CN111701073A - 一种基于胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种基于胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂及其制备方法和应用，通过酰胺化反应合成胶原蛋白模拟肽接枝改性透明质酸，然后通过胶原蛋白模拟肽与软骨表面的II型胶原蛋白的特异性识别插入作用，将透明质酸嵌合到软骨基质表面，从而获得一种基于胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂。该关节注射制剂既可以将透明质酸特异性结合在受损软骨组织表面，同时又赋予了受损软骨表面优异的抗非特异性吸附性能和润滑性能，能够用于制备软骨修复材料，治疗骨关节炎，改善受损软骨表面抗炎症因子以及润滑性能；还能够用作改善软骨修复材料摩擦性能的改性材料。

Description

一种基于胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂及其 制备方法和应用
技术领域
本发明属于生物医用材料领域，涉及一种关节注射制剂，具体涉及一种基于胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂及其制备方法和应用。
背景技术
关节炎是最常见的慢性疾病之一，而由急慢性软骨组织损伤造成的关节炎为世界公认的致残性疾病，其发病率约占关节炎疾病患者的30％，其治疗是至今尚未攻克的世界难题。针对急慢性软骨组织损伤造成的关节炎的传统外科治疗方法主要有关节镜下冲洗、微骨折术、关节磨削术等，但这些治疗方法存在不能彻底治愈以及需要多次微创手术等问题。
透明质酸(HA)是由β-1,4糖苷键和β-1,3-糖苷键交替链接的D-葡萄糖醛酸和D-N-乙酰葡萄糖胺构成，既是软骨细胞外基质的重要糖胺聚糖，也是滑液的主要组成成分，在保护软骨磨损中发挥着不可替代的作用。研究发现高分子量透明质酸(HA)具有优异的润滑性能和良好的抗炎症因子性能，在治疗骨关节炎中发挥着不可或缺的作用。目前临床上使用的关节注射制剂的主要成分为游离的透明质酸(HA)，通过向患处注射游离的透明质酸(HA)来改善软骨表面的润滑性能，减轻关节炎患者痛苦。但是在天然软骨表面，透明质酸(HA)是镶嵌在软骨表面的，相比游离的透明质酸具有更好的润滑能力。临床上注射的游离透明质酸虽然能够暂时缓解软骨组织损伤的进程，但它的寿命有限，因此需要频繁的注射和重复的给药。
II型胶原蛋白是关节软骨基质的主要组成成分，在正常软骨表面，II型胶原蛋白主要与覆盖在软骨表面的透明质酸和蛋白多糖等其它润滑成分共同保护软骨免于磨损。但随着退行性骨关节炎疾病的一步步恶化，软骨基质表面的润滑分子会逐渐降解并脱落，造成II型胶原蛋白的大面积暴露，导致软骨基质的润滑性能降低。
胶原蛋白模拟肽(Collagen mimic peptide,CMP)是由胶原蛋白重复单元甘氨酸-脯氨酸-羟脯氨酸(Gly-Pro-Hyp)组成的肽，可以通过其特异性识别胶原蛋白纤维的间隙区(gap regions)特异性结合在软骨基质表面。
目前尚未发现合成胶原蛋白模拟肽改性透明质酸，进而制备关节注射制剂用于治疗软骨损伤，以克服现有关节注射制剂与受损软骨表面不能结合以及需要多次注射和重复给药缺点的报导。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种基于胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂，该关节注射制剂既可以将透明质酸特异性结合在受损软骨组织表面，同时又赋予了受损软骨表面优异的抗非特异性吸附性能和润滑性能。
本发明的另一个目的在于提供一种基于胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂的制备方法，该方法通过酰胺化反应合成胶原蛋白模拟肽接枝改性透明质酸，然后通过胶原蛋白模拟肽与软骨表面的II型胶原蛋白的特异性识别插入作用，将透明质酸嵌合到软骨基质表面，从而获得一种基于胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂。
本发明的又一个目的是提供一种基于胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂在治疗软骨组织损伤造成的关节炎的药物中的应用，能够用于制备软骨修复材料，治疗骨关节炎，改善受损软骨表面抗炎症因子以及润滑性能；还能够用作改善软骨修复材料摩擦性能的改性材料。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种基于胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂，是采用胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂，其中胶原蛋白模拟肽改性透明质酸(CMP-HA)的结构式为：
Figure BDA0002519342540000021
其中n*＝1～20。
在上述技术方案中，所述胶原蛋白模拟肽序列为(Gly-Pro-Hyp)n*，其中n＝1～20。
另一方面，一种基于胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂的制备方法，按照下述步骤进行：
步骤1：向pH＝7.4的磷酸盐缓冲液中加入透明质酸，于常温下搅拌溶解得到混合液a，其中磷酸盐缓冲液的浓度为10mmol/L，由十二水合磷酸氢二钠和磷酸二氢钾配制而成；
步骤2：向步骤1得到的混合液a中加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐，于反应20-30℃下反应20-30min得到混合液b，其中1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和透明质酸的摩尔比为1：1；
步骤3：向步骤2得到的混合液b中加入胶原蛋白模拟肽，于反应20-30℃下反应1-3h得到混合液c，其中胶原蛋白模拟肽与透明质酸的摩尔比为(1-3):1；
步骤4：将步骤3得到的混合液c在去离子水中透析以除去催化剂及未反应单体，然后冷冻干燥得到粉末状的产物胶原蛋白模拟肽改性透明质酸(CMP-HA)，于-20℃下储存备用；
步骤5：将步骤4得到的胶原蛋白模拟肽改性透明质酸粉末溶解在pH＝7.4的磷酸盐缓冲液中，得到基于胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂，其中关节注射制剂的浓度为5-25mg/mL。
在上述技术方案中，所述步骤2和步骤3的反应体系中pH为5-6，优选为5.5。
在上述技术方案中，步骤3中所述胶原蛋白模拟肽与透明质酸的摩尔比优选为2:1。
在上述技术方案的步骤4中，将混合液c置于截留分子量为8000-14000Da的透析袋中，且在pH＝5的水溶液中透析2天，再在去离子水中透析12h。
另一方面，一种基于胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂在治疗软骨组织损伤造成的关节炎的药物中的应用，基于胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂结合II型胶原蛋白的能力为160ng/cm2，对牛血清蛋白和溶菌酶的非特异性吸附量分别为9.8ng/cm2和2.9ng/cm2，摩擦系数为、0.02。
本发明的优点和有益效果为：
(1)本发明的胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂具有很好的抗非特异性吸附性能，在溶菌酶(带正电荷)、牛血清蛋白(带负电荷)中非特性吸附量分别为2.9ng/cm2、9.8ng/cm2，远低于在II型胶原蛋白基质表面的非特异性吸附量，克服了受损软骨表面抗非特异性吸附性能差的缺点。
(2)本发明的胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂具有优异的润滑性能。在磷酸盐缓冲液(PBS，模拟生理环境)中的摩擦系数达0.02左右，克服了受损软骨表面润滑性能不足的缺点。
(3)本发明的胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂能够很好地延缓骨关节炎的进展。
(4)本发明的胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂可以自主结合在受损软骨表面，与软骨结合的方式天然无损害.
(5)本发明研制的胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂的制备方法较为简便，原料易于合成，且成本低廉，生物相容性好，有很好的可行性和实用性。
附图说明
图1是本发明基于胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂的合成路线图的。
图2是实施例3中的基于胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂治疗骨关节炎的效果图。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本发明方案，下面结合附图与具体实施例进一步说明本发明的技术方案。需要说明的是：下述实施例是说明性的，不是限定性的，不能以下述实施例来限定本发明的保护范围。以下实施例中所述的透明质酸均为食品级的透明质酸。基于胶原蛋白结合多肽改性透明质酸的关节注射制剂的合成路线图如图1所示。
本发明基于胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂的制备方法合成路线示意图如图1所示。
实施例一
1)胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的制备：
用十二水合磷酸氢二钠和磷酸二氢钾配制pH＝7.4的10mmol/L磷酸盐缓冲液。取1.2g透明质酸(HA)溶于120mL上述磷酸盐缓冲液中，用1.0mol/L盐酸将溶液的pH调至5，然后向溶液中加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和透明质酸重复单元摩尔比为1：1)，搅拌20min后加入胶原蛋白模拟肽(胶原蛋白模拟肽和透明质酸重复单元摩尔比为1：1)，用1mol/L盐酸将溶液的pH值维持在5，且在20℃下搅拌反应1小时。将反应后的溶液置于透析袋(MWCO：8000-14000Da)中，且在pH＝5.0的水溶液中透析2天，再在去离子水中透析12h。将透析后的溶液冻干得到粉末状的产物胶原蛋白模拟肽改性透明质酸(CMP-HA)，于-20℃下储存备用。
2)胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂的制备：
将10mg胶原蛋白模拟肽改性透明质酸(CMP-HA)粉末溶于2mL pH＝7.4的磷酸盐缓冲溶液中，至最终浓度为5mg/mL，即获得基于胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂。
3)结合II型胶原蛋白的测定：对制得的胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂的结合II型胶原蛋白能力进行测试，具体方法如下：
将II型胶原蛋白的QCM芯片(COL II)贴合到QCM系统的流通池内。以pH为7.4的磷酸缓冲液为流动相，流速为50μL/min。待基线平稳后，通入5mg/mL的胶原蛋白模拟肽改性透明质酸溶液，经流动相推动蛋白溶液到达芯片表面，由QCM系统测定实时变化曲线，读取频率变化值，并计算特异性吸附量，结果见表1。
表1胶原蛋白模拟肽以及所制得关节注射制剂结合COL II的能力
实施例 溶液 吸附量(ng/cm<sup>2</sup>)
对照组 CMP 150±30
实施例1 CMP-HA-5mg/ml 120±6.0
由表中数据可知，实施例1制备的基于胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂(CMP-HA-5mg/ml)结合II型胶原蛋白的能力为120ng/cm2，与胶原蛋白模拟肽结合II型胶原蛋白的吸附量几乎相同，表明制得的关节注射制剂能够很好地结合在受损软骨表面上。
4)抗非特异性吸附量测定：对制得的胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂的抗非特异性吸附性能进行测试，具体方法如下：
将胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂的QCM芯片(COL II-CMP-HA)贴合到QCM系统的流通池内。以pH为7.4的磷酸缓冲液为流动相，流速为50μL/min。待基线平稳后，通入1mg/mL的牛血清白蛋白或溶菌酶，经流动相推动蛋白溶液到达芯片表面，由QCM系统测定实时变化曲线，读取频率变化值，并计算非特异性吸附量，结果见表2。
5)摩擦系数测定与润滑性能评价：采用表面力仪对制得的胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的表面摩擦系数进行测定，评价其润滑性能，具体方法如下：
首先在云母片上修饰II型胶原蛋白基质，随后配置5mg/ml的胶原蛋白模拟肽改性透明质酸溶液，将修饰后的云母片置于其中，25℃条件下反应1h，反应后的云母片用无水乙醇、水依次清洗三次，氮气吹干。将修饰好的云母片固定于表面力仪测试系统内，测量其摩擦系数，重复测量3次，结果见表2。
表2不同基质表面的非特异性吸附量以及摩擦系数
Figure BDA0002519342540000061
由表中数据可知，实施例1制得的基于胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂(CMP-HA-5mg/ml)，对牛血清蛋白和溶菌酶的非特异性吸附量分别为27.9ng/cm2和8.1ng/cm2，远低于对照组II型胶原蛋白表面的吸附量。
由表中数据可知，实施例1制得的基于胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂(CMP-HA-5mg/ml)的摩擦系数为0.04，远低于II型胶原蛋白表面的摩擦系数0.30。
实施例二
1)胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的制备：
用十二水合磷酸氢二钠和磷酸二氢钾配制pH＝7.4的10mmol/L磷酸盐缓冲液。取1.2g透明质酸(HA)溶于120mL上述磷酸盐缓冲液中，用1.0mol/L盐酸将溶液的pH调至5，然后向溶液中加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和透明质酸重复单元摩尔比为1：1)，搅拌25min后加入胶原蛋白模拟肽(胶原蛋白模拟肽和透明质酸重复单元摩尔比为2：1)，用1mol/L盐酸将溶液的pH值维持在5.5，且在25℃下搅拌反应2小时。将反应后的溶液置于透析袋(MWCO：8000-14000Da)中，且在pH＝5.0的水溶液中透析2天，再在去离子水中透析12h。将透析后的溶液冻干得到粉末状的产物胶原蛋白模拟肽改性透明质酸(CMP-HA)，于-20℃下储存备用。
2)胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂的制备：
将30mg胶原蛋白模拟肽改性透明质酸(CMP-HA)溶于2mL pH＝7.4的磷酸盐缓冲溶液中，至最终浓度为15mg/mL，即获得基于胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂。
3)结合II型胶原蛋白的测定：测试方法同实例1，测试结果见表3。
表3胶原蛋白模拟肽以及所制得关节注射制剂结合COL II的能力
Figure BDA0002519342540000062
Figure BDA0002519342540000071
由表中数据可知，实施例2制得的基于胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂(CMP-HA-15mg/ml)结合II型胶原蛋白的能力为140ng/cm2，与胶原蛋白模拟肽结合II型胶原蛋白的吸附量几乎相同，表明制得的关节注射制剂能够很好地结合在受损软骨表面上。
4)抗非特异性吸附量测定：测试方法同实例1，测试结果见表4。
5)摩擦系数测定与润滑性能评价：测试方法同实例1，测试结果见表4。
表4不同基质表面的非特异性吸附量以及摩擦系数
Figure BDA0002519342540000072
由表中数据可知，实施例2制得的基于胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂(CMP-HA-15mg/ml)，牛血清蛋白和溶菌酶的非特异性吸附量分别为15.2ng/cm2和5.3ng/cm2，远低于对照组II型胶原蛋白表面的吸附量。
由表中数据可知，实施例2制得的基于胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂(CMP-HA-15mg/ml)的摩擦系数为0.03，远低于II型胶原蛋白表面的吸附量的摩擦系数0.30。
实施例三
1)胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的制备：
用十二水合磷酸氢二钠和磷酸二氢钾配制pH＝7.4的10mmol/L磷酸盐缓冲液。取1.2g透明质酸(HA)溶于120mL上述磷酸盐缓冲液中，用1.0mol/L盐酸将溶液的pH调至6，然后向溶液中加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和透明质酸重复单元摩尔比为1：1)，搅拌30min后加入胶原蛋白模拟肽(胶原蛋白模拟肽和透明质酸重复单元摩尔比为3：1)，用1mol/L盐酸将溶液的pH值维持在6，且在30℃下搅拌反应3小时。将反应后的溶液置于透析袋(MWCO：8000-14000Da)中，且在pH＝5.0的水溶液中透析2天，再在去离子水中透析12h。将透析后的溶液冻干得到粉末状的产物胶原蛋白模拟肽改性透明质酸(CMP-HA)，于-20℃下储存备用。
2)胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂的制备：
将50mg胶原蛋白模拟肽改性透明质酸(CMP-HA)溶于2mL pH＝7.4的磷酸盐缓冲溶液中，至最终浓度为25mg/mL，即获得基于胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂。
3)结合II型胶原蛋白的测定：测试方法同实例1，测试结果见表5。
表5胶原蛋白模拟肽以及所制得关节注射制剂结合COL II的能力
实施例 溶液 吸附量(ng/cm<sup>2</sup>)
对照组 CMP 150±30
实施例3 CMP-HA-25mg/ml 160±20
由表中数据可知，实施例3制得的基于胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂(CMP-HA-25mg/ml)结合II型胶原蛋白的能力为160ng/cm2，与胶原蛋白模拟肽结合II型胶原蛋白的吸附量几乎相同，表明制得的关节注射制剂能够很好地结合在受损软骨表面上。
4)抗非特异性吸附量测定：测试方法同实例1，测试结果见表6。
5)摩擦系数测定与润滑性能评价：测试方法同实例1，测试结果见表6。
表6不同基质表面的非特异性吸附量以及摩擦系数
Figure BDA0002519342540000081
由表中数据可知，实施例3制得的基于胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂(CMP-HA-25mg/ml)，牛血清蛋白和溶菌酶的非特异性吸附量分别为9.8ng/cm2和2.9ng/cm2，远低于对照组胶原蛋白植入凝胶基质表面吸附量。
由表中数据可知，实施例3制得的基于胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂(CMP-HA-25mg/ml)的摩擦系数为0.02，远低于单一胶原蛋白凝胶基质的摩擦系数0.30。
6)治疗骨关节炎效果评价：利用猪骨关节炎模型评价延缓骨关节炎进展的效果，具体方法如下：
该动物实验在山东省医药工业研究所药物安全性评价中心进行。取健康巴马香猪50只，将动物注射麻醉，然后将其仰卧在手术台上，四肢固定，碘伏常规皮肤消毒后在左后肢膝关节中间外侧形成一个直径6cm的皮肤切口，露出关节，推开髌骨，通过膝关节韧带的连接进行关节切开术，暴露股骨外髁；使用角膜环钻骨膜剥离器在股骨外髁分别形成一处直径6.0mm的缺损。将造模成功并存活的香巴猪随机分成A、B、C、D四组，6只/组。A组猪关节不做任何处理，做空白对照组，B组猪关节腔注射磷酸盐缓冲液(PBS)100μl，C组猪关节腔注射透明质酸(HA)100μl，D组注射胶原蛋白模拟肽改性透明质酸(CMP-HA)关节注射制剂100μl。术后将动物分笼饲养，标准动物饲料喂养，洁净饮水，室温保持于15-26℃，每日紫外线消毒，术后抗生素处理，肌注庆大霉素一只，每天两次，连续3天，预防术后感染。
检测：
(1)每天观察和记录动物的一般临床情况，每周测量动物的体重1次；
(2)术后1个月获得其关节软骨，测定相应指标；
(3)将所得香巴猪关节经脱钙脱水处理，切割出15μm×15μm软骨试样，石蜡包埋，随后进行番茄O染色，II型胶原蛋白免疫组化测定。
由图2可见，经切除部分软骨的香巴猪饲养后，关节软骨明显变薄，软骨表面粗糙不平整，不连续，具有明显的骨关节炎症状，表明骨关节炎模型造型成功。相比于对照组、PBS组、HA组，关节注射制剂治疗组软骨表面粗糙不平整状况得到改善，表明在关节注射制剂的作用下，软骨的磨损状况及降解状况得到了有效改善，进而有效的缓解了骨关节炎的病理进展。
本发明的胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂具有很好的抗非特异性吸附性能。在溶菌酶(带正电荷)、牛血清蛋白(带负电荷)中非特性吸附量分别为2.9ng/cm2、9.8ng/cm2，远低于在II型胶原蛋白基质表面的非特异性吸附量，克服了受损软骨表面抗非特异性吸附性能差的缺点；具有优异的润滑性能，在磷酸盐缓冲液(PBS，模拟生理环境)中的摩擦系数达0.02左右，克服了受损软骨表面润滑性能不足的缺点；够很好地延缓骨关节炎的进展；可以自主结合在受损软骨表面，与软骨结合的方式天然无损害；制备方法较为简便，原料易于合成，且成本低廉，生物相容性好，有很好的可行性和实用性。
尽管上面实施例结合附图对此发明进行了比较详细的描述，但此发明不局限于上述的具体实施方式，根据发明内容进行工艺参数的调整均可实现胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂的制备，且表现出与上述实施例基本一致的性能。应该说明的是，在不脱离本发明的核心的情况下，任何简单的变形、修改或者在本发明启示下能够不花费创造性劳动作出的各种形式的变换均落入本发明的保护范围。

Claims (7)

1.一种基于胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂，其特征在于：采用以下结构式的胶原蛋白模拟肽改性透明质酸制备而成：
Figure FDA0002519342530000011
其中，n*＝1～20。
2.如权利要求1所述的基于胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂的制备方法，包括以下步骤：
步骤1：向pH＝7.4的磷酸盐缓冲液中加入透明质酸，于常温下搅拌溶解得到混合液a，其中磷酸盐缓冲液的浓度为10mmol/L，由十二水合磷酸氢二钠和磷酸二氢钾配制而成；
步骤2：向步骤1得到的混合液a中加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐，于反应20-30℃下反应20-30min得到混合液b，其中1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和透明质酸的摩尔比为1：1；
步骤3：向步骤2得到的混合液b中加入胶原蛋白模拟肽，于反应20-30℃下反应1-3h得到混合液c，其中胶原蛋白模拟肽与透明质酸的摩尔比为(1-3):1；
步骤4：将步骤3得到的混合液c在去离子水中透析以除去催化剂及未反应单体，然后冷冻干燥得到粉末状的产物胶原蛋白模拟肽改性透明质酸，于-20℃以下储存备用；
步骤5：将步骤4得到的胶原蛋白模拟肽改性透明质酸粉末溶解在pH＝7.4的磷酸盐缓冲液中，得到基于胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂，其中关节注射制剂的浓度为5-25mg/mL。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述步骤2和步骤3的反应体系中pH为5-6。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤3中所述胶原蛋白模拟肽与透明质酸的摩尔比为2:1。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：在步骤4中，将混合液c置于截留分子量为8000-14000Da的透析袋中，且在pH＝5的水溶液中透析2天，再在去离子水中透析12h。
6.权利要求1所述的基于胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂在治疗软骨组织损伤造成的关节炎药物中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述基于胶原蛋白模拟肽改性透明质酸的关节注射制剂结合II型胶原蛋白的能力为160ng/cm2，对牛血清蛋白和溶菌酶的非特异性吸附量分别为9.8ng/cm2和2.9ng/cm2，摩擦系数为0.02。
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