CN111808207A - 天冬多糖在肠道菌群调节中的应用 - Google Patents

天冬多糖在肠道菌群调节中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN111808207A
CN111808207A CN202010556685.3A CN202010556685A CN111808207A CN 111808207 A CN111808207 A CN 111808207A CN 202010556685 A CN202010556685 A CN 202010556685A CN 111808207 A CN111808207 A CN 111808207A
Authority
CN
China
Prior art keywords
polysaccharide
asparagus
chromatography purification
crude
ethanol
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202010556685.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111808207B (zh
Inventor
董彩霞
许军
孙启立
朱利霞
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Tianjin Medical University
Original Assignee
Tianjin Medical University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Tianjin Medical University filed Critical Tianjin Medical University
Priority to CN202010556685.3A priority Critical patent/CN111808207B/zh
Publication of CN111808207A publication Critical patent/CN111808207A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111808207B publication Critical patent/CN111808207B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0006—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
    • C08B37/0051—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid beta-D-Fructofuranans, e.g. beta-2,6-D-fructofuranan, i.e. levan; Derivatives thereof
    • C08B37/0054—Inulin, i.e. beta-2,1-D-fructofuranan; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/733—Fructosans, e.g. inulin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0003—General processes for their isolation or fractionation, e.g. purification or extraction from biomass

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明提供一种天冬多糖，包括Fru和Glc，其中Fru占比93.3％，Glc占比6.7％；不含有糖醛酸和蛋白，是由(2→1)‑Fruf和t‑Glcp组成的菊粉型果聚糖，相对分子量为2.69×103；通过取天冬加入乙醇脱脂，再用热水回流提取获得提取液，对提取液浓缩后醇沉，获得的沉淀透析后获得天冬粗多糖；取天冬粗多糖依次经过阴离子交换色谱纯化、琼脂糖凝胶层析纯化和葡聚糖凝胶层析纯化后，得到天冬多糖。天冬多糖能够用于肠道菌群调节，通过调整肠道内腔的pH值，促进短链脂肪酸的产生，从而对肠道产生相应有益的影响，另外天冬多糖还能够促进有益菌群普氏菌属和巨单胞菌属的增加，抑制嗜血杆菌属，降低拟杆菌属与普氏菌属的比值。

Description

天冬多糖在肠道菌群调节中的应用
技术领域
本发明涉及一种天冬多糖在肠道菌群调节中的应用。
背景技术
肠道微生物群是一个复杂的、高度动态的微生物群落，作为人体最庞大、最复杂的微生态系统，肠道微生物本身及其代谢产物不仅能调节人体健康，更在膳食和宿主之间起到了重要的桥梁作用。研究发现，肠道微生物在系统发育地位上基本分属厚壁菌门(Firmicutes)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、变形菌门(Proteobacteria)、放线菌门(Actinobacteria)、疣微菌门 (Verrucomicrobia)、梭杆菌门(Fusobacteria)6大门，其中拟杆菌门和厚壁菌门为主要优势菌群，占整个系统发育类型的90％以上。肠道微生物本身及其代谢产物不仅能调节人体健康，更在膳食和宿主之间起到了重要的桥梁作用。肠道微生物群失调及其宿主代谢表型改变已被报道与多种人类慢性疾病有关，包括炎症性肠病、2型糖尿病、慢性肾病、肥胖、心血管疾病和老年痴呆症疾病。当肠道微生态系统发生变化时，一些由肠道微生物执行的特定发酵途径的共生细菌可导致有毒化合物的形成，这些有毒化合物有可能损害宿主上皮并引起炎症。在这些疾病中，肠道菌群的结构和组成发生了变化，加速了这些疾病的发展。因此，对患病个体肠道菌群的研究，可以为肠道菌群在这些疾病的发生、发展中影响宿主健康的潜在作用提供新的理论依据。
大量研究表明，肠道细菌的主要营养来源是不可消化的膳食碳水化合物，主要包括抗性淀粉、非淀粉多糖、低聚糖，人体肠道中的消化酶不能水解这些碳水化合物，但可以通过调节结肠微生物组成，降低结肠的pH值，增加短链脂肪酸的产生，刺激结肠的免疫反应来进行发酵，这对宿主和肠道健康是有益的。因此，不可消化的膳食低聚糖可被视为一种益生元，并能对健康肠道发挥调节作用，近年来受到越来越多的关注。
菊粉型果聚糖，如菊粉、低聚果糖和低聚果糖，根据聚合度(DP)的不同，不能被人体消化酶水解，只能由某些特定的细菌如肠道微生物群发酵。天冬是百合科植物，广泛分布于中国、日本和韩国。几千年来，它一直被用作这些国家的传统药物。多糖作为天冬中的主要活性成分具有抗炎、抗氧化、抗炎和神经保护等作用。然而，从天冬中纯化得到的多糖很多结构特征和药理作用至今尚未得到明确。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供一种天冬多糖在肠道菌群调节中的应用。
本发明采用的技术方案是：一种天冬多糖，包括Fru和Glc，不含有糖醛酸和蛋白，是由(2→1)-Fruf和t-Glcp组成的菊粉型果聚糖，相对分子量为2.69×103。
优选地，天冬多糖组成单糖Fru与Glc的比例为14：1；Fru占比93.3％， Glc占比6.7％。
优选地，结构如式1所示：
Figure BDA0002543127860000021
提取天冬多糖的方法，包括如下步骤，
取天冬加入乙醇脱脂，再用热水回流提取获得提取液，对提取液浓缩后醇沉，获得的沉淀透析后获得天冬粗多糖；
取天冬粗多糖依次经过阴离子交换色谱纯化、琼脂糖凝胶层析纯化和葡聚糖凝胶层析纯化后，得到天冬多糖。
优选地，取天冬粗多糖依次经过DEAE-650M阴离子交换色谱纯化、琼脂糖凝胶Sepharose 6B柱层析纯化和葡聚糖凝胶Sephacryl S-300柱层析纯化后，得到天冬多糖。
优选地，天冬粗多糖提取方法具体为：
取干燥天冬浸泡于乙醇中，过夜脱脂；
乙醇全部挥发后，加入15-25倍质量的纯水，加热回流提取3-5次，去滤渣后合并提取液；
将提取液旋蒸浓缩到总量的15-25％，加入无水乙醇，静置过夜进行醇沉，取沉淀加水重溶后再次进行醇沉，重复3-5次；
醇沉物用水溶解后以7000Da的透析袋进行透析，内溶物浓缩、冷冻干燥后得到天冬粗多糖。
天冬多糖在肠道菌群调节中的应用。
优选地，天冬多糖能够降低肠道内腔的pH值。
优选地，天冬多糖促进短链脂肪酸的产生。
优选地，天冬多糖能够促进有益菌群普氏菌属和巨单胞菌属的增加，抑制嗜血杆菌属，降低拟杆菌属与普氏菌属的比值。
本发明具有的优点和积极效果是：提供一种大分子的聚糖天冬多糖，能够用于肠道菌群调节，通过调整肠道内腔的pH值，促进短链脂肪酸的产生，从而对肠道产生相应有益的影响，另外天冬多糖还能够促进有益菌群普氏菌属和巨单胞菌属的增加，抑制嗜血杆菌属，降低拟杆菌属与普氏菌属的比值。
附图说明
图1天冬粗多糖提取流程图；
图2 DEAE-650M分离ACNP洗脱图；
图3 ACN中多糖的分离色谱图；
图4 ACN1的分离纯化色谱图；
图5 ACNP高效液相凝胶渗透色谱图；
图6 ACNP的FT-IR图；
图7 Glc、Fru和ACNP的HPLC分析结果图；
图8 ACNP的1H-NMR谱；
图9 ACNP的13C-NMR谱；
图10 ACNP的1H-1H COSY谱；
图11 ACNP的HSQC谱；
图12 ACNP的NOESY谱；
图13 ACNP的HMBC谱；
图14水、菊粉和ACNP发酵培养基在不同发酵时间点的pH值变化；
图15水(空白)、菊粉和ACNP发酵产物中总SCFAs和单个SCFAs的浓度:(A) 乙酸；(B)丙酸；(C)异丁酸；(D)正丁酸；(E)异戊酸；(F)正戊酸；(G)总SCFAs。同一列中不同字母的平均值在不同处理和不同处理时间下分别有显著性差异(n＝3,p< 0.05)；
图16在门(A)和属(B)水平上的微生物分类学分析，属水平上的热图分析(C)， 主坐标分析(D)和所有处理组的多样性分析(E)；(E)中不同字母表示差异显著(p <0.01)。
具体实施方式
下面结合附图对本发明的实施例做出说明。
本发明采用阴离子交换-凝胶渗透色谱法从天冬粗多糖中分离纯化得到一种新的多糖ACNP，并研究其结构特征和多糖特性。一种天冬多糖，包括Fru和 Glc，其中Fru占比93.3％，Glc占比6.7％，不含有糖醛酸和蛋白，具体为由 (2→1)-Fruf和t-Glcp组成的菊粉型果聚糖；结构如式1所示：
Figure BDA0002543127860000051
提取天冬多糖的方法，取天冬加入乙醇脱脂，再用热水回流提取获得提取液，对提取液浓缩后醇沉，获得的沉淀透析后获得天冬粗多糖；再取天冬粗多糖依次经过阴离子交换色谱纯化、琼脂糖凝胶层析纯化和葡聚糖凝胶层析纯化后，得到天冬多糖。具体如下：取干燥天冬浸泡于乙醇中，过夜脱脂；乙醇全部挥发后，加入15-25倍质量的纯水，加热回流提取3-5次，去滤渣后合并提取液；将提取液旋蒸浓缩到总量的15-25％，加入无水乙醇，静置过夜进行醇沉，取沉淀加水重溶后再次进行醇沉，重复3-5次；醇沉物用水溶解后以7000Da的透析袋进行透析，内溶物浓缩、冷冻干燥后得到天冬粗多糖；取天冬粗多糖依次经过DEAE-650M阴离子交换色谱纯化、琼脂糖凝胶Sepharose 6B柱层析纯化和葡聚糖凝胶Sephacryl S-300柱层析纯化后，最终得到天冬多糖。
为了进一步研究天冬多糖的作用，将人粪便接种物在天冬多糖作用下进行体外发酵，并对发酵产物进行检测，研究发现，天冬多糖对肠道菌群具有一定程度的调节作用，能够适当降低肠道内腔的pH值，促进短链脂肪酸的产生，有益于宿主健康；另外，为了研究天冬多糖对肠道菌群的影响，通过在门和属水平上分析细菌群落，发现天冬多糖能够促进有益菌群普氏菌属和巨单胞菌属的增加，抑制嗜血杆菌属，降低拟杆菌属与普氏菌属的比值。
下面结合实施例对本发明方案做出说明，其中，未具体说明操作步骤的实验方法，均按照相应商品说明书进行，实施例中所用到的仪器、试剂、耗材如无特殊说明，均可从商业公司购买得到。
实施例1：天冬多糖的提取
1.1天冬粗多糖的提取
取天冬干燥药材1.78kg，加入乙醇使其没过药材，浸泡过夜脱脂。待乙醇全部挥发后，加入20倍质量的纯水，加热到100℃连续回流提取三次，每次6小时，用纱布过滤除去残渣，合并得到提取液。通过旋蒸使其浓缩至总量的20％，加入无水乙醇至浓缩滤液的体积分数浓度为80℃，放置4℃过夜；收集袋内溶液，加入无水乙醇中，使得无水乙醇最终浓度变为80％，将温度控制在4℃，静置过夜，充分进行醇沉。弃去上层清液，残渣加水溶解，并按照上述步骤再次进行醇沉，重复醇沉三次，得到醇沉物以适量水充分溶解后用去离子水以7000Da 的透析袋进行透析，内溶物浓缩、冷冻干燥机冻干得天冬粗多糖(ACCP),得率2.14％(38.17g)。
1.2天冬多糖的提取
1.2.1 DEAE-650M阴离子交换色谱纯化
取ACCP 1.5g，用适量去离子水充分溶解后，离心除去不溶于水的杂质，收集沉淀保存。另将上清液上样至已装填平衡完全的DEAE-650M阴离子交换柱，分别用H2O和0.5mol/L NaCl洗脱，用自动部分收集器以1mL/min流速进行收集。然后经硫酸-苯酚法测定总糖含量，按照洗脱曲线合并、浓缩、透析、冷冻干燥。
如图2所示，ACCP在H2O和0.5mol/L NaCl溶液洗脱曲线共得到两个洗脱峰，即分离得到2个组分，分别记为天冬中性多糖(ACN)、天冬酸性多糖(ACA)。由分离曲线可见，天冬粗多糖中中性多糖占主要部分，酸性多糖量较低。
1.2.2琼脂糖凝胶Sepharose 6B柱层析纯化
取500mg经DEAE-650M分离的水样品部分，加入适量去离子水室温下充分溶解，3000r/min，20min离心2次，取上清液，上样至已装填平衡完全的Sepharose 6B凝胶色谱柱，用0.1mol/L NaCl洗脱，收集洗脱液，经硫酸-苯酚法测定总糖，按照洗脱曲线合并、浓缩、透析、冷冻干燥。
如图3所示，BSN洗脱曲线中，首先检测多糖中无蛋白质并且从峰型可以看出ACN分离后得到一个主峰，分子量组成单一，但是糖峰很宽且不对称，说明分子量分布范围较大且不均一，需从中合并收集主要多糖组分ACN-1。
1.2.3葡聚糖凝胶Sephacryl S-300柱层析纯化
取200mg经Sepharose 6B分离的样品组分，加入适量去离子水室温下充分溶解，取上清液，上样至已装填平衡完全的Sephacryl S-300HR凝胶色谱柱，用0.1 mol/L NaCl洗脱，收集洗脱液，硫酸-苯酚法检测，经硫酸-苯酚法测定总糖含量，按照洗脱曲线合并、浓缩、透析、冷冻干燥，得到纯化的天冬多糖，样品置于干燥器中保存，备用。
进一步采用Sepharcryl S-300HR色谱柱对从Sepharose 6B分离得到的主要多糖组分ACN-1进行纯化，结果如图4所示，从分离后得到的洗脱曲线中可以看出ACNP的洗脱峰对称单一，表明分子量分布均匀，证明提取到的天冬多糖 (ACNP)为中性均一多糖。
实施例2天冬多糖结构分析
本实验中，采用颜色反应、红外光谱、高效液相色谱(HPGPC)、化学衍生结合气相色谱-质谱联用技术和核磁共振技术对分离得到的纯化多糖进行结构特征研。所用到的普鲁兰系列标准品、CH3COONH4、苯酚、浓硫酸、NaOH、间羟基联苯、α-D-半乳糖、α-D-半乳糖醛酸、间羟基联苯、D-葡萄糖、果糖、氨水、醋酸酐、1-甲基咪唑、无水硫酸钠、氯仿、碘甲烷、D2O、耐高温具塞玻璃反应管、高效凝胶色谱仪、红外光谱仪、旋转蒸发仪、GC-MS仪、核磁共振波谱仪等均采用市场公共渠道购买获得。
2.1均一性分析及分子量测定
取普鲁兰系列标准品(分子量分别为642、337、194、107、47.1、21.1、 9.6、6.1kD)5mg，用1mL超纯水充分溶解后，分别配置成5mg·mL-1普鲁兰系列标准溶液，过0.22μm滤膜，备用。分别取10μL标准溶液，进样至高效凝胶色谱仪,用0.02M CH3COONH4洗脱，流速为0.6mL·min-1，柱温40℃。以保留时间A为纵坐标，分子量C为横坐标绘制标准曲线A＝-1.449C+19.868,R2＝0.9968。取白树粗多糖样品5mg，用1mL超纯水充分溶解后，配置成5mg·mL-1样品溶液，过0.22μm滤膜，进样至高效凝胶色谱仪(HPGPC),用0.02M CH3COONH4洗脱，流速为0.6mL·min-1,柱温40℃。得出本发明提取方法提取的天冬纯化多糖保留时间。
均一性分析结果如图5所示，高效凝胶色谱测定结果显示ACNP有单一尖锐且对称的峰，揭示ACNP为分子量分布均一的分子。经普鲁兰系列标准曲线计算，相对分子量为2.69×103。
2.2化学组成分析
2.2.1总糖含量测定
总糖含量利用苯酚硫酸法进行测定。以α-D-半乳糖做标准品，配制1mg· mL-1半乳糖标准品溶液，依次稀释成200μg·mL-1，100μg·mL-1，50μg·mL-1， 25μg·mL-1、12μg·mL-1系列浓度溶液，分别取0.2mL半乳糖标准品系列浓度，加入0.2mL质量分数5％苯酚溶液，快速加入1.0mL浓硫酸，充分震荡后，静置20min,在490nm处测定吸光度，以浓度C为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线A＝0.0077C+0.0473，R2＝0.9996。取干燥的样品，配制成100μg ·mL-1样品溶液，稀释至50μg·mL-1，按照上述方法显色后测定吸光度，带入标准曲线，计算样品总糖含量。
2.2.2糖醛酸含量测定
糖醛酸含量利用间羟基联苯法进行测定。以α-D-半乳糖醛酸做标准品，配制1mg·mL-1半乳糖醛酸标准品溶液，依次稀释成100μg·mL-1，20μg·mL-1，10 μg·mL-1，5μg·mL-1，2.5μg·mL-1，1.25μg·mL-1系列浓度溶液，分别吸取 200μL半乳糖醛酸标准品系列浓度，加入1.2mL 0.0125M硫酸-四硼酸钠溶液，冰浴至冷却，100℃水浴加热5min，冰浴冷却后，加入20μL体积分数为0.15％间羟基联苯溶液，空白组加入20μL质量浓度0.5％的NaOH溶液充分震荡后，静置5min,在520nm出测定吸光度，以浓度C为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线A＝0.0709C-0.0847，R2＝0.9855。取干燥的样品，配制成100μg· mL-1样品溶液，稀释至50μg·mL-1，按照上述方法显色后测定吸光度，带入标准曲线，计算样品糖醛酸含量。
化学组成分析结果显示，ACNP总糖含量为97.49％，不含糖醛酸和蛋白。
2.2.3.FT-IR分析
取干燥的多糖样品约2mg,加入约200mg KBr在玛瑙研钵中研磨混合后压片，用红外光谱仪在4000—400cm-1区域内进行红外扫描。
ACNP的FT-IR如图6所示，3391.12cm-1处的较大吸收峰为糖残基的O-H 的伸缩震动。2932.28cm-1处的吸收峰为糖环上的C-H伸缩振动。1646.71cm-1处的吸收峰是结合水的特征峰。1132.40和1028.77cm-1处的吸收峰为呋喃糖环上的C-O伸缩振动。932.62和822.22cm-1的吸收峰为β构型的糖苷键的特征峰。在1740cm-1左右没有观察到吸收峰，说明ACNP中无糖醛酸，这与糖醛酸测定结果一致。
2.3单糖组成分析
采用三氟乙酸对天冬进行水解再进行高效凝胶色谱分析。
具体方法如下：分别称取D-葡萄糖、和果糖标准品,分别配制成5mg·mL-1单糖标准品溶液，取本发明提取方法提取的多糖样品5mg,加入去离子水0.5mL 溶解，备用。取三支耐高温具塞玻璃反应管，第一和二管中分别加入葡萄糖和果糖单糖标准溶液0.5ml。第三管中加入0.5mL的样品溶液。每管中加入0.5mL 2mol /L TFA溶液，50℃水解30min静置至室温后，用N2吹干溶剂，用甲醇洗涤3 遍。重新溶解过0.22μm滤膜，进样至Agilent1260Infinity II色谱仪配有ELSD 检测器和Sugar-pack(6.5mm×300mm,10μm)柱，流速为0.4mL/min，柱温为 70℃。
根据对应标准品的保留时间，确定样品中的单糖组成；根据每种单糖的峰面积比计算出样品中单糖之间的相对含量。
结果如图7所示，A和B分别是葡萄糖(Glc)和果糖(Fru)单糖标准品的色谱图。C是ACNP的色谱图，可以看出在12.23和15.83min处分别是Glc和 Fru的色谱峰，6.95min处是水解时为残留的TFA溶剂峰，10.3min处为蔗糖的色谱峰。根据单糖峰面积计算每种单糖占总单糖的百分比，结果显示，ACNP主要由Fru(93.3％)和少量Glc(6.7％)组成。每个果聚糖分子含有一个Glc残基，根据Fru/Glc比值和表观分子量计算聚合度(DP)为15。
2.4糖苷键的组成分析
依据以下关键技术路线依次甲基化、水解、还原、乙酰化得到可挥发性的乙酰化衍生物，进而进行GC-MS分析。
取干燥的多糖样品2mg于2mL反应瓶中，置于干燥器中过夜。加入1mL DMSO,搅拌至样品完全溶解。将50mg NaOH用研钵中研成细粉，加入反应瓶中，搅拌2h。每隔15min加入150μL碘甲烷，一共加入3次，室温下搅拌45min，至溶液澄清透明。加入1mL纯水终止反应，冰浴，转移至玻璃反应管，N2吹干碘甲烷后，用等量氯仿萃取2次，合并氯仿层，再用纯水洗涤5次，水层弃去。氯仿层用N2吹干溶剂，加入0.5mL的2mol/L TFA,120℃水解2h静置至室温后，用N2吹干溶剂，用甲醇洗涤3遍。加入0.5mL的1mol/L氨水溶液后，分别加入30mg硼氘化钠粉末，拧紧反应管，室温放置过夜。加入10％体积分数的醋酸-甲醇溶液，用旋转蒸发仪旋干溶剂，重复操作3次。再加入无水甲醇复溶，旋干溶剂，重复操作4次。加入1mL醋酸酐和0.1mL甲基咪唑，室温下进行30min 乙酰化反应。将溶液转移至反应管，加入1mL纯水终止反应，冰浴。加入1mL氯仿萃取2次，收集氯仿层，合并后转移至干净的反应管，再加入2mL纯水洗涤 5次，水层弃去。加入适量的无水硫酸钠去除溶液中的水，静置30min后，将溶液过自制无水硫酸钠小柱后，收集，N2吹至0.5mL,备用。
GC—MS进样条件：载气为He2,分流比100:1,检测器：280℃,柱温由 120℃,每分钟4℃升高至280℃,保持5min。根据样品保留时间，确定样品的碎片分子质谱图；另取峰面积比值，计算样品碎片分子占总分子量的含量比值。
ACNP经过甲基化、三氟乙酸水解、还原、乙酰化处理得到单糖的部分甲基化的乙酰化衍生物(PMAA)。对这些衍生产物进行GC-MS分析，结合单糖组成分析，结果如表1所示。分析结果显示ACNP主要由(2→1)-Fruf、末端链接的 Fruf(t-Fruf)和t-Glcp组成，证实该多糖结构由(2→1)-Fruf和t-Glcp组成的菊粉型果聚糖。
表1 ACNP甲基化分析结果
Figure DEST_PATH_IMAGE001
2.5核磁共振(NMR)分析
为了进一步阐明ACNP的结构，我们采用1D和2D NMR核磁技术来明确糖苷键的连接方式。将本发明提取分离的多糖样品(30mg)在P2O5上真空干燥72h，然后溶解于D2O(0.5mL)再进行冻干，最后在0.5mL D2O中溶解。在核磁共振波谱仪上进行1H-COSY、13C-COSY、1H-1HCOSY、NOESY、HSQC、HMBC光谱分析。
结果如图8和9所示，ACNP的1H NMR谱显示主要信号出现在δ3.50-4.20，在端基氢区δ5.40-5.20没有活跃的氢质子出现。此外，13C NMR谱显示六个主要的特征峰信号，其中包括异头碳δ103.15，和糖环碳原子在δ62.53-81.09区域，其中δ62.17和60.72信号属于连氧伯碳信号，其他三个信号δ74.33,77.04和 81.09属于连氧仲碳信号。与报道的数据相比，H质子和C的化学位移显示出典型的Fruf结构。依据以上结果，得知δ5.30处为Glcp的H1信号。其他信号在δ3.79、δ3.60、δ4.12、δ3.97、δ3.70、δ3.67被分配到H1a-、H1b-、H3-、H4-、H6a-和H6b-Fruf。通过氢谱计算DP值约在13～16范围内，该结果与单糖组成分析结果一致。
通过分析1H-1H COSY、NOESY和HSQC谱的化学位移得知，H-1至H-6 和C-1至C-6的归属，如表2所示。在1H-1H COSY谱中，如图10所示，可以检测到Fruf的H3/H4-、H4/H5-、H5/H6a和H5/H6b的相关信号峰，可以进一步识别无法确定的1H谱部分。从HSQC谱(如图11所示)和表2可以看出末端和链中Fruf的H1/C1和H6/C6分别为H-1a、H1b/C-1(δ3.79、3.60/60.92)和H-6a、H6b/C-6(δ3.70、3.65/62.17)信号。还可以看出C-3(δ77.30)在高场区域表明Fruf残基是β-构型，同时C-2和C-1化学位移向低场位移，显示Fruf残基的连接位点在C-2和C-1位。NOESY谱(如图12所示)，它也可以看出H1a, H1b/H3-Fruf的信号峰，进一步验证归属的正确性。因此，判断ACNP的主链为 (2→1)-β-D-Fruf糖残基。此外，在1H-NMR中，δ5.4处氢信号和13C-NMR中δ92.12 处的碳信号提示α-构型的存在。结合单糖组成分析结果，判断其末端连接为α-D-Glcp糖残基。该糖残基的其他信号非常微弱，未一一归属。
从HMBC图可以推断糖基残基的序列，如表2所示。从HMBC图中可以看出，β-D-Fruf的C2与β-D-Fruf的H1a、H1b出现交叉峰，且缺失C-2和H-6a和 H6b间相关峰，这一特征表明果糖残基间是通过(2→1)连接，为典型的菊糖的糖苷键链接类型。除此之外β-D-Fruf的C2还与α-D-Glcp的H1有弱相关峰，表明葡萄糖残基作为末端链接在(2→1)-β-D-Fruf的O-2上，综合上述甲基化及NMR 图谱分析结果，ACNP的结构可以推测如式1：
Figure BDA0002543127860000131
表2 ACNP的化学位移归属及远程碳氢相关
Figure BDA0002543127860000132
实施例3天冬多糖对肠道菌群的调节作用
为了进一步研究提取出的天冬多糖在肠道菌群调节中的应用，本发明通过研究天冬多糖与粪便接种物进行反应，检测其产物各项参数，从而体现天冬多糖的作用。本部分研究中，胆盐、血晶素、酵母提取物、蛋白胨、刃天青、L-半胱氨酸盐酸盐一水物、维生素K1和短链脂肪酸对照品(乙酸、丙酸、异丁酸、正丁酸、异戊酸和正戊酸)均被购自Sigma-Aldrich公司。大丽花块茎的菊粉(分子量：285.303Da)和2-乙基丁酸从上海迈瑞尔化学技术有限公司购买。
3.1发酵
新鲜的粪便接种物，来自至少三个月没有服用任何抗生素的三名健康捐赠者。将来自三名捐赠者的粪便等量混合，用10％(v/v)的杜氏磷酸缓冲盐溶液(DPBS) 稀释，得到20％(w/w)的粪便接种物溶液，然后用涡旋混合器充分混合。再将粪便接种物通过三层棉质汤袋过滤，并立即转移到厌氧罐中，备用。基础培养基在121℃下灭菌20min后使用。
将5毫升灭菌后的ACNP溶液(20mg/mL)、菊粉溶液(20mg/mL，阳性对照) 或超纯水(空白对照)与22.5mL的粪便接种物和22.5mL的基础培养基用涡旋混合器充分混合。将实验样品转移到不同的厌氧密封管中，分别在37℃下孵育、250 rpm下震荡0、3、6、12、24h。在相同的条件下进行了三次重复实验。
3.2 pH值的测定
ACNP、菊粉和水的发酵产物分别在0、3、6、12、24h收集，并置入冰水中 5min。将这些发酵产物离心(10000rpm，10min)，分离上清液(发酵培养基)，然后测定每个上清液样品的pH值。
发酵过程中各组pH值的变化如图14所示。从0h到24h，所有组的pH值均表现出明显的(p<0.05)下降。发酵12h后，ACNP发酵培养液的pH值从6.78±0.02显著下降至4.91±0.04，除初始时间外，在所有时间点均显著低于(p<0.05)空白组。类似的pH值变化也发生在菊粉的发酵培养液中，ACNP和菊粉发酵培养液的pH 值降低是由粪便菌群的发酵产物导致的，适当降低肠道内腔的pH值可以促进肠道有益菌群的增殖，并抑制某些有害微生物的繁殖。
3.3游离单糖的测定
采用上述单糖组成分析方法，测定发酵产物中游离单糖的浓度。将发酵产物离心(10，000rpm，10min)，取上清液，用0.22μm尼龙微孔滤膜过滤后进样分析。
膳食多糖的发酵行为显著受其单糖组成的影响，因此在粪便发酵24h间，测定了发酵培养基中游离单糖浓度的变化如表3所示。在发酵0h时，发酵培养液中没有检测到游离的单糖。在发酵6h内，ACNP发酵培养液中的果糖浓度显著增加至46.26±1.80μg/mL，然后在剩余时间内迅速下降至2.79±0.25μg/mL。对于菊粉发酵，发酵培养液中果糖的浓度在发酵3h内急剧增加，然后从3h至24h急剧下降。ACNP和菊粉均为带有t-Galp的2,1-Fruf主链组成，发酵培养液中仅检测到了游离果糖，未检测到游离葡萄糖，可能是因为产生的葡萄糖含量太低，并立即被肠道菌群消耗而产生短链脂肪酸。ACNP与菊粉(分子量：285Da)发酵相比，ACNP发酵产生果糖的速度相对较慢，这样的情况是由于ACNP分子量较大(2690 Da)2,1-Fruf主链较长而较难消化导致。
表3 ACNP和菊粉发酵后游离单糖浓度的变化
Figure BDA0002543127860000151
#同一行内不同字母表示差异显著p<0.05.
3.4短链脂肪酸的测定
短链脂肪酸的含量采用气相色谱-质谱仪(GC-MS)系统(GCMS-QP2020， ShimadzuCo.，Kyoto，Japan)进行测定。气相色谱条件为：色谱柱：HP-INNOWAX 19091N-133I(30m×0.25mm×0.25μm)；升温程序：初始柱温设定为100℃并保持1min，然后以5℃/min升至180℃并保持2min，最后以10℃/min升至250℃并保持4min；进样口温度设置为250℃，氮气的流速为1.0mL/min，进样体积为 1μL，分流比为30:1。质谱条件为：EI电子轰击离子源，离子源温度设置为200℃，接口温度为250℃，溶剂切除时间为4min，Scan模式扫描范围为35～300，SIM 模式监测为41、43、45、55、57、60、73、74、87、88。
将发酵产物离心(10000rpm，10min)，分离上清液。随后，将0.5mL上清液或对照品(乙酸、丙酸、异丁酸、正丁酸、异戊酸和正戊酸)溶液与0.5mL内标溶液(1mmol/L 2-乙基丁酸)混合，然后将混合溶液用0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液在上述气相色谱-质谱检测条件下进样分析。通过内标法分别建立各个短链脂肪酸的标准曲线，并根据所建立的标准曲线计算各个短链脂肪酸及其总短链脂肪酸的含量。
短链脂肪酸是碳水化合物发酵过程中的主要代谢产物，其浓度被认为是肠道菌群活性的重要反映。各组发酵产物中各个短链脂肪酸及其总短链脂肪酸的浓度见图4-15所示。随着发酵的进行，所有组中的总短链脂肪酸浓度均增加。与空白组相比，ACNP组的总短链脂肪酸浓度从发酵6h时的18.03±1.44mmol/L迅速增加到24h发酵时的43.94±0.43mmol/L，菊粉组的总短链脂肪酸浓度在除初始时间以外的所有时间点均显著增加，这与ACNP和菊粉发酵培养液中较低的pH值相吻合。与空白组相比，随着发酵的进行，ACNP和菊粉组中乙酸、丙酸、异戊酸和正戊酸的浓度均显著增加。但是，ACNP组和空白组之间的异丁酸和正丁酸浓度没有显著变化。如图15A所示，发酵24h，与空白组(6.19±0.87～17.77±1.08 mmol/L)相比，ACNP组发酵培养液中的乙酸浓度从5.32±0.67显著增加到23.36 ±0.60mmol/L。此外，与空白组相比，ACNP组的丙酸浓度在发酵12h后显著增加，而异戊酸和正戊酸的浓度在发酵6h后显著增加(图15B、E和F)。总的来说，这些结果表明ACNP发酵可以促进短链脂肪酸的产生，这与以下事实相吻合，即难以消化的碳水化合物和益生元(如菊粉)可以通过肠道菌群发酵，最终加速 SCFA的产生。大多数肠道细菌能够水解和利用不可消化的碳水化合物作为发酵底物来产生乙酸。乙酸盐是由各种类型的肠道菌群产生的，包括普氏杆菌属、双歧杆菌属和拟杆菌属。据报道，乙酸可以提高葡萄糖耐量，抑制脂肪合成。已有研究发现，丙酸可通过增加葡萄糖摄取并减少肥胖相关的炎症对脂肪组织产生有益影响。总体而言，这些实验结果表明，ACNP与菊粉一样促进了短链脂肪酸的产生，有益于宿主健康。
3.5 DNA提取及其高通量测序
发酵24h后，将发酵产物离心(10,000rpm，10分钟)，收集沉淀用于DNA提取及其高通量测序。取均质化处理的沉淀样品，采用
Figure BDA0002543127860000161
Soil DNA提取试剂盒(Omega Bio-Tek，Inc.，GA，USA)，按照试剂盒说明书操作，提取粪菌总DNA。用通用引物338F(5'-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3')和806R(5'- GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3')对细菌16S rRNA的V3-V4区进行PCR扩增。 PCR反应在ABI
Figure BDA0002543127860000171
9700型PCR仪上进行。采用2％琼脂糖凝胶电泳鉴定 PCR产物，并使用AxyPrep DNA凝胶提取试剂盒(Axygen Biosciences,UnionCity, USA)进行纯化。纯化的扩增子采用QuantusTM荧光计(Promega,Madison,USA) 进行定量，并在深圳微生态技术有限公司的MiSeq平台(IIIumina Co.,San Diego, USA)上进行测序。
为了研究ACNP处理引起的肠道菌群结构的变化，在门和属水平上分析了 ACNP组和对照组(空白组和菊粉组)细菌群落。初始粪便样本在门水平上的优势菌为厚壁菌门、变形菌门、放线菌门和拟杆菌门，这四个主要门类的菌群是造成非消化性多糖降解的原因。此外，拟杆菌属的菌群还能够通过一系列糖苷水解酶和碳水化合物代谢途径产生多种短链脂肪酸(例如乙酸和丙酸)。
如图16A所示，厚壁菌门和拟杆菌门占肠道菌总数的91.60％。该结果与已报道的研究一致，即超过90％的肠道菌群是属于厚壁菌门和拟杆菌门。在发酵12h 和24h后，ACNP组和菊粉组中的厚壁菌门与拟杆菌门比值以及变形菌门水平显著下降。另外，在发酵12h和24h后，菊粉组中放线菌门水平显著增加。之前的研究表明，拟杆菌门水平的提高以及厚壁菌门和变形菌门水平的降低为环磷酰胺引起的肠道损伤的恢复带来了益处，更高的拟杆菌门与厚壁菌门比值与人、小鼠和猪的肥胖风险降低呈正相关。也有报道称，放线菌门的某些菌群，例如双歧杆菌属(乙酸和乳酸的生产者)，对人类肠道菌群产生了有益的影响。这些有关门水平的实验结果表明，ACNP与菊粉一样(阳性对照)对宿主肠道菌群的健康有益。
ACNP组、空白组和菊粉组在属水平上的菌群组成差异如图16B和C所示。与空白组相比，ACNP组和菊粉组中优势菌的相对丰度有显著差异，这表明ACNP 和菊粉发酵对肠道微生物群落有显著影响。具体而言，ACNP组在发酵12h后，有益的普氏菌属、巨单胞菌属和双歧杆菌属菌群相对丰度分别显著(p<0.05)从 21.42％增至51.98％、3.19％增至31.68％、1.53％增至5.69％，而嗜血杆菌属水平则显著从20.30％降至0.40％。发酵24h后，有益菌群普氏菌属和巨单胞菌属显著增加，而有害的嗜血杆菌属水平以及拟杆菌属与普氏菌属的比值显著下降。这些实验结果表明，普氏菌属和巨单胞菌属可能是水解和利用ACNP的主要肠道菌群。菊粉组的肠道菌群发生了类似变化。ACNP和菊粉发酵引起粪便微生物群发生类似的改变，可能是由于它们具有相似的分子结构单元，因为它们都由带有末端葡萄糖的2，1-糖苷键的果聚糖组成。众所周知，普氏菌属为有益菌群，它可以参与植物多糖的代谢和利用。据报道，普氏菌属水平的增加可通过促进糖原的贮藏来改善葡萄糖的代谢，而膳食纤维或碳水化合物的消耗可使普氏菌属水平增加。最近的研究表明，膳食多糖的摄入可使巨单胞菌属水平增加，巨单胞菌属作为有益微生物群对新陈代谢有积极的影响。双歧杆菌属的肠道微生物可产生乳酸和乙酸，调节G蛋白偶联受体41和43。而且，双歧杆菌属水平增加与糖尿病和/或肥胖症呈负相关。如图16C所示，嗜血杆菌属为变形菌门的革兰氏阴性球菌。嗜血杆菌属包括一些有害细菌，例如B型流感嗜血杆菌(Hib)，它们可引起不同类型的疾病，包括呼吸、骨骼和关节以及神经系统疾病。
为了进一步表征发酵24h后各组肠道菌群之间的差异，我们采用了基于 WeightedUnifrac距离的主坐标分析(PCoA)。从图16D中可以看到，PCoA的3D 图表明不同组之间的肠道菌群组成有明显的差异，其中三个主成分分别占 69.19％，16.45％和12.59％。从图16E可以看出，基于Wilcox Test的Shannon指数箱型图显示了不同治疗组之间Alpha多样性的显著差异(p<0.01)
由上可知，天冬多糖在对肠道菌群影响中，无论从pH变化，消耗情况，短链脂肪酸的产生上均有着有益方向的影响，另外，天冬多糖还能够促进有益菌群普氏菌属和巨单胞菌属的增加，抑制嗜血杆菌属，降低拟杆菌属与普氏菌属的比值，有益人体健康，能够帮助肠道建立健康活跃的菌群环境。
以上对本发明的实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，不能被认为用于限定本发明的实施范围。凡依本发明申请范围所作的均等变化与改进等，均应仍归属于本发明的专利涵盖范围之内。

Claims (10)

1.一种天冬多糖，其特征在于：包括Fru和Glc，不含有糖醛酸和蛋白，是由(2→1)-Fruf和t-Glcp组成的菊粉型果聚糖，相对分子量为2.69×103。
2.根据权利要求1所述的天冬多糖，其特征在于：天冬多糖组成单糖Fru与Glc的比例为14：1。
3.根据权利要求1或2所述的天冬多糖，其特征在于：结构如式1所示：
Figure FDA0002543127850000011
4.提取权利要求1-3中任一所述的天冬多糖的方法，其特征在于：包括如下步骤，
取天冬加入乙醇脱脂，再用热水回流提取获得提取液，对提取液浓缩后醇沉，获得的沉淀透析后获得天冬粗多糖；
取天冬粗多糖依次经过阴离子交换色谱纯化、琼脂糖凝胶层析纯化和葡聚糖凝胶层析纯化后，得到天冬多糖。
5.根据权利要求4所述的天冬多糖的方法，其特征在于：取天冬粗多糖依次经过DEAE-650M阴离子交换色谱纯化、琼脂糖凝胶Sepharose 6B柱层析纯化和葡聚糖凝胶SephacrylS-300柱层析纯化后，得到天冬多糖。
6.根据权利要求4所述的天冬多糖的方法，其特征在于：天冬粗多糖提取方法具体为：
取干燥天冬浸泡于乙醇中，过夜脱脂；
乙醇全部挥发后，加入15-25倍质量的纯水，加热回流提取3-5次，去滤渣后合并提取液；
将提取液旋蒸浓缩到总量的15-25％，加入无水乙醇，静置过夜进行醇沉，取沉淀加水重溶后再次进行醇沉，重复3-5次；
醇沉物用水溶解后以7000Da的透析袋进行透析，内溶物浓缩、冷冻干燥后得到天冬粗多糖。
7.权利要求1-3中任一所述的天冬多糖在肠道菌群调节中的应用。
8.根据权利要求7所述的天冬多糖在肠道菌群调节中的应用，其特征在于：天冬多糖能够降低肠道内腔的pH值。
9.根据权利要求7所述的天冬多糖在肠道菌群调节中的应用，其特征在于：天冬多糖促进短链脂肪酸的产生。
10.根据权利要求7所述的天冬多糖在肠道菌群调节中的应用，其特征在于：天冬多糖能够促进有益菌群普氏菌属和巨单胞菌属的增加，抑制嗜血杆菌属，降低拟杆菌属与普氏菌属的比值。
CN202010556685.3A 2020-06-17 2020-06-17 天冬多糖在肠道菌群调节中的应用 Active CN111808207B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010556685.3A CN111808207B (zh) 2020-06-17 2020-06-17 天冬多糖在肠道菌群调节中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010556685.3A CN111808207B (zh) 2020-06-17 2020-06-17 天冬多糖在肠道菌群调节中的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111808207A true CN111808207A (zh) 2020-10-23
CN111808207B CN111808207B (zh) 2021-11-12

Family

ID=72846561

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010556685.3A Active CN111808207B (zh) 2020-06-17 2020-06-17 天冬多糖在肠道菌群调节中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111808207B (zh)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102516403A (zh) * 2011-12-10 2012-06-27 重庆市秀山红星中药材开发有限公司 从天门冬中提取天冬多糖的方法
CN102579476A (zh) * 2011-01-17 2012-07-18 上海市中医医院 一种含天冬脱蛋白多糖的抗肿瘤血管栓塞剂及其制备方法
CN108524749A (zh) * 2018-07-03 2018-09-14 正大青春宝药业有限公司 一种用于改善肠道菌群分布的中药组合物及应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102579476A (zh) * 2011-01-17 2012-07-18 上海市中医医院 一种含天冬脱蛋白多糖的抗肿瘤血管栓塞剂及其制备方法
CN102516403A (zh) * 2011-12-10 2012-06-27 重庆市秀山红星中药材开发有限公司 从天门冬中提取天冬多糖的方法
CN108524749A (zh) * 2018-07-03 2018-09-14 正大青春宝药业有限公司 一种用于改善肠道菌群分布的中药组合物及应用

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JI EUN KIM等: ""Anti-Inflammatory Response and Muscarinic Cholinergic Regulation during the Laxative Effect of Asparagus cochinchinensis in Loperamide-Induced Constipation of SD Rats"", 《INTERNATIONAL JOURNAL OF MOLECULAR SCIENCES》 *
KANGXIAO GUO等: ""Bacterial diversity in the intestinal mucosa of mice fed with Asparagus extract under high‑fat diet condition"", 《3 BIOTECH》 *
刘宏: ""菊粉的功能特性与开发应用"", 《中国食物与营养》 *
宫兆燕等: ""天冬活性化合物的提取及其药理活性研究进展"", 《医学综述》 *
苗晶囡等: ""天然多糖对肠道菌群调节作用的研究进展"", 《中国食物与营养》 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN111808207B (zh) 2021-11-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Huang et al. Extraction, purification, structural characterization, and gut microbiota relationship of polysaccharides: A review
Caleffi et al. Isolation and prebiotic activity of inulin-type fructan extracted from Pfaffia glomerata (Spreng) Pedersen roots
CN111285939B (zh) 一种具有抗氧化和调节肠道菌群功效的海蒿子多糖及其制备方法与应用
CN110801028B (zh) 具有优良结肠发酵特性的改性苹果果胶及其制备方法
Zeng et al. A galactoglucan isolated from of Cistanche deserticola YC Ma. and its bioactivity on intestinal bacteria strains
CN104479043A (zh) 一种鼠李糖乳杆菌的胞外多糖及其制备方法和应用
Suárez et al. First isolation and structural determination of cyclic β-(1→ 2)-glucans from an alga, Chlorella pyrenoidosa
Wei et al. Purification, characterization and immunostimulatory activity of a novel exopolysaccharide from Bacillus sp. H5
Wu et al. In vitro digestive characteristics and microbial degradation of polysaccharides from lotus leaves and related effects on the modulation of intestinal microbiota
Lei et al. Structural characterization and in vitro analysis of the prebiotic activity of oligosaccharides from lotus (Nelumbo nucifera Gaertn.) seeds
Luo et al. A novel polysaccharide from Rubus chingii Hu unripe fruits: Extraction optimization, structural characterization and amelioration of colonic inflammation and oxidative stress
Hu et al. Preparation, structural characterization and prebiotic potential of mulberry leaf oligosaccharides
Tang et al. Extraction and characterization of polysaccharide from fermented mycelia of Coriolus versicolor and its efficacy for treating nonalcoholic fatty liver disease
CN114805629B (zh) 天麻均一多糖及其制备方法和应用
Xing et al. Molecular structure features and lactic acid fermentation behaviors of water-and alkali-soluble polysaccharides from Dendrobium officinale
Yang et al. Structural elucidation of a highly branched α-D-glucan from Huangjiu and its hepatoprotective activity via gut microbiome regulation and intestinal barrier repairment
CN111808207B (zh) 天冬多糖在肠道菌群调节中的应用
CN106749733B (zh) 一种泡叶藻硫酸酯化多糖及其制备方法、应用
CN113480672B (zh) 一种类芽孢杆菌的胞外多糖及其应用
CN114027510A (zh) 一种蛋白核小球藻多糖混合物及其制备方法和作为新型益生元的应用
CN113826900A (zh) 一种结冷胶寡糖及其在益生元中的应用
CN114134188B (zh) 一种发酵小麦麸皮合成胞外多糖的方法
CN116284476A (zh) 鸭跖草多糖及其制备方法与应用
CN114672073B (zh) 一种益生活性复合多糖及其制备方法与应用
Yang et al. An exopolysaccharide from Lactobacillus pentosus YY-112: structure and effect on the human intestinal microbiota

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
OL01 Intention to license declared
OL01 Intention to license declared