CN111705009B

CN111705009B - 海洋好氧反硝化盐单胞菌及其应用与处理养殖废水的方法

Info

Publication number: CN111705009B
Application number: CN201911052741.3A
Authority: CN
Inventors: 黄志涛; 周正; 江玉立
Original assignee: Ocean University of China
Current assignee: Ocean University of China
Priority date: 2019-10-31
Filing date: 2019-10-31
Publication date: 2022-02-08
Anticipated expiration: 2039-10-31
Also published as: CN111705009A

Abstract

海洋高效好氧反硝化盐单胞菌及其应用与处理养殖废水的方法，该菌株的保藏名称：Halomonashydrothermalis Z8，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏日期：2019年3月25日，保藏号：CCTCC NO:M 2019197。该菌株在好氧的条件下具有高效的反硝化能力，通过对好氧反硝化性能测定，菌株培养72h硝酸盐去除率为99.05%，总氮去除率为84.17%。将菌株扩大培养并接种到生物反应器中模拟生物滤池反硝化效果，结果显示挂膜迅速高效、脱氮效率高并且亚硝酸盐积累不明显脱氮性能良好。本发明为海水循环水系统构建新型脱氮机制提供新的理论依据，从而进一步完善循环水系统的生物过滤作用。

Description

海洋好氧反硝化盐单胞菌及其应用与处理养殖废水的方法

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一种海洋好氧反硝化盐单胞菌及其应用与处理养殖废水的方法。

背景技术

海水循环水养殖是一种高密度、集约化的养殖模式，系统的关键是对养殖废水处理以达到安全回收利用的目的，而生物处理又是循环水水处理系统的核心。

现有的生物过滤是将养殖水体中毒性较高的氨氮和亚硝酸盐氮转化为毒性较低的硝酸盐，由于循环水养殖水体溶氧浓度均较高，使得传统厌氧反硝化无法进行，这就导致了硝酸氮在养殖水体中被积累，积累到一定程度之后会对养殖鱼类带来潜在的危害。

目前在循环水条件下，控制硝酸盐在安全浓度以下的方法有以下三种：

一、加大循环水系统的换水量，通过与外界交换水体达到降低系统内硝酸盐的目的；

二、在系统中养殖一些藻类，利用其吸收作用降低硝酸盐浓度；

三、反硝化过滤环节将硝酸盐转化为氮气排出系统。

但是以上诸多方法都受到不同因素的限制。养殖系统每天换水的比例一般5％～20％，有些循环水养殖系统的换水率更高，增大换水量会额外增加能源及水资源的消耗，而且换水时排出养殖系统的养殖废水中有机物和硝酸盐浓度比较高，容易对环境造成污染；在系统中养殖藻类受到适宜的藻类及创造藻类适宜的生长条件等限制；加入反硝化环节同样困难重重，传统的生物脱氮理论认为硝化细菌和反硝化细菌各自适宜的生长环境不同，因此硝化过程与反硝化过程有严格区分，前者是好氧条件，后者是厌氧条件，而循环水养殖系统是富氧环境，厌氧反硝化细菌难以在该环境中生存。

好氧反硝化细菌的发现彻底打破了这一传统脱氮思路，目前已报道的好氧反硝化细菌有 Microvirgula aerodenitrificans,Alcaligenes faecalis，Thaureamechernichensis，Pseudomonas nautical，Pseudomonas stutzeri和Thiosphaerapantotropha等。

但是目前发现的好氧反硝化细菌，主要是从土壤、生活污水和工业污水中分离出来，很少有从海水养殖生物滤池中直接分离出的。此外，目前已发现从海水中分离出具有好氧反硝化功能的细菌，其脱氮效率较低，如王晓静等分离出的好氧反硝化细菌Kocuriapolaris AD7 硝酸盐去除率仅80.70％，且同时伴随着亚硝酸盐的大量积累，实际反硝化效率很低，这制约了海水污染的脱氮处理工艺的发展。

发明内容

本发明的目的在于提供一种海洋好氧反硝化盐单胞菌Halomonashydrothermalis，该菌株在好氧条件下具有高效的反硝化能力，能够有效的去除海水中的亚硝酸盐和硝酸盐。

本发明的另一个目的是提供上述好氧反硝化盐单胞菌在生物反应器中处理养殖废水的应用。

本发明还有一个目的是提供上述好氧反硝化盐单胞菌在生物反应器中处理养殖废水 NO₃ ^--N和NO₂ ^--N的方法。

此外本发明提供上述好氧反硝化盐单胞菌在处理养殖废水中NO₃ ^--N和NO₂ ^--N时的最优碳源、碳氮比、摇床转速和温度，并得到了在最优条件下好氧反硝化率和硝酸盐去除率。

一种海洋好氧反硝化盐单胞菌，其特征在于该菌株的保藏名称:Halomonashydrothermalis Z8，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏日期：2019年3月25日，保藏号：CCTCC NO: M 2019197；保藏单位地址：湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内，邮编430072。

本发明所述好氧反硝化盐单胞菌菌株的分离、筛选、鉴定过程为：取珍珠龙胆石斑鱼养殖车间的一级生物滤池中的生物滤料，在实验室经过四代富集和BTB平板涂布筛选，并分离纯化菌株，通过定量检测培养基中NO₃ ^--N和NO₂ ^--N的浓度，判断细菌的反硝化能力，筛选出对NO₃ ^--N和NO₂ ^--N还原能力强的一株菌株。根据细菌菌落形态特征、生理生化特征以及该菌株16SrDNA基因序列与GenBank数据库中序列进行比对，确定细菌种类为Halomonashydrothermalis。

所述盐单胞菌的16SrDNA序列是如序列表所示的核苷酸序列。

所述的好氧反硝化盐单胞菌菌株在生物反应器中处理养殖废水NO₃ ^--N和NO₂ ^--N中的应用。

所述盐单胞菌在生物反应器中处理养殖废水NO₃ ^--N和NO₂ ^--N的方法为：将所述海洋好氧反硝化盐单胞菌用接种环接种到活化培养基中，然后于30℃、100r/min条件下震荡培养48h；

向预先加入养殖废水的生物反应器中接入碳源和活化后菌株的培养液10mL，24h充气，稳定两天后，启动反应器的蠕动泵，即可对生物反应器中的废水进行NO₃ ^--N和NO₂ ^-N处理。

为了能够进一步了解处理效果，每天可从反应器的进出水口取样分析，检测硝酸盐、亚硝酸盐、氨氮、总氮的浓度变化。

本发明所提供的上述好氧反硝化盐单胞菌最优碳源为乙酸钠，菌株反硝化的最优碳氮比为20、摇床最优转速为100r/min以及震荡培养的最适温度为30℃，在该最优条件下所述菌株好氧反硝化率为84.17％，硝酸盐去除率为99.05％。如王晓静等分离出的好氧反硝化细菌Kocuria polaris AD7硝酸盐去除率仅80.70％，且同时伴随着亚硝酸盐的大量积累，实际反硝化效率很低，这制约了海水污染的脱氮处理工艺的发展本发明的盐单胞菌及应用与现有的技术比较，有如下有益效果：本发明所述的盐单胞菌菌株在好氧条件下具有高效的反硝化能力。本发明给出了该菌株最优的反硝化条件，在该条件下几乎能够完全去除硝酸盐，在生物反应器中挂膜迅速，脱氮性能良好，并且具有环保、高效的特点。

附图说明

图1是海洋好氧反硝化盐单胞菌在不同碳源条件下对培养液中NO₃ ^--N浓度的影响。

图2是海洋好氧反硝化盐单胞菌在不同碳源条件下对培养液中TN-N浓度的影响。

图3是海洋好氧反硝化盐单胞菌在不同碳源条件下对培养液中NO₂ ^--N浓度的影响

图4是海洋好氧反硝化盐单胞菌在不同碳氮比条件下对培养液中NO₃ ^--N浓度的影响。

图5是海洋好氧反硝化盐单胞菌在不同碳氮比条件下对培养液中TN-N浓度的影响。

图6是海洋好氧反硝化盐单胞菌在不同碳氮比条件下对培养液中NO₂ ^--N浓度的影响.

图7是海洋好氧反硝化盐单胞菌在不同转速条件下对培养液中NO₃ ^--N浓度的影响。

图8是海洋好氧反硝化盐单胞菌在不同转速条件下对培养液中TN-N浓度的影响。

图9是海洋好氧反硝化盐单胞菌在不同转速条件下对培养液中NO₂ ^--N浓度的影响。

图10是海洋好氧反硝化盐单胞菌在不同温度条件下对培养液中NO₃ ^--N浓度的影响。

图11是海洋好氧反硝化盐单胞菌在不同温度条件下对培养液中TN-N浓度的影响。

图12是海洋好氧反硝化盐单胞菌在不同温度条件下对培养液中NO₂ ^--N浓度的影响。

图13是海洋好氧反硝化盐单胞菌在最优条件下的好氧反硝化曲线。

图14是本发明所使用的一种生物反应器示意图。

图15是本发明的海洋好氧反硝化盐单胞菌在生物反应器中对硝酸盐和总氮的去除率。

具体实施方式

实施例1所述海洋好氧反硝化盐单胞菌的分离、筛选方法：

一、实验材料

1、菌株来源：山东省烟台市明波水产有限公司珍珠龙胆石斑鱼养殖车间的一级生物滤池中的生物滤料。

2、培养基及试剂：如下列表1-1至表1-5所示。

表1-1

表1-2

表1-3

表1-4

表1-5

格里斯试剂：

A液：将0.5g对氨基苯磺酸溶解于150mL30％的醋酸中(于暗处保存)；

B液：将0.5gα-萘胺与50mL无离子水混合煮沸，煮沸后加入到150mL20％的乙酸中(于暗处保存)；

二苯胺试剂：称取0.5g的二苯胺，然后将其溶解于20mL的无离子水中，最后将其缓慢加入到100mL的浓硫酸中。

3、实验仪器和设备：如表1-6

表1-6实验仪器

二、菌株的分离与筛选

1、菌株的富集：将滤料在无菌环境下剪碎后装入盛有90ml人工海水的三角瓶中，在 200r/min摇床转速下震荡3小时。静放一个小时后取出10ml上清接种在9ml富集培养基中，在28℃、150r/min条件下培养，每12小时用二苯胺试剂和格里斯试剂分别检测NO₃ ^--N以及 NO₂ ^--N的量，在NO₃ ^--N有明显减少且NO₂ ^--N产生时开始富集第二代，按此步骤富集三次，获取四代富集培养液。

2、菌株的分离纯化：

当菌液富集四代后，使用人工海水把富集培养液稀释为10^-1至10^-8八个梯度，分别移取 0.1ml稀释液稀释涂布在BTB平板上，各梯度做两个重复，再在30℃恒温培养箱中培养2至 5天，等有菌落长出时，选择变蓝色的平板，将带蓝色晕圈的单菌落再次划线(每代做两个重复)，按此步骤重复纯化三次获得四代纯化的菌落。将生长个状况良好菌株接种至斜面培养基上，在4℃条件下保存。

3、菌株的筛选：用接种环把上述得到的菌株接种在装有150mL活化培养基的三角瓶中进行活化，在28℃，150r/min的条件下恒温震荡培养。2天后分别取出5mL活化培养液接种至100mL的反硝化性能测定培养基，在100r/min，28℃的恒温培养箱中培养，48h后分别测定其亚硝酸盐与硝酸盐的浓度，以次判断细菌的反硝化效果。

实施例2所述海洋好氧反硝化盐单胞菌的鉴定

1、菌株生理生化实验

将菌株从保种管中接到BTB培养基中进行培养，用于生理生化的鉴定。菌株的生理生化特性通过梅里埃试剂条进行检测，严格按照API 20NE试剂条、API ZYM试剂条的使用说明进行操作，观察并记录实验结果。

生理生化实验中，所述菌株革兰氏染色呈阴性，为革兰氏阴性菌，用API 20NE试剂条检测结果见表2-1，可以看出，菌株可以将硝酸盐还原为亚硝酸盐，并且将亚硝酸盐还原为氨或者氮气。该菌株吲哚试验呈阴性，并且在脲酶、精氨酸水解酶试验中呈阴性，其可以同化葡萄糖、阿拉伯糖、甘醇糖、麦芽糖、苹果酸以及柠檬酸，与盐单胞菌属Halomonashydrothermalis基本一致。

通过API ZYM试剂条检测菌株酶的活性，其结果如表2-2所示，菌株的碱性磷酸盐酶、酯酶(C4)、类脂没(C14)、酸性磷酸酶、α-半乳糖甙酶、α-葡萄糖甙酶、β-葡萄糖甙酶检测称阳性，其他检测结果均为阴性。

表2-1菌株在API 20NE试剂条中的检测结果

备注：“+”为检测结果呈阳性，“-”为检测结果呈阴性

表2-2菌株在API ZYM试剂条中的检测结果

备注：“+”为检测结果呈阳性，“-”为检测结果呈阴性

2、菌株16S rDNA鉴定

对菌株进行革兰氏染色，依据革兰氏染色结果，选取合适的操作步骤通过化学方法进行 DNA提取。将提取的细菌DNA进行PCR扩增后，采用16S rDNA基因序列分析法对所得细菌进行鉴定。

PCR扩增引物为细菌通用引物27F(5-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3)和1492R (5-TACGGYTACCTTGTTACGACTT-3)。25μL的PCR反应体系包括：DNA模板1μL， 10×GoTaq Flexibuffer 2μL，dNTPs 1.6μL，引物F 1μL，引物R 0.5μL，GoTaq Flexi polymerase0.2μL。PCR反应在94℃条件下预变性5min，再35个循环(包含94℃变性1min， 54℃退火1min，72℃延伸1min)，最后72℃延伸10min。

通过菌株的生理生化实验以及把得到的PCR产物送测序公司进行测序，所得基因序列与 GenBank数据库中序列进行比对，确定细菌种类。

通过菌株的生理生化实验以及16S rDNA鉴定，确定这株菌为Halomonashydrothermalis。

所述盐单胞菌的16S rDNA序列是如序列表所示的核苷酸序列。

实施例3所述盐单胞菌在不同碳源条件下的好氧反硝化性能

在250mL锥形瓶中分别加入100mL的反硝化性能测定培养基，培养液分别以葡萄糖、柠檬酸三钠、丁二酸钠和乙酸钠作为唯一碳源，并且保持碳氮比为15，向培养液中接种3mL 的菌株活化培养液(以下接种量都为3mL)，然后在30℃、100r/min条件下恒温震荡培养。每个处理组设置三个平行。每隔12h检测培养基中的NO₃ ^--N、NO₂ ^--N和TN的浓度变化，实验结果如图1、图2和图3所示。

由图1和图2看出，72h时碳源为乙酸钠条件下，NO₃ ^--N浓度最低为2.22mg/L，TN浓度变化趋势与NO₃ ^--N相似，72h时碳源为乙酸钠条件下，总氮浓度最低为14.10mg/L，去除率达到78.05％，丁二酸钠、柠檬酸三钠以及葡萄糖次之。试验空白对照组为没有接种细菌，总氮浓度没有发生变化，因此总氮的去除率的高低间接说明了细菌反硝化能力的强弱，本次试验中最佳碳源为乙酸钠。

亚硝酸是反硝化过程的中间产物，在好氧反硝化过程中会出现短暂的积累，如图3所示，碳源为丁二酸钠、柠檬酸三钠和乙酸钠时，NO₂ ^--N在12h～24h间出现积累，且碳源为丁二酸钠时，在24h～36h间NO₂ ^--N浓度迅速增加，48h达到峰值14.80mg/L，随后浓度维持在较高水平，而当碳源变成葡萄糖时，NO₂ ^--N浓度始终保持在较低水平，浓度基本维持在1.41mg/L 以下。

实施例4所述盐单胞菌在不同碳氮比条件下的好氧反硝化性能

培养液以不同碳源试验中的最佳碳源(TN去除率最高)作为唯一碳源，碳氮比分别设置为5、10、15和20，每个处理组设置三个平行，于30℃、100r/min条件下恒温震荡培养。同样，每隔12h测量并记录NO₃ ^--N、NO₂ ^--N和TN的浓度，实验结果如图4、图5和图6所示。

如图4和图5所示，本试验中，碳氮比从5变化到20时，硝酸盐和总氮的去除率都发生了显著变化。其中C/N为15和20时，硝酸盐去除率均在95.70％以上，并且去除效果差异性不显著(P<0.05)。C/N＝15时，总氮浓度为14.10mg/L，反硝化效率为78.05％，当C/N增加到20时，总氮浓度降低至10.71mg/L，反硝化效率升高至84.17％，当碳氮比为20时，反硝化效果最好。

如图6显示，C/N＝5时，亚硝酸盐浓度基本保持稳定，当C/N增加到10之后亚硝酸积累比较严重，0～72h亚硝酸盐浓度一直在增加。继续增加C/N，发现亚硝酸盐积累现象明显改善，C/N为15和20时，亚硝酸盐浓度均在36h出现峰值分别为4.63mg/L、4.16mg/L，随后亚硝酸盐浓度开始降低，72h亚硝酸盐浓度分别为2.75mg/L、0.30mg/L。

实施例5所述盐单胞菌在不同转速条件下的好氧反硝化性能

培养液中的碳源以及碳氮比分别是上述两试验结果中的最佳碳源和最佳碳氮比，试验温度为30℃。于恒温条件下振荡培养，转速分别为0r/min、50r/min、100r/min和150r/min，并且每组设置3个平行，每隔12h测量并记录NO₃ ^--N、NO₂ ^--N和TN的浓度变化，实验结果如图7、图8和图9所示。

图7和图8结果显示，当摇床转速提升至100r/min、150r/min时，两处理组的硝氮与总氮浓度变化曲线均几乎重合，说明在这两种不同转速情况下该菌株反硝化效率非常接近，两处理组在72h总氮去除率分别为84.17％，82.96％，两处理组反硝化效率无显著性差异 (p>0.05)。所以，当摇床转速为100r/min～150r/min时，该菌株反硝化率最高，鉴于实验操作难易程度以及节约资源等因素，建议采用100r/min。

由图9可以看出，不同摇床转速下，亚硝酸盐氮浓度变化存在明显差异。当转速为0时，亚氮从0～36h基本没有发生改变，当细菌增长到一定数量时(36h)，反硝化效率才逐步增强，亚氮浓度逐渐增加到7.53mg/L(72h)。转速提高到50r/min时，在60h亚氮浓度出现峰值8.36mg/L,随后降低。转速为100r/min和150r/min时，都在36h出现拐点，此刻亚氮达到最大值分别为4.16mg/L，3.01mg/L。

实施例6所述盐单胞菌在不同温度条件下的好氧反硝化性能

培养液中的碳源以及碳氮比分别是上述两试验结果中的最佳碳源和最佳碳氮比，摇床转速均为100r/min。温度梯度分别为15℃、20℃、25℃和30℃，，恒温震荡培养，同样每组设置三个平行，每隔12h测量并记录NO₃ ^--N、NO₂ ^--N和TN的浓度变化，实验结果如图10、图11和图12所示。

如图10和图11所示，当温度在25～30℃时，菌株反硝化效率明显提高分别为69.89％， 84.17％。硝酸盐在30℃条件下，去除效果最好且被降解速率最高，36h硝酸盐浓度降低至 0.96mg/L，基本被降解完全，并且在24～36h硝酸盐被还原速率最快为3.05mg/(L·h)。因此，菌株在30℃条件下，反硝化效果和硝酸盐去除效果均最好。

由图12可以看出，不同温度条件下，亚硝酸盐的浓度变化不尽相同。在15℃温度较低时，抑制了好氧反硝化酶系的活性，周质硝酸盐还原酶活性较低，从而导致硝酸盐被还原成亚硝酸盐的能力降低。当温度升高至20℃时，亚硝酸盐维持在0～1.55mg/L，波动幅度较低，硝酸盐被还原效果仍然不明显。当温度升高至25℃时，72h亚硝酸盐浓度仍处在较高值为 7.34mg/L。当温度继续升高至30℃时，亚硝酸盐没有出现明显积累，其在36h达到峰值4.16mg/L，随后开始降低至0.48mg/L以下。

实施例7所述盐单胞菌在最优条件下的好氧反硝化曲线

实验条件分别为上述试验中的最佳碳源、碳氮比、温度和转速，同时试验设置三个水平，于培养箱中恒温振荡培养，每隔12h测量并记录NO₃ ^--N、NO₂ ^--N和TN的浓度变化，并计算其反硝化性能，实验结果如图13所示。

如图13所示，硝酸盐被还原主要都发生在12～36h，硝酸盐降解速率为2.06mg/(L·h)，菌株在36h后硝酸盐浓度基本保持不变，72h菌株硝酸盐去除率为99.05％，硝酸盐去除效率较高。细菌总氮浓度的变化与其硝氮浓度变化相似，总氮的去除也是主要发生在12～36h，菌株总氮去除速率为1.97mg/(L·h)，菌株72h反硝化效率分别为84.17％。

菌株在反硝化过程中总会出现亚硝酸盐的积累，且积累现象主要发生在12h～48h，并且均在36h出现峰值为4.16mg/L。随后36～48h由于硝酸盐被大量还原导致培养基中硝酸盐浓度较低，进而限制了培养集中反硝化作用中间产物亚硝酸盐的产出，进而亚硝酸盐浓度开始下降，细菌亚硝酸盐浓度在48～72h维持在较低水平为0.3～0.48mg/L。

实施例8所述盐单胞菌在处理生物反应器中养殖废水的应用

一、培养基与反应器

活化培养基：参照实施例1。

人工污水：采用青岛近海砂滤海水配制(每天配制一次)，NO₃ ^--N浓度50mg/L，C/N为15，各成分配比如下：CH₃COONa 2.1967g/L，KNO₃ 0.361g/L，KH₂PO₄ 0.0255g/L，K₂HPO₄·3H₂O 0.0427g/L，微量元素溶液1ml/L，pH约为7.3。

反应器：装置如图14所示。通过蠕动泵的作用，人工污水以恒定流速从反应器底部入水口进入反应器，再由反应器上端出水口流出。反应器各系统参数：(1)系统由三个并联的反应器组成，每个反应器填190g K1滤料，反应器容积为2.2L，单个反应器流量为12.22ml/min，水力停留时间(HRT)3h。(2)K1滤料由聚丙烯制作，为直径1cm、高1cm的内十字圆筒结构，外壁附有纵向突起条带；滤料密度约为0.96g/cm³(堆积密度150kg/m³)，比表面积约 850m²/m³。(3)反应器浸入配有加热棒的水槽中施行水浴控温(水槽内持续充气搅拌以实现均匀加热)，温度控制在25±1℃；反应器外壁贴有黑色壁纸以避光；24h充气。

二、处理方法

将试验分离出的菌株用接种环接种到活化培养基中，然后于30℃、100r/min条件下震荡培养48h。分别向每个反应器中接入活化后的菌株培养液各10mL以及碳源，24h充气，蠕动泵不启动。接种两天后开启蠕动泵，每天从反应器的进出水口取样分析，检测硝酸盐、亚硝酸盐、氨氮、总氮的浓度变化。

如图15所示，反应器在8d时，总氮和硝酸盐去除率最低,分别为32.22％和60.63％，这可能是因为反应器碳源充足，碳氮比较高，反应器直接暴露在环境中，其他微生物与菌株的竞争作用，抑制了菌株的正常生长和繁殖，以及阻碍了物质和能量在细菌体内的传递。反应器稳定后，几乎完全去除硝酸盐，总氮去除率达80％以上，相比而言反硝化能力较好。

序列表

<110> 中国海洋大学

<120> 海洋好氧反硝化盐单胞菌及其应用与处理养殖废水的方法

<141> 2019-10-31

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1177

<212> DNA

<213> 盐单胞菌(Halomonas hydrothermalis)

<400> 1

ggcagagcgg cagctaccat gcaagtcgag cggtaacagg ggtagcttgc tacccgctga 60

cgagcggcgg acgggtgagt aatgcatagg aatctgcccg atagtggggg ataacctggg 120

gaaacccagg ctaataccgc atacgtccta cgggagaaag ggggctccgg ctcccgctat 180

tggatgagcc tatgtcggat tagctagttg gtgaggtaaa ggctcaccaa ggcgacgatc 240

cgtagctggt ctgagaggat gatcagccac atcgggactg agacacggcc cgaactccta 300

cgggaggcag cagtggggaa tattggacaa tgggcgaaag cctgatccag ccatgccgcg 360

tgtgtgaaga aggccctcgg gttgtaaagc actttcagcg aggaagaacg cctagtggtt 420

aatacccatt aggaaagaca tcactcgcag aagaagcacc ggctaactcc gtgccagcag 480

ccgcggtaat acggagggtg caagcgttaa tcggaattac tgggcgtaaa gcgcgcgtag 540

gtggcttgat aagccggttg tgaaagcccc gggctcaacc tgggaacggc atccggaact 600

gtcaagctag agtgcaggag aggaaggtag aattcccggt gtagcggtga aatgcgtaga 660

gatcgggagg aataccagtg gcgaaggcgg ccttctggac tgacactgac actgaggtgc 720

gaaagcgtgg gtagcaaaca ggattagata ccctggtagt ccacgccgta aacgatgtcg 780

accagccgtt gggtgcctag cgcactttgt ggcgaagtta acgcgataag tcgaccgcct 840

ggggagtacg gccgcaaggt taaaactcaa atgaattgac gggggcccgc acaagcggtg 900

gagcatgtgg tttaattcga tgcaacgcga agaaccttac ctactcttga catcctgcga 960

acttgtgaga gatcacttgg gtgcccttcg ggaacgcaga gacaggtgct gcatggctgt 1020

cgtcagctcg tgttgtgaaa tgttgggtaa gtcccgtacg agcgcaacct gtcttatttg 1080

cagcgcgtaa tgcggactct agagactgcg gtgacaacga agagtgggac gacgtcagtc 1140

atcatgccta cgagataggg gctacacacc accggtg 1177

Claims

1.一种海洋好氧反硝化盐单胞菌，其特征在于：该菌株的保藏名称: Halomonas hydrothermalis Z8，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏日期：2019年3月25日，保藏号：CCTCC NO: M 2019197；所述盐单胞菌的16SrDNA序列是如序列表所示的核苷酸序列。

2.权利要求1所述的海洋好氧反硝化盐单胞菌在生物反应器中处理养殖废水中的NO₃ ^--N和NO₂ ^--N的应用。

3.利用权利要求1所述的海洋好氧反硝化盐单胞菌在生物反应器中处理养殖废水中的NO₃ ^--N和NO₂ ^--N的方法，其特征在于包括以下步骤：

将所述海洋好氧反硝化盐单胞菌用接种环接种到活化培养基中，然后于30℃、100r/min条件下震荡培养48h；

向预先加入养殖废水的生物反应器中接入碳源和活化后菌株的培养液10mL，24h充气，稳定两天后，启动反应器的蠕动泵，即可对生物反应器中的废水进行NO₃ ^--N和NO₂ ^—N处理；

上述好氧反硝化盐单胞菌的碳源为乙酸钠，所述盐单胞菌反硝化的碳氮比为20。