CN111615631A

CN111615631A - 以高灵敏度检测脑梗塞的发病风险的体液抗体生物标志物

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Publication number: CN111615631A
Application number: CN201880077624.XA
Authority: CN
Inventors: 黑田英行; 中村利华; 富吉乡; 日和佐隆树; 山岸良匡; 津金昌一郎; 泽田典绘; 矶博康
Original assignee: NATIONAL CANCER CENTER; Fujikura Kasei Co Ltd; Chiba University NUC; Osaka University NUC; University of Tsukuba NUC
Current assignee: NATIONAL CANCER CENTER; Fujikura Kasei Co Ltd; Chiba University NUC; Osaka University NUC; University of Tsukuba NUC
Priority date: 2017-11-30
Filing date: 2018-11-22
Publication date: 2020-09-01
Anticipated expiration: 2038-11-22
Also published as: JP2019100811A; JP6942036B2; CN111615631B; EP3719497A4; WO2019107256A1; EP3719497A1; US20210373032A1

Abstract

本发明提供关于脑梗塞的发病的数据取得方法，其特征在于，对从生物体分离的体液样品中的针对DIDO1蛋白质或其一部分的抗体水平、和/或，针对CPSF2蛋白质或其一部分的抗体水平进行测定、及用于进行所述方法的数据取得用试剂盒。由本发明可确切掌握与脑梗塞的发病关联的迹象。

Description

以高灵敏度检测脑梗塞的发病风险的体液抗体生物标志物

【技术领域】

本发明是关于疾病的检测手段的发明，更具体而言，关于通过以针对DIDO1蛋白质、CPSF2蛋白质、或者具有这些的部分序列的肽的体液抗体作为生物标志物检测的脑梗塞的发病风险的掌握手段的发明。

【背景技术】

脑梗塞直接致死的情况也多，就算未致死也必须进行其后的长期的康复训练，成为卧病不起的原因的第一位。从而脑梗塞对于患者本人或其家族而言负担重，社会意义上也与国民医疗费的增大关联，其发病的预防是重要的课题。如果掌握脑梗塞的微细的迹象，变得可预测其后的脑梗塞的发病，可由发病前的治疗或生活习惯的改善预防脑梗塞发病的可能性极其高。

从而，为了脑梗塞的病状掌握，报告了Hsp60(非专利文献1)、RPA2(非专利文献2)，SOSTDC1(非专利文献3)。另外，作为与脑梗塞关联的疾病生物标志物，已知动脉硬化的高密度脂蛋白(HDL)-胆甾醇、低密度脂蛋白(LDL)-胆甾醇、总胆甾醇(TC)(非专利文献4)、脂联素(非专利文献5)、尿酸(非专利文献6)、ATP2B4(非专利文献7)、BMP-1(非专利文献7)、DHPS(非专利文献8)，SH3BP5(非专利文献9)，心血管障碍的磷脂(非专利文献10)、载脂蛋白A-1(非专利文献11)、氧化低密度脂蛋白(非专利文献12)、热休克蛋白(Hsps)(非专利文献13)、糖尿病的胰岛素(非专利文献14)、糖血红蛋白(HbA1c)(非专利文献15)、谷氨酸脱羧酶(GAD)(非专利文献16)、蛋白质酪氨酸磷酸酶IA-2(非专利文献17)等。

【现有技术文献】

【非专利文献】

非专利文献1：Kramer J,Harcos P,Prohaszka Z,Horvath L,Karadi I,Singh M,Csaszar A,RomicsL,Fust G.Frequencies of certain complement protein allelesand serum levels of anti-heat-shock protein antibodies in cerebrovasculardiseases.Stroke 2000；31：2648-2652。

非专利文献2：Machida T,Kubota M,Kobayashi E,Iwadate Y,Saeki N,etal.Identification of stroke-associated-antigens via screening of recombinantproteins from the human expression cDNA library(SEREX).J Translat Med 2015；13:71。

非专利文献3：GotoK,Sugiyama T,Matsumura R,Zhang XM,Kimura R,etal.Identification of cerebral infarction-specific antibody markers fromautoantibodies detected in patients with systemic lupus erythematosus.J MolBiomark Diagnos 2015；6:2。

非专利文献4：Libby P,Ridker PM,Hansson GK.Progress and challenges intranslating the biology of atherosclerosis.Nature 2011；473：317-325。

非专利文献5：KadowakiT,Yamauchi T,Kubota N,Hara K,Ueki K,TobeK.Adiponectin and adiponectin receptors in胰岛素resistance,diabetes,and themetabolic syndrome.J Clin Invest 2006；116：1784-1792。

非专利文献6：Nakanishi N,Okamoto M,Yoshida H,Matsuo Y,Suzuki K,etal.Serum uric acid and risk for development of hypertension and impairedfasting glucose or type II diabetes in Japanese male office workers.Eur JEpidemiol 2003；18:523-530。

非专利文献7：HiwasaT,Machida T,Zhang XM,Kimura R,Wang H,et al.Elevatedlevels of autoantibodies against ATP2B4 and BMP-1in sera of patients withatherosclerosis-related diseases.Immunome Res2015；11:097。

非专利文献8：Nakamura R,Tomiyoshi G,Shinmen N,Kuroda H,Kudo T,et al.Ananti-deoxyhypusine synthase antibody as a marker of atherosclerosis-relatedcerebral infarction,myocardial infarction,diabetes mellitus,and chronickidney disease.SM Atheroscler J 2017；1:1001。

非专利文献9：HiwasaT,Tomiyoshi G,Nakamura R,ShinmenN,Kuroda H,etal.Serum SH3BP5-specific antibody level is a biomarker ofatherosclerosis.Immunome Res 2017；13:2。

非专利文献10：Liang KP,Kremers HM,Crowson CS,Snyder MR,TherneauTM,Roger VL,Gabriel SE.Autoantibodies and the risk of cardiovascular events.JRheumatol 2009；36：2462-2469。

非专利文献11：MontecuccoF,Vuilleumier N,Pagano S,LengletS,BertolottoM,BraunersreutherV,Pelli G,Kovari E,Pane B,Spinella G,Pende A,Palombo D,Dallegri F,Mach F,Roux-Lombard P.Anti-apolipoprotein A-1auto-antibodies areactive mediators of atherosclerotic plaque vulnerability.Eur Heart J 2011；32:412-421。

非专利文献12：FesmireJ,Wolfson-Reichlin M,Reichlin M.Effects ofautoimmune antibodies anti-lipoprotein lipase,anti-low density lipoprotein,and anti-oxidized low density lipoprotein on lipid metabolism andatherosclerosis in systemic lupus erythematosus.Rev Bras Reumatol2010；50：539-551。

非专利文献13：Carbone F,Nencioni A,Mach F,VuilleumierN,MontecuccoF.Evidence on the pathogenic role of auto-antibodies in acute cardiovasculardiseases.Thromb Haemost 2013；109：854-868。

非专利文献14：Palmer JP,Asplin CM,Clemons P,Lyen K,Tatpati O,Ragh,PK,Paquette TL.Insulin antibodies in insulin-dependent diabetics before insulintreatment.Science 1983；222:1337-1339。

非专利文献15：Rollins KE,Varadhan KK,Dhatariya K,Lobo DN.Systematicreview of the impact of HbA1c on outcomes following surgery in patients withdiabetes mellitus.Clin Nutr 2015；S0261-5614：00082-5。

非专利文献16：BaekkeskovS,Aanstoot H,Christgau S,Reetz A,Solimena MS,Cascalho M,Folli F,Richter-Olsen H,DeCamilli P.Identification of the 64Kautoantigen in insulin dependent diabetes as the GABA-synthesizing enzymeglutamic acid decarboxylase.Nature 1990；347:151-156。

非专利文献17：Payton MA,Hawkes CJ,Christie MR.Relationship of the 37,000-and 40,000-M(r)tryptic fragments of islet antigens in insulin-dependentdiabetes to the protein tyrosine phosphatase-like molecule IA-2(ICA512).JClin Invest 1995；96:1506-1511。

非专利文献18：Libby P,Ridker PM,Hansson GK.Progress and challenges intranslating the biology of atherosclerosis.Nature 2011；473：317-325。

【发明的公开】

【发明要解决的课题】

脑梗塞等的脑血管障碍占日本人的死因的第4位，如前所述，脑梗塞成为变得卧病不起的原因的第1位，一旦患脑梗塞，则就算未致死也必须进行长期的康复训练和药的服用。从而，事先防脑梗塞的发病是重要的，鉴定为此的各种各样的风险因素，已知高血压、高脂血症、糖尿病、吸烟习惯、及血液检查的中性脂肪、恶性胆甾醇值、低脂联素值等各种各样的(非专利文献18、5)。但是，糖尿病等难治疗，一方面，即使血液检查项目是异常值，也未必会立即患脑梗塞。也试了组合风险因素的发病预测，但尚难说充分。

【用于解决课题的手段】

本发明人发现，通过对体液中的针对DIDO1蛋白质、CPSF2蛋白质、或者具有它们的部分序列的肽的体液抗体水平进行测定，可确切掌握与脑梗塞的发病关联的迹象，从而完成本发明。

在本发明中，“脑梗塞”是指脑的血管由动脉硬化变狭，由于通过血栓阻塞而氧或营养缺乏而脑神经细胞受障碍的疾病。

本发明首先提供关于脑梗塞的发病的数据取得方法(以下，也称为本发明的数据取得方法)，其特征在于，对从生物体分离的体液样品中的针对DIDO1蛋白质或其一部分的抗体水平、和/或，针对CPSF2蛋白质或其一部分的抗体水平进行测定。

作为捕获在本发明的数据取得方法中的作为测定对象的体液抗体的基础的作为抗原的DIDO1蛋白质是也称为死亡诱导清理子1(death inducer-obliterator 1)的DIDO1蛋白质的1～6的剪接变体(登录号是1～6各自是NM_022105.4、NM_080796.3、NM_080797.3、NM_033081.2、NM_001193369.1、NM_001193370.1注册到NCBI)之一。DIDO1剪接变体4基因的碱基序列如SEQ ID NO:1所示。DIDO1蛋白质的剪接变体1和2由562个氨基酸构成、剪接变体3和6由1189个氨基酸构成、剪接变体4和5由2240个氨基酸构成。DIDO1的最长的剪接变体4基因的氨基酸序列示于SEQ ID NO:2。在后述的实施例中作为抗原使用的DIDO1蛋白质是自N末端起275个氨基酸的N末端区域部分(SEQ ID NO:3)，此区域是在DIDO1全部的剪接变体中共同的序列。另外在，相同的实施例中作为抗原使用的DIDO1肽是第543～560个氨基酸序列(SEQ ID NO:4)，此区域是DIDO1剪接变体3～6共同的序列。无论是DIDO1的蛋白质抗原，还是肽抗原，均得到类似的结果，从而被认为不是体液抗体识别的DIDO1蛋白质识别不同的剪接变体。即，本发明的DIDO1不限定于特定的剪接变体。

CPSF2蛋白质的别名裂解和聚腺苷酸化特异性因子2(cleavage andpolyadenylation specific factor 2)、或者称为CPSF100，作为登录号“NM_017437”注册到NCBI。CPSF2基因的碱基序列和氨基酸序列如SEQ ID NO:5和6所示。

作为本发明的数据取得方法的别的表现，例如，可举出“以测定从生物体分离的体液样品中的针对DIDO1蛋白质或其一部分的抗体水平、和/或，针对CPSF2蛋白质或其一部分的抗体水平作为特征的脑梗塞发病的掌握方法”。

再者，本发明其次提供数据取得用试剂盒(以下，也称为本发明的试剂盒)，其用于进行本发明的数据取得方法。

作为本发明的数据取得用试剂盒的别的表现，例如，可举出“用于进行脑梗塞发病的掌握方法的试剂盒，其特征在于，对从生物体分离的体液样品中的针对DIDO1蛋白质或其一部分的抗体水平、和/或，针对CPSF2蛋白质或其一部分的抗体水平进行测定”。

【发明的效果】

由本发明提供通过以针对DIDO1蛋白质、CPSF2蛋白质、或者具有它们的部分序列的肽的体液抗体作为生物标志物使用，确切掌握脑梗塞发病的风险的手段。由此，进行脑梗塞发病的预防，及提供脑梗塞的治疗动机。再者，可进行与脑梗塞发病关联动脉硬化关联疾病的确切的病状掌握。

【附图的简单的说明】

【图1】是将DIDO1蛋白质(剪接变体4)的氨基酸序列(SEQ ID NO:2)用单字母显示表示，在实施例中使用的相当于DIDO1肽的氨基酸序列(SEQ ID NO:4)的部分加下划线的附图。

【图2】是将CPSF2全长蛋白质的氨基酸序列(SEQ ID NO:6)用单字母显示表示，在实施例中使用的相当于CPSF2肽的氨基酸序列(SEQ ID NO:7)的部分加下划线的附图。

【图3】显示将健康者(HD)、瞬时脑缺血发作(TIA)患者及急性脑梗塞(aCI)患者中的DIDO1血清抗体及CPSF2血清抗体水平由AlphaLISA法定量进行的结果。使用DIDO1蛋白质抗原时的结果用箱线图显示于a，使用CPSF2肽抗原之时的结果用箱线图显示于b。这些箱线图的纵轴是显示抗体水平的Alpha计数，显示于各箱线的边界自下显示第10(最下段的横杠)、第20(箱的底边)、第50(箱的中心线)、第80(箱的上边)、第90(最上段的横杠)的百分率。

【图4】显示将HD、急性心肌梗塞(AMI)及糖尿病(DM)患者中的DIDO1血清抗体及CPSF2血清抗体水平由AlphaLISA法测定的结果。使用DIDO1蛋白质抗原时的结果用箱线图显示于a，使用CPSF2肽抗原之时的结果用箱线图显示于b。箱线图如记载在图3的说明。

【图5】显示将HD和慢性肾脏病(CKD)患者中的DIDO1血清抗体及CPSF2血清抗体水平由AlphaLISA法测定的结果。使用DIDO1蛋白质抗原时的结果用箱线图显示于a，使用CPSF2肽抗原之时的结果用箱线图显示于b。箱线图如记载在图3的说明文。

【具体实施方式】

(1)本发明的数据取得方法

(a)从生物体分离的体液样品

本发明的数据取得方法中的作为数据取得的对象使用的“从生物体分离的体液样品”的体液是指血液、淋巴液等，“样品”是指从身体分离的状态的所述体液本身，或者，处理物。在所述体液样品之中也适宜为血液样品。作为血液样品，可举出全血、血清、血浆等的样品，优选血清样品或血浆样品，特别优选血清样品。血液样品也可实施肝素处理等的凝固防止处理。

(b)体液抗体捕获抗原

作为捕获在本发明的数据取得方法中的体液抗体的基础的作为DIDO1蛋白质的氨基酸序列的SEQ ID NO:2、及作为CPSF2蛋白质的氨基酸序列的SEQ ID NO:6能以全部作为体液抗体捕获抗原使用，也能使用一部分。在以SEQ ID NO:2的氨基酸序列的一部分作为体液抗体捕获抗原使用时，能从SEQ ID NO:2的氨基酸序列选7～1189个连续的氨基酸序列、及从SEQ ID NO:6的氨基酸序列选7～782个连续的氨基酸序列而作为体液抗体捕获抗原，优选含在DIDO1的全部剪接变体中共同的SEQ ID NO:3的氨基酸序列的全部或一部分，或者，SEQ ID NO:3的氨基酸序列的全部或一部分。再者，为了更有效的检测系的确立，选择短的链长的氨基酸序列(肽)也是可能的，此时的氨基酸序列的个数适宜为7～30个左右，再优选为10～20个左右。

另外，这些氨基酸序列的全部或一部分之中，也可改变(缺失、取代或追加)10％以下的个数的氨基酸残基(小数点之后部分舍去)。但是，目的体液抗体(针对DIDO1蛋白质、CPSF2蛋白质、或者具有它们的部分序列的肽的体液抗体)的捕获是可能的，即，改变氨基酸残基的体液抗体捕获抗原候选例如，在用与本说明书的实施例的方法同样的方法进行体液抗体的捕获时，从其捕获抗体水平，作为目的的脑梗塞发病的风险掌握是否可能是必要的。

“缺失”是指在成为对象的氨基酸序列中的任何的氨基酸残基缺失，所述缺失的氨基酸残基的N末端侧(前)和C末端侧(后)的氨基酸残基经肽键连接的状态(N末端氨基酸残基和C末端氨基酸残基的缺失的情况是所述氨基酸残基简单缺失的状态)、所述缺失残基的个数作为“氨基酸缺失的个数”计数。“取代”是指在成为对象的氨基酸序列中的任何的氨基酸残基置换为“其他氨基酸残基”，所述置换的氨基酸残基与N末端侧(前)和C末端侧(后)的各氨基酸残基经肽键连接的状态(N末端氨基酸残基的取代的情况是仅与C末端侧的氨基酸残基的肽键，C末端氨基酸残基的取代的情况是仅与N末端侧的氨基酸残基的肽键)、所述取代残基的个数作为“氨基酸取代的个数”计数。“附加”是指在成为对象的氨基酸序列中的任何1个位置以上的肽键的位置在插入各1个以上的新的氨基酸残基的状态下形成新的肽键的状态。在N末端和C末端的新的1个以上的氨基酸残基的附加也包括在此“附加”的概念内。这些“附加”的氨基酸残基的个数作为“氨基酸附加的个数”计数。

作为用作体液抗体捕获抗原的肽的氨基酸序列的适宜的具体例，作为DIDO1蛋白质来源，例如，可举出SEQ ID NO:4(AMAASKKTAPPGSAVGKQ)，作为CPSF蛋白质来源，例如，可举出SEQ ID NO:7(CPSF2-607：QVRLKDSLVSSLQFC)。再者，这些捕获肽的能改变的氨基酸的个数根据上述的基准是1个。

指定的氨基酸序列的体液抗体捕获抗原能根据常规方法确保。具体而言，例如，基于SEQ ID NO:1所示的DIDO1基因的碱基序列、或者SEQ ID NO:6所示的CPSF2基因而设计用于扩增有这些碱基序列的全部或一部分的双链DNA的核酸扩增用引物，将由使用所述扩增用引物的PCR法等的基因扩增产物作为DIDO1基因、或者CPSF2基因的全部或一部分得到，使用其而整合到pGEX-4T等的原核细胞表达载体，选择整合转化所述载体的转化体，通过进一步添加IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷，isopropyl-β-D-thiogalactoside)等的药物来诱导指定的DIDO1基因、或者CPSF2基因的全部或一部分的表达，可将表达的DIDO1蛋白质、或者CPSF2蛋白质的全部或一部分由例如，使用谷胱甘肽琼脂糖凝胶(glutathione-Sepharose)(GE Healthcare Life Sciences)的亲和性层析等纯化。

特别是，具有DIDO1蛋白质、或者CPSF2蛋白质的一部分的序列的肽(典型而言，作为上述的氨基酸残基数7～30个的体液抗体捕获抗原使用的肽)能根据公知的肽的化学合成法容易地制造。关于肽合成，能使用作为今或常规方法确立的液相肽合成法、或者，固相肽合成法而制造。进而，一般而言，作为被认为是适宜的化学合成法的固相肽合成法，能使用Boc固相法或Fmoc固相法。

作为DIDO1蛋白质、或者CPSF2蛋白质的全部或一部分，使用市售品也是可能的。在市售品中，既有产品自不必说，也含根据订制而制造的外订品。

另外，可向作为这些体液抗体捕获抗原使用的蛋白质或肽(用于体液抗体捕获的本质部分)根据需要附加适宜修饰结构。例如，如后所述，在AlphaLISA(放大发光接近均匀试验联免疫吸附试验，Amplified Luminescence Proximity Homogeneous Assay-LinkedImmunoSorbent Assay)法中使用的，作为GST(谷胱甘肽S-转移酶，glutathione S-transferase)-融合化蛋白质或肽或生物素融合化蛋白质或肽等也是可能的。

(c)对于关于脑梗塞的发病的数据取得方法

在本发明的数据取得方法中，对血液样品等的从生物体分离的体液样品中的针对DIDO1蛋白质或其一部分(以下，也称为“DIDO1抗原”)、和/或，CPSF2蛋白质或其一部分(以下，也称为“CPSF2抗原”)的抗体水平进行定量，在该定量值比标准值(截止值)大的情况中，认定在所述体液样品提供者中的DIDO1抗原、和/或，CPSF2抗原的亢进，能以其作为指标而作为所述受试试样提供者的关于脑梗塞的发病的数据。

具体而言，在该定量值比标准值(截止值)大的情况中，认定在从生物体分离的体液样品提供者中的DIDO1抗原、或者CPSF2抗原的亢进，能以其作为指标而作为所述受试试样提供者的关于脑梗塞的发病的数据。

在受试试样中的针对DIDO1抗原、或者CPSF2抗原的体液抗体水平的标准值设定由在头部MRI检查中确认不到脑梗塞的迹象等的异常的者构成的对照的标本集团，求出在所述标本集团中的所述受试试样的针对DIDO1抗原、或者CPSF2抗原的所述体液抗体的定量值，通过对其实施统计处理而求出平均、标准偏差等，可含截止值而导出。

所述体液抗体水平的测定，例如，可通过使上述的体液抗体捕获抗原(含蛋白质及肽，即，“DIDO1抗原”和“CPSF2抗原”)的固定化物接触从生物体分离的体液样品，以所述从生物体分离的体液样品内的针对DIDO1蛋白质的抗体、或者针对CPSF2蛋白质的抗体(一同体液抗体)的与所述体液抗体捕获抗原的基于抗原抗体反应的结合作为信号检测来进行。具体而言，可使用AlphaLISA法、ELISA法、间接荧光抗体法、蛋白印迹法(免疫印迹法)、比浊法、散射比浊法、乳胶凝集比浊法、CLEIA法等的手段而进行定量测定。其中例示的任何的定量测定手段也是以定量目标物质作为从生物体分离的体液样品中的抗体时的确立的定量测定手段。

例如，在AlphaLISA法中，在以GST-融合DIDO1抗原或GST-融合CPSF2抗原(蛋白质)作为体液抗体捕获抗原时，使用谷胱甘肽-结合供体珠，以生物素化DIDO1肽或生物素化CPSF2肽作为体液抗体捕获抗原时使用链霉亲和素-结合供体珠，将体液抗体捕获抗原、血液样品、及结合抗人IgG抗体的受体珠混合，数小时至数天、于室温温育，通过向形成的抗原抗体复合物照射680nm的光，检测发生的520～620nm的光，可进行期望的体液抗体的定量。在间接荧光抗体法中，可使固定化指定的体液抗体捕获抗原的蛋白阵列接触从生物体分离的体液样品，使形成的体液抗体捕获抗原-抗DIDO1体液抗体复合物、或者CPSF2体液抗体复合物再与实施荧光标记的第二抗体接触，对针对DIDO1蛋白质、或者CPSF2蛋白质的体液抗体进行定量。ELISA法进行以在间接荧光抗体法中使用的第二抗体的标记作为酶标记定量。第二抗体的标记能多样地选择。在蛋白印迹法中，可将体液抗体捕获抗原用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳之后，从凝胶转印到硝酸纤维素膜等的载体，使从生物体分离的体液样品接触，通过使用第二抗体检测发生的体液抗体捕获抗原-抗DIDO1体液抗体复合物、或者同CPSF2体液抗体复合物来进行定量测定。在比浊法或散射比浊法中，可通过将通过使从生物体分离的体液样品和体液抗体捕获抗原接触而形成的体液抗体捕获抗原-抗DIDO1体液抗体复合物、或者同CPSF2体液抗体复合物用浊度(比浊法)或散射光强度的变化(散射比浊法)检测来进行定量。在乳胶凝集比浊法中，可通过使体液抗体捕获抗原结合的乳胶粒子和从生物体分离的体液样品接触，将所述乳胶粒子的凝集体由与乳胶粒子结合的体液抗体彼此的相互作用形成，通过对其进行检测来进行定量。在CLEIA法中，可使体液抗体捕获抗原的结合磁性粒子和从生物体分离的体液样品接触而在磁性粒子上形成体液抗体捕获抗原-抗CPSF2抗体复合物、或者同DIDO1抗体复合物而进行集磁，除去未反应物，通过实施适合的荧光化处理等而检测所述复合物来进行定量测定。

其中，称为“DIDO1抗原”和“CPSF2抗原”的“用于以从生物体分离的样品中的针对这些抗原的抗体作为生物标志物测定－定量的2种抗原”一同在检测对于脑梗塞的发病风险的生物标志物这样的面共同，但各自有独自的特征，通过将这些单独或组合使用，可取得对于对应于各种各样的状况的确切的脑梗塞的发病的数据。

第1，通过对从生物体分离的体液样品中的针对“DIDO1抗原”的抗体水平的升高进行测定，可特别进行以慢性肾脏病作为基础疾病的关于脑梗塞的发病的数据取得。“慢性肾脏病(CKD)”是肾障碍持续3个月以上的肾疾病，已知罹患者的脑卒中或心肌梗塞等的心血管病的风险高。再者，在急性期脑梗塞发病的前刻抗DIDO1体液抗体水平急升高，相反在慢性期脑梗塞中有所述抗体水平降低的特征。

即，通过对于慢性肾脏病患者定期地监测针对“DIDO1抗原”的体内抗体水平，可以良好确度进行在所述患者中的脑梗塞的发病的预测。另外，由于也是显示同时脑梗塞的发病极其迫近的指标，在此生物标志物是高值的情况中，也有显示讲由肾脏病的治疗或血压管理等的早急的预防对策的必要。再者，通过监测急性脑梗塞发病后的此生物标志物值的降低，确认向慢性期的迁移也是可能的。

第2，通过对从生物体分离的体液样品中的针对“CPSF2抗原”的抗体水平的升高进行测定，可特别进行以糖尿病作为基础疾病的关于脑梗塞的发病的数据取得。即使是由糖尿病的治疗而其他生物标志物值降低时，只要是此针对CPSF2的体液抗体值是高值，就显示依然存在脑梗塞的发病高的风险。另外，如果与针对上述的“DIDO1抗原”的抗体水平的升高比，则确认到与脑梗塞发病的继续的风险敏锐地反应的倾向，通过对于无症状且确认“CPSF2体液抗体的亢进”的脑梗塞前阶段进行减风险因素的措施、例如，就餐指导、运动指导、禁烟指导等的生活习惯改善指导，能使脑梗塞的风险减少。

通过将有这些各自特征的2种脑梗塞发病生物标志物组合使用，能短期且长期掌握在糖尿病或慢性肾脏病等的动脉硬化关联疾病患者中的脑梗塞发病的风险。另外，通过关注特定的病态或症状而锁定各生物标志物而单独使用，可与使用多数的生物标志物时比，进行医疗费的节约，可同时确切掌握根据患者个人的脑梗塞发病的风险。

(2)对于本发明的试剂盒

在本发明的试剂盒中，例如，作为用于以AlphaLISA法作为定量测定手段进行的构成可举GST-融合DIDO1抗原或GST-融合CPSF2抗原(蛋白质)、谷胱甘肽-结合供体珠、及抗人IgG-结合受体珠的组、或者，生物素化DIDO1抗原或生物素化CPSF2抗原(肽)、链霉亲和素-结合供体珠、及抗人IgG-结合受体珠的组。

另外，作为用于以ELISA法作为定量测定手段进行的本发明的试剂盒的构成可举使上述的体液抗体捕获抗原固定化的板、用于使对于体液抗体的标记进行的第二抗体、第二抗体的标记显现的试剂。

另外，作为用于进行乳胶凝集比浊法的试剂盒构成可举使上述的体液抗体捕获抗原结合的乳胶粒子。

另外，作为用于进行CLEIA法的试剂盒构成可举使上述的体液抗体捕获抗原结合的磁性粒子和用于使针对体液抗体的标记进行的第二抗体、第二抗体的标记显现的试剂。

其中举的这些试剂盒的构成终究仅是例示，用于进行其他定量测定手段的试剂盒也包括在本发明试剂盒的范围内。再者，以使其中例示的上述的要素的构成变得更少而增加检查的外订或自身筹备的程度的方式设定也是可能的，相反，以稀释液或试剂用的管等作为构成增加而设定本发明的试剂盒的即时使用也是可能的。另外，考虑对应于具体的检查的其他要素也是可能的。

【实施例】

以下，公开本发明的实施例。

[制造例和解析方法]

＜在本实施例中使用的抗原蛋白质或肽＞

(1)抗原蛋白质或肽的列表

在本实施例中，使用下述的抗原蛋白质或肽。

(a)DIDO1

·“DIDO1蛋白质”(SEQ ID NO:3)：DIDO1蛋白质(SEQ ID NO:2)之中，N末端经GST修饰的自N末端起275个氨基酸的N末端区域部分(SEQ ID NO:3)

·“DIDO1肽”(SEQ ID NO:4)：上述DIDO1蛋白质(SEQ ID NO:2)之中，N末端经生物素化修饰的第543～560个氨基酸序列(SEQ ID NO:4)的肽

图1中将DIDO1蛋白质的氨基酸序列(SEQ ID NO:2)用单字母显示表示，在相当于DIDO1肽的氨基酸序列(SEQ ID NO:4)的部分加下划线。

(b)CPSF2

·“CPSF2肽”(SEQ ID NO:7)：CPSF2的DNA(SEQ ID NO:5)编码的全长蛋白质(SEQID NO:6)之中，N末端经生物素化修饰的第607～620个氨基酸序列(SEQ ID NO:7)的肽

图2中将CPSF2蛋白质的氨基酸序列(SEQ ID NO:6)用单字母显示表示，在相当于CPSF2肽的氨基酸序列(SEQ ID NO:7)的部分加下划线。

(2)抗原蛋白质或肽的调制

上述列表的抗原蛋白质和肽由下述的方法调制。

(a)DIDO1蛋白质的表达和纯化

从人U2OS骨肉瘤细胞使用High Pure RNA Isolation Kit(Roche，Basel，Switzerland)单离总RNA，使用RT-PCR用Superscript III第一链合成系统(Thermo FisherScientific)而合成cDNA。以其作为模板，由使用Pyrobest DNA聚合酶(Takara Bio Inc.，Shiga，Japan)的PCR法，DIDO1蛋白质(SEQ ID NO:2)之中，对N末端区域(275个氨基酸，SEQID NO:3)进行扩增，插入谷胱甘肽S-转移酶(GST)基因部位设在克隆位点的上游的质粒载体pGEX-4T-1(GE Healthcare Life Sciences，Pittsburgh，PA)的EcoRI/SalI部位而制作作为基因表达用的重组质粒的pGEX-4T-1-DIDO1，由DNA测序确认碱基序列。再者，向大肠杆菌BL-21导入pGEX-4T-1-DIDO1而进行转化，由利用0.1mM IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷，isopropyl-β-D-thiogalactoside)于25℃处理4小时诱导DIDO1cDNA的表达。诱导后，回收所述大肠杆菌，加BugBuster Master Mix(Merck Millipore，Darmstadt，Germany)而溶解，得到蛋白质提取液。所述蛋白质提取液中的GST-DIDO1蛋白质由谷胱甘肽-Sepharose(GE Healthcare Life Sciences)柱层析纯化，将缓冲液更换为PBS，以其作为上述的“DIDO1蛋白质”。作为对照，同样地纯化GST。

(b)肽的设计

从CPSF2蛋白质的公开的氨基酸序列(SEQ ID NO:6)使用网公开的表位检索网站程序ProPred(http://www.imtech.res.in/raghava/propred/)检索抗体识别部位。结果，得到所述表位候选的序列、CPSF2-547～550、CPSF2-607～620、CPSF2-712～725。再者，各候选的数字只要是在SEQ ID NO:6中作为表位候选选择的氨基酸的编号：例如，547～550，就表示由SEQ ID NO:6的第547～550的一系列的氨基酸序列构成的肽。以这些表位候选的各肽作为N端具有生物素化修饰的肽，使用Fmoc法而合成，由抗体水平的解析筛选CPSF2-607～620(SEQ ID NO:7)，作为上述的“CPSF2肽”使用。

bCPSF2-607：生物素-QVRLKDSLVSSLQFC(SEQ ID NO:7)

对于DIDO1蛋白质的氨基酸序列(SEQ ID NO:2)，也与上述的CPSF2同样地检索，合成DIDO1-543～560、DIDO1-568～585、DIDO1-643～658、及DIDO1-802～819的N末端具有生物素化修饰的未纯化品，由抗体水平的解析筛选对于脑梗塞最良好反应的bDIDO1-543～560，作为上述的“DIDO1肽”。其结构如下。

bDIDO1-543：生物素-AMAASKKTAPPGSAVGKQ(SEQ ID NO:4)

＜由AlphaLISA法的解析＞

在个别的实施例的公开之前，接下来对在本实施例中使用的由AlphaLISA法的解析的概要进行说明。

AlphaLISA法(Amplified Luminescence Proximity Homogeneous Assay)具体使用384孔微量滴定板(white opaque OptiPlate^TM，Perkin Elmer，Waltham，MA)而进行。在各孔中，将2.5μL用AlphaLISA专用缓冲液(25mM HEPES，pH7.4，0.1％casein，0.5％Triton X-100，1mg/mL dextran-500，0.05％Proclin-300)稀释100倍的血清、及成为抗原的GST、或者DIDO1蛋白质(10μg/mL)、或者生物素化肽(DIDO1肽或CPSF2肽)(400ng/ml)用AlphaLISA专用缓冲液稀释而混合。于室温温育6～8小时之后，将抗-人IgG-缀合的受体珠(2.5μL以40μg/mL)、及谷胱甘肽-、或者链霉亲和素-缀合的供体珠(2.5μL以40μg/mL)用AlphaLISA专用缓冲液稀释而混合。于室温放置1～14天之后，用EnSpire Alpha酶标仪(PerkinElmer)测定发生的光子的数而作为“Alpha计数”。在DIDO1蛋白质的情况中减去对照的GST，在上述生物素化肽的情况中减去缓冲液对照的值而算出对于CPSF2、或者DIDO1抗原特异性的抗体水平。

[实施例1]在使用AlphaLISA法的瞬时脑缺血发作(TIA)患者和急性期脑梗塞(aCI)患者中的探讨

急性期脑梗塞(aCI)是指通过脑的血流停滞而运动功能或感觉功能突然发生大的损伤的状态。瞬时脑缺血发作(TIA)是指因与脑梗塞同样的原因而脑神经细胞受障碍，但在24小时以内、多在数分钟以内恢复的疾病。各自的血清受试体在发病后2周以内采集。

将健康者(HD)、TIA患者、及aCI患者中的针对DIDO1蛋白质、及CPSF2肽的血清抗体水平由AlphaLISA法测定。健康者的血清样品从在海港广场柏户诊所由头部MRI检查未确认异常的受试者得到。TIA和aCI的患者血清从千叶县立佐原医院、千叶劳灾医院、千叶市立青叶医院、及千叶医疗中心得到。

探讨结果示于图3和表1。图3的内容在附图的简单的说明中记载。表1显示图3中所示的由AlphaLISA法的数据解析结果。表1自上，显示健康者样品的平均值、SD、截止值(平均值+2SD)、全样品数、显示截止值以上的阳性样品数、阳性率、及TIA患者和aCI患者样品的平均值、SD、全样品数、显示截止值以上的阳性样品数、阳性率、及对健康者样品和患者样品进行比较之时的P值。将P值0.05以下，或者阳性率10％以上的值用粗体字表示。

[表1_1]

样品信息	HD	TIA	aCI
				全样品数	123	77	158
男/女	85/38	49/28	120/38
				年龄(平均值±SD)	51.9±8.7	69.6±11.7	57.7±7.6

[表1_2]

在表1中得知，将截止值设定为健康者样品的平均值+2SD之时的相对于DIDO1蛋白质的，HD、TIA、aCI的血清样品中的抗体水平的阳性率各自是0.0％、11.7％、9.5％，一方面，对于CPSF2肽的同抗体水平的阳性率各自是4.1％、6.5％、9.5％。即，在图3和表1中，DIDO1蛋白质、及CPSF2肽的抗体水平在TIA、aCI的何方的患者血清中也显示显著地高。

[实施例2]在使用AlphaLISA法的急性心肌梗塞(AMI)患者和糖尿病(DM)患者中的探讨

将AMI患者和DM患者中的针对DIDO1蛋白质及CPSF2肽的血清抗体水平由AlphaLISA法测定，与健康者(HD)比较。

探讨结果示于图4和表2。图4的内容在附图的简单的说明中记载。表2显示图4中所示的由AlphaLISA法的数据解析结果。表中的项目如对于表1进行说明。

[表2_1]

样品信息	HD	CVD	DM
				全样品数	128	128	128
男/女	72/56	105/23	76/52
				年龄(平均值±SD)	58.3±5.6	58.2±8.5	58.4±9.1

[表2_2]

上述的探讨的结果，在AMI患者和DM患者中的DIDO1抗体水平未确认与HD比显著的差异(图4a、表2)。一方面，CPSF2抗体在DM患者中显示与HD比显著的高值，但在AMI患者中与健康者比较确认不到显著的差异(图4b、表2)。

[实施例3]在使用AlphaLISA法的慢性肾脏病(CKD)患者中的探讨

将健康者(HD)和CKD患者中的针对DIDO1蛋白质及CPSF2肽的血清抗体水平由AlphaLISA法测定，与健康者(HD)比较。

探讨结果示于图5和表3。图5的内容在附图的简单的说明中记载。表3显示图5中所示的由AlphaLISA法的数据解析结果。表中的项目如对于表1进行说明。另外，“1型CKD”表示糖尿病性肾病，“2型CKD”表示肾硬化症，“3型CKD”表示肾小球肾病。

[表3_1]

[表3_2]

上述的探讨的结果，DIDO1抗体水平在任何的类型的CKD中均显示与HD比显著的高值(图5a、表3)、特别是在1型CKD中显示大的差异。一方面，CPSF2抗体在任何的类型的CKD中均与HD比确认不到显著的差异(图5b、表3)。

[实施例4]ROC解析结果

由上述实施例1～3，对于各疾病而将由AlphaLISA法得到的针对DIDO1的血清抗体水平及针对CPSF2的血清抗体水平再进行ROC解析而得到的areas under the curve(AUC)值、95％Confidence interval(CI)、截止值、灵敏度、特异性、P值示于表4(表4-1：DIDO1、表4-2：CPSF2)。在表4-1和表4-2中，由ROC解析得到的数字自上顺序地显示AUC值、95％CI、截止值、灵敏度、特异性、P值。在表4-1中，例如，在记载为“DIDO1 vs TIA”时，显示是对于“针对DIDO1蛋白质的TIA患者血清中的抗体水平”的栏，在记载为“DIDO1-pep vs TIA”时，显示是对于“针对DIDO1肽的TIA患者血清中的抗体水平”的栏。

[表4-1_1]

	DIDO1 vs TIA	DIDO1 vs aCI
			AUC值	0.6819	0.6476
95％CI	0.5929～0.7709	0.5898～0.7053
			截止值	4,509	4,686
灵敏度(％)	84.1％	74.1％
			特异性(％)	50.4％	51.8％
P值	0.00028	＜0.0001

[表4-1_2]

	DIDO1 vs AMI	DIDO1 vs DM
			AUC值	0.5163	0.5347
95％CI	0.4454～0.5875	0.4638～0.6057
			截止值	13,519	10,700
灵敏度(％)	22.7％	46.9％
			特异性(％)	85.8％	63.8％
P值	0.650	0.338

[表4-1_3]

	DIDO1 vs 1型CKD	DIDO1 vs 2型CKD	DIDO1 vs 3型CKD
				AUC值	0.9046	0.8956	0.8517
95％CI	0.8584～0.9507	0.8393～0.9518	0.7926～0.9109
				截止值	904	950.5	905.5
灵敏度(％)	98.6％	96.9％	91.9％
				特异性(％)	72.0％	73.2％	72.0％
P值	＜0.0001	＜0.0001	＜0.0001

[表4-1_4]

	DIDO1-pep vs TIA	DIDO1-pep vs aCI
			AUC值	0.6503	0.6611
95％CI	0.5751～0.7256	0.6138～0.7084
			截止值	4,662	8,413
灵敏度(％)	87.9％	43.9％
			特异性(％)	38.3％	81.9％
P值	0.0003	＜0.0001

[表4-2_1]

	CPSF2 vs TIA	CPSF2 vs aCI
			AUC值	0.6314	0.6369
95％CI	0.5631～0.6997	0.5970～0.6768
			截止值	2,643	2,644
灵敏度(％)	54.4％	57.8％
			特异性(％)	67.7％	67.7％
P值	0.0002	＜0.0001

[表4-2_2]

	CPSF2 vs AMI	CPSF2 vs DM
			AUC值	0.5522	0.6464
95％CI	0.4817～0.6226	0.5792～0.7136
			截止值	5,356	6,145
灵敏度(％)	63.3％	55.5％
			特异性(％)	49.2％	70.3％
P值	0.149	＜0.0001

[表4-2_3]

	CPSF2 vs 1型CKD	CPSF2 vs 2型CKD	CPSF2 vs 3型CKD
				AUC值	0.5040	0.6387	0.5196
95％CI	0.4262～0.5817	0.5274～0.7500	0.4395～0.5996
				截止值	641.5	901	706
灵敏度(％)	11.7％	65.6％	29.3％
				特异性(％)	93.9％	62.2％	80.5％
P值	0.921	0.022	0.635

针对DIDO1蛋白质的血清抗体值如表4-1所示，显示对于CKD显著地高的AUC值。对于TIA和aCI也显示显著的高值，但对于AMI和DM未确认显著差异。同样地，针对DIDO1肽的血清抗体值也对于TIA及aCI显示高的AUC值。

由CPSF2肽的CPSF2血清抗体值如表4-2所示，对于TIA、aCI及DM显示高的AUC，但对于AMI或1型CKD和3型CKD未确认显著差异，对于2型CKD也仅确认微少的显著差异。

[实施例5]血清抗体水平和受试者数据的相关解析

(1)Mann-Whitney U解析

接下来，对于针对DIDO1肽和CPSF2肽的血清抗体水平和受试者数据而进行Mann-Whitney U解析(对于无对应的2组的数据的，母集团分布的相同性的检验方法)。

具体而言，对于在千叶县立佐原医院采集的851血清样品，将以DIDO1肽和CPSF2肽作为抗原时的针对这些的血清抗体水平由AlphaLISA法测定而进行在得到的测定值和受试者的数据之间的上述检验。

受试者数据以性别、现在的症状[无(HD)、弥漫性白质软化(DSWMH)、无症候性脑梗塞(asympt-CI)、TIA、aCI、慢性期脑梗塞(cCI)、糖尿病(DM)、高血压症(HT)、心血管障碍(CVD)、脂质异常症(Lipidemia)]、及生活习惯(吸烟习惯、饮酒习惯)作为组使用。

结果示于表5(表5-1、表5-2、表5-3)。在表5-1、表5-2、表5-3中，显示每组的样品数、针对DIDO1肽抗原和CPSF2肽抗原的血清抗体水平(Alpha计数)的平均值和SD、进而在各组和对照组中的由Mann-Whitney U解析的P值。

[表5-1_1]

[表5-1_2]

[表5-1_3]

[表5-2_1]

[表5-2_2]

[表5-2_3]

[表5-3_1]

[表5-3_2]

如表5-1、表5-2、表5-3所示，针对DIDO1肽抗原的血清抗体水平与针对DIDO1蛋白质抗原的血清抗体水平同样地，对于aCI显示最高值。另外，即使是TIA或cCI也确认显著差异。另外，确认与高血压症、心血管障碍、脂质异常症显著的相关，但与糖尿病或性别无关系。另外，在生活习惯中确认到与吸烟习惯强的相关，但与饮酒习惯无关系。

一方面，针对CPSF2肽抗原的抗体水平不仅是aCI，即使是cCI也显示高度显著的差异。再者，即使是TIA或asympt-CI也显示显著差异。这推定为CPSF2抗体还可感知与脑梗塞相关的微细的异变。再者，在其他疾病中对应于DM、HT，但在Lipidemia或CVD中确认不到显著差异。在生活习惯中与吸烟习惯相关，但与饮酒习惯无关系。

(2)Spearman的相关解析

接下来，对于在针对DIDO1肽和CPSF2肽的在千叶县立佐原医院采集的917血清样品中的上述血清抗体水平和受试者数据而进行Spearman的相关解析(将2个变量间以何程度有次序的直线关系(单纯增加或单纯减少关系)用数值表示的分析)。受试者数据使用年龄、身高、体重、体重指数(BMI)、最大颈动脉内膜中膜肥厚(maximum intima-mediathickness；maxIMT)、血液检查数据[白蛋白/珠蛋白比(A/G)]、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)、总胆红素(tBil)、胆碱酯酶(CHE)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GTP)、t总蛋白质(TP)、白蛋白(ALB)、血尿素氮(BUN)、肌酸酐(CRE)、估算的肾小球滤过率(eGFR)、尿酸(UA)、淀粉酶(AMY)、总胆甾醇(T-CHO)、HDL-胆甾醇(HDL-C)、三酰甘油(TG)、钠(Na)、钾(K)、氯(Cl)、钙(Ca)、无机磷酸盐(IP)、铁(Fe)、C-反应性蛋白质(CRP)、LDL-胆甾醇(LDL-C)、白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、红细胞比容(HCT)、平均红细胞容积(MCV)、平均红细胞血红蛋白/平均红细胞色素量(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度/平均红细胞色素浓度(MCHC)、红细胞体积分布宽度(RDW)、血小板(PLT)、平均血小板容积(MPV)、原降钙素(PCT)、血小板分布宽度(PDW)、血糖(BS)、糖化血红蛋白(HbA1c)〕、血压(BP)、及吸烟期间(年数)。

表6(表6-1、表6-2)显示针对DIDO1肽抗原及CPSF2肽抗原的血清抗体水平和受试者数据的相关解析结果。在这些表中，对于在千叶县立佐原医院采集的917血清样品而显示每组的样品数、由针对DIDO1肽、及CPSF2肽抗原的血清抗体水平(Alpha计数)的Speraman的相关解析得到的次序相关系数(r)和P值。

[表6-1]

[表6-2]

如表6-1、表6-2所示，Spearman相关解析的结果得知，DIDO1血清抗体水平和CPSF2血清抗体水平均与年龄、maxIMT、CRP、吸烟期间相关，与身高、体重、ALB、TP逆相关。另外，DIDO1血清抗体水平与BP相关的，一方面，CPSF2血清抗体水平显示与A/G、ALT、tBIL、T-CHO、LDL-C逆相关。从这些结果也认为，DIDO1和CPSF2的血清抗体生物标志物均与年龄、IMT、吸烟习惯相关，被认为反映动脉硬化，但一方面，DIDO1血清抗体生物标志物被认为反映高血压，另外，CPSF2血清抗体生物标志物被认为反映血中蛋白质的减少或胆甾醇的减少。

[实施例6]多目的同组样品解析

对象是在1990年、及1993年在岩手县二户、秋田县横手、长野县佐久、冲绳县中部、茨城县水户、新舄县长冈、高知县中央东、长崎县上五岛、冲绳县宫古的9个保健所管内住的40～69岁的男女之中，参加多个同组(JPHC：Japan Public Health Center-based CohortStudy)研究，保存血浆的约3万人。

将在追踪开始至2008年之间有急性期脑梗塞(aCI)的发病的病例作为“病例组”、在此时点以未患脑梗塞的生存者作为“对照组”，对于各病例而匹配性别、年龄、地域，随机地选出1例的对照，鉴定病例202人、对照202人的合计404人。将针对DIDO1抗原(DIDO1蛋白质和DIDO1肽)和CPSF2抗原(CPSF2肽)各自的血浆抗体水平由AlphaLISA法测定，将四分位和aCI发病的关联由条件附带逻辑模型分析。

结果示于表7。

[表7]

结果，针对DIDO1蛋白质的血浆抗体水平显示与aCI发病强的关联。对于血浆抗体水平的最低的组，在第2四分位的aCI发病的附条件比值比(95％置信区间)是3.99(1.93～8.23)、在第3四分位是3.40(1.62～7.13)、在最高的组是4.02(1.94～8.35)。针对DIDO1肽的血浆抗体水平也显示与DIDO1蛋白质抗原同样的结果，但比值比略低。另外，针对CPSF2肽的血浆抗体水平也显示与aCI发病关联，条件附带比值比各自是1.19(0.63～2.23)、1.66(0.89～3.09)、2.41(1.33～4.37)。结果是指DIDO1体液抗体水平和CPSF2体液抗体水平是对于aCI的发病预测有用的生物标志物。

[实施例的综合]

DIDO1体液(血清或血浆)抗体水平在TIA、aCI及CKD的患者体液中显示高值，在AMI和DM的患者体液中确认不到显著的升高。

特别是，DIDO1体液抗体水平，因为在CKD中显示超过0.8的高的AUC值，是与肾功能衰竭和高血压良好对应的生物标志物。DIDO1体液抗体水平在脑梗塞中，与cCI或TIA相比，在aCI显示大的差异，所以从肾功能衰竭识别患aCI的人。再者，DIDO1体液抗体水平，因不与asympt-CI反应，是在急性期脑梗塞发病的前刻急增的生物标志物。此生物标志物是高值的人，由于推定为极其迫近脑梗塞发病，需要由肾脏病的治疗或血压管理早急的预防对策。

另外，在cCI中DIDO1体液抗体水平下降，所以也可将其适用于治疗后的监测。

一方面，CPSF2体液抗体水平与CKD不太相关，对AMI、DM、aCI及TIA良好反应，特别是，识别由DM的原因的aCI和AMI。确认不到CPSF2体液抗体水平与作为DM生物标志物的HbA1c或BS相关。这被认为是因为由于多数患者受治疗而这些生物标志物值减少。从而推定为，即使其他DM生物标志物值下降，只要是此CPSF2体液抗体水平是高值，脑梗塞发病的风险就依然不下降。再者，见到血中总蛋白质或白蛋白的减少，推定为即使在观察到胆甾醇值的降低时，只要是此生物标志物是高值，脑梗塞发病的风险就不下降。

aCI的患者体液样品在脑梗塞的发病后2周以内采集，在发病后新出现自身抗体的可能性低，所以认为DIDO1体液抗体和CPSF2体液抗体自脑梗塞的发病前就存在。从而，此生物标志物也能适用于动脉硬化症的发病预测。

在更实际的JPHC同组样品的解析中，DIDO1体液抗体水平和CPSF2体液抗体水平在aCI的发病者中也显示显著地高的对于脑梗塞预测变得有用的生物标志物。

如上所述，DIDO1体液抗体水平和CPSF2体液抗体水平对应于各自肾脏病和糖尿病这样的不同的基础疾病。即，这些生物标志物在具有肾脏病或糖尿病等的基础疾病的人之中，可识别患脑梗塞的人。再者，通过联用这些DIDO1体液抗体生物标志物和CPSF2体液抗体生物标志物，事先检测广泛围的脑梗塞发病的高风险者变得可能。

例如，当根据从称为aCI的前阶段的Asympt-CI或TIA的阶段接近aCI而合起来评价缓慢地升高的CPSF2体液抗体生物标志物和到aCI的前刻急增的DIDO1体液抗体生物标志物时，能推定迫近何程度的危险。再者，由这些生物标志物测定，还能预测糖尿病或肾脏病等的原因，从而高风险的人对应于各自的原因的早急的预防措施变得必要。

【产业上的利用可能性】

脑梗塞成为将来卧病不起的原因的第一位，如果通过预测其发病而发病预防变得可能，就具有社会上大的含意。由于由本发明的数据取得方法和将其具现化的本发明试剂盒的使用，能病态个别地或综合地检测脑梗塞的发病风险，可讲对应于各自的状况的预防措施或治疗措施，其产业上的利用价值非常地大。

日本国专利申请第2017-230639号(申请日：2017年11月30日)的公开其整体由参照并入本说明书。记载在本说明书的全部文献、专利申请、及技术规格是各文献、专利申请、及技术规格由参照并入，与具体并且逐个记时同程度地由参照并入本说明书。

序列表

<110> FUJIKURA KASEI CO., LTD.

NATIONAL CANCER CENTER

UNIVERSITY OF TSUKUBA

NATIONAL UNIVERSITY CORPORATION CHIBA UNIVERSITY

OSAKA UNIVERSITY

<120> 以高灵敏度检测脑梗塞的发病风险的体液抗体生物标志物

<130> PFKK8PCT

<150> JP 2017-230639

<151> 2017-11-30

<160> 7

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 8592

<212> DNA

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 1

gtacttgcgc agaactcccc tcgcggcgac cacgcactac gggttggcgc cagagtcaaa 60

aggcgtcggc cctctggcaa gatggctgct gcggaggcgt tggagcgcgg aaatctggaa 120

ccgggatggc gacgtctaca ctgagtcgga ggcgaaggag cttactccac gggaacagcc 180

tctagataat ctgagttgtt gaaaatacga agcctgttac tcgtgaacag tggctgacaa 240

cagtgttgtt gtgagcctgg ctgtctgctt ggacccagag gtttcgtctg ccagggtttt 300

tggttgtatt taggatttca gggaaaagtg tccaagcttt cagtgttgga gcaggtatgg 360

acgacaaagg cgacccgagc aatgaggagg cacctaaggc catcaaaccc accagcaaag 420

agttcaggaa aacatggggt tttcgaagga ccactatcgc caagcgagag ggcgcagggg 480

acgcggaggc tgacccactg gagccgccac ccccacagca gcagctgggc ctgtccctgc 540

ggcgcagtgg gaggcagccc aagcgcactg agcgcgtgga gcagttcctg accattgcgc 600

ggcgccgcgg caggaggagc atgcctgtct ccctggagga ttctggtgag cccacgtcct 660

gccccgccac agacgccgag acagcctccg agggcagcgt ggaaagcgct tctgagacca 720

gaagcggccc ccagtctgct tccacagctg tgaaggaacg accagcctct tctgaaaagg 780

tgaaaggagg ggatgaccac gatgacacct ccgatagtga cagcgatggc ctgaccttga 840

aagagcttca gaatcgcctt cgcaggaagc gggaacagga gcccactgag aggcccctga 900

aagggatcca gagtcgcctg cggaagaagc gccgggagga gggtcccgcc gagactgtgg 960

gctccgaggc cagtgacact gtggagggcg tcctgcccag taagcaggag cccgagaacg 1020

atcagggggt tgtgtcccag gctgggaaag atgacagaga gagtaagttg gagggaaagg 1080

cggctcagga catcaaagat gaggagcctg gagacttggg ccgaccgaag cctgaatgtg 1140

agggttacga ccccaacgcc ctgtattgca tttgccgcca gcctcacaac aacaggttta 1200

tgatttgctg tgaccgctgt gaagaatggt ttcatggcga ttgtgtgggc atttctgagg 1260

ctcgagggag gcttttggaa aggaatgggg aagactatat ctgcccaaac tgcaccattc 1320

tgcaagtgca ggatgagact cattcagaaa cggcagatca gcaggaagct aaatggagac 1380

ctggagatgc tgatggcacc gattgtacaa gtataggaac aatagagcag aagtctagcg 1440

aagaccaagg gataaagggt agaattgaga aagctgcaaa tccaagtggc aagaagaaac 1500

tcaagatctt ccagcctgtg atagaggcgc ctggtgcctc aaaatgtatt ggccccgggt 1560

gctgtcacgt ggcgcagccc gactcggtgt actgcagtaa tgactgtatc ctcaaacacg 1620

ccgcagcgac aatgaagttt ctaagctcag gtaaagaaca gaagccaaag cctaaagaaa 1680

agatgaagat gaagccagag aagcccagtc ttccgaaatg cggtgctcag gcaggtatta 1740

aaatctcttc tgtgcacaag agaccagctc cagaaaaaaa agagaccaca gtgaagaagg 1800

cagtggtggt ccctgcgcgg agtgaagcac tcgggaagga agcagcttgt gagagcagca 1860

cgccgtcgtg ggcgagcgat cacaattaca atgcagtaaa gccagaaaag actgctgctc 1920

cctcgccgtc actgttgtat aaatccacga aggaagacag gaggtccgag gagaaagcgg 1980

cagccatggc agcctcaaag aaaacagccc ctccaggctc cgcggtgggc aagcagcctg 2040

cacctagaaa cctcgtgcca aagaagtctt cttttgctaa tgtggcagca gccacaccag 2100

ccattaaaaa gccaccctca ggtttcaagg gcaccatccc caagaggcca tggctctccg 2160

ctaccccatc gagtggtgct tcagctgcca ggcaggccgg accggcacct gcagcggcaa 2220

cggctgcctc caagaagttc cctggctccg ctgctttggt gggagccgta aggaagccag 2280

tggtaccttc tgttccaatg gcctcgccag ccccaggacg ccttggggct atgagtgctg 2340

caccatcgca gccaaattca caaattcggc aaaatatcag acgctcctta aaagagattt 2400

tgtggaaaag agtcaatgac agcgatgact taatcatgac agaaaacgaa gtaggaaaaa 2460

ttgccctcca tattgagaag gagatgttta acttgtttca agttacagat aatcgctaca 2520

agagtaaata tcgcagcatc atgttcaacc tgaaggaccc taaaaatcag ggactcttcc 2580

atcgtgttct gcgtgaggaa atctctttgg cgaaacttgt gagactgaag ccagaagaac 2640

ttgtatctaa agagctttcc acgtggaaag agaggccagc gagatctgtg atggagtcca 2700

gaactaaact gcacaatgaa agcaagaaga cggcccccag gcaggaggcc atccccgatc 2760

tggaggactc tccgccagtg tcggattcag aggaacagca agagtcagca cgtgctgtcc 2820

ctgagaagag cacagcgccg cttctcgacg tcttcagcag catgttgaaa gacaccacca 2880

gtcagcaccg cgcacacctc ttcgatctca actgtaaaat ttgcacaggc caggttccct 2940

ccgcagaaga tgagccagct ccgaaaaaac aaaaattgtc agcttctgtt aagaaagaag 3000

acttaaaatc aaagcatgac agctctgcac ctgacccagc tccggattca gctgatgagg 3060

tgatgccgga ggctgtgcct gaagttgcct ctgagccagg cctagaaagt gcttctcatc 3120

caaatgtgga cagaacgtat ttccctgggc ctccaggaga tggccatccc gagccctccc 3180

cgctggaaga cctgtccccc tgcccagcct cctgtgggag cggggtggtc accaccgtca 3240

cagtgtccgg ccgggacccc aggaccgctc caagcagttc atgcacagcc gtggcctccg 3300

cagcatcccg cccagacagc acccacatgg tggaagccag acaggatgtg ccgaagcctg 3360

tcttgacttc tgtgatggtg cccaagtcca tactagctaa gccatcctca tctcctgacc 3420

caagatacct gtcagttcct ccgtcaccaa atatcagcac ttcagaatca cgttcccctc 3480

cagagggaga cacgaccctc tttttgtctc gactcagcac catttggaaa ggatttatta 3540

acatgcagag tgtggcaaaa tttgtcacta aggcgtatcc tgtctctggg tgttttgatt 3600

acctcagtga ggatttgcct gacacaattc acattggtgg gaggatcgca ccgaagacag 3660

tttgggatta tgttggcaaa ctcaagtctt ctgtgtctaa ggagctctgt ctgatccgct 3720

tccaccccgc cacagaggaa gaggaggtcg cctatatctc tctctactcc tatttcagca 3780

gccgtggccg ctttggtgtt gtagctaata acaacaggca cgtcaaggac ctctacctga 3840

tcccgctgag cgcccaggac cctgttccat ccaaactctt gccctttgag ggaccaggtc 3900

ttgagtcacc acgtccgaat ataattcttg ggttagtaat ctgccaaaaa atcaaacgtc 3960

ccgcaaacag tggagagtta gacaagatgg acgaaaagcg gacccgactt caaccggaag 4020

aagcggacgt tccggcctat ccaaaagtag ccacagtccc gcagtcggaa aagaagccct 4080

ccaagtatcc actctgctct gcagacgcgg ctgtcagcac cacacctcct gggtcgccgc 4140

cgcctccgcc ccctcttcca gaaccaccgg tgctaaaagt gctgtcatcc ctcaaacctg 4200

cagcccccag cccagccaca gcagccacaa cagcagcggc agcctccacg gcagcttcct 4260

ccaccgcttc gtctgcttcc aaaacagcat caccgctgga gcacatcctg cagactctct 4320

ttggaaagaa gaaatcattc gacccgtccg ccagagagcc tcccgggtcc accgcaggtc 4380

tcccccagga gcccaaaacc acagcagagg acggggtgcc ggcacctccg ttgttagatc 4440

cgatcgtcca gcagttcggt cagttctcaa aagataaggc tctagaggaa gaggaggacg 4500

acaggccata cgaccctgag gaggagtacg acccggagag ggccttcgac actcagcttg 4560

tggagcgagg gcggcgccac gaggtggaaa gggctcctga agcagctgca gccgagcggg 4620

aagaggtggc ctatgacccc gaggatgaga ccatcttaga agaagcgaaa gtgactgttg 4680

atgacctgcc caacaggatg tgtgccgacg tgagaaggaa ctccgtggag aggcctgccg 4740

agccggtggc cggggctgcg acgccctccc tggtggagca acagaagatg ctagaagagc 4800

tgaacaaaca gatcgaggag cagaagagac agctggagga gcaagaagaa gctctcaggc 4860

agcagagggc cgccgtcggg gtctccatgg cccacttctc ggtgtcggac gccttgatgt 4920

ctccaccacc aaagtcgtcc ttgcccaagg cagagctgtt ccagcaagag cagcagtctg 4980

cagacaagcc cgcctcactg ccccccgcca gccaggcgtc aaaccacagg gacccccggc 5040

aggcgaggcg cctggccact gagaccggtg agggggaggg ggagcctctc tccaggctct 5100

cggcacgtgg tgcccagggt gccctgcccg agagagatgc ttccaggggt ggcctcgtgg 5160

gccaggcgcc catgccagtc ccggaggaaa aagagccagc ctcttccccc tgggcttcgg 5220

gcgaaaagcc cccagcgggg tccgagcagg acggctggaa ggcagagcct ggggagggca 5280

cccgccccgc cacggttgga gacagctcgg ccaggcctgc ccggagggtg ctgctgccca 5340

caccgccttg cggcgccctg cagcccggct tcccgctgca gcacgacggt gagagggacc 5400

ctttcacctg cccggggttc gcgtcgcagg acaaggctct cggctcagcc cagtatgagg 5460

acccaagaaa tcttcattct gctggaagga gcagcagccc tgcaggtgaa acagaggggg 5520

acagagagcc acaggccaga cccggcgagg gcaccgcccc gctcccccca ccaggacaga 5580

aagtgggggg ctctcagccc ccgtttcagg gtcagcggga acctggacct catgctttgg 5640

ggatgtcagg gcttcacggc cccaatttcc cgggaccaag ggggccagcc cctccgtttc 5700

cagaagagaa tatcgcttct aacgatgggc cacgagggcc tccgccagcc agattcggag 5760

cccagaaggg gcccatccct tccttattct cggggcaaca tgggccacct ccttatgggg 5820

acagcagagg cccctcaccc tcttaccttg gtggaccacg aggagtggca ccatcccaat 5880

ttgaagaacg caaggatccc catggggaga agagggagtt ccaggacgcc ccgtataacg 5940

aggtgacggg cgcccccgcc cagtttgaag ggacagagca agccccattt ctgggaagca 6000

gaggcggcgc gcctttccag ttcggaggcc agagaaggcc actgctgtct cagctgaaag 6060

gcccccgagg cggcccccct ccctctcagt ttggaggtca gagaggacca ccccctggtc 6120

atttcgtggg cccaagaggg ccccatccta gtcagtttga aactgcccgg ggccctcatc 6180

ccaaccagtt tgaaggaccc agaggccaag cgcctaactt tatgccaggt cccaggggca 6240

ttcagcctca gcagttcgaa gaccagaggg tccattcacc accaagattc acaaaccaaa 6300

gggcgcctgc acccctgcag tttggtggac tacgggggtc cgcacccttt tctgaaaaaa 6360

atgagcagac cccttcgcga tttcacttcc agggccaggc cccgcaggtg atgaagccgg 6420

gccccaggcc cctgctggag cttcccagcc accccccgca gcaccggaag gaccgctggg 6480

aggaggccgg gccgccctcc gcgctctcct ccagtgcgcc cggacagggc cccgaggccg 6540

acggacagtg ggcatcggcc gacttccgag aggggaaagg ccacgaatac agaaaccaga 6600

ctttcgaagg gaggcagaga gagcggtttg acgtggggcc caaagagaag ccgctggagg 6660

agcccgacgc ccagggccgg gcgtccgagg acaggaggag agagcgcgag cgcggccgaa 6720

actggagccg agagcgggac tgggaccggc cccgggagtg ggaccgacac cgggacaagg 6780

actccagccg ggactgggac agaaaccggg agaggagcgc caaccgcgac cgagagcgcg 6840

aggccgaccg gggcaaggag tgggaccgca gccgggagcg gagcaggaac cgagagcgcg 6900

agcgagaccg gaggcgcgac cgggaccggt cccggagcag agagcgggac cgagacaagg 6960

ccagggacag ggagcggggc cgcgaccgca aggaccggag caagagcaaa gagagcgctc 7020

gggacccgaa gcccgaggcc tcgagggcct ccgacgctgg caccgcctcg caggcctaga 7080

cgccccggcc gggcagagac cctttttaaa gccacgttcg taagatgcgt tgaacaaata 7140

gcttttgaaa tagccacgat cttagattca ggatagaata ttctggactt aaacattact 7200

gtaattttgt gtaaatggtt tcttacaaga tttcacatct ttacaattct gatgcttttt 7260

taaaaaaact aaactttaat atttccattt aaaattaaaa gaaatgggaa attgcctacg 7320

gagcatattg cttttcagat catagttatc ttttccaata actttattgt aaattttaag 7380

ggagtttcgt tggaccctag agccatacct tcactgacat ctcatccgtt tgtgtttcca 7440

aaagctgctt ttacaggtct tagccgccgc cccggaggcc ggtgtgggcg tgacctgcag 7500

gcgtccaccc tgcggctacg ggagaagtct tagtagcttg tatctggagt cttgagaaac 7560

acaaacctta caaatgcatc tttcttttgt cataaaattg gaattacaat tttcaactgg 7620

gaaacagaaa cacatttctt agcgtgctca gattttatat atcaccttat caattttttc 7680

caaaacatga tttaaagcaa catctgtcct agtataattg ttgcatttta aataacaatt 7740

tattgaaaaa tgttaagttt taccagccta aaaaaagtaa caaaccaatt aagtgtactt 7800

tgggggcagg gaggagtcct tgatttgaat aatcaggagt tttgttggtc cagtttcgcc 7860

ttctgagcag ttcttctgta tcccgggaaa agtacgctcg gccccaaact ggtatttgtc 7920

agacgataca tgtaaaagtt tgtccttgaa cgtggaacaa gacttgtgta aagtctgaga 7980

cgggaactag tgatcactag ctcaagaact gcaaatgaga caggaagctg ttcactgtga 8040

aacagtctct tgcttgtcgt gtatttttcg agtacttctg aagtgtgaag taaaaaaatc 8100

tggctaattt atttgtacaa atacactttg ataatttttt atattttcat aaacttttac 8160

agatgtaaaa ttaaagaact tcacttgttc tttggagtct gttattccat tgtacgtcac 8220

tacagatttt tcactttata gcacagattt tttaagttaa gaaaacattg agaatgtatc 8280

agtttgagat gtttggtgtt gaaagccaag tgtccatagg ttaaattaca ttaaagtagg 8340

tgtcacgttc caacatctag tacgatgaga aggttttgtt tgtttaacat ataaagcaaa 8400

tttttctaat ttaaatacac aaatgtaaaa atcaagtgtg tttctttagt ttacttgata 8460

gagattcctg tacattgtat tttatattgc ggaggcttat atcactgtac atgagaacat 8520

ggaacgacct aggttttgtt actcgcagta gaataaacag ctacaggaag tttcaaaaaa 8580

aaaaaaaaaa aa 8592

<210> 2

<211> 2240

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 2

Met Asp Asp Lys Gly Asp Pro Ser Asn Glu Glu Ala Pro Lys Ala Ile

1 5 10 15

Lys Pro Thr Ser Lys Glu Phe Arg Lys Thr Trp Gly Phe Arg Arg Thr

20 25 30

Thr Ile Ala Lys Arg Glu Gly Ala Gly Asp Ala Glu Ala Asp Pro Leu

35 40 45

Glu Pro Pro Pro Pro Gln Gln Gln Leu Gly Leu Ser Leu Arg Arg Ser

50 55 60

Gly Arg Gln Pro Lys Arg Thr Glu Arg Val Glu Gln Phe Leu Thr Ile

65 70 75 80

Ala Arg Arg Arg Gly Arg Arg Ser Met Pro Val Ser Leu Glu Asp Ser

85 90 95

Gly Glu Pro Thr Ser Cys Pro Ala Thr Asp Ala Glu Thr Ala Ser Glu

100 105 110

Gly Ser Val Glu Ser Ala Ser Glu Thr Arg Ser Gly Pro Gln Ser Ala

115 120 125

Ser Thr Ala Val Lys Glu Arg Pro Ala Ser Ser Glu Lys Val Lys Gly

130 135 140

Gly Asp Asp His Asp Asp Thr Ser Asp Ser Asp Ser Asp Gly Leu Thr

145 150 155 160

Leu Lys Glu Leu Gln Asn Arg Leu Arg Arg Lys Arg Glu Gln Glu Pro

165 170 175

Thr Glu Arg Pro Leu Lys Gly Ile Gln Ser Arg Leu Arg Lys Lys Arg

180 185 190

Arg Glu Glu Gly Pro Ala Glu Thr Val Gly Ser Glu Ala Ser Asp Thr

195 200 205

Val Glu Gly Val Leu Pro Ser Lys Gln Glu Pro Glu Asn Asp Gln Gly

210 215 220

Val Val Ser Gln Ala Gly Lys Asp Asp Arg Glu Ser Lys Leu Glu Gly

225 230 235 240

Lys Ala Ala Gln Asp Ile Lys Asp Glu Glu Pro Gly Asp Leu Gly Arg

245 250 255

Pro Lys Pro Glu Cys Glu Gly Tyr Asp Pro Asn Ala Leu Tyr Cys Ile

260 265 270

Cys Arg Gln Pro His Asn Asn Arg Phe Met Ile Cys Cys Asp Arg Cys

275 280 285

Glu Glu Trp Phe His Gly Asp Cys Val Gly Ile Ser Glu Ala Arg Gly

290 295 300

Arg Leu Leu Glu Arg Asn Gly Glu Asp Tyr Ile Cys Pro Asn Cys Thr

305 310 315 320

Ile Leu Gln Val Gln Asp Glu Thr His Ser Glu Thr Ala Asp Gln Gln

325 330 335

Glu Ala Lys Trp Arg Pro Gly Asp Ala Asp Gly Thr Asp Cys Thr Ser

340 345 350

Ile Gly Thr Ile Glu Gln Lys Ser Ser Glu Asp Gln Gly Ile Lys Gly

355 360 365

Arg Ile Glu Lys Ala Ala Asn Pro Ser Gly Lys Lys Lys Leu Lys Ile

370 375 380

Phe Gln Pro Val Ile Glu Ala Pro Gly Ala Ser Lys Cys Ile Gly Pro

385 390 395 400

Gly Cys Cys His Val Ala Gln Pro Asp Ser Val Tyr Cys Ser Asn Asp

405 410 415

Cys Ile Leu Lys His Ala Ala Ala Thr Met Lys Phe Leu Ser Ser Gly

420 425 430

Lys Glu Gln Lys Pro Lys Pro Lys Glu Lys Met Lys Met Lys Pro Glu

435 440 445

Lys Pro Ser Leu Pro Lys Cys Gly Ala Gln Ala Gly Ile Lys Ile Ser

450 455 460

Ser Val His Lys Arg Pro Ala Pro Glu Lys Lys Glu Thr Thr Val Lys

465 470 475 480

Lys Ala Val Val Val Pro Ala Arg Ser Glu Ala Leu Gly Lys Glu Ala

485 490 495

Ala Cys Glu Ser Ser Thr Pro Ser Trp Ala Ser Asp His Asn Tyr Asn

500 505 510

Ala Val Lys Pro Glu Lys Thr Ala Ala Pro Ser Pro Ser Leu Leu Tyr

515 520 525

Lys Ser Thr Lys Glu Asp Arg Arg Ser Glu Glu Lys Ala Ala Ala Met

530 535 540

Ala Ala Ser Lys Lys Thr Ala Pro Pro Gly Ser Ala Val Gly Lys Gln

545 550 555 560

Pro Ala Pro Arg Asn Leu Val Pro Lys Lys Ser Ser Phe Ala Asn Val

565 570 575

Ala Ala Ala Thr Pro Ala Ile Lys Lys Pro Pro Ser Gly Phe Lys Gly

580 585 590

Thr Ile Pro Lys Arg Pro Trp Leu Ser Ala Thr Pro Ser Ser Gly Ala

595 600 605

Ser Ala Ala Arg Gln Ala Gly Pro Ala Pro Ala Ala Ala Thr Ala Ala

610 615 620

Ser Lys Lys Phe Pro Gly Ser Ala Ala Leu Val Gly Ala Val Arg Lys

625 630 635 640

Pro Val Val Pro Ser Val Pro Met Ala Ser Pro Ala Pro Gly Arg Leu

645 650 655

Gly Ala Met Ser Ala Ala Pro Ser Gln Pro Asn Ser Gln Ile Arg Gln

660 665 670

Asn Ile Arg Arg Ser Leu Lys Glu Ile Leu Trp Lys Arg Val Asn Asp

675 680 685

Ser Asp Asp Leu Ile Met Thr Glu Asn Glu Val Gly Lys Ile Ala Leu

690 695 700

His Ile Glu Lys Glu Met Phe Asn Leu Phe Gln Val Thr Asp Asn Arg

705 710 715 720

Tyr Lys Ser Lys Tyr Arg Ser Ile Met Phe Asn Leu Lys Asp Pro Lys

725 730 735

Asn Gln Gly Leu Phe His Arg Val Leu Arg Glu Glu Ile Ser Leu Ala

740 745 750

Lys Leu Val Arg Leu Lys Pro Glu Glu Leu Val Ser Lys Glu Leu Ser

755 760 765

Thr Trp Lys Glu Arg Pro Ala Arg Ser Val Met Glu Ser Arg Thr Lys

770 775 780

Leu His Asn Glu Ser Lys Lys Thr Ala Pro Arg Gln Glu Ala Ile Pro

785 790 795 800

Asp Leu Glu Asp Ser Pro Pro Val Ser Asp Ser Glu Glu Gln Gln Glu

805 810 815

Ser Ala Arg Ala Val Pro Glu Lys Ser Thr Ala Pro Leu Leu Asp Val

820 825 830

Phe Ser Ser Met Leu Lys Asp Thr Thr Ser Gln His Arg Ala His Leu

835 840 845

Phe Asp Leu Asn Cys Lys Ile Cys Thr Gly Gln Val Pro Ser Ala Glu

850 855 860

Asp Glu Pro Ala Pro Lys Lys Gln Lys Leu Ser Ala Ser Val Lys Lys

865 870 875 880

Glu Asp Leu Lys Ser Lys His Asp Ser Ser Ala Pro Asp Pro Ala Pro

885 890 895

Asp Ser Ala Asp Glu Val Met Pro Glu Ala Val Pro Glu Val Ala Ser

900 905 910

Glu Pro Gly Leu Glu Ser Ala Ser His Pro Asn Val Asp Arg Thr Tyr

915 920 925

Phe Pro Gly Pro Pro Gly Asp Gly His Pro Glu Pro Ser Pro Leu Glu

930 935 940

Asp Leu Ser Pro Cys Pro Ala Ser Cys Gly Ser Gly Val Val Thr Thr

945 950 955 960

Val Thr Val Ser Gly Arg Asp Pro Arg Thr Ala Pro Ser Ser Ser Cys

965 970 975

Thr Ala Val Ala Ser Ala Ala Ser Arg Pro Asp Ser Thr His Met Val

980 985 990

Glu Ala Arg Gln Asp Val Pro Lys Pro Val Leu Thr Ser Val Met Val

995 1000 1005

Pro Lys Ser Ile Leu Ala Lys Pro Ser Ser Ser Pro Asp Pro Arg

1010 1015 1020

Tyr Leu Ser Val Pro Pro Ser Pro Asn Ile Ser Thr Ser Glu Ser

1025 1030 1035

Arg Ser Pro Pro Glu Gly Asp Thr Thr Leu Phe Leu Ser Arg Leu

1040 1045 1050

Ser Thr Ile Trp Lys Gly Phe Ile Asn Met Gln Ser Val Ala Lys

1055 1060 1065

Phe Val Thr Lys Ala Tyr Pro Val Ser Gly Cys Phe Asp Tyr Leu

1070 1075 1080

Ser Glu Asp Leu Pro Asp Thr Ile His Ile Gly Gly Arg Ile Ala

1085 1090 1095

Pro Lys Thr Val Trp Asp Tyr Val Gly Lys Leu Lys Ser Ser Val

1100 1105 1110

Ser Lys Glu Leu Cys Leu Ile Arg Phe His Pro Ala Thr Glu Glu

1115 1120 1125

Glu Glu Val Ala Tyr Ile Ser Leu Tyr Ser Tyr Phe Ser Ser Arg

1130 1135 1140

Gly Arg Phe Gly Val Val Ala Asn Asn Asn Arg His Val Lys Asp

1145 1150 1155

Leu Tyr Leu Ile Pro Leu Ser Ala Gln Asp Pro Val Pro Ser Lys

1160 1165 1170

Leu Leu Pro Phe Glu Gly Pro Gly Leu Glu Ser Pro Arg Pro Asn

1175 1180 1185

Ile Ile Leu Gly Leu Val Ile Cys Gln Lys Ile Lys Arg Pro Ala

1190 1195 1200

Asn Ser Gly Glu Leu Asp Lys Met Asp Glu Lys Arg Thr Arg Leu

1205 1210 1215

Gln Pro Glu Glu Ala Asp Val Pro Ala Tyr Pro Lys Val Ala Thr

1220 1225 1230

Val Pro Gln Ser Glu Lys Lys Pro Ser Lys Tyr Pro Leu Cys Ser

1235 1240 1245

Ala Asp Ala Ala Val Ser Thr Thr Pro Pro Gly Ser Pro Pro Pro

1250 1255 1260

Pro Pro Pro Leu Pro Glu Pro Pro Val Leu Lys Val Leu Ser Ser

1265 1270 1275

Leu Lys Pro Ala Ala Pro Ser Pro Ala Thr Ala Ala Thr Thr Ala

1280 1285 1290

Ala Ala Ala Ser Thr Ala Ala Ser Ser Thr Ala Ser Ser Ala Ser

1295 1300 1305

Lys Thr Ala Ser Pro Leu Glu His Ile Leu Gln Thr Leu Phe Gly

1310 1315 1320

Lys Lys Lys Ser Phe Asp Pro Ser Ala Arg Glu Pro Pro Gly Ser

1325 1330 1335

Thr Ala Gly Leu Pro Gln Glu Pro Lys Thr Thr Ala Glu Asp Gly

1340 1345 1350

Val Pro Ala Pro Pro Leu Leu Asp Pro Ile Val Gln Gln Phe Gly

1355 1360 1365

Gln Phe Ser Lys Asp Lys Ala Leu Glu Glu Glu Glu Asp Asp Arg

1370 1375 1380

Pro Tyr Asp Pro Glu Glu Glu Tyr Asp Pro Glu Arg Ala Phe Asp

1385 1390 1395

Thr Gln Leu Val Glu Arg Gly Arg Arg His Glu Val Glu Arg Ala

1400 1405 1410

Pro Glu Ala Ala Ala Ala Glu Arg Glu Glu Val Ala Tyr Asp Pro

1415 1420 1425

Glu Asp Glu Thr Ile Leu Glu Glu Ala Lys Val Thr Val Asp Asp

1430 1435 1440

Leu Pro Asn Arg Met Cys Ala Asp Val Arg Arg Asn Ser Val Glu

1445 1450 1455

Arg Pro Ala Glu Pro Val Ala Gly Ala Ala Thr Pro Ser Leu Val

1460 1465 1470

Glu Gln Gln Lys Met Leu Glu Glu Leu Asn Lys Gln Ile Glu Glu

1475 1480 1485

Gln Lys Arg Gln Leu Glu Glu Gln Glu Glu Ala Leu Arg Gln Gln

1490 1495 1500

Arg Ala Ala Val Gly Val Ser Met Ala His Phe Ser Val Ser Asp

1505 1510 1515

Ala Leu Met Ser Pro Pro Pro Lys Ser Ser Leu Pro Lys Ala Glu

1520 1525 1530

Leu Phe Gln Gln Glu Gln Gln Ser Ala Asp Lys Pro Ala Ser Leu

1535 1540 1545

Pro Pro Ala Ser Gln Ala Ser Asn His Arg Asp Pro Arg Gln Ala

1550 1555 1560

Arg Arg Leu Ala Thr Glu Thr Gly Glu Gly Glu Gly Glu Pro Leu

1565 1570 1575

Ser Arg Leu Ser Ala Arg Gly Ala Gln Gly Ala Leu Pro Glu Arg

1580 1585 1590

Asp Ala Ser Arg Gly Gly Leu Val Gly Gln Ala Pro Met Pro Val

1595 1600 1605

Pro Glu Glu Lys Glu Pro Ala Ser Ser Pro Trp Ala Ser Gly Glu

1610 1615 1620

Lys Pro Pro Ala Gly Ser Glu Gln Asp Gly Trp Lys Ala Glu Pro

1625 1630 1635

Gly Glu Gly Thr Arg Pro Ala Thr Val Gly Asp Ser Ser Ala Arg

1640 1645 1650

Pro Ala Arg Arg Val Leu Leu Pro Thr Pro Pro Cys Gly Ala Leu

1655 1660 1665

Gln Pro Gly Phe Pro Leu Gln His Asp Gly Glu Arg Asp Pro Phe

1670 1675 1680

Thr Cys Pro Gly Phe Ala Ser Gln Asp Lys Ala Leu Gly Ser Ala

1685 1690 1695

Gln Tyr Glu Asp Pro Arg Asn Leu His Ser Ala Gly Arg Ser Ser

1700 1705 1710

Ser Pro Ala Gly Glu Thr Glu Gly Asp Arg Glu Pro Gln Ala Arg

1715 1720 1725

Pro Gly Glu Gly Thr Ala Pro Leu Pro Pro Pro Gly Gln Lys Val

1730 1735 1740

Gly Gly Ser Gln Pro Pro Phe Gln Gly Gln Arg Glu Pro Gly Pro

1745 1750 1755

His Ala Leu Gly Met Ser Gly Leu His Gly Pro Asn Phe Pro Gly

1760 1765 1770

Pro Arg Gly Pro Ala Pro Pro Phe Pro Glu Glu Asn Ile Ala Ser

1775 1780 1785

Asn Asp Gly Pro Arg Gly Pro Pro Pro Ala Arg Phe Gly Ala Gln

1790 1795 1800

Lys Gly Pro Ile Pro Ser Leu Phe Ser Gly Gln His Gly Pro Pro

1805 1810 1815

Pro Tyr Gly Asp Ser Arg Gly Pro Ser Pro Ser Tyr Leu Gly Gly

1820 1825 1830

Pro Arg Gly Val Ala Pro Ser Gln Phe Glu Glu Arg Lys Asp Pro

1835 1840 1845

His Gly Glu Lys Arg Glu Phe Gln Asp Ala Pro Tyr Asn Glu Val

1850 1855 1860

Thr Gly Ala Pro Ala Gln Phe Glu Gly Thr Glu Gln Ala Pro Phe

1865 1870 1875

Leu Gly Ser Arg Gly Gly Ala Pro Phe Gln Phe Gly Gly Gln Arg

1880 1885 1890

Arg Pro Leu Leu Ser Gln Leu Lys Gly Pro Arg Gly Gly Pro Pro

1895 1900 1905

Pro Ser Gln Phe Gly Gly Gln Arg Gly Pro Pro Pro Gly His Phe

1910 1915 1920

Val Gly Pro Arg Gly Pro His Pro Ser Gln Phe Glu Thr Ala Arg

1925 1930 1935

Gly Pro His Pro Asn Gln Phe Glu Gly Pro Arg Gly Gln Ala Pro

1940 1945 1950

Asn Phe Met Pro Gly Pro Arg Gly Ile Gln Pro Gln Gln Phe Glu

1955 1960 1965

Asp Gln Arg Val His Ser Pro Pro Arg Phe Thr Asn Gln Arg Ala

1970 1975 1980

Pro Ala Pro Leu Gln Phe Gly Gly Leu Arg Gly Ser Ala Pro Phe

1985 1990 1995

Ser Glu Lys Asn Glu Gln Thr Pro Ser Arg Phe His Phe Gln Gly

2000 2005 2010

Gln Ala Pro Gln Val Met Lys Pro Gly Pro Arg Pro Leu Leu Glu

2015 2020 2025

Leu Pro Ser His Pro Pro Gln His Arg Lys Asp Arg Trp Glu Glu

2030 2035 2040

Ala Gly Pro Pro Ser Ala Leu Ser Ser Ser Ala Pro Gly Gln Gly

2045 2050 2055

Pro Glu Ala Asp Gly Gln Trp Ala Ser Ala Asp Phe Arg Glu Gly

2060 2065 2070

Lys Gly His Glu Tyr Arg Asn Gln Thr Phe Glu Gly Arg Gln Arg

2075 2080 2085

Glu Arg Phe Asp Val Gly Pro Lys Glu Lys Pro Leu Glu Glu Pro

2090 2095 2100

Asp Ala Gln Gly Arg Ala Ser Glu Asp Arg Arg Arg Glu Arg Glu

2105 2110 2115

Arg Gly Arg Asn Trp Ser Arg Glu Arg Asp Trp Asp Arg Pro Arg

2120 2125 2130

Glu Trp Asp Arg His Arg Asp Lys Asp Ser Ser Arg Asp Trp Asp

2135 2140 2145

Arg Asn Arg Glu Arg Ser Ala Asn Arg Asp Arg Glu Arg Glu Ala

2150 2155 2160

Asp Arg Gly Lys Glu Trp Asp Arg Ser Arg Glu Arg Ser Arg Asn

2165 2170 2175

Arg Glu Arg Glu Arg Asp Arg Arg Arg Asp Arg Asp Arg Ser Arg

2180 2185 2190

Ser Arg Glu Arg Asp Arg Asp Lys Ala Arg Asp Arg Glu Arg Gly

2195 2200 2205

Arg Asp Arg Lys Asp Arg Ser Lys Ser Lys Glu Ser Ala Arg Asp

2210 2215 2220

Pro Lys Pro Glu Ala Ser Arg Ala Ser Asp Ala Gly Thr Ala Ser

2225 2230 2235

Gln Ala

2240

<210> 3

<211> 275

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 3

Met Asp Asp Lys Gly Asp Pro Ser Asn Glu Glu Ala Pro Lys Ala Ile

1 5 10 15

Lys Pro Thr Ser Lys Glu Phe Arg Lys Thr Trp Gly Phe Arg Arg Thr

20 25 30

Thr Ile Ala Lys Arg Glu Gly Ala Gly Asp Ala Glu Ala Asp Pro Leu

35 40 45

Glu Pro Pro Pro Pro Gln Gln Gln Leu Gly Leu Ser Leu Arg Arg Ser

50 55 60

Gly Arg Gln Pro Lys Arg Thr Glu Arg Val Glu Gln Phe Leu Thr Ile

65 70 75 80

Ala Arg Arg Arg Gly Arg Arg Ser Met Pro Val Ser Leu Glu Asp Ser

85 90 95

Gly Glu Pro Thr Ser Cys Pro Ala Thr Asp Ala Glu Thr Ala Ser Glu

100 105 110

Gly Ser Val Glu Ser Ala Ser Glu Thr Arg Ser Gly Pro Gln Ser Ala

115 120 125

Ser Thr Ala Val Lys Glu Arg Pro Ala Ser Ser Glu Lys Val Lys Gly

130 135 140

Gly Asp Asp His Asp Asp Thr Ser Asp Ser Asp Ser Asp Gly Leu Thr

145 150 155 160

Leu Lys Glu Leu Gln Asn Arg Leu Arg Arg Lys Arg Glu Gln Glu Pro

165 170 175

Thr Glu Arg Pro Leu Lys Gly Ile Gln Ser Arg Leu Arg Lys Lys Arg

180 185 190

Arg Glu Glu Gly Pro Ala Glu Thr Val Gly Ser Glu Ala Ser Asp Thr

195 200 205

Val Glu Gly Val Leu Pro Ser Lys Gln Glu Pro Glu Asn Asp Gln Gly

210 215 220

Val Val Ser Gln Ala Gly Lys Asp Asp Arg Glu Ser Lys Leu Glu Gly

225 230 235 240

Lys Ala Ala Gln Asp Ile Lys Asp Glu Glu Pro Gly Asp Leu Gly Arg

245 250 255

Pro Lys Pro Glu Cys Glu Gly Tyr Asp Pro Asn Ala Leu Tyr Cys Ile

260 265 270

Cys Arg Gln

275

<210> 4

<211> 18

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 4

Ala Met Ala Ala Ser Lys Lys Thr Ala Pro Pro Gly Ser Ala Val Gly

1 5 10 15

Lys Gln

<210> 5

<211> 5072

<212> DNA

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 5

ctcctcgtct ccgccgctag tctccagctc caaaatggcg gctgccactg tggggcttct 60

gccggccggt agtccctggc gctgctgacc cagcatcggc ttttctacgt cttgaacctg 120

gattcgccta ggggttggga agggctgtgg acggcgttgg gggaggcctg acgagattaa 180

taaagaactc ttcagaattc ctggtgtttc atcatatata cgactaagat atcaactctt 240

ctagcttgct gtttctggac caaaaaaaat gacgtctatt atcaaattaa ctaccctttc 300

tggggtccaa gaagaatctg ccctttgcta tcttctccaa gttgatgagt ttagattttt 360

attggactgt ggctgggatg agcacttttc tatggatatt attgattccc tgaggaagca 420

tgttcaccag attgatgcag tgctgttgtc tcaccctgat cctctccacc ttggtgccct 480

cccgtatgct gtcggaaagt tgggtctgaa ctgtgctatc tatgcaacca ttcctgttta 540

taaaatggga cagatgttca tgtatgatct ttatcagtct cgacacaata cagaagattt 600

tacactcttt acattagatg atgtggatgc agcctttgat aaaatacagc agctaaaatt 660

ctctcagatt gtgaatttga aaggtaaagg acatggcctg tctatcacac ctctgccagc 720

tggtcatatg ataggtggaa caatatggaa aatagtcaaa gatggagaag aagaaattgt 780

ttatgcagtt gacttcaacc acaagaggga gatccattta aatggatgtt ccctggaaat 840

gctaagcagg ccttccctac ttatcacaga ttcattcaat gctacatatg tacagcctag 900

aagaaaacag agagatgagc agcttctgac aaatgtcctg gaaacacttc gaggtgatgg 960

aaatgtgtta atagcagtgg acacagcagg cagagttttg gaacttgctc aacttcttga 1020

tcagatttgg aggactaaag atgcaggatt gggtgtttac tcattggcac tcctaaataa 1080

tgtcagttac aatgtggtgg agttttctaa gtcccaggta gaatggatga gtgataaatt 1140

gatgagatgt tttgaagaca aaagaaataa tccgtttcag tttcgccatc tctctttatg 1200

tcatggtctt tctgacttgg cccgtgtacc tagccctaaa gttgtacttg ccagccaacc 1260

tgacctggaa tgcggatttt caagggatct ctttattcag tggtgtcagg accctaaaaa 1320

ctcaatcatt ctaacctaca gaactactcc tgggacttta gcacgtttcc taattgataa 1380

tccttctgaa aaaattacag aaatagagtt gaggaaacgt gtgaagcttg aagggaaaga 1440

acttgaagaa tacttggaaa aagagaaact aaagaaagaa gctgccaaaa agcttgagca 1500

gtcaaaagag gcagatatag attccagtga tgagagtgat attgaggaag atattgacca 1560

gccatcagct cataagacga agcatgactt gatgatgaaa ggtgaaggca gtcgtaaagg 1620

aagttttttc aaacaggcaa aaaagtccta tcctatgttt cctgccccag aagaaagaat 1680

taaatgggat gaatatggag agattatcaa accagaggat ttcttagtgc cagagcttca 1740

agctactgaa gaagaaaaaa gcaaattaga atctggtttg acaaatggag atgaacctat 1800

ggatcaggat ttatctgatg ttcctactaa atgtatttct acaacagagt ctattgaaat 1860

aaaagcccgg gttacctaca tagactatga aggacgctct gatggggatt ccattaaaaa 1920

aatcattaat cagatgaaac cacgacagtt gatcatcgtc catggcccac cagaggccag 1980

tcaagatctg gcagagtgct gtcgcgcctt tggtgggaaa gatattaaag tgtacatgcc 2040

aaagctacat gaaacagttg atgccactag tgaaactcac atctaccagg tgaggttaaa 2100

agactcactt gtcagctctc ttcagttttg taaggcaaaa gatgctgaat tagcttggat 2160

agatggtgtc ttagatatga gagtttccaa agtggacaca ggggttattt tagaagaagg 2220

agaactaaag gatgatggag aagactcaga gatgcaagtg gaagctccct cagattctag 2280

cgttatagca caacaaaagg ccatgaaaag tctgttcgga gatgatgaaa aagaaacagg 2340

tgaagaaagt gagatcattc ctactttgga acccttgcca cctcatgagg ttcctggaca 2400

tcagtcagtt tttatgaatg aaccaaggct gtcagacttc aagcaagttc tcttacggga 2460

ggggattcaa gctgaatttg taggaggtgt acttgtttgc aacaatcaag tagcagtccg 2520

cagaacggaa actggacgca ttggattaga aggctgcctt tgtcaagatt tttataggat 2580

aagagacctt ttatatgaac aatatgccat tgtataaagg acatgatgtc aagaagtatc 2640

tgcttgacct ttctaagaaa aagggattct tatcttactc tgagcttttg atgttttgtt 2700

ttgtaacata caaaaagaat ctgccagaaa aacttacatg tatcagattt ttaaaaatat 2760

aaatagagaa cattttgcaa atgctcaaat gagcattcta tcttttggct ttcagagtga 2820

tagagctcct aacaggtgta caggcccaag agttgaaggt gattggtttt ctttacagac 2880

tccttgttct ctagaagggc tttttacttg aataaaacaa tgcaacttag caaaccaatt 2940

tatggcctta gagaaacatt tttgcatgag ttcttacaaa ctgtttgtta tattttctgg 3000

aatgataagt gagaattatt tagaaaagac atgctccaaa aaaaaaacaa aactgataaa 3060

acagtttttc gaaacttact tttaaaagca tacgtgctat gactctctcc agtttgaata 3120

tgcaattgtt ttcacaggca ggatgtctgt tttctgcctg tatttcccag tgatttactc 3180

tagggtaagg tagtacacat ttggttcaga aattaatttt tatttctcct atatcttgtt 3240

ttatcaagat tttgttgtgg catttcaatg taaattataa caccatcatt tgagtataca 3300

taattcaaaa gaactacttg atgcagtata gtcttaaggg ttctgcatac attttagaaa 3360

catcttagcc gtaagttagg tcctgtgtta aactgtttag tgctctgttt ttaagaaaac 3420

aaatgttgaa cctcacactt ttatgtggtg acagtgtaat ttaattaaaa ggtgtaaatg 3480

ttttcatctc ttaggcttgc tgtctcctaa ggtcacccaa gcagtggttg gattttatac 3540

acattactac taaaataata ctgaagttgg ataaggttat cctttctgta tttgcgtctt 3600

tcttgtgact aaccaccctg atatagtatt aaccactgtg ttcaagagta aaaacaatat 3660

atgcaatttt cattgaactt aaagagtgaa aaccatgtaa actattgaaa ctattgtaat 3720

ccattaatgc ttttttagaa tggcagacct tgatgtttat ttctcaaatg gttaagccct 3780

cttctttact cttaattttt ttttgagaca gagtcaccca ggctggagtg cagtggtgag 3840

attttggctc actataacct cttcctccag ggttcaagtg attctcccac ctcagcctcc 3900

caagtagctg ggactacggg cacatgccac tgcacctggc taatttttat atttttggta 3960

gagacagggt ttcaccatgt tggccaggct ggtctcaaac tcctgacctc aagcgatcca 4020

cccacctagg cctcccaaag tgctgggatt acaggcatga atcaccacaa ctagcctacc 4080

cttagatttt tggaaggatc gatcttattt aactatgtgt ggaacaaccc agtaatatca 4140

gactcgaatt actatttcat tctatttcaa atgcttataa agctactatt gtagattata 4200

gtgttaatgc aaagtttaca gacttttgat atggaaaacc agataaaaca atgttacaaa 4260

aggcaaatat aaagagtatg ttttcttttt agtgctttgg aaaaatttca cttaaactct 4320

tattactgta tagattaagc cctataatgc tatttatatt ccaggggaac gaaaatctga 4380

atttgtttta tgatttaaag catctggttt gcatattgta ttgtaatact gatacagttt 4440

ggctgtgtcc ccaccaaatt gaattgtgtt aatagttccc ataatcccta cgtgttgtgg 4500

gagggaccca gtgggcagta atttaatcat ggtggtggtt accctcatgc tgttcttgtg 4560

atggtgagtt ctcatgagat ctgatgggtg tttttttttg ttttgttttt tgttttttga 4620

gatggagttt tgctcttgtt gcccagactg gagtgcaatg gcacacgatc tcggctcacc 4680

gcaacctctg cctcctgggt tcaagcgatt ctcctgcctc agcatctcga gtagctggga 4740

ttacaggcat gcaccaccac gcccagctaa ttttgtattt ttagtagaga cggggtttct 4800

ccatgttggt taggctggcc tcaaactccc gacctcaggt gatccgcccg cctgggcctc 4860

ccaaagtgct gggattacag gcgtgagcca ctgctcctgg cccaagatct gatggttttg 4920

taagggaatt ttcccccttt gcttggcact tcttcctgct gccatgtgaa gaaggatgtg 4980

tttgcttccc cttccaccat gattgtaagt ttcatgaggc ctccccagcc tgtgggactg 5040

tgagtcaatt aaacgtgttt actttataaa tt 5072

<210> 6

<211> 782

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 6

Met Thr Ser Ile Ile Lys Leu Thr Thr Leu Ser Gly Val Gln Glu Glu

1 5 10 15

Ser Ala Leu Cys Tyr Leu Leu Gln Val Asp Glu Phe Arg Phe Leu Leu

20 25 30

Asp Cys Gly Trp Asp Glu His Phe Ser Met Asp Ile Ile Asp Ser Leu

35 40 45

Arg Lys His Val His Gln Ile Asp Ala Val Leu Leu Ser His Pro Asp

50 55 60

Pro Leu His Leu Gly Ala Leu Pro Tyr Ala Val Gly Lys Leu Gly Leu

65 70 75 80

Asn Cys Ala Ile Tyr Ala Thr Ile Pro Val Tyr Lys Met Gly Gln Met

85 90 95

Phe Met Tyr Asp Leu Tyr Gln Ser Arg His Asn Thr Glu Asp Phe Thr

100 105 110

Leu Phe Thr Leu Asp Asp Val Asp Ala Ala Phe Asp Lys Ile Gln Gln

115 120 125

Leu Lys Phe Ser Gln Ile Val Asn Leu Lys Gly Lys Gly His Gly Leu

130 135 140

Ser Ile Thr Pro Leu Pro Ala Gly His Met Ile Gly Gly Thr Ile Trp

145 150 155 160

Lys Ile Val Lys Asp Gly Glu Glu Glu Ile Val Tyr Ala Val Asp Phe

165 170 175

Asn His Lys Arg Glu Ile His Leu Asn Gly Cys Ser Leu Glu Met Leu

180 185 190

Ser Arg Pro Ser Leu Leu Ile Thr Asp Ser Phe Asn Ala Thr Tyr Val

195 200 205

Gln Pro Arg Arg Lys Gln Arg Asp Glu Gln Leu Leu Thr Asn Val Leu

210 215 220

Glu Thr Leu Arg Gly Asp Gly Asn Val Leu Ile Ala Val Asp Thr Ala

225 230 235 240

Gly Arg Val Leu Glu Leu Ala Gln Leu Leu Asp Gln Ile Trp Arg Thr

245 250 255

Lys Asp Ala Gly Leu Gly Val Tyr Ser Leu Ala Leu Leu Asn Asn Val

260 265 270

Ser Tyr Asn Val Val Glu Phe Ser Lys Ser Gln Val Glu Trp Met Ser

275 280 285

Asp Lys Leu Met Arg Cys Phe Glu Asp Lys Arg Asn Asn Pro Phe Gln

290 295 300

Phe Arg His Leu Ser Leu Cys His Gly Leu Ser Asp Leu Ala Arg Val

305 310 315 320

Pro Ser Pro Lys Val Val Leu Ala Ser Gln Pro Asp Leu Glu Cys Gly

325 330 335

Phe Ser Arg Asp Leu Phe Ile Gln Trp Cys Gln Asp Pro Lys Asn Ser

340 345 350

Ile Ile Leu Thr Tyr Arg Thr Thr Pro Gly Thr Leu Ala Arg Phe Leu

355 360 365

Ile Asp Asn Pro Ser Glu Lys Ile Thr Glu Ile Glu Leu Arg Lys Arg

370 375 380

Val Lys Leu Glu Gly Lys Glu Leu Glu Glu Tyr Leu Glu Lys Glu Lys

385 390 395 400

Leu Lys Lys Glu Ala Ala Lys Lys Leu Glu Gln Ser Lys Glu Ala Asp

405 410 415

Ile Asp Ser Ser Asp Glu Ser Asp Ile Glu Glu Asp Ile Asp Gln Pro

420 425 430

Ser Ala His Lys Thr Lys His Asp Leu Met Met Lys Gly Glu Gly Ser

435 440 445

Arg Lys Gly Ser Phe Phe Lys Gln Ala Lys Lys Ser Tyr Pro Met Phe

450 455 460

Pro Ala Pro Glu Glu Arg Ile Lys Trp Asp Glu Tyr Gly Glu Ile Ile

465 470 475 480

Lys Pro Glu Asp Phe Leu Val Pro Glu Leu Gln Ala Thr Glu Glu Glu

485 490 495

Lys Ser Lys Leu Glu Ser Gly Leu Thr Asn Gly Asp Glu Pro Met Asp

500 505 510

Gln Asp Leu Ser Asp Val Pro Thr Lys Cys Ile Ser Thr Thr Glu Ser

515 520 525

Ile Glu Ile Lys Ala Arg Val Thr Tyr Ile Asp Tyr Glu Gly Arg Ser

530 535 540

Asp Gly Asp Ser Ile Lys Lys Ile Ile Asn Gln Met Lys Pro Arg Gln

545 550 555 560

Leu Ile Ile Val His Gly Pro Pro Glu Ala Ser Gln Asp Leu Ala Glu

565 570 575

Cys Cys Arg Ala Phe Gly Gly Lys Asp Ile Lys Val Tyr Met Pro Lys

580 585 590

Leu His Glu Thr Val Asp Ala Thr Ser Glu Thr His Ile Tyr Gln Val

595 600 605

Arg Leu Lys Asp Ser Leu Val Ser Ser Leu Gln Phe Cys Lys Ala Lys

610 615 620

Asp Ala Glu Leu Ala Trp Ile Asp Gly Val Leu Asp Met Arg Val Ser

625 630 635 640

Lys Val Asp Thr Gly Val Ile Leu Glu Glu Gly Glu Leu Lys Asp Asp

645 650 655

Gly Glu Asp Ser Glu Met Gln Val Glu Ala Pro Ser Asp Ser Ser Val

660 665 670

Ile Ala Gln Gln Lys Ala Met Lys Ser Leu Phe Gly Asp Asp Glu Lys

675 680 685

Glu Thr Gly Glu Glu Ser Glu Ile Ile Pro Thr Leu Glu Pro Leu Pro

690 695 700

Pro His Glu Val Pro Gly His Gln Ser Val Phe Met Asn Glu Pro Arg

705 710 715 720

Leu Ser Asp Phe Lys Gln Val Leu Leu Arg Glu Gly Ile Gln Ala Glu

725 730 735

Phe Val Gly Gly Val Leu Val Cys Asn Asn Gln Val Ala Val Arg Arg

740 745 750

Thr Glu Thr Gly Arg Ile Gly Leu Glu Gly Cys Leu Cys Gln Asp Phe

755 760 765

Tyr Arg Ile Arg Asp Leu Leu Tyr Glu Gln Tyr Ala Ile Val

770 775 780

<210> 7

<211> 15

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 7

Gln Val Arg Leu Lys Asp Ser Leu Val Ser Ser Leu Gln Phe Cys

1 5 10 15

Claims

1.关于脑梗塞的发病的数据取得方法，其特征在于，对从生物体分离的体液样品中的下列抗体水平进行测定：

针对SEQ ID NO:2的氨基酸序列所示的DIDO1蛋白质或其一部分的抗体、和/或

针对SEQ ID NO:6的氨基酸序列所示的CPSF2蛋白质或其一部分的抗体。

2.权利要求1所述的关于脑梗塞的发病的数据取得方法，其特征在于，通过从生物体分离的体液样品中的针对DIDO1蛋白质或其一部分的抗体水平的测定的关于脑梗塞的发病的数据取得是以慢性肾脏病作为基础疾病的关于脑梗塞的发病的数据取得。

3.权利要求1或2所述的关于脑梗塞的发病的数据取得方法，其特征在于，通过从生物体分离的体液样品中的针对CPSF2蛋白质或其一部分的抗体水平的测定的关于脑梗塞的发病的数据取得是以糖尿病作为基础疾病的关于脑梗塞的发病的数据取得。

4.权利要求1～3之任一项所述的数据取得方法，其特征在于，

SEQ ID NO:2的氨基酸序列的一部分中的氨基酸残基的个数是7～2240个，

SEQ ID NO:6的氨基酸序列的一部分中的氨基酸残基的个数是7～782个。

5.权利要求1～3之任一项所述的数据取得方法，其特征在于，SEQ ID NO:2或SEQ IDNO:6的氨基酸序列的一部分中的氨基酸残基的个数是7～30个。

6.权利要求1～5之任一项所述的数据取得方法，其特征在于，SEQ ID NO:2的氨基酸序列的一部分中的氨基酸残基

含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的全部或一部分，或者

是SEQ ID NO:3的氨基酸序列的全部或一部分。

7.权利要求6所述的数据取得方法，其特征在于，SEQ ID NO:2的氨基酸序列的一部分是SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列。

8.权利要求5所述的数据取得方法，其特征在于，SEQ ID NO:6的氨基酸序列的一部分是SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列。

9.权利要求1～8之任一项所述的数据取得方法，其特征在于，SEQ ID NO:2的氨基酸序列或其一部分、和/或，SEQ ID NO:6的氨基酸序列或其一部分缺失、取代或追加10％以下的个数(小数点之后的部分舍去)的氨基酸残基。

10.权利要求1～9之任一项所述的数据取得方法，其特征在于，从生物体分离的体液样品是血液样品。

11.权利要求10所述的数据取得方法，其特征在于，血液样品是血清样品或血浆样品。

12.权利要求1～11之任一项所述的数据取得方法，其特征在于，抗体水平测定法是ELISA法、AlphaLISA法、间接荧光抗体法、蛋白印迹法(免疫印迹法)、比浊法、散射比浊法、乳胶凝集比浊法、或者，CLEIA法。

13.数据取得用试剂盒，其用于进行权利要求1～12之任一项所述的数据取得方法。