CN111793141B - 一种榆黄蘑菌丝体多糖及其制备方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及榆黄蘑菌丝体多糖的制备方法，属于生物技术领域。两种榆黄蘑菌丝体多糖精品，它们是由深层发酵得到的榆黄蘑菌丝体粉碎后，热水提取，乙醇沉淀，4℃过夜，离心去上清，沉淀用乙醇洗涤三次，干燥后得榆黄蘑菌丝体水提物。榆黄蘑菌丝体水提物溶解于水，加入过氧化氢去色素、蛋白酶除蛋白质。脱色液浓缩后，乙醇沉淀，离心去上清，沉淀用乙醇洗涤3次，干燥后得榆黄蘑菌丝体多糖粗品。榆黄蘑菌丝体多糖粗品经离子交换层析和凝胶过滤层析纯化后得两种榆黄蘑菌丝体多糖精品PMP‑1和PMP‑2。它们可以作为食品原料、食品添加剂和药品原料。

Description

一种榆黄蘑菌丝体多糖及其制备方法和用途
技术领域
本发明涉及两种榆黄蘑菌丝体多糖的制备方法，用于食品原料、食品添加剂和药品原料，属于生物技术领域。
背景技术
榆黄蘑(Pleurotus citrinopileatus)属担子菌亚门，层菌纲，伞菌目，侧耳科，侧耳属，为非常珍贵药食同源的蕈菌之一，它除了味道鲜美、营养丰富外，还具有抗肿瘤、抗氧化、免疫调节、抗炎、降血脂、降血糖等生物活性。
榆黄蘑富含多种营养物质和药用成分，其中多糖为其主要药用成分，具有抗氧化、免疫调节、降血压、抗炎等功效，目前对榆黄蘑多糖的研究都是从子实体中提取得到，从菌丝体中分离纯化多糖并分析其结构，这方面的研究还是空白。与传统的固体基质人工栽培榆黄蘑子实体技术相比，液体深层发酵榆黄蘑菌丝体不仅占地少、周期短、产量高，还可以进行规模化生产，保证产品的稳定性。并且，通过培养基和发酵参数的调整，可以改变榆黄蘑菌丝体多糖的生物合成途径，得到新的多糖，开发多糖的更多新用途。本发明通过解决榆黄蘑菌丝体多糖制备的技术性难题，获得两种均一的榆黄蘑菌丝体多糖，可用于食品原料、食品添加剂和药品原料。
发明内容
本发明的目的之一是提供一种从榆黄蘑菌丝体中分离纯化得到榆黄蘑菌丝体多糖纯品PMP-1的方法。
本发明所述的榆黄蘑菌丝体多糖，为含D-葡萄吡喃环的多糖，具体由甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和岩藻糖以摩尔比0.001-0.005：0.005-0.015：0.005-0.015：0.01-0.02：0.0005-0.002：0.8-1.1：0.01-0.02：0.0005-0.002组成。
作为优选方案，榆黄蘑菌丝体多糖由甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和岩藻糖以摩尔比0.003：0.010：0.011：0.015：0.001：0.944：0.013：0.001组成，所述的榆黄蘑菌丝体多糖PMP-1的分子量大约5238Da。命名为PMP-1。
所述的获得榆黄蘑菌丝体多糖精品PMP-1的方法，将榆黄蘑菌丝体干燥品粉碎过筛后加入去离子水，加热，离心取上清，共提取两次，合并两次的上清液并浓缩，加入乙醇沉淀，真空干燥后得到本发明所述的榆黄蘑菌丝体水提取物。将榆黄蘑菌丝体水提取物溶解于去离子水中，加入H2O2，室温下振荡，加热去除H2O2后离心，在上清液中加入胰蛋白酶去蛋白质，加入乙醇沉淀，将沉淀真空干燥后得到本发明所述的榆黄蘑菌丝体多糖粗品，其多糖含量占总固体重量的60％以上。
将榆黄蘑菌丝体多糖粗品溶解于去离子水，用离子交换层析进行纯化，洗脱液为去离子水，用硫酸-蒽酮比色法跟踪检测，收集主峰，再采用凝胶过滤层析，洗脱液为去离子水，用硫酸-蒽酮比色法跟踪检测，收集主峰，真空干燥，即得到本发明所述的榆黄蘑菌丝体多糖精品(PMP-1)，其多糖含量占总固体的95％以上。
所述方法中，加热提取是在水浴中加热，水浴温度在60-95℃。
所述方法中，加热提取时间为1-6小时。
所述方法中，提取所用的液固比为10-20(mL/g)。
所述方法中，H2O2浓度为1％-3％。
所述方法中，胰蛋白酶浓度为0.1％-0.25％。
所述方法中，离子交换树脂为二乙胺基乙基纤维素(DEAE-52)，或二乙胺基乙基萄聚糖凝胶(DEAE Sephadex A-25或DEAE Sephadex A-50)，或二乙胺基乙基琼脂糖凝胶(DEAE Sepharose)。
所述方法中，凝胶过滤层析所用填料为Sephcryl S-200或Sephcryl S-400。
本发明的目的之二是提供一种从榆黄蘑菌丝体中分离纯化得到榆黄蘑菌丝体多糖纯品PMP-2的方法。
本发明的技术方案还提供一种榆黄蘑菌丝体多糖，榆黄蘑菌丝体多糖为含有吡喃环的多糖，具体由甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖和岩藻糖以摩尔比0.1-0.2：0.05-0.1：0.003-0.01：0.03-0.08：0.005-0.015：0.3-0.8：0.1-0.2：0.005-0.02：0.01-0.03：0.001-0.003组成。
作为优选方案，本发明所述的榆黄蘑菌丝体多糖由甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、、木糖、阿拉伯糖和岩藻糖以摩尔比0.123：0.080：0.006：0.052：0.010：0.526：0.175：0.011：0.015：0.002组成，所述的榆黄蘑菌丝体多糖PMP-2的分子量大约43471Da。命名为PMP-2。
所述的获得榆黄蘑菌丝体多糖精品PMP-2的方法，将榆黄蘑菌丝体干燥品粉碎过筛后加入去离子水，加热，离心取上清，将上清液浓缩，加入乙醇沉淀，真空干燥后得到本发明所述的榆黄蘑菌丝体水提取物。将榆黄蘑菌丝体水提取物溶解于去离子水中，加入H2O2，室温下振荡，加热去除H2O2后离心，在上清液中加入胰蛋白酶去蛋白质，加入乙醇沉淀，将沉淀真空干燥后得到本发明所述的榆黄蘑菌丝体多糖粗品，其多糖含量占总固体重量的60％以上。
将榆黄蘑菌丝体多糖粗品溶解于去离子水，用离子交换层析进行纯化，洗脱液为NaCl溶液，用硫酸-蒽酮比色法跟踪检测，收集主峰，再采用凝胶过滤层析，洗脱液为去离子水，用硫酸-蒽酮比色法跟踪检测，收集主峰，真空干燥，即得到本发明所述的榆黄蘑菌丝体多糖精品(PMP-2)，其多糖含量占总固体的95％以上。
所述方法中，加热提取是在水浴中加热，水浴温度在60-95℃。
所述方法中，加热提取时间为1-6小时。
所述方法中，提取所用的液固比为10-20(mL/g)。
所述方法中，H2O2浓度为1％-3％。
所述方法中，胰蛋白酶浓度为0.1％-0.25％。
所述方法中，离子交换树脂为二乙胺基乙基纤维素(DEAE-52)，或二乙胺基乙基萄聚糖凝胶(DEAE Sephadex A-25或DEAE Sephadex A-50)，或二乙胺基乙基琼脂糖凝胶(DEAE Sepharose)。
所述方法中，NaCl溶液为0.5-1.5mol/L的NaCl水溶液。
所述方法中，凝胶过滤层析所用填料为Sephcryl S-200或Sephcryl S-400。
附图说明
图1为榆黄蘑菌丝体多糖精品(PMP-1)紫外—可见光扫描光谱。
图2为榆黄蘑菌丝体多糖精品(PMP-1)红外光谱。
图3为榆黄蘑菌丝体多糖精品(PMP-2)紫外—可见光扫描光谱。。
图4为榆黄蘑菌丝体多糖精品(PMP-2)红外光谱。
图5为榆黄蘑菌丝体多糖精品(PMP-1和PMP-2)的超氧阴离子清除能力，A为VC、B为PMP-1、C为PMP-2。
图6为榆黄蘑菌丝体多糖精品(PMP-1和PMP-2)的ABTS自由基清除能力，A为VC、B为PMP-1、C为PMP-2。
图7为榆黄蘑菌丝体多糖精品(PMP-1和PMP-2)的DPPH自由基清除能力，A为VC、B为PMP-1、C为PMP-2。
图8为榆黄蘑菌丝体多糖精品(PMP-1和PMP-2)的Fe2+螯合能力，A为VC、B为PMP-1、C为PMP-2。
具体实施方式
下面结合实施例，进一步说明本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。说明书及实施例中采用的化学试剂、层析柱等，如无特殊说明均按常规实验条件下进行操作，或按供应商提供的说明进行操作。
实施例1：榆黄蘑菌丝体多糖粗品的制备方法
榆黄蘑菌丝体由本实验室通过深层发酵所得，将菌丝体烘干、粉碎、过筛。取榆黄蘑菌丝体干粉100g，按液固比15：1(mL/g)加入90℃热水，90℃浸提2h，冷却至室温后3500rpm离心15min，取上清液，残渣重复提取一次。合并两次的浸提液，浓缩至总体积的1/10，向浓缩液中缓缓加入无水乙醇，至乙醇终浓度为80％，4℃冰箱静置过夜，3 500rpm离心15min，弃上清得到榆黄蘑菌丝体水提物。将水提物溶解于去离子水中，加入2％的H2O2，室温下振荡2h，加热煮沸30min去除H2O2后离心，在上清液中加入0.15％的胰蛋白酶去蛋白质，然后加入乙醇沉淀，将沉淀真空干燥后得到本发明的榆黄蘑菌丝体粗品。
实施例2：均一榆黄蘑菌丝体多糖PMP-1的制备方法
取榆黄蘑菌丝体多糖粗品500mg，去离子水充分溶解，上样至已平衡好的DEAESephadex A-25离子交换层析柱中，规格为(2.6×30cm)，平衡液为去离子水，用去离子水以1.5mL/min的流速洗脱，3min/管分部收集，采用硫酸-蒽酮法检测各管洗脱液中多糖含量，以收集管号为横坐标，吸光值为纵坐标绘制多糖洗脱曲线，根据洗脱曲线合并相同组分。离子交换柱分离所得榆黄蘑菌丝体多糖水洗组分上Sephacryl S-200分子筛层析，去离子水洗脱。柱规格为(1.0×100cm)，分部收集，硫酸-蒽酮法跟踪检测，合并相同组分。冷冻干燥，得到榆黄蘑菌丝体多糖精品(代号：PMP-1)。所得到的榆黄蘑菌丝体多糖由甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和岩藻糖以摩尔比0.003：0.010：0.011：0.015：0.001：0.944：0.013：0.001组成，所述的榆黄蘑菌丝体多糖PMP-1的分子量为5238Da。
在图1中，通过对(PMP-1)进行紫外－可见光(200-700nm)全波长扫描，证明榆黄蘑菌丝体多糖精品纯度较高，基本无蛋白质、核酸和其它杂质。
在图2中：PMP-1在3600～3200cm-1出现一种宽峰，是O-H的伸缩振动。在2922.34cm-1的峰是糖类C-H伸缩振动，1400～1200cm-1的一些峰是C-H的变角振动，这两组峰是糖类化合物的特征吸收。1665～1635cm-1间的吸收是糖水化物的吸收峰，1250～950cm-1的一组峰是吡喃环的醚键(C-O-C)和羟基的吸收峰，在849.93cm-1的吸收是由α-端基碳差向异构体的C-H变振动引起的，表明PMP-1的端基碳为α-构型，PMP-1在761.34cm-1处的吸收是由D-葡萄吡喃环的对称环伸缩振动所引起。
实施例3：均一榆黄蘑菌丝体多糖PMP-2的制备方法
取榆黄蘑菌丝体多糖粗品500mg，去离子水充分溶解，上样至已平衡好的DEAESephadex A-25离子交换层析柱中，规格为(2.6×30cm)，平衡液为去离子水，用1mol/L的NaCl水溶液以1.5mL/min的流速洗脱，3min/管分部收集，采用硫酸-蒽酮法检测各管洗脱液中多糖含量，以收集管号为横坐标，吸光值为纵坐标绘制多糖洗脱曲线，根据洗脱曲线合并相同组分。离子交换柱分离所得榆黄蘑菌丝体多糖水洗组分上Sephacryl S-400分子筛层析，去离子水洗脱。柱规格为(1.0×100cm)，分部收集，硫酸-蒽酮法跟踪检测，合并相同组分。冷冻干燥，得到榆黄蘑菌丝体多糖精品(代号：PMP-2)。所得到的榆黄蘑菌丝体多糖由甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖和岩藻糖以摩尔比0.123：0.080：0.006：0.052：0.010：0.526：0.175：0.011：0.015：0.002组成，所述的榆黄蘑菌丝体多糖PMP-2的分子量为43471Da。
在图3中，通过对(PMP-2)进行紫外-可见光(200-700nm)全波长扫描，证明榆黄蘑菌丝体多糖精品纯度较高，基本无蛋白质、核酸和其它杂质。
在图4中：PMP-2在3600～3200cm-1出现一种宽峰，是O-H的伸缩振动。在3000～2800cm-1的一组峰是糖类C-H伸缩振动，2933.30cm-1出现的峰说明存在分子间氢键，1400～1200cm-1的一些峰是C-H的变角振动，这两组峰是糖类化合物的特征吸收。1665～1635cm-1间的吸收是糖水化物的吸收峰，1250～950cm-1的一组峰是吡喃环的醚键(C-O-C)和羟基的吸收峰，在1404.73cm-1的吸收推测为C-O的伸缩振动所致。
实施例4：理化性质测定
1.多糖含量测定
采用硫酸-蒽酮法，在620nm处，分光光度法测定总多糖含量，以葡萄糖(C6H12O6)计榆黄蘑菌丝体多糖粗品含量为60％，榆黄蘑菌丝体多糖(PMP-1、PMP-2)含量分别为99.89％，和99.86％
2.紫外光谱分析
样品以蒸馏水溶解，置于200～400nm紫外全波长扫描。如图1，图3所示，PMP-1、PMP-2在260、280nm处无吸收，说明其不含蛋白质和核酸。
3.单糖组成分析
分别称取PMP-1、PMP-2干粉2mg，加入1mL 2mol/L三氟乙酸水解90min，旋转蒸发仪蒸干，再加入2mL甲醇，蒸干，按此方法反复处理2次。用2mL双蒸水将已水解的残基溶解，向其中加入60mg硼氢化钠还原8h，然后加入冰乙酸中和过量的硼氢化钠，浓缩，加入甲醇3mL以除去水分和反应副产物硼酸，反复处理3次，浓缩，110℃烘干以充分除去水分。向以上干燥样品中加入1mL乙酸酐乙酰化，100℃反应1h后冷却，向其中加入3mL甲苯，旋转蒸发仪蒸干，反复操作4～5次，以除去多余的乙酸酐。将乙酰化后的产物用3mL氯仿溶解，加入少量蒸馏水充分振荡，除去水相，重复操作4次后用无水硫酸钠干燥氯仿层，完全除去残留水相，最后定容至10mL用于GC-MS分析。结果见表1：榆黄蘑菌丝体多糖PMP-1由甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和岩藻糖组成，摩尔比0.003：0.010：0.011：0.015：0.001：0.944：0.013：0.001；PMP-2由甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖和岩藻糖组成，摩尔比0.123：0.080：0.006：0.052：0.010：0.526：0.175：0.011：0.015：0.002。
表1榆黄蘑菌丝体多糖PMP-1、PMP-2单糖组成气相色谱分析
Figure BDA0002596540810000061
4.分子量测定
以Shodex SUGAR KS-805(8.0mm×300mm)为高效液相色谱柱，采用示差折光检测器。色谱条件为：流动相为蒸馏水，流速为1.0mL/min；样品浓度为1.5mg/mL，进样量20μL。依次以右旋糖酐标准品绘制保留时间与各分子量参数关系标准曲线，再测样品的保留时间，根据标准曲线求得样品的分子量。结果表明：榆黄蘑菌丝体多糖PMP-1的分子量大约5238Da；
PMP-2的分子量大约43471Da。
实施例5：体外抗氧化活性检测
1超氧阴离子清除能力的测定
采用邻苯三酚自氧化法，在2.4mLTris—HCl溶液(pH8.2)中加入100μL不同浓度(0、0.0625mg/mL、0.125mg/mL、0.25mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL)的Vc或不同浓度(0、0.0625mg/mL、0.125mg/mL、0.25mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL)的PMP-1溶液，或(0、0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL、4mg/mL、8mg/mL)PMP-2溶液，混合后加入300μL浓度为7mmol/L的邻苯三酚，反应4min后，加入1滴浓盐酸终止反应。以蒸馏水做参比，用石英比色皿在325nm处测定其吸光值，重复三次，结果以超氧阴离子清除率(％)P1表示：
Figure BDA0002596540810000071
其中A0为空白吸光度，A1为待测液吸光度。
结果见图5。Vc的超氧阴离子清除能力在0-2mg/mL浓度范围内呈线性增加，经计算Vc对超氧阴离子的半数清除浓度CC50为113.17mg/mL；PMP-1的超氧阴离子清除能力在0-2mg/mL浓度范围内呈线性增加，CC50为0.97mg/mL；PMP-2的超氧阴离子清除能力在0-8mg/mL浓度范围内呈线性增加，CC50为3.81mg/mL。
2ABTS自由基清除能力的测定
取100μL不同浓度(0、6.25μg/L、12.5μg/L、25μg/L、50μg/L、100μg/L)的Vc溶液或不同浓度(0、0、6.25μg/L、12.5μg/L、25μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L)的PMP-1溶液或不同浓度(0、0.0625mg/mL、0.125mg/mL、0.25mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL)PMP-2溶液分别加入到96孔板中，再加入ABTS·+溶液300μL，混匀静置30min后，于734nm处测吸光值，以100μL蒸馏水或相对应溶液加入300μLABTS·+溶液为空白，并测定100μL样品溶液+300μL无水乙醇的吸光值。按下列公式计算清除率(P2)：
Figure BDA0002596540810000072
其中A0为加蒸馏水的ABTS的吸光值，At为样品溶液与ABTS反应后的吸光值。
结果如图6所示。Vc的ABTS自由基清除率在0-100μg/mL浓度范围内与浓度呈线性关系，经计算Vc对ABTS自由基的半数清除浓度CC50为52.46μg/mL；PMP-1的ABTS自由基清除能力在0-200μg/mL浓度范围内呈线性增加，CC50为109.87μg/mL；PMP-2的ABTS自由基清除率在0-2mg/mL浓度范围内呈正相关，CC50为0.95mg/mL。
3DPPH自由基清除能力测定
分别取不同浓度(0、3.125μg/mL、6.25μg/mL、12.5μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL)的Vc溶液或不同浓度(0、0.03125mg/mL、0.0625mg/mL、0.125mg/mL、0.25mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL)的PMP-1溶液或不同浓度(0、0.125mg/mL、0.25mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL、4mg/mL)PMP-2溶液100μL，置于96孔板的微孔中，加入100μL的DPPH溶液，室温避光保存30min，同时以100μL DPPH溶液与100μL无水乙醇为空白，于517nm波长处测定吸光值。按下列公式计算DPPH自由基清除率(P3)：
Figure BDA0002596540810000081
其中A0为100μL无水乙醇+100μL DPPH溶液的吸光度值，AS为100μL样品溶液+100μLDPPH溶液的吸光度值，AC为100μL样品溶液+100μL无水乙醇的吸光度值。将实验重复三次，求得清除率的平均值。
结果如图7所示。Vc的DPPH自由基清除率在0-100μg/mL浓度范围内与浓度呈线性关系，经计算Vc对DPPH自由基的半数清除浓度CC50为61.21μg/mL；PMP-1的DPPH自由基清除能力在0-1mg/mL浓度范围内呈线性增加，CC50为0.52mg/mL；PMP-2的DPPH自由基清除率在0-4mg/mL浓度范围内与浓度呈正相关，CC50为2.71mg/mL。
4Fe2+螯合能力的测定
吸取50μL不同浓度(0、2.5μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL)的EDTA-2Na溶液或不同浓度(0、0.03125mg/mL、0.0625mg/mL、0.125mg/mL、0.25mg/mL、0.5mg/mL)的PMP-1或不同浓度(0、0.125mg/mL、0.25mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL)PMP-2溶液分别加入到96孔培养板的孔中，再加入5μL硫酸亚铁溶液(2mmol/L)，160μL去离子水，室温需震荡反应5min，加10μL菲咯嗪溶液(5mmol/L，溶于甲醇)，摇匀，室温反应10min后，于562nm处测定其吸光值。重复三次实验，按下式计算Fe2+螯合率(P4)：
Figure BDA0002596540810000091
其中A0为空白吸光度，A1为样品吸光度，A2为不加菲咯嗪时的吸光度。
结果如图8所示。EDTA-2Na Fe2+螯合能力在0-80μg/mL浓度范围内与浓度呈线性关系，经计算EDTA对Fe2的半数螯合清除浓度CC50为40.91μg/mL；PMP-1的Fe2+螯合能力在0-0.5mg/mL浓度范围内呈线性增加，CC50为0.27mg/mL；PMP-2Fe2+螯合率在0-2mg/mL浓度范围内与浓度呈正相关，CC50为0.90mg/mL。

Claims (1)

1.一种榆黄蘑菌丝体多糖PMP-1的制备方法，其特征在于，步骤如下：
取榆黄蘑菌丝体干粉 100 g，按液固比mL/g 15：1加入 90℃热水，90℃浸提2h，冷却至室温后3500rpm 离心15min，取上清液，残渣重复提取一次，合并两次的浸提液，浓缩至总体积的1/10，向浓缩液中缓缓加入无水乙醇，至乙醇终浓度为 80%，4℃冰箱静置过夜，3500rpm离心15min，弃上清液得到榆黄蘑菌丝体水提物，将水提物溶解于去离子水中，加入2%的H2O2，室温下振荡2h，加热煮沸30 min去除 H2O2后离心，在上清液中加入0.15%的胰蛋白酶去蛋白质，然后加入乙醇沉淀，将沉淀真空干燥后得到榆黄蘑菌丝体多糖粗品；
取榆黄蘑菌丝体多糖粗品500mg，去离子水充分溶解，上样至已平衡好的 DEAESephadexA-25 离子交换层析柱中，规格为2.6×30cm，平衡液为去离子水，用去离子水以1.5mL/min 的流速洗脱，3min/管分部收集，采用硫酸-蒽酮法检测各管洗脱液中多糖含量，以收集管号为横坐标，吸光值为纵坐标绘制多糖洗脱曲线，根据洗脱曲线合并相同组分，离子交换柱分离所得榆黄蘑菌丝体多糖水洗组分上 Sephacryl S-200 分子筛层析，去离子水洗脱，柱规格为1.0×100 cm，分部收集，硫酸-蒽酮法跟踪检测，合并相同组分，冷冻干燥，得到榆黄蘑菌丝体多糖PMP-1，所得到的榆黄蘑菌丝体多糖PMP-1由甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和岩藻糖以摩尔比 0.003： 0.010：0.011：0.015： 0.001： 0.944： 0.013： 0.001 组成，所述的榆黄蘑菌丝体多糖PMP-1的分子量为5238Da。
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