CN111788201A

CN111788201A - 紫堇达明的结晶盐

Info

Publication number: CN111788201A
Application number: CN201980016180.3A
Authority: CN
Inventors: 杨征; 李征; 杨红菊; 石智聪
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2018-11-29
Filing date: 2019-11-15
Publication date: 2020-10-16
Anticipated expiration: 2039-11-15
Also published as: WO2020107335A1; EP3887367A1; AU2019385971A1; JP7194828B2; AU2019385971B2; CA3121405A1; EP3887367A4; SG11202105355XA; WO2020108330A1; CN111788201B; JP2022509701A; CA3121405C; US20210347770A1; US11236081B2

Abstract

本公开涉及以下化合物(1)(也称为l‑紫堇达明或l‑CDL)的结晶盐型及其制备方法、其药物组合物以及其在治疗慢性疼痛、焦虑、失眠、高脂血症、高胆固醇血症、高甘油三酯血症、肝脂肪变性和代谢综合征等的方法中的用途。

Description

紫堇达明的结晶盐

技术领域

本公开涉及以下化合物(1)，也称为l-紫堇达明或l-CDL，的结晶盐型(crystalline salt form)及其制备方法、其药物组合物以及其在用于治疗慢性疼痛、焦虑、失眠、高脂血症、高胆固醇血症、高甘油三酯血症、肝脂肪变性和代谢综合征等的方法中的用途。

化合物(1)

背景技术

化合物(1)，也称为l-紫堇达明或l-CDL，具有CAS编号：30413-84-4。化合物(1)为游离碱，其酸pKa值为约5.2。需要的是以足以使制剂能够满足严格的药物要求和规格的形式生产化合物(1)，同时提供充分的活性药物体内暴露。此外，生产化合物(1)的方法需要是适合大规模生产的方法。另外，希望的是产物应当为易于加工的形式，例如易于过滤和易于干燥。最后，希望的是化合物(1)的药物产品长时间稳定而不需要专门的储存条件。因此，需要鉴定化合物(1)的药学上可接受的结晶盐。

另外，许多盐形式可以以不同的多晶型存在，其表现出不同的物理、化学和光谱学性质。例如，盐的某些多晶型可能比其他多晶型更容易溶于特定溶剂中、可能更容易流动或可能更容易压缩。对于药物候选物，某些多晶型可能比其他多晶型具有更高的生物利用度，而其他多晶型可能在某些生产、储存和生物条件下更稳定。从监管的角度来看，这是特别重要的，因为药物只有在符合严格的纯度和特性标准时，才会获得如美国食品药品监督管理局的机构的批准。事实上，对化合物的一种多晶型(其表现出特定的溶解性和物理化学(包括光谱)性质)的监管批准通常并不意味着对该相同化合物的其他多晶型的即时批准。因此，需要鉴定可以提供多种优点的盐的多晶型。

发明内容

本公开涉及以下化合物(1)(也称为l-紫堇达明或l-CDL)的结晶盐型及其制备方法、其药物组合物以及其在治疗慢性疼痛、焦虑、失眠、高脂血症、高胆固醇血症、高甘油三酯血症、肝脂肪变性和代谢综合征等的方法中的用途。

化合物(1)

在一个方面，本公开涉及化合物(1)的结晶盐型。在一个具体的方面，本公开涉及化合物(1)的结晶盐酸盐、草酸盐、马来酸盐、硫酸盐或甲磺酸盐盐型。

在一个方面，本公开涉及化合物(1)的结晶盐酸盐型。在一个具体的方面，化合物(1)的结晶盐酸盐型特征在于包括选自约9.7、10.1、14.3、15.0、17.2、17.5、18.9、21.0、21.4、21.9和23.7度2θ的峰的X射线粉末衍射(“XRPD”)图谱和/或约252℃的差示扫描量热法(“DSC”)热图吸热T_onset。

在一个方面，本公开涉及化合物(1)的结晶草酸盐型。在一个具体的方面，化合物(1)的结晶草酸盐型特征在于包括选自约11.7、13.0、15.4、16.3、19.0、19.6、20.4、22.1、24.5和25.2度2θ的峰的X-射线粉末衍射图谱和/或约205℃的差示扫描量热法热图吸热T_onset。

在一个方面，本公开涉及化合物(1)的结晶马来酸盐型。在一个具体的方面，化合物(1)的结晶马来酸盐型特征在于包括选自约8.0、10.4、12.4、14.0、15.3、16.4、19.3、20.8、21.5和23.3度2θ的峰的X-射线粉末衍射图谱和/或约193℃的差示扫描量热法热图吸热T_onset。

在一个方面，本公开涉及化合物(1)的结晶硫酸盐型。在一个具体的方面，化合物(1)的结晶硫酸盐型特征在于包括选自约8.4、12.6、13.7、16.0、16.7、21.0、21.8、22.2、23.4和27.5度2θ的峰的X-射线粉末衍射图谱和/或约229℃的差示扫描量热法热图吸热T_onset。

在一个方面，本公开涉及化合物(1)的结晶甲磺酸盐型。在一个具体的方面，化合物(1)的结晶甲磺酸盐型特征在于包括选自约7.9、11.3、12.6、12.9、14.7、16.1、18.8、20.0、20.7和23.6度2θ的峰的X-射线粉末衍射图谱和/或约238℃的差示扫描量热法热图吸热T_onset。

在一个方面，本公开提供了一种药物组合物，其包含本文公开的任何结晶盐型和药学上可接受的载体。在一些具体的方面，药物组合物为单一单位剂型，和/或包含基本上纯的本文公开的结晶盐型。

在一个方面，本公开提供了一种治疗哺乳动物的慢性疼痛、焦虑、失眠、高脂血症、高胆固醇血症、高甘油三酯血症、肝脂肪变性和代谢综合征的方法，其包括向哺乳动物施用治疗有效量的本文公开的任何药物组合物。

在另一个方面，本公开提供了一种治疗哺乳动物的慢性疼痛、焦虑、失眠、高脂血症、高胆固醇血症、高甘油三酯血症、肝脂肪变性和代谢综合征的方法，包括向哺乳动物施用包含治疗有效量的本文公开的任何结晶盐型的药物组合物。施用步骤可通过口服、静脉内、肌肉内或皮下方式以约1mg至约1,000mg、约5mg至约500mg、约10mg至约200mg、约10mg至约150mg、约10mg至约120mg、约10mg、约20mg、约40mg、约80mg或约120mg的量进行。

本公开的进一步方面、特征和优点对于本领域普通技术人员来说在检查和阅读以下详细描述后是清楚的。

附图说明

并入说明书中并构成说明书的部分的附图示出了本发明的几个实施方案，并且其与说明书一起用于解释本发明的原理。附图仅用于说明本发明的实施方案的目的，而不应被解释为限制本发明。本发明的其他目的、特征和优点将从结合示出本发明说明性实施方案的附图进行的以下详细描述变得明显，其中：

图1示出了化合物(1)的盐酸盐的代表性1HNMR谱。

图2示出了化合物(1)的盐酸盐I型的代表性XRPD谱图。

图3示出了化合物(1)的盐酸盐I型的代表性偏光显微镜(“PLM”)图像。

图4示出了化合物(1)的盐酸盐I型的代表性差示扫描量热法(“DSC”)和热重分析(“TGA”)谱图。

图5示出了化合物(1)的盐酸盐I型的代表性动态蒸气吸附(“DVS”)曲线。

图6示出了化合物(1)的盐酸盐II型的代表性XRPD谱图。

图7显示了化合物(1)的盐酸盐II型的代表性DSC和TGA谱图。

图8示出了化合物(1)的盐酸盐III型的代表性XRPD谱图。

图9显示了化合物(1)的盐酸盐III型的代表性DSC和TGA谱图。

图10显示了化合物(1)的盐酸盐IV型的代表性XRPD谱图。

图11显示了化合物(1)的盐酸盐IV型的代表性DSC和TGA谱图。

图12示出了化合物(1)的盐酸盐V型的代表性XRPD谱图。

图13显示了化合物(1)的盐酸盐V型的代表性DSC和TGA谱图。

图14示出了化合物(1)的盐酸盐VI型的代表性XRPD谱图。

图15示出了化合物(1)的盐酸盐VI型的代表性DSC和TGA谱图。

图16显示了化合物(1)的盐酸盐VII型的代表性XRPD谱图。

图17显示了化合物(1)的盐酸盐VII型的代表性DSC和TGA谱图。

图18从底部至顶部分别示出了化合物(1)的盐酸盐I至VII型的代表性XRPD谱图。

图19示出了化合物(1)的草酸盐的代表性1HNMR谱。

图20示出了化合物(1)的草酸盐I型的代表性XRPD谱图。

图21示出了化合物(1)的草酸盐I型的代表性PLM图像。

图22显示了化合物(1)的草酸盐I型的代表性DSC和TGA谱图。

图23显示了化合物(1)的草酸盐I型的代表性DVS谱图。

图24示出了化合物(1)的草酸盐II型的代表性XRPD谱图。

图25显示了化合物(1)的草酸盐II型的代表性DSC和TGA谱图。

图26示出了化合物(1)的马来酸盐的代表性1HNMR谱。

图27示出了化合物(1)的马来酸盐的代表性XRPD谱图。

图28示出了化合物(1)的马来酸盐的代表性PLM图像。

图29显示了化合物(1)的马来酸盐的代表性DSC和TGA谱图。

图30显示了化合物(1)的马来酸盐的代表性DVS谱图。

图31示出了(a)化合物(1)、(b)化合物(1)的硫酸盐、(c)化合物(1)的甲磺酸盐和(d)化合物(1)的苯磺酸盐的代表性1HNMR谱。

图32示出了化合物(1)的硫酸盐的代表性XRPD谱图。

图33显示了化合物(1)的甲磺酸盐的代表性XRPD谱图。

图34示出了化合物(1)的(a)硫酸盐和(b)甲磺酸盐的代表性PLM图像。

图35显示了化合物(1)的硫酸盐的代表性DSC和TGA谱图。

图36显示了化合物(1)的甲磺酸盐的代表性DSC和TGA谱图。

图37A和37B显示了从施用3mg/kg IV和10mg/kg POA的TLZ-16游离碱(化合物(1))的雄性大鼠获得的血浆药物-时间曲线。

图38显示了从施用10mg/kg POB的TLZ-16HCl的雄性大鼠获得的血浆药物-时间曲线。

图39显示了从施用10mg/kg POC的TLZ-16马来酸盐的雄性大鼠获得的血浆药物-时间曲线。

图40显示了从施用10mg/kg POD的TLZ-16甲磺酸盐的雄性大鼠获得的血浆药物-时间曲线。

图41显示了从施用10mg/kg POE的TLZ-16草酸盐的雄性大鼠获得的血浆药物-时间曲线。

图42显示了从施用10mg/kg POF的TLZ-16硫酸盐的雄性大鼠获得的血浆药物-时间曲线。

图43显示了TLZ-16血浆药物-时间曲线的比较：雄性SD大鼠，3mg/kg IV，10mg/kgPOA&POB&POC&POD&POE&POF(n＝3)。

具体实施方式

以下是为帮助本领域技术人员实施本发明而提供的详细描述。本领域普通技术人员可以在不脱离本公开的精神或范围的情况下对本文所述的实施方案进行修改和变化。本文中提及的所有公开出版物、专利申请、专利、图形和其他参考文献均通过引用整体明确纳入本文中。

本说明书提供了以下化合物(1)(也称为l-紫堇达明或l-CDL)的结晶盐型，及其制备方法、其药物组合物以及其在治疗慢性疼痛、焦虑、失眠、高脂血症、高胆固醇血症、高甘油三酯血症、肝脂肪变性和代谢综合征等的方法中的用途。

化合物(1)

除非另有定义，本文中使用的所有科技术语具有与本公开所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。说明书中使用的术语仅用于描述特定实施方案，并不旨在限制本公开。

在提供值的范围的情况下，应当理解，除非上下文另有明确规定，在该范围的上限和下限之间的每一个中间值(至该下限单位的十分之一)以及在该所述范围内的任何其他阐述或中间值包含在本公开中(例如，在包含多个碳原子的组的情况下，提供落入该范围内的每一个碳原子数)。本公开也设想，这些较小范围的上限和下限可独立地包含在较小范围内，但受限于所述范围内的任何明确排除的限制。当所述范围包括一个或两个限制时，本公开中也包括排除这两个限制之一或两者的范围。

以下术语用于描述本公开。除非另有定义，本申请中使用的所有科技术语具有与本公开所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。说明书中使用的术语仅用于描述特定实施方案，并不旨在限制本公开。

除非上下文另有明确说明，本文和所附权利要求书中使用的冠词“一”和“一个”在本文中用于指该冠词的一个或多于一个(即至少一个)语法对象。举例来说，“一个元素”指一个元素或多于一个元素。

本文在说明书和权利要求书中使用的短语“和/或”应理解为指如此连接的元素中的“任一或两者”，即在某些情况下结合地存在而在其他情况下分离地存在的元素。用“和/或”列出的多个元素应以相同的方式解释，即如此结合的“一个或多个”元素。除了由“和/或”短语明确确认的元素之外，其他元素可以任选地存在，无论与明确确认的元素相关还是无关。因此，作为非限制性实例，当与诸如“包含”的开放式语言结合使用时，提及“A和/或B”在一个实施方案中可以仅指A(任选地包括B以外的元素)；在另一个实施方案中，仅指B(任选地包括A以外的元素)；和在又一个实施方案中，指A和B两者(任选地包括其他元素)；等等。

如本文在说明书和权利要求书中使用的，“或”应理解为具有与上文定义的“和/或”相同的含义。例如，当分隔列表中的项目时，“或”或者“和/或”应被解释为包含性的，即包括多个或一系列元素中的至少一个，但也包括多于一个，以及任选地另外的未列出的项目。只有明确表示相反的术语，例如“仅其中一个”或“恰好其中一个”，或当在权利要求中使用时，“由…组成”，指包含多个或一系列元素中的恰好一个元素。一般而言，当前接排他性的术语，例如“任一”、“其中一个”、“仅其中一个”或“恰好其中一个”时，本文中使用的术语“或”仅应解释为表示排他性的可选项(即，“一个或另一个，但非两者”)。

在权利要求书以及以上说明书中，所有过渡性短语如“包括”、“包含”、“带有”、“具有”、“含有”、“涉及”、“持有”、“由…组成”等应被理解为开放式的，即意味着包括但不限于。根据美国专利局专利审查程序手册第2111.03节的规定，只有过渡性短语“由…组成”和“基本上由…组成”应分别为封闭式或半封闭式过渡短语。

如本文在说明书和权利要求书中所使用的，涉及一个或多个元素的列表的短语“至少一个”应理解为是指从元素列表中的任何一个或多个元素中选择的至少一个元素，但不一定包括元素列表中具体列出的各个或每个元素中的至少一个，且不排除元素列表中的任何元素组合。该定义还允许可以任选地存在元素列表中除了短语“至少一个”所指的明确确认的元素之外的元素，无论与那些明确确认的元素相关还是无关。因此，作为非限制性的实例，“A和B的至少一个”(或等同地，“A或B的至少一个”，或等同地，“A和/或B的至少一个”)在一个实施方案中可以指至少一个(任选地包括超过一个)A而不存在B(且任选地包括B以外的元素)；在另一个实施方案中，指至少一个(任选地包括超过一个)B而不存在A(并且任选地包括除A以外的元素)；在又一实施方案中，指至少一个(任选地包括超过一个)A和至少一个(任选地包括超过一个)B(并且任选地包括其他元素)；等等。

如本文在说明书和权利要求书中使用的，关于本文中使用的物质的术语“药学上可接受的”是指在合理的医学判断范围内适合用于与人和低等动物的组织接触而没有过度毒性、刺激、过敏反应等的物质，其与合理的利益/风险比相称，并且当该物质用于药物组合物中时对预期用途是有效的。

如本文在说明书和权利要求书中使用的，术语“治疗”、“处理”和“疗法”指疾病或障碍和/或其至少一种伴随症状的减轻。

如本文在说明书和权利要求书中使用的，术语“多晶形”和“多晶型”指化合物或复合物如溶剂化物或水合物的固体结晶形式。同一化合物的不同多晶型可以表现出不同的物理、化学和/或光谱性质。不同的物理性质包括但不限于稳定性(例如，热或光稳定性)、可压缩性和密度(在制剂和产品制造中重要的)以及溶解速率(其可能影响生物利用度)。稳定性的差异可由化学反应性(例如，差异氧化，使得剂型在由一种多晶型组成时比由另一种多晶型组成时更快退色)或机械特性(例如，片剂在储存时随着动力学有利的多晶型转化为热力学上更稳定的多晶型而碎裂)或两者(例如，一种多晶型的片剂在高湿度下更易破裂)的变化引起。多晶型的不同物理性质可影响其加工。例如，一种多晶型可能比另一种更容易形成溶剂化物，或者由于例如其颗粒的形状或尺寸分布而更难过滤或洗涤除去杂质。

如本文中用于指以图形形式呈现的图谱或数据(例如，XRPD、DSC和NMR谱)，且除非另有说明，术语“峰”指本领域技术人员公认为不归因于背景噪声的峰或其他特殊特征。

通用分析方法

X射线粉末衍射分析(XRPD)

固体样品通过具有LynxEye检测器的粉末X射线衍射仪(Bruker D8 advance)进行测定。仪器参数如下所示。

应当理解，相对强度可能根据各种因素而变化，包括样品制备、仪器及安装程序和设置，以及用于获取分子谱。因此，此处列出的峰赋值旨在包括±0.2度2θ的变化。

热重分析(TGA)

总重量损失在TA Discovery TGA 55上获得。样品在去皮的(tared)铝盘中加热，10摄氏度/分钟升温至最终温度。

差示扫描量热分析(DSC)

使用TA Discovery DSC 250进行热分析。样品在铝针孔密封盘中加热，以50毫升/分钟的氮气吹扫10摄氏度/分钟升温至最终温度。注意，温度可能根据各种因素而变化，包括样品制备、仪器和样品纯度。因此，此处报告的温度旨在包括±0.5℃的变化。

偏光显微镜(PLM)

PLM分析在偏光显微镜ECLIPSE LV100POL(Nikon,JPN)上进行。

1H NMR分析

使用配备自动进样器(B-ACS 120)的Bruker Advance 300进行1H NMR。

动态蒸汽吸附(DVS)

使用DVS Intrinsic(SMS,UK)确定DVS。将约20至50毫克的化合物转移至SMS动态蒸汽吸附型DVS，并记录25℃下相对于不同大气湿度的重量变化。使用以下参数:

化合物(1)的盐酸盐

化合物(1)的盐酸盐表现出多种多晶型。

I型

I型盐酸(“HCl”)盐可从各种溶剂获得，包括但不限于丙酮、异丙醇(“IPA”)或乙酸乙酯(“EtOAc”)。在一些实施方案中，I型的结晶盐酸盐通过向化合物(1)游离碱的丙酮、IPA或EtOAc溶液中加入浓HCl水溶液(12摩尔/升)制备，并且表1列出了实验条件的细节。在一个具体的实施方案中，1.07g游离碱与333.3μL HCl在25mL丙酮中伴随过搅拌过夜进行反应，过滤结晶固体并在40℃下真空干燥。I型通过1HNMR、XRPD、PLM、DVS、TGA和DSC进行表征。

表1.I型盐酸盐的制备(1当量浓HCl)

图1显示了I型的代表性1HNMR谱。1HNMR谱显示在6.84ppm附近存在约0.17的化学位移，表明游离碱与HCl转化成盐。

图2显示了I型的代表性XRPD谱图。该谱图特征在于约9.7、10.1、14.3、15.0、17.2、17.5、18.9、21.0、21.4、21.9和23.7度2θ的峰，优选三个或更多个显著的峰。XRPD谱图表明I型晶体具有良好的结晶度。表2列出了I型盐酸盐的XRPD峰。

表2.I型盐酸盐的代表性XRPD峰的列表

代表性PLM图像见于图3中，其显示I型为棒状结晶固体。

I型的代表性热特征见图4。TGA数据表明，在RT和150℃之间存在约0.3％的重量损失，且残留溶剂较低。DSC数据表明，I型具有一个吸热峰，其起始温度和峰值温度分别为252℃和259℃，且吸热峰的焓为约120J/g。

代表性的DVS数据绘制于图5中，其表明I型盐酸盐是轻微吸湿的，且在80％相对湿度下吸收约0.57％。固体形式在DVS测试后不改变。

I型盐酸盐在水中2小时的溶解度高于游离碱，其从游离碱的低于1mg/mL的溶解度提高到I型盐酸盐的约19.1mg/mL的溶解度。

II型

II型盐酸盐可从甲醇获得。在一个实施方案中，II型通过在室温下搅拌甲醇中的I型盐酸盐浆液3天，和/或在50℃下搅拌该浆液1天获得。在另一个实施方案中，II型可以通过蒸发饱和盐酸盐甲醇溶液获得。在又一个实施方案中，II型可以通过向甲醇溶液中加入反溶剂(例如甲基叔丁基醚(“MTBE”)、甲苯、EtOAc或IPA)获得。

图6显示了II型的代表性XRPD谱图。II型的代表性热特征显示于图7中。TGA和DSC数据进一步表明II型是甲醇溶剂化物。

III型

III型盐酸盐可从乙醇获得。在一个实施方案中，III型可以通过在室温下搅拌乙醇中的I型盐酸盐浆液3天，和/或在50℃下搅拌该浆液1天获得。

图8显示了III型的代表性XRPD谱图。III型的代表性热特征见图9。TGA和DSC数据进一步表明，III型为乙醇溶剂化物。

IV型

IV型盐酸盐可从水获得。在一个实施方案中，IV型可以通过在室温下搅拌水中的I型盐酸盐浆体3天获得。

图10显示了IV型的代表性XRPD谱图。IV型的代表性热特征见图11。TGA和DSC数据进一步表明，IV型是水合物。

V型

V型盐酸盐可从水获得。在一个实施方案中，V型可以通过在RT-50℃下搅拌水中的I型盐酸盐浆液一天获得。

图12示出了V型的代表性XRPD谱图。V型的代表性热特征示于图13中。TGA和DSC数据进一步表明，V型是水合物。

VI型

VI型盐酸盐可从乙腈("ACN")获得。在一个实施方案中，VI型可以通过在RT-50℃下搅拌乙腈中的I型盐酸盐浆液一天获得。

图14显示了VI型的代表性XRPD谱图。VI型的代表性热特征见图15。TGA和DSC数据进一步表明，VI型为乙腈溶剂化物。

VII型

VII型盐酸盐可从乙醇和/或水获得。在一个实施方案中，VII型可通过蒸发饱和盐酸盐乙醇溶液或水溶液获得。

图16显示了VII型的代表性XRPD谱图。VII型的典型热特征见图17。TGA和DSC数据进一步表明，VII型为乙醇溶剂化物或水合物。乙醇溶剂化物和水合物的XRPD谱图几乎相同，表明VII型的乙醇溶剂化物和水合物具有相似的晶格。

图18显示了I-VII型的XRPD谱图的比较。表3总结了II-VII型盐酸盐的DSC和TGA数据。

表3.II-VII型盐酸盐的DSC和TGA

化合物(1)的草酸盐

化合物(1)的草酸盐表现出两种多晶型。

I型

I型草酸盐可从各种溶剂获得，包括但不限于EtOAc。在一个实施方案中，1.07g游离碱与420mg草酸在72mL EtOAc中通过搅拌过夜进行反应，过滤结晶固体并在40℃下真空干燥。I型草酸盐通过1HNMR、XRPD、PLM、DVS、TGA和DSC表征。

图19显示了I型草酸盐的代表性1HNMR谱。1HNMR谱显示在6.84ppm附近存在约0.17的化学位移，表明游离碱转化为草酸盐。

图20显示了I型草酸盐的代表性XRPD谱图。该谱图特征在于约11.7、13.0、15.4、16.3、19.0、19.6、20.4、22.1、24.5和25.2度2θ的峰，优选三个或更多个显著的峰。XRPD谱图表明I型草酸盐晶体具有良好的结晶度。表4列出了I型草酸盐的XRPD峰。

表4.I型草酸盐的代表性XRPD峰列表

代表性PLM图像见图21。

I型草酸盐的代表性热特征见图22。TGA数据表明，RT和150℃之间的重量损失为约0.56％，且残留溶剂较低。DSC数据表明，I型具有一个吸热峰，其起始温度和峰值温度分别为205℃和206℃，且吸热峰的焓为约100J/g。

代表性的DVS数据绘制在图23中，其表明I型草酸盐具有轻微的吸湿性，且在80％相对湿度下吸收约0.25重量％。固体形式在DVS测试后不改变。

I型草酸盐在水中(2小时内)的溶解度高于游离碱，其从游离碱的低于1mg/mL的溶解度提高到约19.2mg/mL的溶解度。

II型

II型草酸盐可从甲醇获得。在一个实施方案中，II型可以通过在室温下搅拌甲醇中的I型草酸盐浆液3天，和/或在50℃下搅拌该浆液1天获得。在另一个实施方案中，II型草酸盐可以通过向甲醇溶液中加入反溶剂(例如，MTBE、甲苯、EtOAc或IPA)获得。

图24显示了II型的代表性XRPD谱图。II型的代表性热特征见图25。TGA和DSC数据进一步表明II型草酸盐是甲醇溶剂化物。

化合物(1)的马来酸盐

马来酸盐

马来酸盐可以从各种溶剂获得，包括但不限于EtOAc和MeOH。在一个实施方案中，1.03g游离碱与356mg马来酸在72mL EtOAc中通过搅拌过夜进行反应，过滤结晶固体并在40℃下真空干燥。马来酸盐通过1HNMR、XRPD、PLM、DVS、TGA和DSC进行表征。

图26显示了马来酸盐的代表性1HNMR谱。1HNMR谱显示，马来酸与游离碱以1:1的摩尔比形成马来酸盐。

图27显示了马来酸盐的代表性XRPD谱图。该谱图的特征在于约8.0、10.4、12.4、14.0、15.3、16.4、19.3、20.8、21.5和23.3度2θ的峰，优选三个或更多个显著的峰。XRPD谱图表明马来酸盐晶体具有良好的结晶度。表5列出了马来酸盐的XRPD峰。

表5.马来酸盐的代表性XRPD峰的列表

代表性PLM图像见图28。

马来酸盐的代表性热特征见图29。TGA数据表明，RT和150℃之间有约0.92％的重量损失，这是由于残留溶剂的损失。DSC数据表明具有一个吸热峰，其起始温度和峰值温度分别为193℃和197℃，且吸热峰的焓为约104J/g。

代表性的DVS数据绘制在图30中，其表明马来酸盐具有轻微的吸湿性，且在80％相对湿度下吸收约0.085重量％。固体形式在DVS测试后不改变。

马来酸盐在水中(2小时内)的溶解度高于游离碱，其从低于1mg/mL的游离碱溶解度提高到约11.0mg/mL的马来酸盐溶解度。

化合物(1)的硫酸盐、甲磺酸盐和苯磺酸盐

硫酸盐

硫酸盐可从各种溶剂获得，包括但不限于EtOAc和丙酮。在一个实施方案中，1mL的游离碱EtOAc溶液(15mg/mL)加入到500μL硫酸EtOAc溶液(0.07mol/L)中，通过搅拌过夜获得结晶固体，过滤结晶固体并在40℃下真空干燥。硫酸盐通过1HNMR、XRPD、PLM、TGA和DSC进行表征。

甲磺酸盐

甲磺酸盐可从各种溶剂获得，包括但不限于EtOAc和丙酮。在一个实施方案中，2.6μL(1当量)甲磺酸加入1mL的游离碱EtOAc溶液(15mg/mL)中，结晶固体通过搅拌过夜获得，过滤结晶固体并在40℃下真空干燥。甲磺酸盐通过1HNMR、XRPD、PLM、TGA和DSC表征。

苯磺酸盐

苯磺酸盐可从各种溶剂获得，包括但不限于EtOAc和丙酮。在一个实施方案中，7.6mg(1当量)苯磺酸加入到1mL的游离碱EtOAc溶液(15mg/mL)中，通过搅拌过夜获得结晶固体，过滤结晶固体并在40℃下真空干燥。苯磺酸盐通过1HNMR、XRPD、PLM、TGA和DSC进行表征。XRPD谱图表明，硫酸盐和甲磺酸盐晶体具有良好的结晶度，而苯磺酸盐具有差的结晶度。

图31显示了化合物(1)的硫酸盐、甲磺酸盐和苯磺酸盐的代表性1HNMR谱。1HNMR谱显示，化合物(1)与硫酸、甲磺酸和苯磺酸形成盐。

图32显示了硫酸盐的代表性XRPD谱图。硫酸盐的XRPD谱图特征在于约8.4、12.6、13.7、16.0、16.7、21.0、21.8、22.2、23.4和27.5度2θ的峰，优选三个或更多个显著的峰。图33显示了甲磺酸盐的代表性XRPD谱图。甲磺酸盐的XRPD谱图特征在于约7.9、11.3、12.6、12.9、14.7、16.1、18.8、20.0、20.7和23.6度2θ的峰，优选三个或更多个显著的峰。表6和表7分别列出了硫酸盐和甲磺酸盐的XRPD峰。

表6.硫酸盐的代表性XRPD峰的列表

表7.甲磺酸盐的代表性XRPD峰的列表

硫酸盐和甲磺酸盐的代表性PLM图像见图34。

硫酸盐的代表性热特征见图35。TGA数据表明，室温与150℃之间有约0.89％的重量损失，这是由于残留溶剂的损失。DSC数据表明，硫酸盐具有一个吸热峰，其起始温度和峰值温度分别为229℃和234℃，且吸热峰的焓为约101J/g。甲磺酸盐的代表性热特征见图36。TGA数据表明，室温与150℃之间有约0.73％的重量损失，这是由于残留溶剂的损失。DSC数据表明，甲磺酸盐具有一个吸热峰，其起始温度和峰值温度分别为238℃和240℃，且吸热峰的焓为约83J/g。

硫酸盐和甲磺酸盐在水中(2小时内)的溶解度高于游离碱，其从低于1mg/mL的游离碱溶解度提高至约20mg/mL的盐溶解度。

使用方法和药物组合物

本发明的结晶盐型表现出有利于药物制造、储存和/或使用的物理特性。

本发明包括使用本发明的结晶盐型治疗和预防多种多样的疾病和病症的方法。在每种方法中，将治疗或预防有效量的结晶盐或多晶型施用于需要这种治疗或预防的患者。这类疾病和病症的例子包括但不限于慢性疼痛、焦虑、失眠、高脂血症、高胆固醇血症、高甘油三酯血症、肝脂肪变性和代谢综合征。可以使用本发明的组合物治疗或预防的这些和其他疾病和障碍的例子描述于专利申请No.US20180071269A1、WO2009002873A1、EP1911456A1、CN101327214A和CN106176740A中。本文引用的每一项专利和专利申请的全部内容在此引入作为参考。

本文公开的任何结晶盐型的治疗有效量没有特别限制，并且施用步骤可通过口服、静脉内、肌肉内或皮下方式进行，其量为约1mg至约1,000mg、约5mg至约500mg、约10mg至约200mg、约10mg至约150mg、约10mg至约120mg、约10mg、约20mg、约40mg、约80mg或约120mg。

取决于待治疗的疾病和受试者的状况，本发明的结晶盐型可通过口服、肠胃外(例如，肌肉内、腹膜内、静脉内、ICV、脑池内注射或输注、皮下注射或植入)、吸入喷雾、经鼻、阴道、直肠、舌下或局部施用途径来施用，并且可单独或共同配制成合适的单位剂量制剂，其包含适用于各种施用途径的常规无毒的药学上可接受的载体、佐剂和媒介。由于单个结晶盐型具有不同的溶解性、稳定性和其他性质，治疗方法中使用的最佳多晶型可能取决于施用途径。例如，易溶于水性溶液中的结晶盐型优选用于提供液体剂型，而表现出高热稳定性的结晶盐型在固体剂型(例如，片剂和胶囊)的生产中可能是优选的。

尽管结晶盐型的物理特性在某些情况下可影响其生物利用度，但药学或医学领域的普通技术人员可以容易地确定在各种疾病和病症的治疗中治疗或预防有效的多晶型的量。

本发明包括可用于治疗和预防方法中的药物组合物和单一单位剂型，其包含一种或多种化合物(1)的结晶盐型和任选地一种或多种赋形剂或稀释剂。具体的组合物和剂型在通过引用结合于此的各种专利和专利申请中公开。

实施例

参考以下实施例，可以进一步理解上述实施方案以及另外的实施方案。

鉴定不同多晶型的方法

室温下的浆液研究

将一定量的固体加入到特定的溶剂中，并将混合物浆液在室温下搅拌3天。对浆液进行过滤和通过XRPD进行表征，并通过DSC和TGA进一步分析获得的新谱图。

50℃下的浆液研究

在室温下将浆液研究样品加热至50℃，并搅拌1天。对浆液进行过滤和通过XRPD进行表征，并通过DSC和TGA进一步分析获得的新谱图。

蒸发结晶

在室温下，向浆液研究样品中加入一定量的溶剂。浆液样品通过0.22μm膜过滤，和然后饱和溶液在环境条件下蒸发。通过DSC和TGA进一步分析所获得的新谱图。

反溶剂结晶

一定量的结晶盐加入MeOH和/或H₂O以形成溶液，然后加入反溶剂以沉淀固体。固体通过XRPD进行表征，并通过DSC和TGA进一步分析所获得的新谱图。

制备I型盐酸盐

1.07g化合物(1)溶于25mL丙酮中，然后与333.3μL浓盐酸反应。将反应混合物搅拌过夜，且固体从溶液中沉淀出来。通过过滤收集固体，并在40℃下真空干燥5小时。固体作为结晶物质通过PLM和XRPD表征，其DSC熔融起始温度(“T_onset”)为约252℃。

制备I型草酸盐

1.07g化合物(1)溶解于72mL EtOAc中，然后与420mg草酸反应。将反应混合物搅拌过夜，且固体从溶液中沉淀。通过过滤收集固体，并在40℃下真空干燥5小时。固体作为结晶物质通过PLM和XRPD表征，其DSC熔融T_onset为约205℃。

制备马来酸盐

1.03g化合物(1)溶解于72mL EtOAc中，然后与356.2mg马来酸反应。将反应混合物搅拌过夜，且固体从溶液中沉淀出来。通过过滤收集固体，并在40℃下真空干燥5小时。固体作为结晶材料通过PLM和XRPD表征，其DSC熔融T_onset为约193℃。

制备硫酸盐

15mg化合物(1)溶解于1mL EtOAc中，然后与500μL硫酸(0.07摩尔/升)EtOAc溶液反应。将反应混合物搅拌过夜，且固体从溶液中沉淀出来。通过过滤收集固体，并在40℃下真空干燥5小时。固体作为结晶材料通过PLM和XRPD表征，其DSC熔融T_onset为约229℃。

制备甲磺酸盐

15mg化合物(1)溶解于1mL EtOAc中，然后与2.6μL甲磺酸反应。将反应混合物搅拌过夜，且固体从溶液中沉淀出来。通过过滤收集固体，并在40℃下真空干燥5小时。固体作为结晶材料通过PLM和XRPD表征，其DSC熔融T_onset为约238℃。

示例性实施方案

化合物(1)的结晶盐型

化合物(1)。

化合物(1)的结晶盐型，其中该结晶盐型为盐酸盐、草酸盐、马来酸盐、硫酸盐或甲磺酸盐。

化合物(1)的结晶盐型，其中所述结晶盐型是具有包含选自约9.7、10.1、14.3、15.0、17.5、18.9、21.9和23.7度2θ的峰的X射线粉末衍射图谱的盐酸盐。

化合物(1)的结晶盐型，其中所述结晶盐型为具有约252℃的差示扫描量热热图吸热T_onset和包含选自约9.7、10.1、14.3、15.0、17.5、18.9、21.9和23.7度2θ的峰的X射线粉末衍射图谱的盐酸盐。

化合物(1)的结晶盐型，其中所述结晶盐型为具有包含选自约11.7、13.0、15.4、16.3、19.6、22.1和24.5度2θ的峰的X射线粉末衍射图谱的草酸盐。

化合物(1)的结晶盐型，其中所述结晶盐型为具有约205℃的差示扫描量热热图吸热T_onset和包含约11.7、13.0、15.4、16.3、19.6、22.1和24.5度2θ的峰的X射线粉末衍射图谱的草酸盐。

化合物(1)的结晶盐型，其中所述结晶盐型为具有包含选自约8.0、10.4、12.4、14.0、15.3、16.4、19.3、21.5和23.3度2θ的峰的X射线粉末衍射图谱的马来酸盐。

化合物(1)的结晶盐型，其中所述结晶盐型为具有约193℃的差示扫描量热热图吸热T_onset和包含约8.0、10.4、12.4、14.0、15.3、16.4、19.3、21.5和23.3度2θ的峰的X射线粉末衍射图谱的马来酸盐。

化合物(1)的结晶盐型，其中所述结晶盐型为具有包含选自约8.4、12.6、13.7、16.7、21.0、21.8、22.2和23.4度2θ的峰的X射线粉末衍射图谱的硫酸盐。

化合物(1)的结晶盐型，其中所述结晶盐型为具有约229℃的差示扫描量热热图吸热T_onset和包含约8.4、12.6、13.7、16.7、21.0、21.8、22.2和23.4度2θ的峰的X射线粉末衍射图谱的硫酸盐。

化合物(1)的结晶盐型，其中所述结晶盐型是具有包含选自约7.9、11.3、12.6、12.9、14.7、16.1、20.0和20.7度2θ的峰的X射线粉末衍射图谱的甲磺酸盐。

化合物(1)的结晶盐型，其中所述结晶盐型为具有约238℃的差示扫描量热热图吸热T_onset和包含约7.9、11.3、12.6、12.9、14.7、16.1、20.0和20.7度2θ的峰的X射线粉末衍射图谱的甲磺酸盐。

包含本文公开的任何结晶盐型和药学上可接受的载体的药物组合物。

包含本文公开的任何结晶盐型的药物组合物，其中该药物组合物为单一单位剂型。

包含本文公开的任何结晶盐型的药物组合物，其中该结晶盐型为基本上纯的形式。

一种治疗哺乳动物的慢性疼痛、焦虑、失眠、高脂血症、高胆固醇血症、高甘油三酯血症、肝脂肪变性和代谢综合征的方法，包括对该哺乳动物施用治疗有效量的本文公开的任何药物组合物。

一种治疗哺乳动物的慢性疼痛、焦虑、失眠、高脂血症、高胆固醇血症、高甘油三酯血症、肝脂肪变性和代谢综合征的方法，包括对该哺乳动物施用包含治疗有效量的本文公开的任何结晶盐型的药物组合物。

实施例1.药代动力学和脑渗透研究

目的

确定TLZ-16游离碱(化合物(1))及其五种盐的药代动力学分布和脑渗透。

研究设计

研究组如下表所示。

注：盐型的剂量水平应通过盐因子进行校正

实验程序

A.药代动力学(PK)时间表:

血液采集的可接受时间范围

时间点	可接受的时间范围
		5-30分钟	±0.25分钟内
1-2小时	±2分钟内
		4-24小时	±10分钟内

B.血液样品采集和处理

C.生活期间的评估：

程序	频率
		笼边观察：	每天两次
详细临床观察：	第1天给药前一次
		体重：	每次给药前一次

注：根据需要，还进行非计划的临床观察(笼边或详细的)。

D.测试系统

物种/品系/性别：	雄性SD大鼠
		来源：	思贝福实验动物科技有限公司
给药日的年龄：	大约6-8周
		给药日的体重：	约200-300克

测试品和剂量配方

A.测试品信息

测试品识别	批号	复试日期	MW	FW	储存条件
						TLZ-16游离碱	341.41	341.41	RT
TLZ-16HCl			341.41	377.87	RT
						TLZ-16马来酸盐	341.41	457.48	RT
TLZ-16甲磺酸盐			341.41	437.51	RT
						TLZ-16草酸盐	341.41	431.44	RT
TLZ-16硫酸盐			341.41	439.48	RT

B.剂量配方

配制频率：	在给药日新制
		溶媒组成：	IV/POA：水中20％HP-β-CD
	POB/POC/POD/POE/POF：水
		储存条件：	给药制剂：室温
制备程序：	TBD

PK样品分析

使用LC-MS/MS方法分析血浆样品中测试品的浓度。

WinNonlin(PhoenixTM，6.1版)或其他类似软件用于药代动力学计算。在任何可能的情况下，从血浆浓度vs时间数据计算以下药代动力学参数：

IV施用：T_1/2、C₀、AUC_last、AUC_inf、MRT_inf、Cl、Vss、回归点数。

PO施用：T_1/2、C_max、T_max、MRT_inf、AUC_inf、AUC_last、F％、回归点数。

药代动力学数据使用描述性统计如平均值、标准偏差进行描述。

另外的药物动力学或统计学分析可由负责科学家决定进行，并记录在数据总结中。

结果

(1)TLZ-16游离碱

注：BLOQ＝低于定量极限(0.2ng/mL)

注：BLOQ＝低于定量极限(0.2ng/mL)

(2)TLZ-16 HCl

注：BLOQ＝低于定量极限(0.2ng/mL)

(3)TLZ-16马来酸盐

注：BLOQ＝低于定量极限(0.2ng/mL)

(4)TLZ-16甲磺酸盐

注：BLOQ＝低于定量极限(0.2ng/mL)

(5)TLZ-16草酸盐

注：BLOQ＝低于定量极限(0.2ng/mL)

(6)TLZ-16硫酸盐

注：BLOQ＝低于定量极限(0.2ng/mL)

实验结果进一步总结如下:

1.TLZ-16游离碱与各种盐的溶解度比较

I型盐酸盐在水中(2小时内)的溶解度高于游离碱的溶解度，其从游离碱的低于1mg/mL的溶解度提高至I型盐酸盐的约19.1mg/mL的溶解度。

I型草酸盐在水中(2小时内)的溶解度高于游离碱的溶解度，其从游离碱的低于1mg/mL的溶解度从提高到I型草酸盐的约19.2mg/mL的溶解度。

马来酸盐在水中(2小时内)的溶解度高于游离碱的溶解度，其从游离碱的低于1mg/mL的溶解度提高到马来酸盐的约11.0mg/mL的溶解度。

硫酸盐和甲磺酸盐在水中(2小时内)的溶解度高于游离碱的溶解度，其从游离碱的低于1mg/mL的溶解度提高至约20mg/mL的盐的溶解度。

2.大鼠血浆样品中TLZ-16游离碱和盐的浓度

表8.单个血浆样品中TLZ-16游离碱及其盐的浓度(动物数n＝3)

数据以平均值±SD表示。IV:静脉内施用；P.O.:口服施用。

NA:不可用

3.TLZ-16游离碱的PK参数

表9总结了大鼠血浆中TLZ-16游离碱的PK参数(T_1/2、AUC_0-t、AUC_inf、AUC_％Extrap、平均保留时间(MRT)、清除率(CL)、C_max、F(生物利用度)等)。

TLZ-16游离碱及其各种盐的PK参数的比较

大鼠血浆中TLZ-16游离碱和盐的PK参数(T_1/2、AUC_0-t、AUC_inf、AUC_％Extrap、平均保留时间(MRT)、清除率(CL)、C_max、F(生物利用度))显示于表10中。

表10.大鼠血浆中TLZ-16游离碱和盐的PK参数(n＝3，平均值±SD)

如上所示，TLZ-16游离碱的生物利用度(F值)为19.3±1.4，其明显低于盐的F值。

与TLZ-16游离碱相比，各种盐的溶解度均有很大提高。此外，上述药物动力学数据表明，本发明的盐具有更好的生物利用度和生物分布。

实施例2.TLZ-16-CL(TLZ-16HCl盐)在大鼠完全弗氏佐剂(CFA)炎性疼痛模型中的作用

研究目的：评价TLZ-16-CL在大鼠完全弗氏佐剂(CFA)炎性疼痛模型中的作用。

本研究是非GLP研究。本研究中与动物操作、护理和处理相关的所有程序均按照Pharmaron的实验动物管理与使用委员会(IACUC)批准的指南遵循国际实验动物评估和认可委员会(AALAC)的指导进行。

研究设计

动物

物种和品系：SD大鼠，来自北京维通利华实验动物技术有限公司

年龄：6-8周

体重：203-234克

性别：雄性

饲养：动物和饲养的一般程序符合Commission on Life Sciences、NationalResearch Council、Pharmaron，Inc.的标准操作程序(SOPs)的标准。动物保持在恒温恒湿的层流室内，每笼3只动物。动物被饲养在聚碳酸酯笼中，和在环境监测的、通风良好的保持温度为(22±3℃)和相对湿度为40％-80％的室中。日光灯照明为每天约12小时。垫料为软木，每周更换一次。

动物标识：每只动物分配一个标识号；采用了以下识别方法。每张笼卡标记如研究编号、组、性别、剂量、动物编号、起始日期、研究负责人和电话号码的信息。

饮食：动物在整个研究期间随意获得辐照消毒的干颗粒食物(北京科澳协力饲料有限公司，中国北京)，除实验方案规定的时间段除外。

水：在检疫和研究期间，所有动物均可随意获得瓶中的无菌饮用水。在使用前，对瓶和附有吸管的塞进行高压灭菌。对来自动物设施的水样品进行分析，且水分析的结果保留在设施记录中并由兽医或其指定人士进行审查以确保不存在可能干扰或影响研究结果的已知污染物。

分组和处理

基于第3天的体重和Von Frey基线，使用计算机生成的随机化程序将动物随机分配至各个组。研究组和每组的处理如下表所示。

表.分组和处理

#注：随机选择10只动物以在注射CFA前测试Von Frey基线

诱导试剂：CFA，购自Chondrex Inc.

溶媒：生理盐水，由山东华鲁制药有限公司提供。

测试化合物：TLZ-16-CL(TLZ-16HCl盐)，由北京泰舟利泽医药科技有限公司提供

对照：萘普生钠，由中国食品药品检定研究院提供

诱导程序：

诱导试剂：CFA

途径：左足跖下注射

给药量：50μL/大鼠(结核分枝杆菌，4mg/mL)

频率：第0天单剂量

给药程序和制剂：

途径：P.O.

体积：5mL/kg

频率：单剂量

给药时间：CFA注射后72小时。

制剂：

测试品和溶媒的制备如下表所示。

表.制剂

实验方法和测量参数

Von Frey测试

在研究的过程中通过确定Von Frey电子丝(Bioseb，法国)的撤回阈值来测量左后爪的机械异常性疼痛。该丝用增加的力垂直施加于脚掌的足底表面。通过取2-3次重复刺激(以g计)(其诱导反射性足爪撤回)的平均值计算诱导反射性足爪撤回所需的力。

在研究的过程期间进行5次Von Frey测试，包括CFA前基线、CFA后72小时和给药后1、2和4小时。

血液采集

血液样品收集到试管中。将血液样品在4℃下以8000g离心10分钟以收集血清样品，共48个血清样品储存于-80℃下。

统计分析

采用SPSS 16.0软件在各组间进行多重比较检验后的单因素方差分析(ANOVA)，且P<0.05认为是显著的。

结果

测试化合物TLZ-16-CL以10.8mg/kg和5.4mg/kg的单剂量口服施用，在给药后1、2和4小时基于Von Frey测试显示出显著的拮抗作用，且呈剂量依赖性的方式。如预期的，20mg/kg单剂量后的阳性化合物萘普生在给药后1、2和4小时基于Von Frey测试显示出显著的拮抗作用。

表11.研究组的Von Frey测试结果(平均值±SD)(n＝10)

注：与CFA+溶媒相比，**P<0.01。第0天CFA前的Von Frey基线为：12.7±0.3。

实施例3.TLZ-16-CL在通过SNI诱导的神经病理性疼痛大鼠模型中的镇痛作用

研究目的：评价TLZ-16-CL在SNI诱导的神经病理性疼痛大鼠模型中的作用。

本研究是非GLP研究。本研究中与动物操作、护理和处理相关的所有程序均按照Pharmaron动物护理和使用委员会(IACUC)批准的指南遵循国际实验动物护理评估和认证协会(AALAC)的指导进行。

研究设计

动物

物种和品系：SD大鼠，购自北京维通利华实验动物技术有限公司

年龄：6-8周

体重：192-233克

性别：雄性

饲养：动物护理和饲养的一般程序符合Commission on Life Sciences、NationalResearch Council、Pharmaron，Inc.的标准操作程序(SOPs)的标准。动物保持在恒温恒湿的层流室内，每笼3只动物。动物被饲养在聚碳酸酯笼中，和在环境监测的、通风良好的保持温度为22±3℃和相对湿度为40％-80％的室中。在整个研究过程中，所有动物保持于具有规律的12小时光照(8:00AM到8:00PM)和12小时黑暗(8:00PM到8:00AM)周期的环境中。垫料为软木，每周更换一次。

动物标识：每只动物分配标识号；采用了以下标识方法。每张笼卡标记如研究编号、组、性别、剂量、动物编号、起始日期、研究负责人和电话号码的信息。

分组和处理

基于第10天的动物体重以及Von Frey和承重的基线，使用计算机生成的随机化程序将动物随机分配至相应的组。研究组和每组的处理如下表所示。

表.分组和处理

#注：随机选择10只动物用于测试和记录SNI手术前的Von Frey和承重的基线。

测试化合物：TLZ-16-CL，由北京泰舟利泽医药科技有限公司提供

对照化合物：普加巴林，由九鼎化工科技有限公司提供；和

盐酸吗啡：由北京泰舟利泽医药科技有限公司提供

给药程序和制剂

途径：P.O.(G1.2.4.5.6),IP(G3)

体积：5mL/kg

频率：SNI手术后第10天单剂量

给药时间：第10天。

制剂

测试化合物在给药前新制备。下表列出了溶媒和化合物的制备。

表.制剂

实验方法和测量参数

体重

所有动物的体重在研究过程期间每周及手术和给药前记录。

选择性神经损伤(SNI)

在麻醉下切开动物股外侧表面上的皮肤，并直接通过股二头肌进行切片，从而暴露坐骨神经及其三个终端分支：腓肠神经、腓总神经和胫神经。

SNI手术包括胫神经和腓总神经的轴突切开术和结扎术，而保留腓肠神经完整。用6.0丝将腓总神经和胫神经紧密结扎，并在结扎的远端侧进行切片，从而去除2-4mm的远端神经残端。尽力避免与完整的腓肠神经的任何接触或拉伸。肌肉和皮肤封闭为两层。所有动物在第0天接受左侧腿上的手术。

Von Frey测试

在研究的过程中，通过确定Von Frey电子丝(Bioseb,France)的撤回阈值来测量左后爪的机械异常性疼痛。该丝用增加的力垂直施加于脚掌的足底表面。诱导反射性足爪撤回所需的力通过取两次诱导反射性足爪撤回的重复刺激(以g计)的平均值计算。

第1组至第6组动物的Von Frey进行五次测量，包括手术前基线、给药前基线及第10天给药后1、2和4小时。

承重测试差异

用通道式鼠足支撑力测量仪(YLS-11A，济南益延科技发展有限公司)测量SNI诱导爪和对侧爪两者上体重均等分布的大鼠。对动物测试以通过插入地板的力板记录后爪施加的重量负荷。在10秒钟内确定SNI诱导爪和对侧爪之间的平均承重(以g计)。

第1组至第6组的承重差异测量5次，包括手术前基线、给药前基线和第10天给药后1、2和4小时。

血液采集

血液样品在最后一次测量后4小时从第1组至第6组动物收集。血液样品被收集到试管中。将血液放置30分钟，然后将血液样品在4℃下以8000g离心10分钟以收集血清样品，总共60个血清样品在-80℃下储存。

数据分析

进行所有统计分析，且显著性水平设定为P<0.05。按照研究设计对所有测量参数计算组平均值、标准误差。用软件SPSS 16.0进行对组间单因素ANOVA比较。

结果

在本研究中，以10.8mg/kg和5.4mg/kg的单剂量口服施用的测试化合物TLZ-16-CL在给药后1、2和4小时基于Von Frey和承重测试显示出显著的拮抗作用；以2.7mg/kg的单剂量口服施用的测试化合物TLZ-16-CL在给药后2小时基于Von Frey和承重测试显示出显著的拮抗作用，并且在给药后4小时仅基于Von Frey测试显示出显著的拮抗作用。

表12.研究组的Von Frey测试结果(平均值±SD)

注：与第1组(SNI+溶媒1)相比，**P<0.01。第1组至第6组动物的Von Frey测量五次，包括手术前基线、给药前基线及第10天给药后1、2和4小时。在第0天SNI手术前的VonFrey基线为：13.2±0.4。

表13.研究组的承重(平均值±SD)

注：与第1组(SNI+溶媒1)相比，*P<0.05，**P<0.01。

第0天SNI手术前的承重基线为：6.0±1.4。

实施例4.TLZ-16-CL在大鼠慢性压迫性神经损伤(CCI)模型中的镇痛作用

研究目的：评价TLZ-16-CL对大鼠CCI模型的镇痛作用。

研究设计

动物

物种和品系：SD大鼠，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供

年龄：6-8周

体重：257-349克

性别：雄性

饲养：动物和饲养的一般程序符合Commission on Life Sciences、NationalResearch Council、Pharmaron，Inc.的标准操作程序(SOPs)的标准。动物保持在恒温恒湿的层流室内，每笼3只动物。动物被饲养在聚碳酸酯笼中，和在环境监测的、通风良好的保持温度为(22±3℃)和相对湿度为40％-80％的室中。日光灯照明时间为每天约12小时。垫料为软木，每周更换一次。

动物ID：每只动物分配标识号；采用了以下标识方法。每张笼卡标记如研究编号、性别、动物编号、起始日期、研究负责人和电话号码的信息。个体动物通过耳朵编码进行识别。

饮食：动物在整个研究期间自由获取辐照消毒的干颗粒食物(北京科澳协力饲料有限公司，中国北京)，除实验方案规定的时间段除外。

分组和处理

基于第13天的体重、Von Frey和体重的基线，使用计算机生成的随机化程序将动物随机分配至相应的组(见下表)。

表.分组和处理

*注：随机选择10只动物以测试并记录Von Frey的基线和CCI手术前的承重。

溶媒：0.9％生理盐水，由山东华鲁制药有限公司提供。

甲基纤维素，由Sigma-Aldrich提供

对照化合物1：普加巴林，由九鼎化学(上海)有限公司提供。

对照化合物2：盐酸吗啡，由北京泰舟利泽医药科技有限公司提供

给药程序和制剂

途径：PO

体积：5mL/kg

频率：QD*7

给药时间：CCI手术后第14天至第20天。

制剂

所有测试化合物在给药前新制备。下表列出了溶媒和化合物的制备。

表.溶媒和化合物的制备

实验方法和测量参数

体重

在研究过程期间，所有动物的体重在给药前记录。

慢性压迫性神经损伤(CCI)

大鼠用异氟醚麻醉。左侧的坐骨神经通过在大腿中部水平的钝性剥离暴露，并对于神经的约10mm节段剥离附着组织。将10mm的铬制羊肠线连接到神经上，并在三分支的神经近侧部分周围施加收缩套，套之间的距离约为1mm。用4.0缝线缝合切开肌肉的伤口，然后在皮肤上使用创口夹。

Von Frey测试

在研究过程期间，通过确定Von Frey电子丝(Bioseb，法国)的撤回阈值来测量左后爪的机械异常性疼痛。该丝用增加的力垂直施加于脚掌的足底表面。通过取2-3次重复的诱导反射性足爪撤回的刺激(以g计)的平均计算诱导反射性足爪撤回所需的力。

第1-6组的Von Frey测试在研究过程期间进行九次，包括CCI手术前基线、第13天给药前基线、第14天给药后1、2和4小时、第20天给药前基线和给药后1、2和4小时。

承重试验的差异

在CCI诱导爪和对侧爪上的体重等同分布的大鼠采用通道式鼠足支撑力测量仪(YLS-11A，济南益延科技发展有限公司)测量。对动物进行测试以通过插入地板的力板记录后爪施加的重量负荷。在10秒内确定剂量影响(dose-infection)爪和对侧爪之间的平均承重(以g计)。

第1-6组的承重差异在研究过程期间进行9次，包括CCI手术前基线、第13天给药前基线、第14天给药后1、2和4小时、第20天给药后1、2和4小时。

数据分析

结果

根据第14天和第20天的Von Frey和承重测量，5.4mg/kg和10.8mg/kg的TLZ-16-CL在给药后1、2和4小时显示出止痛效果，且以2.7mg/kg在给药后2和4小时也显示出止痛效果。

表14.研究组的Von Frey测试结果(平均值±SD)

注：与溶媒组(G1)相比，*P<0.05，**P<0.01。第1-6组的Von Frey测试在研究过程期间进行9次，包括CCI手术前基线、第13天给药前基线、第14天给药后1、2和4小时、第20天给药前基线和给药后1、2和4小时。在第0天CCI手术前的Von Frey基线为：13.1±0.3。

表15.各组的Von Frey(平均值±SD)

注：与溶媒组(G1)相比，*P<0.05，**P<0.01。

表16.研究组的承重(平均值±SD)

注：与溶媒组(G1)相比，**P<0.01。

第0天CCI手术前的承重基线为：5.3±1.3。

表17.研究组的承重(平均值±SD)

注：与溶媒组(G1)相比，**P<0.01。

测试化合物TLZ-16-CL在大鼠慢性压迫性神经损伤(CCI)模型中显示出剂量依赖性的镇痛作用。根据第14天和第20天的Von Frey和承重测量，5.4mg/kg和10.8mg/kg的TLZ-16-CL在给药后1、2和4小时显示出止痛效果，且以2.7mg/kg在给药后2和4小时也显示出止痛效果。

从上文可以看出，测试化合物TLZ-16-CL(TLZ-16HCl盐)在炎性疼痛模型和神经性疼痛模型中均表现出显著的镇痛效果。

等同

本领域技术人员将认识到或能够仅通过常规实验确定与本文所述具体实施方式和方法的许多等同物。该等同物旨在包括在以下权利要求的范围内。

应当理解，在此描述的详细实施例和实施方案仅作为示例给出，并不被视为对本公开的限制。本领域技术人员将根据其提出各种修改或变化，并且这些修改或变化包括在本公开的精神和范围内，并且被视为包括在所附权利要求的范围内。例如，可以改变成分的相对量以优化所需效果，可以添加额外的成分，和/或可以用类似的成分替代所述的一种或多种成分。从所附权利要求中，与本公开的系统、方法和过程相关联的其他有利特征和功能将变得明显。此外，本领域技术人员将认识到或能够仅通过常规实验确定与本文所述公开的具体实施方案的许多等同物。该等同物旨在包含在以下权利要求中。

Claims

1.一种化合物(1)的结晶盐型：

化合物(1)。

2.根据权利要求1所述的结晶盐型，其中所述结晶盐型为盐酸盐、草酸盐、马来酸盐、硫酸盐或甲磺酸盐。

3.根据权利要求1所述的结晶盐型，其中所述结晶盐型是具有包括约9.7、10.1、14.3、15.0、17.5、18.9、21.9和23.7度2θ的峰的X射线粉末衍射图谱的盐酸盐。

4.根据权利要求1所述的结晶盐型，其中所述结晶盐型是具有约252℃的差示扫描量热法热图吸热T_onset和包括约9.7、10.1、14.3、15.0、17.5、18.9、21.9和23.7度2θ的峰的X射线粉末衍射图谱的盐酸盐。

5.根据权利要求1所述的结晶盐型，其中所述结晶盐型为具有包括约11.7、13.0、15.4、16.3、19.6、22.1和24.5度2θ的峰的X射线粉末衍射图谱的草酸盐。

6.根据权利要求1所述的结晶盐型，其中所述结晶盐型为具有约205℃的差示扫描量热法热图吸热T_onset和包括约11.7、13.0、15.4、16.3、19.6、22.1和24.5度2θ的峰的X射线粉末衍射图谱的草酸盐。

7.根据权利要求1所述的结晶盐型，其中所述结晶盐型是具有包括约8.0、10.4、12.4、14.0、15.3、16.4、19.3、21.5和23.3度2θ的峰的X射线粉末衍射图谱的马来酸盐。

8.根据权利要求1所述的结晶盐型，其中所述结晶盐型为具有约193℃的差示扫描量热法热图吸热T_onset和包括约8.0、10.4、12.4、14.0、15.3、16.4、19.3、21.5和23.3度2θ的峰的X射线粉末衍射图谱的马来酸盐。

9.根据权利要求1所述的结晶盐型，其中所述结晶盐型为具有包括约8.4、12.6、13.7、16.7、21.0、21.8、22.2和23.4度2θ的峰的X射线粉末衍射图谱的硫酸盐。

10.根据权利要求1所述的结晶盐型，其中所述结晶盐型为具有约229℃的差示扫描量热法热图吸热T_onset和包括约8.4、12.6、13.7、16.7、21.0、21.8、22.2和23.4度2θ的峰的X射线粉末衍射图谱的硫酸盐。

11.根据权利要求1所述的结晶盐型，其中所述结晶盐型是具有包括约7.9、11.3、12.6、12.9、14.7、16.1、20.0和20.7度2θ的峰的X射线粉末衍射图谱的甲磺酸盐。

12.根据权利要求1所述的结晶盐型，其中所述结晶盐型为具有约238℃的差示扫描量热法热图吸热T_onset和包括约7.9、11.3、12.6、12.9、14.7、16.1、20.0和20.7度2θ的峰的X射线粉末衍射图谱的甲磺酸盐。

13.一种药物组合物，其包含权利要求1至12中任一项的结晶盐型和药学上可接受的载体。

14.根据权利要求13所述的药物组合物，其为单一单位剂型。

15.根据权利要求13所述的药物组合物，其中所述结晶盐型为基本上纯的形式。

16.一种治疗哺乳动物的慢性疼痛、焦虑、失眠、高脂血症、高胆固醇血症、高甘油三酯血症、肝脂肪变性和代谢综合征的方法，包括对该哺乳动物施用治疗有效量的根据权利要求13至15中任一项的药物组合物。

17.一种治疗哺乳动物的慢性疼痛、焦虑、失眠、高脂血症、高胆固醇血症、高甘油三酯血症、肝脂肪变性和代谢综合征的方法，包括对该哺乳动物施用包含治疗有效量的根据权利要求1至12的结晶盐型的药物组合物。

18.根据权利要求17所述的方法，其中所述结晶盐型的治疗有效量为约5mg至约500mg。