CN111850076A - 一种干细胞蛋白活性肽的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种干细胞蛋白活性肽的制备方法，涉及蛋白多肽制备技术领域。该干细胞蛋白活性肽的制备方法，包括以下步骤:S1胎盘处理、S2破碎细胞结构、S3多肽制备、S4高速离心分离、S5提取、S6分离纯化、S7保存放置。通过发明中制备方法的使用，可以将猪、牛、羊的胎盘作为提取蛋白活性肽的原料，减少其浪费，能够提取处亲水性和亲脂性的蛋白活性肽，副产物以及中间各种添加成分均无毒无害，充分保持蛋白活性肽的活性，延长其保存时间，可作为其他领域研制产品或研究使用。
Description
技术领域
本发明涉及蛋白多肽制备技术领域，具体为一种干细胞蛋白活性肽的制备方法。
背景技术
胎盘是哺乳动物妊娠期间由胚胎的胚膜和母体子宫内膜联合长成的母子间交换物质的过渡性器官。胎盘中含有丰富活性多肽和蛋白质。
活性肽是蛋白质中20个天然氨基酸以不同组成和排列方式构成的从二肽到复杂的线形、环形结构的不同肽类的总称，是源于蛋白质的多功能最复杂的化合物。以前,人们认为氨基酸是人体吸收蛋白质的主要途径。近年来,科学家经研究发现,蛋白质经消化道酶促水解后，主要以小肽的形式吸收,比完全游离氨基酸更易、更快被机体吸收利用。除此之外还有诸多功能，这里不做一一描述。
现有的胎盘的哺乳动物生产完成后，除少数应用于科学研究，其余的处理方式是直接丢弃，造成大量的浪费。
发明内容
(一)解决的技术问题
针对现有技术的不足，本发明提供了一种干细胞蛋白活性肽的制备方法，解决了现有哺乳动物胎盘直接丢弃造成大量浪费的问题。
(二)技术方案
为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种干细胞蛋白活性肽的制备方法，包括以下步骤:
S1胎盘处理
选取新鲜哺乳动物胎盘，在接种入过氧化氢酶后将其绞碎，之后进行将哺乳动物胎盘碎块与生理盐水进行分离；
S2破碎细胞结构
将S1中的固体产物置于超声波装置中，并在其中加入1.5倍体积的去离子水并加入硫酸铵，使用超声波以30KHZ～80KHZ处理10～15min；
S3多肽制备
将S2中的产物加入分解罐中，并在其中接种入蛋白酶，调控温度30～35℃，调控PH至适宜，分解20～30h；
S4高速离心分离
使用高速离心机将S3中产物以8000～15000rad/min的转速分离，取上层液体；
S5提取
将S4中的上层液体置于有机溶剂中进行提取，在提取完成后取上层有机成分；
S6分离纯化
将S5的有机成分使用高效液相色谱法分离得到活性多肽，将剩余成分加入至S3中再次制备活性多肽；
S7保存放置
将S6中的活性多肽置于生理盐水中，并在其中加入海藻糖、甘油、谷胱甘肽、甘露醇，在混合均匀后冷藏至10～15℃的环境中。
优选的，所述新鲜哺乳动物胎盘为猪、牛、羊的胎盘，在从猪、牛、羊繁殖场所获取后，洗去表面血渍，之后加入生理盐水立即迅速降温冷藏。
优选的，所述1.5倍是指去离子水的体积为S1中的固体产物的体积的1.5倍。
优选的，所述硫酸铵与S1中的固体产物的重量比例为1:15～20。
优选的，所述有机溶剂为乙醇、丙酮、异丙醇、正丁酮中的任意两种等量混合。
优选的，所述S7中的活性多肽与海藻糖、甘油、谷胱甘肽、甘露醇的重量占比为10～15:2:1：2:1，其使用的生理盐水与S6中活性多肽的体积占比为1：10～25。
(三)有益效果
本发明提供了一种干细胞蛋白活性肽的制备方法。具备以下有益效果：
1、本发明，可将猪、牛、羊的胎盘作为提取蛋白活性肽的原料，可以减少其浪费，可以有效地提取处亲水性和亲脂性的蛋白活性肽，并且可以保证很高的提取率，原料保存方式，可以保证足够的原料来源。
2、本发明，制备过程，副产物以及中间各种添加成分均无毒无害，在蛋白活性肽制备完成后，可以充分保持其活性，延长其保存时间，发明成品可作为其他领域研制产品或研究使用。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例：
本发明实施例提供一种干细胞蛋白活性肽的制备方法，包括以下步骤:
S1胎盘处理
选取新鲜的猪胎盘，在接种入过氧化氢酶后将其绞碎，之后进行将哺乳动物胎盘碎块与生理盐水进行分离，通过加入过氧化氢酶可以将代谢产生的过氧化氢分解为水与氧气；
S2破碎细胞结构
将S1中的固体产物置于超声波装置中，并在其中加入1.5倍体积的去离子水并加入硫酸铵，使用超声波以30KHZ处理10min，将猪胎盘干细胞破坏，其中硫酸铵与固体产物的重量比例为1:15；
S3多肽制备
将S2中的产物加入分解罐中，并在其中接种入蛋白酶，调控温度30℃，调控PH至适宜，分解20h；
S4高速离心分离
使用高速离心机将S3中产物以8000rad/min的转速分离，取上层液体；
S5提取
将S4中的上层液体置于乙醇、丙酮等量混合有机溶剂中进行提取，在提取完成后取上层有机成分，可以将未分解的蛋白质与活性多肽充分提取；
S6分离纯化
将S5的有机成分使用高效液相色谱法分离得到活性多肽，将剩余成分加入至S3中再次制备活性多肽；
S7保存放置
将S6中的活性多肽置于生理盐水中，并在其中加入海藻糖、甘油、谷胱甘肽、甘露醇，其中活性多肽、海藻糖、甘油、谷胱甘肽、甘露醇的重量占比为10:2:1：2:1，在混合均匀后冷藏至10℃的环境中，可以有效保证多肽的活性。
实施例二：
本发明实施例提供一种干细胞蛋白活性肽的制备方法，包括以下步骤:
S1胎盘处理
选取新鲜的羊胎盘，在接种入过氧化氢酶后将其绞碎，之后进行将哺乳动物胎盘碎块与生理盐水进行分离，通过加入过氧化氢酶可以将代谢产生的过氧化氢分解为水与氧气；
S2破碎细胞结构
将S1中的固体产物置于超声波装置中，并在其中加入1.5倍体积的去离子水并加入硫酸铵，使用超声波以50KHZ处理10min，将羊胎盘干细胞破坏，其中硫酸铵与固体产物的重量比例为1:20；
S3多肽制备
将S2中的产物加入分解罐中，并在其中接种入蛋白酶，调控温度30℃，调控PH至适宜，分解25h；
S4高速离心分离
使用高速离心机将S3中产物以100000rad/min的转速分离，取上层液体；
S5提取
将S4中的上层液体置于异丙醇、正丁酮等量混合有机溶剂中进行提取，在提取完成后取上层有机成分，可以将未分解的蛋白质与活性多肽充分提取；
S6分离纯化
将S5的有机成分使用高效液相色谱法分离得到活性多肽，将剩余成分加入至S3中再次制备活性多肽；
S7保存放置
将S6中的活性多肽置于生理盐水中，并在其中加入海藻糖、甘油、谷胱甘肽、甘露醇，其中活性多肽、海藻糖、甘油、谷胱甘肽、甘露醇的重量占比为12:2:1：2:1，在混合均匀后冷藏至10℃的环境中，可以有效保证多肽的活性。
实施例三：
本发明实施例提供一种干细胞蛋白活性肽的制备方法，包括以下步骤:
S1胎盘处理
选取新鲜的牛胎盘，在接种入过氧化氢酶后将其绞碎，之后进行将哺乳动物胎盘碎块与生理盐水进行分离，通过加入过氧化氢酶可以将代谢产生的过氧化氢分解为水与氧气；
S2破碎细胞结构
将S1中的固体产物置于超声波装置中，并在其中加入1.5倍体积的去离子水并加入硫酸铵，使用超声波以80KHZ处理15min，将牛胎盘干细胞破坏，其中硫酸铵与固体产物的重量比例为1:15；
S3多肽制备
将S2中的产物加入分解罐中，并在其中接种入蛋白酶，调控温度30℃，调控PH至适宜，分解30h；
S4高速离心分离
使用高速离心机将S3中产物以15000rad/min的转速分离，取上层液体；
S5提取
将S4中的上层液体置于丙酮、异丙醇等量混合有机溶剂中进行提取，在提取完成后取上层有机成分，可以将未分解的蛋白质与活性多肽充分提取；
S6分离纯化
将S5的有机成分使用高效液相色谱法分离得到活性多肽，将剩余成分加入至S3中再次制备活性多肽；
S7保存放置
将S6中的活性多肽置于生理盐水中，并在其中加入海藻糖、甘油、谷胱甘肽、甘露醇，其中活性多肽、海藻糖、甘油、谷胱甘肽、甘露醇的重量占比为15:2:1：2:1，在混合均匀后冷藏至15℃的环境中，可以有效保证多肽的活性。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (6)
1.一种干细胞蛋白活性肽的制备方法，其特征在于：包括以下步骤:
S1胎盘处理
选取新鲜哺乳动物胎盘，在接种入过氧化氢酶后将其绞碎，之后进行将哺乳动物胎盘碎块与生理盐水进行分离；
S2破碎细胞结构
将S1中的固体产物置于超声波装置中，并在其中加入1.5倍体积的去离子水并加入硫酸铵，使用超声波以30KHZ～80KHZ处理10～15min；
S3多肽制备
将S2中的产物加入分解罐中，并在其中接种入蛋白酶，调控温度30～35℃，调控PH至适宜，分解20～30h；
S4高速离心分离
使用高速离心机将S3中产物以8000～15000rad/min的转速分离，取上层液体；
S5提取
将S4中的上层液体置于有机溶剂中进行提取，在提取完成后取上层有机成分；
S6分离纯化
将S5的有机成分使用高效液相色谱法分离得到活性多肽，将剩余成分加入至S3中再次制备活性多肽；
S7保存放置
将S6中的活性多肽置于生理盐水中，并在其中加入海藻糖、甘油、谷胱甘肽、甘露醇，在混合均匀后冷藏至10～15℃的环境中。
2.根据权利要求1所述的一种干细胞蛋白活性肽的制备方法，其特征在于：所述新鲜哺乳动物胎盘为猪、牛、羊的胎盘，在从猪、牛、羊繁殖场所获取后，洗去表面血渍，之后加入生理盐水立即迅速降温冷藏。
3.根据权利要求1所述的一种干细胞蛋白活性肽的制备方法，其特征在于：所述1.5倍是指去离子水的体积为S1中的固体产物的体积的1.5倍。
4.根据权利要求1所述的一种干细胞蛋白活性肽的制备方法，其特征在于：所述硫酸铵与S1中的固体产物的重量比例为1:15～20。
5.根据权利要求1所述的一种干细胞蛋白活性肽的制备方法，其特征在于：所述有机溶剂为乙醇、丙酮、异丙醇、正丁酮中的任意两种等量混合。
6.根据权利要求1所述的一种干细胞蛋白活性肽的制备方法，其特征在于：所述S7中的活性多肽与海藻糖、甘油、谷胱甘肽、甘露醇的重量占比为10～15:2:1：2:1，其使用的生理盐水与S6中活性多肽的体积占比为1：10～25。
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