CN111781281A - 一种糯米类食品中防腐剂和甜味剂的检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种糯米类食品中防腐剂和甜味剂的检测方法，特点是包括以下步骤：1)制备苯甲酸、山梨酸、糖精钠和安赛蜜标准溶液，绘制标准曲线；2)样品经中温淀粉酶酶解，得到酶解液；3)沉淀剂去除蛋白后定容，滤膜过滤；4)采用高效液相色谱仪‑紫外或二极管阵列紫外检测器进行检测；5)计算得到样品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠和安赛蜜的含量；优点是通过采用特定酶活活性的中温淀粉酶，并在特定的温度下酶解糯米类食品中的支链淀粉，使样品在水中充分溶解、分散，可以准确检测糯米类食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠、安赛蜜的含量，使前处理过程变的快捷、方便、简单，平均回收率达到77.8%‑98.7%，RSD小于5%。

Description

一种糯米类食品中防腐剂和甜味剂的检测方法
技术领域
本发明涉及一种食品检测技术领域，尤其是涉及一种糯米类食品中防腐剂和甜味剂的检测方法。
背景技术
近年来，随着人们生活水平的提高，食品安全问题越来越受到重视。为了防止食品的腐败变质和赋予食品甜味，常常需要在食品中添加防腐剂和甜味剂，这两类食品添加剂，已在多个国家和地区被广泛使用，且实验证明，正常剂量的防腐剂和甜味剂不会对人体的健康造成影响，但依然存在不少企业在生产经营中，盲目追求利益，违反食品添加剂的使用标准，超出规定使用范围，因此，食品检测是保证食品安全中至关重要的一个环节。
目前为止，我国已经批准了多种食品防腐剂和甜味剂，详细规定了使用范围和用量，其中最常用的防腐剂有苯甲酸钠、山梨酸钾等，最常用的甜味剂有糖精钠、安赛蜜等；已经报道的食品安全国家标准GB 5009.28-2016中规定的食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的方法，是在样品中加入蒸馏水，于水浴中加热、超声提取，在含蛋白质的样品中加入亚铁氰化钾溶液和乙酸锌溶液将蛋白沉淀，含高脂肪样品经正己烷脱脂,并采用液相色谱分离、紫外检测器检测,外标法定量；食品安全国家标准GB/T 5009.140-2003中规定的饮料中的安赛蜜的测定方法，是经高效液相反相C18柱分离后，以保留时间定性，峰高或峰面积定量。
但上述的技术至少还存在如下的技术问题：
前述方法对样品的前处理操作，适用于大部分的食品基质，但是对于以糯米为主要原料制成的食品，如“青团”、“清明粿”、“艾饺”等这类特殊食品基质，往往检测效果不佳，然而这类食品又广受我国老百姓的喜爱；这类以糯米为主要原料制成的食品一般存在大量的支链淀粉，呈胶状，在检测其防腐剂和甜味剂的前处理操作中，加入蒸馏水后，采用直接水浴加热、超声、震荡等前处理方式都无法将该类食品溶解、分散，样品在糯米淀粉的作用下，依然成团状，除了样品表面接触水的部分有溶出外，内部无法与水接触，给检测其防腐剂和甜味剂造成困难，无法准确检测出该类食品中的真实含量，导致检测结果偏低。
发明内容
本发明通过提供一种糯米类食品中防腐剂和甜味剂的检测方法，解决了现有技术由于糯米支链淀粉的作用而使检测该类食品中防腐剂和甜味剂的结果偏低的技术问题，实现了准确检测的目的。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：
一种糯米类食品中防腐剂和甜味剂的检测方法，包括以下步骤：
1)制备苯甲酸、山梨酸、糖精钠和安赛蜜标准溶液，分别注入高效液相色谱仪-紫外或二极管阵列紫外检测器进行分析，得到各个标准溶液的色谱图，再分别以标准溶液的浓度和测得相应浓度的色谱峰面积的值绘制关系曲线图，得到标准曲线的拟合方程；
2)称取糯米类食品的样品于烧杯中，加入蒸馏水，在温度为55℃-65℃的水浴条件下震荡，加入酶活活性为2000-7000U/g的中温淀粉酶酶解，中温淀粉酶与样品的质量比为 50mg~150mg:5g，酶解时间不少于3h，得到酶解液；
3)在步骤2)的酶解液中加入亚铁氰化钾溶液和乙酸锌溶液，其中，亚铁氰化钾溶液的浓度为92g/L，亚铁氰化钾溶液与样品的体积质量比为2~3mL:5g，乙酸锌溶液的浓度为183g/L，乙酸锌溶液与样品的体积质量比为2~3mL:5g，混匀，定容，离心，离心转速为10000-15000r/min，离心时间为5-10min，得到上清液；将上清液经过滤膜过滤，得到滤液；
4)将步骤3)的滤液注入高效液相色谱仪-紫外或二极管阵列紫外检测器中进行检测，分别测得样品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠和安赛蜜的色谱峰面积，得到的色谱峰面积的值通过步骤1)中对应的标准曲线的拟合方程计算得到各个待测组分的浓度c；
5)根据以下换算公式分别得到样品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠和安赛蜜的含量：
Figure 100002_DEST_PATH_IMAGE001
式中：
X—待测组分在样品中的含量，单位为克每千克(g/kg)；
c—通过标准曲线的拟合方程计算得到的各个待测组分的浓度，单位为毫克每升(mg/L)；
V—样品溶液的定容体积，单位为毫升(mL)；
m—样品称样量，单位为克(g)；
1000—单位转换系数。
所述的中温淀粉酶为适用于55℃-65℃条件下的α-淀粉酶。
所述步骤1)中的苯甲酸、山梨酸、糖精钠和安赛蜜标准溶液的具体配制方法如下：
分别准确移取25、50、100、250、500μL浓度为1000mg/L的苯甲酸储备液于5个10mL容量瓶中，用水定容至刻度，同样地，分别配置山梨酸、糖精钠、安赛蜜的不同浓度的标准溶液，得到四种待测组分的浓度梯度均为2.5、5、10、25、50mg/L的标准系列工作液，将不同浓度的标准溶液分别注入高效液相色谱仪-紫外或二极管阵列紫外检测器进行分析，测得相应浓度的色谱峰面积的值，其中色谱条件为：
a)色谱柱：Waters SunFire C18，5μm，4.6mm×250mm；
b)流动相：A相：甲醇，B相：20mmol/L的乙酸铵水溶液，其中，A相和B相的体积比为5:95；
c)进样量：10μL；
d)流速： 1.0mL/min；
e)柱温： 35-40℃；
f)检测器的波长：230nm；
以标准溶液的浓度为横坐标，相应的色谱峰面积的值为纵坐标绘制标准曲线，分别绘制苯甲酸、山梨酸、糖精钠和安赛蜜标准溶液的浓度与色谱峰面积的值的关系曲线图, 得到标准曲线的拟合方程。
所述步骤2)的具体步骤为：
称取5g糯米类食品的样品于烧杯中，加入10mL蒸馏水中，在温度为60℃的水浴条件下震荡，震荡速度为150r/min，加入酶活活性为2000U/g中温淀粉酶酶解，所述的中温淀粉酶与所述样品的质量比为100mg:5g，酶解时间为4h，得到酶解液。
所述步骤3)的具体步骤为：
以5g糯米类食品的样品为例，在步骤2)的酶解液中加入3mL浓度为92g/L亚铁氰化钾溶液和183g/L乙酸锌溶液，混匀，定容至50mL，离心，离心转速为15000r/min，离心时间为10min，得到上清液；将所述上清液经过0.22μm的水相微孔滤膜过滤，得到滤液。
所述步骤4) 的高效液相色谱仪-紫外或二极管阵列紫外检测器的色谱条件为：
a)色谱柱：Waters SunFire C18，5μm，4.6mm×250mm；
b)流动相：A相：甲醇，B相：20mmol/L的乙酸铵水溶液，其中，A相和B相的体积比为5:95
c)进样量：10-20μL；
d)流速：0.8-1.0mL/min；
e)柱温： 35-40℃；
f)检测器的波长：230nm。
与现有技术相比，本发明的优点在于：
本发明通过采用特定酶活活性的中温淀粉酶，并在特定的温度下酶解糯米类食品中的支链淀粉，使样品在水中充分溶解、分散，同时可以使包裹在粘稠成团样品中的化合物充分释放、溶解，有效地解决了该类样品按国标方法难以处理的技术问题，可以准确检测糯米类食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠、安赛蜜的含量，使前处理过程变的快捷、方便、简单。通过回收率实验对本发明提出的检测方法进行验证，结果表明采用酶解法的平均回收率可达到77.0%-98.6%，RSD为0.47%-1.29%，而采用国标方法处理糯米类食品的平均回收率为30.6%-40%，RSD为1.20%-4.30%。
附图说明
图1a为本发明中苯甲酸标准溶液的关系曲线图；
图1b为本发明中山梨酸标准溶液的关系曲线图；
图1c为本发明中糖精钠标准溶液的关系曲线图；
图1d为本发明中安赛蜜标准溶液的关系曲线图；
图2为本发明中浓度10mg/L条件下的各个待测组分的标准溶液检测波长为230nm时的色谱图；
图3为本发明中实施例一中加中温淀粉酶处理青团样品检测波长为230nm时的色谱图；
图4为本发明中对比例一中按照国标方法处理青团样品检测波长为230nm时的色谱图；
图5为本发明中实施例四中加中温淀粉酶处理“清明粿”样品A检测波长为230nm时的色谱图；
图6为本发明中实施例五中加中温淀粉酶处理“清明粿”样品B检测波长为230nm时的色谱图；
图7为本发明中实施例六中按照国标方法处理“清明粿”样品C检测波长为230nm时的色谱图。
具体实施方式
以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。
试剂：甲醇，色谱纯，默克；中温淀粉酶，生化试剂，贮存条件2-8℃，国药集团化学试剂有限公司；水，Milli-Q系统净化后的去离子水；安赛蜜（C4H4KNO4S）标准储备液，苯甲酸（C6H5COOH）标准储备液，山梨酸（C6H8O2）标准储备液，糖精钠（C7H5O3NS）标准储备液，浓度均为1000mg/L，中国计量科学研究院；乙酸铵，试剂纯，国药集团化学试剂有限公司；
材料：色谱柱，Waters SunFire C18， 5μm，4.6mm×250mm；安捷伦高效液相色谱-紫外或二极管阵列检测器；高速冷冻离心机，Thermo；震荡水浴，Julabo，SW23；0.22μm的水相微孔滤膜。
标准溶液的配制：
分别准确移取25、50、100、250、500μL浓度为1000mg/L的苯甲酸储备液于5个10mL容量瓶中，用水定容至刻度，同样地，分别配置山梨酸、糖精钠、安赛蜜的不同浓度的标准溶液，得到四种化合物的浓度梯度均为2.5、5、10、25、50mg/L的标准系列工作液，将不同浓度的标准溶液分别注入高效液相色谱仪-紫外或二极管阵列紫外检测器进行分析，测得相应浓度的色谱峰面积的值，其中色谱条件为：
a)色谱柱：Waters SunFire C18，5μm，4.6mm×250mm；
b)流动相：A相：甲醇，B相：20mmol/L的乙酸铵水溶液，其中，A相和B相的体积比为5:95；
c)进样量：10μL；
d)流速： 1.0mL/min；
e)柱温： 35-40℃；
f)检测器的波长：230nm；
以标准溶液的浓度为横坐标X，相应的色谱峰面积的值Y为纵坐标绘制标准曲线，分别得到苯甲酸、山梨酸、糖精钠和安赛蜜标准溶液的浓度与色谱峰面积的值的关系曲线图，如图1(a-d)，并得到标准曲线的拟合方程和相关系数见表1，图2为浓度10 mg/L条件下的各个待测组分的标准溶液检测波长为230nm时的色谱图；
表1 4种待测组分的标准曲线的拟合方程和相关系数
待测组分 标准曲线的拟合方程 相关系数（R<sup>2</sup>）
苯甲酸 Y=49.066698X+4.3560914 0.99999
山梨酸 Y=80.5010735X+5.0372557 0.99999
糖精钠 Y=30.8828288X+1.8238253 0.99999
安赛蜜 Y=43.7550235X+2.6278028 1.00000
实施例一：
一种糯米类食品中防腐剂和甜味剂的检测方法，包括以下步骤：
称取5g青团的样品于烧杯中，加入10mL蒸馏水，在温度为60℃的水浴条件下震荡，震荡速度为150r/min，加入100mg酶活活性为2000U/g的中温淀粉酶酶解，酶解时间为3h，得到酶解液；
在酶解液中加入3mL浓度为92g/L亚铁氰化钾溶液和3mL浓度为183g/L乙酸锌溶液，混匀，定容至50mL，离心，离心转速为15000r/min，离心时间为5min，得到上清液；将上清液经过0.22μm的水相微孔滤膜过滤，得到滤液；
将滤液注入高效液相色谱仪-紫外或二极管阵列紫外检测器中进行检测，分别测得样品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠和安赛蜜的色谱峰面积，高效液相色谱仪-紫外或二极管阵列紫外检测器的色谱条件为：
a)色谱柱：Waters SunFire C18，5μm，4.6 mm×250mm；
b)流动相：A相：甲醇，B相：20mmol/L的乙酸铵水溶液，其中，A相和B相的体积比为5：95；
c)进样量：10μL；
d)流速： 1.0mL/min；
e)柱温： 35-40℃；
f)检测器的波长：230nm；
得到的各个待测组分的色谱峰面积的值通过对应的标准曲线的拟合方程计算得到各个待测组分的浓度c；
根据以下换算公式分别得到样品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠和安赛蜜的含量：
Figure 815075DEST_PATH_IMAGE001
式中：
X—待测组分在样品中的含量，单位为克每千克(g/kg)；
c—通过标准曲线的拟合方程计算得到各个待测组分的浓度，单位为毫克每升(mg/L)；
V—样品溶液的定容体积，单位为毫升(mL)；
m—样品称样量，单位为克(g)；
1000—单位转换系数；
得到的色谱图见图3。
对比例一：
对比例一与实施例一的不同之处在于：未加入100mg酶活活性为2000U/g的中温淀粉酶酶解，其他均与实施例一相同；得到的色谱图见图4。
对比例一和实施例一两种方法处理后的青团样品中均检测出了山梨酸，得到的待测组分的色谱峰面积的值结果如表2所示；
表2 实施例一和对比例一中山梨酸检测结果的比较
样品 色谱峰面积的值 标准曲线的拟合方程 由标准曲线的拟合方程求得检测结果（mg/L） 5 g样品中山梨酸的含量（mg/kg）
实施例一 625.2 Y=80.5010735X+5.0372557 7.7038 77.04
对比例一 160.4 Y=80.5010735X+5.0372557 1.9299 19.30
经过定性和定量结果的分析，青团样品对比例一中，按照国标GB 5008.28-2016方法在实验过程中不使用淀粉酶进行酶解，与实施例一使用酶解的方法同时进行实验，两种方法处理后的青团样品中均检测出了山梨酸，未加酶的国标方法处理的青团样品中山梨酸的峰面积的值为160.4，而加酶处理后的青团样品中山梨酸的峰面积的值为625.2。加酶处理后的青团样中山梨酸的定量结果与未加酶处理的同一青团样品的定量结果进行对比，详见表2，由山梨酸标准曲线的拟合方程求得加酶处理后青团样中山梨酸的定量结果7.7038mg/L，按照公式换算至5 g青团样品中山梨酸的含量为77.04mg/kg，由山梨酸标准曲线的拟合方程求得未加酶处理的同一青团样中山梨酸的定量结果1.9299mg/L，按照公式换算至5g青团样品中山梨酸的含量为19.30mg/kg。由于加酶后，青团样品中的山梨酸被完全释放出来，因此按照实施例一的加酶方法处理青团样品，其检测结果是国标方法检测结果的4倍。
实施例二：
一种糯米类食品中防腐剂和甜味剂的检测方法，包括以下步骤：
称取5g青团的样品于烧杯中，加入10mL蒸馏水，在温度为55℃的水浴条件下震荡，震荡速度为150r/min，加入50mg酶活活性为7000U/g的中温淀粉酶酶解，酶解时间为4h，得到酶解液；
在酶解液中加入2mL浓度为92g/L亚铁氰化钾溶液和2mL浓度为183g/L乙酸锌溶液，混匀，定容至50mL，离心，离心转速为10000r/min，离心时间为10min，得到上清液；将上清液经过0.22μm的水相微孔滤膜过滤，得到滤液；
将滤液注入高效液相色谱仪-紫外或二极管阵列紫外检测器中进行检测，分别测得样品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠和安赛蜜的色谱峰面积，高效液相色谱仪-紫外或二极管阵列紫外检测器的色谱条件为：
a)色谱柱：Waters SunFire C18，5μm，4.6mm×250mm；
b)流动相：A相：甲醇，B相：20mmol/L的乙酸铵水溶液，其中，A相和B相的体积比为5:95；
c)进样量：20μL；
d)流速： 1.0mL/min；
e)柱温： 35-40℃；
f)检测器的波长：230nm；
得到的各个待测组分的色谱峰面积的值通过对应的标准曲线的拟合方程计算得到各个待测组分的浓度c；
根据以下换算公式分别得到样品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠和安赛蜜的含量：
Figure 466636DEST_PATH_IMAGE001
式中：
X—待测组分在样品中的含量，单位为克每千克(g/kg)；
c—通过标准曲线的拟合方程计算得到各个待测组分的浓度，单位为毫克每升(mg/L)；
V—样品溶液的定容体积，单位为毫升(mL)；
m—样品称样量，单位为克(g)；
1000—单位转换系数。
实施例三：
一种糯米类食品中防腐剂和甜味剂的检测方法，包括以下步骤：
称取5g青团的样品于烧杯中，加入10mL蒸馏水，在温度为65℃的水浴条件下震荡，震荡速度为150r/min，加入80mg酶活活性为5000U/g的中温淀粉酶酶解，酶解时间为3h，得到酶解液；
在酶解液中加入3mL浓度为92g/L亚铁氰化钾溶液和3mL浓度为183g/L乙酸锌溶液，混匀，定容至50mL，离心，离心转速为15000r/min，离心时间为5min，得到上清液；将上清液经过0.22μm的水相微孔滤膜过滤，得到滤液；
将滤液注入高效液相色谱仪-紫外或二极管阵列紫外检测器中进行检测，分别测得样品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠和安赛蜜的色谱峰面积，高效液相色谱仪-紫外或二极管阵列紫外检测器的色谱条件为：
a)色谱柱：Waters SunFire C18，5μm，4.6 mm×250mm；
b)流动相：A相：甲醇，B相：20 mmol/L的乙酸铵水溶液，其中，A相和B相的体积比为5:95；
c)进样量：10μL；
d)流速： 1.0mL/min；
e)柱温： 35-40℃；
f)检测器的波长：230nm；
得到的各个待测组分的色谱峰面积的值通过对应的标准曲线的拟合方程计算得到各个待测组分的浓度c；
根据以下换算公式分别得到样品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠和安赛蜜的含量：
Figure 980794DEST_PATH_IMAGE001
式中：
X—待测组分在样品中的含量，单位为克每千克(g/kg)；
c—通过标准曲线的拟合方程计算得到各个待测组分的浓度，单位为毫克每升(mg/L)；
V—样品溶液的定容体积，单位为毫升(mL)；
m—样品称样量，单位为克(g)；
1000—单位转换系数。
本发明通过回收率实验对本发明提出的检测方法进行验证，具体验证步骤及验证结果如下：
实施例四：
一种糯米类食品中防腐剂和甜味剂的检测方法，包括以下步骤：
称取5g“清明粿”样品A于烧杯中，加入10mL蒸馏水，在温度为60℃的水浴条件下震荡，震荡速度为150r/min，加入100mg酶活活性为2000U/g的中温淀粉酶酶解，酶解时间为3h，得到酶解液；
在酶解液中加入3mL浓度为92g/L亚铁氰化钾溶液和3mL浓度为183g/L乙酸锌溶液，混匀，定容至50mL，离心，离心转速为15000r/min，离心时间为5min，得到上清液；将上清液经过0.22μm的水相微孔滤膜过滤，得到滤液；
将滤液注入高效液相色谱仪-紫外或二极管阵列紫外检测器中进行检测，分别测得样品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠和安赛蜜的色谱峰面积，高效液相色谱仪-紫外或二极管阵列紫外检测器的色谱条件为：
a)色谱柱：Waters SunFire C18，5μm，4.6mm×250mm；
b)流动相：A相：甲醇，B相：20mmol/L的乙酸铵水溶液，其中，A相和B相的体积比为5:95；
c)进样量：10μL；
d)流速： 1.0mL/min；
e)柱温： 35-40℃；
f)检测器的波长：230nm；
得到的各个待测组分的色谱峰面积的值通过对应的标准曲线的拟合方程计算得到各个待测组分的浓度c；
根据以下换算公式分别得到样品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠和安赛蜜的含量：
Figure 562954DEST_PATH_IMAGE001
式中：
X—待测组分在样品中的含量，单位为克每千克(g/kg)；
c—通过标准曲线的拟合方程计算得到各个待测组分的浓度，单位为毫克每升(mg/L)；
V—样品溶液的定容体积，单位为毫升(mL)；
m—样品称样量，单位为克(g)；
1000—单位转换系数；
得到的色谱图见图5。
实施例五：
一种糯米类食品中防腐剂和甜味剂的检测方法，包括以下步骤：
称取5g“清明粿”样品B于烧杯中，加入10mL蒸馏水，准确加入500μL浓度为1000mg/L苯甲酸、500μL浓度为1000mg/L山梨酸、500μL浓度为1000mg/L糖精钠、500μL浓度为1000mg/L安赛蜜标准储备液，即得4种化合物在样品中的浓度为：100mg/kg苯甲酸、100mg/kg山梨酸、100mg/kg糖精钠、100mg/kg安赛蜜在常温下放置24h，使加标溶液完全被样品吸收。
在温度为60℃的水浴条件下震荡，震荡速度为150r/min，加入100mg酶活活性为2000U/g的中温淀粉酶酶解，酶解时间为3h，得到酶解液；
在酶解液中加入3mL浓度为92g/L亚铁氰化钾溶液和3mL浓度为183g/L乙酸锌溶液，混匀，定容至50mL，离心，离心转速为15000r/min，离心时间为5min，得到上清液；将上清液经过0.22μm的水相微孔滤膜过滤，得到滤液；
将滤液注入高效液相色谱仪-紫外或二极管阵列紫外检测器中进行检测，分别测得样品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠和安赛蜜的色谱峰面积，高效液相色谱仪-紫外或二极管阵列紫外检测器的色谱条件为：
a)色谱柱：Waters SunFire C18，5 μm，4.6mm×250mm；
b)流动相：A相：甲醇，B相：20mmol/L的乙酸铵水溶液，其中，A相和B相的体积比为5：95；
c)进样量：10μL；
d)流速： 1.0mL/min；
e)柱温： 35-40℃；
f)检测器的波长：230nm；
得到的各个待测组分的色谱峰面积的值通过对应的标准曲线的拟合方程计算得到各个待测组分的浓度c；
根据以下换算公式分别得到样品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠和安赛蜜的含量：
Figure 111747DEST_PATH_IMAGE001
式中：
X—待测组分在样品中的含量，单位为克每千克(g/kg)；
c—通过标准曲线的拟合方程计算得到各个待测组分的浓度，单位为毫克每升(mg/L)；
V—样品溶液的定容体积，单位为毫升(mL)；
m—样品称样量，单位为克(g)；
1000—单位转换系数；
得到的色谱图见图6。
实施例六：
实施例六与实施例五的不同之处在于：未加入100 mg酶活活性为2000U/g的中温淀粉酶酶解，样品记为“清明粿”样品C，其他均与实施例五相同，得到的色谱图见图7。
分别重复实验实施例4、5、6共六次，得到的4种待测组分的色谱峰面积结果如表3所示。
表3 “清明粿”样品A、B、C中4种待测组分色谱峰面积的值
Figure 668630DEST_PATH_IMAGE002
表4 “清明粿”样品B、C中4种待测组分加标回收率实验数据
Figure DEST_PATH_IMAGE003
回收率（%）=（测得加入量/理论加入量）*100%，RSD的计算公式为：相对标准偏差（RSD）=标准偏差（SD）/计算结果的算术平均值（X）*100%。
实验结论：由酶解法得到的各待测组分的平均回收率为77.8%-98.7%，RSD为0.47%-1.29%，国标方法得到的各待测组分的平均回收率为30.4%-40.7%，RSD为1.20%-4.30%。RSD均小于5%，符合GB/T27404-2008《实验室质量控制规范》的要求，证明该检测方法科学有效。

Claims (6)

1.一种糯米类食品中防腐剂和甜味剂的检测方法，其特征在于包括以下步骤：
1)制备苯甲酸、山梨酸、糖精钠和安赛蜜标准溶液，分别注入高效液相色谱仪-紫外或二极管阵列紫外检测器进行分析，得到各个标准溶液的色谱图，再分别以标准溶液的浓度和测得相应浓度的色谱峰面积的值绘制关系曲线图，得到标准曲线的拟合方程；
2)称取糯米类食品的样品于烧杯中，加入蒸馏水，在温度为55℃-65℃的水浴条件下震荡，加入酶活活性为2000-7000U/g的中温淀粉酶酶解，中温淀粉酶与样品的质量比为50mg~150mg:5g，酶解时间不少于3h，得到酶解液；
3)在步骤2)的酶解液中加入亚铁氰化钾溶液和乙酸锌溶液，其中，亚铁氰化钾溶液的浓度为92g/L，亚铁氰化钾溶液与样品的体积质量比为2~3mL：5g，乙酸锌溶液的浓度为183g/L，乙酸锌溶液与样品的体积质量比为2~3mL:5g，混匀，定容，离心，离心转速为10000-15000r/min，离心时间为5-10min，得到上清液；将上清液经过滤膜过滤，得到滤液；
4)将步骤3)的滤液注入高效液相色谱仪-紫外或二极管阵列紫外检测器中进行检测，分别测得样品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠和安赛蜜的色谱峰面积，得到的色谱峰面积的值通过步骤1)中对应的标准曲线的拟合方程计算得到各个待测组分的浓度c；
5)根据以下换算公式分别得到样品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠和安赛蜜的含量：
Figure DEST_PATH_IMAGE001
式中：
X—待测组分在样品中的含量，单位为克每千克(g/kg)；
c—通过标准曲线的拟合方程计算得到的各个待测组分的浓度，单位为毫克每升(mg/L)；
V—样品溶液的定容体积，单位为毫升(mL)；
m—样品称样量，单位为克(g)；
1000—单位转换系数。
2.根据权利要求1所述的一种糯米类食品中防腐剂和甜味剂的检测方法，其特征在于，所述的中温淀粉酶为适用于55℃-65℃条件下的α-淀粉酶。
3.根据权利要求1所述的一种糯米类食品中防腐剂和甜味剂的检测方法，其特征在于，所述步骤1)中的苯甲酸、山梨酸、糖精钠和安赛蜜标准溶液的具体配制方法如下：
分别准确移取25、50、100、250、500μL浓度为1000mg/L的苯甲酸储备液于5个10mL容量瓶中，用水定容至刻度，同样地，分别配置山梨酸、糖精钠、安赛蜜的不同浓度的标准溶液，得到四种待测组分的浓度梯度均为2.5、5、10、25、50mg/L的标准系列工作液，将不同浓度的标准溶液分别注入高效液相色谱仪-紫外或二极管阵列紫外检测器进行分析，测得相应浓度的色谱峰面积的值，其中色谱条件为：
a)色谱柱：Waters SunFire C18，5 μm，4.6mm×250mm；
b)流动相：A相：甲醇，B相：20mmol/L的乙酸铵水溶液，其中，A相和B相的体积比为5:95；
c)进样量：10μL；
d)流速： 1.0mL/min；
e)柱温：35-40℃；
f)检测器的波长：230nm；
以标准溶液的浓度为横坐标，相应的色谱峰面积的值为纵坐标绘制标准曲线，分别绘制苯甲酸、山梨酸、糖精钠和安赛蜜标准溶液的浓度与色谱峰面积的值的关系曲线图, 得到标准曲线的拟合方程。
4.根据权利要求1所述的一种糯米类食品中防腐剂和甜味剂的检测方法，其特征在于，所述步骤2)的具体步骤为：
称取5g糯米类食品的样品于烧杯中，加入10mL蒸馏水中，在温度为60℃的水浴条件下震荡，震荡速度为150r/min，加入酶活活性为2000U/g中温淀粉酶酶解，所述的中温淀粉酶与所述样品的质量比为100 mg:5g，酶解时间为4h，得到酶解液。
5.根据权利要求1所述的一种糯米类食品中防腐剂和甜味剂的检测方法，其特征在于，所述步骤3)的具体步骤为：
以5g糯米类食品的样品为例，在步骤2)的酶解液中加入3mL浓度为92g/L亚铁氰化钾溶液和183g/L乙酸锌溶液，混匀，定容至50mL，离心，离心转速为15000r/min，离心时间为10min，得到上清液；将所述上清液经过0.22μm的水相微孔滤膜过滤，得到滤液。
6.根据权利要求1所述的一种糯米类食品中防腐剂和甜味剂的检测方法，其特征在于，所述步骤4) 的高效液相色谱仪-紫外或二极管阵列紫外检测器的色谱条件为：
a)色谱柱：Waters SunFire C18，5μm，4.6mm×250mm；
b)流动相：A相：甲醇，B相：20mmol/L的乙酸铵水溶液，其中，A相和B相的体积比为5:95
c)进样量：10-20μL；
d)流速：0.8-1.0mL/min；
e)柱温： 35-40℃；
f)检测器的波长：230nm。
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