CN111821458A - 一种用于非小细胞肺癌治疗的药物组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明属医药技术领域,涉及治疗非小细胞肺癌的药物组合物。具体涉及一种Hedgehog抑制剂与细胞自噬抑制剂组成的药物组合物或制备的方法,本发明的药物组合物中Hedgehog抑制剂单用不能有效抑制非小细胞肺癌肿瘤的增殖,而与自噬抑制剂联用后能快速减轻小鼠的肿瘤负荷且更能抑制其关键预后蛋白分子GLI2的表达;同时,该药物组合物于EGFR野生型的肿瘤同样具有显著的治疗效果;且其对于小鼠的体重没有显著的影响,证实了所述药物组合物在实验期间没有显著的药物毒性;该药物组合物具有靶向性好、疗效稳定等特点,有望成为非小细胞肺癌治疗的新一代药物。
Description
技术领域
本发明属医药技术领域,涉及用于非小细胞肺癌治疗的药物组合物,具体涉及一种用于非小细胞肺癌治疗的药物组合物的特征、组成、制备方法,及其在EGFR突变型以及EGFR野生型非小细胞肺癌治疗中的应用。
背景技术
现有技术公开了非小细胞肺癌的研究现状,结果显示,肺癌是世界上发病率和死亡率最高的最恶性肿瘤之一,其2018年新增肺癌病例达到了210万例,死亡180万例,约占癌症死亡人数的五分之一(18.4%)[1]。肺癌通常分为小细胞肺癌(SCLC)和非小细胞肺癌(NSCLC);其中非小细胞肺癌占80%~85%,其五年总生存率仅为17%,而临床IV期的肺癌患者的五年生存率低于2%[2];因此,进一步研究新的非小细胞肺癌治疗方法是目前最急迫需要的。
研究公开了EGFR是原癌基因C-ErbB的表达产物,是细胞存活、生长、分化及癌细胞转移的调控因子;EGFR突变会引起酪氨酸激酶(tyrosine kinase,TK)活化异常,可抑制细胞凋亡,并加速血管形成,增强细胞黏附性,最终导致肿瘤细胞的增殖,是非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)中最常见的驱动基因之一[3];由于EGFR基因在非小细胞肺癌中至关重要,且EGFR是否突变对于非小细胞肺癌的生长影响较大,故而临床实践中对于非小细胞肺癌的治疗通常须先经过EGFR基因的病理分型,根据患者肿瘤组织中的酪氨酸激酶位点19外显子和21外显子是否缺失突变分为EGFR突变型和EGFR野生型[4],并采用不同的治疗干预策略。
临床实践中,对于EGFR突变型的非小细胞肺癌患者通常使用吉非替尼、厄洛替尼和埃克替尼为代表的EGFR-TKI进行治疗,虽然,EGFR-TKI作为一线治疗药物对于EGFR突变的晚期非小细胞肺癌的疗效显著,且优于传统含铂类化疗方案,然而该类患者常出现在治疗后的2年内逐渐对TKI的作用耐受,从而使疗效下降[5];此外,对于EGFR野生型的患者,目前临床上仅能使用顺铂联合紫杉醇进行治疗,该种治疗方法不仅副作用大,而且疗效有限;据有关统计显示,当前患者经传统化疗后其中位生存期往往仅为8-10个月,临床治疗的形势极其严峻。
目前有关Hedgehog信号通路及其在非小细胞肺癌中作用的研究结果显示,所述Hh信号通路组成中,
(1)Hh配体
果蝇和其它无脊椎动物中只有一种Hh基因,而在哺乳动物中,Hh家族包括三个同源基因:Sonic hedgehog(Shh)、Desert hedgehog(Dhh)和Indian hedgehog(Ihh),分别编码具有自我催化能力的Shh、Dhh和Ihh糖蛋白,而Hh信号传导源于这种自我催化反应[6];Shh在神经系统、皮肤、消化道中广泛表达,Ihh主要在骨、软骨、消化道、胰腺中表达,Dhh主要在生殖腺中表达,也在外周神经和胰腺中表达。Hh蛋白属于高度保守的分泌性糖蛋白,分子量约45kDa。Hh蛋白家族成员由两个结构域组成:20kDa的氨基端(Hh-N)结构域和25kDa的羧基端(Hh-C)结构域,Hh-N具有Hh配体的全部信号传递功能,Hh-C具有自身蛋白水解酶活性及胆固醇转移酶功能。Hh前体蛋白在内质网中通过自身催化分裂成Hh-N片段及Hh-C片段两部分,其中Hh-C共价结合胆固醇分子,并将其转移到Hh-N的氨基端,随后在酰基转移酶作用下发生棕榈酰化,通过上述翻译后的修饰过程,最后才变成具有信号转导功能的成熟功能蛋白[7];
(2)跨膜糖蛋白PTCH和SMO
在靶细胞膜上有两种主要的Hh下游跨膜受体PTCH和SMO,均为跨膜糖蛋白[8];PTCH是一种12个氨基酸跨膜蛋白,有2个细胞外结合域和1个细胞内结构域,具有结合Hh配体和抑制SMO的2种功能;人类有两种PTCH同源基因,PTCHl和PTCH2;而SMO是一种7个氨基酸的跨膜蛋白,属于G蛋白偶联受体超家族成员,负责细胞内信号传导和靶基因的激活,SMO的活性对于果蝇和脊椎动物中Hh信号是必须的;PTCH是Hh转导途径的负调控因子,当PTCH1与Hh配体结合后,就可以将SMO从抑制状态释放,进而引发Hh信号级联反应;与PTCH1结合的Hh配体数量受到一些Hh结合蛋白的严密调控,保证整个信号通路的适度活性。
(3)核转录因子Gli
Hedgehog信号通路的胞内信号分子为Gli蛋白家族,Gli蛋白是分子量较大的多功能转录因子,定位于细胞核和细胞浆,将信号传送至核内;该蛋白家族成员只有在维持全长时才具有转录激活因子的功能,启动下游靶基因的转录;当羧基端被蛋白酶体水解后,就形成了转录抑制因子,抑制下游靶基因的转录。果蝇只有一种核转录因子,为Gli的同源基因;脊椎动物中已鉴定出3个成员,分别为Glil、Gli2和Gli3,其中Gli和Gli2是Hh通路激活因子,而Gli3具备激活和抑制的双向功能,但主要是转录抑制因子,个别情况下以激活因子存在来调节生长发育;由于Gli1既是Hh通路的激活因子,也是该通路激活的靶基因,因此将检测Gli1表达作为Hh通路是否激活的标志[9]。
研究结果还显示了Hedgehog信号通路在肿瘤中异常激活的方式:正常情况下Hh信号通路在胚胎发育成熟后,进入失活状态,SMO蛋白的活性被抑制,但若该信号通路中Hh蛋白异常表达、SMO蛋白的抑制效应被解除,导致Hh信号通路的异常激活,Gli蛋白发挥转录激活因子功能,触发下游靶基因表达,引起细胞过度增殖,最终将导致肿瘤的发生[10]。
研究发现多种肿瘤组织中,包括肺癌、乳腺癌等均存在着Hh信号通路的异常激活;在肿瘤中存在三种Hh信号通路异常激活的方式:第一种为Hh信号通路成员(PATH1或SMO)基因突变,导致Hh信号通路的异常激活,PATH1功能丧失性突变见于单发基底细胞癌、乳腺癌等,而SMO功能激活性突变在肝癌中被发现;第二种为自分泌型,即Hh配体既由肿瘤细胞分泌又作用于肿瘤细胞自身;第三种为旁分泌型,分为两种亚型:其一是肿瘤细胞分泌Hh配体后,作用于间质细胞,间质细胞通过其他通路再反作用于肿瘤细胞;另一为肿瘤间质细胞分泌Hh配体后,作用于肿瘤细胞,该种肿瘤细胞与周围间质复杂的相互作用为肿瘤细胞的生长增殖创造了有利的微环境[11]。
还有研究报道了Hedgehog信号通路与非小细胞肺癌的关系:
有大量的研究结果表明Hh在非小细胞肺癌,尤其是腺癌的细胞中高表达。据报道,EGFR突变型和野生型的NSCLC细胞系可通过自分泌途径阳性表达Hh,而且阳性表达下游转录因子Gli1。当把Gli1敲除后,所述细胞系开始变得对Hh信号通路抑制剂敏感,说明NSCLC可能存在其他的Hh信号通路异常激活模式,如通过旁旁分泌将信号转导给下游的转录因子Gli,代偿了药物对通路的抑制作用,使细胞继续生长增殖。
有研究进一步表明,与其它肿瘤细胞不同的是,单独敲除Gli1对于非小细胞肺癌的生长无显著影响;如,通过靶向Gli1的shRNA和siRNA治疗后裸鼠皮下A549细胞的移植瘤体积与对照组相比没有显著差异,而同时抑制Gli1和Gli2则能显著抑制移植瘤在裸鼠体内的生长;同时,对于临床非小细胞肺癌患者的研究数据证实,仅高表达Gli1对于患者的预后没有显著的影响,而高表达Gli2的患者预后则明显差于Gli2低水平的患者;此外,在一些铂类和TKI耐受的患者肿瘤组织中也发现Gli2高表达的情况[12];上述研究结果说明,是否能在治疗中抑制Gli2的表达是治疗是否能取得较好疗效的关键。
还有治疗细胞自噬与非小细胞肺癌的研究结果显示,PI3K/AKT/mTOR信号通路介导“自噬”现象,是表示细胞内的自我吞噬,是细胞内降解无效蛋白质和受损细胞器的一种方式;目前发现自噬有三种形式,分子伴侣介导的自噬、小自噬和大自噬,根据它们的功能以及将物质与溶酶体融合的方式而划分,大自噬会先形成双膜结构再与溶酶体融合,而小自噬则直接与溶酶体融合,然后在溶酶体的作用下将细胞器和大分子蛋白降解;自噬可在很多种癌细胞中被诱导,但对癌细胞而言是把双刃剑,既能为细胞提供能量促进其生长,也会在过度的情况下促进细胞死亡,即自噬性死亡,但该两者之间的转换机制目前仍不明确,有认为可能与细胞代谢紊乱有关。
自噬从首次被发现到迄今为止,业内对其已进行了大量的研究,目前已发现41种自噬相关蛋白(autophagy-related gene,ATG),研究表明,上述蛋白参与了自噬的诱导、起始、自噬膜的延长和成熟降解阶段;在自噬形成过程中,哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)以及Beclin-1蛋白对自噬的调控起到了至关重要的作用,mTOR有两种复合物,分别是mTORC1和mTORC2,类UNC-51激酶1(ULK1)具有促进自噬的作用,它是mTORC1的底物,营养充足条件下,mTORC1磷酸化ULK1抑制其与腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的作用阻断自噬,而处于饥饿状态时,AMPK抑制mTORC1从而与ULK1发挥作用,通过磷酸化ULK1使其激活,再由激活的ULK1磷酸化Vps34-Beclin-1-Atg14复合体,脂质激酶Vps34激活后产生三磷酸磷脂酰肌醇(PIP3)促进自噬小体形成。mTOR是多条信号通路的中间环节,其中PI3K/Akt/mTOR信号通路不仅是EGF的下游通路,同时也是诱导自噬的重要信号通路之一,正常情况下,细胞因子及胞外的生长因子通过受体酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinase,RTKs)激活PI3K,再催化PIP2转化成PIP3,然后对Akt进行磷酸化使其被激活,P-Akt磷酸化抑癌基因TSC2,P-TSC2从TSC1/TSC2的复合物中解聚,正向调控mTOR。mTOR通过作用下游的效应物转录起始因子4E结合蛋白1(4E-BP1),核糖体蛋白S6(S6K1)激酶启动基因的转录和翻译来控制自噬;Beclin-1蛋白有四个结构域,这些结构域通过与Bcl-2、肿瘤抑制基因(UVRAG)、Vps34、死亡相关蛋白激酶(DAPK)等结合对自噬进行调控。PI3K/AKT/mTOR信号通路的反常在肺癌中常有发生,引起反常的原因有多种,有可能是酪氨酸激酶上游信号的放大,或是KRAS、PI3K、Akt等基因的突变,有时还会与抑癌基因PTEN缺失有关,这些现象在NSCLC的鳞癌中发生更加频繁;目前以该条信号通路作为靶标治疗NSCLC的相关抑制剂,包括mTORC1抑制剂、PI3K特异性抑制剂、mTOR催化靶点的抑制剂、PI3K-mTOR双重抑制剂及Akt抑制剂[13,14];不论是临床前还是临床中上述抑制剂对NSCLC的治疗均发挥了一定的疗效,尤其是与其他抗癌药物联合运用;然而实践显示,所述抑制剂仅能部分增强铂类和TKI的疗效,并不能根本上解决非小细胞肺癌的耐药机制。
基于现有技术的基础与现状,本申请的发明人拟提供治疗非小细胞肺癌的药物组合物,尤其涉及一种Hedgehog抑制剂与细胞自噬抑制剂组成的药物组合物及制备的方法,本发明的细胞自噬抑制剂与Hedgehog抑制剂组成的药物组合物能有效抑制非小细胞肺癌组织中Gli1和Gli2的表达,彻底逆转非小细胞肺癌耐药的问题,从而显著抑制肿瘤细胞的生长。
与本发明有关的参考文献:
1.Cassidy,R.J.et al.Next-generation sequencing and clinical outcomesof patients with lung adenocarcinoma treated with stereotactic bodyradiotherapy.Cancer.2017;123:3681-90.
2.Yotsukura,M.Y.et al.Clinical and pathological characteristics ofEGFR mutation in operable early-stage lung adenocarcinoma.Lung cancer.2017;109:45-51.
3.Hamaguchi,R.et al.Effects of an Alkaline Diet on EGFR-TKI Therapyin EGFR Mutation-positive NSCLC.Anticancer Res.2017;37:5141-5145.
4.Vyse,S.et al.Targeting EGFR exon 20insertion mutations in non-smallcell lung cancer.Signal Transduct Target Ther.2019;4:5.
5.Miyawaki,E.et al.Optimal Sequence of Local and EGFR-TKI Therapy forEGFR-mutant NSCLC with Brain Metastases Stratified by Number of BrainMetastases.Int J Radiat Oncol Biol Phys.2019.pii:S0360-3016(19)30307-4.
6.Zhao,L.et al.The emerging roles of phosphatases in Hedgehogpathway.Cell Commun Signal.2017;15:35.
7.Rivell,A.et al.Sonic hedgehog expression in the postnatalbrain.Biol Open.2019.pii:bio.040592.
8.Justilien,V.,Fields,A.P.Molecular pathways:novel approaches forimproved therapeutic targeting of Hedgehog signaling in cancer stemcells.Clin Cancer Res.2015;21:505-13.
9.Basset-Seguin,N.,Sharpe,H.J.&de Sauvage,F.J.Efficacy of Hedgehogpathway inhibitors in Basal cell carcinoma.Molecular cancertherapeutics.2015;14:633-41.
10.Kim,E.J.et al.Pilot clinical trial of hedgehog pathway inhibitorGDC-0449(vismodegib)in combination with gemcitabine in patients withmetastatic pancreatic adenocarcinoma.Clin Cancer Res.2014;20:5937-45.
11.Mpekris,F.et al.Sonic-hedgehog pathway inhibition normalizesdesmoplastic tumor microenvironment to improve chemo-and nanotherapy.JControl Release.2017;261:105-112.
12.Giroux,Leprieur,E.et al.Sonic Hedgehog Pathway Activation IsAssociated With Resistance to Platinum-Based Chemotherapy in Advanced Non-Small-Cell Lung Carcinoma.Clin Lung Cancer.2016;17:301-8.
13.Zeng,X.&Ju,D.Hedgehog Signaling Pathway and Autophagy inCancer.Int J Mol Sci.2018;19.pii:E2279.
14.Niu,C.Metformin alleviates hyperglycemia-induced endothelialimpairment by downregulating autophagy via the Hedgehogpathway.Autophagy.2019:1-28.。
发明内容
本发明的目的是基于现有技术的基础与现状,提供一种用于非小细胞肺癌治疗的药物组合物,具体涉及一种Hedgehog抑制剂与细胞自噬抑制剂组成的药物组合物及制备的方法,本发明的用于非小细胞肺癌治疗的药物组合物,由一种Hedgehog通路抑制剂和自噬抑制剂组成,其每个药物成分单用对于肿瘤生长没有显著的抑制效果,但是组成药物组合物后对于非小细胞肺癌有显著的疗效。
本发明的细胞自噬抑制剂与Hedgehog抑制剂组成的药物组合物能有效抑制非小细胞肺癌组织中Gli1和Gli2的表达,彻底逆转非小细胞肺癌耐药的问题,从而显著抑制肿瘤细胞的生长。
更具体的,本发明得用于非小细胞肺癌治疗的药物组合物,其由Hedgehog通路抑制剂和自噬抑制剂组成,其中,
所述Hedgehog通路抑制剂包括但不限于Vismodegib(GDC-0449),GANT61,Mebendazole,SANT-1,RU-SKI 43等;优选的,Hedgehog通路抑制剂是Vismodegib(GDC-0449);
所述细胞自噬抑制剂包括但不限于氯喹(Chloroquine,CQ),羟氯喹(Hydroxychloroquine),3-MA,沃曼青霉素,巴伐洛霉素A-1,NH4Cl,LY294002等;优选的细胞自噬抑制剂中是氯喹(Chloroquine,CQ);
所述Hedgehog通路抑制剂和自噬抑制剂,序贯给药也能对非小细胞肺癌有显著的疗效。
本发明还提供了制备所述药物组合物的方法,其包括:
(1)Vismodegib与氯喹药物组合物的配制方法:先将羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)溶于水制备成25%的水溶液,随后称取Vismodegib溶于二甲亚砜(DMSO)制备成200mg/mL的溶液;将制备好的Vismodegib二甲亚砜溶液缓慢加入HP-β-CD水溶液中,并使DMSO的终浓度为5%,加入适量CQ,配置成10mg/mL的溶液,于室温下缓慢颠倒混匀,直至溶液成为清澈的药物溶胶悬液,置于4℃保存;或,
(2)GANT61与氯喹药物组合物的配制方法:先将羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)溶于水制备成25%的水溶液,随后称取GANT61溶于二甲亚砜(DMSO)制备成135mg/mL的溶液;将制备好的GANT61二甲亚砜溶液缓慢加入HP-β-CD水溶液中,并使DMSO的终浓度为5%,加入适量CQ,配置成10mg/mL的溶液,于室温下缓慢颠倒混匀,直至溶液成为清澈的药物溶胶悬液,置于4℃保存;或,
(3)Vismodegib与羟氯喹药物组合物的配置方法:先将羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)溶于水制备成25%的水溶液,随后称取Vismodegib溶于二甲亚砜(DMSO)制备成200mg/mL的溶液;将制备好的Vismodegib二甲亚砜溶液缓慢加入HP-β-CD水溶液中,并使DMSO的终浓度为5%,加入羟氯喹,使其终浓度为5mg/mL,于室温下缓慢颠倒混匀,直至溶液成为清澈的药物溶胶悬液,置于4℃保存。
本发明公开了一种Hedgehog抑制剂与细胞自噬抑制剂组成的药物组合物以及通过序贯给药用于非小细胞肺癌的干预措施,通过相关实验,其结果表明,所述药物组合物中的Hedgehog抑制剂单用不能有效抑制非小细胞肺癌肿瘤的增殖,而与自噬抑制剂联用后,不但能快速减轻小鼠的肿瘤负荷,更能抑制其关键预后蛋白分子GLI2的表达;同时,该药物组合物与传统的小分子靶向治疗药物不同,对于EGFR突变型和野生型的非小细胞肺癌同样具有显著的治疗效果;且其对于小鼠的体重没有显著的影响,证实了该药物组合物在实验期间没有显著的药物毒性;所述药物组合物具有靶向性好、疗效稳定等特点,有望成为非小细胞肺癌治疗的新一代药物。
附图说明
图1显示了Hedgehog抑制剂Vismodegib不能导致非小细胞肺癌肿瘤的缩小,其中,
A、B:Vismodegib治疗后皮下瘤的瘤体积;
C、D:经过4周治疗后裸鼠皮下瘤肿瘤重量的变化。
图2显示了Hedgehog信号通路抑制剂不能降低导致非小细胞肺癌耐药及预后不良的因子Gli2的表达,并同时上调了细胞自噬的水平。
图3显示了在Hedgehog信号通路被抑制后,A549和NCI-H1975细胞内细胞自噬的水平显著上调,其中,
A、B:Vismodegib治疗后非小细胞肺癌细胞和组织中存在大量自噬样囊泡;
C、D:Vismodegib能在非小细胞肺癌细胞中诱导自噬流。
图4显示了本发明所述药物组合物显著抑制了非小细胞肺癌裸鼠皮下瘤的生长并杀伤了肿瘤细胞,其中,
A、B:药物组合物治疗28天后非小细胞肺癌肿瘤体积的变化;
C、D:药物组合物治疗28天后非小细胞肺癌体内模型中瘤重的变化;
E:各组的HE染色分析。
图5显示了本发明所述药物组合物显著下调了非小细胞肺癌耐药及预后不良基因Gli2的水平并诱导了细胞凋亡,其中,
A:治疗28天后肿瘤组织中Gli2、Gli1等蛋白的Western blot检测;
B:治疗28天后肿瘤组织中Caspase3活性的检测;
C、D:治疗28天后肿瘤组织Cleaved-Caspase 3的免疫组化检测以及ROS的检测。
具体实施方式
实施例1药物组合物的配制和保存
(1)Vismodegib与氯喹药物组合物的配制:先将羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)溶于水制备成25%的水溶液,随后称取Vismodegib溶于二甲亚砜(DMSO)制备成200mg/mL的溶液;将制备好的Vismodegib二甲亚砜溶液缓慢加入HP-β-CD水溶液中,并使DMSO的终浓度为5%,加入适量CQ,配置成10mg/mL的溶液,于室温下缓慢颠倒混匀,直至溶液成为清澈的药物溶胶悬液,置于4℃保存;
(2)GANT61与氯喹药物组合物的配制:先将羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)溶于水制备成25%的水溶液,随后称取GANT61溶于二甲亚砜(DMSO)制备成135mg/mL的溶液;将制备好的GANT61二甲亚砜溶液缓慢加入HP-β-CD水溶液中,并使DMSO的终浓度为5%,加入适量CQ,配置成10mg/mL的溶液,于室温下缓慢颠倒混匀,直至溶液成为清澈的药物溶胶悬液,置于4℃保存。
(3)Vismodegib与羟氯喹药物组合物的配制:先将羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)溶于水制备成25%的水溶液,随后称取Vismodegib溶于二甲亚砜(DMSO)制备成200mg/mL的溶液;将制备好的Vismodegib二甲亚砜溶液缓慢加入HP-β-CD水溶液中,并使DMSO的终浓度为5%,加入羟氯喹,使其终浓度为5mg/mL,于室温下缓慢颠倒混匀,直至溶液成为清澈的药物溶胶悬液,置于4℃保存。
序贯给药干预:其中Vismodegib给药方法为口服给药,二甲亚砜(DMSO)制备成200mg/mL的溶液;将制备好的Vismodegib二甲亚砜溶液缓慢加入灭菌后的ddH2O中,充分混匀,每次按50mg/kg体重口服给药;氯喹为腹腔注射给药,将氯喹荣誉灭菌水配置成10mg/mL的溶液,给药时按50mg/kg腹腔注射给药。
实施例2
Hedgehog通路抑制剂单独使用不能抑制非小细胞肺癌裸鼠皮下移植瘤的生长实验
通过在裸鼠皮下接种1*107个A549或NCI-H1975非小细胞肺癌细胞从而构建裸鼠非小细胞肺癌皮下瘤模型。当肿瘤长至平均75cm3后每两天给予一次Vismodegib混悬液治疗(剂量为50mg/kg),观察28天,期间测量肿瘤体积,实验结束后处死实验裸鼠,记录瘤重,结果显示,两个Vismodegib治疗30天后裸鼠皮下肿瘤相比较对照组而言没有显著性差异(P>0.05),(如图1所示)。
实施例3
Hedgehog通路抑制剂给药后,非小细胞肺癌裸鼠皮下移植瘤的中Gli2的表达没有显著改变,且自噬相关蛋白LC3-II的水平显著提升:
本实验研究了非小细胞肺癌为何对Vismodegib治疗不敏感的原因,对治疗前后肿瘤内的Hedgehog相关基因Gli1和Gli2进行了检测,并同时检测了细胞自噬的相关蛋白LC3-II;结果显示,在治疗后Hedgehog相关基因Gli1的表达水平显著下降,结果表明Vismodegib抑制了肿瘤内Hedgehog信号通路的活性,然而最关键的预后因子Gli2的表达水平并没有显著的变化,推测可能有其他机制影响了Gli2的活性,从而导致Vismodegib的疗效不佳;同时,结果显示了自噬相关蛋白LC3-II表达水平也显著提升,提示自噬可能与Gli2的高表达有关(如图2所示)。
实施例4
Vismodegib的治疗在非小细胞肺癌细胞和移植瘤组织中诱导了自噬的发生
进一步研究确认自噬是否真的在vismodegib治疗后被激活,本实验采用电镜及激光共聚焦等手段对细胞自噬的自噬体和溶酶体进行观察,结果显示在vismodegib治疗后在电镜下可见非小细胞肺癌细胞内存在大量自噬泡;同时,通过激光共聚焦确认了自噬体在形成后被溶酶体吞噬并降解的过程,结果表明,非小细胞肺癌A549和NCI-H1975细胞在vismodegib治疗后,细胞自噬被激活(如图3所示)。
实施例5
Hedgehog通路抑制剂Vismodegib与自噬抑制剂CQ的药物组合物能显著抑制A549和NCI-H1975细胞裸鼠皮下移植瘤的生长
制备vismodegib与自噬抑制剂CQ的药物组合物,通过联合治疗观察细胞自噬是否在非小细胞肺癌细胞耐受vismodegib治疗中起重要作用,结果表明,所述药物组合物能显著抑制A549和NCI-H1975移植瘤在裸鼠皮下的生长,并显著杀伤肿瘤细胞;同时单独vismodegib的治疗仍然对移植瘤没有显著的疗效,该结果表明,所述药物组合物打破了非小细胞肺癌的耐药机制,从而产生了显著的抗肿瘤效果(如图4所示)。
实施例6
Hedgehog通路抑制剂Vismodegib与自噬抑制剂CQ的药物组合物能显著抑制A549和NCI-H1975细胞裸鼠皮下移植瘤组织中Gli1和Gli2的表达,同时诱导了ROS的升高和Caspase 3的剪切;
本申请对抑制自噬打破非小细胞肺癌耐药的机制进行了进一步的探讨,研究细胞自噬是否改善了非小细胞肺癌耐药及预后不良的相关因子Gli2的表达,结果表明,所述药物组合物不仅显著抑制了不良因子Gli2的表达,并能显著诱导肿瘤内ROS的产生以及Caspase3的剪切,从而导致肿瘤细胞凋亡(如图5所示)。
Claims (6)
1.一种治疗非小细胞肺癌的药物组合物,其特征在于,由Hedgehog通路抑制剂和自噬抑制剂组成,其中,
所述Hedgehog通路抑制剂选自Vismodegib(GDC-0449),GANT61,Mebendazole,SANT-1或RU-SKI 43;
所述细胞自噬抑制剂选自氯喹(Chloroquine,CQ),羟氯喹(Hydroxychloroquine),3-MA,沃曼青霉素,巴伐洛霉素A-1,NH4Cl或LY294002。
2.按权利要求1所述的治疗非小细胞肺癌的药物组合物,其特征在于,所述Hedgehog通路抑制剂是Vismodegib(GDC-0449)。
3.按权利要求1所述的治疗非小细胞肺癌的药物组合物,其特征在于,所述细胞自噬抑制剂是氯喹(Chloroquine,CQ)。
4.按权利要求1所述的治疗非小细胞肺癌的药物组合物,其特征在于,所述药物组合物中Hedgehog通路抑制剂和自噬抑制剂,采用序贯给药方式。
5.按权利要求1所述的治疗非小细胞肺癌的药物组合物,其特征在于,所述的非小细胞肺癌包括EGFR突变型和野生型的非小细胞肺癌。
6.权利要求1所述的治疗非小细胞肺癌的药物组合物,其特征在于,按下述方法制备:
(1)Vismodegib与氯喹药物组合物的配制:将羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)溶于水制备成25%的水溶液,随后称取Vismodegib溶于二甲亚砜(DMSO)制备成200mg/mL的溶液;将制备的Vismodegib二甲亚砜溶液加入HP-β-CD水溶液中,使DMSO的终浓度为5%,加入适量CQ,配制成10mg/mL的溶液,于室温下颠倒混匀,至溶液为清澈的药物溶胶悬液,置于4℃保存;
或,
(2)GANT61与氯喹药物组合物的配制:将羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)溶于水制成25%的水溶液,随后称取GANT61溶于二甲亚砜(DMSO)制成135mg/mL的溶液;将制备的GANT61二甲亚砜溶液缓慢加入HP-β-CD水溶液中,使DMSO的终浓度为5%,加入适量CQ,配制成10mg/mL的溶液,于室温下颠倒混匀,至溶液为清澈的药物溶胶悬液,置于4℃保存;
或,
(3)Vismodegib与羟氯喹药物组合物的配制:将羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)溶于水制成25%的水溶液,随后称取Vismodegib溶于二甲亚砜(DMSO)制成200mg/mL的溶液;将制备的Vismodegib二甲亚砜溶液缓慢加入HP-β-CD水溶液中,使DMSO的终浓度为5%,加入羟氯喹,使其终浓度为5mg/mL,于室温下颠倒混匀,至溶液为清澈的药物溶胶悬液,置于4℃保存。
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Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN112451528A (zh) * | 2020-12-08 | 2021-03-09 | 上海中医药大学附属曙光医院 | Gli1抑制剂在制备治疗胆汁淤积性肝纤维化、肝硬化药物中的应用 |
CN113713111A (zh) * | 2021-10-20 | 2021-11-30 | 南华大学附属第一医院 | 一种治疗小细胞肺癌及克服其化疗耐药的药物组合 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105879034A (zh) * | 2014-09-30 | 2016-08-24 | 复旦大学 | 一种靶向hedgehog通路和细胞自噬的抗肿瘤药物组合物 |
CN108853507A (zh) * | 2017-05-11 | 2018-11-23 | 复旦大学 | 一种抗肿瘤的增效药物组合物及其制备方法和用途 |
CN110214007A (zh) * | 2017-06-14 | 2019-09-06 | 江苏恒瑞医药股份有限公司 | 一种控释药物组合物及其制备方法 |
-
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Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105879034A (zh) * | 2014-09-30 | 2016-08-24 | 复旦大学 | 一种靶向hedgehog通路和细胞自噬的抗肿瘤药物组合物 |
CN108853507A (zh) * | 2017-05-11 | 2018-11-23 | 复旦大学 | 一种抗肿瘤的增效药物组合物及其制备方法和用途 |
CN110214007A (zh) * | 2017-06-14 | 2019-09-06 | 江苏恒瑞医药股份有限公司 | 一种控释药物组合物及其制备方法 |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
JIAJUN, FAN,等: "Regulating autophagy facilitated therapeutic efficacy of the sonic Hedgehog pathway inhibition on lung adenocarcinoma through GLI2 suppression and ROS production", 《CELL DEATH & DISEASE》 * |
LANYON-HOGG, T. , 等: "Click chemistry armed enzyme-linked immunosorbent assay to measure palmitoylation by hedgehog acyltransferase", 《ANALYTICAL BIOCHEMISTRY》 * |
LARSEN A R , 等: "Repurposing the Antihelmintic Mebendazole as a Hedgehog Inhibitor", 《MOLECULAR CANCER THERAPEUTICS》 * |
VENUGOPAL CHENNA,等: "Synthesis and cytotoxicity studies of Hedgehog enzyme inhibitors SANT-1 and GANT-61 as anticancer agents", 《JOURNAL OF ENVIRONMENTAL SCIENCE AND HEALTH, PART A》 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN112451528A (zh) * | 2020-12-08 | 2021-03-09 | 上海中医药大学附属曙光医院 | Gli1抑制剂在制备治疗胆汁淤积性肝纤维化、肝硬化药物中的应用 |
CN113713111A (zh) * | 2021-10-20 | 2021-11-30 | 南华大学附属第一医院 | 一种治疗小细胞肺癌及克服其化疗耐药的药物组合 |
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