CN111689914A - 一种具有1,2,4-三唑席夫碱的截短侧耳素衍生物及制备与应用 - Google Patents

一种具有1,2,4-三唑席夫碱的截短侧耳素衍生物及制备与应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于药物化学领域，特别涉及一种具有1,2,4‑三唑席夫碱的截短侧耳素衍生物及制备与应用。所述的具有1,2,4‑三唑席夫碱的截短侧耳素衍生物为式2化合物或其药学上可接受的盐，以及所述的式2化合物或其药学上可接受的盐的溶剂化合物、对映异构体、非对映异构体、互变异构体或其任意比例的混合物，包括外消旋混合物：该类化合物不仅具有良好的体外抗菌活性，还具有较沃尼妙林及瑞它莫林制备成本低的优势，因而特别适合作为新型抗菌药物用于防治人或动物细菌感染性疾病，尤其是耐药金黄色葡萄球菌引起的感染性疾病。
Figure DDA0002544687220000011

Description

一种具有1,2,4-三唑席夫碱的截短侧耳素衍生物及制备与 应用
技术领域
本发明属于药物化学领域，特别涉及一种具有1,2,4-三唑席夫碱的截短侧耳素衍生物及制备与应用。
背景技术
截短侧耳素(Pleuromutilin)(式1)是由侧耳菌Pleurotusmutiliz(Fr.)Sacc.和Pleurotus Passeckeranius Pilat产生的一类广谱的二萜烯类抗生素，是截短侧耳素类半合成衍生物的前体。截短侧耳素类化合物是一大类具有较好抗菌活性的抗生素家族，能够有效抑制大部分革兰氏阳性菌以及部分革兰氏阴性菌。截短侧耳素最早由Kavanagh等在1951年首次分离并进行初步鉴定。1976年，Knauseder等对截短侧耳素产生菌Clitoiluspasseckerianus的发酵条件、截短侧耳素的化学结构和生物合成途径进行了初步研究。
Figure BDA0002544687200000011
研究表明，截断侧耳素类化合物的作用靶点为细菌50S核糖体亚基的肽转移酶中心(PTC)，有别与临床广泛应用的其他抗菌药物。基于其独特的抗菌机制，该类抗菌药物对多药耐药革兰氏阳性菌、耐药性支原体及部分革兰氏阴性菌均由很强的抗菌活性，异于临床常见抗菌药母核结构，与其它结构类抗菌药之间不易产生交叉耐药性。
目前，通过对其C14侧链的改造，已有泰秒菌素(Tiamulin)和沃尼妙林(Valnemulin)两个兽用抗菌药，以及2007年通过美国FDA审批上市的瑞他妙林(Retapamulin)共三种抗菌药物成功上市。
截短侧耳素作为重要的医药中间体，可以合成动物专用抗生素和人用抗生素，用途广泛，市场开发成本低，而且项目建设期短，经济效益较好，因此我们可以对截短侧耳素类药物进行深入的研发。
发明内容
为了克服现有技术的不足和缺点，本发明的首要目的在于提供一种具有1,2,4-三唑席夫碱的截短侧耳素衍生物。
本发明的另一目的在于提供上述具有1,2,4-三唑席夫碱的截短侧耳素衍生物的制备方法。
本发明的再一目的在于提供上述具有1,2,4-三唑席夫碱的截短侧耳素衍生物的应用。
本发明目的通过以下技术方案实现：
一种具有1,2,4-三唑席夫碱的截短侧耳素衍生物，为式2化合物或其药学上可接受的盐，以及所述的式2化合物或其药学上可接受的盐的溶剂化合物、对映异构体、非对映异构体、互变异构体或其任意比例的混合物，包括外消旋混合物：
Figure BDA0002544687200000021
其中，R为
Figure BDA0002544687200000022
R1为氢原子、烷基、羟基、氨基、氰基、巯基、二甲氨基、二乙胺基、羟甲基、胺甲基、硝基、卤素、三卤代甲基、苯甲基、天然氨基酸酰氨基和碳原子数为1～6的烷氧基中的一种；
R2为氢原子、烷基、羟基、氨基、氰基、巯基、二甲氨基、二乙胺基、羟甲基、胺甲基、硝基、卤素、三卤代甲基、苯甲基、天然氨基酸酰氨基和碳原子数为1～6的烷氧基中的一种；
R3为氢原子、烷基、羟基、氨基、氰基、巯基、二甲氨基、二乙胺基、羟甲基、胺甲基、硝基、卤素、三卤代甲基、苯甲基、天然氨基酸酰氨基和碳原子数为1～6的烷氧基中的一种；
R4为氢原子、烷基、羟基、氨基、氰基、巯基、二甲氨基、二乙胺基、羟甲基、胺甲基、硝基、卤素、三卤代甲基、苯甲基、天然氨基酸酰氨基和碳原子数为1～6的烷氧基中的一种；
R5为氢原子、烷基、羟基、氨基、氰基、巯基、二甲氨基、二乙胺基、羟甲基、胺甲基、硝基、卤素、三卤代甲基、苯甲基、天然氨基酸酰氨基和碳原子数为1～6的烷氧基中的一种；
R6为氢原子、烷基、羟基、氨基、氰基、巯基、二甲氨基、二乙胺基、羟甲基、胺甲基、硝基、卤素、三卤代甲基、苯甲基、天然氨基酸酰氨基和碳原子数为1～6的烷氧基中的一种；
R7为氢原子、烷基、羟基、氨基、氰基、巯基、二甲氨基、二乙胺基、羟甲基、胺甲基、硝基、卤素、三卤代甲基、苯基、苯甲基、天然氨基酸酰氨基和碳原子数为1～6的烷氧基中的一种；
优选的，R1为氢原子，R2为氢原子，R3为氢原子；
或者R1为甲基，R2为氢原子，R3为氢原子；
或者R1为氢原子，R2为甲基，R3为氢原子；
或者R1为氢原子，R2为氢原子，R3为甲基；
或者R1为羟基，R2为氢原子，R3为氢原子；
或者R1为氢原子，R2为羟基，R3为氢原子；
或者R1为氢原子，R2为氢原子，R3为羟基；
或者R1为氟原子，R2为氢原子，R3为氢原子；
或者R1为氢原子，R2为氟原子，R3为氢原子；
或者R1为氢原子，R2为氢原子，R3为氟原子；
或者R1为硝基，R2为氢原子，R3为氢原子；
或者R1为氢原子，R2为硝基，R3为氢原子；
或者R1为氢原子，R2为氢原子，R3为硝基；
或者R1为氰基，R2为氢原子，R3为氢原子；
或者R1为氢原子，R2为氰基，R3为氢原子；
或者R1为氢原子，R2为氢原子，R3为氰基；
或者R1为氢原子，R2为氢原子，R3为二甲氨基；
或者R1为氢原子，R2为氢原子，R3为二乙胺基；
优选的，R4为氢原子或者R4为甲基；
优选的，R5为氢原子，R6为氢原子；
或者R5为溴原子，R6为氢原子；
或者R5为氢原子，R6为溴原子；
优选的，R7为氢原子或者R7为苯基；
上述优选结构的化合物的具体基团归纳如表1所示：
表1化合物编号及具体基团
Figure BDA0002544687200000041
Figure BDA0002544687200000051
所述的药学上可接受的盐优选为式2化合物与盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、醋酸、富马酸、马来酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、柠檬酸、苹果酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、谷氨酸或天冬氨酸形成的盐；
所述的药学上可接受的盐优选具有如下结构式：
Figure BDA0002544687200000052
所述的具有1,2,4-三唑席夫碱的截短侧耳素衍生物的制备方法，包含如下步骤：
(1)将截短侧耳素与对甲苯磺酰氯反应，得到如式3所示结构的中间体Ⅰ；
(2)以水合肼、二硫化碳为原料，通过加热回流反应并纯化，得到如式4所示结构的中间体Ⅱ(即肼基硫代酰肼)；
(3)以步骤(2)制得的中间体Ⅱ和冰乙酸为原料，通过加热回流反应并纯化，得到如式5所示结构的中间体Ⅲ(即4-氨基-5-甲基-4H-1,2,4-三唑-3-巯基)；
(4)以步骤(3)制得的中间体Ⅲ作为原料与各种取代醛反应，纯化，得到如式6所示结构的中间体Ⅳ；
(5)以步骤(1)制得的中间体Ⅰ作为原料，通过碘化钠进一步活化；然后与中间体Ⅳ进行加热回流反应，纯化，得到如式2所示结构的具有1,2,4-三唑席夫碱的截短侧耳素衍生物；
所述的中间体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ分别具有式3～6结构式；
Figure BDA0002544687200000053
Figure BDA0002544687200000061
步骤(1)中所述的反应优选采用吡啶作为溶剂，在0～5℃条件下反应3～5h；
步骤(1)中所述的截短侧耳素与对甲苯磺酰氯摩尔比为1:1.1；
步骤(2)中所述的反应的具体操作优选为：
采用水作为溶剂并加热至45～50℃，溶解水合肼；随后加入二硫化碳，然后将混合液在90～95℃条件下加热回流反应3～5h；
所述的水的用量优选为水合肼体积的3倍，所述的水合肼与二硫化碳的摩尔比优选为22:1；
步骤(2)中所述的纯化的具体操作优选为：
加热回流反应后冷却析晶，抽滤；将所得固体加水，加热溶解后再放冷，有无色针状晶体析出，抽滤，烘干，得到如式4所示结构的中间体Ⅱ；
步骤(3)中所述的反应的具体操作优选为：
采用冰乙酸作溶剂先溶解中间体Ⅱ，然后110～118℃加热回流反应3～5h；
步骤(3)中所述的中间体Ⅱ与冰乙酸的摩尔比优选为1:5；
步骤(3)中所述的纯化的具体操作优选为：110～118℃加热回流反应后冷却至20～30℃，减压蒸馏出过量的乙酸，用水重结晶(加热溶解后再放冷，有白色结晶析出)，抽滤，烘干；
步骤(4)中所述的反应的具体操作优选为：
采用无水乙醇为溶剂先溶解中间体Ⅲ，加热搅拌至完全溶解后加入取代醛，再在冰水浴条件下加入98wt％浓硫酸，然后在115～120℃条件下加热回流反应1～2h至取代醛消失；
所述的无水乙醇的体积用量优选为浓硫酸体积的30倍，所述的中间体Ⅲ与取代醛的摩尔比优选为1:1.2；
步骤(4)中所述的纯化的具体操作优选为：加热回流反应后静置冷却，然后抽滤，并用乙醇洗涤滤饼，烘干；
步骤(5)中所述的活化的具体操作优选为：
以乙腈作为溶剂先溶解中间体Ⅰ，再加入碘化钠和碱，75～80℃条件下加热回流1～3h；
所述的乙腈的体积用量(ml)优选为中间体Ⅰ质量(g)的30倍，所述的碱与中间体Ⅰ的摩尔比优选为2：1，所述的碘化钠的摩尔数优选为碱摩尔数的57％；
所述的碱优选为氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铯、碳酸钠、碳酸钾或碳酸铯；
步骤(5)中活化后与中间体Ⅳ反应具体操作优选为：
活化反应结束后，加入中间体Ⅳ，在70～80℃条件下加热回流反应4～6h；
所述的中间体Ⅰ和中间体Ⅳ的摩尔比优选为1:1；
所述的纯化的具体操作优选为：反应结束后萃取、洗涤、干燥、旋转蒸干、复溶、柱层析；
合成路线如下式所示：
Figure BDA0002544687200000071
所述的具有1,2,4-三唑席夫碱的截短侧耳素衍生物在制备抗菌产品中的应用；
所述的抗菌产品优选为治疗感染性疾病的药物；
所述的抗菌产品进一步优选为用于治疗由革兰氏阳性菌引起的感染性疾病的抗菌药物；
所述的感染性疾病为人或动物经耐药金黄色葡萄球菌或其他多药耐药菌感染引起的感染性疾病；
所述的药物可含有一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂；
所述的药物的制剂包括多种临床药物剂型，如片剂、注射液、脂质体纳米粒、控释剂等；
一种抗生素药物，含有有效量的具有1,2,4-三唑席夫碱的截短侧耳素衍生物，余量为药用辅料或其它可配伍的药物；
所述药用辅料是指常规的药用赋形剂，如溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂和粘合剂等；
所述其它可配伍的药物，指的是以有效剂量的具有1,2,4-三唑席夫碱的截短侧耳素衍生物为药物原料，再配伍其它天然药物或化学药品；
与现有技术相比，本发明具有如下优点及有益效果：
(1)本发明提供的截短侧耳素类化合物是未曾报道过的新类型化合物。
(2)本发明经过广泛而深入的研究，合成了大量全新结构的具有1,2,4-三唑席夫碱的截短侧耳素衍生物，并进行了广泛的抗菌活性筛选，首次发现该类化合物具有良好的体外抗菌活性，特别适合作为新型抗菌药物用于防治人或动物细菌感染性疾病，尤其是耐药金黄色葡萄球菌引起的感染性疾病。
(3)本发明制得的具有1,2,4-三唑席夫碱的截短侧耳素衍生物还具有较沃尼妙林(Valnemulin)及瑞它莫林(Retapamulin)制备成本低的优势。
附图说明
图1是化合物中间体Ⅱ的核磁图谱图。
图2是化合物中间体Ⅲ的核磁图谱图。
图3是化合物1的核磁图谱图。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1
(1)中间体Ⅰ制备：将10.0g(26.4mmol)截短侧耳素溶于20ml吡啶并置于冰浴；将5.5g(29.0mmol)对甲基苯磺酰氯溶于10ml吡啶，然后缓慢加入上述的截短侧耳素吡啶溶液，冰浴(0～5℃)搅拌该混合液3h后，依次加入冰水与三氯甲烷各50ml，再转移至分液漏斗中振摇，静置待其分层；取有机相，依次用4mol/L的硫酸100ml、饱和碳酸氢钠溶液100ml、去离子水100ml洗涤；洗涤后有机相减压蒸发有机溶液，往剩余固体中加入异丙醇20ml，加热溶解后再放冷，析出大量白色粉末，抽滤，并用异丙醇洗涤滤渣，烘干，得到如式3所示结构的产物中间体Ⅰ的纯品，产率76.8％。
(2)中间体Ⅱ制备：在装有温度计，滴液漏斗及冷凝器(上口连有尾气导出管)的三口烧瓶中加20ml 85％(350mmol)的水合肼及60ml水，控制温度在50℃左右。在电磁搅拌下于l h内滴加6ml(16mmol)CS2，然后将混合液在95℃回流4h，冷却析晶，抽滤，将所得固体加水30ml，加热溶解后再放冷，有无色针状晶体析出，抽滤，烘干，得到如式4所示结构的产物中间体Ⅱ的纯品，产率76％。其中，图1是中间体Ⅱ的核磁图谱图。
(3)中间体III制备：取3.18g(30mmol)步骤(2)制得的肼基硫代酰肼(中间体Ⅱ)于烧瓶中，加入8.6ml冰乙酸，在118℃条件下加热回流反应4h，冷至室温25℃，减压蒸馏出未反应的乙酸；用水重结晶，加热溶解后在放冷，有白色结晶析出，抽滤，烘干，得到如式5所示结构的中间体III，产率81％。其中，图2是中间体Ⅲ的核磁图谱图。
实施例2 22-O-[2-(4-(4-(亚苄基)氨基)-5-甲基-4H-1,2,4-三唑)]硫乙酰基妙林(化合物1)合成
(1)取中间体Ⅲ1g(8.7mmol)溶于30ml无水乙醇中，加热搅拌至完全溶解后加入苯甲醛1.06ml(10.4mmol)，再在冰水浴条件下加入98wt％浓硫酸1ml，然后在120℃条件下加热回流反应1h，TLC监测反应至结束，静置冷却，有固体析出，抽滤，乙醇洗涤滤饼，烘干，得到如式7所示结构的中间体Ⅳ-1；产率为69.87％。
Figure BDA0002544687200000091
(2)取中间体I 1g(1.8mmol)溶于30ml乙腈中，加入碘化钠0.31g(2.1mmol)和无水碳酸钾0.52g(3.7mmol)，78℃条件下加热回流反应1h，用TLC监测反应完全后，然后向混合液中加入中间体Ⅳ-1 0.39g(1.8mmol)，78℃继续加热回流反应4h，将反应液倒入分液漏斗中，加40ml氯仿萃取，并用氯化钠水溶液(15％w/v)洗涤两次并用无水硫酸钠干燥，取有机相；所得有机相旋转蒸干得混合物，经二氯甲烷复溶，加入100～200目硅胶2g充分混合，待溶剂挥发完后，将上述粗产物-硅胶粉混合物用柱层析进行纯化(200～300目硅胶粉为固定相，二氯甲烷：甲醇＝35：1(V:V)为流动相)，得到产物22-O-[2-(4-(4-(亚苄基)氨基)-5-甲基-4H-1,2,4-三唑)]硫乙酰基妙林(化合物1)的纯品。产率72.53％。其中，图3是化合物1的核磁图谱图。
实施例3 22-O-[2-(4-(4-(2-羟基亚苄基)氨基)-5-甲基-4H-1,2,4-三唑)]硫乙酰基妙林(化合物5)合成
(1)取中间体Ⅲ1g(8.7mmol)溶于30ml无水乙醇中，加热搅拌至完全溶解后加入2-羟基苯甲醛1.11ml(10.4mmol)，再在冰水浴条件下加入98wt％浓硫酸1ml，然后在115℃条件下加热回流反应1h，TLC监测反应至结束，静置冷却，有固体析出，抽滤，乙醇洗涤滤饼，烘干，得到如式8所示结构的中间体Ⅳ-5；产率为75.16％。
Figure BDA0002544687200000101
(2)取中间体I 1g(1.8mmol)溶于30ml乙腈中，加入碘化钠0.31g(2.1mmol)和无水碳酸钾0.52g(3.7mmol)，75℃条件下加热回流反应2h，用TLC监测反应完全后，然后向混合液中加入中间体Ⅳ-5 0.42g(1.8mmol)，70℃继续加热回流反应6h，将反应液倒入分液漏斗中，加40ml氯仿萃取，并用氯化钠水溶液(15％w/v)洗涤两次并用无水硫酸钠干燥，取有机相；所得有机相旋转蒸干得混合物，经二氯甲烷复溶，加入100～200目硅胶2g充分混合，待溶剂挥发完后，将上述粗产物-硅胶粉混合物用柱层析进行纯化(200～300目硅胶粉为固定相，二氯甲烷：甲醇＝50：1(V:V)为流动相)，得到产物22-O-[2-(4-(4-(2-羟基亚苄基)氨基)-5-甲基-4H-1,2,4-三唑)]硫乙酰基妙林(化合物5)的纯品。产率72.26％。
实施例4 22-O-[2-(4-(4-(4-羟基亚苄基)氨基)-5-甲基-4H-1,2,4-三唑)]硫乙酰基妙林(化合物7)合成
(1)取中间体Ⅲ1g(8.7mmol)溶于30ml无水乙醇中，加热搅拌至完全溶解后加入4-羟基苯甲醛1.13ml(10.4mmol)，再在冰水浴条件下加入98wt％浓硫酸1ml，然后在120℃条件下加热回流反应2h，TLC监测反应至结束，静置冷却，有固体析出，抽滤，乙醇洗涤滤饼，烘干，得到如式9所示结构的中间体Ⅳ-7；产率为73.58％。
Figure BDA0002544687200000111
(2)取中间体I 1g(1.8mmol)溶于30ml乙腈中，加入碘化钠0.31g(2.1mmol)和无水碳酸钾0.52g(3.7mmol)，78℃条件下加热回流反应3h，用TLC监测反应完全后，然后向混合液中加入中间体Ⅳ-7 0.42g(1.8mmol)，78℃继续加热回流反应4h，将反应液倒入分液漏斗中，加40ml氯仿萃取，并用氯化钠水溶液(15％w/v)洗涤两次并用无水硫酸钠干燥，取有机相；所得有机相旋转蒸干得混合物，经二氯甲烷复溶，加入100～200目硅胶2g充分混合，待溶剂挥发完后，将上述粗产物-硅胶粉混合物用柱层析进行纯化(200～300目硅胶粉为固定相，二氯甲烷：甲醇＝50：1(V:V)为流动相)，得到产物22-O-[2-(4-(4-(4-羟基亚苄基)氨基)-5-甲基-4H-1,2,4-三唑)]硫乙酰基妙林(化合物7)的纯品。产率74.49％。
实施例5 22-O-[2-(4-(4-(2-氟亚苄基)氨基)-5-甲基-4H-1,2,4-三唑)]硫乙酰基妙林(化合物8)合成
(1)取中间体Ⅲ1g(8.7mmol)溶于30ml无水乙醇中，加热搅拌至完全溶解后加入2-氟苯甲醛1.09ml(10.4mmol)，再在冰水浴条件下加入98wt％浓硫酸1ml，然后在118℃条件下加热回流反应1h，TLC监测反应至结束，静置冷却，有固体析出，抽滤，乙醇洗涤滤饼，烘干，得到如式10所示结构的中间体Ⅳ-8；产率为81.67％。
Figure BDA0002544687200000112
(2)取中间体I 1g(1.8mmol)溶于30ml乙腈中，加入碘化钠0.31g(2.1mmol)和无水碳酸钾0.52g(3.7mmol)，80℃条件下加热回流反应2h，用TLC监测反应完全后，然后向混合液中加入中间体Ⅳ-8 0.43g(1.8mmol)，80℃继续加热回流反应6h，将反应液倒入分液漏斗中，加40ml氯仿萃取，并用氯化钠水溶液(15％w/v)洗涤两次并用无水硫酸钠干燥，取有机相；所得有机相旋转蒸干得混合物，经二氯甲烷复溶，加入100～200目硅胶2g充分混合，待溶剂挥发完后，将上述粗产物-硅胶粉混合物用柱层析进行纯化(200～300目硅胶粉为固定相，二氯甲烷：甲醇＝40：1(V:V)为流动相)，得到产物22-O-[2-(4-(4-(2-氟亚苄基)氨基)-5-甲基-4H-1,2,4-三唑)]硫乙酰基妙林(化合物8)的纯品。产率70.18％。
实施例6 22-O-[2-(4-(4-(4-氟亚苄基)氨基)-5-甲基-4H-1,2,4-三唑)]硫乙酰基妙林(化合物10)合成
(1)取中间体Ⅲ1g(8.7mmol)溶于30ml无水乙醇中，加热搅拌至完全溶解后加入4-氟苯甲醛1.12ml(10.4mmol)，再在冰水浴条件下加入98wt％浓硫酸1ml，然后在120℃条件下加热回流反应1h，TLC监测反应至结束，静置冷却，有固体析出，抽滤，乙醇洗涤滤饼，烘干，得到如式11所示结构的中间体Ⅳ-10；产率为77.59％。
Figure BDA0002544687200000121
(2)取中间体I 1g(1.8mmol)溶于30ml乙腈中，加入碘化钠0.31g(2.1mmol)和无水碳酸钾0.52g(3.7mmol)，78℃条件下加热回流反应1h，用TLC监测反应完全后，然后向混合液中加入中间体Ⅳ-10 0.43g(1.8mmol)，78℃继续加热回流反应4h，将反应液倒入分液漏斗中，加40ml氯仿萃取，并用氯化钠水溶液(15％w/v)洗涤两次并用无水硫酸钠干燥，取有机相；所得有机相旋转蒸干得混合物，经二氯甲烷复溶，加入100～200目硅胶2g充分混合，待溶剂挥发完后，将上述粗产物-硅胶粉混合物用柱层析进行纯化(200～300目硅胶粉为固定相，二氯甲烷：甲醇＝40：1(V:V)为流动相)，得到产物22-O-[2-(4-(4-(4-氟亚苄基)氨基)-5-甲基-4H-1,2,4-三唑)]硫乙酰基妙林(化合物10)的纯品。产率83.27％。
实施例7 22-O-[2-(4-(4-(4-硝基亚苄基)氨基)-5-甲基-4H-1,2,4-三唑)]硫乙酰基妙林(化合物13)合成
(1)取中间体Ⅲ1g(8.7mmol)溶于30ml无水乙醇中，加热搅拌至完全溶解后加入4-硝基苯甲醛1.05ml(10.4mmol)，再在冰水浴条件下加入98wt％浓硫酸1ml，然后在115℃条件下加热回流反应2h，TLC监测反应至结束，静置冷却，有固体析出，抽滤，乙醇洗涤滤饼，烘干，得如式12所示结构中间体Ⅳ-13；产率为74.53％。
Figure BDA0002544687200000131
(2)取中间体I 1g(1.8mmol)溶于30ml乙腈中，加入碘化钠0.31g(2.1mmol)和无水碳酸钾0.52g(3.7mmol)，75℃条件下加热回流反应3h，用TLC监测反应完全后，然后向混合液中加入中间体Ⅳ-13 0.47g(1.8mmol)，78℃继续加热回流反应5h，将反应液倒入分液漏斗中，加40ml氯仿萃取，并用氯化钠水溶液(15％w/v)洗涤两次并用无水硫酸钠干燥，取有机相；所得有机相旋转蒸干得混合物，经二氯甲烷复溶，加入100～200目硅胶2g充分混合，待溶剂挥发完后，将上述粗产物-硅胶粉混合物用柱层析进行纯化(200～300目硅胶粉为固定相，二氯甲烷：甲醇＝45：1(V:V)为流动相)，得到产物22-O-[2-(4-(4-(4-硝基亚苄基)氨基)-5-甲基-4H-1,2,4-三唑)]硫乙酰基妙林(化合物13)的纯品。产率81.89％。
实施例8 22-O-[2-(4-(4-(4-氰基亚苄基)氨基)-5-甲基-4H-1,2,4-三唑)]硫乙酰基妙林(化合物16)合成
(1)取中间体Ⅲ1g(8.7mmol)溶于30ml无水乙醇中，加热搅拌至完全溶解后加入4-氰基苯甲醛1.14ml(10.4mmol)，再在冰水浴条件下加入98wt％浓硫酸1ml，然后在120℃条件下加热回流反应1h，TLC监测反应至结束，静置冷却，有固体析出，抽滤，乙醇洗涤滤饼，烘干，得到如式13所示结构的中间体Ⅳ-16；产率为70.86％。
Figure BDA0002544687200000132
Figure BDA0002544687200000141
(2)取中间体I 1g(1.8mmol)溶于30ml乙腈中，加入碘化钠0.31g(2.1mmol)和无水碳酸钾0.52g(3.7mmol)，80℃条件下加热回流反应2h，用TLC监测反应完全后，然后向混合液中加入中间体Ⅳ-16 0.44g(1.8mmol)，70℃继续加热回流反应6h，将反应液倒入分液漏斗中，加40ml氯仿萃取，并用氯化钠水溶液(15％w/v)洗涤两次并用无水硫酸钠干燥，取有机相；所得有机相旋转蒸干得混合物，经二氯甲烷复溶，加入100～200目硅胶2g充分混合，待溶剂挥发完后，将上述粗产物-硅胶粉混合物用柱层析进行纯化(200～300目硅胶粉为固定相，二氯甲烷：甲醇＝40：1(V:V)为流动相)，得到产物22-O-[2-(4-(4-(4-氰基亚苄基)氨基)-5-甲基-4H-1,2,4-三唑)]硫乙酰基妙林(化合物16)的纯品。产率74.67％。
实施例9 22-O-[2-(4-(4-(4-二甲氨基亚苄基)氨基)-5-甲基-4H-1,2,4-三唑)]硫乙酰基妙林(化合物17)合成
(1)取中间体Ⅲ1g(8.7mmol)溶于30ml无水乙醇中，加热搅拌至完全溶解后加入4-二甲氨基苯甲醛1.42ml(10.4mmol)，再在冰水浴条件下加入98wt％浓硫酸1ml，然后在118℃条件下加热回流反应1h，TLC监测反应至结束，静置冷却，有固体析出，抽滤，乙醇洗涤滤饼，烘干，得如式14所示结构的中间体Ⅳ-17；产率为84.68％。
Figure BDA0002544687200000142
(2)取中间体I 1g(1.8mmol)溶于30ml乙腈中，加入碘化钠0.31g(2.1mmol)和无水碳酸钾0.52g(3.7mmol)，78℃条件下加热回流反应3h，用TLC监测反应完全后，然后向混合液中加入中间体Ⅳ-17 0.47g(1.8mmol)，80℃继续加热回流反应4h，将反应液倒入分液漏斗中，加40ml氯仿萃取，并用氯化钠水溶液(15％w/v)洗涤两次并用无水硫酸钠干燥，取有机相；所得有机相旋转蒸干得混合物，经二氯甲烷复溶，加入100～200目硅胶2g充分混合，待溶剂挥发完后，将上述粗产物-硅胶粉混合物用柱层析进行纯化(200～300目硅胶粉为固定相，二氯甲烷：甲醇＝55：1(V:V)为流动相)，得到产物22-O-[2-(4-(4-(4-二甲氨基亚苄基)氨基)-5-甲基-4H-1,2,4-三唑)]硫乙酰基妙林(化合物17)的纯品。产率76.61％。
效果实施例
(1)体外抑菌实验
实验采用的是肉汤稀释法。实验对照药物选用截短侧耳素、泰妙菌素、沃尼妙林和瑞他妙林。沃尼妙林为截短侧耳素类抗生素，是该类抗生素中目前应用广泛的兽用抗生素，瑞他妙林则作为第一个人用截短侧耳素类抗菌药物于2007年通过美国FDA审批上市。
实验中所用的菌株为：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)ATCC 43300。
目标化合物储备液配制：分别精密称取6.4mg目标化合物置于10mL容量瓶中，用0.25mLDMSO溶解，加入9.5mL蒸馏水，0.25mL吐温80定容，得到储备液，用0.22μm滤膜过除菌，小管分装，-20℃保存。对照药物截短侧耳素、泰妙菌素、沃尼妙林、瑞他妙林同样按照上述方法配制。
菌液的配制：取出在-20℃下保存完好的菌株接种在新MH平板上，37℃培养24h后挑取单菌落接种在MH培养基中再次培养24h；选取单菌落转移到无菌的生理盐水中并调整其浊度为0.5McF。此时菌液浓度为105CFU/mL。
MIC板制备：分别将目标化合物储备液(2560μg/mL)稀释4倍，得到浓度为得到浓度为640μg/mL的目标化合物溶液；取无菌96孔板，第1孔加入180μLMH肉汤培养基，第2至10孔分别加入100μL MH肉汤培养基，往第1孔加入20μL浓度为浓度为640μg/mL的抗菌药物，混匀后取100μL加入第2孔，混匀，再吸取100μL至第3孔，依次类推，第12孔吸取100μL弃去。此时各孔药物浓度依次为：64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.06、0.03μg/mL，每个浓度药物做三组平行。
接种菌液：在1至12孔各加入100μL菌液，使每孔最终菌液浓度约为5×105CFU/mL，第1孔至第12孔药物浓度分别为32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.06、0.03、0.015μg/mL。接种好的96孔板置于37℃培养箱进行培养，24h观察菌液生长情况。对照药物截短侧耳素、泰妙菌素、沃尼妙林、瑞他妙林同法测定以在小孔内完全抑制细菌生长的最低药物浓度为MIC，阳性对照孔(即不含药物)内细菌需明显生长。当在微量肉汤稀释法出现单一跳孔时，记录抑制细菌的最高药物浓度，如出现多处跳孔则需重复试验。
表3为MIC结果，可知目标化合物对选用菌株具有良好的抑菌活性，具有良好的抑制耐药金黄色葡萄球菌活性，特别适合作为新型抗菌药物用于防治人或动物或耐药金葡或多药耐药菌引起的感染性疾病。
表3体外抑菌数据
Figure BDA0002544687200000161
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种具有1,2,4-三唑席夫碱的截短侧耳素衍生物，其特征在于为式2化合物或其药学上可接受的盐，以及所述的式2化合物或其药学上可接受的盐的溶剂化合物、对映异构体、非对映异构体、互变异构体或其任意比例的混合物，包括外消旋混合物：
Figure FDA0002544687190000011
其中，R为
Figure FDA0002544687190000012
R1为氢原子、烷基、羟基、氨基、氰基、巯基、二甲氨基、二乙胺基、羟甲基、胺甲基、硝基、卤素、三卤代甲基、苯甲基、天然氨基酸酰氨基和碳原子数为1～6的烷氧基中的一种；
R2为氢原子、烷基、羟基、氨基、氰基、巯基、二甲氨基、二乙胺基、羟甲基、胺甲基、硝基、卤素、三卤代甲基、苯甲基、天然氨基酸酰氨基和碳原子数为1～6的烷氧基中的一种；
R3为氢原子、烷基、羟基、氨基、氰基、巯基、二甲氨基、二乙胺基、羟甲基、胺甲基、硝基、卤素、三卤代甲基、苯甲基、天然氨基酸酰氨基和碳原子数为1～6的烷氧基中的一种；
R4为氢原子、烷基、羟基、氨基、氰基、巯基、二甲氨基、二乙胺基、羟甲基、胺甲基、硝基、卤素、三卤代甲基、苯甲基、天然氨基酸酰氨基和碳原子数为1～6的烷氧基中的一种；
R5为氢原子、烷基、羟基、氨基、氰基、巯基、二甲氨基、二乙胺基、羟甲基、胺甲基、硝基、卤素、三卤代甲基、苯甲基、天然氨基酸酰氨基和碳原子数为1～6的烷氧基中的一种；
R6为氢原子、烷基、羟基、氨基、氰基、巯基、二甲氨基、二乙胺基、羟甲基、胺甲基、硝基、卤素、三卤代甲基、苯甲基、天然氨基酸酰氨基和碳原子数为1～6的烷氧基中的一种；
R7为氢原子、烷基、羟基、氨基、氰基、巯基、二甲氨基、二乙胺基、羟甲基、胺甲基、硝基、卤素、三卤代甲基、苯基、苯甲基、天然氨基酸酰氨基和碳原子数为1～6的烷氧基中的一种。
2.根据权利要求1所述的具有1,2,4-三唑席夫碱的截短侧耳素衍生物，其特征在于：
R1为氢原子，R2为氢原子，R3为氢原子；
或者R1为甲基，R2为氢原子，R3为氢原子；
或者R1为氢原子，R2为甲基，R3为氢原子；
或者R1为氢原子，R2为氢原子，R3为甲基；
或者R1为羟基，R2为氢原子，R3为氢原子；
或者R1为氢原子，R2为羟基，R3为氢原子；
或者R1为氢原子，R2为氢原子，R3为羟基；
或者R1为氟原子，R2为氢原子，R3为氢原子；
或者R1为氢原子，R2为氟原子，R3为氢原子；
或者R1为氢原子，R2为氢原子，R3为氟原子；
或者R1为硝基，R2为氢原子，R3为氢原子；
或者R1为氢原子，R2为硝基，R3为氢原子；
或者R1为氢原子，R2为氢原子，R3为硝基；
或者R1为氰基，R2为氢原子，R3为氢原子；
或者R1为氢原子，R2为氰基，R3为氢原子；
或者R1为氢原子，R2为氢原子，R3为氰基；
或者R1为氢原子，R2为氢原子，R3为二甲氨基；
或者R1为氢原子，R2为氢原子，R3为二乙胺基。
3.根据权利要求1所述的具有1,2,4-三唑席夫碱的截短侧耳素衍生物，其特征在于：
R4为氢原子或者R4为甲基。
4.根据权利要求1所述的具有1,2,4-三唑席夫碱的截短侧耳素衍生物，其特征在于：
R5为氢原子，R6为氢原子；
或者R5为溴原子，R6为氢原子；
或者R5为氢原子，R6为溴原子。
5.根据权利要求1所述的具有1,2,4-三唑席夫碱的截短侧耳素衍生物，其特征在于：
R7为氢原子或者R7为苯基。
6.根据权利要求1所述的具有1,2,4-三唑席夫碱的截短侧耳素衍生物，其特征在于：
所述的药学上可接受的盐优选为式2化合物与盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、醋酸、富马酸、马来酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、柠檬酸、苹果酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、谷氨酸或天冬氨酸形成的盐。
7.权利要求1～6任一项所述的具有1,2,4-三唑席夫碱的截短侧耳素衍生物的制备方法，其特征在于包含如下步骤：
(1)将截短侧耳素与对甲苯磺酰氯反应，得到如式3所示结构的中间体Ⅰ；
(2)以水合肼、二硫化碳为原料，通过加热回流反应并纯化，得到如式4所示结构的中间体Ⅱ；
(3)以步骤(2)制得的中间体Ⅱ和冰乙酸为原料，通过加热回流反应并纯化，得到如式5所示结构的中间体Ⅲ；
(4)以步骤(3)制得的中间体Ⅲ作为原料与各种取代醛反应，纯化，得到如式6所示结构的中间体Ⅳ；
(5)以步骤(1)制得的中间体Ⅰ作为原料，通过碘化钠进一步活化；然后与中间体Ⅳ进行加热回流反应，纯化，得到如式2所示结构的具有1,2,4-三唑席夫碱的截短侧耳素衍生物；
所述的中间体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ分别具有式3～6结构式；
Figure FDA0002544687190000031
Figure FDA0002544687190000041
8.权利要求1～6任一项所述的具有1,2,4-三唑席夫碱的截短侧耳素衍生物在制备抗菌产品中的应用。
9.根据权利要求8所述的具有1,2,4-三唑席夫碱的截短侧耳素衍生物在制备抗菌产品中的应用，其特征在于：
所述的药物含有一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
10.一种抗生素药物，其特征在于含有有效量的具有1,2,4-三唑席夫碱的截短侧耳素衍生物，余量为药用辅料或其它可配伍的药物。
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