CN111766125A - 利用荧光淬灭时间差进行的染色方法及自动染色装置、设备和介质 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种利用荧光淬灭时间差进行的染色方法，该方法包括：将组织病理切片进行脱蜡，得到待处理切片并用带有预设抗体的荧光染色试剂对待处理切片进行至少一次荧光染色，得到包括预设荧光标记的荧光染色切片。在进行下一次荧光染色之前，淬灭上一次荧光染色生成的预设荧光标记；扫描每个荧光染色切片，得到荧光图像。淬灭预设荧光标记，用苏木精伊红染色法对待处理切片进行上色染色，获取上色染色切片，扫描上色染色切片以获取上色图像。将至少一个荧光图像和上色图像进行图像叠加融合处理，得到交叉复染融合图像。因此本发明能满足染色图像对观察范围及染色特异性的要求。此外，还提出了利用荧光淬灭时间差进行的染色装置、设备和介质。
Description
技术领域
本发明涉及细胞染色技术领域，尤其是涉及利用荧光淬灭时间差进行的染色方法及自动化染色装置、设备和介质。
背景技术
组织病理诊断是疾病诊断中重要的手段方法。组织病理诊断需依据对组织病理切片进行染色观察，常见的染色方法包括：HE(hematoxylin-eosin，苏木精伊红)染色、免疫组化染色、免疫荧光染色等方法。
常规HE染色相比于免疫荧光染色方法的观察范围更广，但是对某一特定细胞或物质，识别与分辨的能力严重依赖于人的经验及视觉的极限能力。而免疫荧光染色方法，利用抗体技术，具备高敏感性、高特异性的放大待目标检测的细胞或物质的优点，但目前免疫荧光方法存在图像无法长期保存，且使用的染色抗体较多时，容易出现荧光光谱之间的交叉干扰的现象，会影响最后的结果判读。而直接结合免疫荧光染色与HE染色将会使染色区域无法保持完全一致，会导致染色观察区域的误判。因此，现有的染色方法仅可以实现观察HE染色图像或免疫荧光图像中的1-3种抗体，缺乏综合HE及多种抗体的分析结果图。
发明内容
基于此，有必要针对上述问题，提供可进行综合分析的利用荧光淬灭时间差进行的染色方法及自动化染色装置、设备和介质。
一种利用荧光淬灭时间差进行的染色的方法，包括步骤：
将组织病理切片进行脱蜡，获取待处理切片；
用带有预设抗体的荧光染色试剂对所述待处理切片进行至少一次荧光染色，获取至少一个包括预设荧光标记的荧光染色切片；其中，在进行下一次荧光染色之前，淬灭上一次荧光染色生成的所述预设荧光标记；
扫描所述至少一个荧光染色切片，获取至少一个包括荧光区域的荧光图像；
淬灭所述预设荧光标记，用苏木精伊红染色法对所述待处理切片进行上色染色，获取上色染色切片，扫描所述上色染色切片以获取上色图像；
将所述至少一个荧光图像和所述上色图像进行图像叠加融合处理，得到交叉复染融合图像。
在其中一个实施例中，所述淬灭所述预设荧光标记的步骤包括：
以光强超过阈值的光线照射所述荧光染色切片。
在一个实施例中，所述将组织病理切片进行脱蜡，包括：
将所述组织病理切片用二甲苯脱蜡3次，每次持续时间为3-10分钟；
将所述组织病理切片用无水乙醇脱蜡3次，每次持续时间为3-10分钟；
将所述组织病理切片用磷酸缓冲盐溶液脱蜡3次，每次持续时间为3-10分钟。
在其中一个实施例中，所述用带有预设抗体的荧光染色试剂对所述待处理切片进行至少一次荧光染色，获取至少一个包括预设荧光标记的荧光染色切片，包括：
将带有所述预设抗体的荧光染色试剂滴加到所述待处理切片上，将所述待处理切片放置于35-42℃的湿盒中孵育1-2小时；
用磷酸缓冲盐溶液漂洗所述待处理切片3次，每次持续时间为3-10分钟，获取所述荧光染色切片；
所述扫描所述至少一个荧光染色切片，获取至少一个包括荧光区域的荧光图像，包括：
对所述荧光染色切片进行免疫荧光扫描，生成包括所述荧光区域的所述荧光图像。
在其中一个实施例中，所述用苏木精伊红染色法对所述待处理切片进行上色染色，获取上色染色切片，扫描所述上色染色切片或获取上色图像，包括：
将所述待处理切片依次用100％无水乙醇浸泡3-10分钟，用95％乙醇浸泡3-10分钟，用85％乙醇浸泡3-10分钟；
将所述待处理切片依次用蒸馏水浸泡5分钟，用苏木素染色5分钟，用流水冲洗5分钟，用1％盐酸乙醇浸泡10-30秒，用流水冲洗1分钟，用伊红染色1-5分钟，用流水冲洗1分钟；
将所述待处理切片依次用75％乙醇浸泡3-10分钟，用85％乙醇浸泡3-10分钟，用95％乙醇浸泡3-10分钟，用100％无水乙醇浸泡3-10分钟2次；
将所述待处理切片用二甲苯浸泡2-5分钟，用中性树胶封片，进行数字病理扫描，生成所述上色图像。
在其中一个实施例中，所述将所述至少一个荧光图像和所述上色图像进行图像叠加融合处理，得到交叉复染融合图像，包括：
分别对每个所述荧光图像中的所述荧光区域进行颜色区分处理；
将进行颜色区分处理后的所述至少一个荧光图像与所述上色图像进行图像叠加融合处理，得到交叉复染融合图像。
在其中一个实施例中，所述组织病理切片包括：乳腺癌组织病理切片、肺癌组织病理切片、肠癌组织病理切片、病毒性肺炎组织病理切片及支原体肺炎组织病理切片。
一种自动染色装置，所述装置包括：
获取模块，用于将组织病理切片进行脱蜡，获取待处理切片；
第一染色模块，用于用带有预设抗体的荧光染色试剂对所述待处理切片进行至少一次荧光染色，获取至少一个包括预设荧光标记的荧光染色切片；其中，在进行下一次荧光染色之前，淬灭上一次荧光染色生成的所述预设荧光标记；
扫描模块，用于扫描所述至少一个荧光染色切片，获取至少一个包括荧光区域的荧光图像；
第二染色模块，用于淬灭所述预设荧光标记，用苏木精伊红染色法对所述待处理切片进行上色染色，获取上色染色切片，扫描所述上色染色切片以获取上色图像；
叠加融合模块，用于将所述至少一个荧光图像和所述上色图像进行图像叠加融合处理，得到交叉复染融合图像。
一种计算机可读存储介质，存储有计算机程序，所述计算机程序被处理器执行时，使得所述处理器执行如下步骤：
将组织病理切片进行脱蜡，获取待处理切片；
用带有预设抗体的荧光染色试剂对所述待处理切片进行至少一次荧光染色，获取至少一个包括预设荧光标记的荧光染色切片；其中，在进行下一次荧光染色之前，淬灭上一次荧光染色生成的所述预设荧光标记；
扫描所述至少一个荧光染色切片，获取至少一个包括荧光区域的荧光图像；
淬灭所述预设荧光标记，用苏木精伊红染色法对所述待处理切片进行上色染色，获取上色染色切片，扫描所述上色染色切片以获取上色图像；
将所述至少一个荧光图像和所述上色图像进行图像叠加融合处理，得到交叉复染融合图像。
一种自动化染色设备，包括存储器和处理器，所述存储器存储有计算机程序，所述计算机程序被所述处理器执行时，使得所述处理器执行如下步骤：
将组织病理切片进行脱蜡，获取待处理切片；
用带有预设抗体的荧光染色试剂对所述待处理切片进行至少一次荧光染色，获取至少一个包括预设荧光标记的荧光染色切片；其中，在进行下一次荧光染色之前，淬灭上一次荧光染色生成的所述预设荧光标记；
扫描所述至少一个荧光染色切片，获取至少一个包括荧光区域的荧光图像；
淬灭所述预设荧光标记，用苏木精伊红染色法对所述待处理切片进行上色染色，获取上色染色切片，扫描所述上色染色切片以获取上色图像；
将所述至少一个荧光图像和所述上色图像进行图像叠加融合处理，得到交叉复染融合图像。
本发明提供了利用荧光淬灭时间差进行的染色方法及自动化染色装置、设备和介质。用带有预设抗体的荧光染色试剂对待处理切片进行至少一次荧光染色，获取至少一个包括预设荧光标记的荧光染色切片；在进行下一次荧光染色之前，淬灭上一次荧光染色生成的预设荧光标记。扫描每个荧光染色切片，获取对应的荧光图像。由于单独使用荧光染色试剂进行染色，从而有效避免了荧光标记的荧光光谱之间出现交叉干扰，避免后续对判读产生的干扰。进一步的，淬灭预设荧光标记，用苏木精伊红染色法对待处理切片进行上色染色，获取上色染色切片，扫描上色染色切片以获取上色图像；将至少一个荧光图像和上色图像进行图像叠加融合处理，得到交叉复染融合图像。因此本发明可得到综合了苏木精伊红染色法及多种抗体的交叉复染融合图像，能同时满足染色图像对观察范围及染色特异性的要求。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
其中：
图1为一个实施例中利用荧光淬灭时间差进行的染色方法的流程示意图；
图2为一个实施例中乳腺癌切片的扫描图像；
图3为一个实施例中乳腺癌切片第一次染色的扫描图像；
图4为一个实施例中乳腺癌切片第二次染色的扫描图像；
图5为一个实施例中乳腺癌切片第三次染色的扫描图像；
图6为一个实施例中乳腺癌切片苏木精伊红染色法的扫描图像；
图7为一个实施例中乳腺癌切片的交叉复染融合图像；
图8为一个实施例中利用荧光淬灭时间差进行的染色装置的结构示意图；
图9为一个实施例中利用荧光淬灭时间差进行的染色设备的结构框图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
如图1所示，图1为一个实施例中利用荧光淬灭时间差进行的染色方法的流程示意图，本实施例提供的步骤包括：
步骤102，将组织病理切片进行脱蜡，获取待处理切片。
其中，本实施例中的组织病理切片包括乳腺癌组织病理切片、肺癌组织病理切片、肠癌组织病理切片等肿瘤性组织病理切片，及病毒性肺炎组织病理切片、支原体肺炎组织病理切片等非肿瘤性组织病理切片。
在一个实施例中，脱蜡步骤具体包括：将组织病理切片静置于二甲苯脱蜡中10分钟，重复进行共3次。将组织病理切片静置于无水乙醇中10分钟，重复进行共3次。将组织病理切片静置于磷酸缓冲盐溶液中10分钟，重复进行共3次。
在另一个实施例中，脱蜡步骤具体包括：将组织病理切片置于二甲苯脱蜡中3分钟，期间对该组织病理切片进行持续微波震荡，重复进行共3次。将组织病理切片置于无水乙醇中3分钟，期间对该组织病理切片进行持续微波震荡，重复进行共3次。将组织病理切片置于磷酸缓冲盐溶液中3分钟，期间对该组织病理切片进行持续微波震荡，重复进行共3次。
步骤104，用带有预设抗体的荧光染色试剂对待处理切片进行至少一次荧光染色，获取至少一个包括预设荧光标记的荧光染色切片；扫描至少一个荧光染色切片，获取至少一个包括荧光区域的荧光图像。
其中，预设抗体包括：CD3(cluster of differentiation 3)、CD4(cluster ofdifferentiation 4)、ER(Estrogen Receptor)、P63。
本实施例中，当进行大于或等于两次荧光染色时，需要在进行下一次荧光染色之前，淬灭上一次荧光染色生成的预设荧光标记。具体淬灭步骤为：以光强超过阈值的光线照射荧光染色切片，本实施例中的光线可以是日光、紫外光、激光。其原理为荧光分子在激发光的照射下，分子内部结构发生不可逆的变化，不能吸收更多的光子而进一步发射荧光，从而被漂白。需要进行淬灭荧光标记的原因在于，当同时出现多个荧光标记时，容易出现荧光光谱之间的交叉干扰，这将影响最后的结果判读，本实施例利用荧光淬灭时间差的方法可有效避免这一问题。
在一个实施例中，以荧光染色次数为3次，预设抗体为CD3、CD4、P63，待处理切片为乳腺癌切片为例。其中，乳腺癌切片的扫描图像如图2所示，具体的染色步骤为：
第一次荧光染色：将带有CD3的红色荧光染色试剂滴加到乳腺癌切片上，将乳腺癌切片放置于35℃的湿盒中孵育2小时；用磷酸缓冲盐溶液漂洗待处理切片3次，每次持续时间为10分钟，获取荧光染色切片。对荧光染色切片进行免疫荧光扫描，生成包括荧光区域的荧光图像，如图3所示，其中黑色区域为荧光区域(实际为红色区域)。
第二次荧光染色：以光强超过阈值的光线照射荧光染色切片，以淬灭荧光染色切片中的荧光区域(图3黑色区域)。将乳腺癌切片转移到暗室，将带有CD4的红色荧光染色试剂滴加到乳腺癌切片(淬灭后的荧光染色切片)上，将乳腺癌切片放置于42℃的湿盒中孵育1小时；用磷酸缓冲盐溶液漂洗待处理切片3次，每次持续时间为3分钟，获取荧光染色切片。对荧光染色切片进行免疫荧光扫描，生成包括荧光区域的荧光图像，如图4所示，其中黑色区域为荧光区域(实际为红色区域)。
第三次染色：以光强超过阈值的光线照射荧光染色切片，以淬灭荧光染色切片中的荧光区域(图4黑色区域)。将乳腺癌切片转移到暗室，将带有P63的红色荧光染色试剂滴加到乳腺癌切片(淬灭后的荧光染色切片)上，将乳腺癌切片放置于35-42℃的湿盒中孵育1-2小时；用磷酸缓冲盐溶液漂洗待处理切片3次，每次持续时间为3-10分钟，获取荧光染色切片。对荧光染色切片进行免疫荧光扫描，生成包括荧光区域的荧光图像，如图5所示，其中黑色区域为荧光区域(实际为红色区域)。
步骤106，淬灭预设荧光标记，用苏木精伊红染色法对待处理切片进行上色染色，获取上色染色切片，扫描上色染色切片以获取上色图像。
在一个实施例中，淬灭预设荧光标记步骤与上文中所述的一致，此处不再进行赘述。
苏木精伊红染色法的步骤具体为：
第一步：将待处理切片依次静置于100％无水乙醇10分钟，静置于95％乙醇10分钟，静置于85％乙醇10分钟。
第二步：将待处理切片依次静置于蒸馏水浸泡5分钟，用苏木素染色5分钟，用流水冲洗5分钟，静置于1％盐酸乙醇30秒，用流水冲洗1分钟，用伊红染色1分钟，用流水冲洗1分钟。
第三步：将待处理切片依次静置于75％乙醇10分钟，静置于85％乙醇浸泡10分钟，静置于95％乙醇浸泡10分钟，静置于100％无水乙醇10分钟2次。
第四步：将待处理切片静置于二甲苯浸泡5分钟，用中性树胶封片，进行数字病理扫描，生成上色图像，如图6所示。
在另一个实施例中，苏木精伊红染色法的具体步骤为：
第一步：将待处理切片依次置于100％无水乙醇震荡3分钟，置于95％乙醇震荡3分钟，置于85％乙醇震荡3分钟。
第二步：将待处理切片依次静置于蒸馏水浸泡5分钟，用苏木素染色5分钟，用流水冲洗5分钟，放置于1％盐酸乙醇震荡10秒，用流水冲洗1分钟，用伊红染色5分钟，用流水冲洗1分钟。
第三步：将待处理切片依次置于75％乙醇震荡3分钟，置于85％乙醇震荡3分钟，置于95％乙醇震荡3分钟，置于100％无水乙醇震荡3分钟2次。
第四步：将待处理切片置于二甲苯震荡2分钟，用中性树胶封片，进行数字病理扫描，生成上色图像。
步骤108，将至少一个荧光图像和上色图像进行图像叠加融合处理，得到交叉复染融合图像。
在本实施例中，首先分别对每个荧光图像中的荧光区域进行颜色区分处理，具体可通过识图设备自动识别每个荧光图像中的荧光区域，并使用不同的颜色对荧光区域进行填充，以使得不同荧光图像中的荧光区域可以通过颜色区分开来。此外，该填充的颜色还应区别与苏木精伊红染色法的着色(紫蓝色、红色)，可选择绿色、黄色等颜色。进一步的，将进行颜色区分处理后的至少一个荧光图像与上色图像进行图像叠加融合处理，得到交叉复染融合图像，如图7所示。
上述利用荧光淬灭时间差进行的染色方法，用带有预设抗体的荧光染色试剂对待处理切片进行至少一次荧光染色，获取至少一个包括预设荧光标记的荧光染色切片；在进行下一次荧光染色之前，淬灭上一次荧光染色生成的预设荧光标记。扫描每个荧光染色切片，获取对应的荧光图像。由于单独使用荧光染色试剂进行染色，从而有效避免了荧光标记的荧光光谱之间出现交叉干扰，避免后续对判读产生的干扰。进一步的，淬灭预设荧光标记，用苏木精伊红染色法对待处理切片进行上色染色，获取上色染色切片，扫描上色染色切片以获取上色图像；将至少一个荧光图像和上色图像进行图像叠加融合处理，得到交叉复染融合图像。因此本发明可得到综合了苏木精伊红染色法及多种抗体的交叉复染融合图像，能同时满足染色图像对观察范围及染色特异性的要求。
本发明提供的荧光淬灭时间差进行的染色方法，能整合HE染色和免疫荧光染色的图像，生成综合分析结果图，可同时兼顾HE染色的观察范围大及免疫荧光染色具备染色特异性的特点，可更加直接、准确的分析肿瘤免疫微环境现象，非常适合于病理切片的图像处理。
在一个实施例中，如图8所示，提出了一种利用荧光淬灭时间差进行的染色装置，该装置包括：
获取模块802，用于将组织病理切片进行脱蜡，获取待处理切片；
第一染色模块804，用于用带有预设抗体的荧光染色试剂对待处理切片进行至少一次荧光染色，获取至少一个包括预设荧光标记的荧光染色切片；其中，在进行下一次荧光染色之前，淬灭上一次荧光染色生成的预设荧光标记；
扫描模块806，用于扫描至少一个荧光染色切片，获取至少一个包括荧光区域的荧光图像；
第二染色模块808，用于淬灭预设荧光标记，用苏木精伊红染色法对待处理切片进行上色染色，获取上色染色切片，扫描上色染色切片以获取上色图像；
叠加融合模块810，用于将至少一个荧光图像和上色图像进行图像叠加融合处理，得到交叉复染融合图像。
上述利用荧光淬灭时间差进行的染色装置，用带有预设抗体的荧光染色试剂对待处理切片进行至少一次荧光染色，获取至少一个包括预设荧光标记的荧光染色切片；在进行下一次荧光染色之前，淬灭上一次荧光染色生成的预设荧光标记。扫描每个荧光染色切片，获取对应的荧光图像。由于单独使用荧光染色试剂进行染色，从而有效避免了荧光标记的荧光光谱之间出现交叉干扰，避免后续对判读产生的干扰。进一步的，淬灭预设荧光标记，用苏木精伊红染色法对待处理切片进行上色染色，获取上色染色切片，扫描上色染色切片以获取上色图像；将至少一个荧光图像和上色图像进行图像叠加融合处理，得到交叉复染融合图像。因此本发明可得到综合了苏木精伊红染色法及多种抗体的交叉复染融合图像，能同时满足染色图像对观察范围及染色特异性的要求。
在一个实施例中，第二染色模块808，还具体用于以光强超过阈值的光线照射荧光染色切片。
在一个实施例中，获取模块802，还具体用于将组织病理切片用二甲苯脱蜡3次，每次持续时间为3-10分钟；将组织病理切片用无水乙醇脱蜡3次，每次持续时间为3-10分钟；将组织病理切片用磷酸缓冲盐溶液脱蜡3次，每次持续时间为3-10分钟。
在一个实施例中，第一染色模块804，还具体用于将带有预设抗体的荧光染色试剂滴加到待处理切片上，将待处理切片放置于35-42℃的湿盒中孵育1-2小时；用磷酸缓冲盐溶液漂洗待处理切片3次，每次持续时间为3-10分钟，获取荧光染色切片。扫描模块806，还具体用于对荧光染色切片进行免疫荧光扫描，生成包括荧光区域的荧光图像。
在一个实施例中，第二染色模块808，还具体用于将待处理切片依次用100％无水乙醇浸泡3-10分钟，用95％乙醇浸泡3-10分钟，用85％乙醇浸泡3-10分钟；将待处理切片依次用蒸馏水浸泡5分钟，用苏木素染色5分钟，用流水冲洗5分钟，用1％盐酸乙醇浸泡10-30秒，用流水冲洗1分钟，用伊红染色1-5分钟，用流水冲洗1分钟；将待处理切片依次用75％乙醇浸泡3-10分钟，用85％乙醇浸泡3-10分钟，用95％乙醇浸泡3-10分钟，用100％无水乙醇浸泡3-10分钟2次；将待处理切片用二甲苯浸泡2-5分钟，用中性树胶封片，进行数字病理扫描，生成上色图像。
在一个实施例中，叠加融合模块810，还具体用于分别对每个荧光图像中的荧光区域进行颜色区分处理；将进行颜色区分处理后的至少一个荧光图像与上色图像进行图像叠加融合处理，得到交叉复染融合图像。
图9示出了一个实施例中利用荧光淬灭时间差进行的染色设备的内部结构图。如图9所示，该利用荧光淬灭时间差进行的染色设备包括通过系统总线连接的处理器、存储器和网络接口。其中，存储器包括非易失性存储介质和内存储器。该利用荧光淬灭时间差进行的染色设备的非易失性存储介质存储有操作系统，还可存储有计算机程序，该计算机程序被处理器执行时，可使得处理器实现利用荧光淬灭时间差进行的染色方法。该内存储器中也可储存有计算机程序，该计算机程序被处理器执行时，可使得处理器执行利用荧光淬灭时间差进行的染色方法。本领域技术人员可以理解，图9中示出的结构，仅仅是与本申请方案相关的部分结构的框图，并不构成对本申请方案所应用于其上的利用荧光淬灭时间差进行的染色设备的限定，具体的利用荧光淬灭时间差进行的染色设备可以包括比图中所示更多或更少的部件，或者组合某些部件，或者具有不同的部件布置。
一种利用荧光淬灭时间差进行的染色设备，包括存储器、处理器以及存储在该存储器中并可在该处理器上执行的计算机程序，该处理器执行该计算机程序时实现如下步骤：将组织病理切片进行脱蜡，获取待处理切片；用带有预设抗体的荧光染色试剂对待处理切片进行至少一次荧光染色，获取至少一个包括预设荧光标记的荧光染色切片；其中，在进行下一次荧光染色之前，淬灭上一次荧光染色生成的预设荧光标记；扫描至少一个荧光染色切片，获取至少一个包括荧光区域的荧光图像；淬灭预设荧光标记，用苏木精伊红染色法对待处理切片进行上色染色，获取上色染色切片，扫描上色染色切片以获取上色图像；将至少一个荧光图像和上色图像进行图像叠加融合处理，得到交叉复染融合图像。
在一个实施例中，淬灭预设荧光标记的步骤包括：以光强超过阈值的光线照射荧光染色切片。
在一个实施例中，将组织病理切片进行脱蜡，包括：将组织病理切片用二甲苯脱蜡3次，每次持续时间为3-10分钟；将组织病理切片用无水乙醇脱蜡3次，每次持续时间为3-10分钟；将组织病理切片用磷酸缓冲盐溶液脱蜡3次，每次持续时间为3-10分钟。
在一个实施例中，用带有预设抗体的荧光染色试剂对待处理切片进行至少一次荧光染色，获取至少一个包括预设荧光标记的荧光染色切片，包括：将带有预设抗体的荧光染色试剂滴加到待处理切片上，将待处理切片放置于35-42℃的湿盒中孵育1-2小时；用磷酸缓冲盐溶液漂洗待处理切片3次，每次持续时间为3-10分钟，获取荧光染色切片；扫描至少一个荧光染色切片，获取至少一个包括荧光区域的荧光图像，包括：对荧光染色切片进行免疫荧光扫描，生成包括荧光区域的荧光图像。
在一个实施例中，用苏木精伊红染色法对待处理切片进行上色染色，获取上色染色切片，扫描上色染色切片或获取上色图像，包括：将待处理切片依次用100％无水乙醇浸泡3-10分钟，用95％乙醇浸泡3-10分钟，用85％乙醇浸泡3-10分钟；将待处理切片依次用蒸馏水浸泡5分钟，用苏木素染色5分钟，用流水冲洗5分钟，用1％盐酸乙醇浸泡10-30秒，用流水冲洗1分钟，用伊红染色1-5分钟，用流水冲洗1分钟；将待处理切片依次用75％乙醇浸泡3-10分钟，用85％乙醇浸泡3-10分钟，用95％乙醇浸泡3-10分钟，用100％无水乙醇浸泡3-10分钟2次；将待处理切片用二甲苯浸泡2-5分钟，用中性树胶封片，进行数字病理扫描，生成上色图像。
在一个实施例中，将至少一个荧光图像和上色图像进行图像叠加融合处理，得到交叉复染融合图像，包括：分别对每个荧光图像中的荧光区域进行颜色区分处理；将进行颜色区分处理后的至少一个荧光图像与上色图像进行图像叠加融合处理，得到交叉复染融合图像。
一种计算机可读存储介质，该计算机可读存储介质存储有计算机程序，该计算机程序被处理器执行时实现如下步骤：将组织病理切片进行脱蜡，获取待处理切片；用带有预设抗体的荧光染色试剂对待处理切片进行至少一次荧光染色，获取至少一个包括预设荧光标记的荧光染色切片；其中，在进行下一次荧光染色之前，淬灭上一次荧光染色生成的预设荧光标记；扫描至少一个荧光染色切片，获取至少一个包括荧光区域的荧光图像；淬灭预设荧光标记，用苏木精伊红染色法对待处理切片进行上色染色，获取上色染色切片，扫描上色染色切片以获取上色图像；将至少一个荧光图像和上色图像进行图像叠加融合处理，得到交叉复染融合图像。
在一个实施例中，淬灭预设荧光标记的步骤包括：以光强超过阈值的光线照射荧光染色切片。
在一个实施例中，将组织病理切片进行脱蜡，包括：将组织病理切片用二甲苯脱蜡3次，每次持续时间为3-10分钟；将组织病理切片用无水乙醇脱蜡3次，每次持续时间为3-10分钟；将组织病理切片用磷酸缓冲盐溶液脱蜡3次，每次持续时间为3-10分钟。
在一个实施例中，用带有预设抗体的荧光染色试剂对待处理切片进行至少一次荧光染色，获取至少一个包括预设荧光标记的荧光染色切片，包括：将带有预设抗体的荧光染色试剂滴加到待处理切片上，将待处理切片放置于35-42℃的湿盒中孵育1-2小时；用磷酸缓冲盐溶液漂洗待处理切片3次，每次持续时间为3-10分钟，获取荧光染色切片；扫描至少一个荧光染色切片，获取至少一个包括荧光区域的荧光图像，包括：对荧光染色切片进行免疫荧光扫描，生成包括荧光区域的荧光图像。
在一个实施例中，用苏木精伊红染色法对待处理切片进行上色染色，获取上色染色切片，扫描上色染色切片或获取上色图像，包括：将待处理切片依次用100％无水乙醇浸泡3-10分钟，用95％乙醇浸泡3-10分钟，用85％乙醇浸泡3-10分钟；将待处理切片依次用蒸馏水浸泡5分钟，用苏木素染色5分钟，用流水冲洗5分钟，用1％盐酸乙醇浸泡10-30秒，用流水冲洗1分钟，用伊红染色1-5分钟，用流水冲洗1分钟；将待处理切片依次用75％乙醇浸泡3-10分钟，用85％乙醇浸泡3-10分钟，用95％乙醇浸泡3-10分钟，用100％无水乙醇浸泡3-10分钟2次；将待处理切片用二甲苯浸泡2-5分钟，用中性树胶封片，进行数字病理扫描，生成上色图像。
在一个实施例中，将至少一个荧光图像和上色图像进行图像叠加融合处理，得到交叉复染融合图像，包括：分别对每个荧光图像中的荧光区域进行颜色区分处理；将进行颜色区分处理后的至少一个荧光图像与上色图像进行图像叠加融合处理，得到交叉复染融合图像。
需要说明的是，上述利用荧光淬灭时间差进行的染色方法、装置、设备及计算机可读存储介质属于一个总的发明构思，利用荧光淬灭时间差进行的染色方法、装置、设备及计算机可读存储介质实施例中的内容可相互适用。
本领域普通技术人员可以理解实现上述实施例方法中的全部或部分流程，是可以通过计算机程序来指令相关的硬件来完成，该程序可存储于一非易失性计算机可读取存储介质中，该程序在执行时，可包括如上述各方法的实施例的流程。其中，本申请所提供的各实施例中所使用的对存储器、存储、数据库或其它介质的任何引用，均可包括非易失性和/或易失性存储器。非易失性存储器可包括只读存储器(ROM)、可编程ROM(PROM)、电可编程ROM(EPROM)、电可擦除可编程ROM(EEPROM)或闪存。易失性存储器可包括随机存取存储器(RAM)或者外部高速缓冲存储器。作为说明而非局限，RAM以多种形式可得，诸如静态RAM(SRAM)、动态RAM(DRAM)、同步DRAM(SDRAM)、双数据率SDRAM(DDRSDRAM)、增强型SDRAM(ESDRAM)、同步链路(Synchlink)DRAM(SLDRAM)、存储器总线(Rambus)直接RAM(RDRAM)、直接存储器总线动态RAM(DRDRAM)、以及存储器总线动态RAM(RDRAM)等。
以上实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上实施例仅表达了本申请的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本申请专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本申请的保护范围。因此，本申请专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (10)
1.一种利用荧光淬灭时间差进行的染色的方法，其特征在于，包括步骤：
将组织病理切片进行脱蜡，获取待处理切片；
用带有预设抗体的荧光染色试剂对所述待处理切片进行至少一次荧光染色，获取至少一个包括预设荧光标记的荧光染色切片；其中，在进行下一次荧光染色之前，淬灭上一次荧光染色生成的所述预设荧光标记；
扫描所述至少一个荧光染色切片，获取至少一个包括荧光区域的荧光图像；
淬灭所述预设荧光标记，用苏木精伊红染色法对所述待处理切片进行上色染色，获取上色染色切片，扫描所述上色染色切片以获取上色图像；
将所述至少一个荧光图像和所述上色图像进行图像叠加融合处理，得到交叉复染融合图像。
2.权利要求1所述的方法，其特征在于，所述淬灭所述预设荧光标记的步骤包括：
以光强超过阈值的光线照射所述荧光染色切片。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述将组织病理切片进行脱蜡，包括：
将所述组织病理切片用二甲苯脱蜡3次，每次持续时间为3-10分钟；
将所述组织病理切片用无水乙醇脱蜡3次，每次持续时间为3-10分钟；
将所述组织病理切片用磷酸缓冲盐溶液脱蜡3次，每次持续时间为3-10分钟。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述用带有预设抗体的荧光染色试剂对所述待处理切片进行至少一次荧光染色，获取至少一个包括预设荧光标记的荧光染色切片，包括：
将带有所述预设抗体的荧光染色试剂滴加到所述待处理切片上，将所述待处理切片放置于35-42℃的湿盒中孵育1-2小时；
用磷酸缓冲盐溶液漂洗所述待处理切片3次，每次持续时间为3-10分钟，获取所述荧光染色切片；
所述扫描所述至少一个荧光染色切片，获取至少一个包括荧光区域的荧光图像，包括：
对所述荧光染色切片进行免疫荧光扫描，生成包括所述荧光区域的所述荧光图像。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述用苏木精伊红染色法对所述待处理切片进行上色染色，获取上色染色切片，扫描所述上色染色切片或获取上色图像，包括：
将所述待处理切片依次用100％无水乙醇浸泡3-10分钟，用95％乙醇浸泡3-10分钟，用85％乙醇浸泡3-10分钟；
将所述待处理切片依次用蒸馏水浸泡5分钟，用苏木素染色5分钟，用流水冲洗5分钟，用1％盐酸乙醇浸泡10-30秒，用流水冲洗1分钟，用伊红染色1-5分钟，用流水冲洗1分钟；
将所述待处理切片依次用75％乙醇浸泡3-10分钟，用85％乙醇浸泡3-10分钟，用95％乙醇浸泡3-10分钟，用100％无水乙醇浸泡3-10分钟2次；
将所述待处理切片用二甲苯浸泡2-5分钟，用中性树胶封片，进行数字病理扫描，生成所述上色图像。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述将所述至少一个荧光图像和所述上色图像进行图像叠加融合处理，得到交叉复染融合图像，包括：
分别对每个所述荧光图像中的所述荧光区域进行颜色区分处理；
将进行颜色区分处理后的所述至少一个荧光图像与所述上色图像进行图像叠加融合处理，得到交叉复染融合图像。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述组织病理切片包括：乳腺癌组织病理切片、肺癌组织病理切片、肠癌组织病理切片、病毒性肺炎组织病理切片及支原体肺炎组织病理切片。
8.一种自动染色装置，其特征在于，所述装置包括：
获取模块，用于将组织病理切片进行脱蜡，获取待处理切片；
第一染色模块，用于用带有预设抗体的荧光染色试剂对所述待处理切片进行至少一次荧光染色，获取至少一个包括预设荧光标记的荧光染色切片；其中，在进行下一次荧光染色之前，淬灭上一次荧光染色生成的所述预设荧光标记；
扫描模块，用于扫描所述至少一个荧光染色切片，获取至少一个包括荧光区域的荧光图像；
第二染色模块，用于淬灭所述预设荧光标记，用苏木精伊红染色法对所述待处理切片进行上色染色，获取上色染色切片，扫描所述上色染色切片以获取上色图像；
叠加融合模块，用于将所述至少一个荧光图像和所述上色图像进行图像叠加融合处理，得到交叉复染融合图像。
9.一种计算机可读存储介质，存储有计算机程序，所述计算机程序被处理器执行时，使得所述处理器执行如权利要求1至7中任一项所述方法的步骤。
10.一种自动染色设备，包括存储器和处理器，所述存储器存储有计算机程序，所述计算机程序被所述处理器执行时，使得所述处理器执行如权利要求1至7中任一项所述方法的步骤。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20201013 |
|
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