CN111603481A

CN111603481A - 治疗发炎性疾病的方法

Info

Publication number: CN111603481A
Application number: CN202010115716.1A
Authority: CN
Inventors: 王学孝; 叶宏一; 张恒雄
Original assignee: Goldred Nanobiotech Co Ltd
Current assignee: Goldred Nanobiotech Co Ltd
Priority date: 2019-02-25
Filing date: 2020-02-25
Publication date: 2020-09-01
Also published as: EP3698787A1; US11285172B2; TWI742540B; TW202031251A; US20200268792A1

Abstract

本公开内容提供一种用于治疗个体的发炎性疾病的方法，包含对该个体施予一有效量的粒径为约0.1至20nm的二氢硫辛酸(dihydrolipoic acid，DHLA)涂覆的金纳米团簇。本公开内容还提供一种用于在培养细胞中减少促发炎分子的表达的方法，包含将培养细胞与所述DHLA涂覆的金纳米团簇接触。本公开内容还额外提供包含DHLA涂覆的金纳米团簇的药学组合物，其可用于治疗个体的发炎性疾病。

Description

治疗发炎性疾病的方法

【技术领域】

相关申请的的交互参照

本发明主张美国专利临时申请于2019年2月25日申请的第62/809,762的优先权，该申请案的完整内容纳入本发明专利说明书的一部分以供参照。

本公开内容是关于治疗发炎性疾病的相关领域。具体地，本公开内容是关于一种通过二氢硫辛酸(dihydrolipoic acid，DHLA)涂覆的金纳米团簇，用以治疗发炎性疾病的方法，其可下调(downregulate)发炎相关因子的表达量。

【背景技术】

心血管疾病(cardiovascular disease，CCD)是涉及心脏或血管数种关联病理的总称，且为全球性死亡主因。动脉粥样硬化(atherosclerosis)是当斑块堆积在动脉壁上所形成的疾病，其为造成某些心血管疾病的潜在机制，例如冠状动脉心脏病(coronary heartdisease，CHD)、脑血管疾病(cerebrovascular disease)、周边动脉疾病(peripheralarterial disease，PAD)以及中风。

近期研究表明，发炎在所有的动脉粥样硬化阶段均扮演重要角色。通常，在动脉腔表面的内皮细胞促发炎分子的表达会将发炎细胞从循环吸引到血管壁并启动后续发炎反应。相关的发炎因子及免疫反应可协同地加速动脉重构，以导致内皮功能异常并促使发生动脉粥样硬化。临床上广泛使用非类固醇抗发炎药物来减轻动脉粥样硬化，然而该药物在治疗心血管疾病的结果并不一致，遑论近年来被报导的诸多副作用。

鉴于上述，相关领域亟需一种有效降低发炎性分子及/或发炎细胞的表达及/或功能，以治疗各种发炎性疾病(例如：CCD)的改良方法。

【发明内容】

为了给读者提供基本的理解，以下提供本公开内容的简要发明内容。此发明内容不是本公开内容的广泛概述，同时非用来识别本发明的关键/必需元件或勾勒本发明的范围。其唯一目的是以简化的概念形式呈现本公开内容的一些概念，以作为呈现于后文中更详细描述的序言。

如本文具体实施及广泛描述地，本公开内容的一个方面是关于一种用以对个体治疗发炎性疾病的方法。前述方法包含对该个体施予一有效量的二氢硫辛酸(DHLA)涂覆的金纳米团簇。所述DHLA涂覆的金纳米团簇是由复数个金纳米(奈米)粒子所形成的一金纳米团簇以及涂覆在该些金纳米粒子上的复数个DHLA所组成。根据本公开内容的实施方式，DHLA涂覆的金纳米团簇降低个体中血管内皮生长因子1(vascular endothelial growthfactor-1，VEGF-1)、细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1)、血管细胞黏附蛋白-1(vascular cell adhesion protein-1，VACM-1)、P-选择素(P-selectin)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(plasminogen activator inhibitor-1，PAI-1，血浆蛋白原活化因子抑制物第一型)、冯威里氏因子(von Willebrand factor，vWF，血管性血友病因子)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha，TNF-α)、白介素-8(interleukin-8，IL-8)及/或白介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)的表达量。

本公开内容也关于一种DHLA涂覆的金纳米团簇用于制备一药物或一药学组合物的用途，用以治疗及/或预防发炎性疾病。

根据本公开内容一些实施方式，DHLA涂覆的金纳米团簇的直径约为0.1至20nm；较佳地，约1至2nm的直径。

可以本发明的方法、药物或药学组合物治疗的发炎性疾病的非限制性实例包含：心血管疾病、炎症性肠病、器官移植排斥、狼疮、自体免疫疾病、辐射诱导损伤、癌症、烧伤、创伤、风湿性疾病、肾脏疾病、过敏疾病、传染病、眼科疾病、皮肤疾病、胃肠病、肝疾病、脑水肿、类肉瘤病、血小板减少症以及脊髓损伤。根据本公开内容一具体实施例，发炎性疾病是心血管疾病。

通常，心血管疾病可以是心绞痛(angina pectoris)、动脉粥状瘤(atheroma)、动脉粥样硬化(atherosclerosis)、动脉硬化(arteriosclerosis)、郁血性心衰竭(congestive heart failure，充血性心衰竭)、冠状动脉心脏病(coronary heartdisease)、心肌病(cardiomyopathy)、心肌梗塞(myocardial infarction)、中风、缺血性病症(ischemic condition)、缺血性心肌病(ischemic cardiomyopathy)、开放性动脉导管(patent ductus arteriosus)、高血压、肺脏高血压(pulmonary hypertension，肺动脉高压)、周边动脉疾病、冠状动脉疾病、冠状动脉痉挛或心包炎(pericarditis)任一种。

较佳地，所述个体是人类。

在一些实施方式中，所述有效量的DHLA涂覆的金纳米团簇为每日约1至15nM；较佳为每日约3至12nM；更佳为每日约6至10nM。

在一些实施例中，本发明的方法更包含在施予DHLA涂覆的金纳米团簇的同时或之前，施予一胞吞作用抑制剂。

本公开内容的另一方面是关于降低培养细胞中促发炎分子的表达的方法。前述方法包含将培养细胞与约1至1000nM的浓度的二氢硫辛酸(DHLA)涂覆的金纳米团簇接触。所述DHLA涂覆的金纳米团簇是由复数个金纳米粒子所形成的一金纳米团簇以及涂覆在该些金纳米粒子上的复数个DHLA所组成。根据本公开内容的实施方式，促发炎分子可选自由血管内皮生长因子1(VEGF-1)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、血管细胞黏附蛋白-1(vascularcell adhesion protein-1，VACM-1)、P-选择素(P-selectin)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(plasminogen activator inhibitor-1，PAI-1)、冯威里氏因子(von Willebrand factor，vWF)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha，TNF-α)、白介素-8(interleukin-8，IL-8)及白介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)所组成的群组。

根据本公开内容的实施方式、DHLA涂覆的金纳米团簇的直径约为0.1至20nm；较佳地是约1至2nm的直径。

培养细胞可以是人类主动脉内皮细胞(human aortic endothelial cell，HAEC)、人类上皮细胞、人类冠状动脉内皮细胞(human coronary artery endothelial cell，HCAEC)或人类内皮前驱细胞(human endothelial progenitor cell，HEPC)。

培养细胞也可非必要地或选择性地以一胞吞作用抑制剂进一步处理。

藉由前述特征，在特定心血管细胞株通过网格蛋白介导的胞吞作用中，本发明DHLA涂覆的金纳米团簇具有高度生物兼容性。此外，由于DHLA涂覆的金纳米团簇的长期培养可降低某些促发炎分子(例如血管生成因子、黏附性分子、凝血因子以及甚至是发炎细胞介素)的表达，因此通过施予DHLA涂覆的金纳米团簇的治疗具有抗发炎、抗动脉血栓生成以及抗动脉粥样硬化的效果。

在参阅下文实施方式后，本发明所属技术领域中具有普通知识者当可轻易了解本发明的基本精神及其他发明目的，以及本发明所采用的技术手段与实施方式。

【附图说明】

为让本发明的上述与其他目的、特征、优点与实施例能更明显易懂，所附图式的说明如下：

图1A至图1D绘示胞吞作用抑制剂对DHLA涂覆的金纳米团簇(图式中简称为FANC)内化作用的影响。在经抑制剂预处理的特定培养基后，以含有FANC的培养基替换该些培养基并额外培养80分钟，接着进行流式细胞测量分析(图1A至图1C)。注意盐酸氯丙嗪仅可在低血清或无血清补充剂的培养环境下以剂量依赖性方式降低FANC的内化作用。图1D则呈现经胞吞作用抑制剂处理后，摄取FANC的代表性照片。Chlor表示盐酸氯丙嗪。*：P<0.05；**：P<0.01，相较于纯FANC控制组。比例尺：10μm。

图2A至图2B绘示长时间以FANC处理的HAEC的mRNA表达谱。图2A呈现21天的期间；图2B则呈现28天的期间。数值是来自3个独立实验的三次重复所测定的平均值±SD。*：P<0.05，相较于控制组。

图3A至图3B分别绘示短时间(3日)以FANC处理，接着以100ng/ml的脂多糖隔夜处理(LPS，取自于大肠杆菌菌株：0111:B4)活化的HAEC的黏附分子mRNA表达量，其中图3A为ICAM-1，图3B是VCAM-1。数值是来自3个独立实验的三次重复所测定的平均值±SD。**：P<0.01；***：P<0.001，与控制组相比。

图4A至图4B绘示HAEC与THP-1细胞共培养的细胞黏附测定的结果。图4A：THP-1细胞贴附于HAEC的代表性共轭焦影像。图4B为各实验组的定量结果。数值是来自3个独立实验的三次重复所测定的平均值±SD。*：P<0.05。

图5A至图5C绘示经3日FANC处理，接着以LPS(100ng/ml)处理隔夜的HAEC中，发炎性细胞介素：IL-1β(图5A)、IL-8(图5B)以及TNF-α(图5C)的mRNA表达量结果。数值是来自3个独立实验的三次重复所测定的平均值±SD。*：P<0.05；**：P<0.01；***：P<0.001。

图6绘示FANC对小鼠的发炎作用的减轻效果。小鼠分别以腹膜内注射PBS、FANC(100nM)、LPS(10mg/Kg)以及FANC+LPS两小时。每组N＝3。

【具体实施方式】

为了使本公开内容的叙述更加详尽与完备，下文针对了本发明的实施方面与具体实施例提出了说明性的描述；但这并非实施或运用本发明具体实施例的唯一形式。实施方式中涵盖了多个具体实施例的特征以及用以建构与操作这些具体实施例的方法步骤与其顺序。然而，亦可利用其他具体实施例来达成相同或均等的功能与步骤顺序。

I.定义

为了便于说明，此处统整性地说明本说明书、实施例以及所附的申请专利范围中所记载的特定术语。除非本说明书另有定义，此处所用的科学与技术词汇的含义与本发明所属技术领域中具有普通知识者所理解与惯用的意义相同。此外，在不和上下文冲突的情形下，本说明书所用的单数名词涵盖该名词的复数型；而所用的复数名词时亦涵盖该名词的单数型。具体而言，除非上下文另有明确说明，本文和后附的申请专利范围所使用的单数形式“一”(a及an)包含复数形式。此外，在本说明书与申请专利范围中，“至少一”(at leastone)与“一或更多”(one or more)等表述方式的意义相同，两者都代表包含了一、二、三或更多。

虽然用以界定本发明较广范围的数值范围与参数皆是约略的数值，此处已尽可能精确地呈现具体实施例中的相关数值。然而，任何数值本质上不可避免地含有因个别测试方法所致的标准偏差。在此处，“约(about)”通常是指实际数值在一特定数值或范围的正负10％、5％、1％或0.5％之内。或者是，“约”一词代表实际数值落在平均值的可接受标准误差之内，视本发明所属技术领域中具有普通知识者的考量而定。除了实验例之外，或除非另有明确的说明，当可理解此处所用的所有范围、数量、数值与百分比(例如用以描述材料用量、时间长短、温度、操作条件、数量比例及其他相似者)均经过“约”的修饰。因此，除非有相反的说明，本说明书与附随申请专利范围所公开的数值参数皆为约略的数值，且可视需求而更动。至少应将这些数值参数理解为所指出的有效位数与套用一般进位法所得到的数值。

本文使用的“一有效量”一词是指足以产生预期反应的金纳米团簇的量。对于体外应用，例如在培养细胞中降低发炎反应时，具体的有效量可随着各因素变化，例如与金纳米团簇接触的特定细胞种类或是该细胞经过继代的次数。举例来说，可以将有效量表示成施用的金纳米团簇浓度、金纳米团簇的总质量(例如以克、毫克或微克来表示；以摩尔、毫摩尔、微摩尔或纳摩尔来表示)、或是表示成金纳米团簇的总质量相对于培养基总体积的比例(例如：每公斤培养基多少毫克(mg/kg)或是每公升(L)培养基多少纳摩尔(nM))。较佳地，以约1至1,000nM的浓度施用金纳米团簇；更佳为10至500nM的浓度；更佳为30至150nM的浓度。至于体内的应用，例如降低个体的发炎反应及/或治疗个体的发炎性疾病，具体有效量可随各种因素变化，诸如治疗的特定病症、个体的生理状况(例如该个体的体重、年纪或性别)、所治疗哺乳类或动物种类、治疗时间、并行疗程的性质(如果有的话)、以及使用的具体制剂等。较佳地，可用于一个体(例如：人类)的有效量金纳米团簇约为1至15nM的纳摩尔浓度；较佳为约3至12nM的纳摩尔浓度；而更佳为6至10nM的纳摩尔浓度。

本文使用的“发炎性疾病(inflammatory disease)”、“发炎性病症(inflammatorydisorder)”或“发炎状况(inflammatory condition)”指称任何以发炎反应为表征的疾病，其可被多种包含辐射、机械、化学、感染及免疫性刺激等引发事件所诱导。发炎性病症可通过临床和病理特征、以及/或是由组织及/或细胞分泌的本领域习知发炎相关分子的表达来鉴定。发炎性疾病可指有发炎状况存在的任意疾病。发炎性疾病的实例包含但不限于：心血管疾病、关节炎、炎症性肠病、气喘、干癣、器官移植排斥、辐射诱导损伤、癌症、狼疮、烧伤、创伤、风湿性疾病、肾脏疾病、过敏疾病、传染病、眼科疾病、皮肤疾病、胃肠疾病、肝疾病、脑水肿、类肉瘤病、血小板减少症、脊髓损伤以及自体免疫疾病。

本文使用的“心血管疾病(cardiovascular disease)”或“心血管发炎相关疾病(cardiovascular inflammation-related disease)”术语是指心脏或血管(即动脉及静脉)的疾病或病症或其任何症状，特别包含发炎状况。所述疾病的实例包含但不限于：包含手术或其他创伤导致的急性及慢性心血管发炎、心血管疾病、心绞痛、动脉粥状瘤、动脉粥样硬化、动脉硬化、郁血性心衰竭、冠状动脉心脏病、心肌病、心肌梗塞、中风、缺血性病症、缺血性心肌病、高三酸甘油脂血症、高胆固醇血症、开放性动脉导管、高血压、心肌梗塞、肺脏高血压、周边动脉疾病、冠状动脉疾病、冠状动脉痉挛、心包炎、华格纳氏肉芽病、Takayasu氏动脉炎、川崎病、抗第八凝血因子自体免疫疾病(anti-factor VIIIautoimmune disease)、坏死性小血管血管炎(necrotizing small vessel vasculitis)、显微多血管炎(microscopic polyangiitis)以及Churg-Strauss综合征(Churg-Strausssyndrome)。

本文使用的“促发炎分子(pro-inflammatory molecules)”一词是指在器官及/或培养细胞株中促进发炎反应的分子。通常，促发炎分子包含生长因子、黏附分子、凝血因子以及发炎细胞介素。在许多实例中，黏附分子在内皮细胞壁上表达以刺激单核球浸润，藉此在发炎反应中扮演关键角色。另一方面，免疫系统的淋巴球可通过产生抗发炎分子来参与促发炎分子(例如：细胞介素)的调节。在具有抗发炎能力的物质或药剂的存在下，促发炎分子展现下调作用(down-regulation)。

本文使用的“胞吞作用抑制剂(endocytosis inhibitor)”一词是指不论介导胞吞作用的机制为何，可抑制胞吞路径的分子。胞吞作用通常包含可由网格蛋白介导的胞饮作用(pinocytosis)以及涉及内化经膨胀充满液体的胞内体的吞噬作用。所述胞吞作用抑制剂的实例包含但不限于：网格蛋白(clathrin)依赖性抑制剂，例如盐酸氯丙嗪(chlorpromazine hydrochloride)以及阿米洛利(amiloride)；以及非网格蛋白抑制剂，例如金雀异黄酮(genistein)以及菲律平(filipin)。

所述“凝血因子(coagulation factor)”指任何涉及凝血过程中的分子或蛋白质，通过该过程血液从液体变成胶体，最终形成一血凝块。

II.具体实施方式

本公开内容至少部分基于对DHLA涂覆的金纳米团簇可用于降低数种发炎相关分子表达的研究，以提出可预防及/或治疗发炎性疾病的潜在手段。

每一DHLA涂覆的金纳米团簇在结构上是由复数个金纳米粒子所形成的金纳米团簇以及涂覆在该些金纳米粒子上的复数个DHLA所组成。本公开内容使用的DHLA涂覆的金纳米团簇以及其生产过程是本领域具有普通知识者已知的(Lin et al.,ACS Nano 2009,3(2),pp 395-401)；因此为了简洁起见将不赘述细节。DHLA涂覆的金纳米团簇在激发波长约为420nm的条件下，可发射650nm的荧光，因此其发射波长是在红光至近红外光的范围内。每个DHLA涂覆的金纳米团簇具有0.1至20nm的粒径，较佳是1至15nm的粒径，更佳为1.3至3.4nm的粒径。前述本公开内容的金纳米团簇的直径是在干燥状态下，然而，如果用于本公开内容的金纳米团簇是水溶性或至少可分散于液体培养基及/或水中，则更好；由于可以与周边溶剂分子(例如水)耦合，因此本公开内容的金纳米团簇的流体动力学尺寸会明显大于干燥状态下的尺寸。在一特定实施方式中，金纳米团簇具有流体动力学粒径(hydrodynamicsize)相当于标准粒径的聚乙二醇(PEG)的1至30kDa(Lin et al.,ACS Nano 2009,3(2),pp395-401)。

根据一方面，DHLA涂覆的金纳米团簇可于培养细胞中降低至少一促发炎分子的表达量。在特定实施方式中，是将培养细胞与浓度为约1至1,000nM的DHLA涂覆的金纳米团簇接触一段时间，例如1至10小时，较佳是3至7小时，更佳是4至6小时。根据本公开内容的实施方式，可被本公开内容DHLA涂覆的金纳米团簇抑制的促发炎分子包含但不限于，生长因子、黏附分子以及凝血因子。

生长因子的非限制性实例包含血管内皮生长因子(VEGF)、纤维母细胞生长因子(fibroblast growth factor，FGF)、血小板衍生生长因子(platelet-derived growthfactor，PDGF)、肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor，HGF)、表皮生长因子(epidermal growth factor，EGF)、转化生长因子-α(transforming growth factor-α，TGF-α)、碱性及酸性纤维母细胞生长因子、结缔组织生长因子(connective tissue growthfactor，CTGF)及/或肝素-结合类EGF生长因子(Heparin-binding EGF-like growthfactor，HB-EGF)。在特定实施方式中，生长因子是VEGF。

黏附分子的实例包含但不限于：细胞间黏附分子1(intercellular adhesionmolecule 1，ICAM-1)、血管细胞黏附蛋白-1(vascular cell adhesion protein-1，VACM-1)、E-选择素(E-selectin)及/或P-选择素。在特定实施方式中，所述黏附分子选自由ICAM-1、VACM-1、及P-选择素所组成的群组。

凝血因子的实例包含但不限于：第一至第十三凝血因子(coagulation factors Ito XIII)、冯威里氏因子(vWF)、肝素第二辅因子(heparin cofactor II)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(plasminogen activator inhibitor-1，PAI-1，纤溶酶原激活物抑制剂1型)及/或纤溶酶原激活物抑制剂-2(plasminogen activator inhibitor-2，PAI2，纤溶酶原激活物抑制剂2型)。在特定实施方式中，凝血因子包含vWF及PAI-1。

在一些非必要性或替代实施方式中，DHLA涂覆的金纳米团簇也可降低发炎性细胞介素的表达。在一些实施方式中，所述发炎性细胞介素包含白介素-1家族(IL-1)、IL-12、及IL-18、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor，TNF)、干扰素(interferonγ，IFN-γ)及/或颗粒性白血球-巨噬细胞群落刺激因子在特定实施方式中，DHLA涂覆的金纳米团簇抑制IL-1家族及TNF家族的过表达。

可以本公开内容DHLA涂覆的金纳米团簇处理的培养细胞包含但不限于人类主动脉内皮细胞(HAEC)、人类上皮细胞、人类冠状动脉内皮细胞(HCAEC)以及人类内皮前驱细胞(HEPC)。在一些实施方式中，培养细胞是HAEC。

本公开内容的另一方面是关于DHLA涂覆的金纳米团簇于制备用以治疗一个体发炎性疾病的药物及/或药学组合物的用途。本公开内容的药学组合物或药物包含一有效量DHLA涂覆的金纳米团簇，还非必要性地包含一药学上可接受的赋形剂。合适的药学上可接受的赋形剂包含注射用水、0.9％盐水及/或5％葡萄糖溶液，但不限于此。

可以本公开内容的药物组合物或药物治疗的发炎性疾病的非限制性实例包含(但不限于)心血管疾病、炎症性肠病、器官移植排斥、狼疮、自体免疫疾病、辐射诱导损伤、癌症、烧伤、创伤、风湿性疾病、肾脏性疾病、过敏疾病、传染病、眼科疾病、皮肤疾病、胃肠疾病、肝疾病、脑水肿、类肉瘤病、血小板减少症以及脊髓损伤。

通常，心血管疾病可以是心绞痛(angina pectoris)、动脉粥状瘤(atheroma)、动脉粥样硬化(atherosclerosis)、动脉硬化(arteriosclerosis)、郁血性心衰竭(congestive heart failure)、冠状动脉心脏病(coronary heart disease)、心肌病(cardiomyopathy)、心肌梗塞(myocardial infarction)、中风、缺血性病症(ischemiccondition)、缺血性心肌病(ischemic cardiomyopathy)、开放性动脉导管(patent ductusarteriosus)、高血压、肺脏高血压(pulmonary hypertension)、周边动脉疾病、冠状动脉疾病、冠状动脉痉挛或心包炎(pericarditis)任一种。

本公开内容的药学组合物或药物可用于降低个体的促发炎分子(象是VEGF、ICAM-1、VACM-1、P-选择素、PAI-1及vWF)的表达，藉此可用于治疗发炎性疾病以及/或是改善或缓和与发炎性疾病相关的症状。本公开内容的药学组合物或所述药物还可额外或非必要性地降低发炎性细胞介素，例如IL-1家族及TNF家族的过表达。

在特定实施方式中，药学组合物包含一有效量的本公开内容DHLA涂覆的金纳米团簇。在特定实施方式中，有效量是一治疗有效量(例如，可有效治疗发炎反应及/或降低促发炎分子的表达的量)。在特定实施方式中，有效量是预防性有效量(例如，可有效预防亟需的个体产生发炎症状的量)。

可以任何已知药学方法来配制本发明药学组合物。为了实施本发明，本公开内容的DHLA涂覆金纳米团簇可制备成合适的制剂，例如锭剂、糖衣锭剂、丸剂、颗粒剂、气雾剂、糖浆剂、乳剂、悬浮剂、溶液剂、软膏剂、霜剂或凝胶剂或任何形式，特别是通过惰性、本质上无毒并且为药学上可接受的载体或溶剂来制造。依据欲施予治疗的病患个体、体型及/或生理状况，以及施予组成物的路径的不同，可调整本发明药学组合物中活性成分、药学上可接受的赋形剂，及/或任何其他成分的的相对剂量。所述组合物可包含介于重量百分比0.1至100之间的活性成分(例如：DHLA涂覆的金纳米团簇)。

在某些实施方式中，组合物是一药学组合物。在某些实施方式中，组合物是一营养组合物。在某些实施方式中，组合物是一保健食品。在一些实施方式中，本公开内容的组合物可以是保健食品或保健食品产物，其可为任何滋补人类及动物的液体及固体/半固体材料，以治疗治疗发炎性疾病以及/或是改善或缓和与发炎性疾病相关的症状。保健食品产物可为食品产物(例如：茶基底的饮料、果汁、软性饮料、咖啡、奶类、果冻、饼干、谷物、巧克力、营养棒、草药萃取物、乳制品(例如冰淇淋和优格))、食品/饮食补充品、或营养制剂。

通常是以剂量单位形式配制本发明的DHLA涂覆的金纳米团簇，以方便给药及使剂量具有一致性。然而，当可想见，医护人员可在合理的医学判断范围内，决定本公开内容所述的组合物的总每日用量。对特定个体或生物的特定治疗有效量将依不同因素而有所调整，包含欲治疗的疾病；疾病的严重程度；所使用特定活性成分的活性；使用的组成物；个体的年龄、体重、一般健康状况、性别及饮食习惯；给药时间、给药路径及活性成分的排出速度；治疗的持续时间；与活性成分合并或共同使用的药物；以及医药领域习知的其他因素。

本公开内容的另一方面是治疗一个体的发炎性疾病的方法。所述方法包含对一个体施予以一有效量的DHLA涂覆的金纳米团簇或是一包含前述DHLA涂覆的金纳米团簇的组合物。

在一些实施方式中，可以DHLA涂覆的金纳米团簇治疗的发炎性疾病包含但不限于：心血管疾病、炎症性肠病、器官移植排斥、狼疮、自体免疫疾病、辐射诱导损伤、癌症、烧伤、创伤、风湿性疾病、肾脏疾病、过敏疾病、传染病、眼科疾病、皮肤疾病、胃肠疾病、肝疾病、脑水肿、类肉瘤病、血小板减少症以及脊髓损伤。

在一些实施方式中，发炎性病症是与涉及发炎反应的心血管疾病的进程有关。所述心血关疾病的实例包含但不限于，心绞痛、动脉粥状瘤、动脉粥样硬化、动脉硬化、郁血性心衰竭、冠状心脏病、心肌病、心肌梗塞、中风、缺血性条件、缺血性心肌病、开放性动脉导管、高血压、肺脏高血压、周边动脉疾病、冠状动脉疾病、冠状动脉痉挛以及心包炎。

在其他实施方式中，施予DHLA涂覆的金纳米团簇可降低本文所述的发炎相关黏附分子(例如VEGF、ICAM、VACM-1、P-选择素、PAI-1及vWF)的表达。在一些非必要或额外实施方式中，可对个体施予DHLA涂覆的金纳米团簇，以降低发炎性细胞介素的表达，所述发炎性细胞介素包含但不限于：IL-1、IL-12、IL-18、TNF、IFN-γ、及/或颗粒性白血球-巨噬细胞群落刺激因子。

本公开内容的DHLA涂覆的金纳米团簇及其组合物可经由任何合适路径施予或给药，合适施予或给药路径包含肠内(例如：口服)、不经肠胃道、静脉内、肌内、动脉内、髓内、鞘内、皮下的、心室内、经皮、皮内、皮下的、皮内、直肠的、阴道内、腹腔、局部(以粉末、软膏剂、霜剂及/或滴剂)。具体而言，较佳的路径是口服施予、静脉施予(例如：全身静脉注射)、通过血液及/或淋巴供给的局部施予、以及/或直接施予于受影响的位置。通常最合适的给药路径会随着各种因素而有所改变，象是药剂的本质(例如其在胃肠道环境中的稳定性)、及/或个体的生理条件(例如该个体是否对于口服给药有耐受性)。

达到有效量所需的DHLA涂覆的金纳米团簇的精确量随着不同个体而有所差异，举例来说，其取决于人种、年纪、以及个体的一般状况、副作用或疾病的严重程度、给药的模式等。有效量可被包含在单一剂量中(例如单一口服剂量)或多剂量(例如口服多剂量)。在特定实施方式中，当对个体、生物检体、组织或细胞施予多剂量时，任二剂可包含不同或大致相同剂量的本发明DHLA涂覆的金纳米团簇。在特定实施方式中，当对个体、生物检体、组织或细胞施予多剂量时，多剂量的施予或施用频率可以是每天3剂、每天2剂、每天1剂、每隔一天1剂、每三天1剂、每周1剂、每两周1剂、每个月1剂或每隔一个月1剂。在特定实施方式中，对个体、组织或细胞施予多剂量的频率是每天一剂。在特定实施方式中，对个体、组织或细胞施予多剂量的频率是每天2剂。在特定实施方式中，本公开内容所述的一剂(例如：单一剂量或多剂量的任一剂)可分别包含每日每公斤体重约1至15nM，特别是包含每日每公斤体重3至12nM，较佳是每日每公斤体重约6至10nM的本发明DHLA涂覆的金纳米团簇。在一较佳实施方式中，包含有效量的剂量为每日每公斤体重约8.1nM。

本公开内容所述的剂量范围提供了对成人施予本发明药学组成物的导引。举例来说，相较于成人的施予剂量，医护从业人员或本发明所属领域具有普通知识者可对孩童或青少年施予较少或相同的剂量。

本公开内容的DHLA涂覆的金纳米团簇或其组合物可与一或多种额外药剂(例如：治疗及/或预防活性剂)合并施予，该种药剂可用以治疗、减少罹患本公开内容任一发炎性疾病/病症的风险、或延迟该发炎性疾病/病症的进程。所述DHLA涂覆的金纳米团簇或其组合物可与其他额外药剂共同施予，以改善其活性(例如对亟需的个体治疗发炎性病症及/或减少发炎性病症的风险的活性)、改善生物利用性、改善安全性、减少药物抗性、减少及/或改变代谢、抑制排出及/或改善个体、生物检体、组织或细胞中的分布。当可想见，采用的治疗可对相同疾病达到期望的功效，及/或可产生不同的功效。在一些实施方式中，相较于仅包含DHLA涂覆的金纳米团簇或仅包含一额外药剂的药学组合物，包含本发明DHLA涂覆的金纳米团簇及额外药剂的药学组合物可产生协同功效(synergistic effect)。

在一些实施方式中，额外药剂可以是胞吞作用抑制剂，其包含盐酸氯丙嗪(chlorpromazine hydrochloride)、菲律平(filipin)、阿米洛利(amiloride)以及金雀异黄酮(genistein)。在一些实施方式中，可以在施予DHLA涂覆的金纳米团簇之前，施予胞吞作用抑制剂。在其他实施方式中，可同时施予胞吞作用抑制剂以及DHLA涂覆的金纳米团簇。

在一些实施方式中，个体为哺乳动物，较佳为人类。

下文提出多个实施例来说明本发明的某些方面，以利本发明所属技术领域中具有普通知识者实作本发明。不应将这些实验例视为对本发明范围的限制。无须进一步说明，据信所属技术领域中具有普通知识者可根据本文的描述，最大限度地利用本发明。本文引用的所有公开文献均通过引用其整体并入本文。

实施例

材料与方法

合成DHLA涂覆的金纳米团簇(FANC)及制备培养细胞

将人类主动脉内皮细胞(以下以HAEC称之)培养在含有5％胎牛血清(FBS)及内皮细胞生长补充液(以下简称为完全培养基；购自PromoCell,Heidelberg，德国)的内皮细胞生长培养基(MV)中。于37℃下，在具有5％的CO₂/95％的空气的加湿培养箱中，将HAEC在完全培养基中培养，并每周继代两次。本实验中使用的DHLA涂覆的金纳米团簇是基于前驱物诱导的金(Au)纳米粒子(NP)蚀刻来制备(Lin et al.,ACS Nano,2009,3(2),pp 395–401)。简言的，首先在甲苯(tolune)中通过将0.8毫升的金前驱物(在100毫摩尔/公升的双十二基二甲基溴化铵(didodecyldimethyl ammonium bromide，DDAB)溶液中制得的AuCl₃，7.5毫克/毫升)添加至含有1毫升的新鲜配制的硼氢化溴化四丁铵(tetrabutylammoniumborohydride，TBAB)(100毫摩尔/升的DDAB溶液)及0.675毫升的癸酸(100毫摩尔/升的甲苯溶液)的还原剂中，合成以DDAB稳定的6nm金纳米粒子。

逐渐逐滴加入额外金前驱物，直到颜色变成透明黄色，从而产生非等离子体金纳米团簇。接着将前述制备的金纳米团簇加入还原态二硫辛酸(α-lipoic acid，α-硫辛酸)液态，以交换配位基。通过在DDAB溶液中加入5毫升的TABA(50毫摩尔/L)，将二硫辛酸(0.206g,Sigma-Aldrich,St.Louis,Missouri,USA)还原成二氢硫辛酸(DHLA)。通过将等量的金前驱物以及DHLA混合以形成DHLA涂覆的金纳米团簇，接着经UV光(302nm)退火30分钟，从而可在活细胞中产生稳定荧光信号。以下本文与附图中，均以“FANC”简称DHLA涂覆的金纳米团簇，以节省篇幅。

离心除去上清液之后，通过甲醇/氯仿洗涤步骤将FANC进一步纯化，并将其重沉淀于硼酸盐缓冲液(pH 9)中，于55℃的温度放置至隔夜，并以30-100kDa的离心过滤器(EMDMillipore)收集及缓冲液交换。

抑制胞吞路径

在某些实验中，HAEC已经胞吞作用抑制剂处理，以抑制其胞吞路径。胞吞作用抑制剂是盐酸氯丙嗪(10μg/ml，C8138)、菲律平(10μg/ml，F9765)、阿米洛利(10μmol/L，A7410)以及金雀异黄酮(50μmol/L，G6649；均购自Sigma-Aldrich)。

免疫荧光法

将细胞种在2％的明胶涂层的玻璃盖玻片上放置24小时后，用于FANC处理。将细胞固定在含有1％的聚甲醛中，以PBS洗涤，接着以5％的牛血清蛋白(BSA)进行阻断30分钟。接着将细胞与初级抗VE-钙黏蛋白抗体于37℃下培养2小时，接着以FITC-共轭的二级抗体(Chemicon,Temecula,California,USA)于室温下反应50分钟。经上述胞吞作用抑制剂预处理一小时之后，将HAEC与FANC共培养80分钟，接着以PBS洗涤并以1％的聚甲醛固定。随后，以双苯甲酰胺(18.7μmol/L)染色细胞15分钟，接着以PBS缓冲液洗涤。接着，使用60％的甘油(v/v)固定细胞，并使用具有40×油镜/1.25孔径的共轭焦显微镜(Leica TCS SP5,Leica,Germany)检查。在室温下撷取影像。

实时聚合酶连锁反应(Real-time PCR)

在以DHLA涂覆的金纳米团簇处理之后，将被污染的培养基替换为新鲜的培养基。使用RNeasy Plus mini kit(Qiagen,Hilden,Germany)于特定时间点萃取细胞的总RNA。使用First-Strand Synthesis System试剂盒(BioRad,Hercules,California,USA)，取用2μg的RNA用于反转录反应中。将cDNA产物(0.5μl)配合针对血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子受体1(Flt-1)、血管内皮生长因子受体2(KDR)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)、细胞间细胞黏附分子1(ICAM-1)、P-选择素、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)、冯威里氏因子(vWF)、内皮氧化氮合成酶(endothelial nitric oxide synthase，eNOS)、去乙酰化酶(sirtuin1，SirT1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-8(IL-8)、白介素-1β(IL-1β)以及β-肌动蛋白的特定引物(引子)一同用于定量PCR扩增反应中，引物的序列分别列于表1。为了进行实时PCR，使用iQTM

Green Supermix试剂以及MyiQ Single-Color Real-TimePCR侦测系统(两者均购自Bio-Rad,California,USA)。相对mRNA表达量是以β-肌动蛋白的相应量来标准化。为了分析，至少进行3次独立实验。

表1实时PCR使用的引物序列

细胞贴附测定

于37℃下将HAEC(7.5×10⁴细胞)种植于6孔盘中。于37℃下以不同浓度的FANC(50及100nM)处理HAEC 72小时，接着以LPS(100ng/ml)处理隔夜。在进行细胞贴附测定之前，以含有0.1％BSA的Hank's平衡盐溶液(HBSS)洗涤三次。将THP-1细胞以1.0×10⁶细胞/毫升的密度悬浮于0.1％的BSA/HBSS溶液中，并以浓度为1μM的Calcein-AM(Biotium,Hayward,CA)于37℃下反应60分钟，接着以0.1％的BSA/HBSS洗涤三次。接着于37℃下，将经标记的THP-1细胞与HAEC一起培养两小时。以0.1％的BSA/HBSS仔细地将非贴附细胞洗去，进行三次。以荧光显微镜(DM IRBE；Leica)手动定量标记有Calcein-AM并贴附于HAEC上的THP-1细胞。

动物及其处理

将雄性成年C57B/6小鼠(12周龄)以腹膜内注射FANC(100nM)及/或LPS(10mg/Kg)(每一组的个体数，N＝3)。经过2小时处理后，牺牲动物并收取其血清。从每只个体取等量血清(35μL)，并将其汇集在一起，并与预先印好的抗体膜(Mouse Cytokine Array Panel A,ARY006,R&D systems,USA)共培养。检测并定量出现在显影膜上的正信号。比较不同阵列上的相应信号，以测定每组之间细胞介素的相对变化。

电子显微镜

针对薄片电子显微镜，用2.5％的戊二醛的0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH 7.2)将培养细胞固定1小时。将标本放在PBS缓冲液中润洗，后置于经磷酸盐缓冲的氧化锇(VIII)(1％)，以乙醇脱水并以Spurr树脂包埋。以乙酸氧铀(uranyl acetate)及柠檬酸铅(leadcitrate)对薄片进行染色，接着以穿透式电子显微镜(型号：JEM-1200EXII,JEOL,Massachusetts,USA)检查。

资料分析

使用单向ANOVA检定或司徒顿的t检定分析，并以平均值±SD表示实验结果。当P值<0.05，则认为数据具有统计上显著差异。

实验例1：网格蛋白介导的胞吞作用对FANC内化作用的影响

在抑制剂预处理45分钟(除了菲律平是处理30分钟之外)之后，添加FANC并再继续培养80分钟。接着，细胞经过流式细胞仪。图1A–1D)。在完全培养基中，盐酸氯丙嗪以及阿米洛利，其分别抑制网格蛋白依赖性胞吞作用及巨胞饮作用，以及对FANC内化作用轻微效应的非网格蛋白胞吞作用抑制剂(包含金雀异黄酮及菲律平)(图1A)。然而，在血清或无血清培养基中，FANC内化作用则被盐酸氯丙嗪阻断(相较于FANC控制组，1％的FBS培养基下降60％，而无血清培养基下降51％；图1B及图1C)。共轭焦显微镜显示盐酸氯丙嗪处理可下调点状的荧光信号(图1D的c至d小图)。短期监测显示，当HAEC以FANC处理15分钟之后，FANC与网格蛋白重链(网格蛋白HC)发生共定位(colocalization)。在1小时的FANC培养之后，经放大及z维度影像则显示点状的FANC信号增加且被网格蛋白HC信号包覆。额外的穿透式显微镜则证实，FANC培养30分钟后(500nmol/L)，在顶膜上存在被覆小洼(coated pit)结构(未示出)，这表示FANC的内化作用可由网格蛋白所介导。

实验例2：FANC对体外发炎反应的有益效果

为了检查可受FANC影响的细胞标记，将维持在补充有FANC的完整培养基中的细胞进行培养长达四周，且于特定时间点(第21天及第28天)以实时PCR对细胞进行评估。检查涉及血管生成、发炎、凝血、黏着、生长以及血管舒张的内皮活性的转录本。结果显示，对生长因子、黏附分子及凝血因子的下调是呈现剂量依赖形式(图2A及图2B)。可以观察到相比于控制组(无FANC处理)，以FANC补充液(150nmol/L)培养经21天之后，减量的分子分别为VEGF，88％；ICAM-1(图式为ICAM)：64％；VCAM-1(图式为VCAM)：74％；P-选择素：88％；PAI-1：64％；及vWF：75％(第2A图；*：P<0.05)。再者，以FANC补充液(150nmol/L)培养经28天之后，减量的分子分别为:VEGF：87％；ICAM-1：62％；VCAM-1：76％；P-选择素(图式为：P-Sel)：87％；PAI-1：42％；以及vWF：62％(图2B；*：P<0.05)。相反地，FANC对VEGF受体、eNOS及SirT1的表达量则仅有最小的影响。

为了确定是否在发炎状态下，FANC对黏附分子仍有如前述的影响力，以FANC处理HAEC细胞3天，接着以LPS活化隔夜，最后测量黏附分子的转录本表达量。可以观察到，除了在长期处理下的衰减效应之外，FANC也可以扭转短期以LPS诱导而过表达的黏附分子(ICAM-1及VCAM-1)的表达量(图3A及图3B)。

还进行细胞黏附测定来评估ICAM-1及VCAM-1的表达降低是否反应在白血球对内皮细胞较弱的黏附表现上。将HAEC以FANC处理3天，并以LPS隔夜活化，接着与THP-1细胞共培养1小时。THP-1细胞黏附HAEC的定量数据显示FANC处理可导致黏附的THP-1细胞明显减少。

除了黏附分子之外还研究FANC在内皮细胞中对发炎性细胞介素的表达的影响。为了此目的，将HAEC以FANC处理3天，然后以LPS活化处理至隔夜。培养之后分析发炎性细胞介素(IL-1β、IL-8及TNF-α)的表达量。结果显示，前述三种分子均可显著地被LPS调升，然而FANC处理则使此表达增量减弱(图5A至图5C)。

实验例3：FANC对体内发炎反应的有益效果

为了阐明FANC于活体内抗发炎作用，而进行动物实验。将成年雄性小鼠分成四组，每一组分别以腹膜内施予磷酸盐缓冲溶液(PBS)、FANC(100nM)、LPS及FANC加上LPS(10mg/Kg)两小时。收取每一组等量血清并加以汇集，并以抗体微阵列(ARY006,R&D systems,USA)测定促发炎及/或发炎性分子，其包含IL-1β、IL-6、IL-10、CXCL9、CXCL10、CCL3、CCL4、CCL5、CCL12、TIMP-1及TNF-α。可以观察到，与单独施予LPS而明显增加的促发炎及/或发炎性分子相比，前述分子的增加，特别是IL-1β、IL-10、CCL4、CCL5及TNF-α，在小鼠中可被LPS及FANC的共同处理而减弱(图6)。

总结上述，本公开内容证明DHLA涂覆的金纳米团簇在体内和体外均可降低特定一些促发炎分子(例如黏附分子、凝血因子甚至发炎性细胞介素)的表达。据此，本发明包含施予DHLA涂覆的金纳米团簇及/或其药学组合物的方法可提供有效防止或治疗个体免于发炎相关疾病的潜在手段。

应当理解的是，前述对实施方式的描述仅是以实施例的方式给出，且本领域所属技术领域中具有普通知识者可进行各种修改。以上说明书、实施例及实验结果提供本发明的例示性实施方式的结构与用途的完整描述。虽然上文实施方式中揭露了本发明的各种具体实施例，然其并非用以限定本发明，本发明所属技术领域中具有普通知识者，在不悖离本发明的原理与精神的情形下，当可对其进行各种更动与修饰，因此本发明的保护范围当以附随申请专利范围所界定者为准。

<110> 叶宏一

红婴生物科技股份有限公司

<120> 治疗发炎性疾病的方法

<130> P4011-TW

<150> 62/809,762

<151> 2019-02-25

<160> 28

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

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<212> DNA

<213> 人工序列

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<223> Flt-1_正向引物

<400> 1

tctgaaatgg gtggctcttg a 21

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<212> DNA

<213> 人工序列

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<223> Flt-1_反向引物

<400> 2

caactgcaga agtgctcatc ca 22

<210> 3

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<212> DNA

<213> 人工序列

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<223> VCAM-1_正向引物

<400> 3

cggattgctg ctcagattgg agac 24

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<212> DNA

<213> 人工序列

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<223> VCAM-1_反向引物

<400> 4

aaactcacag ggctcagggt cag 23

<210> 5

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<212> DNA

<213> 人工序列

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<223> eNOS_正向引物

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gcagcctcac tcctgttttc c 21

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<212> DNA

<213> 人工序列

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<223> eNOS_反向引物

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ttcactcgct tcgccatcac 20

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<212> DNA

<213> 人工序列

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<223> ICAM-1_正向引物

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ctgaccccaa cccttgatga t 21

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<213> 人工序列

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<223> ICAM-1_反向引物

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agccccattt gatctttttg c 21

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<213> 人工序列

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<223> PAI-1_正向引物

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gccgcctctt ccacaaatc 19

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<213> 人工序列

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<223> PAI-1_反向引物

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agcctggtca tgttgccttt c 21

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<213> 人工序列

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<223> KDR_正向引物

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gcaggaagta gccgcatttg 20

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<212> DNA

<213> 人工序列

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<223> KDR_反向引物

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gccattgctt gaagctcttt gt 22

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<212> DNA

<213> 人工序列

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<223> VEGF_正向引物

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ctctacctcc accatgccaa 20

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<213> 人工序列

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<223> VEGF_反向引物

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gcatggtgat gttggactcc 20

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<213> 人工序列

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<223> P-选择素_正向引物

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gaggctgaga actgggctga t 21

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<212> DNA

<213> 人工序列

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<223> P-选择素_反向引物

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tccttgtttg ctgcaggaca t 21

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<213> 人工序列

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<223> vWF_正向引物

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tgacagtgtt ccctattgga attg 24

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<223> vWF_反向引物

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aggaaggaat tgcccaaggt 20

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<212> DNA

<213> 人工序列

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<223> TNF-α_正向引物

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cctcctctct gccatcaag 19

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<212> DNA

<213> 人工序列

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<223> TNF-α_反向引物

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agtcggtcac ccttctcc 18

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<212> DNA

<213> 人工序列

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<223> SirT1_正向引物

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ataggttagg tggtgaatat gc 22

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<212> DNA

<213> 人工序列

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<223> SirT1_反向引物

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ctgaagaatc tggtggtgaa g 21

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<212> DNA

<213> 人工序列

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<223> β-肌动蛋白_正向引物

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cctccctgga gaagagctac ga 22

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<212> DNA

<213> 人工序列

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<223> β-肌动蛋白_反向引物

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cgccagacag cactgtgttg 20

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<212> DNA

<213> 人工序列

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<223> IL-8_正向引物

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ccactgtgcc ttggtttc 18

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<212> DNA

<213> 人工序列

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<223> IL-8_反向引物

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tcttgcacaa atatttgatg c 21

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<213> 人工序列

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<223> IL-1β_正向引物

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tgatggctta ttacagtggc aatg 24

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<213> 人工序列

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<223> IL-1β_反向引物

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gtagtggtgg tcggagattc g 21

Claims

1.一种粒径为约0.1至20nm的二氢硫辛酸涂覆的金纳米团簇用于制备用以治疗发炎性疾病的药物的用途，其中，

所述二氢硫辛酸涂覆的金纳米团簇是由复数个金纳米粒子所形成的金纳米团簇及涂覆在所述复数个金纳米粒子上的复数个二氢硫辛酸所组成；以及

所述二氢硫辛酸涂覆的金纳米团簇可降低个体中血管内皮生长因子1(vascularendothelial growth factor-1，VEGF-1)、细胞间黏附分子-1(intercellular adhesionmolecule-1，ICAM-1)、血管细胞黏附蛋白-1(vascular cell adhesion protein-1，VACM-1)、P-选择素(P-selectin)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(plasminogen activatorinhibitor-1，PAI-1)、冯威里氏因子(von Willebrand factor，vWF)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha，TNF-α)、白介素-8(interleukin-8，IL-8)和/或白介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)的表达量。

2.如权利要求1所述的用途，其中所述二氢硫辛酸涂覆的金纳米团簇的粒径为约1至2nm。

3.如权利要求1所述的用途，其中所述发炎性疾病为心血管疾病、炎症性肠病、器官移植排斥、狼疮、自体免疫疾病、辐射诱导损伤、癌症、烧伤、创伤、风湿性疾病、肾脏疾病、过敏疾病、传染病、眼科疾病、皮肤疾病、胃肠病、肝疾病、脑水肿、类肉瘤病、血小板减少症或脊髓损伤。

4.如权利要求3所述的用途，其中所述发炎性疾病为所述心血管疾病。

5.如权利要求4所述的用途，其中所述心血管疾病为心绞痛(angina pectoris)、动脉粥状瘤(atheroma)、动脉粥样硬化(atherosclerosis)、动脉硬化(arteriosclerosis)、郁血性心衰竭(congestive heart failure)、冠状动脉心脏病(coronary heart disease)、心肌病(cardiomyopathy)、心肌梗塞(myocardial infarction)、中风、缺血性病症(ischemic condition)、缺血性心肌病(ischemic cardiomyopathy)、开放性动脉导管(patent ductus arteriosus)、高血压、肺脏高血压(pulmonary hypertension)、周边动脉疾病、冠状动脉疾病、冠状动脉痉挛或心包炎(pericarditis)。

6.如权利要求1所述的用途，其中所述药物还包含胞吞作用抑制剂。

7.一种用以降低培养细胞的促发炎分子表达量的方法，其包含将所述培养细胞与粒径为约0.1至20nm，且浓度为约1至1000nM的二氢硫辛酸涂覆的金纳米团簇接触，其中，

所述促发炎分子是选自由血管内皮生长因子1、细胞间黏附分子1、血管细胞黏附蛋白-1、P-选择素、纤溶酶原激活物抑制剂-1、冯威里氏因子、肿瘤坏死因子α、白介素-8及白介素-1β所组成的群组。

8.如权利要求8所述的方法，其中所述二氢硫辛酸涂覆的金纳米团簇的粒径为约1至2nm。

9.如权利要求8所述的方法，其中所述培养细胞是选自由人类主动脉内皮细胞(humanaortic endothelial cell，HAEC)、人类上皮细胞、人类冠状动脉内皮细胞(humancoronary artery endothelial cell，HCAEC)以及人类内皮前驱细胞(human endothelialprogenitor cell，HEPC)所组成的群组。

10.如权利要求8所述的方法，还包含在与所述将所述培养细胞与所述二氢硫辛酸涂覆的金纳米团簇接触之前或同时与胞吞作用抑制剂接触。