CN111855777B - 谷氨酸氧化酶生物传感器及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了谷氨酸氧化酶生物传感器及其制备方法和应用，属于电化学生物传感器技术领域。该生物传感器的工作电极由PtNP@MXene‑Ti₃C₂T_x溶液、谷氨酸氧化酶溶液和壳聚糖溶液修饰，制备方法包括：MXene‑Ti₃C₂T_x溶液与氯金酸溶液混合，超声并连续还原反应，得到PtNP@MXene‑Ti₃C₂T_x溶液后，将其滴涂于玻碳电极表面，无尘环境下干燥，继续用壳聚糖将谷氨酸氧化酶修饰在其表面，冷藏至完全干燥。本发明的酶生物传感器可用于食品中谷氨酸钠(MSG)含量的检测，且灵敏度高、检测限低、抗干扰性好。

Description

谷氨酸氧化酶生物传感器及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及电化学生物传感器技术领域，尤其涉及谷氨酸氧化酶生物传感器及其制备方法和应用，用于定量检测谷氨酸钠。

背景技术

谷氨酸盐是中枢神经系统中主要的兴奋性神经递质，过量谷氨酸盐介导的神经毒性能够导致大脑损伤，并引起神经发育障碍和神经退行性疾病。谷氨酸盐在食品中通常以谷氨酸钠(MSG)的形式存在，因其能够为食品添加鲜味，并增强适口性，已成为广泛应用于食品工业的添加剂之一。目前，定量测量谷氨酸钠的方法主要包括酸滴定法、旋光法、高效液相色谱法等，虽然这些方法精度良好，但操作复杂、耗费时间长，且所需溶剂对环境污染大。而电化学酶生物传感器具有灵敏度佳、选择性高、检测速度快、环保无污染等优点，开发能够快速、灵敏定量检测谷氨酸钠的酶生物传感器在生物医学与食品工业等领域具有重要意义。

MXene-Ti₃C₂T_x(T为-OH、-O或-F)是近年来新兴的一种二维层状纳米材料，它具有独特的层叠状结构和极高的导电性，且亲水性与热稳定性良好，在蓄能、催化、传感等方面有着广泛的应用前景。当将其应用于传感器的电极修饰时，能够提高检测的灵敏度和专一性。金属纳米粒子(如纳米金、纳米铂、纳米钯)对MXene-Ti₃C₂T_x材料进行修饰后，其在高电位下的稳定性有所提升，并且对H₂O₂具有良好的催化作用，对开发具有广泛应用价值的氧化型生物传感器极为有利。目前，基于PtNP@MXene-Ti₃C₂T_x和谷氨酸氧化酶制备的生物传感器用于食品中谷氨酸钠的检测仍未见文献报道，属于技术空白。

发明内容

为了克服目前检测技术的缺点，本发明的首要目的在于提供一种谷氨酸氧化酶生物传感器，二维纳米材料MXene-Ti₃C₂T_x(T选自-OH、-O或-F)和纳米铂(PtNP)反应得到PtNP@MXene-Ti3C2Tx溶液，具有良好选择性、灵敏度和稳定性等优点。

本发明的另一目的在于提供上述谷氨酸氧化酶生物传感器的制备方法。

本发明的再一目的在于提供上述谷氨酸氧化酶生物传感器在谷氨酸钠定量检测中的应用。

本发明的上述目的通过以下技术方法实现：

本发明提供了一种谷氨酸氧化酶生物传感器，其工作电极由基于二维纳米材料MXene-Ti₃C₂T_x(T选自-OH、-O或-F)和纳米铂(PtNP)反应得到的PtNP@MXene-Ti₃C₂T_x溶液、谷氨酸氧化酶溶液和壳聚糖溶液修饰，并通过层层滴涂法制备，步骤如下：

(1)制备PtNP@MXene-Ti₃C₂T_x纳米复合材料，包括：配置MXene-Ti₃C₂T_x溶液并超声，加入氯铂酸后超声，在氮气保护下连续进行还原反应，反应产物经离心、洗涤后冻干，冻干产物配置溶液即得；

(2)对工作电极进行表面预处理；

(3)将3～10μL PtNP@MXene-Ti₃C₂T_x溶液滴加到经表面预处理的工作电极表面，室温晾干；

(4)将3～10μL壳聚糖溶液滴加到步骤(3)中所述的电极表面，室温晾干；

(5)将3～10μL谷氨酸氧化酶溶液滴加到步骤(4)中所述的电极表面，4℃晾干；

(6)将3～10μL壳聚糖溶液滴加到步骤(5)中所述的电极表面，4℃晾干，得到修饰完成的工作电极；

(7)将修饰完成的工作电极与参比电极和对电极组成三电极体系，得到谷氨酸氧化酶生物传感器。

根据本发明的一些实施方式，所述MXene-Ti₃C₂T_x溶液的浓度为0.1-1.5mg/mL，由MXene-Ti₃C₂T_x(T选自OH、O或F)材料分散于水中得到；

所述氯铂酸溶液的浓度为5-25mg/mL，由六水合六氯铂酸溶于水配成溶液得到；

所述壳聚糖溶液的浓度为0.1％-0.5％，由壳聚糖溶于乙酸溶液得到；

所述谷氨酸氧化酶溶液的浓度为5-10U/mL，由谷氨酸氧化酶溶于PBS溶液中得到。

根据本发明的一些实施方式，滴加至电极表面的PtNP@MXene-Ti₃C₂T_x溶液、壳聚糖溶液、谷氨酸氧化酶溶液、壳聚糖溶液的体积比为1：1：1：1。

根据本发明的一些实施方式，所述PtNP@MXene-Ti₃C₂T_x纳米复合材料的制备方法为：首先配制10mL 1mg/mL的MXene-Ti₃C₂T_x溶液，超声10分钟，加入0.5-2.5mL 10mg/mL的氯铂酸，超声10分钟后，在氮气保护下连续还原反应2-24h，反应产物以9500rpm离心10min，然后用乙醇离心洗涤，并冻干；冻干产物配制成0.5mg/mL的溶液，得到PtNP@MXene-Ti₃C₂T_x纳米复合材料。

根据本发明的一些实施方式，所述PBS溶液为pH 7.4、0.1M的PBS溶液。

根据本发明的一些实施方式，步骤(2)中，所述工作电极为玻碳电极，其表面预处理的步骤为：用0.3μm与0.05μm的氧化铝粉末将所述玻碳电极依次在抛光布上抛光成镜面，再用超纯水冲洗，氮气吹干。

根据本发明的一些实施方式，所述参比电极为Ag/AgCl电极，所述对电极为铂电极。

本发明还提供了上述谷氨酸氧化酶生物传感器在谷氨酸钠定量检测中的应用。

根据本发明的一些实施方式，通过上述谷氨酸氧化酶生物传感器定量检测谷氨酸钠的步骤为：

(a)所述谷氨酸氧化酶生物传感器浸入40℃的PBS(pH 7.4，0.1M)缓冲溶液，采用电流-时间法进行测试，施加电位为0.6V，扫描速率为100mV/s，在磁力搅拌器的不断搅拌下，每间隔一段时间(约30s)，向所述PBS缓冲液中加入不同浓度(10μM、20μM、50μM)的谷氨酸钠溶液5μL；

(b)根据得到的电流值与溶液中的谷氨酸钠浓度，以谷氨酸钠浓度为横坐标，电流值为纵坐标，选取数据点进行线性拟合，得到线性范围内的标准曲线；

(c)将实际样品溶液采用同样的电化学方法进行测试，记录其电流响应值，并将其代入线性拟合的标准曲线，计算得到实际样品中谷氨酸钠的浓度。

本发明的原理

本发明制备了纳米铂(PtNP)与MXene-Ti₃C₂T_x(T选自-OH、-O或-F)的复合材料用于电极修饰，并且将壳聚糖作为成膜剂和酶的保护层，从而将谷氨酸氧化酶固定在工作电极表面。再利用修饰后的工作电极，配合参比电极与对电极组成三电极体系，得到一种检测谷氨酸钠的酶生物传感器，其检测原理为：

H₂O₂→2H⁺+O₂+2e^-

PtNP@MXene-Ti₃C₂T_x复合纳米材料在高电位下的稳定性良好，且能够有效进行底物催化，制备得到的检测谷氨酸钠的酶生物传感器性能良好，其线性检测范围为10-110μM，线性方程为I(nA)＝1.5906C-6.2520(μM)，相关系数R²为0.9948，检测限为0.4508μM。

本发明的有益效果

与发明人知晓的现有技术相比，本发明的有益效果在于：

(1)本发明的酶生物传感器具有极高的灵敏度(1.5906nA/μM)和较低的检测限(0.4508μM)，PtNP@MXene-Ti₃C₂T_x能在较高电位下保持稳定，且催化H₂O₂分解产生电子，并促进电子在酶活性中心与电极表面间的迅速转移，从而提高传感器的检测性能。

(2)本发明的酶生物传感器具有良好的选择性与稳定性，对干扰物质如谷氨酰胺、葡萄糖、肌苷酸、甘氨酸、天冬氨酸等无明显电流响应，且在4℃存放28天后仍能达到原始电流响应的60％以上。

(3)本发明的酶生物传感器可用于食品中谷氨酸钠的定量检测，制备工艺简单、安全，检测条件温和，应用前景广泛。

附图说明

图1是实施例1中制备得到的PtNP@MXene-Ti₃C₂T_x的扫描电镜(SEM)图像。

图2是本发明中酶生物传感器工作电极的制备流程与检测原理图。

图3是实施例1中的酶生物传感器在PBS溶液(0.1M，pH＝7.4)中的循环伏安曲线图，其中，a表示PBS溶液中存在浓度为0.5mM的谷氨酸钠，b表示PBS溶液中不存在谷氨酸钠。

图4是实施例2中的酶生物传感器在PBS溶液(0.1M、pH＝7.4)中，在100mV/s扫描速率、0.6V电位条件下，对谷氨酸钠的电流-时间响应曲线(A)；和在线性范围内，响应电流值与谷氨酸钠浓度的标准曲线(B)。

图5是实施例3中的酶生物传感器对谷氨酸钠及不同干扰物质的电流-时间响应曲线(A)，和在干扰物质存在情况下对谷氨酸钠的电流响应柱形图(B)。

图6是实施例4中酶生物传感器随时间的电流响应变化。

具体实施方式

下面结合实例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于以下范围。实施例中所用试剂未进行注明者，均为市售常规产品，可购买获得。

实施例1

制备一种谷氨酸氧化酶生物传感器，具体步骤如下：

(1)首先制备PtNP@MXene-Ti₃C₂T_x复合纳米材料。配制10mL 1mg/mL的MXene-Ti₃C₂T_x溶液，超声10分钟，加入2.5mL 10mg/mL的氯铂酸，超声10分钟后，在氮气保护下连续还原24h。将产物以9500rpm离心10min，然后用乙醇离心洗涤，并冻干。将冻干产物配制成0.5mg/mL的溶液，即得到PtNP@MXene-Ti₃C₂T_x纳米复合材料。该材料的扫描电镜图像如图1所示，能清晰地观察到纳米铂颗粒附着在片状的MXene-Ti₃C₂T_x表面，表明PtNP@MXene-Ti₃C₂T_x的成功合成。

(2)对工作电极进行表面预处理。将玻碳电极依次使用0.3μm与0.05μm的氧化铝粉末在抛光布上抛光成镜面，再用超纯水冲洗，氮气吹干后得到预处理的玻碳电极。

(3)工作电极的修饰过程如图2所示。首先将5μL PtNP@MXene-Ti₃C₂T_x(0.5mg/mL)溶液滴加到经表面预处理的工作电极表面，室温晾干；然后，将5μL壳聚糖(0.1％)溶液滴加到上述电极表面，室温晾干；再将5μL谷氨酸氧化酶溶液(20U/mL)滴加到上述电极表面，4℃晾干；最后，将5μL壳聚糖溶液(0.1％)滴加到上述电极表面，4℃晾干，得到修饰完成的工作电极。

(4)将修饰完成的工作电极与参比电极和对电极组成三电极体系，得到检测谷氨酸钠的酶生物传感器。其检测原理为：

H₂O₂→2H⁺+O₂+2e^-

采用循环伏安法对实施例1中制备的酶生物传感器进行测试，具体步骤为：将所述检测谷氨酸钠的酶生物传感器浸入含或不含0.5mM谷氨酸钠的PBS缓冲溶液(0.1M、pH＝7.4)，扫描速率为20mV/s，扫描电位范围为0～0.8V，结果如图3所示。

其中，a表示PBS溶液中存在浓度为0.5mM的谷氨酸钠，b表示PBS溶液中不存在谷氨酸钠。当溶液中存在谷氨酸钠时，氧化还原电流明显增加，表明固定在电极表面的谷氨酸氧化酶催化缓冲溶液中的谷氨酸钠分解产生H₂O₂，H₂O₂在较高电压与PtNP@MXene-Ti₃C₂T_x的催化作用下，分解产生电子，在电极表面出现了电子的迅速转移，从而获得了对目标检测物谷氨酸钠灵敏的电流响应。且电流峰在0.6V(相对于Ag/AgCl)附近，此时观察到酶生物传感器对谷氨酸钠的最大响应电流，因此可将0.6V作为固定电压进行后续的电流-时间法电化学实验。

实施例2

制备一种谷氨酸氧化酶生物传感器，具体步骤如下：

(1)首先制备PtNP@MXene-Ti₃C₂T_x复合纳米材料。配制10mL 1mg/mL的MXene-Ti₃C₂T_x溶液，超声10分钟，加入2.5mL 10mg/mL的氯铂酸，超声10分钟后，在氮气保护下连续还原24h。将产物以9500rpm离心10min，然后用乙醇离心洗涤，并冻干。将冻干产物配制成0.5mg/mL的溶液，即得到PtNP@MXene-Ti₃C₂T_x纳米复合材料。

(2)对工作电极进行表面预处理。将玻碳电极依次使用0.3μm与0.05μm的氧化铝粉末在抛光布上抛光成镜面，再用超纯水冲洗，氮气吹干后得到预处理的玻碳电极。

(3)工作电极的修饰过程如图2所示。首先将5μLPtNP@MXene-Ti₃C₂T_x(0.5mg/mL)溶液滴加到经表面预处理的工作电极表面，室温晾干；然后，将5μL壳聚糖(0.1％)溶液滴加到上述电极表面，室温晾干；再将5μL谷氨酸氧化酶溶液(20U/mL)滴加到上述电极表面，4℃晾干；最后，将5μL壳聚糖溶液(0.1％)滴加到上述电极表面，4℃晾干，得到修饰完成的工作电极。

(4)将修饰完成的工作电极与参比电极和对电极组成三电极体系，得到检测谷氨酸钠的酶生物传感器。其检测原理为：

H₂O₂→2H⁺+O₂+2e^-

采用电流-时间法对实施例2制备的酶生物传感器进行测试，具体步骤为：将所述检测谷氨酸钠的酶生物传感器浸入40℃的PBS(pH 7.4，0.1M)缓冲溶液，施加电位为0.6V，扫描速率为100mV/s，在磁力搅拌器的不断搅拌下，每间隔一段时间(约30s)，往所述PBS缓冲液中加入不同浓度(10μM、20μM、50μM)的谷氨酸钠溶液5μL。根据得到的电流值与溶液中的谷氨酸钠浓度，以谷氨酸钠浓度为横坐标，电流值为纵坐标，根据数据点进行线性拟合，获得线性范围内的标准曲线。

图4是实施例2中的酶生物传感器在PBS溶液(0.1M、pH＝7.4)中，在100mV/s扫描速率、0.6V电位条件下，对谷氨酸钠的电流-时间响应曲线(A)；及在线性范围内，响应电流值与谷氨酸钠浓度的标准曲线(B)。由图可见，加入谷氨酸钠溶液后，电流呈上升趋势，达到一固定响应值后保持不变，酶生物传感器的响应时间在20s以下。测定结果表明，酶生物传感器对谷氨酸钠的线性检测范围为10-110μM，线性方程为I(nA)＝1.5906C-6.2520(μM)，相关系数R²为0.9948，检测限为0.4508μM。

在蔬菜汤中加入已知含量的谷氨酸钠(50μM、100μM)，用酶生物传感器对其中的谷氨酸钠含量进行检测，计算所得的分析回收率分别为87.04％(50μM)和106.81％(100μM)，表明所构建的酶生物传感器可用于食品样品中谷氨酸钠的快速检测。

实施例3

制备一种谷氨酸氧化酶生物传感器，具体步骤如下：

(1)首先制备PtNP@MXene-Ti₃C₂T_x复合纳米材料。配制10mL 1mg/mL的MXene-Ti₃C₂T_x溶液，超声10分钟，加入2.5mL 10mg/mL的氯铂酸，超声10分钟后，在氮气保护下连续还原24h。将产物以9500rpm离心10min，然后用乙醇离心洗涤，并冻干。将冻干产物配制成0.5mg/mL的溶液，即得到PtNP@MXene-Ti₃C₂T_x纳米复合材料。

(2)对工作电极进行表面预处理。将玻碳电极依次使用0.3μm与0.05μm的氧化铝粉末在抛光布上抛光成镜面，再用超纯水冲洗，氮气吹干后得到预处理的玻碳电极。

(3)工作电极的修饰过程如图2所示。首先将5μLPtNP@MXene-Ti₃C₂T_x(0.5mg/mL)溶液滴加到经表面预处理的工作电极表面，室温晾干；然后，将5μL壳聚糖(0.1％)溶液滴加到上述电极表面，室温晾干；再将5μL谷氨酸氧化酶溶液(20U/mL)滴加到上述电极表面，4℃晾干；最后，将5μL壳聚糖溶液(0.1％)滴加到上述电极表面，4℃晾干，得到修饰完成的工作电极。

(4)将修饰完成的工作电极与参比电极和对电极组成三电极体系，得到检测谷氨酸钠的酶生物传感器。其检测原理为：

H₂O₂→2H⁺+O₂+2e^-

采用电流-时间法对实施例3制备的酶生物传感器进行测试，具体步骤为：将所述检测谷氨酸钠的酶生物传感器浸入40℃的PBS(pH 7.4，0.1M)缓冲溶液，施加电位为0.6V，扫描速率为100mV/s，在磁力搅拌器的不断搅拌下，每间隔一段时间(约30s)，往所述PBS缓冲液中依次加入谷氨酸钠溶液(20μM)、谷氨酰胺溶液(100μM)、氯化钠溶液(100μM)、葡萄糖溶液(100μM)、肌苷酸(溶液100μM)、甘氨酸溶液(100μM)、天冬氨酸溶液(100μM)、谷氨酸钠溶液(20μM)、谷氨酸钠溶液(20μM)。

图5是实施例3中的酶生物传感器对谷氨酸钠及不同干扰物质的电流-时间响应曲线(A)，及在干扰物质存在情况下对谷氨酸钠的电流响应柱形图(B)。由图可见，当向PBS溶液中添加谷氨酸钠时电流响应显著变大，但当添加干扰物时无明显电流响应，说明制备的酶生物传感器具有良好的专一性和抗干扰性。

实施例4

制备一种谷氨酸氧化酶生物传感器，具体步骤如下：

(1)首先制备PtNP@MXene-Ti₃C₂T_x复合纳米材料。配制10mL 1mg/mL的MXene-Ti₃C₂T_x溶液，超声10分钟，加入2.5mL 10mg/mL的氯铂酸，超声10分钟后，在氮气保护下连续还原24h。将产物以9500rpm离心10min，然后用乙醇离心洗涤，并冻干。将冻干产物配制成0.5mg/mL的溶液，即得到PtNP@MXene-Ti₃C₂T_x纳米复合材料。

(2)对工作电极进行表面预处理。将玻碳电极依次使用0.3μm与0.05μm的氧化铝粉末在抛光布上抛光成镜面，再用超纯水冲洗，氮气吹干后得到预处理的玻碳电极。

(3)工作电极的修饰过程如图2所示。首先将5μLPtNP@MXene-Ti₃C₂T_x(0.5mg/mL)溶液滴加到经表面预处理的工作电极表面，室温晾干；然后，将5μL壳聚糖(0.1％)溶液滴加到上述电极表面，室温晾干；再将5μL谷氨酸氧化酶溶液(20U/mL)滴加到上述电极表面，4℃晾干；最后，将5μL壳聚糖溶液(0.1％)滴加到上述电极表面，4℃晾干，得到修饰完成的工作电极。

(4)将修饰完成的工作电极与参比电极和对电极组成三电极体系，得到检测谷氨酸钠的酶生物传感器。其检测原理为：

H₂O₂→2H⁺+O₂+2e^-

采用电流-时间法对实施例4制备的酶生物传感器进行测试，具体步骤为：将所述检测谷氨酸钠的酶生物传感器浸入40℃的PBS(pH 7.4，0.1M)缓冲溶液，施加电位为0.6V，扫描速率为100mV/s，在磁力搅拌器的不断搅拌下，每间隔一段时间(约30s)，往所述PBS缓冲液中加入20μM的谷氨酸钠溶液5μL，重复，计算平均电流值。每隔7天，使用同一批酶生物传感器重复相同的电流-时间法实验。不使用时，将酶生物传感器的工作电极存放在干燥、洁净的4℃环境中。

图6是实施例4中酶生物传感器随时间的电流响应变化。由图可见，当存放28天后，酶生物传感器对谷氨酸钠溶液的电流响应值仍能达到原始电流响应值的60％以上。

上述实施例仅为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，凡在本发明的精神实质与原理下所作的任何修改、替代、简化等，均应视为等效的置换方式，包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种谷氨酸氧化酶生物传感器，其特征在于，其工作电极由PtNP@MXene-Ti₃C₂T_x溶液、谷氨酸氧化酶溶液和壳聚糖溶液修饰，并通过层层滴涂法制备，步骤如下：

（1）制备PtNP@MXene-Ti₃C₂T_x纳米复合材料，包括：配制MXene-Ti₃C₂T_x溶液并超声，加入氯铂酸后超声，在氮气保护下进行连续还原反应，反应产物经离心、洗涤后冻干，冻干产物配制溶液即得；

所述MXene-Ti₃C₂T_x溶液的浓度为0.1–1.5mg/mL，由MXene-Ti₃C₂T_x材料分散于水中得到，其中T选自OH、O或F；

氯铂酸溶液的浓度为5–25mg/mL，由六水合六氯铂酸溶于水配成溶液得到；

所述壳聚糖溶液的浓度为0.1%–0.5%，由壳聚糖溶于乙酸溶液得到；

所述谷氨酸氧化酶溶液的浓度为5–10U/mL，由谷氨酸氧化酶溶于PBS溶液中得到；

（2）对工作电极进行表面预处理；

（3）将3–10μL PtNP@MXene-Ti₃C₂T_x溶液滴加到经表面预处理的工作电极表面，室温晾干；

（4）将3–10μL壳聚糖溶液滴加到步骤（3）中所述电极表面，室温晾干；

（5）将3–10μL谷氨酸氧化酶溶液滴加到步骤（4）中所述电极表面，4℃晾干；

（6）将3–10μL壳聚糖溶液滴加到步骤（5）中所述电极表面，4℃晾干，得到修饰工作电极；

（7）将所述修饰工作电极与参比电极、对电极组成三电极体系，得到谷氨酸氧化酶生物传感器。

2.根据权利要求1所述的谷氨酸氧化酶生物传感器，其特征在于，滴加至电极表面的PtNP@MXene-Ti₃C₂T_x溶液、壳聚糖溶液、谷氨酸氧化酶溶液、壳聚糖溶液的体积比为1：1：1：1。

3.根据权利要求1所述的谷氨酸氧化酶生物传感器，其特征在于，所述PtNP@MXene-Ti₃C₂T_x纳米复合材料的制备方法为：先配制10mL 1mg/mL的MXene-Ti₃C₂T_x溶液，超声10分钟，加入0.5–2.5mL 10mg/mL的氯铂酸，超声10分钟，在氮气保护下连续还原反应2–24h，反应产物以9500rpm离心10min，然后用乙醇离心洗涤并冻干，冻干产物配制成0.5mg/mL的溶液即得。

4.根据权利要求1所述的谷氨酸氧化酶生物传感器，其特征在于，所述PBS溶液为pH7.4、0.1M的PBS溶液。

5.根据权利要求1所述的谷氨酸氧化酶生物传感器，其特征在于，步骤（2）中，所述工作电极为玻碳电极，其表面预处理的步骤为：用0.3μm与0.05μm的氧化铝粉末将所述玻碳电极依次在抛光布上抛光成镜面，再用超纯水冲洗，氮气吹干。

6.根据权利要求1所述的谷氨酸氧化酶生物传感器，其特征在于，所述参比电极为Ag/AgCl电极，所述对电极为铂电极。

7.权利要求1至6任一项所述的谷氨酸氧化酶生物传感器在谷氨酸钠定量检测中的应用，所述谷氨酸氧化酶生物传感器定量检测谷氨酸钠的步骤为：

（a）所述谷氨酸氧化酶生物传感器浸入40℃的PBS缓冲溶液，用电流-时间法进行测试，施加电位为0.6V，扫描速率为100mV/s，在磁力搅拌器不断搅拌下，每间隔一段时间，向所述PBS缓冲液中加入5μL不同浓度的谷氨酸钠溶液；

（b）根据得到的电流值与溶液中的谷氨酸钠浓度，以谷氨酸钠浓度为横坐标，电流值为纵坐标，选取数据点进行线性拟合，得到线性范围内的标准曲线；

（c）将实际样品溶液采用同样的电化学方法进行测试，记录其电流响应值，并将其代入线性拟合的标准曲线，计算得到实际样品中谷氨酸钠的浓度。

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