CN111683662A

CN111683662A - 取代嘧啶类化合物及其药物组合物和治疗方法

Info

Publication number: CN111683662A
Application number: CN201880069833.XA
Authority: CN
Inventors: 陈志宏
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2017-08-28
Filing date: 2018-08-27
Publication date: 2020-09-18
Anticipated expiration: 2038-08-27
Also published as: EP3675860A1; US20200190068A1; CN111683662B; EP3675860A4; US11440904B2; EP3675860B1; US11981665B2; US20230109688A1; WO2019046163A1

Abstract

本发明提供了对某些酪氨酸激酶(例如布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)和/或黏着斑激酶(FAK)，细胞外信号调节激酶(ERK))的活性具有抑制作用的新型嘧啶衍生物和类似物，其药物组合物，以及治疗、减轻或预防由酪氨酸激酶介导的某些疾病或障碍的方法，例如癌症、肿瘤、纤维症、炎症性疾病、自身免疫性疾病、糖尿病或免疫介导性疾病。

Description

取代嘧啶类化合物及其药物组合物和治疗方法

优先权要求和相关专利申请

本申请要求2017年8月28日提交的美国临时申请案62/550,803的优先权，并通过引用将其全部内容并入本申请。

技术领域

本发明总体上涉及新型化合物及其治疗应用。具体地，本发明提供了对某些酪氨酸激酶(例如布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)和/或黏着斑激酶(FAK)，细胞外信号调节激酶(ERK))的活性具有抑制作用的新型嘧啶衍生物和类似物，其药物组合物，以及治疗、减轻或预防由酪氨酸激酶介导的某些疾病或病症的方法，例如癌症、炎症性疾病、纤维症、自身免疫性疾病或免疫介导性疾病。

发明背景

癌症是一组关于异常细胞生长的疾病，有可能侵袭或扩散到身体的其他部位。目前有100多种危害人类的癌症。2015年，超过9000万人患有癌症，每年约有1400万新病例发生，导致约15％的人死亡。最常见的癌症类型包括男性的肺癌、前列腺癌、结肠直肠癌和胃癌，以及女性的乳腺癌、结肠直肠癌、肺癌和宫颈癌。尽管有许多治疗手段，比如手术、化疗、放疗、激素治疗、靶向治疗和姑息治疗，但癌症仍然是人类最大的健康威胁。

炎症性疾病是一大类疾病，为多种人类疾病的基础。炎症是人体对受伤和感染的保护性反应，是个复杂的过程，涉及多种细胞类型以及不同的血液成分。炎症过程迅速破坏和消除外来和受损细胞，并将感染或受伤的组织与身体其他部分隔离开来。当炎症变得不受控制时，就会出现炎症性疾病，并破坏健康的组织。当免疫系统在没有感染的情况下错误地触发炎症反应时，许多炎症性疾病就会产生，例如类风湿性关节炎的关节炎症。还有些炎症性疾病是对组织损伤或创伤的反应，但会影响整个身体。总的来说，在西方社会，免疫介导的炎症疾病的患病率估计为5％-7％。

目前可用于治疗疾病或障碍的疗法和手段不够充分，所述疾病或障碍如癌症、肿瘤、纤维化、炎性疾病、自身免疫疾病或免疫介导的疾病。人类仍然迫切需要新型的、改进的疗法来有效地应对这些疾病和障碍。

发明内容

本发明部分基于对新型嘧啶衍生物和类似物的意外发现，所述嘧啶衍生物和类似物对某些酪氨酸激酶，例如布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)和/或黏着斑激酶(FAK)，及其药物组合物表现出抑制活性的作用。本文公开的嘧啶衍生物表现出有效抑制BTK和/或其他非受体酪氨酸激酶TEC家族，例如骨髓酪氨酸激酶(BMX)或白细胞介素-2诱导型T细胞激酶(ITK)。此外，某些嘧啶衍生物能有效抑制耐药突变BTK(C481S)、FAK以及BTK。此外，本申请公开的一些嘧啶衍生物能有效抑制耐药突变BTK(C481S)、FAK和细胞外信号调节激酶(ERK)以及BTK。

本申请还公开了治疗、减轻或预防由酪氨酸激酶介导的某些疾病或障碍的方法，所述酪氨酸激酶例如BTK、BTK(C481S)、FAK、ERK激酶和/或其他TEC家族激酶。这些疾病和障碍包括癌症、炎症性疾病、纤维症、自身免疫性疾病、糖尿病或免疫介导性疾病。

一方面，本发明总体上涉及一种化合物，具有结构式(I):

其中，

X是NH(CH₂)_n、O或S，n为0或1；

A是5-7元、脂肪族或芳香族、环状或杂环部分；

B是5-7元、脂肪族或芳香族、环状或杂环部分；

R_1’可以不存在，且R₁和R_1’(如果存在)各自独立地选自卤素、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、氰基、羟基、氨基、羧酰胺、磺酰胺和R_1x，其中R_1x选自:

可选地R₁和R_1’中的至少一个是包含亲电部分的基团，可选地R₁和R_1’共同形成4-6元脂肪族或芳香族环状或杂环部分；

R₂和R₃各自独立地选自:氢、卤素、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、或R₂和R₃共同形成5-7元、脂肪族或芳香族、环状或杂环部分；

R₄和R₅各自独立地选自氢、卤素、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、氰基、羟基、氨基、取代的羧酸酰胺、取代的磺酰胺，或R₄和R₅共同形成6-15元脂肪族、环状或杂环部分，

或其药学上可接受的形式。

另一方面，本发明总体上涉及一种药物组合物，其包含一定量的化合物,具有结构式(I):

其中，

X是NH(CH₂)_n、O或S，n为0或1；

A是5-7元、脂肪族或芳香族、环状或杂环部分；

B是5-7元、脂肪族或芳香族、环状或杂环部分；

或其药学上可接受的形式，可有效治疗、预防或减轻哺乳动物(包括人)的一种或多种疾病或障碍，以及药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂。

在又一方面，本发明总体上涉及一种包括本发明公开的药物组合物的单位剂型。

另一方面，本发明总体上涉及一种方法，用于治疗、减轻或预防疾病或障碍，其特征在于，包括向有需要的受试者施用一种药物组合物，所述药物组合物包含具有结构式(I)的化合物:

其中，

X是NH(CH₂)_n、O或S，n为0或1；

A是5-7元、脂肪族或芳香族、环状或杂环部分；

B是5-7元、脂肪族或芳香族、环状或杂环部分；

或其药学上可接受的形式，可有效治疗、预防或减轻哺乳动物(包括人)中的一种或多种癌症、炎症性疾病、纤维症、自身免疫性疾病、糖尿病或免疫介导性疾病或相关疾病或障碍，和药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂。

另一方面，本发明总体上涉及一种治疗、减轻或预防疾病或障碍的方法。该方法包括给有需要的受试者施用本申请公开的药物组合物，其中所述疾病或障碍选自癌症、炎症性疾病、纤维症、自身免疫疾病或免疫介导性疾病或相关疾病或病症。

另一方面，本发明总体上涉及一种治疗、减轻或预防疾病或障碍的方法。该方法包括向有需要的受试者施用一种药物组合物，所述药物组合物包含对布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)和/或黏着斑激酶(FAK)的活性具有抑制作用的化合物。在某些方法实施例中，所述化合物具有结构式(I):

其中，

X是NH(CH₂)_n、O或S，n为0或1；

A是5-7元、脂肪族或芳香族、环状或杂环部分；

B是5-7元、脂肪族或芳香族、环状或杂环部分；

或其药学上可接受的形式。

在又一方面，本发明总体上涉及一种方法，用于治疗、减轻或预防疾病或障碍，包括向有需要的受试者施用一种药物组合物，所述药物组合物包含具有以下结构式的化合物:

在又一方面，本发明总体上涉及本申请公开的化合物和药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂在制备用于治疗疾病或障碍的药物中的应用。

附图说明

结合附图和以下描述，本发明的上述内容和目的、特征将变得显而易见。附图分别为:

图1示例性地示出了Ramos细胞中p-BTK(Y223)的蛋白质印迹分析。

图2示例性地示出了BTK IC₅₀数据。

图3示例性地示出了BTK(C481S)IC₅₀数据。

图4示例性地示出了BMX IC₅₀数据。

图5示例性地示出了ITK IC₅₀数据。

图6示例性地示出了FAK IC₅₀数据。

图7示例性地示出了ERK IC₅₀数据。

定义

除非另有定义，本申请所使用的技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。本申请出现的“Compound”表示“化合物”。关于有机化学的一般原理，以及特定的功能基元和反应，在《有机化学》托马斯·索雷尔，大学科学书籍，索萨利托:2006中有描述。

本发明的某些化合物可以以特定的几何或立体异构形式存在。本发明所构想的这些化合物，包括顺式和反式异构体、R-和S-对映异构体、非对映异构体、(d)-同分异构体、(l)-同分异构体、其外消旋混合物和其他混合物，都落在本发明的范围内。另外的不对称碳原子可以存在于取代基中，例如烷基。所有这些异构体及其混合物都包括在本发明中。

含有任何多种异构体比例的异构体混合物可按照本发明进行使用。例如，在仅结合两种异构体的情况下，本发明考虑了包括50∶50、60∶40、70∶30、80∶20、90∶10、95∶5、96∶4、97∶3、98∶2、99∶1或100∶0异构体比例的混合物。本领域普通技术人员将容易理解，对于更复杂的异构体混合物，可以考虑类似的比例。

例如，如果需要本发明化合物的特定对映体，可以通过不对称合成或使用手性助剂衍生物来制备，所得非对映体混合物被分离，助剂基团裂解以提供纯所需对映体。或者，当分子含有碱性官能团如氨基，或酸性官能团如羧基时，用合适的光学活性酸或碱形成非对映体盐，随后通过本领域熟知的分步结晶或色谱法对形成的非对映异构体进行拆分，进而复原纯对映异构体。

本发明也构想了本公开的化合物的溶剂化物和多晶型物。本发明化合物的溶剂化物包括，例如水合物。

具体官能团和化学术语的定义将在下面更详细地描述。所列出的范围值旨在包含该范围内的每个值和子范围。例如，“C1-6烷基”表示包括C₁、C₂、C₃、C₄、C₅、C₆、C_1-6、C_1-5、C_1-4、C_1-3、C_1-2、C_2-6、C_2-5、C_2-4、C_2-3、C_3-6、C_3-5、C_3-4、C_4-6、C_4-5和C_5-6烷基。

如本文所用，术语“烷基”是指仅由碳原子和氢原子组成的直链或支链基团，不含不饱和键，具有1至10个碳原子(例如，C_1-10烷基)。本文中，诸如数字“1到10”指给定范围内的每个整数；例如，“1至10个碳原子”意味着烷基可以由1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子、达到并包括10个碳原子，本定义也涵盖未指定数值范围的术语“烷基”。在一些实施例中，“烷基”可以是C_1-6烷基。在一些实施例中，烷基具有1至10个、1至8个、1至6个或1至3个碳原子。代表性的饱和直链烷基包括但不限于，-甲基，-乙基，-正丙基，-正丁基，-正戊基和-正己基；而饱和支链烷基包括但不限于，-异丙基，-仲丁基，-异丁基，-叔丁基，-异戊基，2-甲基丁基，3-甲基丁基，2-甲基戊基，3-甲基戊基，4-甲基戊基，2-甲基己基，3-甲基己基，4-甲基己基，5-甲基己基，2，3-二甲基丁基等。烷基通过单键与母体分子相连。除非说明书中另有说明，否则烷基可任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地包括:酰基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷芳基、环烷基、芳烷基、芳基、芳氧基、氨基、酰胺基、脒基、亚氨基、叠氮化物、碳酸盐、氨基甲酸盐、羰基、杂烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂环烷基、羟基、氰基、卤素(F、Cl、Br、I)、卤代烷氧基、卤代烷基、酯、醚、巯基、硫代、烷硫基、芳硫基、硫代羰基、硝基、氧代、磷酸盐、膦酸盐、亚膦酸盐、甲硅烷基、亚磺酰基、磺酰基、磺酰胺基、增效砜、磺酸盐、尿素、-Si(R^a)₃、-OR^a、-SR^a、-OC(O)-R^a、-N(R^a)₂、-C(O)R_a、-C(O)OR^a、-OC(O)N(R^a)₂、-C(O)N(R^a)₂、-N(R^a)C(O)OR^a、-N(R^a)C(O)R^a、-N(R^a)C(O)N(R^a)₂、-N(R^a)C(NR^a)N(R^a)₂、-N(R^a)S(O)_tN(R^a)₂(其中t为1或2)、-P(＝O)(R^a)(R^a),或者-O-P(＝O)(OR^a)₂，其中每个R^a独立地是氢、烷基、卤代烷基、碳环基、碳环基烷基、芳基、芳烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、杂芳基或杂芳基烷基，并且如本文所定义的，这些部分均可以任选地被取代。在非限制性实施例中，取代的烷基可选自氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、2-氟乙基、3-氟丙基、羟甲基、2-羟乙基、3-羟丙基、苄基和苯乙基。

如本文所用，术语“烷氧基”指的是通过氧连接到母体分子结构上的直链、支链、饱和环状构型的-O-烷基基团，包括1-10个碳原子(C_1-10)及其组合。例子包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、环丙氧基、环己氧基等。“低级烷氧基”是指含有1至6个碳的烷氧基。在一些实施方案中，C_1-3烷氧基是指包含1至3个碳原子的直链和支链烷基的烷氧基。除非说明书中另有说明，否则烷氧基可任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地包括:酰基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷芳基、环烷基、芳烷基、芳基、芳氧基、氨基、酰胺基、脒基、亚氨基、叠氮化物、碳酸盐、氨基甲酸盐、羰基、杂烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂环烷基、羟基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、酯、醚、巯基、硫代、烷硫基、芳硫基、硫代羰基、硝基、氧代、磷酸盐、膦酸盐、亚膦酸盐、甲硅烷基、亚磺酰基、磺酰基、磺酰胺基、增效砜、磺酸盐、尿素、-Si(R^a)₃、-OR^a、-SR^a、-OC(O)-R^a、-N(R^a)₂、-C(O)R_a、-C(O)OR^a、-OC(O)N(R^a)₂、-C(O)N(R^a)₂、-N(R^a)C(O)OR^a、-N(R^a)C(O)R^a、-N(R^a)C(O)N(R^a)₂、-N(R^a)C(NR^a)N(R^a)₂、-N(R^a)S(O)_tN(R^a)₂(其中t为1或2)、-P(＝O)(R^a)(R^a),或者-O-P(＝O)(OR^a)₂，其中每个R^a独立地是氢、烷基、卤代烷基、碳环基、碳环基烷基、芳基、芳烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、杂芳基或杂芳基烷基，并且如本文所定义的，这些部分均可以任选地被取代。

如本文所用，术语“芳族”或“芳基”指具有6至14个环原子的原子团(例如，C_6-14芳族或C_6-14芳基)，其具有至少一个环，该环具有碳环共轭π电子系统(例如，苯基、芴基和萘基)。在一些实施例中，芳基指的是C_6-10芳基。例如，由取代苯衍生物形成并在环原子上具有自由价的二价基团被称为取代亚苯基。在其它实施例中，衍生自单价多环烃基(通过从具有自由价的碳原子上除去一个氢原子来命名，以“-基”结尾)的二价基团通过在相应的单价基团的名称中添加“-亚基”来命名，例如，具有两个连接点的萘基称为亚二氢萘基。在本文出现时，数字范围如“6至14个芳基”指给定范围内的每个整数；例如，“6至14个环原子”是指芳基可以由6个环原子、7个环原子等组成，最多包括14个环原子。该术语包括单环或稠环多环(即共用相邻原子对的环)基团。多环芳基包括双环、三环、四环等。在多环基团中，只需一个环是芳族的，因此芳基定义包括茚满基等基团。芳基的非限制性实例包括苯基、丙烯合萘基、萘基、四氢萘基、菲基、蒽基、芴基、吲哚基、茚满基等。除非说明书中另有说明，否则芳基部分可任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地包括:酰基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷芳基、环烷基、芳烷基、芳基、芳氧基、氨基、酰胺基、脒基、亚氨基、叠氮化物、碳酸盐、氨基甲酸盐、羰基、杂烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂环烷基、羟基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、酯、醚、巯基、硫代、烷硫基、芳硫基、硫代羰基、硝基、氧代、磷酸盐、膦酸盐、亚膦酸盐、甲硅烷基、亚磺酰基、磺酰基、磺酰胺基、增效砜、磺酸盐、尿素、-Si(R^a)₃、-OR^a、-SR^a、-OC(O)-R^a、-N(R^a)₂、-C(O)R_a、-C(O)OR^a、-OC(O)N(R^a)₂、-C(O)N(R^a)₂、-N(R^a)C(O)OR^a、-N(R^a)C(O)R^a、-N(R^a)C(O)N(R^a)₂、-N(R^a)C(NR^a)N(R^a)₂、-N(R^a)S(O)_tN(R^a)₂(其中t为1或2)、-P(＝O)(R^a)(R^a),或者-O-P(＝O)(OR^a)₂，其中每个R^a独立地是氢、烷基、卤代烷基、碳环基、碳环基烷基、芳基、芳烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、杂芳基或杂芳基烷基，并且如本文所定义的，这些部分均可以任选地被取代。

如本文所用，术语“环烷基”和“碳环基”各自指仅含有碳和氢的单环或多环基团，并且可以是饱和的或部分不饱和的。如果碳环含有至少一个双键，部分不饱和环烷基可称为“环烯基”，如果碳环含有至少一个三键，则称为“环炔基”。环烷基包括具有3至13个环原子的基团(即C_3-13环烷基)。在本文出现时，数字范围如“3至10”指给定范围内的每个整数；例如，“3至13个碳原子””是指环烷基可以由3个碳原子、4个碳原子、5个碳原子等组成，最多包括13个碳原子。术语“环烷基”还包括不含杂原子的桥连和螺-稠环结构。该术语还包括单环或稠环多环(即共用相邻原子对的环)基团。多环芳基包括双环、三环、四环等。在一些实施例中，“环烷基”可以是C_3-8烷基。在一些实施例中，“环烷基”可以是C_3-5烷基。环烷基的说明性实例包括但不限于以下部分:C_3-6碳环基包括但不限于环丙基(C₃)、环丁基(C₄)、环戊基(C₅)、环戊烯基(C₅)、环己基(C₆)、环己烯基(C₆)、环己二烯基(C₆)等。C_3-7碳环基的示例包括降冰片烯(C₇)。C_3-8碳环基的示例包括上述C_3-7碳环基以及环庚基(C₇)、环庚二烯基(C₇)、环庚三烯基(C₇)、环辛基(C₈)、双环[2.2.1]庚烷基、双环[2.2.2]辛烷基等。C_3-13碳环基的示例包括上述C_3-8碳环基以及八氢-1H茚基、十氢萘基、螺[4.5]癸基等。除非说明书中另有说明，否则环烷基可任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地包括:酰基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷芳基、环烷基、芳烷基、芳基、芳氧基、氨基、酰胺基、脒基、亚氨基、叠氮化物、碳酸盐、氨基甲酸盐、羰基、杂烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂环烷基、羟基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、酯、醚、巯基、硫代、烷硫基、芳硫基、硫代羰基、硝基、氧代、磷酸盐、膦酸盐、亚膦酸盐、甲硅烷基、亚磺酰基、磺酰基、磺酰胺基、增效砜、磺酸盐、尿素、-Si(R^a)₃、-OR^a、-SR^a、-OC(O)-R^a、-N(R^a)₂、-C(O)R_a、-C(O)OR^a、-OC(O)N(R^a)₂、-C(O)N(R^a)₂、-N(R^a)C(O)OR^a、-N(R^a)C(O)R^a、-N(R^a)C(O)N(R^a)₂、-N(R^a)C(NR^a)N(R^a)₂、-N(R^a)S(O)_tN(R^a)₂(其中t为1或2)、-P(＝O)(R^a)(R^a),或者-O-P(＝O)(OR^a)₂，其中每个R^a独立地是氢、烷基、卤代烷基、碳环基、碳环基烷基、芳基、芳烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、杂芳基或杂芳基烷基，并且如本文所定义的，这些部分均可以任选地被取代。术语“环烯基”和“环炔基”对应上面关于“环烷基”的描述，其中“基”分别被“烯基”或“炔基”取代，父术语“烯基”或“炔基”如本文所述。例如，环烯基可以含有3至13个环原子，例如5至8个环原子。在一些实施例中，环炔基可以含有5至13个环原子。

如本文所用，术术“卤素”指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)或碘(I)。这里使用的术术“卤化物”或“卤素”是指氟、氯、溴或碘。术术“卤代烷基”、“卤代烯基”、“卤代炔基”和“卤代烷氧基”包括被一个或多个卤素基团或其组合取代的烷基、烯基、炔基和烷氧基结构。例如，“氟烷基”和“氟烷氧基”包括分别卤代烷基和卤代烷氧基，其中卤素是氟，例如但不限于三氟甲基、二氟甲基、2,2,2-三氟乙基、1-氟甲基-2-氟乙基等。烷基、烯基、炔基和烷氧基均如本文所定义，并且如本文所定义的，可以任选地进一步被取代。

如本文所用，术语“杂烷基”是指烷基，其具有一个或多个选自碳以外的原子的骨架链原子，例如氧、氮、硫、磷或其组合。给定的数值范围，例如C_1-4杂烷基指总的链长，在这个例子中是4个原子长。例如，一个-CH₂OCH₂CH₃基团被称为“C₄”杂烷基，其在原子链长度描述中包括杂原子中心。可以通过杂原子或杂烷基链中的碳与母体分子结构连接。例如，含氮杂烷基部分指至少有一个骨架原子是氮原子的基团。杂烷基中的一个或多个杂原子可以任选地被氧化。如果存在一个或多个氮原子，也可以任选地被季铵化。例如，杂烷基还包括被一个或多个氮氧化物(-O-)取代基取代的骨架链。示例性杂烷基包括但不限于醚类，例如甲氧基乙基(-CH₂CH₂OCH₃)、乙氧基甲基(-CH₂OCH₂CH₃)、(甲氧基甲氧基)乙烷基(-CH₂CH₂OCH₂OCH₃)、(甲氧基甲氧基)甲烷基(-CH₂OCH₂OCH₃)和(甲氧基乙氧基)甲烷基(-CH₂OCH₂CH₂OCH₃)等；胺类如(-CH₂CH₂NHCH₃,-CH₂CH₂N(CH₃)₂，-CH₂NHCH₂CH₃,-CH₂N(CH₂CH₃)(CH₃))等。

如本文所用，术语“杂芳基”或“杂芳族”是指在芳环系统中提供的具有环碳原子和1-6个环杂原子的5-18元单环或多环(例如双环、三环、四环等)芳环系统(例如，在环阵列中共享6、10或14个π电子)的基团，其中每个杂原子独立地选自氮、氧、磷和硫(“5-18元杂芳基”)。杂芳基多环体系可以在一个或两个环中包含一个或多个杂原子。在本文出现时，数字范围如“5至18”指给定范围内的每个整数；例如，“5至18个环原子”是指杂芳基可以由5个环原子、6个环原子等组成，最多包括18个环原子。在一些实施例中，杂芳基可以含有5至14个环原子。在一些实施例中，衍生自单价杂芳基(通过从具有自由价的碳原子上除去一个氢原子来命名，以“-基”结尾)的二价基团通过在相应的单价基团的名称中添加“吡啶”来命名，例如，具有两个连接点的吡啶基团是吡啶基。

例如，含氮的“杂芳族”或“杂芳基”部分指其中该环的至少一个骨架原子是氮原子的芳族基团。杂芳基中的一个或多个杂原子可以任选地被氧化。如果存在一个或多个氮原子，也可以任选地被季铵化。杂芳基还包括被一个或多个氮氧化物(-O-)取代基取代的环体系，例如吡啶基氮氧化物。杂芳基通过环的任何原子连接到母体分子结构上。

“杂芳基”还包括环体系，其中如上定义的杂芳基环与一个或多个芳基稠合，其中与母体分子结构的连接点在芳基或杂芳基环上，或者其中如上定义的杂芳基环与一个或多个环烷基或杂环基稠合，其中与母体分子结构的连接点在杂芳基环上。对于其中一个环不含杂原子(例如，吲哚基、喹啉基、咔唑基等)的多环杂芳基，与母体分子结构的连接点可以在任何一个环上，即带有杂原子的环(例如，2-吲哚基)或不含杂原子的环(例如，5-吲哚基)。在一些实施例中，杂芳基是具有环碳原子和在芳环体系中提供的1-4个环杂原子的5-10元芳环体系，其中每个杂原子独立地选自氮、氧、磷和硫(“5-10元杂芳基”)。在一些实施例中，杂芳基是具有环碳原子和在芳环体系中提供的1-4个环杂原子的5-8元芳环体系，其中每个杂原子独立地选自氮、氧、磷和硫(“5-8元杂芳基”)。在一些实施例中，杂芳基是具有环碳原子和在芳环体系中提供的1-4个环杂原子的5-6元芳环体系，其中每个杂原子独立地选自氮、氧、磷和硫(“5-6元杂芳基”)。在一些实施例中，5-6元杂芳基具有1-3个选自氮、氧、磷和硫的环杂原子。在一些实施例中，5-6元杂芳基具有1-2个选自氮、氧、磷和硫的环杂原子。在一些实施例中，5-6元杂芳基具有1个选自氮、氧、磷和硫的环杂原子。

杂芳基的实例包括但不限于氮杂环庚烯基、吖啶基、苯并咪唑基、苯并吲哚基、1，3-苯并二唑基、苯并呋喃基、苯并噁唑基、苯并[d]噻唑基、苯并噻二唑基、苯并[b][1，4]二氧杂环庚基、苯并[b][1，4]噁嗪基、1，4-苯并二噁烷基、苯并萘并呋喃基、苯并噁唑基、苯并二氧杂环戊烯基、苯并二氧杂环己基、苯并噁唑基、苯并哌喃基、苯并吡喃基、苯并呋喃基、苯并吡喃基、苯并呋咱、苯并噻唑基、苯噻嗯基(苯并噻吩基)、苯甲硫代[3,2-d]吡啶、苯并三唑基、苯并[4,6]咪唑[1,2-a]吡啶基、咔唑基、辛尼林基、环戊烷[d]嘧啶基、6，7-二氢-5H-环戊烷[4，5]噻吩诺[2，3-d]嘧啶基、5，6-二氢苯并[h]喹唑啉基、5，6-二氢苯并[h]辛尼林基、6，7-二氢-5H苯并[6，7]环庚基[1，2-c]哒嗪基、二苯并呋喃基、二苯并噻吩基、呋喃基、呋咱基、呋喃酮基，呋喃并[3，2-c]吡啶基、5，6，7，8，9，10-六氯环己烷[d]嘧啶基、5，6，7，8，9，10-六氯环己烷[d]哒嗪基、5，6，7，8，9，10-六氯环己烷[d]吡啶基、异噻唑基、咪唑基、吲唑基、吲哚基、吲唑基、异吲哚基、吲哚基、异吲哚基、异喹啉基、吲哚嗪基、异噁唑基、5，8-甲氧基-5，6，7，8-四氢喹唑啉基、萘啶基、1，6-萘啶基、噁二唑基、2-氧氮杂吡啶基、噁唑基、环氧乙烷基、5，6，6a，7，8，9，10，10a-八氢苯并[h]喹唑啉基、1-苯基-1H-吡咯基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基、酞嗪基、蝶呤基、嘌呤基、吡喃基、吡咯基、吡唑基、吡戈洛[3,4-d]嘧啶基、吡啶并[3,2-d]嘧啶基、吡啶并[3,4-d]嘧啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、吡咯基、喹唑啉基、喹喔啉基、喹啉基、异喹啉基、四氢喹啉、5,6,7,8-四氢喹唑啉、5,6,7,8-四氢苯三唑[4.5]噻吩并[2，3-d]嘧啶醇、5，6，7，8-四氢吡啶并[4，5-c]哒嗪基、噻唑基、噻二唑基、噻喃基、三唑基、四唑基、三嗪基、噻吩并[2，3-d]嘧啶基、噻吩并[3，2-d]嘧啶基、噻吩并[2，3-c]吡啶基和苯硫基(即噻吩基)。除非说明书中另有说明，否则杂芳基部分可任选地被或多个取代基取代，所述取代基独立地包括:酰基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷芳基、环烷基、芳烷基、芳基、芳氧基、氨基、酰胺基、脒基、亚氨基、叠氮化物、碳酸盐、氨基甲酸盐、羰基、杂烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂环烷基、羟基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、酯、醚、巯基、硫代、烷硫基、芳硫基、硫代羰基、硝基、氧代、磷酸盐、膦酸盐、亚膦酸盐、甲硅烷基、亚磺酰基、磺酰基、磺酰胺基、增效砜、磺酸盐、尿素、-Si(R^a)₃、-OR^a、-SR^a、-OC(O)-R^a、-N(R^a)₂、-C(O)R_a、-C(O)OR^a、-OC(O)N(R^a)₂、-C(O)N(R^a)₂、-N(R^a)C(O)OR^a、-N(R^a)C(O)R^a、-N(R^a)C(O)N(R^a)₂、-N(R^a)C(NR^a)N(R^a)₂、-N(R^a)S(O)_tN(R^a)₂(其中t为1或2)、-P(＝O)(R^a)(R^a),或者-O-P(＝O)(OR^a)₂，其中每个R^a独立地是氢、烷基、卤代烷基、碳环基、碳环基烷基、芳基、芳烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、杂芳基或杂芳基烷基，并且如本文所定义的，这些部分均可以任选地被取代。

如本文所用，用术活性剂的“有效量”是指足以引发期望的生物反应的量。本领域普通技术人员应理解，本发明化合物的有效量可以根据如期望的生物终点、化合物的药代动力学、所治疗的疾病、施药方式和患者等因素而有所不同。

如本文所用，某种疾病或障碍的“疗法”或“治疗”是指在疾病或障碍发生之前或之后减轻、延缓或改善该病症的方法。治疗可以是针针疾病和/或潜在病变的一种或多种效果或症状。治疗可以是减轻，且可以是，但不限于，疾病或疾病症状的完全消退。与同等的未经经理的针照组相比，不管通过何种标准技术术量，这种减轻或预防的程度至少为5％、10％、20％、40％、50％、60％、80％、90％、95％或100％。

如本文所用，用术“预防”指的是用于消除、延缓、避免或阻止疾病或病症的发作、发生率、严重性或复发的方法。例如，与未接受该方法的受试者相比，如果易患病的受试者的疾病或病症或其一种或多种症状的发作、发病率、严重性或复发情况减少或延缓，则该方法即为“预防”。与受试者接受治疗前的病情进展相比，如果接受该方法后易患病的受试者的骨质疏松症或该疾病或病症的一种或多种症状的发作、发病率、严重性或复发情况减少或延缓，则所公开的方法为“预防”。因此，骨质疏松症的发作、发生率、严重性或复发情况的减少或延缓程度大约可以是5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100％，或其间的任何减少量。

本文所用的公开化合物的“药学上可接受的形式”包括但不限于公开化合物的药学上可接受的盐、水合物、酯、溶剂化物、异构体、前药和同位素标记的衍生物。在一个实施例中，“药学上可接受的形式”包括但不限于所公开化合物的药学上可接受的盐、酯、前药和同位素标记的衍生物。在某些实施例中，“药学上可接受的形式”包括但不限于所公开化合物的药学上可接受的异构体、立体异构体、前药和同位素标记的衍生物。

在某些实施例中，药学上可接受的形式是药学上可接受的盐。如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指在合理的医学判断范围内，适合与受试者的组织接触而没有产生过度毒性、刺激、过敏反应等的盐，与合理的效益/风险比相称。药学上可接受的盐是本领域公知的。例如，Berge等人，在《药物科学》(1977)66:1-19中详细描述了药学上可接受的盐。本文提供的化合物的药学上可接受的盐包括那些衍生自适当的无机和有机酸和碱的盐。医药学上可接受的无毒酸加成盐的实例为，由无机酸如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和过氯酸或有机酸如乙酸、草酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸形成的氨基盐，或通过使用本领域的其它方法，如离子交换形成的氨基盐。其他药学上可接受的盐包括己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡萄糖酸盐、甘油磷酸盐、葡糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘化物、2-羟基-乙磺酸盐、乳糖醛酸盐、月桂酸盐、十二烷基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐，油酸盐，草酸盐，棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸酯、磷酸盐、苦味酸盐、三甲基乙酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一酸盐、戊酸盐等。在一些实施例中，可衍生出盐的有机酸包括，例如乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、乳酸、三氟乙酸、马来酸、丙二酸、丁二酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙烷磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等。

盐可以在分离和纯化所公开的化合物的过程中原位制备，或者单独制备，例如通过母体化合物的游离碱或游离酸分别与合适的碱或酸反应。衍生自适当碱的药学上可接受的盐包括碱金属、碱土金属、铵和N⁺(C_1-4alkyl)⁴盐。代表性的碱金属或碱土金属盐包括钠、锂、钾、钙、镁、铁、锌、铜、锰、铝等。其它药学上可接受的盐包括，无毒铵、季铵和伯胺阳离子，其由抗衡离子如卤化物、氢氧化物、羧酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐、低级烷基磺酸盐和芳基磺酸盐形成。可衍生出盐的有机碱包括，例如伯胺、仲胺和叔胺，取代胺，包括天然存在的取代胺、环胺、碱性离子交换树脂等，例如异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺和乙醇胺。在一些实施例中，药学上可接受的碱加成盐可以选自铵盐、钾盐、钠盐、钙盐和镁盐。

在某些实施例中，药学上可接受的形式是“溶剂化物”(例如水合物)。如本文所用，术语“溶剂化物”是指进一步包括通过非共价分子间力结合的化学计量或非化学计量的溶剂的化合物。溶剂化物可以是公开的化合物或其药学上可接受的盐。当溶剂是水时，溶剂化物是“水合物”。药学上可接受的溶剂化物和水合物是复合物，其可包括，例如约1至100、1至10、1至2、3或4的溶剂或水分子。应当理解，本文使用的术语“化合物”包括化合物和化合物的溶剂化物，以及它们的混合物。

在某些实施例中，药学上可接受的形式是前药。如本文所用，术语“前药”(或“前体药物”)是指在体内转化产生本文公开的化合物或该化合物的药学上可接受的形式的化合物。前药在施用给受试者时是无活性的，但可在体内通过水解(例如血液中的水解)转化为活性化合物。在某些情况下，前药比母体化合物具有更好的物理和/或输送性能。给药于受试者时，前药可增加所述化合物的生物药效率(例如，通过口服给药增强血液的吸收)，相对于母体化合物，其提高了到目的生物间室(例如脑或淋巴系统)的输送效率。相对于母体化合物，示例性前药包括具有较强水溶性或跨肠膜主动转运的所公开化合物的衍生物。

前药化合物在哺乳动物有机体中通常具有溶解性、组织相容性或延迟释放的优点(参见，Bundgard,H,《前药设计》(1985年)，第7-9、21-24页(埃尔塞维尔，阿姆斯特丹)。关于前药，Higuchi，T等人《前药--新型给药系统》，A.C.S.SymposiumSeries,Vol.14，和药物设计中的生物可逆转载体，Edward B.Roche，美国医药协会和培格曼出版社，1987年，均提供了讨论，两者均被充分引用并入本文。前体药物的示例性优点，包括但不限于其物理性质，例如与母体化合物相比，其在生理pH下肠胃外给药的水溶性增强，或其可以增强消化道的吸收，或其可以增强药物长期储存的稳定性。

如本文所用，术语“药学上可接受的”赋形剂、载体或稀释剂是指药学上可接受的材料、组合物或运载体，例如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或封装材料，参与将所述受试药物从身体的一个器官或部分运送或转运到身体的另一个器官或部分。每种载体必须是“可接受的”，即与制剂的其他成分相容，并且对患者无害。可用作药学上可接受的载体的材料的示例包括:糖，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素；粉状黄芪胶；麦芽；明胶；滑石；赋形剂，如可可脂和栓剂蜡；油，例如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；乙二醇，如丙二醇；多元醇，如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；酯，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，例如氢氧化镁和氢氧化铝；藻酸；无热原水；等渗盐水；林格氏液；乙醇；磷酸盐缓冲溶液；和药物制剂中使用的其他无毒相容物质。湿润剂、乳化剂和润滑剂，例如月桂醇硫酸酯钠盐、硬脂酸镁和聚环氧乙烷-聚环氧丙烷共聚物，以及着色剂、离型剂、涂层剂、甜味剂、调味剂和芳香剂、防腐剂和抗氧化剂也可以存在于组合物中。

如本文所用，用术“分离的”或“纯化的”是指基本上或大体上不含通常以其天然状态的成分存在的材料。纯度和均匀性通常运用“分析化学技术”来确定，如聚丙烯烯胺凝胶电泳或高效液相色谱。

如本文所用，术语“受试者”指任何动物(例如哺乳动物)，包括但不限于人类、非人灵长类动物、啮齿类动物等待接受特定治疗的群体。通常，术语“受试者”和“患者”在此可互换地用于人类受试者。

如本文所用，“低剂量”是指为治疗任何人类疾病或障碍，其比给定给药途径配制的特定化合物的最低标准推荐剂量少至少5％(如，至少10％、20％、50％、80％、90％或甚至95％)。例如，用于降低葡萄糖水平并通过吸入方式给药的药剂的“低剂量”，将不同于通过口服给药的同一药剂的“低剂量”。例如，配制为通过吸入方式给药的药剂“低剂量”将不同于配制为通过口服方式给药的同种药剂的“低剂量”。

如本文所用，“高剂量”是指为治疗任何人类疾病或障碍，其比特定化合物的最高标准推荐剂量高至少5％(如，至少10％、20％、50％、100％、200％或甚至300％)。

如本文所用，用语“前药”或“前体药物”是指原型药物分子的药理学衍生物，其需要在生物体内进行生物转化(自发或酶促)来释放活性药物。当这些前药在生理条件下进行溶剂分解或酶促降解时，它们在体内具有药物活性。这里的前药化合物可以为单、双、三等。取决于在生物体中释放活性药物所需的生物转化步骤的数量，以及以前体类型形式存在的官能团的数量。

前药形式通常具有溶解性、组织相容性或在哺乳动物体内延缓释放的优点。(参见，Bundgard，《前药设计》，第7-9、21-24页，Elsevier，阿姆斯特丹，1985年；Silverman，《药物设计和药物行为的有机化学》，第352-401页，学术出版社，圣地亚哥，加利福尼亚，1992年)。本领域通常已知的前药包括酸衍生物，例如通过母体酸与合适的醇反应制备的酯，通过母体酸化合物与胺反应制备的酰胺，反应形成酰化碱衍生物的碱性基团等。当然，其它前药衍生物可以与本申请公开的其它特征结合以提高生物药效率。因此，本领域技术人员将理解，某些本申请公开的具有游离氨基、羟基或羧基的化合物可以转化为前药。前药包括具有氨基酸残基的化合物，或具有两个或多个(例如，两个、三个或四个)氨基酸残基的多肽链的化合物，所述氨基酸残基通过肽键共价连接到本申请公开的化合物的游离氨基、羟基或羧酸基团。氨基酸残基包括通常由三个字母符号表示的20种天然氨基酸，还包括4-羟基脯氨酸、羟基赖氨酸、锁链赖氨酸、异锁链赖氨素、3-甲基组氨酸、正缬氨酸、β-丙氨酸、γ-氨基丁酸、瓜氨酸、高半胱氨酸、高丝氨酸、鸟氨酸和甲硫氨酸砜。前药还包括具有与本申请公开的任何上述取代基共价键合的碳酸酯、氨基甲酸酯、酰胺或烷基酯部分的化合物。

发明详述

本发明提供了一种新型嘧啶衍生物和类似物及其药物组合物，其对某些酪氨酸激酶，例如布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)和/或黏着斑激酶(FAK)表现出抑制活性的作用。本申请还公开了治疗、减轻或预防由酪氨酸激酶介导的某些疾病或障碍的方法，所述酪氨酸激酶例如BTK、BTK(C481S)、FAK、ERK激酶和/或其他TEC家族激酶。这些疾病和障碍包括癌症、炎症性疾病、纤维症、糖尿病、自身免疫性疾病或免疫介导性疾病。

酪氨酸激酶在调节细胞增殖和细胞存活等多种细胞过程中发挥重要作用。已知某些酪氨酸激酶被突变激活或在许多人类癌症中异常表达。某种酪氨酸激酶的选择性抑制可用于治疗人类疾病，如癌症。例如，表皮生长因子受体(EGFR)在某些人类癌症如肺癌中会发生突变和/或过度表达。有几种EGFR抑制剂已被批准用于治疗EGFR突变和/或过度表达的癌症。

黏着斑激酶(FAK)

黏着斑激酶(FAK)是一种酪氨酸激酶，可整合来自整合素和生长因子受体的信号，并调节多种细胞功能，包括粘附、扩散、迁移、侵袭、极性、增殖和存活。研究表明，肿瘤的发生和发展需要FAK，如皮肤肿瘤和乳腺肿瘤。据报道，FAK在许多人类肿瘤(例如，乳腺癌、结肠癌、胰腺癌和前列腺癌)中发生过度表达。FAK通过磷酸化调节和激活，特别是酪氨酸残基Y397。此外，与正常组织相比，磷酸化FAK(Y397)在某些肿瘤中增加，例如胰腺癌。(McLeanet al.2005Nat Rev Cancer 5(7):505-15；Frame et al.2010Nat Rev Mol Cell Biol.11(11):802-14；McLean et al.2004Genes Dev.18(24):2998-3003；Lahlou et al.2007ProcNatl Acad Sci U S A.104(51):20302-7；Owens et al.1995Cancer Res.55(13):2752-5；Figel et al.2011Anticancer Agents Med Chem.11(7):607-16；Jiang et al.2016NatMed.22(8):851-60.)

研究表明，RNAi抑制FAK或显性阴性FAK会导致人类癌细胞(例如乳腺癌、黑素瘤和卵巢癌细胞)粘附力丧失和细胞死亡。shRNA抑制FAK能抑制肺癌转移并增加小鼠模型的存活率。此外，FAK催化活性的丧失降低了小鼠中v-Src肿瘤的生长。(Beviglia etal.2003Biochem J.373(Pt 1):201-10；Smith et al.2005Melanoma Res.15(5):357-62；Haider et al.2005Clin Cancer Res.11(24Pt 1):8829-36；Mitra etal.2006Oncogene.25(32):4429-40.)

癌症中,FAK的许多功能与其在质膜上的整合素和生长因子受体下游的信号传导作用有关。FAK可定位于细胞核中，核FAK调节炎性细胞因子和趋化因子的转录，促进免疫抑制的肿瘤微环境形成。通过触发免疫介导的肿瘤消退，来抑制FAK活性可带来有益的治疗效果。(Lim et al.2008Mol Cell.29(1):9-22；Serrels et al.2015Cell 163(1):160-73；Sulzmaier et al.2014Nature Reviews Cancer 14,598–610.)

研究表明FAK是纤维形成的主要媒介。FAK在皮肤受伤后被激活。成纤维细胞特异性FAK敲除小鼠的炎症和纤维症明显少于对照组小鼠，表明了FAK在纤维化中起重要作用。对FAK的抑制使得博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化显著消除。FAK是治疗纤维化疾病(如肺纤维化)的一个有望目标。(Wong et al.2011Nat Med.18(1):148-52；Lagares etal.2012Arthritis Rheum.64(5):1653-64；Kinoshita et al.2013Am J Respir Cell MolBiol.49(4):536-43.)

由此，充分的证据表明FAK是粘附、凋亡、细胞生长抑制、迁移、血管生成、纤维化和/或免疫抑制的调节者。抑制FAK活性对于治疗FAK相关疾病很有用，如癌症和纤维化。目前，还未有经美国食品和药物管理局(FDA)批准的、可用于治疗患者的FAK抑制剂。

布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)

BTK是由BTK基因编码的激酶。BTK在B细胞的发育和存活中起着至关重要的作用，例如B细胞活化和B细胞信号通路，其将B细胞受体(BCR)刺激与细胞中的下游反应联系起来。异常的B细胞增殖和分化可能导致淋巴瘤，包括急性或慢性淋巴白血病。(Rawlings1999Clin Immunol.91(3):243-53；Khan 2001Immunol Res.23(2-3):147-56；Hendriks etal.2014Nat Rev Cancer 14(4):219-32.)

抑制BTK可作为B细胞介导的疾病的治疗方法，如B细胞淋巴瘤和白血病。

此外，有报道表明，BTK依赖的免疫细胞串扰驱动胰腺癌。BTK作为一个关键的B细胞和巨噬细胞激酶，可调节T细胞依赖的免疫反应。用BTK抑制剂伊布替尼重组巨噬细胞对PDAC小鼠进行治疗，使其趋向TH1表型和抑制PDAC生长，表明BTK信号介导PDAC免疫抑制。BTK在PDAC小鼠中的药理抑制可以重新激活适应性免疫反应，为这种毁灭性的肿瘤提供了一种新的治疗方式。(Gunderson et al.2016Cancer Discov.6(3):270-85.)

有效的BTK抑制剂可用于治疗癌症和类风湿性关节炎、过敏和哮喘。研究还表明，BTK信号涉及多种炎症、自身免疫疾病和免疫介导性疾病。(Corneth et al.2016Curr TopMicrobiol Immunol.393:67-105.)

其他TEC家族激酶也在T细胞活化中发挥重要作用。ITK是参与T细胞受体信号传导的酪氨酸激酶TEC家族成员之一，在T细胞活化和发育中发挥重要作用。ITK抑制剂可用于治疗过敏性哮喘和特应性皮炎等疾病。(Lucas et al.2003Immunol Rev.191:119-38；Schwartzberg et al.2005Nat Rev Immunol.5(4):284-95；August et al.2012Int RevImmunol.31(2):155-65.)

此外，BMK抑制剂可用作抗癌剂。研究表明BMX在癌细胞中高表达，促进细胞增殖和致瘤性，且BMX的缺失可抑制肿瘤生长。(Zhuang et al.2014J Exp Clin Cancer Res.33:25；Li et al.2017Oncotarget.8(30):49238-49252；Holopainen et al.2012CancerRes.72(14):3512-21.)

由于TEC家族激酶(如BTK、ITK、BMX)在B细胞和/或T细胞的激活中发挥关键作用，这些细胞和/或T细胞与炎性疾病、自身免疫疾病和免疫介导性疾病的发病机制有关，因此对这些激酶的有效抑制可有望治疗这类疾病。

伊布替尼是一种小分子BTK抑制剂，已被批准用于治疗多种B细胞淋巴瘤和白血病。然而，随着伊布替尼应用于癌症治疗的数据日趋成熟，人们开始担心它的不良反应和耐药性问题。(Kaur et al.2017Ann Hematol.96(7):1175-1184；Furman et al.2014N EnglJ Med.370(24):2352-4.)

研究表明伊布替尼也针对正常细胞中存在的EGFR野生型(wt),可导致严重的副作用，例如皮疹、腹泻和体重减轻。这些副作用限制了伊布替尼的临床应用。

如本申请所公开的，现已意外发现某些嘧啶衍生物可有效抑制BTK和/或其他TEC家族非受体酪氨酸激酶，例如骨髓酪氨酸激酶(BMX)或白细胞介素-2诱导的T细胞激酶(ITK)。此外，某些嘧啶衍生物能有效抑制耐药突变BTK(C481S)、FAK以及BTK。此外，某些嘧啶衍生物能有效抑制耐药突变BTK(C481S)、FAK和ERK以及BTK。

一方面，本发明总体上涉及一种化合物，具有结构式(I):

其中，

X是NH(CH₂)_n、O或S，n为0或1；

A是5-7元、脂肪族或芳香族、环状或杂环部分；

B是5-7元、脂肪族或芳香族、环状或杂环部分；

或其药学上可接受的形式。

在某些实施例中，所述化合物具有下述结构式；

在某些实施例中，结构式(I)中的R₂和R₃共同形成5元环，具有结构式(II):

其中，

Y₁选自CH、CH₂、N、NH、O或S；

Y₂选自CH、CH₂、N、NH、O或S；

Y₃选自CH、CH₂、N、NH、O或S；和

Y₁和Y₂之间的键可以是双键或单键；Y₂和Y₃之间的键可以是双键或单键；前提是Y₁、Y₂和Y₃中的至少一个是CH或CH₂；和

Y₁和Y₂之间的键与₂和Y₃之间的键中，至少一个是单键。

在某些实施例中，结构式(I)中的B是六元芳基，且所述化合物具有结构式(III):

在某些实施例中，结构式(III)中的R₄和R₅分别位于间位和对位，具有结构式(IV):

在某些实施例中，结构式(III)或(IV)中的R₄和R₅共同形成6至15元脂肪族、环状或杂环部分。

在某些实施例中，R₄和R₅共同形成12元脂肪族杂环部分。

在某些实施例中，所述化合物具有下述结构式：

其中R₆、R₇和R₈各自独立地选自氢、卤素、C₁-C₆烷基和C₁-C₆烷氧基。

在某些实施例中，R₆、R₇和R₈中的每一个都是H，该化合物具有结构式(V-a):

在某些实施例中，结构式(V)中的R₂和R₃共同形成5元杂环芳基部分，具有结构式(VI):

其中，

Y₁选自CH、CH₂、N、NH、O或S；

Y₂选自CH、CH₂、N、NH、O或S；

Y₃选自CH、CH₂、N、NH、O或S；

Y₁和Y₂之间的键与Y₂和Y₃之间的键中，至少一个是单键。

在某些实施例中，R₆、R₇和R₈中的每一个都是H，该化合物具有结构式(VI-a):

在某些实施例中，A是6元芳基部分，具有结构式(VII):

其中，

Z是CH或N；和

R₁’和R₁”各自独立地选自氢、卤素、C₁-C₆烷基、羟基或包含亲电部分的基团，前提是R₁’和R₁”中的至少一个是包含亲电部分的基团。

在某些实施例中，结构式(VII)中的Z是CH。

在某些实施例中，结构式(VII)中的Z是N。

在某些实施例中，A是6元脂肪族环状或杂环部分，具有结构式(VIII):

Z是CH或N。

在某些实施例中，结构式(VIII)中的Z是CH。

在某些实施例中，结构式(VIII)中的Z是N。

在某些实施例中，A是5元脂族环状部分，具有结构式(IX):

R₁’和R₂”各自独立地选自氢、卤素、C₁-C₆烷基、羟基或包含亲电部分的基团，前提是R₁’和R₂”中的至少一个是包含亲电部分的基团。

在某些实施例的上述化合物中，Y₁和Y₂之间的键是双键。在某些实施例的上述化合物中，Y₁和Y₂之间的键是单键。

在某些实施例的上述化合物中，Y₂和Y₃之间的键是双键。在某些实施例的上述化合物中，Y₂和Y₃之间的键是单键。

在某些实施例的上述化合物中，Y₁是N；Y₂是CH；Y₃是NH。

在某些实施例的上述化合物中，Y₁是CH；Y₂是N；Y₃是NH。

在某些实施例的上述化合物中，Y₁是CH；Y₂是CH；Y₃是NH。

在某些实施例的上述化合物中，Y₁是CH；Y₂是CH；Y₃是O或S。

在某些实施例的上述化合物中，X是NH。

在某些实施例的上述化合物中，X是O。

在某些实施例的上述化合物中，X是S。

在某些实施例的上述化合物中，所述亲电或亲核部分是丙烯酰胺(CH₂＝CH-C(＝O)-NH-)。在某些实施例的上述化合物中，所述亲电或亲核部分是-N-S(＝O)₂-CH＝CH₂、-N-C(＝O)-CH＝CH-CH₃或–N-S(＝O)₂-CH＝CH-CH₃。

在某些实施例中，所公开的化合物与靶激酶形成不可逆共价键。

在某些实施例中，所公开的化合物与靶激酶形成可逆非共价键。

本发明的示例性化合物包括但不限于表1所列出的:

表1.示例性化合物

在某些实施例中，所述化合物具有如下结构式:

在某些实施例中，所述化合物具有如下结构式:

在某些实施例中，所述化合物具有如下结构式:

在某些实施例中，所述化合物具有如下结构式:

在某些实施例中，所述化合物具有如下结构式:

在某些实施例中，所述化合物具有如下结构式:

在某些实施例中，所述化合物具有如下结构式:

在某些实施例中，所述化合物具有如下结构式:

在某些实施例中，所述化合物具有如下结构式:

在某些实施例中，所述化合物具有如下结构式:

在某些实施例中，所述化合物具有如下结构式:

在某些实施例中，所述化合物具有如下结构式:

在某些实施例中，所述化合物具有如下结构式:

在某些实施例中，所述化合物具有如下结构式:

在某些实施例中，所述化合物具有如下结构式:

在某些实施例中，所述化合物具有如下结构式:

在某些实施例中，所述化合物具有如下结构式:

在某些实施例中，所述化合物具有如下结构式:

其中，

X是NH(CH₂)_n、O或S，n为0或1；

A是5-7元、脂肪族或芳香族、环状或杂环部分；

B是5-7元、脂肪族或芳香族、环状或杂环部分；

在某些实施例中，所述药物组合物可有效治疗、预防或减轻癌症或相关疾病或障碍。

在某些实施例中，所述药物组合物可有效治疗、预防或减轻炎症性疾病或相关疾病或障碍。

在某些实施例中，所述药物组合物可有效治疗、预防或减轻纤维症或相关疾病或障碍。

在某些实施例中，所述药物组合物可有效治疗、预防或减轻自身免疫性疾病或相关疾病或障碍。

在某些实施例中，所述药物组合物可有效治疗、预防或减轻免疫介导性疾病或相关疾病或障碍。

本发明所述的药物组合物包括含有本发明提供的任何化合物的药物组合物。

在某些药物组合物实施例中，所述化合物具有如下结构式:

在某些药物组合物实施例中，所述化合物具有如下结构式:

在某些药物组合物实施例中，所述化合物具有如下结构式:

在某些药物组合物实施例中，所述化合物具有如下结构式:

在某些药物组合物实施例中，所述化合物具有如下结构式:

在某些药物组合物实施例中，所述化合物具有如下结构式:

在某些药物组合物实施例中，所述化合物具有如下结构式:

在某些药物组合物实施例中，所述化合物具有如下结构式:

在某些药物组合物实施例中，所述化合物具有如下结构式:

在某些药物组合物实施例中，所述化合物具有如下结构式:

在某些药物组合物实施例中，所述化合物具有如下结构式:

在某些药物组合物实施例中，所述化合物具有如下结构式:

在某些药物组合物实施例中，所述化合物具有如下结构式:

在某些药物组合物实施例中，所述化合物具有如下结构式:

在某些药物组合物实施例中，所述化合物具有如下结构式:

在某些药物组合物实施例中，所述化合物具有如下结构式:

在某些药物组合物实施例中，所述化合物具有如下结构式:

在某些药物组合物实施例中，所述化合物具有如下结构式:

其中，

X是NH(CH₂)_n、O或S，n为0或1；

A是5-7元、脂肪族或芳香族、环状或杂环部分；

B是5-7元、脂肪族或芳香族、环状或杂环部分；

或其药学上可接受的形式，可有效治疗、预防或减轻哺乳动物(包括人)中的一种或多种癌症、炎症性疾病、纤维症、自身免疫性疾病或免疫介导性疾病或相关疾病或障碍，和药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂。

在某些实施例中，所述方法可有效治疗、预防或减轻癌症或相关疾病或障碍。

在某些实施例中，所述方法可有效治疗、预防或减轻炎症性疾病或相关疾病或障碍。

在某些实施例中，所述方法可有效治疗、预防或减轻纤维症或相关疾病或障碍。

在某些实施例中，所述方法可有效治疗、预防或减轻自身免疫性疾病或相关疾病或障碍。

在某些实施例中，所述方法可有效治疗、预防或减轻免疫介导性疾病或相关疾病或障碍。

另一方面，本发明总体上涉及一种治疗、减轻或预防疾病或障碍的方法。该方法包括向有需要的受试者施用一种药物组合物，所述药物组合物包含对布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)和/或黏着斑激酶(FAK)的活性具有抑制作用的化合物。

在某些方法实施例中，所述化合物是BTK的抑制剂。

在某些方法实施方案中，所述化合物是骨髓酪氨酸激酶(BMX)的抑制剂。

在某些方法实施例中，所述化合物是BTK和BMX的抑制剂。

在某些方法实施方案中，所述化合物是白细胞介素-2诱导的T细胞激酶(ITK)的抑制剂。

在某些方法实施例中，所述化合物是FAK的抑制剂。

在某些方法实施例中，所述化合物是BTK和FAK的抑制剂。

在某些方法实施例中，所述化合物是BTK(C481S)突变体的抑制剂。

在某些方法实施例中，所述化合物是ERK的抑制剂。

在某些方法实施例中，所述化合物是BTK、BTK(C481S)突变体和FAK的抑制剂。

在某些方法实施例中，所述化合物是BTK、BTK(C481S)突变体、FAK和ERK的抑制剂。

在某些方法实施例中，所述化合物具有结构式(I):

其中，

X是NH(CH₂)_n、O或S，n为0或1；

A是5-7元、脂肪族或芳香族、环状或杂环部分；

B是5-7元、脂肪族或芳香族、环状或杂环部分；

或其药学上可接受的形式。

在某些应用实施例中，所述疾病或障碍为癌症或相关疾病或病症。

在某些应用实施例中，所述疾病或障碍为炎症性疾病或相关疾病或病症。

在某些应用实施例中，所述疾病或障碍为纤维症或相关疾病或病症。

在某些应用实施例中，所述疾病或障碍为自身免疫性疾病或相关疾病或病症。

在某些应用实施例中，所述疾病或障碍为免疫介导性疾病或相关疾病或病症。

本发明的化合物、药物组合物和方法可用于治疗或预防的增殖性疾病，其中包括非何杰金氏淋巴瘤(特别是弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)和套细胞淋巴瘤(MCL)亚型)、B细胞慢性淋巴细胞白血病和成熟B细胞急性淋巴细胞白血病(ALL)，尤其是急性淋巴细胞白血病(ALL)。

本发明的化合物、药物组合物和方法可用于治疗自身免疫性和炎症性疾病，例如风湿性疾病(如类风湿性关节炎、银屑病关节炎、传染性关节炎、进行性慢性关节炎、变形性关节炎、骨关节炎、创伤性关节炎、痛风性关节炎、赖特氏综合征、多软骨炎、急性滑膜炎和脊椎炎)、肾小球肾炎(伴或不伴肾病综合征)、自身免疫性血液病(例如溶血性贫血、再生障碍性贫血、特发性血小板减少症和中性粒细胞减少症)、自身免疫性胃炎和自身免疫性炎性肠病(例如溃疡性结肠炎和克罗恩氏病)，宿主抗移植物病、同种异体移植物排斥、慢性甲状腺炎、格雷夫斯氏病、硬皮病、糖尿病(1型和2型)、活动性肝炎(急性和慢性)、胰腺炎、原发性胆汁性肝硬化、重症肌无力、多发性硬化、系统性红斑狼疮、银屑病、特应性皮炎、接触性皮炎、湿疹、皮肤晒伤、血管炎(例如白塞氏病)、慢性肾功能不全、史蒂文斯-约翰逊综合征、炎性疼痛、特发性脂肪泻、恶病质、结节病、格林-巴利综合征、葡萄膜炎、结膜炎、角膜结膜炎、中耳炎、牙周病、肺间质纤维化、哮喘、支气管炎、鼻炎、鼻窦炎、尘肺病、肺功能不全综合征、肺气肿、肺纤维化、矽肺、慢性炎性肺病(例如慢性阻塞性肺病)和其他呼吸道炎症或阻塞性疾病。

当本发明的化合物、药物组合物和方法与用于治疗炎性疾病、自身免疫疾病或免疫介导性疾病的另一种治疗剂联合施用给受试者时，其抗炎效果和治疗效果可得到增强。

用于治疗炎症性疾病、自身免疫疾病或免疫介导性疾病的治疗剂的例子包括但不限于类固醇药物(例如，泼尼松、泼尼松龙、甲基泼尼松龙、可的松、羟基可的松、倍他米松、地塞米松等)、甲氨蝶呤、来氟米特、抗TNFa剂(例如，依那西普、英夫利昔单抗、阿达木单抗等)、钙调神经磷酸酶抑制剂(例如，他克莫司、匹美莫司等)和抗组胺药(例如苯海拉明、羟嗪、氯雷他定、依巴斯汀、酮替芬、西替利嗪、左西替利嗪、非索非那定等)，至少一种选自上述的治疗剂可包含在本发明的药物组合物中。

本发明的化合物、药物组合物和方法可用于治疗过敏，例如对食物、食品添加剂、杀虫剂、尘螨、花粉、动物材料和接触性过敏原的过敏、型超敏性哮喘、过敏性鼻炎、过敏性结膜炎。

本发明的化合物、药物组合物和方法可用于治疗感染性疾病，例如败血症、脓毒性休克、内毒素性休克、革兰氏阴性菌引起的败血症、志贺氏菌病、脑膜炎、脑疟疾、肺炎、结核病、病毒性心肌炎、病毒性肝炎(甲型肝炎、乙型肝炎和丙型肝炎)、艾滋病病毒感染、巨细胞病毒引起的视网膜炎、流感、疱疹、严重烧伤引起的感染、由感染引起的肌痛、恶病质继发感染、以及兽医病毒感染，例如慢病毒、山羊关节炎病毒、羊进行性间质肺炎、猫免疫缺陷病毒、牛免疫缺陷病毒或犬免疫缺陷病毒。

本发明的化合物、药物组合物和方法可用于治疗骨吸收障碍，例如骨质疏松症、骨关节炎、创伤性关节炎、痛风性关节炎和与多发性骨髓瘤相关的骨障碍。

本发明的化合物、药物组合物和方法可用于治疗由BTK和/或FAK酪氨酸激酶或其突变体诱导的癌症。

本发明的化合物、药物组合物和方法可用于治疗由BTK或其突变体诱导的癌症。

本发明的化合物、药物组合物和方法可用于治疗由BTK和/或BMX酪氨酸激酶或其突变体诱导的癌症。

本发明的化合物、药物组合物和方法可用于治疗由BMX酪氨酸激酶诱导的癌症。

本发明的化合物、药物组合物和方法可用于治疗由ERK激酶诱导的癌症。

癌症或肿瘤的例子可包括但不限于肝癌、肝细胞癌、甲状腺癌、结肠直肠癌、睾丸癌、骨癌、口腔癌、基底细胞癌、卵巢癌、脑肿瘤、胆囊癌、胆道癌、头颈癌、结肠直肠癌、膀胱癌、舌癌、食道癌、神经胶质瘤、胶质母细胞瘤、肾癌、恶性黑色素瘤、胃癌、乳腺癌、肉瘤、咽癌、子宫癌、宫颈癌、前列腺癌、直肠癌、胰腺癌、肺癌、皮肤癌和其他实体癌。

当本发明的化合物、药物组合物和方法外与另一种抗癌剂一起施用给受试者时，可增强抗癌效果。

抗癌剂的例子可以包括但不限于免疫疗法(例如CTLA4拮抗剂、细胞信号转导抑制剂(例如，伊马替尼、吉非替尼、硼替佐米、埃罗替尼、索拉非尼、舒尼替尼、达沙替尼、伏立诺他、拉帕替尼、西罗莫司脂化物、尼洛替尼、依维莫司、帕唑帕尼、曲妥珠单抗、贝伐单抗、西妥昔单抗、兰尼单抗、哌加他尼、帕尼单抗等)、有丝分裂抑制剂(例如，紫杉醇、长春新碱、长春碱等)、烷化剂(例如，顺铂、环磷酰胺、瘤可宁、卡莫司汀等)、抗代谢物(例如，甲氨蝶呤、5-FU等)、嵌入抗癌剂(例如，放线菌素、蒽环霉素、博莱霉素、丝裂霉素-C等)、拓扑异构酶抑制剂(例如，伊立替康、拓扑替康、替尼泊苷等)、免疫治疗剂(例如，白细胞介素、干扰素等)和抗激素剂(例如，他莫昔芬、雷洛昔芬等)，至少一种选自上述的抗癌剂可包含在本发明的药物组合物中。

同位素标记的化合物也在本公开的范围内。如本文所用，“同位素标记的化合物”是指目前公开的化合物，包括其药用盐和前药，如本文所述，一个或多个原子被原子质量或质量数不同于自然界中常见的原子质量或质量数的原子所取代。可结合到本申请公开的化合物的同位素例子包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，例如²H、³H、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁸O、¹⁷O、³¹P、³²P、³⁵S、¹⁸F、³⁶Cl。

通过同位素标记本申请公开的化合物，所述化合物可用于药物和/或基质组织分布分析。因其易于制备和检测，可特别优选氚(³H)和碳-14(¹⁴C)来标记化合物。此外，用较重的同位素如氘(²H)替代可带来一些治疗优势，这些优势得益于较高的代谢稳定性，例如增加体内半衰期或降低剂量要求，因此在某些情况下是优选的。本申请公开的同位素标记的化合物，以及其药用盐、酯和前药，可通过本领域已知的方法制备。

此外，用较重的同位素如氘取代通常丰富的氢(¹H)可得到某些治疗方面的益处，例如，改善了吸收、分布、代谢和/或排泄(ADME)特性后，所得药物的功效、安全性和/或耐受性得到了改善。用¹³C替换通常丰富的¹²C也可带来益处。(参见，WO 2007/005643、WO 2007/005644、WO 2007/016361和WO2007/016431。)

本申请公开的化合物的立体异构体(例如顺式和反式异构体)和所有光学异构体(例如R和S对映异构体)，以及这些异构体的外消旋混合物、非对映异构体和其他混合物都都落入本公开的范围内。

本公开的化合物制备完成后，优选地分离和纯化，以获得含有等于或大于95重量％的量(“基本上纯的”)的组合物，然后如本文所述进行使用或配制。在某些实施例中，本发明的化合物纯度大于99％。

本发明还构想了本公开的化合物的溶剂化物和多晶型物。本发明化合物的溶剂化物包括，例如水合物。

可采用任何合适的给药方式，例如肠胃外、静脉内、皮下、肌内、脑室内、体内、腹膜内、直肠或口服。对于某些患者，最合适的给药方式将取决于所治疗的疾病或病症的性质和严重程度，或所用的治疗方法的性质和活性化合物的性质。

口服固体剂型包括胶囊、片剂、丸剂、粉剂和颗粒剂。在这种固体剂型中，本文所述的化合物或其衍生物与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，例如柠檬酸钠或磷酸二钙，或(I)填充剂或补充剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸，(ii)粘合剂，例如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯树胶，(iii)湿润剂，例如甘油，(iv)崩解剂，例如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐和碳酸钠，(v)溶液缓凝剂，例如石蜡，(vi)吸收促进剂，例如季铵化合物，(vii)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯，(viii)吸附剂，例如高岭土和膨润土，和(ix)润滑剂，例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠或其混合物。剂型为胶囊、片剂和丸剂时，也可包含缓冲剂。相似类型的固体组合物也可用作软和硬明胶胶囊的填充剂，使用诸如乳糖或牛奶糖以及高分子量聚乙二醇等作为赋形剂。固体剂型如片剂、糖衣丸、胶囊、丸剂和颗粒剂可以采用包衣和壳，如肠溶衣和本领域已知的其它材料制备。

口服液体剂型包括药学上可接受的乳剂、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。除了活性化合物之外，所述液体剂型可含有本领域常用的惰性稀释剂，例如水或其它溶剂、增溶剂和乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚芽油、橄榄油、蓖麻油、芝麻油、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和脱水山梨醇脂肪酸酯，或这些物质的混合物，等等。除了这些惰性稀释剂之外，该组合物还可以包括其他助剂，例如润湿剂、乳化剂、悬浮剂、甜味剂、调味剂或加香剂。

本文公开的材料、组合物和成分可用于所公开的方法和组合物、可结合于所公开的方法和组合物、可用于制备所公开的方法和组合物，或是所公开的方法和组合物的产物。应当理解，公开这些材料的组合、子集、相互关系、集合等时，尽管未明确地具体公开这些化合物的每个个体的、集合组合以及排列组合的具体参考，但本文也具体构想和描述了每一种情况。例如，如果公开和讨论了某种方法，并且讨论了可以对该方法中的一些分子进行修改，则该方法的每种组合和变换，以及可能的修改都被具体考虑，除非特别指明并非如此。同样，也具体设想并公开了上述的任何子集或组合。该概念适用于本公开的所有方面，包括但不限于使用所公开的组合物的方法中的步骤。因此，如果有其他可执行的附加步骤，应当理解，这些附加步骤可以用本公开的方法的任何特定步骤或组合步骤来得到，并且这样的组合或组合的子集都已被具体构想，且应视为已公开。

以下实施例旨在说明本发明的实施方式，而非以任何方式对其进行限制。

实施例

化合物的合成

4-[3-[(5-乙基-2，2-二甲基-1，3-二恶烷-5-基)氧代]丙氧基]苯胺(I-1)

方案1

在圆底烧瓶中，加入2，2-二甲基-5-乙烯基-1，3-二恶烷(2.9g，20.4mmol，2.0eq.)，3-(4-硝基苯氧基)丙-1-醇(2.0g,10.2mmol,1.0eq.)，碳酸钠(206mg,2.0mmol,0.2eq.)，RuCl₂(PPh₃)₃(192mg,0.2mmol,2.0％mol)，在氮气下于115℃加热3小时。薄层色谱(TLC)显示反应完全(PE/EA＝15:1)，得到粗产物5-乙基-2，2-二甲基-5-[3-(4-硝基苯氧基)丙氧基]-1，3-二氧六环(2.78克，收率80％)。

向上述得到的中间产物(2.78g,8.2mmol)的乙酸乙酯(60mL)溶液中加入碳载钯(200mg,7％Wt)。将反应烧瓶抽真空/重新充入氢气数次。在室温下，该混合物在氢气下搅拌16小时。过滤和浓缩后，残余物用石油醚/乙酸乙酯(v/v比＝5∶1→3∶1)通过硅胶柱色谱纯化，得到所需的4-[3-[(5-乙基-2，2-二甲基-1，3-二恶烷-5-基)氧代]-丙氧基]苯胺(I-1)(2.4g，产率95％)。

LC-MS:液相色谱-质谱联用仪(LC-MS):168.1[ESI，M+1，3-(4-氨基苯氧基)-1-丙醇]6，7，9，10，12，13-六氢-5，8，11，14-四氧杂-苯并环十二碳烯-2-基胺(I-2)

方案2

第1步：在氮气下，向正丁醇(220mL)中的混合物(22.02g,199.98mmol)加入46mL的LiOH·H₂O(18.46g,439.94mmol)水溶液。将该混合物加热至95℃，然后向正丁醇(240mL)中加入1-氯-2-[2-(2-氯-乙氧基)-乙氧基]-乙烷(37.43g,200.09mmol)。将反应混合物加热过夜，然后过滤。加入1M盐酸水溶液以将pH调至8。减压除去大部分正丁醇后，残留物用二氯甲烷(250mL x 2)萃取。然后用盐水洗涤合并的有机层，并用无水硫酸镁干燥。粗产物通过硅胶柱色谱纯化，得到6.5g的6，7，9，10，12，13-六氢-5，8，11，14-四氧杂-苯并环十二碳烯，为黄色油状物，产率14.4％。

第2步：在乙腈(65mL)中，向回流溶液6，7，9，10，12，13-六氢-5，8，11，14-四氧杂-苯并环十二烯(6.50g,28.98mmol)中滴加硝酸(56％,5.4mL)。当TLC显示反应完成时，加入160mL的水。将所得溶液置于2℃中过夜。收集沉淀并洗涤至中性，得到所需的2-硝基-6，7，9，10，12，13-六氢-5，8，11，14-四氧杂-苯并环十二碳烯，为黄色固体(4.61g,收率59％)。

第3步：向悬浮在90mL的甲醇中的硝基化合物(4.61g,17.12mmol)中加入0.46g的10％Pd/C。氢交换后，将该混合物在H₂下搅拌过夜。TLC显示硝基物质完全还原。除去氢气，将反应烧瓶重新充入氮气数次。将反应混合物过滤、浓缩，并通过硅胶柱色谱纯化，得到3.76g所需苯胺(I-2)(产率91.7％)。

LC/MS:240.2(ES+,M+1)

¹HNMR(CDCl₃,400MHz)δ6.83(d,1H,J＝8Hz),6.33(dd,1H,J＝4Hz),6.26(dd,1H,J＝4,8Hz),(4.11,m 4H),3.89(m,2H),3.80(m,6H),1.75(br s,2H)。

1-[(3R)-3-[[2-[4-[3-[(2-乙基-5，5-二甲基-1，3-二恶烷-2-基)氧代]丙氧基]苯胺基]-5-氟-嘧啶-4-基]氨基]-1-哌啶基]丙-2-烯-1-酮(Compound-1)(化合物-1)

方案3

步骤1(Cl-置换)。将(3R)-3-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(3.8g,19.2mmol)、2，4-二氯-5-F-嘧啶(3.2g,19.2mmol)和三甲胺(4.56mL,32mmol)混合于25mL正丁醇中。将反应混合物在130℃下加热过夜。液相色谱-质谱显示反应完成。浓缩后，将残余物进行常规的水溶液处理，并用乙酸乙酯萃取。用水、盐水洗涤有机层，并用无水硫酸镁干燥。过滤浓缩后，粗产物通过硅胶柱色谱纯化(石油醚/乙酸乙酯v/v4/1)，得到白色固体状的(3R)-3-[(2-氯-5-氟-嘧啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(4.8g，73％)。

步骤2(De-Boc)。用上述Boc-中间体(3.3g,10mmol)与6mL的三氟乙酸在15mL的二氯甲烷中进行脱Boc反应4小时。减压除去溶剂，残余物悬浮在乙酸乙酯(200mL)和饱和碳酸氢钠中。分离有机层并用无水硫酸镁干燥。过滤浓缩后，得到脱Boc产物(1.4g，产率61％)。

步骤3(丙烯酰化)。在-7.5℃下，将5mLDCM中的丙烯酰氯(0.4mL,5.0mmol)加入到脱Boc中间体(0.8g,3.5mmol)和DIPEA(0.91g,7mmol)在20mL的DCM/DMA(v/v 3:1)中的混合物中。将反应混合物搅拌过夜。浓缩并用乙酸乙酯进行常规水溶液处理后，通过硅胶柱色谱纯化最终产物(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)，得到0.62g的丙烯酰胺，产率62％。

步骤4(钯介导的芳基胺化)。向在6mL叔丁醇的丙烯酰胺(0.31g,1.09mmol)和关键中间体I-1(0.4g,1.3mmol)的混合物中，加入碳酸钾(1.4g,9.2mmol)、X-phos(0.22g,0.24mmol)和Pd₂(dba)₃(0.06g,0.12mmol)。氮交换后，混合物在80℃下加热过夜。得到的产物用乙酸乙酯萃取，并通过硅胶柱色谱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝3/1至2/1)，所需的最终产物1-[(3R)-3-[[2-[4-[3-[(2-乙基-5，5-二甲基-1，3-二恶烷-2-基)氧代]丙氧基]苯胺基]-5-氟-嘧啶-4-基]氨基]-1-哌啶基]丙-2-烯-1-酮(0.15g，25％)。

LC-MS:m/z(ES+,M-142 2，5，5-三甲基-1，3-二氧六环)

1-[(3R)-3-[[5-氟-2-(2，5，8，11-四氧杂双环[10.4.0]十六烷基-1(12)，13，15-三烯- 14-基氨基)嘧啶-4-基]氨基]-1-哌啶基]丙-2-烯-1-酮(Compound-2)的合成

方案4

向在4mL正丁醇的丙烯酰胺(61mg,0.21mmol,1.07eq.)和关键中间体I-2(48mg,0.2mmol,1eq.)的混合物中，加入2滴三氟乙酸。将所得混合物回流过夜。浓缩该反应混合物，残余物用碳酸氢钠中和，用乙酸乙酯萃取。所得粗产物通过硅胶柱色谱纯化(DCM/MeOHv/v＝30/1)，得到所需的1-[3-[[5-氟-2-(2，5，8，11-四氧杂双环[10.4.0]十六烷基-1(12)，13，15-三烯-14-基氨基)嘧啶-4-基]氨基]-1-哌啶基]丙-2-烯-1-酮，为46mg的白色固体(26％)。

LC-MS:m/z 488.2(ES+,M+1).

1-[(3R)-3-[[2-(2，5，8，11-四氧杂双环[10.4.0]十六烷基-1(12)，13，15-三烯-14-基氨基)-9H-嘌呤-6-基]氨基]-1-哌啶基]丙-2-烯-1-酮(Compound-3)的合成

方案5

步骤1(N-保护)。向在20mLDMSO中的2，6-二氯-9H-嘌呤(11g,60mmol)和碳酸铯(29g,90mmol)的混合物中滴加氯甲基2，2-二甲基丙酸酯(13.5g,90mmol)。在室温下搅拌48小时后，将混合物倒入冰中。用乙酸乙酯萃取产物，通过硅胶柱色谱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝7/1至5/1)，得到5g(2，6-二氯嘌呤-9-基)2，2-二甲基丙酸甲酯(27％)。

步骤2(Cl-置换)。此步骤与方案3的步骤1相同，使用(2，6-二氯嘌呤-9-基)2，2-二甲基丙酸甲酯(2.1g，6.93mmol)和2，4-二氯-5-F-嘧啶(1.66g，8.32mmol)，得到(3R)-3-[[2-氯-9-(2，2-二甲基丙酰氧基甲基)嘌呤-6-基]氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯，为白色泡沫状固体(2.3g,71％)。

步骤3(钯介导的芳基胺化)。该步骤与方案3的步骤4相同，使用最后一步得到的产物(1.4g，3.0mmol)，和2，5，8，11-四氧杂双环[10.4.0]十六烷基-1(12)，13，15-三烯-14-胺(0.86g，3.6mmol，X-phos(0.15g，0.3mmol)，Pd₂(dba)₃(0.2g,0.2mmol)，得到(3R)-3-[[9-(2，2-二甲基丙酰氧基甲基)-2-(2，5，8，11-四氧杂双环[10.4.0]十六烷基-1(12)，13，15-三烯-14-基氨基)嘌呤-6-基]氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.6g，30％)。

步骤4(脱保护)。在0℃下，向最后一步得到的二氨基嘌呤(0.6g，0.9mol)在10mLTHF和5mL甲醇的混合物中加入0.96mL的3M氢氧化钠水溶液。在室温下搅拌该混合物5小时，然后加入0.4mL的氢氧化铵(25～28％)。然后继续搅拌过夜，用乙酸乙酯萃取产物。浓缩后，获得粗产物(0.35g)，并直接用于下一步。

步骤5(De-Boc)。使用上面获得的粗产物，在4mLDCM中用2ml的TFA进行Boc脱保护。将反应混合物倒入水中，经超声处理并过滤，得到0.4g固体。

步骤6(丙烯酰化)。使用脱保护的中间体(0.15g,0.33mol)，在12mL的THF/水/DMF(10/1/1)与丙烯酰氯(32μL,1.1eq.)和三甲胺(0.1g，1mmol)的混合溶剂中进行丙烯酰化。搅拌过夜后，将该混合物倒入水中。收集固体，得到29mL黄色固体，纯度96.7％(产率17％)。

LC-MS:510.2(ES+,M+1).

1-[(3R)-3-[[2-(2，5，8，11-四氧杂双环[10.4.0]十六烷基-1(12)，13，15-三烯-14-基氨基)-9H-嘌呤-6-基]氨基]-1-哌啶基]丙-2-烯-1-酮(Compound-4)

Compound-4是由Compound-3在Pd/C催化剂上于甲醇中加氢制得的。

LC-MS:512.2(ES+,M+1).

N-[3-[[2-[4-[3-[(2-乙基-5，5-二甲基-1，3-二恶烷-2-基)氧代]丙氧基]苯胺基]-5- 氟-嘧啶-4-基]氨基]苯基]丙-2-烯酰胺(Compound-5)

使用间-N-Boc苯胺代替3-氨基-N-Boc-哌啶作为起始材料，按照与制备Compound-1相同的方式进行Compound-5的合成。

LC-MS:m/z＝425.1(ES+,M+H-142).

N-[3-[[5-氟-2-(2，5，8，11-四氧杂双环[10.4.0]十六烷基-1(12)，13，15-三烯-14-基氨基)嘧啶-4-基]氨基]苯基]丙-2-烯酰胺(Compound-6)的合成

使用间-N-Boc苯胺代替3-氨基-N-Boc-哌啶作为起始材料，按照与制备Compound-2相同的方式进行Compound-6的合成。

LC-MS:m/z＝496.3(ES+,M+H).

¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ10.15(s,1H),9.41(s,1H),9.04(s,1H),8.08(s,1H),7.93(s,1H),7.48(m,2H),7.37(d,1H,J＝4Hz),7.27(dd,1H,J＝4,8Hz),7.21(dd,1H,J＝4,8Hz),6.83(d,1H,J＝8Hz),6.47(dd,1H,J＝8,16Hz),6.24(dd,1H,J＝4,16Hz),5.74(dd,1H,J＝4,8Hz),4.00(br s,2H),3.88(br s,2H),3.67(br s,4H),3.43(br s,4H)。

N-[3-[[2-(2，5，8，11-四氧杂双环[10.4.0]十六烷基-1(12)，13，15-三烯-14-基氨基)-9H-嘌呤-6-基]氨基]苯基]丙-2-烯酰胺(Compound-7)的合成

使用间-N-Boc苯胺代替3-氨基-N-Boc-哌啶作为起始材料，按照与制备Compound-3相同的方式进行Compound-7的合成。

LC-MS:m/z＝518.3(ES+,M+H).

¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ10.27(s,1H),9.07(s,1H),8.10(s,1H),7.72(d,1H,J＝8Hz),7.51～7.46(m,3H),6.92(d,1H,J＝12Hz),6.50(dd,1H,J＝12,20Hz),6.27(d,1H,J＝20Hz),5.27(d,1H,J＝12Hz),4.00(m,4H),3.68(m,8H)。

N-[3-[[2-(2，5，8，11-四氧杂双环[10.4.0]十六烷基-1(12)，13，15-三烯-14-基氨基)-9H-嘌呤-6-基]氨基]苯基]丙酰胺(Compound-8)

Compound-8是由Compound-7在Pd/C催化剂上于甲醇中加氢制得的。

LC-MS:m/z＝520.3(ES+,M+H).

N-[2-[[2-[4-[3-[(2-乙基-5，5-二甲基-1，3-二恶烷-2-基)氧代]丙氧基]苯胺基]-5- 氟-嘧啶-4-基]氨基]苯基]丙-2-烯酰胺(Compound-9)

Compound-9的制备方法与方案3中Compound-1的制备方法相同，不同的是，从N-(2-氨基苯基)氨基甲酸叔丁酯开始，而非(3R)-3-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯。

LC-MS:m/z＝425.3(ES+,M+H-142碎片).

¹HNMR(CDCl₃,400MHz)δ7.93(d,1H,J＝3Hz),7.63(br s,1H),7.53(br s,1H),7.47(br s,1H),7.29(d,2H,J＝8Hz),6.75(d,2H,J＝8Hz),6.40(d,1H,J＝20Hz),6.15(dd,1H,J＝12,20Hz),5.73(d,1H,J＝12Hz),4.05(t,2H,J＝4hz),3.79(d,2H,J＝12Hz),3.60(t,2H,J＝8Hz),2.10(m,2H),1.75(q,2H,J＝8Hz),1.13(s,3H),0.97(t,3H,J＝8Hz),0.51(s,3H)。

N-[2-[[5-氟-2-(2，5，8，11-四氧杂双环[10.4.0]十六烷基-1(12)，13，15-三烯-14-基氨基)嘧啶-4-基]氨基]苯基]丙-2-烯酰胺(Compound-10)

Compound-10的制备方法与方案4中Compound-2的制备方法相同，不同的是，从N-(2-氨基苯基)氨基甲酸叔丁酯开始，而非(3R)-4-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯。

LC-MS:m/z＝496.2(ES+,M+H).

¹HNMR(CD₃OD,400MHz)δ7.96(s,1H),7.71(d,1H,J＝8Hz),7.56(br d,1H,J＝8Hz),7.34(s,1H),7.29(br t,2H,J＝8Hz),6.92(d,1H,J＝12Hz),6.86(d,1H,J＝8Hz),6.33～6.39(m,2H),5.77(d,1H,J＝12Hz),4.10(br t,2H,J＝4Hz),3.87(br t,2H,J＝4Hz),3.78(s,4H),3.75(s,4H)。

N-[2-[[2-(2，5，8，11-四氧杂双环[10.4.0]十六烷基-1(12)，13，15-三烯-14-基氨基)-9H-嘌呤-6-基]氨基]苯基]丙-2-烯酰胺(Compound-11)

Compound-11的制备方法与方案4中Compound-3的制备方法相同，不同的是，从N-(2-氨基苯基)氨基甲酸叔丁酯开始，而非(3R)-5-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯。

LC-MS:m/z＝518.2(ES+,M+H).

¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ12.6(s,1H),10.11(s,1H),8.81(s,1H),8.76(s,1H),7.92(d,1H,J＝8Hz),7.50(d,1H,J＝8Hz),7.25(m,2H),6.86(d,1H,J＝12Hz),6.56(s,1H),6.41(dd,1H,J＝12,20Hz),6.25(d,1H,J＝20Hz),5.80(dd,1H,J＝4,12Hz),4.00(br s,2H),3.89(br s,2H),3.68(m,8H)。

N-[2-[[2-(2，5，8，11-四氧杂双环[10.4.0]十六烷基-1(12)，13，15-三烯-14-基氨基)-9H-嘌呤-6-基]氨基]苯基]丙酰胺(Compound-12)

Compound-12是由Compound-11在10％Pd/C上于甲醇中氢化制得的。Compound-12也可用制备Compound-11的方法制得，不同的是，进行丙烷化而非丙烯酰化。

LC-MS:m/z＝520.2(ES+,M+H).

2-氨基-N-甲氧基-苯甲酰胺(I-3)

方案6

在0℃下，将10mL的2M氢氧化钠水溶液加入到25％的0-甲基羟胺(1640mg,19.6mmol,3.2eq.)水溶液里。搅拌30分钟后，将1H-3，1-苯并恶嗪-2，4-二酮(994mg,6.1mmol,1eq.)分几份加入。然后将反应混合物在室温下搅拌3小时。用乙酸乙酯萃取所需产物，用乙醚滴定，得到棕色固体(600mg,60％)。

4，6-二氯-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[3，4-d]嘧啶(I-4)

方案7

向在3mLTHF和3mLDCM中的4，6-二氯-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶(200mg,1.06mmol,1.0eq)和对甲苯磺酸(20.1mg,0.106mmol,0.1eq)混合物中加入3，4-二氢-2H-吡喃(134mg,1.6mmol,1.5eq)。混合物在室温下搅拌1小时，直到TLC显示完全反应。将反应混合物浓缩，然后重新溶解在10mL的DCM中，用饱和NaHCO₃、水和盐水洗涤。将有机层干燥并浓缩，得到所需中间体I-4(287mg,100％)，为白色固体。

N-[3-(氨甲基)-2-吡啶基]-N-甲基甲磺酰胺(I-5)

方案8

向在20mLDMF的N-甲基甲磺酰胺(2.18g,20mmol,1.0eq)中加入叔丁醇钾(t-BuOK)(2.24g,20mmol,1.0eq.)。在室温下搅拌30分钟后。一次性加入2-氟-3-氰基吡啶(2.44g,20mmol,1.0eq),将所得混合物加热至80℃2小时。(TLC显示反应完全)。将反应混合物倒在冰上，并用乙酸乙酯萃取。浓缩干燥过的有机层，通过硅胶柱色谱纯化，用石油醚/乙酸乙酯(v/v＝1/1)作为洗脱剂，得到N-(3-氰基-2-吡啶基)-N-甲基-甲磺酰胺(4.0g,93％)。

将4.0g的腈在含10％Pd/C的甲醇中氢化过夜。TLC显示两种产物，m/z＝216和413。产物通过硅胶柱色谱纯化，使用DCM/MeOH＝10/1作为洗脱剂，得到所需的I-5(3.0g，73％)。

N-[(1R，2R)-2-羟基环己基]-N-甲基甲磺酰胺(I-6)

方案9

向在30mL的DCM中的(1R，2R)-2-氨基环己醇(3.02g,20mmol)、TEA(8.5ml,60mmol)和DMAP(0.75g,6.0mmol)混合物中，加入TBSCl(4.5g,30mmol)。将反应混合物搅拌过夜。用水洗涤后，有机层用MgSO₄干燥。过滤和浓缩后，残余物直接用于下一步。

在冰浴中，向上述获得的TBS醚中加入含20mLDCM的三乙胺(4.6mL,34.2mmol)，然后加入MsCl(1.0ml,13.7mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。进行常规的水性处理后，将浓缩的粗产物通过硅胶柱色谱纯化(石油醚/乙酸乙酯，v/v＝8/1)，得到N-[(1R，2R)-2-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧环己基]甲磺酰胺(3.0g，两步总收率49％)。

向上述获得的磺酰胺(1.5g,4.9mmol)和碳酸铯(3.19g,9.8mmol)在10mLDMF的混合物中加入碘甲烷(0.37mL,5.88mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入水中，用乙酸乙酯萃取产物。干燥并浓缩后，产物通过硅胶柱色谱纯化(DCM/MeOH＝50/130/1)，→得到1.56g(97％)N-间-磺酰胺。

通过使N-间-磺酰胺与TBAF(1.5equiv)反应，进行TBS基团的脱保护，得到所需的醇I-6(660mg,66％)。

N-[(1R，2R)-2-羟基环戊基]-N-甲基甲磺酰胺(I-7)

使用(1R，2R)-2-氨基环戊醇盐酸盐代替(1R，2R)-2-氨基环己醇作为起始原料，用与方案8中所示的I-6相同的方式制备中间体I-7。

N-[2-[[2-(2，5，8，11-四氧杂双环[10.4.0]十六烷基-1(12)，13，15-三烯-14-基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]氨基]苯基]丙酰胺(Compound-13)

方案1

Compound-13的合成方法如方案10所示，其与方案5中化合物-3的合成相似，不同之处在于使用2，4-二氯吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)甲基2，2-二甲基丙酸酯代替2，6-二氯-9H-嘌呤作为起始原料，并且最终步骤是丙酰化，而不是丙烯酰化。

LC-MS:m/z＝518.9(ES+,M+H).

¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ10.17(s,1H),9.74(s,1H),8.64(s,1H),7.72(s,1H),7.56(s,2H),7.18(m,t,J＝9～12Hz),6.30(s,1H),4.01(br s,2H),3.92(br s,2H),3.68(m,8H),2.30(q,2H,J＝6Hz),1.03(t,3H,J＝6Hz)。

N-[2-[[6-(2，5，8，11-四氧杂双环[10.4.0]十六烷基-1(12)，13，15-三烯-14-基氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基]氨基]苯基]丙酰胺(Compound-14)

方案11

Compound-14的合成方案如方案11所示，除了使用4，6-二氯-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[3，4-d]嘧啶(I-4)代替2，4-二氯吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)甲基2，2-二甲基丙酸酯作为起始原料之外，其与方案10中Compound-13的合成相似。

LC-MS:m/z＝519.9(ES+,M+H).

¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ12.9(s,1H),9.58(s,1H),9.18(s,1H),7.71～7.64(m,3H),7.63(s,1H),7.26(m,3H),6.87(s,1H),4.03(br s,2H),3.96(br s,2H),3.64～3.72(m,8H),2.30(q,2H,J＝6Hz),1.03(t,3H,J＝6Hz)。

N-甲氧基-2-[[6-(2，5，8，11-四氧杂双环[10.4.0]十六烷基-1(16)，12，14-三烯-14- 基氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基]氨基]苯甲酰胺(Compound-15)

Compound-15按照与方案11中的Compound-14相同的方式制备，从中间体I-3和I-4开始。

LC-MS:m/z＝521.9(ES+,M+H).

¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ13.91(s,1H),11.23(s,1H),10.91(s,1H),8.91(br s,1H),8.78(br s,1H),8.05(d,1H,J＝6.0Hz),7.73(t,1H,J＝6Hz),7.44(t,1H,J＝5.6Hz),7.14(dd,1H,J＝1.6,6.8Hz),7.05(d,1H,J＝1.6Hz),4.081(br s,2H),4.03(br s,2H),4.01(s,3H),3.70(s,2H),3.61(br s,4H),3.59(s,2H)。

N-甲基-N-[(1R，2R)-2-[[2-(2，5，8，11-四氧杂双环[10.4.0]十六烷基-1(16)，12，14- 三烯-14-基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]氧代]环己基]甲磺酰胺(Compound-16)

Compound-16按照与方案10中的Compound-13相同的方式制备，不同的是，从中间体I-6开始，而非N-(2-氨基苯基)氨基甲酸叔丁酯。

LC-MS:m/z＝561.9(ES+,M+H).

¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.41(s,1H),8.93(s,1H),7.57(s,1H),7.32(d,1H,J＝6.0Hz),6.95(d,2H,J＝5.6Hz),6.25(s,1H),5.37(br s,1H),4.10(br s,2H),4.01(br s,2H),3.93(br s,2H),3.91(br s,2H),3.78(m,6H),2.84(s,3H),2.51(s,3H),2.29(br s,1H),1.75(m 5H),1.07～1.40(m,5H)。

N-甲基-N-[(1R，2R)-2-[[6-(2，5，8，11-四氧杂双环[10.4.0]十六烷基-1(16)，12，14- 三烯-14-基氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基]氧代]环己基]甲磺酰胺(Compound-17)

Compound-17按照与方案11中的Compound-15相同的方式制备，不同的是，从中间体I-6开始，而非N-(2-氨基苯基)氨基甲酸叔丁酯。

LC-MS:m/z＝562.9(ES+,M+H).

¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ13.20(s,1H),9.36(s,1H),7.82(s,1H),7.55(s,1H),7.35(d,1H,J＝5.6Hz),6.98(d,1H,J＝6.8Hz),5.41(m,1H),4.16(br s,2H),4.07(br s,2H),3.90(m,1H),3.77(s,2H),3.71(br s,2H),3.65(s,4H).2.86(s,3H),2.68(s,3H),2.28(m,1H),1.78(m,3H),1.25～1.75(m,4H)。

N-甲基-N-[2-[[2-(2，5，8，11-四氧杂双环[10.4.0]十六烷基-1(16)，12，14-三烯-14- 基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]氧代]环戊基]甲磺酰胺(Compound-18)

所述化合物(Compound-18)按照与Compound-16相同的方式制备，不同的是，从中间体I-7开始，而非I-6。

LC-MS:m/z＝547.9(ES+,M+H).

¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.51(s,1H),8.90(s,1H),7.58(d,1H,＝3.2Hz),7.32(d,1H,J＝6.0Hz),6.95(m,2H),6.21(br s,1H),5.37(br s,1H),4.07(br s,2H),4.01(brs,2H),3.55～3.75(m,6H),2.84(s,3H),2.75(s,3H),2.29(br s,1H),1.96(m,1H),1.72(m,4H)。

N-甲基-N-[(1R，2R)-2-[[6-(2，5，8，11-四氧杂双环[10.4.0]十六烷基-1(16)，12，14- 三烯-14-基氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基]氧代]环戊基]甲磺酰胺(Compound-19)

Compound-19按照与Compound-16相同的方式制备，不同的是，从中间体I-7开始，而非I-6。

LC-MS:m/z＝548.9(ES+,M+H).

¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ9.31(s,1H),7.82(s,1H),7.52(s,1H),7.28(d,1H,＝8.8Hz),5.54(t,1H,J＝3.6Hz),4.36(m,1H),4.06(br s,2H),4.02(br s,2H),3.71(br s,2H),3.65(br s,2H),3.60(s,4H),2.84(s,3H),2.73(s,3H),2.29(m,1H),1.96(m,1H),1.72(m,4H)。

N-甲基-N-[4-[[[2-(2，5，8，11-四氧杂双环[10.4.0]十六烷基-1(16)，12，14-三烯- 14-基氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]氨基]甲基]-3-吡啶基]甲磺酰胺(Compound- 20)

Compound-20按照与Compound-16相同的方式制备，不同的是，从中间体I-5开始，而非I-6。

LC-MS:m/z＝569.9(ES+,M+H).

¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.0(s,1H),8.45(s,1H),8.43(s,1H),7.82(d,1H,＝3.2Hz),7.75(br t,1H),7.50(s,1H),7.45(d,1H,J＝6.0Hz),7.23(d,1H,J＝6.0Hz),6.80(s,1H),6.75(s,1H),6.45(s,1H),4.78(s,2H)4.00(br s,2H),3.95(br s,2H),3.60～3.70(m,8H),3.23(s,3H),3.15(s,3H)。

N-甲基-N-[4-[[[6-(2，5，8，11-四氧杂双环[10.4.0]十六烷基-1(16)，12，14-三烯- 14-基氨基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基]氨基]甲基]-3-吡啶基]甲磺酰胺(Compound- 21)的合成

Compound-21按照与方案11中的Compound-15相同的方式制备，不同的是，从中间体I-5开始，而非N-(2-氨基苯基)氨基甲酸叔丁酯。

LC-MS:m/z＝570.9(ES+,M+H).

¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ10.02(br s,1H),8.49(d,1H,＝8Hz),7.86(d,1H,J＝8Hz),7.43(dd,1H,J＝8,10Hz),7.25(s,1H),6.97(m,2H),4.86(d,2H,J＝6Hz),4.05(br s,2H),3.93(br s,2H),3.60～3.70(m,8H),3.17(s,3H),3.13(s,3H)。

N6-(1H-吲哚-4-基)-N2-(2，5，8，11-四氧杂双环[10.4.0]十六烷基-1(12)，13，15-三烯-14-基)-9H-嘌呤-2，6-二元胺(Compound-22)的合成

Compound-22按照与方案5相同的方式制备，从1H-吲哚-4-胺开始。

LC-MS:m/z＝487.9(ES+,M+H).

¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ12.60(s,1H),11.14(s,1H),8.87(s,1H),8.77(s,1H),7.98(d,1H,＝4Hz),7.69(s,1H),7.52(s,1H),7.29(s,1H),7.24(d,1H,J＝8Hz),7.20(d,1H,J＝8Hz),6.82(d,1H,J＝8Hz),6.54(s,1H),6.42(m,1H),4.00(br s,2H),3.81(br s,2H),3.62～3.67(br d,8H)。

N6-(1H-吲哚-7-基)-N2-(2，5，8，11-四氧杂双环[10.4.0]十六烷基-1(12)，13，15-三烯-14-基)-9H-嘌呤-2，6-二元胺(Compound-23)的合成

Compound-23按照与方案-5相同的方式制备，从1H-吲哚-7-胺开始。

LC-MS:m/z＝487.9(ES+,M+H).

¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.20(s,1H),9.23(s,1H),8.68(s,1H),7.94(s,1H),7.70(t,1H,＝4Hz),7.46(s,1H),7.32(d,1H,J＝8Hz),7.28(d,1H,J＝4Hz),6.99(d,1H,J＝8Hz),6.76(d,1H,J＝8Hz),6.45(s,1H),4.00(br s,2H),3.82(br s,2H),3.62～3.67(m,8H)。

N-甲基-N-[(1R，2R)-2-[2-(2，5，8，11-四氧杂双环[10.4.0]十六烷基-1(12)，13，15- 三烯-14-基氨基)噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-基]氧代环戊基]甲磺酰胺(Compound-24)的合成

所述化合物(Compound-24)按照与Compound-18相同的方法制备，从2，4-二氯噻吩并[2，3-d]嘧啶和关键中间体I-5开始。

LC-MS:m/z＝564.9(ES+,M+H).

¹HNMR(CDCl₃,400MHz)δ7.44(s,1H),7.15(d,1H,＝4Hz),7.11(d,1H,J＝8Hz),6.96(m,3H),5.51(m,1H),4.56(q,1H,J＝8Hz),4.22(br s,2H),4.18(br s,2H),3.90(br s,2H),3.85(br s,2H),3.81(s,4H),2.85(s,3H),2.79(s,3H),2.31(m,1H),2.02(m,1H),1.80(m,4H)。

N-[5-甲基-2-[[6-(2，5，8，11-四氧杂双环[10.4.0]十六烷基-1(12)，13，15-三烯-14- 基氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基]氨基]苯基]丙-2-烯胺(Compound-26)

所述化合物按照与方案11相同的方法制备，在氯置换步骤使用N-(2-氨基苯基)丙酰胺与4，6-二氯-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[3，4-d]嘧啶反应，随后用2，5，8，11-四氧杂双环[10.4.0]十六烷基-1(16)，12，14-三烯-14-胺进行钯介导的芳基胺化。

所述化合物按照与方案11相同的方法制备，在氯置换步骤中使用N-(2-氨基-5-甲基-苯基)氨基甲酸叔丁酯与4，6-二氯-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[3，4-d]嘧啶反应，然后用2-[2-(4-氨基-2-甲氧基-苯氧基)乙氧基]乙醇进行钯介导的芳基胺化，并在Boc-脱保护后进行最终的丙烯酰化，

LC-MS:m/z 532.2(ES+,M+H).

HNMR(DMSO-d6,300MHz)δ9.86(s,1H),9.72(s,1H),9.21(s,1H),8.87(s,1H),7.59(s,1H),7.50(s,1H),7.44(d,1H,J＝6Hz),7.21(br s,1H),7.02(t,1H,J＝6Hz),6.82(d,1H,J＝6Hz),6.44(dd,1H,J＝6,12Hz),6.18(d,1H,J＝12Hz),5.68(m,1H),3.99(d,2H,J＝6Hz),3.90(br s,1H),3.67(s,2H),3.64(s,2H),3.59(s,4H),2.31(s,3H)。

N-[5-甲基-2-[[2-(2，5，8，11-四氧杂双环[10.4.0]十六烷基-1(12)，13，15-三烯-14- 基氨基)-9H-嘌呤-6-基]氨基]苯基]乙酰胺(Compound-27)

所述化合物按照与方案11相同的方法制备，在氯置换步骤使用N-(2-氨基-5-甲基-苯基)乙酰胺与(2，6-二氯嘌呤-9-基)甲基2，2-二甲基丙酸酯反应，随后用2，5，8，11-四氧杂双环[10.4.0]十六烷基-1(16)，12，14-三烯-14-胺进行钯介导的芳基胺化。

LC-MS:m/z 520.4(ES+,M+H).

HNMR(DMSO-d6,300MHz)δ9.82(s,1H),8.72(s,1H),8.56(s,1H),7.86(s,1H),7.71(d,1H,J＝6Hz),7.48(d,1H,J＝6Hz),7.19(m,2H),7.00(d,1H,J＝6Hz),6.82(d,1H,J＝6Hz),3.98(d,2H,J＝6Hz),3.90(br s,1H),3.67(s,2H),3.64(s,2H),3.59(s,4H),2.27(s,3H),2.01(s,3H)。

N-[5-氟-2-[[2-(2，5，8，11-四氧杂双环[10.4.0]十六烷基-1(12)，13，15-三烯-14-基氨基)-9H-嘌呤-6-基]氨基]苯基]乙酰胺(Compound-28)

所述化合物按照与方案11相同的方法制备，在氯置换步骤使用N-(2-氨基-5-氟-苯基)乙酰胺与(2，6-二氯嘌呤-9-基)甲基2，2-二甲基丙酸酯反应，随后用2，5，8，11-四氧杂双环[10.4.0]十六烷基-1(16)，12，14-三烯-14-胺进行钯介导的芳基胺化。

LC-MS:m/z 524.4(ES+,M+H).

HNMR(DMSO-d6,300MHz)δ9.85(s,1H),8.91(s,1H),8.60(s,1H),7.99(d,1H,J＝6Hz),7.91(s,1H),7.44(d,1H,J＝3Hz),7.31(m,2H),6.92(m,1H),6.85(d,1H,J＝6Hz),3.98(d,2H,J＝6Hz),3.90(br s,1H),3.67(s,2H),3.64(s,2H),3.59(s,4H),2.05(s,3H)。

N-[2-[[2-(2，5，8，11-四氧杂双环[10.4.0]十六烷基-1(12)，13，15-三烯-14-基氨基)-9H-嘌呤-6-基]氨基]-5-(三氟甲基)苯基]乙酰胺(Compound29)

所述化合物按照与方案11相同的方法制备，在氯置换步骤使用N-[2-氨基-5-(三氟甲基)苯基]乙酰胺与(2，6-二氯嘌呤-9-基)2，2-二甲基丙酸甲酯反应，随后用2，5，8，11-四氧杂双环[10.4.0]十六烷基-1(16)，12，14-三烯-14-胺进行钯介导的芳基胺化。

LC-MS:m/z 574.4(ES+,M+H).

N-[3-[[5-氟-2-(2，5，8，11-四氧杂双环[10.4.0]十六烷基-1(12)，13，15-三烯-14-基氨基)嘧啶-4-基]苯基]丙-2-烯胺(Compound-30)

所述化合物通过(3-氨基苯基)硼酸与2，4-二氯-5-F-嘧啶的Suzuki反应制备，接着用2，5，8，11-四氧杂双环[10.4.0]十六烷基-1(16)，12，14-三烯-14-胺进行丙烯酰化和钯介导的芳基胺化。

LC-MS:m/z 481.2(ES+,M+H).

HNMR(DMSO-d6,300MHz)δ10.30(s,1H),9.60(s,1H),8.58(s,1H),8.39(s,1H),7.79(d,1H,J＝6Hz),7.71(d,1H,J＝6Hz),7.58(s,1H),7.51(t,1H,J＝6Hz),7.24(d,1H,J＝6Hz),6.94(d,1H,J＝6Hz),6.44(dd,1H,J＝6,12Hz),6.24(d,1H,J＝12Hz),5.75(m,1H),3.99(d,2H,J＝6Hz),3.90(br s,1H),3.67(s,2H),3.64(s,2H),3.59(s,4H)。

N-甲基-N-[(1R，2R)-2-[[2-(2，5，8，11-四氧杂双环[10.4.0]十六烷基-1(12)，13，15- 三烯-14-基氨基)-9H-嘌呤-6-基]氧代]茚满-1-基]甲磺酰胺(Compound-31)

所述化合物按照与方案5相同的方法制备，在含二恶烷的碳酸铯存在下，氯置换步骤中使用N-[(1R，2R)-2-羟基茚满-1-基]-N-甲基甲磺酰胺与(2，6-二氯嘌呤-9-基)2，2-二甲基丙酸甲酯反应，随后用2，5，8，11-四氧杂双环[10.4.0]十六烷基-1(16)，12，14-三烯-14-胺进行钯介导的芳基胺化。

LC-MS:m/z 597.2(ES+,M+H).

HNMR(DMSO-d6,300MHz)δ12.72(s,1H),9.19(s,1H),7.96(s,1H),7.57(s,1H),7.32(m,3H),7.17(m,2H),6.90(d,1H,J＝6Hz),5.83(m,1H),5.61(d,1H,J＝6Hz),3.98(d,2H,J＝6Hz),3.90(br s,1H),3.67(s,2H),3.64(s,2H),3.59(s,4H),3.03(s,3H),2.62(s,3H)。

N-甲基-N-[(1R，2R)-2-[[2-(2，5，8，11-四氧杂双环[10.4.0]十六烷基-1(12)，13，15- 三烯-14-基氨基)-5-(三氟甲基)-4-吡啶基]氧代]茚满-1-基]甲磺酰胺(Compound-32)

所述化合物的制备，是在含二恶烷的氢化钠存在下，通过用N-[(1R，2R)-2-羟基茚满-1-基]-N-甲基甲磺酰胺对2-氯-4-碘-5-(三氟甲基)吡啶进行碘置换，然后用2，5，8，11-四氧杂双环[10.4.0]十六烷基-1(16)，12，14-三烯-14-胺进行钯介导的芳基胺化。

LC-MS:m/z 624.4(ES+,M+H).

HNMR(DMSO-d6,300MHz)δ9.25(s,1H),8.22(s,1H),7.32(m,4H),7.23(m,1H),7.09(m,1H),6.95(d,1H,J＝6Hz),6.57(s,1H),5.53(d,1H,J＝6Hz),5.30(m,1H),3.98(d,2H,J＝6Hz),3.90(br s,1H),3.67(s,2H),3.64(s,2H),3.59(s,4H),2.97(s,3H),2.59(s,3H)。

实施例1.对BTK wt、BTK(C481S)、BMX、FAK、ITK、EGFR wt激酶的抑制活性

Compound-1到Compound-24中,对BTK wt、BTK(C481S)、BMX、FAK、ITK和EGFR wt激酶活性的抑制是通过³³P ATP“HotSpot”激酶分析平台进行测定的。(参见，e.g.,Ma,et al,2008Expert Opin Drug Discov.3(6):607–621.)

Compound-1至Compound-24都制备成10mM DMSO溶液，然后以1∶3连续稀释至1μΜ-0.05nΜ的浓度。然后，使用“HotSpot”分析平台进行激酶测定。

简而言之，特异性激酶/底物对以及所需的辅因子是在反应缓冲液中制备的；20mM的Hepes pH 7.5,10mM MgCl₂,1mM EGTA,0.02％Brij35,0.02mg/ml BSA,0.1mM Na₃VO₄,2mMDTT,1％DMSO。将化合物输送到反应中，约20分钟后加入ATP(Sigma,St.Louis MO)和³³P ATP(Perkin Elmer,Waltham MA)的混合物，最终浓度为10μM。

反应在室温下进行120分钟，然后将反应物点样到P81离子交换滤纸上(WhatmanInc.,Piscataway,NJ)。通过在0.75％磷酸中大量洗涤过滤器来除去未结合的磷酸盐。减去来自含有非活性酶的对照反应的背景后，将激酶活性数据表示为测试样品中残余激酶活性相对于载体(二甲基亚砜)反应的百分比。用Prism(GraphPad软件)得到IC₅₀值和曲线拟合。

结果如表2所示。

表2.示例性化合物的抑制活性IC₅₀(nm)

对BTK wt、BTK(C481S)、EGFR wt激酶的抑制活性

表3.对BTK wt、BTK(C481S)、EGFR的抑制活性

如表3所示，许多化合物表现出对BTK和BTK(C481S)突变体优异的抑制活性，该突变体对市售的BTK抑制剂伊布替尼(IC₅₀＝A,<50nM)具有抗性，而对与不利影响相关的EGFRWT表现出相对较低的抑制活性(IC₅₀＝C或D)。与实施例1的结果相似，这些化合物的抑制机制与市售的BTK酪氨酸激酶抑制剂伊布替尼的抑制机制非常不同。因此，这些化合物对于癌症患者来说是有潜力的有效且安全的药物，因为它们对BTK和BTK突变体(C481S)表现出有效且优异的抑制活性，而在正常细胞中没有表现出对EGFR WT的抑制活性。

实施例3.对FAK激酶的抑制活性

分别对Compound-1至Compound-32中的某些化合物对FAK激酶的抑制活性进行了测定。激酶测定的过程如上所述，不同之处在于使用了FAK激酶。结果如表4所示。

表4.对FAK的抑制活性

如表4和图6所示，这些化合物表现出对FAK激酶的抑制活性。

实施例4.对BTK、BTK(C481S)和FAK激酶的抑制活性

对Compound-1至Compound-32中的某些化合物对BTK、BTK(C481S)和FAK的抑制活性进行了测定。测定过程与上述相同，使用了BTK、BTK(C481S)和FAK酶。结果如表5所示。

表5.对BTK、BTK(C481S)、FAK的抑制活性

如表5所示，Compound-1至Compound-24中的某些化合物有效地抑制了BTK、BTK(C481S)、FAK激酶，但不抑制EGFR wt。如图2、3和6所示，Compound-1至Compound-24中的某些化合物有效地抑制了BTK(图2)、BTK(C481S)(图3)、FAK(图6)激酶。

实施例5.对BMX和ITK激酶的抑制活性

对Compound-1至Compound-24对TEC家族激酶、BMX和ITK的抑制活性进行测定。测定过程与上述相同，使用了BMX、ITK酶。结果如表6所示。

表6.对BMX和ITK的抑制活性

如表6所示，本发明Compound-1至Compound-24中的某些化合物有效地抑制了TEC家族激酶，如BMX和ITK激酶。如图4和图5所示，Compound-1至Compound-24中的某些化合物有效地抑制了TEC家族激酶，如BMX(图4)和ITK(图5)激酶。

实施例6.对ERK激酶的抑制活性

对Compound-1至Compound-24中的某些化合物对ERK1激酶的抑制活性进行测定。测定过程与上述相同，使用了ERK酶。结果如表7所示。

表7.对ERK的抑制活性

如表7和图7所示，本发明Compound-1至Compound-24中的某些化合物有效地抑制了ERK1激酶。

实施例7.细胞中BTK的抑制活性

磷酸化p-BTK(Y223)的免疫印迹分析

在含有10％胎牛血清(FBS)和1％青霉素/链霉素(Gibco BRL)的RPMI-1640培养基中培养Ramos细胞。在测定前，对Ramos细胞进行计数，并以1x10⁶细胞/mL进行接种，在含有10％FBS的RPMI-1640培养基中培养过夜，细胞以950转/分离心10分钟，然后在300μL培养基中将1～2x10⁶细胞分到管里。用Compound 1-24中的某些化合物在0～3μM、37℃下处理细胞1小时，然后用10μg/mL的抗-IgM(BioLegend)刺激细胞5分钟，然后以2000转/分的速度旋转3分钟。吸取上清液后，将60μL的RIPA裂解缓冲液(50mM Tris-HCl、1mM EDTA、1％NP-40、0.5％脱氧胆酸钠和0.1％SDS、pH 7.4、150mM NaCl、1mM Na₃VO₄)加入细胞沉淀中，在冰上裂解细胞30分钟。以10000转/分的转速旋转5分钟后，将60μL的细胞裂解物转移到一根干净的试管中，并向试管中加入20μL的4x LDS缓冲液。样品在100℃的加热块上煮沸10分钟。将25μL裂解物装载到SDS-PAGE凝胶上(NuPAGE^TM Novex^TM4-12％Bis-Tris Midi Protein Gels,cat.no.WG1402BOX,ThermoFisher)，用于按照制造商的说明书进行蛋白质印迹分析。用于免疫印迹分析的抗体包括Btk和p-Btk(Y223)(cat.no.3553和5082；细胞信号技术,Beverly,MA).p-Btk(Y223)(cat.no.GTX61791；GeneTex,Inc.,Irvine,CA).)。用红外荧光染料检测细胞膜(

800CW驴抗兔IgG(H+L),cat.no.P/N 925-32213；

680RD驴抗小鼠IgG(H+L),cat.no.P/N 925-68072，在LiCor Odyssey扫描仪上扫描(LiCorBiosciences,Lincoln,NB)。

EC₅₀是指引起50％抑制时的浓度，是基于用测试化合物处理的细胞和未处理的细胞(为100％)之间的细胞裂解物中的p-BTK(Y223)信号差异来测定的。EC₅₀的结果如表8所示，其中A表示EC₅₀<100nM，B表示EC₅₀为100-1000nM。

表8.对BTK的抑制活性

如表8所示，许多化合物表现出能够抑制Ramos癌细胞中的BTK在Tyr223位点上的磷酸化。

如图1所示，许多化合物表现出能够抑制Ramos癌细胞中的BTK在Tyr223位点上的磷酸化。

实施例8.细胞中FAK的抑制活性

基于细胞的FAK(Y397)磷酸化测定

在含有10％胎牛血清(FBS)和1％青霉素/链霉素(Gibco BRL)的RPMI-1640培养基中培养PC3细胞。在测定之前，对PC3细胞进行计数,并按1～3x10⁶细胞/孔接种在6孔板中，在含有10％胎牛血清的RPMI-1640培养基中培养过夜。用Compound 1-24中的某些化合物在0～3μM、37℃下处理细胞1小时，然后刮掉细胞，以2000转/分的速度旋转5分钟。吸取上清液后，将100μL的RIPA裂解缓冲液(50mM Tris-HCl、1mM EDTA、1％NP-40、0.5％脱氧胆酸钠和0.1％SDS、pH 7.4、150mM NaCl、1mM Na₃VO₄)加入细胞沉淀中，在冰上裂解细胞30分钟。以12000转/分的转速旋转5分钟后，将90μL的细胞裂解物转移到一根干净的试管中。

酶联免疫吸附试验(ELISA)中，10μL的裂解物用于p-FAK(Y397)酶联免疫吸附试验。按照制造商的说明书，使用FAK[pY397]磷(P)-ELISA试剂盒(ThermoFisherScientific，KHO0441)进行酶联免疫吸附测定。简单来说，一种对FAK特异的单克隆捕获抗体已被包被到所提供的96孔板的孔上。在第一次孵育期间，将50μL已知p-FAK(Y397)含量的标准品和化合物处理的样品(10μL裂解物)加上40μL稀释缓冲液移至孔中，并让p-FAK抗原标准品和样品结合到板上的固定化(捕获)抗体上，将对p-FAK(Y397)50L/孔特异的兔抗体加入到孔中，该抗体通过在室温下孵育3小时与p-FAK蛋白结合来作为检测抗体。洗涤4次后，加入辣根过氧化物酶标记的抗兔IgG。其与检测抗体结合。在培养和洗涤30分钟以除去所有未结合的酶后，加入底物溶液(TMB)，其与结合酶作用后可产生颜色。这种有色产物的强度与样品中p-FAK(Y397)的浓度成正比，450nM处的光密度可以在标准微孔板读数器上读取。

EC₅₀是指引起50％抑制时的浓度，是基于用测试化合物在孔中处理的细胞和未处理的细胞(为100％)之间的p-FAK(Y397)信号差异来测定的。使用微软电子表格进行EC₅₀的计算和结果分析，结果如表9所示，其中，A表示EC₅₀<100nM，B表示EC₅₀为100-1000nM，C表示EC₅₀为1000-3000nM，D表示EC₅₀>3000nM。

表9.细胞中FAK的抑制活性

如表9所示，许多化合物表现出能够抑制PC3癌细胞中的FAK在Tyr397位点上的磷酸化。

为进行蛋白质印迹分析，向90μL裂解物中加入30μL4xLDS缓冲液。样品在100℃的加热块上煮沸10分钟。将25μL裂解物装载到SDS-PAGE凝胶上(NuPAGE^TM Novex^TM4-12％Bis-Tris Midi Protein Gels,cat.no.WG1402BOX,ThermoFisher)，用于进行蛋白质印迹分析。用于免疫印迹分析的抗体包括FAK和p-FAK(Y397)(cat.no.3285和8556；细胞信号技术,Beverly,MA).p-FAK(Y397)(clone 141–9)(cat.no.44-625G,rabbit anti-FAKY397ThermoFisher)。用红外荧光染料检测细胞膜(

800CW驴抗兔IgG(H+L),cat.no.P/N925-32213；

680RD驴抗小鼠IgG(H+L),cat.no.P/N 925-68072，在LiCor Odyssey扫描仪上扫描(LiCor Biosciences,Lincoln,NB)。

实施例9.细胞中ERK的抑制活性

基于细胞的ERK1/2(T202/Y204)磷酸化测定

在含有10％胎牛血清(FBS)和1％青霉素/链霉素(Gibco BRL)的RPMI-1640培养基中培养EOL-1细胞。在测定之前，对EOL-1细胞进行计数,并按1x10⁶细胞/孔接种在6孔板中，在含有10％FBS的RPMI-1640培养基中培养过夜。用Compound 1-24中的某些化合物在0～3μM、37℃下处理细胞3小时，然后收集细胞，以2000转/分的速度旋转5分钟。吸取上清液后，用冷的PBS洗涤细胞，再次离心，将100μL的RIPA裂解缓冲液(50mM Tris-HCl、1mM EDTA、1％NP-40、0.5％脱氧胆酸钠和0.1％SDS、pH 7.4、150mM NaCl、1mM Na₃VO₄)加入细胞沉淀中，在冰上裂解细胞30分钟。以12000转/分的转速旋转5分钟后，将90μL的细胞裂解物转移到一根干净的试管中。

酶联免疫吸附试验(ELISA)中，10μL的裂解物用于p-ERK1/2(T202/Y204)酶联免疫吸附试验。按照制造商的说明书，使用ERK 1/2(pT202/Y204+Total)ELISA试剂盒(Abcam，ab176660)进行酶联免疫吸附试验。具体地，将50μL的所有样品/标准品加入适当的孔中。向每个孔中加入50μL抗体鸡尾酒。将孔板密封，在转速为400转/分的板式振荡器上培养1小时。用3x350μL 1X清洗缓冲液PT清洗每个孔。从孔中抽吸或倾析进行清洗，然后将350μL 1X清洗缓冲液PT分配到每个孔中。完全去除每个步骤的液体，对良好的效果非常重要。进行最后一次清洗后，将盘子倒置，用纸巾吸干以去除多余的液体。向每个孔中加入100μL TMB底物，并于黑暗环境中，在设定为400转/分的板式振荡器上培养15分钟。然后向每个孔中加入100μL的终止溶液。在板式振荡器上摇动1分钟使之混合。记录450nm处的OD值。此为端点读数。

EC₅₀是指引起50％抑制时的浓度，是基于用测试化合物在孔中处理的细胞和未处理的细胞(为100％)之间的p-ERK1/2(T202/Y204)信号或p-ERK1/2(T202/Y204)/总-ERK信号比差异来测定的。使用Microsoft Excel对EC₅₀进行计算和结果分析，结果如表10所示，其中A表示EC₅₀<100nM,C表示EC₅₀为1000-3000nM。

表10.细胞中p-ERK的抑制活性

如表10所示，许多化合物表现出能够抑制EOL-1癌细胞中的ERK(T202/Y204)的磷酸化。

实施例10.癌细胞生长抑制

为测试Compounds 1-24的某些化合物对癌细胞生长的抑制作用，使用了白血病癌细胞株EOL-1和三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231。

在补充有10％胎牛血清(FBS)和1％青霉素/链霉素(Gibco BRL)的RPMI-1640细胞培养基中培养EOL-1和MDA-MB-231细胞。

将储存在液氮罐中的癌细胞系分别在37℃水浴中快速解冻，并离心除去冷冻培养基中的DMSO。将所得细胞沉淀与培养基混合，在37℃、5％CO₂的培养瓶中培养2-3天。将EOL-1细胞在新鲜培养基中以1:5～10的稀释度进行传代培养。对于MD-MB-231细胞，将培养基除去，剩余的细胞用PBS(磷酸盐缓冲盐水)洗涤，并用胰蛋白酶-EDTA酶化。分离的细胞在新鲜培养基中以1:5～10的稀释度进行传代培养。

对于细胞生长抑制试验，在加入化合物之前，将细胞以5x 10⁴细胞/孔(EOL-1细胞)和5x 10³细胞/孔(MDA-MB-231细胞)接种在96孔细胞培养板中,50μL，并在5％CO₂下于37℃中培养3至6小时。

将Compounds 1-24中的某些化合物溶解在二甲基亚砜(DMSO)中，浓度为10mM。用培养基将含有测试化合物的DMSO溶液稀释至最终浓度为600μΜ，然后稀释100倍至6μM为最高剂量，随后以1∶3连续稀释，然后向50μL细胞中加入50μL稀释过的化合物，最终最高剂量为3μM，并将培养板在37℃、5％CO₂下培养72小时。按照制造商的说明书，使用Cell Meter^TM荧光法细胞毒性检测试剂盒(AAT Bioquest)来测定细胞活性。简单来说，将检测溶液(成分A)解冻并加热至37℃，并充分混合。添加20μL/孔(96孔板)的检测溶液(成分A)。轻轻摇动孔板30秒，以混合试剂。将细胞在37℃、5％CO₂的培养箱中避光培养1-24小时。监测Ex/Em＝540/590nm处的荧光强度(底部读取模式)。或者，读取570nm处的O.D.(参考波长应为600nm)，以确定每个孔中的细胞活性。

IC₅₀是指引起50％抑制时的浓度，是基于测试细胞的最终密度和未用测试化合物处理的孔中培养的细胞的初始密度之间的差异来测定的。使用Microsoft Excel对GI₅₀进行计算和结果分析，结果如表11所示。

表11.示例性化合物的IC₅₀

如表11所示，许多化合物抑制了EOL-1和MDA-MB-231细胞的生长，表现出抗癌活性。

申请人在此的公开内容已通过参照附图在优选实施例中描述，其中相同的数字表示相同或相似的元件。贯穿本说明书对“一个实施例”、“实施例”或类似语言的引用表示结合该实施例描述的特定特征、结构或特性被包括在本发明的至少一个实施例中。因此，贯穿本说明书的短语“在一个实施例中”、“在实施例中”和类似语言的出现可以但不一定都指同一实施例。

在一个或多个实施例中，申请人公开的所述特征、结构或特性可以以任何合适的方式组合。在本文的描述中，列举了许多具体细节以提供对本发明实施例的全面理解。然而，相关领域的技术人员将认识到，申请人的组合物和/或方法可以在缺少一个或多个具体细节的情况下，或用其他方法、成分、材料等来实施。在其他情况下，公知的结构、材料或操作没有被详细示出或描述，以避免模糊本公开的诸方面。

在本说明书和所附权利要求中，单数形式“一个”、“该”和“所述”包括复数引用，除非上下文另有明确说明。

除非另外定义，否则这里使用的所有技术和科学术语具有与本领域普通技术人员通常理解的相同的含义。虽然与本文所述的方法和材料相似或等同的任何方法和材料也可用于实践或测试，但这里仅描述了优选的方法和材料。除了所公开的特定顺序之外，本文所述的方法可以逻辑上可能的任何顺序来操作。

通过引用并入

本公开中，参考和引用了其他文件，例如专利、专利申请、专利出版物、期刊、书籍、论文、网络内容。处于所有目的,本文所述所有文件在此通过提述方式全部纳入本文。任何材料或其某部分，也就是通过引用并入本文的，但与本文明确阐述的现有定义、陈述或其他公开材料相冲突的，仅在该并入的材料和本公开材料之间不发生冲突的情况下并入。在发生冲突的情况下，从有利于本申请的角度来解决冲突，将该有利于本申请的公开作为优选实施方式。

等同物

代表性实施例旨在帮助说明本发明，并非限制本发明的范围，也不应将其解释为限制本发明的范围。实际上，除了在此示出的和描述的之外，本文档的全部内容，包括文档中包含的例子和对科学和专利文献的引用，使得本发明的各种修改及其多种进一步的实施例对于本领域的技术人员来说是显而易见的。这些实施例包含重要的附加信息、范例和指导，这些信息、范例和指导可适用于本发明的各种实施例及其等同物的实践。

Claims

1.一种化合物，其特征在于，具有结构式(I):

其中，

X是NH(CH₂)_n、O或S，n为0或1；

A是5-7元、脂肪族或芳香族、环状或杂环部分；

B是5-7元、脂肪族或芳香族、环状或杂环部分；

或其药学上可接受的形式。

2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，R₂和R₃共同形成5元环，具有结构式(II):

其中，

Y₁选自CH、CH₂、N、NH、O或S；

Y₂选自CH、CH₂、N、NH、O或S；

Y₃选自CH、CH₂、N、NH、O或S；和

Y₁和Y₂之间的键与Y₂和Y₃之间的键中，至少一个是单键。

3.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，B是六元芳基，且所述化合物具有结构式(III):

4.根据权利要求3所述的化合物，其特征在于，R₄和R₅分别位于间位和对位，具有结构式(IV):

5.根据权利要求3或4所述的化合物，其特征在于，R₄和R₅共同形成6-15元脂肪族、环状或杂环部分。

6.根据权利要求3-5中任一项所述的化合物，其特征在于，R₄和R₅共同形成12元脂肪族杂环部分。

7.根据权利要求3-6中任一项所述的化合物，其特征在于，具有结构式(V-a):

8.根据权利要求3-7中任一项所述的化合物，其特征在于，R₂和R₃共同形成5元杂环芳基部分，具有结构式(VI-a):

其中，

Y₁选自CH、CH₂、N、NH、O或S；

Y₂选自CH、CH₂、N、NH、O或S；

Y₃选自CH、CH₂、N、NH、O或S；和

Y₁和Y₂之间的键可以是双键或单键；Y₂和Y₃之间的键可以是双键或单键；前提是

Y₁、Y₂和Y₃中的至少一个是CH或CH₂；和

Y₁和Y₂之间的键与Y2和Y3之间的键中，至少一个是单键。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的化合物，其特征在于，A是6元芳基部分，具有结构式(VII):

其中，

Z是CH或N；和

10.根据权利要求9所述的化合物，其特征在于，Z是CH。

11.根据权利要求9所述的化合物，其特征在于，Z是N。

12.根据权利要求1-8中任一项所述的化合物，其特征在于，A是6元脂肪族、环状或杂环部分，具有结构式(VIII):

其中，

Z是CH或N。

13.根据权利要求12所述的化合物，其特征在于，Z是CH。

14.根据权利要求12所述的化合物，其特征在于，Z是N。

15.根据权利要求1-14中任一项所述的化合物，其特征在于，A是5元脂肪族环状部分，具有结构(IX):

16.根据权利要求1-15中任一项所述的化合物，其特征在于，亲电或亲核部分选自丙烯酰胺(CH₂＝CH-C(＝O)-NH-)、-N-S(＝O)₂-CH＝CH₂、-N-C(＝O)-CH＝CH-CH₃和–N-S(＝O)₂-CH＝CH-CH₃。

17.根据权利要求2、8-16中任一项所述的化合物，其特征在于，

Y₁是N；

Y₂是CH；和

Y₃是NH。

18.根据权利要求2、8-16中任一项所述的化合物，其特征在于，

Y₁是CH；

Y₂是N；和

Y₃是NH。

19.根据权利要求2、8-16中任一项所述的化合物，其特征在于，

Y₁是CH；

Y₂是CH；和

Y₃是NH。

20.根据权利要求2、8-16中任一项所述的化合物，其特征在于，

Y₁是CH；

Y₂是CH；和

Y₃是O或S。

21.根据权利要求1-20中任一项所述的化合物，其特征在于，X是NH。

22.根据权利要求1-20中任一项所述的化合物，其特征在于，X是O。

23.根据权利要求1-20中任一项所述的化合物，其特征在于，X是S。

24.根据权利要求1-22中任一项所述的化合物，选自:

25.根据权利要求1所述的化合物，具有结构式:

26.根据权利要求1所述的化合物，具有结构式:

27.根据权利要求1所述的化合物，具有结构式:

28.根据权利要求1所述的化合物，具有结构式:

29.根据权利要求1所述的化合物，具有结构式:

30.根据权利要求1所述的化合物，具有结构式:

31.根据权利要求1所述的化合物，具有结构式:

32.根据权利要求1所述的化合物，具有结构式:

33.根据权利要求1所述的化合物，具有结构式:

34.根据权利要求1所述的化合物，具有结构式:

35.根据权利要求1所述的化合物，具有结构式:

36.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，R₁为包含亲电部分的基团。

37.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，R₁为包含亲核部分的基团。

38.一种药物组合物，其特征在于，包含一定量的化合物，具有结构式(I):

其中，

X是NH(CH₂)_n、O或S，n为0或1；

A是5-7元、脂肪族或芳香族、环状或杂环部分；

B是5-7元、脂肪族或芳香族、环状或杂环部分；

R1’可以不存在，且R1和R1’(如果存在)各自独立地选自卤素、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、氰基、羟基、氨基、羧酰胺、磺酰胺和R_1x，其中R_1x选自:

R₄和R₅各自独立地选自氢、卤素、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、氰基、羟基、氨基、取代的羧酸酰胺、取代的磺酰胺，或R₄和R₅共同形成6-15元脂肪族、环状或杂环部分，或其药学上可接受的形式，可有效治疗、预防或减轻哺乳动物(包括人)的一种或多种疾病或障碍，以及药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂。

39.根据权利要求38所述的药物组合物，可有效治疗、预防或减轻癌症或相关疾病或障碍。

40.根据权利要求38所述的药物组合物，可有效治疗、预防或减轻炎症性疾病或相关疾病或障碍。

41.根据权利要求38所述的药物组合物，可有效治疗、预防或减轻纤维症或相关疾病或障碍。

42.根据权利要求38所述的药物组合物，可有效治疗、预防或减轻自身免疫性疾病或相关疾病或障碍。

43.根据权利要求38所述的药物组合物，可有效治疗、预防或减轻免疫介导性疾病或相关疾病或障碍。

44.一种药物组合物，其特征在于，包含权利要求1-37中任一项所述的化合物。

45.根据权利要求38所述的药物组合物，其特征在于，R₁为包含亲电部分的基团。

46.根据权利要求38所述的药物组合物，其特征在于，R₁为包含亲核部分的基团。

47.一种单位剂型，其特征在于，包含权利要求38-46中任一项所述的药物组合物。

48.一种方法，用于治疗、减轻或预防疾病或障碍，其特征在于，包括向有需要的受试者施用一种药物组合物，所述药物组合物包含具有结构式(I)的化合物:

其中，

X是NH(CH₂)_n、O或S，n为0或1；

A是5-7元、脂肪族或芳香族、环状或杂环部分；

B是5-7元、脂肪族或芳香族、环状或杂环部分；

R_1’可以不存在，且R₁和R_1’(如果存在)各自独立地选自卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、氰基、羟基、氨基、羧酰胺、磺酰胺和R_1x，其中R_1x选自:

R₄和R₅各自独立地选自氢、卤素、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、氰基、羟基、氨基、取代的羧酸酰胺、取代的磺酰胺，或R₄和R₅共同形成6-15元脂肪族、环状或杂环部分，或其药学上可接受的形式，可有效治疗、预防或减轻哺乳动物(包括人)中的一种或多种癌症、炎症性疾病、纤维症、自身免疫性疾病或免疫介导性疾病或相关疾病或障碍，和药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂。

49.根据权利要求48所述的方法，可有效治疗、预防或减轻癌症或相关疾病或障碍。

50.根据权利要求48所述的方法，可有效治疗、预防或减轻炎症性疾病或相关疾病或障碍。

51.根据权利要求48所述的方法，可有效治疗、预防或减轻纤维症或相关疾病或障碍。

52.根据权利要求48所述的方法，可有效治疗、预防或减轻炎症性疾病或相关疾病或障碍。

53.根据权利要求48所述的方法，可有效治疗、预防或减轻免疫介导性疾病或相关疾病或障碍。

54.一种方法，用于治疗、减轻或预防疾病或障碍，包括向有需要的受试者施用一种药物组合物，所述药物组合物包含权利要求1-37中任一项所述的化合物，其中所述疾病或障碍为癌症、炎症性疾病、纤维症、自身免疫性疾病或免疫介导性疾病或相关疾病或障碍。

55.一种方法，用于治疗、减轻或预防疾病或障碍，包括向有需要的受试者施用一种药物组合物，所述药物组合物包含对布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)和/或黏着斑激酶(FAK)的活性具有抑制作用的化合物。

56.根据权利要求55所述的方法，其特征在于，所述化合物是BTK抑制剂。

57.根据权利要求55所述的方法，其特征在于，所述化合物是骨髓酪氨酸激酶(BMX)抑制剂。

58.根据权利要求56或57所述的方法，其特征在于，所述化合物是BTK和BMX抑制剂。

59.根据权利要求55或58所述的方法，其特征在于，所述化合物是白细胞介素-2诱导型T细胞激酶(ITK)抑制剂。

60.根据权利要求55所述的方法，其特征在于，所述化合物是FAK抑制剂。