CN111647069B - 一种改进的tcr及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种改进的TCR及其应用，另外提供编码本发明的TCR的核酸、包含本发发明的TCR的载体和宿主细胞及其应用。

Description

一种改进的TCR及其应用
技术领域
本发明本发明属于细胞免疫学、基因工程领域，涉及一种改进的TCR及其应用。
背景技术
T细胞受体基因工程改造的T细胞(T cell receptor-gene engineered T cells，TCR-T)疗法是以修饰T细胞为基础的肿瘤过继免疫治疗方法，可以凭借其对肿瘤特异性抗原的高亲和性识别能力，在体内发挥较强的抗肿瘤免疫效应。
TCR是T细胞表面能够特异性识别抗原和介导免疫应答的分子，由2条高度可变的异质肽链通过二硫键连接构成。目前已知，TCR的多肽链依据抗原结构和编码基因的不同，有α、β、γ和δ4种，因此TCR可分为αβTCR和γδTCR这2种。人外周血T细胞绝大多数表达αβTCR(约95％)，少数表达γδTCR(约5％)(CHENG M,HU S.Lung-residentγδT cells and theirroles in lung diseases[J].Immunology,2017,151(4):375-384)。
与其他T细胞的治疗方式相比，TCR-T细胞免疫疗法存在以下优势：(1)能识别细胞内的肿瘤特异性抗原或肿瘤相关抗原；(2)严重的细胞因子风暴发生率低；(3)TCR-T细胞具有免疫记忆功能，可以在体内存活较长时间。然而，目前应用的TCR-T细胞尚存在诸多不足，目前的临床有效率相对较低。当前，寻找有效的肿瘤靶抗原，克隆出高亲和力的TCR，以及优化TCR的转化效率，仍是研究的重点。
发明内容
为了弥补现有技术的不足，本发明的主要目的在于提供改造的TCR，当将该改造的TCR引入自体免疫细胞并再输注入患者时，其具有改善的治疗效果。
在本发明中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。并且，本文中所用的细胞培养、分子遗传学、核酸化学、免疫学实验室操作步骤均为相应领域内广泛使用的常规步骤。同时，为了更好地理解本发明，下面提供相关术语的定义和解释。
如本文中所使用的，术语“肿瘤”或“肿瘤疾病”意指良性肿瘤和恶性肿瘤两者或赘生物并且包括黑素瘤、淋巴瘤、白血病、癌和肉瘤。肿瘤组织的说明性实例为皮肤肿瘤，诸如恶性黑素瘤和蕈样霉菌病；血液系统肿瘤，诸如白血病，例如，急性淋巴母细胞性白血病、急性髓细胞白血病或慢性髓细胞白血病；淋巴瘤，诸如霍奇金疾病或恶性淋巴瘤；妇科肿瘤，诸如卵巢肿瘤和子宫肿瘤；泌尿系肿瘤诸如前列腺肿瘤、膀胱肿瘤或睾丸肿瘤的那些；软组织肉瘤、骨肉瘤或非骨肉瘤、乳腺肿瘤；垂体肿瘤、甲状腺肿瘤和肾上腺皮质肿瘤；胃肠肿瘤诸如食道肿瘤、胃肿瘤、肠肿瘤和结肠肿瘤的那些；胰腺肿瘤和肝肿瘤；喉乳头状瘤以及肺肿瘤。在本发明背景下的优选肿瘤选自黑素瘤、肺肿瘤、子宫内膜肿瘤、神经胶质瘤、淋巴瘤、白血病或前列腺肿瘤。
如本文中所使用的，术语“分离的”或“被分离的”指的是，从天然状态下经人工手段获得的。如果自然界中出现某一种“分离”的物质或成分，那么可能是其所处的天然环境发生了改变，或从天然环境下分离出该物质，或二者情况均有发生。例如，某一活体动物体内天然存在某种未被分离的多聚核苷酸或多肽，而从这种天然状态下分离出来的高纯度的相同的多聚核苷酸或多肽即称之为分离的。术语“分离的”或“被分离的”不排除混有人工或合成的物质，也不排除存在不影响物质活性的其它不纯物质。
如本文中所使用的，术语“药学上可接受的载体和/或赋形剂”是指在药理学和/或生理学上与受试者和活性成分相容的载体和/或赋形剂，其是本领域公知的，并且包括但不限于：pH调节剂，表面活性剂，佐剂，离子强度增强剂。例如，pH调节剂包括但不限于磷酸盐缓冲液；表面活性剂包括但不限于阳离子，阴离子或者非离子型表面活性剂，例如Tween-80；离子强度增强剂包括但不限于氯化钠。
如本文中所使用的，术语“佐剂”是指非特异性免疫增强剂，当其与抗原一起或预先递送入机体时，其可增强机体对抗原的免疫应答或改变免疫应答类型。佐剂有很多种，包括但不限于铝佐剂(例如氢氧化铝)、弗氏佐剂(例如完全弗氏佐剂和不完全弗氏佐剂)、短小棒状杆菌、脂多糖、细胞因子等。弗氏佐剂是目前动物试验中最常用的佐剂。氢氧化铝佐剂则在临床实验中使用较多。
如本文中所使用的，术语“有效量”是指足以获得或至少部分获得期望的效果的量。例如，预防疾病有效量是指，足以预防、阻止、或延迟疾病的发生的量；治疗疾病有效量是指，足以治愈或至少部分阻止已患有疾病的患者的疾病和其并发症的量。测定这样的有效量完全在本领域技术人员的能力范围之内。例如，对于治疗用途有效的量将取决于待治疗的疾病的严重度、患者自己的免疫系统的总体状态、患者的一般情况例如年龄，体重和性别，药物的施用方式，以及同时施用的其他治疗等等。
在优选的实施方案中，本发明的TCR提供了以下TCR分子。
本发明的第一方面提供了包含α和/或β链的TCR，所述α和/或β链包含SEQ IDNO.3、SEQ ID NO.6～9中任一项的至少一种CDR3结构域。
进一步，TCRα可变区包含SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2的CDR1、CDR2结构域。
进一步，TCRα包含SEQ ID NO.10的可变区。
进一步，TCRβ可变区包含SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5的CDR1、CDR2结构域。
进一步，TCRβ包含SEQ ID NO.11～14中任一种可变区。
作为一种可选择的实施方案，涉及单链TCR(scTCR)，优选αβ-scTCR，其来源于本发明的TCR的序列。单链TCR(scTCR)为由单条氨基酸链组成的人工构建体。scTCR可包含第一TCR链(如，[α]链)的可变区的多肽以及整个(全长)第二TCR链(如，[β]链)的多肽，或反之亦然。此外，scTCR可任选地含有一个或多个接头，所述接头将两条或更多条多肽连接在一起。接头可为，例如，将两条单链连接在一起的肽。
作为另一种可选择的实施方案，本发明的此类scTCR或本发明的其它TCR源的分子，其与诸如IL-2、IL-7或IL-15的人细胞因子融合。本发明的TCR也可以多聚体复合物提供，所述多聚体复合物包含至少两个scTCR或TCR分子，其中所述scTCR或TCR分子例如通过引入的生物素-链霉亲和素官能团互连。
本发明的第二方面提供了核酸分子，所述核酸分子编码本发明第一方面所述的TCR，或其α或β链，或其可变结构域，或其具有结合抗原能力的片段。
作为可选择的实施方案，所述核酸分子核酸分子任选地具有其它序列，所述其它序列对于核酸序列的蛋白质表达，特别是哺乳动物/人中的表达，最优选为免疫细胞中的表达是必需的。使用的核酸可包含在适合于允许表达与细胞中的TCR相应的核酸序列的载体中。
本发明中的核酸分子包含通过本领域的技术人员已知的方法将本发明的TCR的氨基酸序列翻译成多核苷酸序列所获得的所有核酸分子。因此，可制备具有开放阅读框(ORF)的多种多核苷酸序列，且该制备的多核苷酸序列包含在本发明的核酸分子的范围内。
本发明的第三方面提供了一种包含本发明第二方面所述的核酸分子的载体。
本发明中的表达载体包括(但不限于)由Celltrion Inc.(韩国)生产的MarEx表达载体；市场上可广泛买到的pCDNA载体；F、R1、RP1、Col、pBR322、ToL、Ti载体；粘粒；噬菌体，诸如λ噬菌体、λ形噬菌体、M13噬菌体、Mu噬菌体、P1噬菌体、P22噬菌体、Qμ噬菌体、T-偶数噬菌体、T2噬菌体、T4噬菌体、T7噬菌体等；植物病毒。本发明中可使用本领域技术人员已知的各种表达载体的任意一种，且表达载体的选择依赖于所选择的宿主细胞的性质。宿主细胞中载体的导入可通过(但并不限于)磷酸钙转染、病毒感染、DEAE-葡聚糖介导的转染、脂质体转染或电穿孔实现，且本领域的任何技术人员可选择和使用适用于所用的表达载体和宿主细胞的导入方法。优选地，上述载体包含一种或多种选择标记，但并不限于此，且还可使用不包含选择标记的载体。选择标记的选择可依赖于选择的宿主细胞(如本领域的技术人员公知的)，但这对于本发明并不是关键性的。
为了促进本发明的核酸分子的纯化，可将标签(tag)序列插入表达载体中。标签的实例包括(但不限于)六个组氨酸标签、血凝素标签、myc标签或FLAG标签。可在本发明中使用本领域的技术人员已知的促进纯化的任何标签。
本发明的第四方面提供了宿主细胞，所述宿主细胞包含本发明第一方面所述的TCR、本发明第二方面所述的核酸分子或本发明第三方面所述的载体。
进一步，所述细胞为T细胞。
进一步，所述T细胞为CD4或CD8阳性T细胞。
本发明的宿主细胞优选通过根据本发明的核酸或载体的转导获得。将核酸分子引入T细胞的转导方法为本领域熟知的并且包括但不限于病毒转导媒介物。
在本发明的替代方面，所述人T细胞受体对于肿瘤细胞为特异的并且减少过继性T细胞治疗中的不良作用，如本文以上所述。此类T细胞取决于本发明的方法中使用的宿主生物体，例如人或非人T细胞。
本发明的第五方面提供了一种组合物，包括本发明第一方面所述的TCR、本发明第二方面所述的核酸分子、本发明第三方面所述的载体或本发明第四方面所述的宿主细胞。
进一步，所述组合物还包括药学上可接受的载体和/或赋形剂。
本发明的第六方面提供了本发明第一方面所述的TCR、本发明第二方面所述的核酸分子、本发明第三方面所述的载体、本发明第四方面所述的宿主细胞或本发明第五方面所述的组合物在制备治疗肿瘤、病原体感染或增强个体免疫的产品中的应用。
本发明的第七方面提供了本发明本发明第一方面所述的TCR、本发明第二方面所述的核酸分子、本发明第三方面所述的载体、本发明第四方面所述的宿主细胞或本发明第五方面所述的组合物在抗原筛选、疫苗制备中的应用。
本领域技术人员还将理解的是，本发明涵盖所述TCR的氨基酸序列修饰。举例而言，可需要改良TCR之结合亲和力及/或其它生物学特性。TCR之氨基酸序列变体是由向TCR核酸中引入适当核苷酸变化或由肽合成制备。该等修饰包括(例如)TCR氨基酸序列内之残基缺失及/或插入及/或取代。进行缺失、插入及取代之任何组合以达成最终构建体，其限制条件为该最终构建体具有所要特征。氨基酸变化亦可改变TCR之转译后过程，诸如改变糖基化位点之数目或位置。
氨基酸序列插入物包括长度为一个残基至含有一百个或更多残基之多肽之氨基及/或羧基末端融合体，以及具有单个或多个氨基酸残基之序列内插入物。末端插入物之实例包括具有N末端甲硫氨酰基残基的TCR。
本发明涵盖与所述TCR的氨基酸序列或者编码该TCR的任何核苷酸序列具有一定程度的序列一致性或序列同源性的序列，本发明中，“同源性”可等同于“一致性”。
本发明的组合物或药物组合物在制造和储存条件下必须是无菌和稳定的。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，制备的优选方法是真空干燥和冷冻干燥，真空干燥和冷冻干燥从活性成分和其它期望成分的预先无菌过滤过的溶液产生活性成分和其它期望成分的粉末。可选择地，本发明的组合物可在溶液中，且在递送之前或递送时可加入和/或混合适当的药学上可接受的赋形剂以提供可注射的单位剂型。优选地，本发明中使用的药学上可接受的赋形剂适用于高药物浓度，可保持适当的流动性，且如果需要可延迟吸收。
附图说明
图1是TCR-T杀伤功能检测图。
具体的实施方式
下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细的说明。以下实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring HarborLaboratoryPress,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1 高通量测序筛选TCR序列
1、RNA提取及质控
收集急性髓系白血病患者的外周血样本，患者无甲肝，乙肝，丙肝，戊肝，艾滋病，梅毒，淋病和结核感染。
在5mL Ficoll中缓慢加入外周血，离心2000rpm，15min。吸取中间白膜层，加入0.9％生理盐水，计数单个核细胞数量，离心1000rpm，5min，磁珠分选T细胞。采用TRIzol法对处理的细胞样本进行RNA的提取，对提取后的RNA质量使用Qubit RNA HS Assay kits，经2100生物分析仪(安捷伦)检测RNA完整性。
2、反转录及文库制备
用Repertoire Analysis Kit(Human TCR alpha,beta)进行建库。将所有试剂置于冰上解冻，在配置mix之前，混匀和离心这些试剂。在冰上配置杂交引物需用的mix(表1)。充分混匀后离心，加热反转录引物杂交mix，65℃5min，冰上孵育至少2min。在冰上准备配制反转录mix(表2)，混匀后离心mix。
表1反应体系
组分 体积
RT dNTP Mixture 1μl
RT Primer H TCRα/β 1μl
RNA样本(100pg-1000ng) 最多到6.2μl
Nuclease-free water 补足至8.2μl
表2反转录体系
组分 体积
RT buffer A 4μl
RT buffer B 1μl
RT buffer C 3.8μl
RT Universal primer 1μl
RNase inhibitor 1μl
Reverse Transcriptase 1μl
总体积 11.8μl
将11.8μl的杂交buffer加到上一步反应的杂交RNA中混匀，然后离心，在PCR仪(T100，Bio-RAD)上运行以下程序(表3)：
表3反应条件
Figure BDA0002544230860000081
3、第一步PCR
准备第一步PCR需用的试剂(表4)，并在冰上解冻，混匀后瞬时离心，在冰上配制第一步PCR反应的mix，配置好的mix用移液器混匀，然后离心。
表4第一步PCR反应体系
Figure BDA0002544230860000082
每管中加入41μl的第一步PCR mix，加入9μl的第一链cDNA产物中混匀，然后离心，在PCR仪(T100，Bio-RAD)上运行以下程序：
表5第一步PCR反应条件
Figure BDA0002544230860000083
Figure BDA0002544230860000091
4、第二步PCR
准备第二步PCR需用的试剂(表6)，并在冰上解冻，混匀后瞬时离心，在冰上配制第二步PCR反应的mix，配置好的mix用移液器混匀，然后离心。
表6第二步PCR反应体系
组分 体积
PCR buffer 25μl
PCR dNTP Mixture 10μl
Nuclease-free water 3μl
DNA polymerase 1μl
总体积 39μl
准备一个新的PCR管，每管中加入1μl的第二步PCR引物，hTCRα#1-18(编号：A1-A18)，或者hTCRβ#1-18(编号：B1-B18)。加入39μl第二步反应的mix和10μl的第一步PCR产物混匀，然后离心，在PCR仪(T100，Bio-RAD)上运行以下程序：
表7第二步PCR反应条件
Figure BDA0002544230860000092
5、第三步PCR
准备第三步PCR需用的试剂在冰上解冻(表9)，混匀后瞬时离心。在冰上配制第二步PCR反应的mix，配置好的mix用移液器混匀，然后离心。
表8第三步PCR反应体系
组分 体积
PCR buffer 25μl
PCR dNTP Mixture 10μl
3rd universal primer 2.5μl
Nuclease-free water 6.5μl
DNA polymerase 1μl
总体积 45μl
准备一个新的PCR管，每管中加入45μl的第三步PCR mix，加入5μl的第二步PCR产物中，用手指肚弹匀，然后离心，在PCR仪(T100，Bio-RAD)上运行以下程序：
表9第三步PCR反应条件
Figure BDA0002544230860000101
6、琼脂糖凝胶电泳
配置1.5％的琼脂糖胶，用1*TAE buffer和核酸染料(北京金博益)，DNA marker上样量为2μl，加1μl的6*loading buffer到PCR产物中，点样。100V电泳30-45min。使用凝胶到成像系统(1708195，Bio-RAD)，判断产物大小。hTCRɑ/β片段在650bp左右。
7、用AGENCOURT AMPure XP(BEACKMAN)磁珠纯化
准备nuclease-free 0.2mL的8连管，按照表10稀释文库。
表10稀释体系
组分 体积
第三步PCR产物 30μl
Nuclease-free water 20μl
总体积 50μl
配置DNase-free 70％乙醇(sigma)。磁珠使用前室温平衡30min，将22.5μl的磁珠加到稀释后文库中，用移液器混匀至少10次。室温孵育5min，然后简单的离心。将8连管放置在96孔磁力架上磁吸5min，观察液体和磁珠分离。将所有的上清转移到新的8连管中。再次混匀未使用过的磁珠，加17.5μl的磁珠到上清中，用移液器混匀至少10次。室温孵育5min，然后简单离心。将8连管放在96孔磁力架上磁吸5min，观察液体和磁珠分离。弃85μl的上清，保留5μl的上清以免吸到磁珠。不要将磁珠与磁力架分离。加200μl的70％的乙醇漂洗。室温30s，弃酒精，重复酒精洗涤步骤。弃所有上清，加30μl的10mM Tris-HCl到每个PCR管中，用移液器混匀至少10次。室温孵育2min然后简单离心。将离心管放置在磁力架上室温5min，分离液体和磁珠。将上清20μl转移至新的PCR管中。
8、文库浓度定量及质控
测定文库浓度用Qubit dsDNA HS kit(英潍捷基)，使用设备Qubit 2.0(life)，取2μl的样本用于测定。通常文库浓度集中在5-40ng/μl。如果样本浓度≥1.72ng/μl可用于Miseq测序。
9、文库目标片段质控
人的TCRα/β文库目标片段集中在650bp，使用1.5％的琼脂糖凝胶电泳对文库片段进行质控，用1*TAE buffer和核酸染料(北京金博益)，DNA marker上样量为2μl，加1μl的6*loading buffer到PCR产物中，点样。100V电泳30-45min。使用凝胶到成像系统(1708195，Bio-RAD)，判断产物大小。
10、文库混库及质控
文库混样，是按此批次浓度最低的文库为标准，浓度最低文库乘以10μl为基准纳克数，其他文库按照此纳克数进行取样，确保每个文库的总量是一致的，混样后按照纳克与摩尔数之间的换算，稀释到8.58ng/μl(20nM，650bp)。
11、高通量测序
文库使用Miseq(Illumina)进行2×300bp双端测序，对上述混合完成的文库再次使用设备Qubit 2.0(life)进行文库定量，最终稀释到10pM，与10pM denatured PhiX进行混合(PhiX占比30％)，混合后的600μl进行上机测序。
12、数据分析
采用MiXCR进行初级分析，可以对高度个性化的TCR和免疫球蛋白序列进行分析。MiXCR可以针对不同的数据类型在参数上进行调整，并对分析结果和输出进行优化。进一步高级分析多个多样性指数，如香农指数(Shannon)、辛普森指数(Simpson)、Inverse-Simpson指数和基尼指数(Gini)等。采用VDJtools用于二级TCR profiling分析以及多样性评估。
13、噬菌体展示技术筛选高亲和力的TCR序列。
14、结果
通过噬菌体展示技术筛选出高亲和力的TCR，其α链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO.10所示，其中CDR1-3的序列分别如SEQ ID NO.1-3所示，其β链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.11-14任一序列所示，其中，CDR1-2的序列分别如SEQ ID NO.4-5所示，CDR3的序列如SEQ ID NO.6～9任一项所示。
实施例2 TCR-T的构建
1、利用高通量测序和数据分析结果，全合成相关序列，通过XbaI/SalI限制内切酶切点，连接到pCDH载体中。
2、TCR-T细胞制备
采集健康人外周血，在Ficoll中缓慢加入外周血，离心2000rpm，15min。吸取中间白膜层，加入0.9％生理盐水，计数单个核细胞数量，离心1000rpm，5min。磁珠分选T细胞。同时加入CD3/CD28抗体偶联磁珠刺激，24h及48h后加入病毒感染2次，病毒感染时加入IL-2，培养3-20天，获得TCR-T细胞。
实施例3 TCR-T杀伤功能检测
从本研究中所述的序列构建的TCR-T中任选一个进行功能检测。
计数靶细胞(急性髓系白血病细胞OCI-AMLP1)和阴性参照靶细胞(Daudi)，分别标记Celltrace far red和CFSE染色。计数TCR-T(TCR的Vβ可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO.11所示)细胞作为效应细胞。按照计划效靶比(3：1，9：1，18：1)，重悬效应细胞和靶细胞至相应浓度。圆底96孔板中每个效靶比分别铺入铺入组1效应细胞、组2靶细胞和组3效应细胞+靶细胞，每组4个复孔。培养2-24h，收细胞样本，分别收管A：组1效应细胞+组2靶细胞，管B：组3效应细胞+靶细胞，多聚甲醛液固定，流式上机。作Killing Rate与E:T Ratio曲线图。其中，
Figure BDA0002544230860000131
结果，如图1所示，相比对照组，本申请的TCR-T具有较好的杀伤效果。
上述实施例的说明只是用于理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也将落入本发明权利要求的保护范围内。
序列表
<110> 深圳豪石生物科技有限公司
<120> 一种改进的TCR及其应用
<160> 14
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Val Ser Asn Ala Tyr Asn
1 5
<210> 2
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Gly Ser Lys Pro
1
<210> 3
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
Cys Ala Val Asp Glu Asp Gln Thr Gly Ala Asn Asn Leu Phe Phe
1 5 10 15
<210> 4
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
Lys Gly His Asp Arg
1 5
<210> 5
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
Ser Phe Asp Val Lys Asp
1 5
<210> 6
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
Cys Ala Thr Ser Asp Gly Ala Asp Tyr Asn Glu Gln Phe Phe
1 5 10
<210> 7
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
Cys Ala Pro Ser Arg Val Gly Phe Ser Asp Thr Gln Tyr Phe
1 5 10
<210> 8
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
Cys Ala Thr Ser Asp Leu Ala Gly Asp Thr Gly Glu Leu Phe Phe
1 5 10 15
<210> 9
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
Cys Ala Thr Ser Asp Ser Asp Arg Asp Thr Gly Glu Leu Phe Phe
1 5 10 15
<210> 10
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
Lys Asp Gln Val Phe Gln Pro Ser Thr Val Ala Ser Ser Glu Gly Ala
1 5 10 15
Val Val Glu Ile Phe Cys Asn His Ser Val Ser Asn Ala Tyr Asn Phe
20 25 30
Phe Trp Tyr Leu His Phe Pro Gly Cys Ala Pro Arg Leu Leu Val Lys
35 40 45
Gly Ser Lys Pro Ser Gln Gln Gly Arg Tyr Asn Met Thr Tyr Glu Arg
50 55 60
Phe Ser Ser Ser Leu Leu Ile Leu Gln Val Arg Glu Ala Asp Ala Ala
65 70 75 80
Val Tyr Tyr Cys Ala Val Asp Glu Asp Gln Thr Gly Ala Asn Asn Leu
85 90 95
Phe Phe Gly Thr Gly Thr Arg Leu Thr Val Ile Pro Tyr
100 105
<210> 11
<211> 174
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
Asp Ala Asp Val Thr Gln Thr Pro Arg Asn Arg Ile Thr Lys Thr Gly
1 5 10 15
Lys Arg Ile Met Leu Glu Cys Ser Gln Thr Lys Gly His Asp Arg Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Arg Gln Asp Pro Gly Leu Gly Leu Arg Leu Ile Tyr Tyr
35 40 45
Ser Phe Asp Val Lys Asp Ile Asn Lys Gly Glu Ile Ser Asp Gly Tyr
50 55 60
Ser Val Ser Arg Gln Ala Gln Ala Lys Phe Ser Leu Ser Leu Glu Ser
65 70 75 80
Ala Ile Pro Asn Gln Thr Ala Leu Tyr Phe Cys Ala Thr Ser Trp Tyr
85 90 95
Arg Gln Asp Pro Gly Leu Gly Leu Arg Leu Ile Tyr Tyr Ser Phe Asp
100 105 110
Val Lys Asp Ile Asn Lys Gly Glu Ile Ser Asp Gly Tyr Ser Val Ser
115 120 125
Arg Gln Ala Gln Ala Lys Phe Ser Leu Ser Leu Glu Ser Ala Ile Pro
130 135 140
Asn Gln Thr Ala Leu Tyr Phe Cys Ala Thr Ser Asp Gly Ala Asp Tyr
145 150 155 160
Asn Glu Gln Phe Phe Gly Ser Gly Thr Arg Leu Thr Val Val
165 170
<210> 12
<211> 174
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
Asp Ala Asp Val Thr Gln Thr Pro Arg Asn Arg Ile Thr Lys Thr Gly
1 5 10 15
Lys Arg Ile Met Leu Glu Cys Ser Gln Thr Lys Gly His Asp Arg Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Arg Gln Asp Pro Gly Leu Gly Leu Arg Leu Ile Tyr Tyr
35 40 45
Ser Phe Asp Val Lys Asp Ile Asn Lys Gly Glu Ile Ser Asp Gly Tyr
50 55 60
Ser Val Ser Arg Gln Ala Gln Ala Lys Phe Ser Leu Ser Leu Glu Ser
65 70 75 80
Ala Ile Pro Asn Gln Thr Ala Leu Tyr Phe Cys Ala Thr Ser Trp Tyr
85 90 95
Arg Gln Asp Pro Gly Leu Gly Leu Arg Leu Ile Tyr Tyr Ser Phe Asp
100 105 110
Val Lys Asp Ile Asn Lys Gly Glu Ile Ser Asp Gly Tyr Ser Val Ser
115 120 125
Arg Gln Ala Gln Ala Lys Phe Ser Leu Ser Leu Glu Ser Ala Ile Pro
130 135 140
Asn Gln Thr Ala Leu Tyr Phe Cys Ala Pro Ser Arg Val Gly Phe Ser
145 150 155 160
Asp Thr Gln Tyr Phe Gly Ser Gly Thr Arg Leu Thr Val Val
165 170
<210> 13
<211> 175
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
Asp Ala Asp Val Thr Gln Thr Pro Arg Asn Arg Ile Thr Lys Thr Gly
1 5 10 15
Lys Arg Ile Met Leu Glu Cys Ser Gln Thr Lys Gly His Asp Arg Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Arg Gln Asp Pro Gly Leu Gly Leu Arg Leu Ile Tyr Tyr
35 40 45
Ser Phe Asp Val Lys Asp Ile Asn Lys Gly Glu Ile Ser Asp Gly Tyr
50 55 60
Ser Val Ser Arg Gln Ala Gln Ala Lys Phe Ser Leu Ser Leu Glu Ser
65 70 75 80
Ala Ile Pro Asn Gln Thr Ala Leu Tyr Phe Cys Ala Thr Ser Trp Tyr
85 90 95
Arg Gln Asp Pro Gly Leu Gly Leu Arg Leu Ile Tyr Tyr Ser Phe Asp
100 105 110
Val Lys Asp Ile Asn Lys Gly Glu Ile Ser Asp Gly Tyr Ser Val Ser
115 120 125
Arg Gln Ala Gln Ala Lys Phe Ser Leu Ser Leu Glu Ser Ala Ile Pro
130 135 140
Asn Gln Thr Ala Leu Tyr Phe Cys Ala Thr Ser Asp Leu Ala Gly Asp
145 150 155 160
Thr Gly Glu Leu Phe Phe Gly Ser Gly Thr Arg Leu Thr Val Val
165 170 175
<210> 14
<211> 175
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
Asp Ala Asp Val Thr Gln Thr Pro Arg Asn Arg Ile Thr Lys Thr Gly
1 5 10 15
Lys Arg Ile Met Leu Glu Cys Ser Gln Thr Lys Gly His Asp Arg Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Arg Gln Asp Pro Gly Leu Gly Leu Arg Leu Ile Tyr Tyr
35 40 45
Ser Phe Asp Val Lys Asp Ile Asn Lys Gly Glu Ile Ser Asp Gly Tyr
50 55 60
Ser Val Ser Arg Gln Ala Gln Ala Lys Phe Ser Leu Ser Leu Glu Ser
65 70 75 80
Ala Ile Pro Asn Gln Thr Ala Leu Tyr Phe Cys Ala Thr Ser Trp Tyr
85 90 95
Arg Gln Asp Pro Gly Leu Gly Leu Arg Leu Ile Tyr Tyr Ser Phe Asp
100 105 110
Val Lys Asp Ile Asn Lys Gly Glu Ile Ser Asp Gly Tyr Ser Val Ser
115 120 125
Arg Gln Ala Gln Ala Lys Phe Ser Leu Ser Leu Glu Ser Ala Ile Pro
130 135 140
Asn Gln Thr Ala Leu Tyr Phe Cys Ala Thr Ser Asp Ser Asp Arg Asp
145 150 155 160
Thr Gly Glu Leu Phe Phe Gly Ser Gly Thr Arg Leu Thr Val Val
165 170 175

Claims (9)

1.包含α和β链的TCR，其特征在于，所述α链包含SEQ ID NO.1-3所示的CDR1、 CDR2、CDR3结构域；所述β链包含SEQ ID NO.4-6所示的CDR1、 CDR2、CDR3结构域；其中，TCRα包含SEQ ID NO.10所示的可变区；TCRβ包含SEQ ID NO.11所示的可变区。
2.核酸分子，其特征在于，编码权利要求1所述的TCR。
3.包含权利要求2所述的核酸分子的载体。
4.宿主细胞，其特征在于，包含权利要求1所述的TCR、权利要求2所述的核酸分子或权利要求3所述的载体。
5.根据权利要求4所述的宿主细胞，其特征在于，所述细胞为T细胞。
6.根据权利要求5所述的宿主细胞，其特征在于，所述T细胞为CD4或CD8阳性T细胞。
7.一种组合物，其特征在于，包括权利要求1所述的TCR，权利要求2所述的核酸分子，权利要求3所述的载体或权利要求4-6任一项所述的宿主细胞。
8.权利要求1所述的TCR，权利要求2所述的核酸分子，权利要求3所述的载体，权利要求4-6任一项所述的宿主细胞或权利要求7所述的组合物在制备治疗白血病的产品中的应用。
9.权利要求1所述的TCR，权利要求2所述的核酸分子，权利要求3所述的载体，权利要求4-6任一项所述的宿主细胞或权利要求7所述的组合物在抗原筛选、疫苗制备中的应用。
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