CN111821237A - 一种植物酵素及其制备方法与在护肤品中的应用 - Google Patents

一种植物酵素及其制备方法与在护肤品中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种植物酵素及其制备方法与在护肤品中的应用，以木瓜和芒果为原料，由酵母菌、黑曲霉菌和乳酸链球菌组成菌剂进行发酵，发酵过程中加入酶保活剂制备得到的。本发明提供的植物酵素，含有去角质功效的果酸、蛋白酶，以及抗氧化功能的多酚、黄酮和SOD酶等成分。果酸可以软化皮肤角质，蛋白酶对角质层具有剥脱作用，抗氧化的酚、黄酮和SOD酶能清除自由基，较少皮肤损伤。通过以上成分的协同作用，可以有效降低皮肤纹理度，提高皮肤弹性。

Description

一种植物酵素及其制备方法与在护肤品中的应用
技术领域
本发明涉及护肤品技术领域，具体涉及一种植物酵素及其制备方法与在护肤品中的应用。
背景技术
随着生活水平的提高，人们越来越关注美容养颜。人体因为与外界的持续接触，受到光照、粉尘、空气污染以及心理压力等因素影响，会产生大量的活性氧自由基(ROS)。当人体ROS积聚量超过人体清除自由基的能力时，会导致机体的氧化损伤，表现为皮肤衰老、色素沉积、皮炎和皮肤肿瘤等疾病。
基于此，开发具有抗氧化功能的护肤品，清除自由基降低ROS水平，延缓皮肤衰老，逐渐成为护肤品的一个重要细分市场。相比于化学合成的去除自由基物质，天然植物具有功效好、安全无刺激等优点，植物经微生物发酵处理，得到的植物酵素富含酶系、蛋白质、维生素以及具有广泛生理功效的活性物质，能抑制皮肤老化，修复皱纹，增加皮肤的光泽和弹性。
然而，在使用植物酵素护肤品时，皮肤表面老化的角质层会阻碍植物酵素活性成分的吸收。角质层是表皮最外层的部分，它由几层到几十层扁平无核的角化死亡细胞相互交叉重叠构成，具有保护皮下组织、防止水分过多流失等作用，由于人们年纪增长，代谢速度减缓，加上不良的生活习惯及恶劣的外界环境，角质细胞不能自然脱落，在皮肤表面堆积越来越厚，导致皮肤粗糙、毛孔堵塞。当前市面上的植物酵素护肤品，多为传统的抗氧化、提高免疫力类产品，对于去角质功能则关注较少。
发明内容
发明目的：本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种植物酵素。
本发明进一步要解决的技术问题是提供上述植物酵素的制备方法。
本发明最后要解决的技术问题是提供上述植物酵素在护肤品中的应用，提供一种一种含有去角质和抗氧化功能的护肤品。
为了解决上述技术问题，本发明公开了一种植物酵素的制备方法，以木瓜和芒果为原料，由酵母菌、黑曲霉菌和乳酸链球菌组成菌剂进行发酵，发酵过程中加入酶保活剂制备得到的。
其中，所述的菌剂中酵母菌、黑曲霉菌和乳酸链球菌的体积比3:2:3。
其中，所述的酵母菌为Yarrowia.lipolytica CGMCC NO.17555，已公开于申请号201910530062.6；所述的黑曲霉菌Aspergillus niger CICC 2160；所述的乳酸乳球菌Lactococcus lactis CICC 20090；所述的三种菌均为现有技术已公开的。
其中，所述的酵母菌种子液的制备方法为将上述酵母菌接种于YPD培养基，于30℃、200rpm培养24h，即制得种子液；其中，所述的YPD培养基中各组分的浓度为：酵母提取物10g/L，蛋白胨20g/L，葡萄糖20g/L。
其中，所述的黑曲霉菌种子液的制备方法为将上述黑曲霉菌接种于种子培养基中，于30℃、200rpm培养24h，即制得种子液；其中，所述的种子培养基中各组分的浓度为：葡萄糖30g/L，硝酸钠3g/L，磷酸二氢钾1g/L。
其中，所述的乳酸链球菌种子液的制备方法为将上述乳酸链球菌接种于MRS培养基中，于30℃、200rpm培养24h，即制得种子液；其中，所述的MRS培养基中各组分的浓度为：蛋白胨10g/L，牛肉膏10g/L，酵母提取物5g/L，葡萄糖20g/L，乙酸钠5g/L，柠檬酸二胺2g/L，磷酸氢二钾0.4g/L，硫酸镁0.6g/L，碳酸钙20g/L。
其中，所述的酶保活剂为海藻糖、叠氮化钠和甘氨酸的混合物；其中，海藻糖、叠氮化钠和甘氨酸的重量比为2:1:1。
其中，按照重量份数计，木瓜40-45份，芒果5-10份，酶保活剂0.8-1.5份，菌剂1-2份；优选地，按照重量份数计，木瓜42.5份，芒果7.5份，酶保活剂1份，菌剂1.5份。
其中，上述的植物酵素的制备方法，具体包括如下步骤：
S1：按照配方比称取木瓜和芒果，加入水，磨浆，过滤，向滤液中加入白糖，灭菌，冷却，得到发酵底物；
S2：将酶保活剂和菌剂按照配方比与步骤S1制备得到的发酵底物混合，，发酵，得到酵素初液；
S3：将步骤S2制得的酵素初液过滤，所得滤液进行灭菌，即得植物酵素。
步骤S1中，水的用量为木瓜和芒果总质量的两倍；白糖的用量为滤液质量的10％；所述的灭菌为100℃灭菌20min。
步骤S2中，所述的发酵为28-32℃厌氧发酵60天；所述的灭菌为30℃、100MPa进行压力灭菌15min。
上述方法制备得到的植物酵素也在本发明的保护范围之内。
上述植物酵素在护肤品中的应用也在本发明的保护范围之内。
其中，所述的护肤品中，所述植物酵素的质量百分比为40％。
优选地，所述的护肤品中，还包括保湿剂和乳化剂；进一步优选地，所述的保湿剂为丁三醇和甘油的混合物(质量比1:1)；所述的乳化剂为山梨醇橄榄油脂；更进一步优选地，所述的护肤品中保湿剂的质量百分比为13％，乳化剂的质量百分比为20％，其余为水。
有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下优势：
本发明提供的植物酵素，含有去角质功效的果酸、蛋白酶，以及抗氧化功能的多酚、黄酮和SOD酶等成分。果酸可以软化皮肤角质，蛋白酶对角质层具有剥脱作用，抗氧化的酚、黄酮和SOD酶能清除自由基，较少皮肤损伤。通过以上成分的协同作用，可以有效降低皮肤纹理度，提高皮肤弹性。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明做更进一步的具体说明，本发明的上述和/或其他方面的优点将会变得更加清楚。
实施例1
一种含有植物酵素的护肤品，由以下质量百分含量的组分构成：植物酵素40％，乳化剂(山梨醇橄榄油脂)20％，保湿剂(丁三醇和甘油，质量比1:1)13％，余量为去离子水。
该植物酵素，其成分按照重量份计包括：木瓜42.5份，芒果7.5份，酶保活剂1份，菌剂1.5份。
酶保活剂由海藻糖、叠氮化钠和甘氨酸按照重量比2:1:1混合而成。
菌剂由酵母菌Yarrowia.lipolytica CGMCC NO.17555、黑曲霉菌Aspergillusniger CICC 2160和乳酸乳球菌Lactococcus lactis CICC 20090三者的种子液按照种子液体积比3:2:3混合而成；其中，酵母菌接种于YPD培养基(酵母提取物10g/L，蛋白胨20g/L，葡萄糖20g/L)，30℃、200rpm培养24h制得种子液；黑曲霉菌接种于种子培养基(葡萄糖30g/L，硝酸钠3g/L，磷酸二氢钾1g/L)，30℃、200rpm培养24h制得种子液；乳酸链球菌接种于MRS培养基(蛋白胨10g/L，牛肉膏10g/L，酵母提取物5g/L，葡萄糖20g/L，乙酸钠5g/L，柠檬酸二胺2g/L，磷酸氢二钾0.4g/L，硫酸镁0.6g/L，碳酸钙20g/L)30℃、200rpm培养24h制得种子液。
所述植物酵素，其制备方法包括以下步骤：
(1)按比例称取木瓜和芒果，加入两倍质量的无菌水，磨浆，过滤，按照滤液质量加入10％白糖，100℃灭菌20min，冷却，制得发酵底物。
(2)将发酵底物、酶保活剂和菌剂混合均匀，密闭，温度控制在28-32℃厌氧发酵60天，得到酵素初液。
(3)对酵素初液用200目过滤，滤出液用30℃、100MPa进行压力灭菌15min，得到植物酵素。
对照实施例1：本对照实施例包含对照实施例S1-S6，区别在于菌剂中的菌种组合不同。
对照实施例S1
一种含有植物酵素的护肤品，其制备方法与实施例1相同，区别在于，发酵菌剂为酵母菌Yarrowia.lipolytica CGMCC NO.17555制备得到的种子液，不含有其他菌种。
对照实施例S2
一种含有植物酵素的护肤品，其制备方法与实施例1相同，区别在于，发酵菌剂为黑曲霉菌Aspergillus niger CICC 2160制备得到的种子液，不含有其他菌种。
对照实施例S3
一种含有植物酵素的护肤品，其制备方法与实施例1相同，区别在于，发酵菌剂为乳酸乳球菌Lactococcus lactis CICC 20090制备得到的种子液，不含有其他菌种。
对照实施例S4
一种含有植物酵素的护肤品，其制备方法与实施例1相同，区别在于，发酵菌剂为酵母菌Yarrowia.lipolytica CGMCC NO.17555和黑曲霉菌Aspergillus niger CICC 2160制备得到的种子液(体积比1:1)。
对照实施例S5
一种含有植物酵素的护肤品，其制备方法与实施例1相同，区别在于，发酵菌剂为酵母菌Yarrowia.lipolytica CGMCC NO.17555和乳酸乳球菌Lactococcus lactis CICC20090制备得到的种子液(体积比1：1)。
对照实施例S6
一种含有植物酵素的护肤品，其制备方法与实施例1相同，区别在于，发酵菌剂为黑曲霉菌Aspergillus niger CICC 2160和乳酸乳球菌Lactococcus lactis CICC 20090制备得到的种子液(体积比1：1)。
对照实施例2：本对照实施例包含对照实施例S7-S10，其制备方法与实施例1相同，区别在于菌剂中酵母菌Yarrowia.lipolytica CGMCC NO.17555、黑曲霉菌Aspergillusniger CICC 2160和乳酸乳球菌Lactococcus lactis CICC 20090的配伍比例不同。
对照实施例S7
一种含有植物酵素的护肤品，其制备方法与实施例1相同，区别在于，菌剂中酵母菌Yarrowia.lipolytica CGMCC NO.17555、黑曲霉菌Aspergillus niger CICC 2160和乳酸乳球菌Lactococcus lactis CICC 20090制备得到的种子液体积比为6:1:1。
对照实施例S8
一种含有植物酵素的护肤品，其制备方法与实施例1相同，区别在于，菌剂中酵母菌Yarrowia.lipolytica CGMCC NO.17555、黑曲霉菌Aspergillus niger CICC 2160和乳酸乳球菌Lactococcus lactis CICC 20090制备得到的种子液体积比为1:1:1。
对照实施例S9
一种含有植物酵素的护肤品，其制备方法与实施例1相同，区别在于，菌剂中酵母菌Yarrowia.lipolytica CGMCC NO.17555、黑曲霉菌Aspergillus niger CICC 2160和乳酸乳球菌Lactococcus lactis CICC 20090制备得到的种子液体积比为4:2:2。
对照实施例S10
一种含有植物酵素的护肤品，其制备方法与实施例1相同，区别在于，菌剂中酵母菌Yarrowia.lipolytica CGMCC NO.17555、黑曲霉菌Aspergillus niger CICC 2160和乳酸乳球菌Lactococcus lactis CICC 20090制备得到的种子液体积比为1:3.5:3.5。
对照实施例3：本对照实施例包含对照实施例S11-S12，其制备方法与实施例1相同，区别在于菌剂由其他种属的菌种组成。
对照实施例S11
一种含有植物酵素的护肤品，其制备方法与实施例1相同，区别在于，发酵菌剂为酵母菌Yarrowia.lipolytica CICC 32187、黑曲霉菌Aspergillus niger CICC 2089和乳酸乳球菌Lactococcus lactis CGMCC 1.12794制备得到的种子液(体积比3：2：3)。
对照实施例S12
一种含有植物酵素的护肤品，其制备方法与实施例1相同，区别在于，发酵菌剂为酵母菌Saccharomyces cerevisiae CGMCC 2.3889、醋酸菌Acetobacter pasteurianusCICC 20064和乳酸菌Pediococcus acidilactici CICC 10346制备得到的种子液(体积比3：2：3)。
实施例2
本实施例对实施例1、对照实施例1、对照实施例2和对照实施例3的植物酵素的总酸、多酚、总黄酮、蛋白酶酶活、SOD酶活、DPPH自由基清除率、羟自由基清除率和超氧阴离子自由基清除率进行测定。
其中，总酸含量按照GB/T 12456-2008测定，多酚含量按照GB/T 31740.2-2015测定，总黄酮含量按照NY/T 2010-2011测定，蛋白酶酶活按照GB/T 28715-2012，SOD酶活按照GB/T 5009.171-2003测定，DPPH自由基清除率、羟自由基清除率和超氧阴离子自由基清除率测定方法如下：
DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)自由基清除能力测定：配制浓度为1mM待测样品，用无水乙醇将其稀释到40、80、120、160、200μM；取DPPH 1.4mg加17.5mL无水乙醇即得0.2mmol/L的DPPH溶液；取100μL上述不同浓度的样品溶液加入96孔酶标板中，然后加入现用现配的DPPH溶液100μL，使样品作用最终浓度为20、40、60、80、100μM。酶标板在30℃下保温30min后测定样品在517nm波长下的吸光度值(A1)，同时测定不加DPPH自由基试剂的样品空白(100μL无水乙醇代替DPPH)吸光值(A2)，和加DPPH自由基试剂但不加样品(100μL无水乙醇代替样品)的吸光值(A3)，样品对DPPH自由基清除率(％)＝[1-(A1-A2)/A3]×100％。
羟自由基清除能力测定：分别取1mL、0.4mmol/L结晶紫，3mL、0.2mol/L pH7.4磷酸缓冲液，1mL、0.001mol/L FeSO4溶液，1mL待测样品，加入10mL离心管中，最后加1mL 30％H2O2反应，于室温下反应1h后12000r/min离心5min，取上清液在510nm下测定吸光值记为C，用蒸馏水代替样品时的吸光值记为C1，用蒸馏水代替样品和H2O2时的吸光值记为C2。平行操作3次，取平均值，样品对羟自由基的清除率(％)＝[(C－C1)/(C2－C1)]×100％。
超氧阴离子自由基清除能力测定：在10mL离心管中加入0.6mL待测样品，5.2mLTris-HCl-EDTA缓冲液(pH 8.2)和0.045mol/L邻苯三酚溶液0.2mL，速摇匀，等待反应5分钟后迅速于干燥比色皿中，在325nm处测吸光度值，记为A0，10min后再测记为A4。以蒸馏水代替样品测定的吸光值分别记为B0和B4。平行操作3次取平均值，样品对超氧阴离子自由基清除率＝[(B4－B0)－(A4－A0)]×100％/(B4－B0)。
检测结果如表1：
表1
Figure BDA0002627734450000081
酵素中的乳酸、柠檬酸等果酸和蛋白酶具有去角质功能，多酚和黄酮因其结构上含有羟基而作为抗氧化剂，SOD酶会催化O2 -发生歧化反应，酵素中累积多酚、黄酮和SOD酶可增加酵素的抗氧化能力。考虑到酵素抗氧化机制的多样性，对于其抗氧化能力的检测采用一种方法是不可靠的，两种及以上的检测对于全面评价酵素的抗氧化能力是较为合理的。故本专利检测了酵素的DPPH自由基清除率、羟自由基清除率和超氧阴离子自由基清除率。实施例1与对照实施例1(S1-S6)的区别在于，实施例1是三菌组合，对照实施例1是单独三个菌和三个菌的两两组合，对照实施例S1中，酵母菌Yarrowia.lipolytica CGMCC NO.17555单独发酵，总酸含量极低，多酚和黄酮含量较高；对照实施例S2和S3中，Aspergillus nigerCICC 2160和乳酸乳球菌Lactococcus lactis CICC 20090分别单独发酵，多酚和黄酮含量较低，总酸含量较高，而对照实施例S3的SOD酶活是单菌发酵中最高的，将以上三株菌两两组合(对照实施例S4-S6)，制备得到酵素中的功能性组分的含量、抗氧化能力均高于单菌发酵，但是仍然低于三菌发酵，因此三菌发酵的效果，显著优于单菌或者双菌发酵
实施例1与对照实施例2(S7-S10)的区别在于，菌剂中酵母菌Yarrowia.lipolytica CGMCC NO.17555、黑曲霉菌Aspergillus niger CICC 2160和乳酸乳球菌Lactococcus lactis CICC 20090的配伍比例不同，实施例1的功能性组分的含量普遍高于对照实施例2，导致其抗氧化能力也高于对照实施例2，说明实施例1的配伍比例是最佳的。唯一例外的是，由于S10中黑曲霉菌和乳酸菌比例高，S10的总酸含量高于实施例1，其余成分含量则低于实施例1。
实施例1与对照实施例3(S11-S12)的区别在于，S11的菌剂由与实施例1相同种属、不同保藏号的菌株构成，S12的菌剂由果蔬酵素发酵常用的、与实施例1不同的菌株构成，结果显示，S11和S12的功能性组分含量、抗氧化能力基本低于实施例1。唯一例外的是，S11中蛋白酶酶活高于实施例1，其余成分含量则低于实施例1，这可能是由于S11的菌剂产蛋白酶能力高于实施例1。
以上结果证实，本发明菌剂的三种菌协同作用，配伍合理，酵素中的去角质和抗氧化组分含量高，抗氧化性能好。
对照实施例4
经测定，实施例1的酵素液的pH值为4.1，将实施例1的pH值调整至7.0，使果酸中和失活，然后使用该酵素制备护肤品，由以下质量百分含量的组分构成：上述pH值为7.0的酵素40％，乳化剂(山梨醇橄榄油脂)20％，保湿剂(丁三醇和甘油，质量比1:1)13％，余量为去离子水。
取对照实施例S10、S11的酵素，采用上文所述相同的方法，分别制备含有酵素的护肤品。
对照实施例5
取实施例1的酵素液，90℃加热10分钟，使蛋白酶失活，然后使用该酵素制备护肤品，由以下质量百分含量的组分构成：上述失活蛋白酶的酵素40％，乳化剂(山梨醇橄榄油脂)20％，保湿剂(丁三醇和甘油，质量比1:1)13％，余量为去离子水。
取对照实施例S10、S11的酵素，采用上文所述相同的方法，分别制备含有酵素的护肤品。
实施例3
本实施例对对照实施例4、对照实施例5、对照实施例S10、对照实施例S11和实施例1共计9组护肤品的去角质性能进行测定。选取180名皮肤状况相近的志愿者，平均分为9组，每组20人。清洁志愿者面部皮肤，等待20分钟，选取2个0.8×0.8cm2的正方形区域，取0.2g上述实施例的护肤品，分别涂抹于上述区域内，用指腹进行揉搓、按摩10分钟，再用清水冲洗，休息30分钟。使用表皮水分散失测定仪TM300，测定涂抹护肤品前后的区域皮肤水分经表皮散失量(TEWL，g/(h.m2))，计算皮肤水分经表皮散失量差值△TEWL＝(使用后的TEWL-使用前的TEWL)，计算每组志愿者的△TEWL平均值。护肤品去角质性能越好，水分散失越快，则使用后的TEWL越大，△TEWL越大。结果如表2。
表2
Figure BDA0002627734450000101
注：协同系数＝C/(A+B)
将酵素中蛋白酶和总酸分别失活后用于去角质测试，以及蛋白酶和总酸同时保持活性用于去角质测试，可以考察酵素中蛋白酶与总酸协同去除角质的能力。由上表可知，实施例1的协同系数大于1，对照实施例S10和对照实施例S11的协同系数小于1，说明实施例1的果酸和蛋白酶同时去角质时，二者表现出协同能力，表现出“1+1>2”的效果，对照实施例S10和对照实施例S11则未表现出协同能力，这可能与果酸和蛋白酶的含量及配伍比例有关。
实施例9
本实施例通过临床实验，对照实施例S10、对照实施例S11和实施例1的护肤品的抗氧化效果进行测定。
(1)皮肤纹理度测试：60名皮肤状况相近的志愿者，，平均分为3组。清洁志愿者面部皮肤，等待20分钟，取0.2g对照实施例S10、对照实施例S11和实施例1的护肤品，分别涂抹于志愿者皮肤，用指腹进行揉搓、按摩10分钟，再用清水冲洗。试验开始之前，先对每一位受试者的肌肤的纹理度进行检测，使用德国皮肤图像分析系统(Skin Visiometer SV600)，测定受试者面部肌肤的纹理度情况。志愿者每天早晚使用护肤品一次，使用一个月后，再次对每一位受试者的肌肤的纹理度进行检测。利用以下公式计算肌肤的纹理度下降率：纹理度下降率＝(试验后数值-试验前数值)/试验前数值×100％，计算每组-志愿者的纹理度下降率平均值。纹理度下降率越大，表明抗氧化效果越好。
(2)皮肤弹性测试：护肤品的使用操作同上。试验开始之前，使用皮肤弹性测试仪(Cutometer dual MPA580)测定受试者肌肤的弹性，受试者使用护肤品一个月后，再次测定每一位受试者的肌肤的弹性。利用以下公式计算肌肤的弹性的上升率：弹性上升率＝(试验后数值-试验前数值)/试验前数值×100％，计算每组-志愿者的纹理度下降率平均值。弹性上升率越大，表明抗氧化效果越好。
表3
实施例1 对照实施例S10 对照实施例S11
平均纹理度下降率 62.8％ 26.3％ 32.9％
平均弹性上升率 53.7％ 30.6％ 41.8％
实施例1与对照实施例S10、S11相比，区别在于实施例1中的果酸和蛋白酶具有协同去角质效果，对实施例1与对照实施例S10、S11进行皮肤纹理度和皮肤弹性测试，结果显示实施例1的护肤品可以促进酵素功能成分吸收，具有非常好的抗氧化效果，能有效降低皮肤纹理度，提高皮肤弹性，清除自由基。
本发明提供了一种植物酵素及其制备方法与在护肤品中的应用的思路及方法，具体实现该技术方案的方法和途径很多，以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。本实施例中未明确的各组成部分均可用现有技术加以实现。

Claims (10)

1.一种植物酵素的制备方法，其特征在于，以木瓜和芒果为原料，由酵母菌、黑曲霉菌和乳酸链球菌组成菌剂进行发酵，发酵过程中加入酶保活剂制备得到的；其中，所述的酵母菌为Yarrowia.lipolytica CGMCC NO.17555；所述的黑曲霉菌为Aspergillus niger CICC2160；所述的乳酸乳球菌为Lactococcus lactis CICC 20090。
2.根据权利要求1所述的植物酵素的制备方法，其特征在于，所述的菌剂中酵母菌、黑曲霉菌和乳酸链球菌的体积比为3:2:3。
3.根据权利要求1所述的植物酵素的制备方法，其特征在于，所述的酶保活剂为海藻糖、叠氮化钠和甘氨酸的混合物；其中，海藻糖、叠氮化钠和甘氨酸的重量比为2:1:1。
4.根据权利要求1所述的植物酵素的制备方法，其特征在于，按照重量份数计，木瓜40-45份，芒果5-10份，酶保活剂0.8-1.5份，菌剂1-2份。
5.根据权利要求1所述的植物酵素的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1：按照配方比称取木瓜和芒果，加入水，磨浆，过滤，向滤液中加入白糖，灭菌，冷却，得到发酵底物；
S2：将酶保活剂和菌剂按照配方比与步骤S1制备得到的发酵底物混合，发酵，得到酵素初液；
S3：将步骤S2制得的酵素初液过滤，所得滤液进行灭菌，即得植物酵素。
6.根据权利要求5所述的植物酵素的制备方法，其特征在于，步骤S1中，水的用量为木瓜和芒果总质量的两倍；白糖的用量为滤液质量的10％；所述的灭菌为100℃灭菌20min。
7.根据权利要求5所述的植物酵素的制备方法，其特征在于，步骤S2中，所述的发酵为28-32℃厌氧发酵60天；所述的灭菌为30℃、100MPa进行压力灭菌15min。
8.权利要求1～7中任意一项所述方法制备得到的植物酵素。
9.权利要求8所述的植物酵素在护肤品中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述的护肤品中，所述植物酵素的质量百分比为40％。
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