CN111826461B - 高粱芒的有无分子标记的开发和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了高粱芒的有无分子标记的开发和应用。引物对组合，包括特异引物对1、特异引物对2和/或特异引物对3；特异引物对1由引物Sbp01F和引物Sbp01R组成；特异引物对2由引物Sbawn01F和引物Sbawn01R组成；特异引物对3由引物Sb430F和引物Sb430R组成；各个引物的核苷酸序列依次如SEQ ID NO:1‑SEQ ID NO:6所示。实验证明，本发明提供的方法可以鉴定或辅助鉴定高粱芒的有无，具有快速、低成本以及限制少等特点，可大大提高育种效率。本发明具有重大的应用价值。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及高粱芒的有无分子标记的开发和应用。
背景技术
芒是禾本科植物小花内/外稃上的突出物，是禾本科植物的内外稃顶端由中肋延伸而成的结构。芒是种子对自然环境和生存传播的一种重要的适应性进化，芒的有无不仅与植物的抗性有关，也与其籽粒的产量有关。
高粱(Sorghum bicolor(L.)Moench)属于单子叶植物纲、禾本科、高粱属，是仅次于小麦、水稻、玉米、大麦的世界第五大禾谷类作物，在我国酿酒行业和农业种植上占有重要地位。野生高粱种子不仅具有长芒，而且芒表面布满了芒刺。芒刺不仅阻碍人们对高粱种子的徒手操作，而且影响高粱种子的储藏和加工。在高粱驯化过程中，从有芒到无芒的转变是高粱驯化过程中一个重要事件，然而控制这个重要转变的分子机制并不清楚。
一般来讲，无芒高粱品种或品系易于储藏加工，而有芒高粱品种或品系较少被鸟类侵害。育种家可根据育种目标，筛选无芒或有芒的高粱品种或品系。分子标记辅助选择可以从分子水平上快速准确地分析个体的遗传组成，从而实现对基因型的直接选择，进行分子育种，其不受环境条件影响且选择准确性高。因此，开发与高粱是否有芒相关的分子标记具有较大意义。
发明内容
本发明的目的是鉴定或辅助鉴定待测高粱芒的有无。
本发明首先保护引物对组合。引物对组合可包括特异引物对1、特异引物对2和/或特异引物对3；
特异引物对1可由引物Sbp01F和引物Sbp01R组成；引物Sbp01F的核苷酸序列可如SEQ ID NO:1所示；引物Sbp01R的核苷酸序列可如SEQ ID NO:2所示；
特异引物对2可由引物Sbawn01F和引物Sbawn01R组成；引物Sbawn01F的核苷酸序列可如SEQ ID NO:3所示；引物Sbawn01R的核苷酸序列可如SEQ ID NO:4所示；
特异引物对3可由引物Sb430F和引物Sb430R组成；引物Sb430F的核苷酸序列可如SEQ ID NO:5所示；引物Sb430R的核苷酸序列可如SEQ ID NO:6所示。
所述引物对组合具体可由所述特异引物对1、所述特异引物对2和/或所述特异引物对3组成。
所述引物对组合的功能可为b1)-b4)中的任一种：
b1)鉴定或辅助鉴定待测高粱芒的有无；
b2)筛选或辅助筛选有芒或疑似有芒的高粱品种；
b3)筛选或辅助筛选无芒或疑似无芒的高粱品种；
b4)高粱育种。
所述特异引物对1用于扩增下述与高粱芒有无相关的分子标记Sbp01。
所述特异引物对2用于扩增下述与高粱芒有无相关的分子标记Sbawn01。
所述特异引物对3用于扩增下述与高粱芒有无相关的分子标记Sb430。
本发明还保护一种试剂盒，含有上述引物对组合。
所述试剂盒中还可包括用于PCR扩增的常规试剂和/或用于基因组提取的常规试剂和/或用于琼脂糖凝胶电泳的常规试剂。
所述试剂盒的功能可为b1)-b4)中的任一种：
b1)鉴定或辅助鉴定待测高粱芒的有无；
b2)筛选或辅助筛选有芒或疑似有芒的高粱品种；
b3)筛选或辅助筛选无芒或疑似无芒的高粱品种；
b4)高粱育种。
本发明还保护上述任一所述引物对组合或上述任一所述试剂盒的应用，可为b1)-b4)中的任一种：
b1)鉴定或辅助鉴定待测高粱芒的有无；
b2)筛选或辅助筛选有芒或疑似有芒的高粱品种；
b3)筛选或辅助筛选无芒或疑似无芒的高粱品种；
b4)高粱育种。
本发明还保护所述DNA片段甲(即分子标记Sbp01)、所述DNA片段乙(即分子标记Sbawn01)或所述DNA片段丙(即分子标记Sb430)。
具体的，以待测高粱的基因组DNA为模板，采用所述特异引物对1扩增得到的DNA片段，即为DNA片段甲。
具体的，以待测高粱的基因组DNA为模板，采用所述特异引物对2扩增得到的DNA片段，即为DNA片段乙。
具体的，以待测高粱的基因组DNA为模板，采用所述特异引物对3扩增得到的DNA片段，即为DNA片段丙。
本发明还保护所述DNA片段甲、所述DNA片段乙或所述DNA片段丙的应用，可为b1)-b9)中的任一种：
b1)鉴定或辅助鉴定待测高粱芒的有无；
b2)筛选或辅助筛选有芒或疑似有芒的高粱品种；
b3)筛选或辅助筛选无芒或疑似无芒的高粱品种；
b4)高粱育种；
b5)制备鉴定或辅助鉴定待测高粱芒的有无的产品；
b6)制备筛选或辅助筛选有芒或疑似有芒的高粱品种的产品；
b7)制备筛选或辅助筛选无芒或疑似无芒的高粱品种的产品；
b8)制备高粱育种的产品；
b9)作为分子标记。
上文中，应用特异引物对1、所述试剂盒或所述DNA片段甲鉴定或辅助鉴定待测高粱芒的有无的方法可如下：以待测高粱的基因组DNA为模板，采用所述特异引物对1进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；进行如下判断：如果所述PCR扩增产物中具有DNA片段、待测高粱无芒或疑似无芒，如果所述PCR扩增产物中不具有DNA片段、待测高粱有芒或疑似有芒。所述DNA片段可为392bp的DNA片段。
上文中，应用特异引物对1、所述试剂盒或所述DNA片段甲鉴定或辅助鉴定待测高粱芒的有无的方法可如下：检测待测高粱的基因组DNA中是否含有DNA区段甲；所述DNA区段甲的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示；进行如下判断：如果待测高粱的基因组DNA中含有DNA区段甲、待测高粱无芒或疑似无芒，如果待测高粱的基因组DNA中不含有DNA区段甲、待测高粱有芒或疑似有芒。
上文中，应用特异引物对2、所述试剂盒或所述DNA片段乙鉴定或辅助鉴定待测高粱芒的有无的方法可如下：以待测高粱的基因组DNA为模板，采用所述特异引物对2进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；进行如下判断：如果所述PCR扩增产物中具有DNA片段、待测高粱有芒或疑似有芒，如果所述PCR扩增产物中不具有DNA片段、待测高粱无芒或疑似无芒。所述DNA片段可为532bp的DNA片段。
上文中，应用特异引物对2、所述试剂盒或所述DNA片段乙鉴定或辅助鉴定待测高粱芒的有无的方法可如下：检测待测高粱的基因组DNA中是否含有DNA区段乙；所述DNA区段乙的核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示；进行如下判断：如果待测高粱的基因组DNA中含有DNA区段乙、待测高粱有芒或疑似有芒，如果待测高粱的基因组DNA中不含有DNA区段乙、待测高粱无芒或疑似无芒。
上文中，应用特异引物对3、所述试剂盒或所述DNA片段丙鉴定或辅助鉴定待测高粱芒的有无的方法可如下：以待测高粱的基因组DNA为模板，采用所述特异引物对3进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；进行如下判断：如果所述PCR扩增产物中具有一个DNA片段、待测高粱有芒或疑似有芒，如果所述PCR扩增产物中具有两个DNA片段、待测高粱无芒或疑似无芒。具有一个DNA片段可为具有一个343bp的DNA片段。具有两个DNA片段可为具有一个343bp的DNA片段和一个575bp的DNA片段。
上文中，应用特异引物对3、所述试剂盒或所述DNA片段丙鉴定或辅助鉴定待测高粱芒的有无的方法可如下：检测待测高粱的基因组DNA中是否含有DNA区段丙和DNA区段丁；所述DNA区段丙的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示；所述DNA区段丁的核苷酸序列如SEQ IDNO:10所示；进行如下判断：如果待测高粱的基因组DNA中含有DNA区段丙且含有DNA区段丁、待测高粱无芒或疑似无芒，如果待测高粱的基因组DNA中含有DNA区段丁且不含有DNA区段丙、待测高粱有芒或疑似有芒。
本发明还保护鉴定或辅助鉴定待测高粱芒有无的方法。
本发明所保护的鉴定或辅助鉴定待测高粱芒有无的方法，具体可为方法c1)，包括如下步骤：
(c1-1)以待测高粱的基因组DNA为模板，采用所述特异引物对1进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；
(c1-2)完成步骤(c1-1)后，进行如下判断：如果所述PCR扩增产物中具有DNA片段、待测高粱无芒或疑似无芒，如果所述PCR扩增产物中不具有DNA片段、待测高粱有芒或疑似有芒。
上述方法c1)中，DNA片段可为392bp的DNA片段。
上述方法c1)中，DNA片段的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示。
本发明所保护的鉴定或辅助鉴定待测高粱芒有无的方法，具体可为方法c2)，包括如下步骤：
(c2-1)检测待测高粱的基因组DNA中是否含有DNA区段甲；所述DNA区段甲的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示；
(c2-2)完成步骤(c2-1)后，进行如下判断：如果待测高粱的基因组DNA中含有DNA区段甲、待测高粱无芒或疑似无芒，如果待测高粱的基因组DNA中不含有DNA区段甲、待测高粱有芒或疑似有芒。
本发明所保护的鉴定或辅助鉴定待测高粱芒有无的方法，具体可为方法d1)，包括如下步骤：
(d1-1)以待测高粱的基因组DNA为模板，采用所述特异引物对2进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；
(d1-2)完成步骤(d1-1)后，进行如下判断：如果所述PCR扩增产物中具有DNA片段、待测高粱有芒或疑似有芒，如果所述PCR扩增产物中不具有DNA片段、待测高粱无芒或疑似无芒。
上述方法d1)中，DNA片段可为532bp的DNA片段。
上述方法d1)中，DNA片段的核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示。
本发明所保护的鉴定或辅助鉴定待测高粱芒有无的方法，具体可为方法d2)，包括如下步骤：
(d2-1)检测待测高粱的基因组DNA中是否含有DNA区段乙；所述DNA区段乙的核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示；
(d2-2)完成步骤(d2-1)后，进行如下判断：如果待测高粱的基因组DNA中含有DNA区段乙、待测高粱有芒或疑似有芒，如果待测高粱的基因组DNA中不含有DNA区段乙、待测高粱无芒或疑似无芒。
本发明所保护的鉴定或辅助鉴定待测高粱芒有无的方法，具体可为方法e1)，包括如下步骤：
(e1-1)以待测高粱的基因组DNA为模板，采用所述特异引物对3进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；
(e1-2)完成步骤(e1-1)后，进行如下判断：如果所述PCR扩增产物中具有一个DNA片段、待测高粱有芒或疑似有芒，如果所述PCR扩增产物中具有两个DNA片段、待测高粱无芒或疑似无芒。
上述方法e1)中，具有一个DNA片段可为具有一个343bp的DNA片段。具有两个DNA片段可为具有一个343bp的DNA片段和一个575bp的DNA片段。
上述方法e1)中，343bp的DNA片段的核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示。575bp的DNA片段的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示。
本发明所保护的鉴定或辅助鉴定待测高粱芒有无的方法，具体可为方法e2)，包括如下步骤：
(e2-1)检测待测高粱的基因组DNA中是否含有DNA区段丙和DNA区段丁；所述DNA区段丙的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示；所述DNA区段丁的核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示；
(e2-2)完成步骤(e2-1)后，进行如下判断：如果待测高粱的基因组DNA中含有DNA区段丙且含有DNA区段丁、待测高粱无芒或疑似无芒，如果待测高粱的基因组DNA中含有DNA区段丁且不含有DNA区段丙、待测高粱有芒或疑似有芒。
上述任一所述的方法中，所述检测待测高粱的基因组DNA中是否含有DNA区段甲、所述检测待测高粱的基因组DNA中是否含有DNA区段乙或所述检测待测高粱的基因组DNA中是否含有DNA区段丙和DNA区段丁的方法可为直接测序。
上述任一所述的方法中，所述检测待测高粱的基因组DNA中是否含有DNA区段甲的方法可为以待测高粱的基因组DNA为模板，采用所述特异引物对1进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；之后将PCR扩增产物进行测序。
上述任一所述的方法中，所述检测待测高粱的基因组DNA中是否含有DNA区段乙的方法可为以待测高粱的基因组DNA为模板，采用所述特异引物对2进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；之后将PCR扩增产物进行测序。
上述任一所述的方法中，所述检测待测高粱的基因组DNA中是否含有DNA区段丙和DNA区段丁的方法为以待测高粱的基因组DNA为模板，采用所述特异引物对3进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；之后将PCR扩增产物进行测序。
本发明的发明人对高粱有芒品种红缨子和三尺三进行全基因组测序，再结合高粱无芒品种BTx623参考基因组的核苷酸序列，经过大量实验，开发了与高粱芒有无相关的分子标记Sbp01、分子标记Sbawn01和分子标记Sb430。实验证明，这三个分子标记均可以准确鉴定或辅助鉴定高粱芒的有无，具有快速、低成本以及限制少等特点，可大大提高育种效率。本发明具有重大的应用价值。
附图说明
图1为实施例1中步骤二90个高粱微核心种质和高粱BTx623的琼脂糖凝胶电泳结果。
图2为实施例1中步骤二13个野生高粱和高粱BTx623的琼脂糖凝胶电泳结果。
图3为实施例1中步骤三90个高粱微核心种质和高粱BTx623的琼脂糖凝胶电泳结果。
图4为实施例1中步骤三13个野生高粱和高粱BTx623的琼脂糖凝胶电泳结果。
图5为实施例1中步骤四90个高粱微核心种质和高粱BTx623的琼脂糖凝胶电泳结果。
图6为实施例1中步骤四13个野生高粱和高粱BTx623的琼脂糖凝胶电泳结果。
图7为实施例2中采用分子标记Sbp01鉴定部分杂交后代F7的琼脂糖凝胶电泳结果。
图8为实施例2中采用分子标记Sbawn01鉴定部分杂交后代F7的琼脂糖凝胶电泳结果。
图9为实施例2中采用分子标记Sb430鉴定部分杂交后代F7的琼脂糖凝胶电泳结果。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。以下提供的实施例可作为本技术领域普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本发明的限制。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中，90个高粱微核心种质的名称和国家编号依次见表1中第2列，90个高粱微核心种质可从国际热带半干旱地区作物研究所种质资源库或辽宁省农业科学院高粱所获得。
表1. 90个高粱微核心种质和BTx623的分子标记Sbp01的多态性检测结果
下述实施例中，13个野生高粱的名称详见表2中第2列，13个野生高粱可从辽宁省农业科学院高粱所获得。
表2. 13个野生高粱和BTx623的分子标记Sbp01的多态性检测结果
90个高粱微核心种质和13个野生高粱均为纯合的高粱自然群体，无杂合类型。
2×Taq PCR MasterMix为天根生化科技北京有限公司的产品，产品目录号为KT201-01。
下述实施例中所有琼脂糖凝胶电泳的DNA Marker均为天根生化科技(北京)有限公司的D2000 DNA Marker(MD114)，参照物片段(bp)：100，250，500，750，1000，2000。
实施例1、三个分子标记的开发和多态性检测
一、三个分子标记的开发
本发明的发明人分别对高粱有芒品种红缨子和三尺三进行全基因组测序，再结合高粱无芒品种BTx623参考基因组的核苷酸序列(网址为：https://phytozome.jgi.doe.gov/pz/portal.html#！info？alias＝Org_Sbicolor)，经过大量实验，开发了与高粱芒有无相关的分子标记Sbp01、分子标记Sbawn01和分子标记Sb430。
扩增分子标记Sbp01的引物如下：
引物Sbp01F：5’-GGATCCTTTCTCTACGGGCA-3’(SEQ ID NO:1)；
引物Sbp01R：5’-GAATTGCCTGATCCTGGTGG-3’(SEQ ID NO:2)。
扩增分子标记Sbawn01的引物如下：
引物Sbawn01F：5’-TCCTTTCTCTACGGGCACTC-3’(SEQ ID NO:3)；
引物Sbawn01R：5’-GCTTCTCACTTTTCACCGCA-3’(SEQ ID NO:4)。
扩增分子标记Sb430的引物如下：
引物Sb430F：5’-AGGCTGCCGCAGTAGCAGCTGC-3’(SEQ ID NO:5)；
引物Sb430R：5’-ATTAGTGCGACGACAACGC-3’(SEQ ID NO:6)。
二、分子标记Sbp01的多态性检测
(一)多态性检测一
1.高粱种质资源芒有无的表型鉴定
2018年5月，将13个野生高粱和90个高粱微核心种质种植于辽宁省农业科学院试验田，常规田间管理。抽穗期观察各个高粱种质资源是有芒还是无芒。
90个高粱微核心种质芒有无的表型鉴定结果见表1中第4列。
13个野生高粱芒有无的表型鉴定结果见表2中第3列。
2.高粱种质资源的分子鉴定
(1)分别提取13个野生高粱和90个高粱微核心种质幼嫩叶片的基因组DNA，得到高粱的基因组DNA。
(2)分别以步骤(1)提取的基因组DNA为模板，采用引物Sbp01F和引物Sbp01R组成的引物对Sbp01进行PCR扩增，得到PCR扩增产物。
反应体系为25μL，由1μL高粱的基因组DNA(约50-100ng)、0.5μL引物Sbp01F水溶液、0.5μL引物Sbp01R水溶液、12.5μL 2×Taq PCR Master Mix和ddH2O组成。反应体系中，引物Sbp01F和引物Sbp01R的浓度均为10μM。
反应程序为：94℃3min；94℃30s，58℃30s，72℃30s，33个循环；72℃5min。
(3)取部分步骤(2)得到的PCR扩增产物，进行2％琼脂糖凝胶电泳，然后核酸染色，凝胶成像系统下拍照。
90个高粱微核心种质和高粱BTx623的的琼脂糖凝胶电泳结果依次见图1。
13个野生高粱和高粱BTx623的琼脂糖凝胶电泳结果依次见图2。
结果显示，13个野生高粱和90个高粱微核心种质的PCR扩增产物的带型为两种：带型A(显示一条带，为392bp)和无带型(没有条带)。
90个高粱微核心种质的分子鉴定结果见表1中第5列。
13个野生高粱的分子鉴定结果见表2中第4列。
根据90个高粱微核心种质的分子鉴定和芒有无的表型鉴定结果，发现分子鉴定为带型A的56个高粱微核心种质中，表型鉴定为无芒的55个，表型鉴定为有芒的1个(即24-4)，标记的正确率为98％；分子鉴定为无带型的34个高粱微核心种质中，表型鉴定为有芒的34个，标记的正确率为100％。90个高粱微核心种质的标记的正确率为99％。
根据13个野生高粱的分子鉴定和芒有无的表型鉴定结果，发现分子鉴定为无带型的13个野生高粱，表型鉴定为有芒的13个，标记的正确率为100％。
(二)多态性检测二
1.高粱种质资源芒有无的表型鉴定
同步骤(一)中1。
2.高粱种质资源的分子鉴定
(1)同步骤(一)2中(1)。
(2)同步骤(一)2中(2)。
(3)取部分步骤(2)得到的PCR扩增产物，测序；测序结果显示，13个野生高粱和90个高粱微核心种质的PCR扩增产物有两种，DNA序列甲(SEQ ID NO:7所示，392bp)和无DNA序列(没有核苷酸序列)。
90个高粱微核心种质的分子鉴定结果见表1中第6列。
13个野生高粱的分子鉴定结果见表2中第5列。
根据90个高粱微核心种质的分子鉴定和芒有无的表型鉴定结果，发现分子鉴定为DNA序列甲的56个高粱微核心种质中，表型鉴定为无芒的55个，表型鉴定为有芒的1个，标记的正确率为98％；分子鉴定为无DNA序列的34个高粱微核心种质中，表型鉴定为有芒的34个，标记的正确率为100％。90个高粱微核心种质的标记的正确率为99％。这一结果与多态性检测一中的实验结果完全一致。
根据13个野生高粱的分子鉴定和芒有无的表型鉴定结果，发现分子鉴定为无DNA序列的13个野生高粱中，表型鉴定为有芒的13个，标记的正确率为100％。这一结果与多态性检测一中的实验结果完全一致。
上述结果表明，步骤一开发的分子标记Sbp01具有较高的多态性。
三、分子标记Sbawn01的多态性检测
(一)多态性检测一
1.高粱种质资源芒有无的表型鉴定
同步骤二(一)中1。
90个高粱微核心种质芒有无的表型鉴定结果见表3中第4列(同步骤二(一)中1的结果)。
13个野生高粱芒有无的表型鉴定结果见表4中第3列(同步骤二(一)中1的结果)。
表3. 90个高粱微核心种质和BTx623的分子标记Sbawn01的多态性检测结果
表4. 13个野生高粱和BTx623的分子标记Sbawn01的多态性检测结果
2.高粱种质资源的分子鉴定
(1)分别提取13个野生高粱和90个高粱微核心种质幼嫩叶片的基因组DNA，得到高粱的基因组DNA。
(2)分别以步骤(1)提取的基因组DNA为模板，采用引物Sbawn01F和引物Sbawn01R组成的引物对Sbawn01进行PCR扩增，得到PCR扩增产物。
反应体系为25μL，由1μL高粱的基因组DNA(约50-100ng)、0.5μL引物Sbawn01F水溶液、0.5μL引物Sbawn01R水溶液、12.5μL 2×Taq PCR Master Mix和ddH2O组成。反应体系中，引物Sbawn01F和引物Sbawn01R的浓度均为10μM。
反应程序为：94℃3min；94℃30s，58℃30s，72℃30s，33个循环；72℃5min。
(3)取部分步骤(2)得到的PCR扩增产物，进行2％琼脂糖凝胶电泳，然后核酸染色，凝胶成像系统下拍照。
90个高粱微核心种质和高粱BTx623的琼脂糖凝胶电泳结果依次见图3。
13个野生高粱和高粱BTx623的琼脂糖凝胶电泳结果依次见图4。
结果显示，13个野生高粱和90个高粱微核心种质的PCR扩增产物的带型为两种：带型B(显示一条带，为532bp)和无带型(没有条带)。
90个高粱微核心种质的分子鉴定结果见表3中第5列。
13个野生高粱的分子鉴定结果见表4中第4列。
根据90个高粱微核心种质的分子鉴定和芒有无的表型鉴定结果，发现分子鉴定为带型B的35个高粱微核心种质中，表型鉴定为有芒的35个，标记的正确率为100％；分子鉴定为无带型的55个高粱微核心种质中，表型鉴定为无芒的55个，标记的正确率为100％。90个高粱微核心种质的标记的正确率为100％。
根据13个野生高粱的分子鉴定和芒有无的表型鉴定结果，发现分子鉴定为带型B的13个野生高粱中，表型鉴定为有芒的13个，标记的正确率为100％。
(二)多态性检测二
1.高粱种质资源芒有无的表型鉴定
同步骤(一)中1。
2.高粱种质资源的分子鉴定
(1)同步骤(一)2中(1)。
(2)同步骤(一)2中(2)。
(3)取部分步骤(2)得到的PCR扩增产物，测序；测序结果显示，13个野生高粱和90个高粱微核心种质的PCR扩增产物有两种，DNA序列乙(SEQ ID NO:8所示，532bp)和无DNA序列(没有核苷酸序列)。
90个高粱微核心种质的分子鉴定结果见表3中第6列。
13个野生高粱的分子鉴定结果见表4中第5列。
根据90个高粱微核心种质的分子鉴定和芒有无的表型鉴定结果，发现分子鉴定为DNA序列乙的35个高粱微核心种质中，表型鉴定为有芒的35个，标记的正确率为100％；分子鉴定为无DNA序列的55个高粱微核心种质中，表型鉴定为无芒的55个，标记的正确率为100％。90个高粱微核心种质的标记的正确率为100％。这一结果与多态性检测一中的实验结果完全一致。
根据13个野生高粱的分子鉴定和芒有无的表型鉴定结果，发现分子鉴定为DNA序列乙的13个野生高粱中，表型鉴定为有芒的13个，标记的正确率为100％。这一结果与多态性检测一中的实验结果完全一致。
上述结果表明，步骤一开发的分子标记Sbawn01具有较高的多态性。
四、分子标记Sb430的多态性检测
(一)多态性检测一
1.高粱种质资源芒有无的表型鉴定
同步骤二(一)中1。
90个高粱微核心种质芒有无的表型鉴定结果见表5中第4列(同步骤二(一)中1的结果)。
13个野生高粱芒有无的表型鉴定结果见表6中第3列(同步骤二(一)中1的结果)。
表5. 90个高粱微核心种质和BTx623的分子标记Sb430的多态性检测结果
表6. 13个野生高粱和BTx623的分子标记Sb430的多态性检测结果
2.高粱种质资源的分子鉴定
(1)分别提取13个野生高粱和90个高粱微核心种质幼嫩叶片的基因组DNA，得到高粱的基因组DNA。
(2)分别以步骤(1)提取的基因组DNA为模板，采用引物Sb430F和引物Sb430R组成的引物对Sb430进行PCR扩增，得到PCR扩增产物。
反应体系为25μL，由1μL高粱的基因组DNA(约50-100ng)、0.5μL引物Sb430F水溶液、0.5μL引物Sb430R水溶液、12.5μL 2×Taq PCR Master Mix和ddH2O组成。反应体系中，引物Sb430F和引物Sb430R的浓度均为10μM。
反应程序为：94℃3min；94℃30s，58℃30s，72℃30s，33个循环；72℃5min。
(3)取部分步骤(2)得到的PCR扩增产物，进行2％琼脂糖凝胶电泳，然后核酸染色，凝胶成像系统下拍照。
90个高粱微核心种质和高粱BTx623的琼脂糖凝胶电泳结果依次见图5。
13个野生高粱和高粱BTx623的琼脂糖凝胶电泳结果依次见图6。
结果显示，13个野生高粱和90个高粱微核心种质的PCR扩增产物的带型为两种：带型C(显示两条带，分别为575bp和343bp)和带型D(显示一条带，为343bp)。
90个高粱微核心种质的分子鉴定结果见表5中第5列。
13个野生高粱的分子鉴定结果见表6中第4列。
根据90个高粱微核心种质的分子鉴定和芒有无的表型鉴定结果，发现分子鉴定为带型D的35个高粱微核心种质中，表型鉴定为有芒的35个，标记的正确率为100％；分子鉴定为带型C的55个高粱微核心种质中，表型鉴定为无芒的55个，标记的正确率为100％。90个高粱微核心种质的标记的正确率为100％。
根据13个野生高粱的分子鉴定和芒有无的表型鉴定结果，发现分子鉴定为带型D的13个野生高粱中，表型鉴定为有芒的13个，标记的正确率为100％。
(二)多态性检测二
1.高粱种质资源芒有无的表型鉴定
同步骤(一)中1。
2.高粱种质资源的分子鉴定
(1)同步骤(一)2中(1)。
(2)同步骤(一)2中(2)。
(3)取部分步骤(2)得到的PCR扩增产物，测序；测序结果显示，13个野生高粱和90个高粱微核心种质的PCR扩增产物的核苷酸序列有两种，DNA序列丙(SEQ ID NO:9所示，575bp)和DNA序列丁(SEQ ID NO:10所示，343bp)。
90个高粱微核心种质的分子鉴定结果见表5中第6列。
13个野生高粱的分子鉴定结果见表6中第5列。
根据90个高粱微核心种质的分子鉴定和芒有无的表型鉴定结果，发现分子鉴定仅为DNA序列丁的35个高粱微核心种质中，表型鉴定为有芒的35个，标记的正确率为100％；分子鉴定为DNA序列丙和DNA序列丁的55个高粱微核心种质中，表型鉴定为无芒的55个，标记的正确率为100％。90个高粱微核心种质的标记的正确率为100％。这一结果与多态性检测一中的实验结果完全一致。
根据13个野生高粱的分子鉴定和芒有无的表型鉴定结果，发现分子鉴定仅为DNA序列丁的13个野生高粱中，表型鉴定为有芒的13个，标记的正确率为100％。这一结果与多态性检测一中的实验结果完全一致。
上述结果表明，步骤一开发的分子标记Sb430具有较高的多态性。
采用上述三个分子标记鉴定90个高粱微核心种质和13个野生高粱的芒有无，鉴定结果基本一致。
实施例2、三个分子标记的应用
一、杂交后代F7的获得
以高粱无芒BTx623为母本，有芒高粱品种L361(国家编号为12694)为父本，杂交获得F1；F1的表型为无芒，即无芒对有芒为显性。经多年自交获得该两个亲本的重组自交系F7群体，即570个杂交后代F7。
二、570个杂交后代F7的分子鉴定
1.按照实施例1二中多态性检测一的方法对570个杂交后代F7进行分子鉴定。
部分杂交后代F7的琼脂糖凝胶电泳结果依次见图7。
结果表明，318个杂交后代F7的PCR扩增产物的带型为带型A，这318个杂交后代F7鉴定为无芒品系；252个杂交后代F7的PCR扩增产物的带型为无带型，这252个杂交后代F7鉴定为有芒品系。
2.按照实施例1三中多态性检测一的方法对570个杂交后代F7进行分子鉴定。
部分杂交后代F7的琼脂糖凝胶电泳结果依次见图8。
结果表明，252个杂交后代F7的PCR扩增产物的带型为带型B，这252个杂交后代F7鉴定为有芒品系；318个杂交后代F7的PCR扩增产物的带型为无带型，这318个杂交后代F7鉴定为无芒品系。
3.按照实施例1四中多态性检测一的方法对570个杂交后代F7进行分子鉴定。
部分杂交后代F7的琼脂糖凝胶电泳结果依次见图9。
结果表明，252个杂交后代F7的PCR扩增产物的带型为带型D，这252个杂交后代F7鉴定为有芒品系；318个杂交后代F7的PCR扩增产物的带型为带型C，这318个杂交后代F7鉴定为无芒品系。
采用上述三种方法进行分子鉴定的结果完全一致。
三、570个杂交后代F7芒有无的表型鉴定
2018年6月，将570个杂交后代F7种植于辽宁省农业科学院试验基地，常规田间管理。抽穗期观察570个杂交后代F7是有芒还是无芒。
结果表明，步骤二中鉴定为无芒品系的318个杂交后代F7中，318个杂交后代F7通过表型鉴定为无芒，鉴定的准确率为100％；步骤二中鉴定为有芒品系的252个杂交后代F7中，252个杂交后代F7通过表型鉴定为有芒，鉴定的准确率为100％。
由此可见，本发明开发的三个分子标记均可以鉴定或辅助鉴定高粱品种有无芒。
以上对本发明进行了详述。对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的宗旨和范围，以及无需进行不必要的实验情况下，可在等同参数、浓度和条件下，在较宽范围内实施本发明。虽然本发明给出了特殊的实施例，应该理解为，可以对本发明作进一步的改进。总之，按本发明的原理，本申请欲包括任何变更、用途或对本发明的改进，包括脱离了本申请中已公开范围，而用本领域已知的常规技术进行的改变。按以下附带的权利要求的范围，可以进行一些基本特征的应用。
<110> 辽宁省农业科学院
<120> 高粱芒的有无分子标记的开发和应用
<160> 10
<170> PatentIn version 3.5
<210>1
<211>20
<212>DNA
<213>Artificial Sequence
<400>1
ggatcctttc tctacgggca 20
<210>2
<211>20
<212>DNA
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<400>2
gaattgcctg atcctggtgg 20
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<212>DNA
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<400>3
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<400>4
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<400>5
aggctgccgc agtagcagct gc 22
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<400>6
attagtgcga cgacaacgc 19
<210>7
<211>392
<212>DNA
<213>Artificial Sequence
<400>7
ggatcctttc tctacgggca ctcccaagcc gccgggaagg aaataaaccc atgaccacat 60
gggccttctt tagttctaaa atattttgca aaatcgatat tatagttttt tcgtttgtat 120
ttaacaaata ttgtccaatc atgtactaac tagactcaaa agattcgtct cgtcaattcc 180
gaccaaactg tgcaattagt ttttattttt gtctatattc aatacttcat acatgtgtat 240
aaagattcga tgtgacgagg aatctgaaaa aattttgcaa aatttgttgg gaactaaaca 300
aggccatggt ggctcgctct ctggtggcag ccacagccac ccggcccatg ccgaatcctt 360
gctggaaata aaccaccagg atcaggcaat tc 392
<210>8
<211>532
<212>DNA
<213>Artificial Sequence
<400>8
tcctttctct acgggcactc ccaagccgcc gggaaggaaa taaacccatg accacatggg 60
gccttcttta gttccaaaat attttacaaa atcgatattg tagttttttc gtttgtattt 120
gacaaatatt gtccaatcat gtactaacta gacttaaaag attcgtctcg tcaattccga 180
ccaaactgtg caattagttt ttatttttgt ctatattcaa tacttcatac atgtgtataa 240
agattcgatg tgacgaagaa tctgaaaaat tttgcaaaat ttgttgggaa ctaaacaagg 300
ccatggtggc tcgctctctg gtggcagcca cagccacccg gcccatgccg aatccttgct 360
ggaaaacaca caactcaaga gccgccagct ggctgctgcc attggcacgt gccgccactg 420
tacgtggtgg tcagactcct cagaccacac cacgacacct gcacaccatc tccatccgtg 480
aaagggtaaa aagtggtagt aaaaacggag cgtgcggtga aaagtgagaa gc 532
<210>9
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<212>DNA
<213>Artificial Sequence
<400>9
aggctgccgc agtagcagct gcagctgctg acctcagatc aggcaattct tgggatgtgc 60
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cctttgcaaa ccctagttct ttactcctgt tttctcgatt aaagtagcag cagaatccag 180
ggaccacgaa atcccgagct tctagtttac aatttcggcc ttgtttagtt ggcaaaattt 240
taggattttg gatactgtag cactttcgtt tgtttgtgat aaatattgtc caatcataaa 300
ctaattagag tcaaaagatt catctcgcga tttacaggca aactgtgtaa ttagttttta 360
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tgaaattttt tgcgaactaa acaaggcctt cttcttcttc ccactttccg ccgcctcgaa 480
agcttctctc ccttctcttc tgcacgagca tgttggtgat ggcggcgaaa agctcagttt 540
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<210>10
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<212>DNA
<213>Artificial Sequence
<400>10
aggctgccgc agtagcagct gcagctgctg acctcagatc aggcaattct tgggatgtgc 60
tgccctcaga ggagccgtac ttgccctgga ccagcctgat tctgatttca tctccctccc 120
cctttgcaaa ccctagttct ttactcctgt tttctcgatt aagtagcagc agaatccagg 180
gaccacgaaa tcccgagctt ctagtttaca atttcttctt cttcccactt tccgccgcct 240
cgaaagcttc tctcccttct cttctgcacg agcatgttgg tgatggcggc gaaaagctca 300
gttttttttt tttttgactc cccggcgttg tcgtcgcact aat 343
Claims (10)
1.引物对组合，包括特异引物对1、特异引物对2和/或特异引物对3；
特异引物对1由引物Sbp01F和引物Sbp01R组成；引物Sbp01F的核苷酸序列如SEQ IDNO:1所示；引物Sbp01R的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；
特异引物对2由引物Sbawn01F和引物Sbawn01R组成；引物Sbawn01F的核苷酸序列如SEQID NO:3所示；引物Sbawn01R的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；
特异引物对3由引物Sb430F和引物Sb430R组成；引物Sb430F的核苷酸序列如SEQ IDNO:5所示；引物Sb430R的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示。
2.一种试剂盒，含有权利要求1所述引物对组合。
3.权利要求1所述引物对组合或权利要求2所述试剂盒的应用，为b1)-b4)中的任一种：
b1)鉴定或辅助鉴定待测高粱芒的有无；
b2)筛选或辅助筛选有芒或疑似有芒的高粱品种；
b3)筛选或辅助筛选无芒或疑似无芒的高粱品种；
b4)高粱育种。
4.DNA片段甲、DNA片段乙、DNA片段丙或DNA片段丁；
以待测高粱的基因组DNA为模板，采用权利要求1中所述特异引物对1扩增得到的DNA片段甲；所述DNA区段甲的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示；
以待测高粱的基因组DNA为模板，采用权利要求1中所述特异引物对2扩增得到的DNA片段乙；所述DNA区段乙的核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示；
以待测高粱的基因组DNA为模板，采用权利要求1中所述特异引物对3扩增得到的DNA片段丙或DNA片段丁；所述DNA区段丙的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示；所述DNA区段丁的核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示。
5.权利要求4所述DNA片段甲、所述DNA片段乙、所述DNA片段丙或所述DNA片段丁的应用，为b1)-b9)中的任一种：
b1)鉴定或辅助鉴定待测高粱芒的有无；
b2)筛选或辅助筛选有芒或疑似有芒的高粱品种；
b3)筛选或辅助筛选无芒或疑似无芒的高粱品种；
b4)高粱育种；
b5)制备鉴定或辅助鉴定待测高粱芒的有无的产品；
b6)制备筛选或辅助筛选有芒或疑似有芒的高粱品种的产品；
b7)制备筛选或辅助筛选无芒或疑似无芒的高粱品种的产品；
b8)制备高粱育种的产品；
b9)作为鉴定或辅助鉴定待测高粱芒有无的分子标记。
6.c1)或c2)；
c1)鉴定或辅助鉴定待测高粱芒有无的方法，包括如下步骤：
(c1-1)以待测高粱的基因组DNA为模板，采用权利要求1中所述特异引物对1进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；
(c1-2)完成步骤(c1-1)后，进行如下判断：如果所述PCR扩增产物中具有DNA片段、待测高粱无芒或疑似无芒，如果所述PCR扩增产物中不具有DNA片段、待测高粱有芒或疑似有芒；
c2)鉴定或辅助鉴定待测高粱芒有无的方法，包括如下步骤：
(c2-1)检测待测高粱的基因组DNA中是否含有DNA区段甲；所述DNA区段甲的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示；
(c2-2)完成步骤(c2-1)后，进行如下判断：如果待测高粱的基因组DNA中含有DNA区段甲、待测高粱无芒或疑似无芒，如果待测高粱的基因组DNA中不含有DNA区段甲、待测高粱有芒或疑似有芒。
7.d1)或d2)；
d1)鉴定或辅助鉴定待测高粱芒有无的方法，包括如下步骤：
(d1-1)以待测高粱的基因组DNA为模板，采用权利要求1中所述特异引物对2进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；
(d1-2)完成步骤(d1-1)后，进行如下判断：如果所述PCR扩增产物中具有DNA片段、待测高粱有芒或疑似有芒，如果所述PCR扩增产物中不具有DNA片段、待测高粱无芒或疑似无芒；
d2)鉴定或辅助鉴定待测高粱芒有无的方法，包括如下步骤：
(d2-1)检测待测高粱的基因组DNA中是否含有DNA区段乙；所述DNA区段乙的核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示；
(d2-2)完成步骤(d2-1)后，进行如下判断：如果待测高粱的基因组DNA中含有DNA区段乙、待测高粱有芒或疑似有芒，如果待测高粱的基因组DNA中不含有DNA区段乙、待测高粱无芒或疑似无芒。
8.e1)或e2)；
e1)鉴定或辅助鉴定待测高粱芒有无的方法，包括如下步骤：
(e1-1)以待测高粱的基因组DNA为模板，采用权利要求1中所述特异引物对3进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；
(e1-2)完成步骤(e1-1)后，进行如下判断：如果所述PCR扩增产物中具有一个DNA片段、待测高粱有芒或疑似有芒，如果所述PCR扩增产物中具有两个DNA片段、待测高粱无芒或疑似无芒；
e2)鉴定或辅助鉴定待测高粱芒有无的方法，包括如下步骤：
(e2-1)检测待测高粱的基因组DNA中是否含有DNA区段丙和DNA区段丁；所述DNA区段丙的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示；所述DNA区段丁的核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示；
(e2-2)完成步骤(e2-1)后，进行如下判断：如果待测高粱的基因组DNA中含有DNA区段丙且含有DNA区段丁、待测高粱无芒或疑似无芒，如果待测高粱的基因组DNA中含有DNA区段丁且不含有DNA区段丙、待测高粱有芒或疑似有芒。
9.如权利要求6至8任一所述的方法，其特征在于：所述检测待测高粱的基因组DNA中是否含有DNA区段甲、所述检测待测高粱的基因组DNA中是否含有DNA区段乙或所述检测待测高粱的基因组DNA中是否含有DNA区段丙和DNA区段丁的方法为直接测序。
10.如权利要求6至8任一所述的方法，其特征在于：
所述检测待测高粱的基因组DNA中是否含有DNA区段甲的方法为以待测高粱的基因组DNA为模板，采用权利要求1中所述特异引物对1进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；之后将PCR扩增产物进行测序；
所述检测待测高粱的基因组DNA中是否含有DNA区段乙的方法为以待测高粱的基因组DNA为模板，采用权利要求1中所述特异引物对2进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；之后将PCR扩增产物进行测序；
所述检测待测高粱的基因组DNA中是否含有DNA区段丙和DNA区段丁的方法为以待测高粱的基因组DNA为模板，采用权利要求1中所述特异引物对3进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；之后将PCR扩增产物进行测序。
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Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105603072A (zh) * | 2016-01-22 | 2016-05-25 | 辽宁省农业科学院 | 一种控制高粱芒有无基因SbAn-1以及SNP突变位点和应用 |
| CN107034302A (zh) * | 2017-06-07 | 2017-08-11 | 湖南农业大学 | 一种利用SLAF‑seq技术开发芒属植物SNP分子标记进行亲缘关系鉴定的方法 |
-
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Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105603072A (zh) * | 2016-01-22 | 2016-05-25 | 辽宁省农业科学院 | 一种控制高粱芒有无基因SbAn-1以及SNP突变位点和应用 |
| CN107034302A (zh) * | 2017-06-07 | 2017-08-11 | 湖南农业大学 | 一种利用SLAF‑seq技术开发芒属植物SNP分子标记进行亲缘关系鉴定的方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Hong Luo等.SorGSD: a sorghum genome SNP database.《Biotechnol Biofuels》.2016,第9卷6. * |
| Lai J.等.Accession No. AF466200.2.《Genbank》.2016, * |
| 籍贵苏等.高粱单核苷酸多态性( SNP) 标记开发研究初报.《华北农学报》.2018,第33卷(第2期),119-125. * |
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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