CN111741747A - 包含药物的多孔栓塞微球 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种形成负载治疗剂的聚合物微球的方法，包括：a.将多孔聚合物微球暴露于含有已溶解的治疗剂的有机溶剂中，从而产生负载治疗剂的微球；b.将负载治疗剂的微球与所述有机溶剂分离；c.用水洗涤所述负载治疗剂的微球；以及d.对经洗涤的微球进行干燥。这种微球在栓塞治疗中特别有用。

Description

包含药物的多孔栓塞微球
技术领域
本发明涉及一种形成负载治疗剂的聚合物微球的方法，负载治疗剂的聚合物微球，包括装有负载治疗剂的聚合物微球的容器的试剂盒，用于哺乳动物中的主动栓塞的方法，聚合物微球在治疗恶性或良性癌症中的用途，包括负载治疗剂的聚合物微球的药物组合物以及用于肿瘤的栓塞治疗的包括聚合物微球的药物。
背景技术
栓塞治疗是一种用于治疗肿瘤的成熟且值得信赖的微创、图像引导的技术。在栓塞治疗期间，医师(介入放射科医生)使用栓塞颗粒来阻止血液流向肿瘤血管床。将导管经皮插入并导向肿瘤。在连续的X射线透视下进行导航，并使用造影剂。有多种栓塞方法，包括：单纯栓塞术(bland embolization)、经动脉化疗栓塞术(TACE)和药物洗脱微珠TACE(DEB-DACE)。
单纯栓塞术也称为第一代栓塞技术。该疗法的目的仅是阻塞给肿瘤供血的毛细血管动脉。在该过程中，肿瘤供血动脉被插入导管并注入栓塞颗粒。用于单纯栓塞的微粒可以利用各种形状、大小和材料。球形颗粒是优选的。用于单纯栓塞的微球的一些示例是聚乙烯醇(PVA)微球、水凝胶PVA微球、超吸收性聚合物微球(SAP-MS)和三丙烯酰基交联明胶微球(
Figure BDA0002643708250000011
Merit Medical)。
经动脉化疗栓塞术(TACE)是第二代栓塞技术，也是最常用的技术。在这种方法中，将化学治疗剂和栓塞材料递送到肿瘤组织。在TACE手术中，将化学治疗剂注射到肿瘤中，紧接着在其中注射栓塞微球。这引起高的局部药物浓度并刺激药物在肿瘤中长期保留。对化疗剂的增大的摄入导致被递送到肿瘤的剂量比致死剂量高出几倍。采用全身化疗不能安全地实现这一目标。
DEB-TACE是第三代栓塞技术。这是一种单一步骤的栓塞方法，其中将负载药物的栓塞微球直接注射到肿瘤血管(tumor vasculature)中，从而除血管阻塞之外还能够实现使治疗剂逐步释放到肿瘤床。与TACE相比，DEB-TACE的优势在于可以控制阻塞程度、被递送到该部位的药物的量以及在该部位的药物释放的持续时间。
DEB-TACE的目的是利用微球充当药物递送载体以靶向的方式来递送药物。这使得微球具有双重作用；首先，它们将阻碍血液流向肿瘤，然后它们将局部递送药物。药物洗脱微珠(DEB，drug-eluting beads)通常负载有细胞抑制剂(cytostatic)，例如阿霉素。在DEB-TACE中，药物以精确、持续和受控的方式来递送。它降低了药物的全身释放，同时保持了肿瘤内药物的高浓度。使用负载药物的微球的另一个优点是体内的化学治疗剂的浓度是最低的，从而防止了在全身化学疗法期间经受的主要副作用。
然而，在DEB-TACE手术中被用在当前临床实践中的聚合物微粒仍然是不完美的。例如，市场上可买到的用于DEB-TACE的栓塞微球，如DC
Figure BDA0002643708250000021
(Biocompatibles UK，Ltd.)，需要将微球首先在药物的水溶液中温育。微珠(bead)最初以未负载状态被交付给介入放射科医生。在实际的TACE手术之前将药物加载到微球上。此步骤在血管套件(angiosuite)中进行。在温育过程中，药物吸附到聚合物结构(含有带负电荷的磺酸根基团)上。因此，必须在该手术之前制备负载药物的微球，以允许微球接载药物。这意味着栓塞手术无法在药物加载过程完成(大约30分钟)之前开始。这增加了成本，因此是不利的。另一个缺点是执行该手术的介入放射科医生必须使用纯的细胞抑制剂进行工作，是因为他或她需要将栓塞颗粒和细胞抑制剂混合。由于细胞抑制剂的毒性，所以这不是优选的。
此外，现有技术的微珠如DC
Figure BDA0002643708250000022
仅被一层药物覆盖，药物几乎没有渗透到微珠中。当进行体内注射时，在手术的初始阶段(也可能甚至在微球尚未到达肿瘤部位时)药物从微球的释放会非常高，从而减少了可用于使药物长时间暴露于肿瘤的量。对于在US2016/228556、WO2007/090897、WO2007/085615、WO2007/022190、WO2012/101455、US2002/009415或在“控释”(J.Controlled release，Yan等人，2005-08-18，106，1-2，198-208)中公开的微珠进行了类似的观察。微珠或球体溶胀并被药物浸渍。这通常导致沉积在外部的治疗剂的高的突释(initial burst release)以及相对低并持续时间短暂的持续释放曲线。
此外，在温育DC
Figure BDA0002643708250000023
的过程中，药物吸附到含有带负电荷的磺酸根基团的聚合物结构上。毫不意外的是，对于在分子结构中带有正电基团的药物来说药物的结合最有效。不带电荷或带负电荷的药物很难被加载到上述现有技术的微珠上，这是另一个缺点。
最近已经开发了其他药物洗脱微珠。多孔栓塞微球，例如在WO 2009/086098中公开的那些，在微球内部也可以含有药物，而不是如DC
Figure BDA0002643708250000024
仅在外层上含有药物，这从理论上讲增大了能够被加载到药物洗脱微珠上或其中的药物量。然而，在实践中，仍然通过将微球浸入药物的水溶液中来使栓塞微球负载。药物与水的溶液进入微球的孔，从而使多孔微球负载药物。然而，大多数细胞抑制剂在水中难溶。药物在水中的固有的低浓度会导致药物在微球的孔中含量低。
发明内容
本发明旨在克服一个或更多个上述缺点，或者至少提供一种有用的替代方案。为此，本发明提供了一种形成负载治疗剂的聚合物微球的方法，包括：
a.将多孔聚合物微球暴露于包含已溶解的治疗剂的有机溶剂中，从而产生负载治疗剂的微球，
b.将所述负载治疗剂的微球与所述有机溶剂分离，
c.用水洗涤所述负载治疗剂的微球，
d.对经洗涤的微球进行干燥。
本发明的方法优选产生负载治疗剂的可注射聚合物微球。加载机制特别有利于这样的药物(换言之：治疗剂)，其具有在水性介质中溶解性差而在有机介质中溶解性优异的特征。大多数现代的高效的细胞生长抑制药物和抗血管生成药物都可以满足后者的要求。而且，与现有技术(例如，DC
Figure BDA0002643708250000031
)相反，加载机制不仅仅对带正电荷的药物有效。实际上，用于DC
Figure BDA0002643708250000032
的药物需要具有良好平衡的正电荷，以便在加载能力和释放性能之间达到最佳。另一方面，本发明的方法对于带有正电荷、负电荷的药物分子以及中性分子效果良好，因此用途更广。因此，根据本发明的方法可以用于个性化治疗，其中，该方法用于将微球加载适合于治疗个体特定疾病的药物。
在一种、两种或更多种药物的有机溶剂中的浓溶液中温育多孔3D交联微球会导致药物和溶剂流入微球的多孔结构中，优选在微球呈溶胀状态时。随着溶剂被聚合物网络吸收，药物被伴随运输到微球内部。在达到平衡溶胀状态后(通常在4-6小时后)，小心除去上清液，并加入一定体积的水(例如，水体积约为微球体积的10倍)以便洗涤微球。该体积的水有效地将溶剂分子从微球中提取出来，从而引起药物在微球内部的快速沉淀。这利用了大多数细胞生长抑制药物和抗血管生成药物在水中的不良溶解性以及药物分子与溶剂分子相比慢得多的扩散系数。可以重复洗涤步骤例如两次、三次或更多次以有效除去所有溶剂。
上述处理的结果是固体药物沉积在微球的孔内部以及微球的表面上。以这种方式，与现有的和市售的栓塞产品(其利用在水中进行加载并且是无孔的药物负载/药物洗脱栓塞微球，并因此仅包括在颗粒表面上的药物薄层)相比，可以实现更高的负载程度。
在洗涤过程中，溶剂由于其在水中的溶解性而会被迅速从微球中提取出来，并且溶剂(是小分子)的向外扩散很快。溶剂从溶胀的微球中迅速离开的结果是：(i)微球迅速收缩，大约恢复到其原始尺寸；和(ii)孔内以及微球表面上的药物结晶。微球表面的药物晶体可以与周边的孔的内部的晶体物理地连接(见下文)。这导致“外部”药物晶体的稳定结合。因此，负载药物的微球在孔中和表面处包含固体药物。在表面处的药物区域可以与孔内部的药物晶体“相互联锁”。
当使用根据本发明的栓塞微球时，原位药物释放的机制最初将主要由药物的溶解性决定，而不是由扩散决定。可在栓塞微球表面立即获得药物，因此扩散途径相对较短。只有在此之后，当在表面处没有药物残留时，药物的释放才变得取决于扩散，即药物从微球内部向表面传输以及随后释放。这种双重机制也与控制药物从现有的和竞争性商业药物洗脱微球(例如DC
Figure BDA0002643708250000041
)中原位释放的药物释放机制形成对比。推测其与肿瘤原位治疗的相关性大，因为双重机制允许对释放动力学进行详细设计，旨在实现最大持续时间的治疗窗口。
根据本发明的方法包括对已分离的微球进行干燥的步骤。这种干燥可以通过将微球置于开敞空间(即，大气环境)来进行，直至所有水和任何剩余的溶剂(如果存在)蒸发掉。可以通过将微球暴露于减压来辅助蒸发。还可以通过对微球轻微加热来辅助蒸发，但是为了防止药物和/或微球的降解，优选不超过40℃，更优选不超过30℃。另一种选择是微球的冷冻干燥。由于干燥步骤，根据本发明的方法产生了已预先加载有药物的干燥微球。这意味着微球可以以在微球的孔内和外周处存在一种或更多种药物的状态下被交付给介入放射科医生。执业医生唯一要做的事情是：(i)使负载药物的微球悬浮在生理盐水溶液中；并可选地：(ii)将悬浮液与液体造影剂例如Omnipaque
Figure BDA0002643708250000044
混合。与现有技术的用于DEB-TACE的可注射颗粒相比，这使得微球使用起来更容易和更安全。换言之，根据本发明的方法使得可以对栓塞微球进行预先加载。微球可以在生产设施中加载药物，从而减少了执行栓塞手术所需的时间量，并且因为无需使用纯的细胞抑制剂进行工作，还减少了介入放射科医生的风险。
尽管常规使用的栓塞颗粒(例如DC
Figure BDA0002643708250000042
)在它们的负载状态下进行干燥在理论上是可行的，但是由于带正电荷的药物在水中的溶解度以及药物仅存在于颗粒表面，因此栓塞颗粒的再悬浮将导致药物的大量损失。现有技术的颗粒的再悬浮将降低微珠上已经很低的药物量，这使得DC
Figure BDA0002643708250000043
和类似的颗粒对于制备即用型颗粒(即，不必在栓塞手术前立即进行加载的颗粒)没有吸引力。
在根据本发明的方法中，实现了更高的绝对负载，即，与现有技术的颗粒相比，用根据本发明的方法进行加载的微球包含数量高得多的药物。因此，尽管在根据本发明的微球再悬浮时一些药物可能会从微球中释放出来，但微球上药物的绝对量仍保留比常规颗粒(对其可以比照(mutatis mutandis)使用本发明的方法)高得多。尤其是在药物难溶于水的情况下，在再悬浮于水中时的药物的任何损失很少。相反，许多现有技术的颗粒甚至不能与难溶于水的药物一起使用。
根据本发明的负载药物的栓塞微球有效地联合了栓塞特性、局部药物递送和提高的药物容纳能力。这转化为持续很久的治疗浓度，即扩大的治疗窗口。与常规栓塞颗粒相比，根据本发明的负载药物的微球对于执业医生来说也更易于使用。
根据本发明的微球基本上是球形的。如本文所用，“基本上是球形”通常是指接近完美球体的形状，其被定义为呈现最低外表面积的体积。具体地，本发明中的“基本上是球形”是指，当观察颗粒的任何横截面时，长径和短径之间的差小于长径的20％。球形颗粒的优点是双重的：(i)球形颗粒具有最大的孤立行为倾向(即，微粒堵塞的风险被最小化)，以及(ii)可以更好地预测颗粒在血管树中将最终到达的位置。对于非球形颗粒，长宽比代表着关于血管直径(在进入肿瘤内部的血管树后减小)与颗粒大小将在何处相匹配的不确定性。
本发明另外提供了可通过根据本发明的方法获得的负载治疗剂的可注射聚合物微球。
本发明还提供了一种试剂盒，其包括具有根据本发明的负载治疗剂的可注射聚合物微球的容器。
本发明进一步提供了一种用于哺乳动物中的主动栓塞的方法，其包括向需要治疗的哺乳动物施用根据本发明的负载治疗剂的可注射聚合物微球。
本发明还包括根据本发明的负载治疗剂的可注射聚合物微球作为药物的用途。
本发明进一步包括药物组合物，其包含根据本发明的负载治疗剂的可注射聚合物微球。
最后，本发明涉及用于肿瘤栓塞治疗的药物，其包括根据本发明的负载治疗剂的可注射聚合物微球或根据本发明的药物组合物。
具体实施方式
当所述有机溶剂在20℃与水至少可部分混溶时，可以实现本发明的全部优点。优选地，有机溶剂在20℃与水可完全混溶。这导致在根据本发明的方法的步骤c中溶剂分子快速扩散出微球以及在洗涤过程中一种或更多种治疗剂最佳地保留在微球中，并因此带来更高的微球负载量。
有机溶剂中治疗剂的浓度优选为至少20mg/mL。这样的浓度导致可注射聚合物微球包含高量的治疗剂，例如相对于负载微球的重量至少10重量％的治疗剂。
更优选地，治疗剂在有机溶剂中在20℃的浓度为至少100mg/mL。这样的浓度导致可注射聚合物微球包含特别高量的治疗剂，例如相对于负载微球的重量至少12重量％的治疗剂。最优选地，治疗剂在有机溶剂中在20℃的浓度为至少200mg/mL。这样的浓度导致微球的最优负载程度，例如相对于负载微球的重量至少14重量％的治疗剂。
优选地，治疗剂在有机溶剂中在20℃的浓度为至多800mg/mL。这使未被加载到微球上的药物的损失保持在可接受的水平。更优选地，治疗剂在有机溶剂中在20℃的浓度为至多500mg/mL，因为这导致微球的高负载和可接受量的未被加载的已溶解治疗剂的损失。
治疗剂在水中在20℃的溶解度优选为在5mg/L至1000mg/L之间。在更低的溶解度下，患者体内的释放动力学对于实际应用而言太慢了。在更高的溶解度下，在使用前的药物洗涤步骤c期间和/或在再悬浮期间，从微球中释放出太多的药物分子。
更优选地，治疗剂在水中在20℃的溶解度为在5mg/L至100mg/L之间。在更低的溶解度下，患者体内的释放动力学对于实际应用而言太慢了。在更高的溶解度下，在使用前在药物洗涤步骤c期间和/或在再悬浮期间，从微球中释放出相对高的数量的治疗剂。最优选地，治疗剂在水中的溶解度在10mg/L至50mg/L之间，因为该溶解度范围提供了释放动力学与负载效率之间的最佳效果。
优选地，在步骤a中，多孔聚合物微球在有机溶剂中溶胀。随着微球的溶胀，微球的孔也溶胀，与不溶胀的微球相比，这提高了药物摄取(drug uptake)的能力。
优选地，多孔聚合物微球在有机溶剂中可溶胀至其干燥尺寸的约200％至1000％，更优选至约500％至1000％，最优选至约800％至1000％。微球在有机溶剂中的高溶胀度导致在微球的孔中药物的量增大。
在另一个优选的实施方案中，多孔聚合物微球在有机溶剂中可溶胀至溶胀比Q(由溶胀颗粒的重量除以干燥颗粒的重量来定义)约为1至200，优选为2至20，更优选为5至10。微球在有机溶剂中的高溶胀比Q导致在微球的孔中的药物量增大。
优选地，在步骤a中，应用了减压，更优选应用真空。当微球浸没在药物溶液中时施加真空。在低压下，存在于微球内部的气泡将膨胀并从微球中逸出。气泡的去除使多孔微球的容量增大，因此在药物加载过程中，减压处理是有利的。
优选地，包含有机溶剂和已溶解的治疗剂的溶液包含多种治疗剂。这将产生负载多种治疗剂的可注射聚合物微球。这种微球适用于同时联合多种治疗策略。因为微球的加载不取决于离子相互作用，所以不同治疗剂之间将没有或仅有有限的竞争性相互作用。因此，微球加载多种治疗剂主要取决于溶液中治疗剂的相对量。这提供了两种治疗剂的相对量的简单调节方法。
在一个优选的实施方案中，所述溶液由有机溶剂和一种或更多种治疗剂组成。在另一个优选的实施方案中，所述溶液包含有机溶剂的混合物和一种或更多种治疗剂。不同有机溶剂的组合可导致治疗剂的溶解度增大。
在一个优选的实施方案中，有机溶剂选自乙醛、乙酸、丙酮、乙腈、1,2-丁二醇、1,3-丁二醇、1,4-丁二醇、2-丁氧基乙醇、丁酸、二乙醇胺、二亚乙基三胺、二甲基甲酰胺、二甲氧基乙烷、二甲基亚砜、1,4-二恶烷、乙醇、乙胺、乙二醇、甲酸、糠醇、甘油、甲醇、甲基二乙醇胺、甲基异腈(methyl isocyanice)、N-甲基-2-吡咯烷酮、1-丙醇、1,3-丙二醇、1,5-戊二醇、2-丙醇、丙酸、丙二醇、吡啶、四氢呋喃、三甘醇、六甲基磷酰胺和/或它们的混合物。
更优选地，有机溶剂选自二甲亚砜(DMSO)、六甲基磷酰胺(HMPA)、二甲基甲酰胺(DMF)和水溶性醇，诸如1,2-丁二醇、1,3-丁二醇、1,4-丁二醇、2-丁氧基乙醇、乙醇、(乙)二醇、糠醇、甘油、甲醇、1-丙醇、1,3-丙二醇、1,5-戊二醇、2-丙醇和/或它们的混合物。
最优选地，有机溶剂是DMSO。与许多其他有机溶剂相比，DMSO是具有较低毒性的药学可接受的溶剂。此外，许多抗癌药尤其可溶于DMSO，使得DMSO成为通用型溶剂，可在根据本发明的方法中用于多种药物。此外，DMSO可与水混溶，使得在步骤c中DMSO的向外扩散特别快，从而导致微球的载药量特别高。有机溶剂，尤其是DMSO，很容易被吸收到多孔聚合物微球的3D交联网络结构中。换言之：3D交联的微球在DMSO中温育时可能会显示出相当大的溶胀(如8到10倍体积)。
优选地，治疗剂是抗癌药。根据本发明的可注射聚合物微球特别适用于栓塞治疗，而栓塞治疗又是治疗癌症肿瘤的有效方法。在用于栓塞的微球中引入(incorporation)抗癌药物提高了栓塞治疗的效果。
另一类优选的治疗药物包括抗血管生成药物。这些药物延缓或抑制了新血管的形成(血管生成)。血管生成受到化学信号的控制，这些化学信号既可以刺激受损血管的修复，又可以刺激新血管的形成。通常，这些化学信号的刺激和抑制作用是平衡的，因此血管仅在需要它们的时间和位置形成。血管生成在癌症的生长和扩散中起着至关重要的作用，当然在栓塞的情况下，由于血液的流入受阻，肿瘤的某些部分突然失去了氧气供应。肿瘤可以刺激附近的正常细胞产生血管生成信号分子。血管生成抑制剂干扰该过程中的各个步骤。例如，药物索拉非尼和舒尼替尼与内皮细胞表面的受体或下游信号传导途径中的其他蛋白质结合，从而阻断其活性。另一种著名的血管生成抑制剂是贝伐单抗(bevacizumab)
Figure BDA0002643708250000071
这是一种单克隆抗体，可以特异性识别和结合并阻断血管内皮生长因子。
优选地，所述治疗剂选自索拉非尼(sorafenib)、伊立替康(irinotecan)、顺铂(cis-platin)、紫杉醇(paclitaxel)、多西他赛(docetaxel)、卡巴他赛(cabazitaxel)、拉罗他赛(larotaxel)、艾日布林(eribulin)、伊沙匹隆(ixabepilone)、vinflumine、培瑞维A酸(peretinoin)、奥兰替尼(orantinib)、布利尼布(brivanib)、舒尼替尼(sunitinib)、briganib、厄洛替尼(erlotinib)、乐伐替尼(lenvatinib)、克唑替尼(crizotinib)和凡德他尼(vandetanib)。这些药物在水中的溶解度低，但在有机溶剂(尤其是DMSO)中具有良好的溶解度。根据本发明的方法特别适合于用这些治疗剂来加载栓塞微球。
更优选地，所述治疗剂选自索拉非尼(sorafenib)、紫杉醇(paclitaxel)、多西他赛(docetaxel)、卡巴他赛(cabazitaxel)、拉罗他赛(larotaxel)、艾日布林(eribulin)、伊沙匹隆(ixabepilone)、培瑞维A酸(peretinoin)、奥兰替尼(orantinib)、布利尼布(brivanib)、舒尼替尼(sunitinib)、briganib、厄洛替尼(erlotinib)、乐伐替尼(lenvatinib)、克唑替尼(crizotinib)和/或凡德他尼(vandetanib)。这些药物在水中的溶解度低，但在有机溶剂(尤其是DMSO)中具有良好的溶解度。根据本发明的方法最特别适合于用这些治疗剂来加载栓塞微球。
优选地，抗癌药是索拉非尼。
优选地，聚合物微球是内交联的。通过在起始原料(反应性单体)的混合物中使用交联剂而在聚合物微球的合成过程中(即，在聚合过程中)实现聚合物微球的交联。优选地，交联剂是二丙烯酸酯或二甲基丙烯酸酯结构，例如乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)、二乙二醇二甲基丙烯酸酯(DEGDMA)、三乙二醇二甲基丙烯酸酯(TEGDMA)、乙二醇二丙烯酸酯(EGDA)、二乙二醇二丙烯酸酯(DEGDA)或三乙二醇二丙烯酸酯(TEGDA)。更优选地，交联剂是三乙二醇二甲基丙烯酸酯(TEGDMA)。
优选地，基于多孔聚合物微球的总重量，多孔聚合物微球包含5至30重量％、更优选10至20重量％的TEGDMA。
优选地，多孔聚合物微球包含甲基丙烯酸单体单元，例如甲基丙烯酸甲酯(MMA)。更优选地，多孔聚合物微球包含20至60重量％的MMA，更优选包含30至50重量％的MMA。
多孔聚合物微球的亲水性是优选的，以避免在患者中注射微球之前或期间微球的聚集。为此，聚合物微球优选包含亲水性甲基丙烯酸单体单元，例如甲基丙烯酸羟乙酯(HEMA)。优选地，多孔聚合物微球包含20至60重量％的HEMA，更优选包含30至50重量％的HEMA。
优选地，多孔聚合物微球是不透射线的。DC
Figure BDA0002643708250000081
或WO 2009/086098中公开的微珠都不是本质上不透射线的，因此由于不能确定它们在体内的位置，而产生了局限性。如果需要可见性，则可以在注射聚合物微球之前或之后立即将不透射线的试剂注射到动脉中。这给出了微球的位置的标示，但不是它们的精确位置。不能确定微球没有意外泄漏到健康组织中(介入放射学专业领域称为“反流”的已知现象)。为了防止这种问题，微球本身可以负载不透射线的试剂。这产生了微球的更精确定位，但是减少了颗粒中可用于药物的的空间量，从而降低了微球的有效载药能力。优选地，多孔聚合物微球包含碘。这种本质上不透射线的多孔聚合物微球可以例如通过引入含碘的单体、优选含碘的单体2-[4-碘代苯甲酰氧基]-甲基丙烯酸乙酯(4IEMA，2-[4-iodobenoyloxy]-ethyl methacrylate)来合成。
在最优选的实施方案中，多孔聚合物微球包含以下成分的共聚物：10至20重量％的4IEMA，30至50重量％的MMA，30至50重量％的HEMA，以及10至20重量％的交联剂TEGDMA，总计加起来达100质量％。这样的微球在本发明的方法中具有最优性能。这样的微球在生理流体中溶胀不超过其干燥尺寸的200％，并且在生理条件中在亲水性、在有机溶剂中的溶胀性、不透射线性和剪切作用下的形状保持之间具有最佳平衡。
为了获得孔隙率，在微球的合成过程中，可以一起供应单体混合物和可去除的颗粒。可去除的(固体)颗粒被引入到聚合物微球中。随后对颗粒的溶解导致可去除颗粒的溶解(浸出)，从而形成多孔聚合物微球。典型且优选的示例是PPMA和银。
例如，一种制备聚合物微球的方法包括一个步骤，其中将溶解在甲苯中的聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)添加到组成微球的单体和聚合物中。合成后，可以将PMMA从固体微球中溶解(即，洗脱)，通过产生孔从而产生微孔性(microporosity)(例如参见图2C和图D)。优选地，聚合物微球的孔或空腔(cavity)的尺寸在2至50微米之间，更优选在5至10微米之间。“多孔颗粒”是包含多个孔的颗粒，其可以例如通过使用合适的显微镜技术例如扫描电子显微镜观察微球来观测和确定。孔的尺寸可以在从0.5微米或更小到1至2微米到5微米到10微米到25微米到50微米到100微米或更大的范围内广泛变化。孔可以具有多种形状，因此不必是圆筒形的。在一些实施方案中，颗粒包括设置在无孔核心上的多孔表面层。在其他实施方案中，孔存在于遍布颗粒内部。
另外地或可替代地，可以将单体混合物和银颗粒一起供应。这些颗粒可以被硝酸溶解，导致孔的形成(微孔性)。这具有显著的优点，因为获得的孔基本上是嵌入的银颗粒的包壳(envelope)。这意味着可以通过金属颗粒的选择来设计孔的尺寸：较大的金属颗粒将产生较大的孔，而较小的金属孔将产生较小的孔。虽然利用PMMA的纳入(inclusion)以及随后的溶剂洗脱对在微球中提供多孔性(porosity)给予了良好的结果，但就治疗剂的负载量而言，对孔径和孔径分布的控制较少。存在着固有的风险，即所形成的孔可能太小而不能有效地加载，或者孔径分布不利于容许高负载量的治疗剂，或者释放曲线难以良好控制。因此，在一个优选的实施方案中，优选在微球的产生过程中引入固体颗粒。通过在微球中纳入固体颗粒，所需的孔径和孔径分布更加可控，因此随后的加载和从多孔微球的治疗剂的释放曲线也更加可控。固体颗粒优选是当多孔微球用于哺乳动物中时不会引起任何不良反应的材料的颗粒。用于固体颗粒的材料优选可从微球中洗脱，通常以相对于微球本身是惰性的溶剂来洗脱。优选地，该部分的材料独立地选自银、铁、非贵金属(例如铝、锌、镁、铜、锡及其混合物)、陶瓷、碳酸钙、硫酸钙，优选是银、非贵金属和/或碳酸钙。一旦形成了微球，就可以相对于微球将固体颗粒溶解或洗脱。固体颗粒的溶解或洗脱可以通过合适的溶剂例如酸来实现。可替代地，可以引入固体聚合物颗粒，然后用合适的(有机)溶剂来洗脱。因此，在形成微球时将PMMA颗粒(而不是PMMA溶液)引入到单体/聚合物混合物中并随后使用针对PMMA的溶剂例如甲苯来浸出，也是本发明的实施方案。
将固体颗粒从已形成的微球之中溶解出来的技术优势是对孔径和孔分布的控制的改进。这进而导致对治疗剂的加载和释放速率的控制的改进。多孔微球的孔(优选通过浸出固体颗粒而获得的)优选在1-5微米的范围内，优选在2-5微米的范围内，优选为2.5-3.5微米。优选地，多孔微球的至少80％、更优选至少85％、甚至更优选至少90％、最优选至少95％的孔是这些范围内的孔。较大的孔径尽管在技术上是可能的，但由于较大的孔径趋于使微球(其直径可以在50-100微米的优选范围内)不稳定，其可能在处理过程中导致不希望的碎裂，因此不太可取。
优选地，孔分布在遍及多孔聚合物微球的整个体积中。这导致最佳的药物负载效率。
本发明的多孔微球也可以利用真空来加载，这允许实现更高的治疗剂负载。在该实施方案中，引入了一个步骤，其中使微球经受减压(即，0.5bar，优选0.3bar，更优选0.1bar)。这种压力的降低将空气从孔中抽出以及随后用含有治疗剂的溶液浸渍多孔微球也将导致更高的治疗剂负载。随后使含有治疗剂的浸渍溶液与治疗剂的非溶剂(例如水)接触或进行干燥，这将导致治疗药物在孔中沉积/结晶。
优选地，为了良好的栓塞作用，可注射聚合物微球的直径在1-1000μm的范围内，为了更好的栓塞作用，该直径优选在1-200μm的范围内，为了最佳的栓塞作用，该直径更优选在50-100μm的范围内。
优选地，可注射聚合物微球在生理流体中不会溶胀至超过其干燥尺寸的400％。在诸如血液或注射介质的生理环境中溶胀至超过其干燥尺寸的400％的微球可能在注射时在施加到微球上的剪切力下严重变形。这种变形可能导致微球在到达要治疗的部位(特别是肿瘤部位)之前释放治疗剂。更优选地，可注射聚合物微球在生理流体中不会溶胀至超过其干燥尺寸的200％，以避免任何实质的变形。最优选地，聚合物微球在生理流体中不溶胀。
优选地，相对于未负载的颗粒的重量，负载治疗剂的可注射聚合物微球包含至少10重量％、优选至少12重量％、更优选至少14重量％的治疗剂。在使用所述微球进行DEB-TACE时，较高的负载容量导致更有效的治疗。
在某些实施方案中，与未另外配备孔或空腔而是必须依靠常规的溶胀和纳入行为的微球相比，本发明的多孔微球可以加载相对高的负载量的治疗剂。在某些实施方案中，与用相同的化学组分和方法制备、但没有形成孔的(即，可去除的)物质(例如如上所述的PMMA或银)的浸出步骤因此没有孔或空腔的微球相比，本发明的多孔微球负载治疗剂的量超过200％、超过300％、超过400％。
在本发明的实施方案中，可注射聚合物微球包含在微球的外表面上的治疗剂晶体，所述治疗剂晶体与孔内的治疗剂晶体互连。这导致治疗剂的损失最小。
在根据本发明的试剂盒中，可注射聚合物微球处于干燥(即无水和/或无溶剂)状态。因此，可注射聚合物微球可以储存很长(例如，1年)的时间段，而不会在微球中治疗剂降解和/或治疗剂的量减少。
优选地，试剂盒进一步包括带有药用可注射液体的容器。在这种情况下，所有医生必须在治疗之前立即采取以下行动：(i)将微球悬浮在药用可注射液体(例如生理盐水溶液(0.9％NaCl))中，以及可选地(ii)将悬浮液与市售的造影剂(例如Omnipaque 350)混合。在一个优选的实施方案中，试剂盒还包括带有造影剂的容器。
在根据本发明的方法的一个优选实施方案中，该方法进一步包括用X射线光谱法来对负载治疗剂的可注射微球的位置进行定位。在栓塞治疗期间，医师(介入放射科医生)使用栓塞微球来阻止血液流向肿瘤血管床。将导管经皮插入股动脉并被导向肿瘤。在连续的X射线透视下进行导航，并使用造影剂。
根据本发明的可注射聚合物微球可用作药物，优选作为可注射药物，更优选用于治疗癌症，优选肝癌，更优选肝细胞癌(HCC)。肝癌在世界范围内构成了沉重的负担，它在男性最多确诊的癌症中排第五，在女性最多确诊的癌症中排第九。它是全球第二最常见的癌症死因，2012年约有746,000例死亡。(1)肝细胞癌(HCC)占全球肝癌负担的70-85％。(2)HCC通常在晚期确诊，阻碍了治愈性治疗诸如肿瘤消融、肝部分切除或肝移植等。一个可能的治疗选择是栓塞治疗。导管通过腹股沟的小切口经皮插入股动脉，并被导向肿瘤。HCC栓塞的有效性在很大程度上依赖于肿瘤的异常形态，该肿瘤从肝动脉接收其80％的血液供应。与非肿瘤性肝实质相比，非肿瘤性肝实质是从门静脉接受血液供应。向肿瘤和健康的肝实质的血液供应方面的差异这一有利条件为靶向治疗创造了天然通道，从而使栓塞治疗在肝癌特别是HCC的治疗中特别有效。
根据本发明的药物组合物优选包含一种或更多种药学上可接受的稀释剂、载体和/或接受体(recipient)。
根据需要，本文公开了本发明的详细实施方案；然而，应当理解，所公开的实施方案仅仅是本发明的示例，其可以以各种形式实施。因此，本文所公开的具体结构和功能细节不应被解释为限制性的，而仅仅是作为权利要求的依据以及作为教导本领域技术人员以任何适当的详细结构对本发明进行各种运用的代表性依据。此外，本文中使用的术语和短语不旨在限制，而是旨在提供对本发明的可理解的描述。
如本文所使用的术语“一种”/“一个”被定义为一个(种)或更多个(种)。如本文所使用的术语“多个”被定义为两个或多于两个。如本文所使用的术语“另一个”被定义为至少第二个或更多。如本文所使用的术语“包括”和/或“具有”被定义为包含(即，开放性语言，不排除其他要素或步骤)。
仅仅在互不相同的从属权利要求中记载某些措施的事实，并不表示不能使用这些措施的组合取得优势。
除非另有说明，否则所有反应条件均是在大气压下。
附图说明
图1是用于将本发明的多孔栓塞微球加载一种、两种或更多种药物(例如细胞生长抑制药物和/或抗血管生成药物)的溶胀/真空方法的示意图。
图2描绘了在加载药物之前多孔微球的扫描电子显微照片。A、B、C和D对应不同的放大倍数。A、B、C和D中的比例尺分别为100、50、10和30微米。
图3包括负载有药物双嘧达莫的根据本发明的多孔栓塞微球的扫描电子图像。A显示低放大倍数的多个载药微球(A中的比例尺为500微米)。B显示了A中的一个区域的放大图。C放大了这些载药微球的表面；C中的比例尺为10微米。在C中，在微球表面处药物的晶体清晰可见。由于这些晶体与存在于微球内部的孔中的其他晶体连接，因此这些晶体物理地粘附于微球。
图4显示了在37摄氏度测量的双嘧达莫在体外从负载栓塞微球(20mg)中的释放曲线。使用了三种不同的介质：磷酸盐缓冲盐水(PBS，最低曲线)，含有5％乙醇的PBS(中间曲线)和含有10％乙醇的PBS(最高曲线)。显然，乙醇的存在促进了释放，对于双嘧达莫，乙醇是比水和其他水性介质(如PBS)更好的溶剂。在所有情况下，都在3天后继续进行释放，这表明持续释放的机制是可行的。
图5负载双嘧达莫的栓塞微球的扫描电子显微镜分析。A：概况，表明由于在表面处存在药物，微球的整体形态已发生变化。B.负载双嘧达莫的颗粒之一的放大图，清楚地显示了表面处的药物。药物的粘附是由于以下事实：表面处的药物晶体与微球内部的空腔内存在的晶体连接。C.进一步的放大图，显示了暴露在颗粒表面处的药物的针状晶体。
图6显示发生了药物从如图5所示的栓塞微球的释放；即，这些颗粒负载有双嘧达莫。将颗粒放在由去骨鸡肉(A和B)或去骨猪肉(C和D)构成的表面上。假定这种软组织环境或多或少类似于肿瘤的内部。所有图像都是在紫外光下拍摄的，即，颗粒于是显示为绿色荧光的清晰斑点。A显示出颗粒的存在，紧随其后注意到绿色斑点清晰且界限分明。将图A左侧的侧翼(flap)折叠到微球上方，并将标本静置24小时不动(室温)。然后，将侧翼折回，并拍摄图像B。显然，已发生双嘧达莫的释放：绿色斑点已扩大，并且在折回的表面上存在绿色斑点。现在针对去骨猪肉的实验，C和D显示了类似的结果。
图7是用饱和NaCl溶液温育的根据本发明的多孔/空腔化微球的扫描电子显微照片。首先将颗粒浸入所述盐溶液中，然后施加真空。这意味着几乎所有存在于在空腔中的空气都被抽空了。然后，当真空释放时，盐溶液被迫进入颗粒内部的空腔中。冻干产生了如附加图4所示的微球。请注意，现在表面的多孔性非常少了。而且，盐晶体驻留在表面。它们的粘附性通过它们与存在于颗粒内部的盐晶体的物理连接来解释。
图8是本发明的栓塞微球颗粒的多孔/空腔化表面结构的特写。注意，表面处的开口的直径约为3微米。这与在制备中使用的银颗粒的尺寸一致。
我们注意到，使用较大的金属颗粒会导致微球的结构脆弱，随后其在尺寸分选(筛分)过程中可能会被损坏。使用较小的颗粒并不是最佳选择，因为如果开口为亚微米尺寸，则在加载过程中物质的传输会遇到更大的阻力。
实施例
实施例1：不透射线的多孔微球的制备，方法1。
在250ml圆底烧瓶中制备包含14.45g NaCl、2g MgCl2×8H2O和70ml水的溶液。将其在热油浴(87℃)中以450rpm搅拌约15分钟。称重0.79g NaOH丸粒，并加入15ml水。将该溶液旋转直至丸粒溶解。将该溶液缓慢加入到250ml圆底烧瓶中的混合物中，并搅拌15分钟以沉淀出Mg(OH)2。在100ml的圆底烧瓶中，称重10.8g的甲苯+PMMA溶液(通过将7.56g的甲苯与3.24g的PMMA混合并将其搅拌过夜以产生均匀、澄清、粘性的混合物来制备)。在另一个100ml圆底烧瓶中，称重4.6g的4IEMA(15％碘)，并向其中加入6.2g的HEMA。利用温暖的手掌使4IEMA溶解。将0.36ml的TEGDMA和0.776ml的Trignox添加到HEMA+4IEMA溶液中，通过旋转圆底烧瓶将其混合。将含有HEMA+4IEMA的烧瓶内容物加入含有PMMA和甲苯的烧瓶。通过旋转圆底烧瓶将其充分混合。使用玻璃移液管将该溶液逐滴添加至250ml圆底烧瓶的内容物(含有沉淀的Mg(OH)2)中。将该溶液以350rpm搅拌4-5小时。随后停止搅拌，并将溶液冷却至室温。微球聚集在烧瓶底部。倒出溶剂，并将微球先用水然后用丙酮充分洗涤。将甲苯添加到洗涤过的微球中并浸泡过夜，以从球体中萃取PMMA以产生孔。从球体移出甲苯，并加入丙酮。将其浸泡过夜。从微球中除去丙酮，并将它们再次用水洗涤。除去所有水，并将微球冷冻干燥。然后使用(手动)筛分将微球分选到各种尺寸范围中。使用改变的结构单元(buildingblock)量合成了两种类型的微球。
Figure BDA0002643708250000141
图2显示了多孔微球的4个代表性图像。A显示了两个类似的微球；完全可见的颗粒的直径约为120微米，而另一个微球(部分可见)更大(直径约为200微米)。A中的比例尺(右下)的长度为100微米。B为A的较小微球的放大图。B中的比例尺(右下)为50微米。B说明了微球的多孔性。C和D是另一个类似的多孔微球的放大图像。在这种情况下，遇到微球表面处的较大的孔。C中的较大孔的直径约为10微米(C中的比例尺(左下)为10微米)。D显示了在表面处的四个类似的较大“孔”。这些较大的孔能够对于药物负载具有重要的意义。它们不仅包含相对大量的药物，而且还起着稳定在微球外周处沉积的药物晶体的作用(见下文)。
实施例2：不透射线的多孔微球的制备，方法2。
首先，制备聚(乙烯醇)(PVA)、聚(乙二醇)(PEG)和聚(N-乙烯基-吡咯烷酮)(PVP)的水溶液。将PVA(63.0g；Sigma-Aldrich)、PEG(48.6g；Sigma-Aldrich)和PVP(24g；Acros)溶解在去矿物质水(1800mL)中。需要长时间加热和搅拌。
其次，制备聚(甲基丙烯酸甲酯)(PMMA；2.5g)在甲基丙烯酸甲酯(MMA，20g)中的溶液。
第三，制备反应性混合物(cocktail)，其包括：
·PMMA/MMA溶液(4.57g)
·4-碘代苯甲酰基甲基丙烯酸酯(4IEMA)(3.19g)
·甲基丙烯酸羟乙酯(HEMA)(0.5g)
·交联剂三乙二醇二甲基丙烯酸酯(TEGDMA)(1.70g)
·Trigonox(自由基引发剂，0.88g)
将1000mL圆底烧瓶浸入热油(100℃)中。控制油的温度并保持在99.5-100.5℃之间。将聚合物水溶液(400mL)转移至圆底烧瓶中，并加入磁力搅拌棒。搅拌速度设定为500rpm。将该混合物放置最少1小时，以使烧瓶中的内容物升温。在此阶段，将反应性混合物与1克银微粒(尺寸：2–3.5微米)混合。剧烈摇动混合物以分散银颗粒。然后将该混合物快速加入到热的经搅拌的聚合物水溶液中。
将混合物放置3小时。然后，停止加热。继续搅拌。几个小时后，也停止搅拌，并除去油浴。注意到微球的沉淀。丢弃上清液，并将微球用水重复洗涤。这提供了其中嵌入了银颗粒的微球。获得了不同尺寸的微球(如同光学显微镜分析所证明)。其直径在10微米至600微米之间变化。显微镜分析还证实了在微球上及其内部存在银颗粒。
随后，将微球在75℃的硝酸(1M，Aldrich)中温育并磁力搅拌。这导致了银的溶解，从而在银颗粒最初所在的位置处留下微米级的孔。该反应溶解了所有银颗粒，无论它们的位置在微球上还是在微球内部。18小时后，停止加热，并使烧瓶及其内容物冷却。将现在多孔的微球用水反复洗涤并使其干燥。随后，通过筛分对多孔微球进行尺寸分选。
用2-4微米的固体PMMA颗粒重复该实验。在形成微球之后，使微球在搅拌下悬浮在甲苯中过夜。通过过滤除去洗脱液，并将微球干燥。显微镜检查显示孔形成。
实施例3：用药物索拉非尼来加载多孔微球
制备了200mg索拉非尼(游离碱)在DMSO(1.00ml)中的储备溶液。
1.将多孔微球(200mg，直径范围为100–300微米)称重到聚丙烯离心管(10ml)中。
2.将步骤1的药物溶液转移到步骤2的离心管中。将溶液和微球小心混合，并静置30分钟。
3.然后，加入5ml去矿物质水。将该管封闭并摇动。注意到药物在DMSO-水混合物中沉淀。
4.小心地移出上清液(移液管)，并加入新鲜的水(5ml)。反复摇动。
5.步骤5重复4次，很明显上清液不再包含药物晶体。
6.用0.1％十二烷基硫酸钠的水溶液装满该管，静置24小时。
7.将微球转移到滤纸上并使其干燥过夜。
8.将干燥的微球过筛(用100微米网眼的筛子)，以去除未结合和松散结合的药物晶体。
9.收集筛子上的微球并将其储存在深色玻璃瓶中(-20℃)。
在图1中，A描绘了根据上述方法生产的多孔栓塞微球。孔均匀地分布在每个微球体的各处；孔的直径不同，并且一些孔发现于微球表面处。B描绘了A的多孔微球在一种、两种或更多种药物在DMSO中的浓溶液中温育时达到的平衡状态。注意到微球以及孔已明显溶胀。此外，注意到，孔现在已充满药物溶液，并且微球体也被DMSO饱和。溶胀到平衡状态通常需要4到6小时。C描绘了B突然在过量的水中温育后达到的状态。
实施例4：用双嘧达莫来加载多孔微球
使用与以上实施例3中描述的相似的方法将微球加载药物双嘧达莫。双嘧达莫是一种无毒的心血管药物，易于获得，其溶解特性与许多细胞抑制剂和抗血管生成剂的溶解特性非常相似(在DMSO中的溶解度高，在水中的溶解度低)。双嘧达莫的另一个特殊优点是其强烈的紫外线吸收和荧光，使得能够对药物释放过程进行可视化以及定性和定量的分析。
图3表明在颗粒表面处发现了药物晶体(在这种情况下为针状)。一些针伸入微球的多孔结构中，从而提供了与颗粒表面物理结合的机制。观察到附着强烈且牢固。例如，附着的晶体在筛分处理中幸存，该筛分处理被执行以将载药微球与未结合的和松散结合的药物晶体分离。
随后将负载双嘧达莫的多孔微球在乙醇中(15mg在5mL中)温育。清楚地观察到双嘧达莫的释放，因为上清液变成黄色。将微球放置24，不时摇动。然后，用分光光度法分析上清液，以确定双嘧达莫的浓度。根据该数量，计算微球的负载量。
重复的实验表明，微球的负载量为17+/-3质量％。这意味着大量的药物将被定位在肿瘤内部。例如，如果将200mg微球(典型量)用于HCC的治疗，则约34mg将被递送到肿瘤中并在那里释放。
对多孔微球重复加载导致微球中的活性化合物负载量增大：第二轮加载将微球及其孔中包含的双嘧达莫药物的量增大到24+/-3质量％。以多孔微球的总质量计，三次加载产生29+/-4质量％的负载量。这明显高于没有孔或空腔的比较微球的常规负载量。具有如此高负载量的多孔微球的释放曲线的特征在于：从沉积在表面上的治疗剂的高的突释(innitial burst)，然后是从聚合物微球的浸渍和孔的更持久的持续释放。

Claims (55)

1.形成负载治疗剂的可注射聚合物微球的方法，包括：
a.将多孔聚合物微球暴露于含有已溶解的治疗剂的有机溶剂中，从而产生负载治疗剂的微球，
b.将所述负载治疗剂的微球与所述有机溶剂分离，
c.用水洗涤所述负载治疗剂的微球，以及
d.对经洗涤的微球进行干燥。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述多孔聚合物微球具有尺寸在2微米至50微米之间、优选在3微米至8微米之间、更优选在5微米至10微米之间的孔。
3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述有机溶剂在20℃与水至少可部分混溶。
4.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述有机溶剂在20℃与水可完全混溶。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中，所述治疗剂在20℃在所述有机溶剂中的浓度为至少20mg/ml。
6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述治疗剂在20℃在所述有机溶剂中的浓度为至少100mg/ml，优选在20℃为至少200mg/ml。
7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述治疗剂在20℃在所述有机溶剂中的浓度为至多800mg/ml，优选在20℃为至多500mg/ml。
8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述治疗剂在20℃在水中的溶解度为5mg/L至1000mg/L。
9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述治疗剂在20℃在水中的溶解度为5mg/L至100mg/L，更优选在20℃为10mg/L至50mg/L。
10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，在步骤a中，所述多孔聚合物微球在所述有机溶剂中溶胀。
11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，在步骤a中，所述多孔聚合物微球在所述有机溶剂中溶胀至其干燥尺寸的约200％至1000％，优选溶胀至500％至1000％，更优选溶胀至800％至1000％。
12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述多孔聚合物微球在所述有机溶剂中可溶胀为约1至100、优选为2至20、更优选为5至10的溶胀比Q，所述溶胀比Q通过将溶胀颗粒的重量除以干燥颗粒的重量来定义。
13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，在步骤a中，应用了减压。
14.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述溶剂包括多种已溶解的治疗剂。
15.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述有机溶剂选自乙醛、乙酸、丙酮、乙腈、1,2-丁二醇、1,3-丁二醇、1,4-丁二醇、2-丁氧基乙醇、丁酸、二乙醇胺、二亚乙基三胺、二甲基甲酰胺、二甲氧基乙烷、二甲基亚砜、1,4-二恶烷、乙醇、乙胺、乙二醇、甲酸、糠醇、甘油、甲醇、甲基二乙醇胺、甲基异腈、N-甲基-2-吡咯烷酮、1-丙醇、1,3-丙二醇、1,5-戊二醇、2-丙醇、丙酸、丙二醇、吡啶、四氢呋喃、三甘醇、六甲基磷酰胺和/或它们的混合物。
16.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述有机溶剂选自二甲基亚砜、六甲基磷酰胺、二甲基甲酰胺、1,2-丁二醇、1,3-丁二醇、1,4-丁二醇、2-丁氧基乙醇、乙醇、乙二醇、糠醇、甘油、甲醇、1-丙醇、1,3-丙二醇、1,5-戊二醇、2-丙醇和/或它们的混合物。
17.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述有机溶剂是二甲基亚砜。
18.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述治疗剂是抗癌药和/或抗血管生成药。
19.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述治疗剂选自索拉非尼(sorafenib)、伊立替康(irinotecan)、顺铂(cis-platin)、紫杉醇(paclitaxel)、多西他赛(docetaxel)、卡巴他赛(cabazitaxel)、拉罗他赛(larotaxel)、艾日布林(eribulin)、伊沙匹隆(ixabepilone)、vinflumine、培瑞维A酸(peretinoin)、奥兰替尼(orantinib)、布利尼布(brivanib)、舒尼替尼(sunitinib)、briganib、厄洛替尼(erlotinib)、乐伐替尼(lenvatinib)、克唑替尼(crizotinib)、凡德他尼(vandetanib)和/或它们的组合。
20.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述治疗剂选自索拉非尼(sorafenib)、紫杉醇(paclitaxel)、多西他赛(docetaxel)、卡巴他赛(cabazitaxel)、拉罗他赛(larotaxel)、艾日布林(eribulin)、伊沙匹隆(ixabepilone)、培瑞维A酸(peretinoin)、奥兰替尼(orantinib)、布利尼布(brivanib)、舒尼替尼(sunitinib)、briganib、厄洛替尼(erlotinib)、乐伐替尼(lenvatinib)、克唑替尼(crizotinib)、凡德他尼(vandetanib)和/或它们的组合。
21.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述治疗剂是索拉非尼(sorafenib)。
22.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述多孔聚合物微球是交联的。
23.根据权利要求22所述的方法，其中，所述交联的多孔聚合物微球通过交联剂而内交联。
24.根据权利要求21的方法，其中，所述交联剂优选包含至少两个丙烯酸酯或甲基丙烯酸酯基团，优选其中所述交联剂为三乙二醇二甲基丙烯酸酯(TEGDMA)。
25.根据权利要求23所述的方法，其中，经内交联的多孔聚合物微球包含5重量％至30重量％的TEGDMA，优选包含10重量％至20重量％的TEGDMA。
26.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述多孔聚合物微球是亲水的。
27.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述多孔聚合物微球包含甲基丙烯酸单体单元。
28.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述多孔聚合物微球包含甲基丙烯酸甲酯(MMA)。
29.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述多孔聚合物微球包含20重量％至60重量％的MMA，优选包含30重量％至50重量％的MMA。
30.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述多孔聚合物微球包含甲基丙烯酸羟乙酯(HEMA)。
31.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述多孔聚合物微球包含20重量％至60重量％的HEMA，优选包含30重量％至50重量％的HEMA。
32.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述多孔聚合物微球本质上是不透射线的。
33.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述多孔聚合物微球包含碘。
34.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述多孔聚合物微球包含2-[4-碘代苯甲酰氧基]-甲基丙烯酸乙酯(4IEMA)。
35.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述多孔聚合物微球包含5重量％至30重量％的4IEMA，优选包含10重量％至20重量％的4IEMA。
36.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述多孔聚合物微球包含HEMA、4IEMA和TEGDMA的共聚物，所述共聚物利用TEGDMA进行交联。
37.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述多孔聚合物微球包含以下成分的共聚物：10重量％至20重量％的4IEMA，30重量％至50重量％的MMA，30重量％至50重量％的HEMA以及10重量％和20重量％的TEGDMA，总计加入达到100重量％。
38.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，已通过在所述微球的合成期间添加固体颗粒并且随后将这些固体颗粒溶解而获得所述孔。
39.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述固体颗粒是非贵金属或聚合物。
40.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述孔分布遍及所述多孔聚合物微球的整个体积，优选其中，已通过在所述微球的合成期间添加银颗粒并且随后将这些银颗粒溶解而获得所述孔。
41.可通过权利要求1至40中任一项所述的方法获得的负载治疗剂的可注射聚合物微球。
42.根据权利要求41所述的可注射聚合物微球，其中，所述可注射聚合物微球的直径范围为1μm-1000μm，优选为1μm-200μm，更优选为50μm-100μm。
43.根据权利要求41或42所述的可注射聚合物微球，其中，所述可注射聚合物微球在生理流体中不会溶胀至超过其干燥尺寸的400％，优选不超过200％。
44.根据权利要求41至43中任一项所述的可注射聚合物微球，其中，所述负载治疗剂的可注射聚合物微球包含至少10重量％、优选至少12重量％、更优选至少14重量％的治疗剂。
45.根据权利要求41至44中任一项所述的可注射聚合物微球，其中，所述可注射聚合物微球包含在所述微球的外表面上的治疗剂晶体，所述治疗剂晶体与所述孔内部的治疗剂晶体互连。
46.一种试剂盒，其包括：具有根据权利要求41-45中任一项所述的负载治疗剂的可注射聚合物微球的容器。
47.根据权利要求46所述的试剂盒，其还包括：具有药用可注射液体的容器，以及可选地，具有造影剂的容器。
48.用于哺乳动物中的主动栓塞的方法，其包括向需要治疗的哺乳动物施用根据权利要求41-45中任一项所述的负载治疗剂的可注射聚合物微球。
49.根据权利要求46至48所述的方法，其还包括通过X射线光谱法来对所述负载治疗剂的可注射聚合物微球的位置进行定位。
50.根据权利要求41至45中任一项所述的负载治疗剂的可注射聚合物微球作为药物的用途。
51.根据权利要求50所述的用途，作为可注射药物。
52.根据权利要求50或51所述的用途，用于治疗恶性或良性癌症，优选肝癌，更优选肝细胞癌。
53.一种药物组合物，其包括：根据权利要求41至45中任一项所述的负载治疗剂的可注射聚合物微球，以及优选地一种或更多种药学上可接受的稀释剂、载体和/或接受体。
54.根据权利要求41至45所述的可注射聚合物微球，其用作药物，优选用于肿瘤的栓塞治疗。
55.根据权利要求53所述的药物组合物，其用作药物，优选用于肿瘤的栓塞治疗。
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