CN111544575A - 一种护眼贴及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种护眼贴，其特征在于，该护眼贴包括I型胶原和丹参提取物，其中，与皮肤接触的层为含有I型胶原的膜层，丹参提取物分布在含有I型胶原的膜层中或者不分布在含有I型胶原的膜层中，I型胶原膜层在复水后的pH为6‑8。本发明还提供了所述护眼贴的制备方法和其用途。本发明提供的含有I型胶原和丹参提取物的护眼贴，在复水后，含有I型胶原膜层的pH值处于生理范围内，有利于I型胶原功效的发挥；此外，本发明提供的含有I型胶原蛋白和丹参提取物的复合物对于视疲劳、干眼症、近视与老花等眼疾非常有效。本发明提供的含有I型胶原和丹参提取物的护眼贴的制备方法非常简单，成本低廉，易于大规模生产。

Description

一种护眼贴及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于生物领域，具体涉及一种护眼贴及其制备方法和应用。
背景技术
科技的迅猛发展改变了人们的生产和生活方式，尤其是现代信息的传播方式、通讯电子设备的使用，使得电脑、智能手机、互联网等成为日常工作和生活的必需品。在更便捷地获取信息，为生活和工作带来巨大便利的同时，给眼睛健康带来了严重的问题，这必将造成全社会的重大公共卫生危机。长时间的注视屏幕加上不正确、不卫生的用眼习惯，造成严重的视觉健康问题，使近视、视疲劳及干眼症等各种眼科疾病大幅度上升。
目前，缓解干眼与眼疲劳的产品通常为人工泪液等滴眼剂和眼膏。人工泪液等滴眼剂虽然对缓解干眼与疲劳等症状有一定功效，但作用时间短而容易流失；眼膏附着时间较长但有异物感，有不适感。另外，以眼贴为代表眼部护理产品，通常用无纺布浸泡纯中药成分后(CN106266302A，CN106727936A，CN108686129A)，帖敷眼眶部位，让药物通过眼部组织的吸收，以便让眼疾得到缓解。但用无纺布作为载体存水量少，眼贴水份容易蒸发而影响药物吸收与作用。
有效避免永久性视力损害、缓解视疲劳的产品开发，成为维护视觉健康、提高生活质量最迫切的需求。
胶原蛋白是细胞外基质中最主要的结构蛋白，具有许多生物活性与生物学功能，例如参与细胞增殖、迁移与分化。利用胶原的生物活性，目前，许多产品中都包含有胶原。然而，胶原的等电点在pH7.4左右，当溶液接近中性时胶原不稳定，容易析出。因此，在现有的产品中，胶原都是以偏酸性(pH 4-6)的环境加入。然而，中性环境是细胞代谢最适的pH，因此，如何使胶原稳定溶解于中性环境中，从而能够在中性条件下使用胶原，是急需解决的一个问题。
发明内容
为了解决现有技术中的上述问题，本发明提供了一种护眼贴，该护眼贴能够预防或治疗与视疲劳、干眼症、近视和老花等相关的眼疾。
因此，一方面本发明提供了一种护眼贴，其特征在于，该护眼贴包括I型胶原和丹参提取物，其中，与皮肤接触的层为含有I型胶原的膜层，丹参提取物分布在含有I型胶原的膜层中或者不分布在含有I型胶原的膜层中，I型胶原膜层在复水后的pH为6-8。
另一方面，本发明提供了所述的护眼贴用于预防或缓解视疲劳、干眼症、近视和老花中的一种或几种症状。
另一方面，本发明提供了一种制备护眼贴的方法，其中，该方法包括以下步骤：
a.配制平衡物质：向水中加入Tris-HCl体系的物质、Tris-马来酸体系的物质或HEPES体系的物质；
b.向所述平衡物质中加入I型胶原或向所述平衡物质中加入I型胶原和丹参提取物，获得复合物，该复合物的pH为6-8；
c.将b步骤中获得的复合物倒入模具，干燥成膜。
本发明提供的本发明提供的含有I型胶原和丹参提取物的护眼贴，在复水后，含有I型胶原膜层的pH值处于生理范围内，有利于I型胶原功效的发挥；此外，本发明提供的含有I型胶原蛋白和丹参提取物的复合物对于视疲劳、干眼症、近视与老花等眼疾非常有效。
本发明提供的含有I型胶原和丹参提取物的护眼贴的制备方法非常简单，成本低廉，易于大规模生产。
附图说明
图1为实施例1制备的一种护眼贴的示意图。
具体实施方式
本发明提供了一种护眼贴，其特征在于，该护眼贴包括I型胶原和丹参提取物，其中，与皮肤接触的层为含有I型胶原的膜层，丹参提取物分布在含有I型胶原的膜层中或者不分布在含有I型胶原的膜层中，I型胶原膜层在复水后的pH为6-8。
该眼贴的I型胶原膜层在复水后的pH为6-8，非常有利于胶原功效的发挥(在本申请人另一篇专利)，尤其是使得该眼贴有利于放置到眼内使用，从而大大提高眼睛对有效成分的吸收。
我国有丰富的植物资源，传统中医药学应用已经过千百年的锤炼，在数千年临床实践中积累了丰富经验，为从天然药源中寻找新的安全有效的眼科疾病治疗药物提供了宝贵的线索。中药丹参为唇形科植物(Salvia miltiorrhiza Bge)的干燥根和根茎，味苦，性微寒，归心、肝经，首载于《神农本草经》，列为上品生药；在《本草纲目》中有“一味丹参功同四物汤”之记载，具有祛瘀止疼、活血痛经等功效。现代医学研究证实其通过改善血液流变性、血流动力及改善微循环等途径发挥活血化瘀的作用，主治胸痹心痛、癥瘕积聚、月经不调等，既可单方又可复方，从古至今发挥重要的临床治疗作用。
本申请的发明人发现I型胶原蛋白与丹参提取物协同作用，可以激活和改善眼部及环眼部细胞代谢活性，形成护眼产品。经初步试验发现：该复合物能够减缓和防止视疲劳、干眼症。近视与老花等眼疾通常在视疲劳、干眼症情况下加重，因此，减缓和防止视疲劳、干眼症将有利于改善近视与老花。
为了能长时间保持丹参活性成分(Salvia active components，SAC)的功效，在一种实施方式中，丹参提取物形成干粉层，附着于所述含有I型胶原的膜层的一侧。在使用前，使含有I型胶原的膜层和丹参提取物干粉层润湿。
当将所述护眼贴置于眼睛外使用时，所述含有I型胶原的膜层的厚度可以为0.01-0.15mm；优选地，I型胶原的膜层的厚度为0.013-0.1mm。
为了促进护眼贴中有效成分的吸收，在一种实施方式中，所述含有I型胶原的膜层具有海绵结构。
在一种优选的实施方式中，所述含有I型胶原的膜层是由以下复合物形成：该复合物含有I型胶原和平衡物质；其中，所述平衡物质包括Tris-HCl体系、Tris-马来酸体系或HEPES体系，以及包括葡萄糖、1,3丙二醇，和吐温80中的一种或几种；该复合物的pH为6-8。
在一种优选的实施方式中，所述平衡物质包括Tris-HCl体系、Tris-马来酸体系或HEPES体系、葡萄糖、1,3丙二醇和吐温80；优选地，所述葡萄糖的浓度为0.1-10重量％，所述1,3丙二醇的浓度为0.5-3mg/ml，所述吐温80的浓度为0.1-1mg/ml。
在一种实施方式中，该复合物还含有凝胶基质辅料；优选地，所述凝胶基质辅料的浓度0.1-3重量％。所述凝胶基质包括但不限于纤维素衍生物(例如，羟甲基丙基纤维素)、卡波姆、海藻酸盐、西黄蓍胶和明胶中的一种或几种。
为了获得更好的修复作用和美容效果，优选地，在所述复合物中，所述I型胶原的浓度为0.5-8mg/ml；优选地，所述I型胶原的浓度为1-5mg/ml。
为了获得更好的保湿和美容效果，优选地，本发明的复合物还可以包括透明质酸；优选地，透明质酸的浓度为0.1-8mg/ml，更优选为0.5-5mg/ml。
在一种实施方式中，所述复合物还含有丹参提取物；为了对视疲劳、干眼症具有更好的效果，优选地，所述丹参提取物中活性成分(SAC)的浓度为7-100μg/ml，优选地，所述活性成分的浓度为10-50μg/ml；优选地，所述丹参提取物中活性成分的含量为50-99重量％，优选为60-90重量％。
为了进一步保持丹参有效成分的活性以及使药物进行缓释，所述丹参提取物以微囊的形式存在于所述复合物中。微囊可以用现有技术制备，优选地，以壳聚糖、明胶、海藻酸盐及甲基纤维素等水溶性材料为囊材进行包裹制备微囊，其中囊心为丹参提取物。微囊可以克服丹参水溶性有效成份容易吸潮活性下降的问题，并起到缓释作用。
为了制备的便利，优选地，所述丹参提取物为水溶性提取物，其活性成分可以包括酚酸类活性物质。
为了使护眼贴中的有效成分更好地被吸收以发挥作用，本发明还提供了一种置于眼睛中使用的护眼贴，其中，所述含有I型胶原的膜层是由以下复合物形成：该复合物由I型胶原、丹参提取物和平衡物质组成；其中，所述平衡物质包括Tris-HCl体系、Tris-马来酸体系或HEPES体系，以及包括葡萄糖、1,3丙二醇，和吐温80中的一种或几种；该复合物的pH为6-8。优选地，所述平衡物质包括Tris-HCl体系、Tris-马来酸体系或HEPES体系、葡萄糖、1,3丙二醇和吐温80；优选地，所述葡萄糖的浓度为0.1-10重量％，所述1,3丙二醇的浓度为0.5-3mg/ml，所述吐温80的浓度为0.1-1mg/ml。优选地，所述含有I型胶原的膜层的厚度为0.08-0.12mm。
在一种实施方式中，实施护眼贴还包括带微孔水凝胶基质层、水凝胶基质层、营养液层或水层、防水膜层中的一层或几层，以便使该护眼贴具有更多的功效。
在一种实施方式中，所述护眼贴在含有I型胶原的膜层的一层依次包括丹参提取物干粉层、微孔水凝胶基质层、营养液层或水(优选纯净水)层、水凝胶基质层、防水膜层；在该优选的实施方式中，护眼贴中本身带有的营养液层或者水层(优选纯净水)用于润湿含有I型胶原的膜层和丹参提取物干粉层；营养液层用于提供更多的营养物质，微孔水凝胶基质层有利于引导并使营养液或水流通到丹参提取物干粉层和含有I型胶原的膜层；防水膜层有利于防止水或者营养液的倒流。这种护眼贴可以较长时间置于眼部而不会变干燥，有利于眼贴中有效成分的吸收。
发明人发现本发明的眼贴中的物质，可以显著促进人表皮细胞(Hacat)分泌Ⅰ型和Ⅲ型胶原的基因表达；激活抗氧化系统，显著提高过氧化氢酶的基因表达，以增加氧自由基的清除能力；刺激表皮抗衰老关键基因层粘连蛋白B1高效表达，同时有效降低细胞衰老因子L1(LINE1)的表达(甚至低至检测不到)，双向拮抗衰老退变；阻断炎症因子IFN-1(干扰素I)的表达，抑制炎症发生极其引起后续细胞凋亡。
本发明还提供了所述的护眼贴用于预防或缓解视疲劳、干眼症、近视和老花中的一种或几种症状。
本发明还提供了一种制备护眼贴的方法，其中，该方法包括以下步骤：
a.配制平衡物质：向水中加入Tris-HCl体系的物质、Tris-马来酸体系的物质或HEPES体系的物质；
b.向所述平衡物质中加入I型胶原或向所述平衡物质中加入I型胶原和丹参提取物，获得复合物，该复合物的pH为6-8；
c.将b步骤中获得的复合物倒入模具，干燥成膜。
在一种优选的实施方式中，所述丹参提取物中的活性成分的浓度为7-100μg/ml；优选为，所述活性成分的浓度为10-50μg/ml。
优选地，所述丹参提取物中活性成分的含量为50-99重量％，更优选为60-90重量％。
优选地，所述丹参提取物以微囊的形式添加到所述复合物中。微囊可以用现有技术制备，优选地，以壳聚糖、明胶、海藻酸盐及甲基纤维素等水溶性材料为囊材进行包裹制备微囊，其中囊心为丹参提取物。
优选地，所述I型胶原的添加浓度为0.5-8mg/ml；更优选地，所述I型胶原的添加浓度为1-5mg/ml。
优选地，所述平衡物质中的葡萄糖的浓度为0.1-10重量％，所述1,3丙二醇的浓度为0.5-3mg/ml，所述吐温80的浓度为0.1-1mg/ml。
在一种实施方式中，发明提供的制备护眼贴的方法包括以下步骤：
a.配制平衡物质：向水中加入Tris-HCl体系的物质、Tris-马来酸体系的物质或HEPES体系的物质；
b.向所述平衡物质中加入I型胶原或向所述平衡物质中加入I型胶原和丹参提取物，获得复合物，该复合物的pH为6-8；
c.将b步骤中获得的复合物倒入模具，复合物的用量为0.25-0.75ml/cm2，干燥成膜；
d.在c步骤中获得的含有I型胶原的膜层的一侧均匀喷洒丹参提取物粉末，起膜；
e.将聚丙烯酸钠4.5-5.5重量％，甘油14-18重量，甘羟铝0.05-0.15重量％，余量为纯净水，混合搅拌均匀；
f.将酒石酸0.2-0.3重量％，聚乙烯基吡咯烷酮7-9重量％，余量为纯净水，混合搅拌均匀；
g.微孔水凝胶：将e步骤获得的混合物投入f步骤中获得的混合物，搅拌均匀，倒入不锈钢模具中聚合成胶，打孔；胶体厚度为2-4mm；
h.用压制法制备营养液软胶囊，以明胶为囊材包，0.1-2mg/ml透明质酸溶液为囊心，由步骤a获得的平衡物质配制；囊心还可使用海藻酸盐、胶原肽等营养物质的一种或多种；
i.模具底层铺上防水透明膜，按步骤g制备水凝胶，胶体厚度为4-6mm；50-70％聚合时加入营养液软胶囊，并继续贴上步骤g制备的微孔水凝胶，形成带孔营养夹层；
j.将微孔水凝胶与丹参提取物粉末层贴合。
使用方法说明：轻捏压破水凝胶软胶囊让营养液流出，通过微孔凝胶到含有I型层胶原膜，湿润后敷贴于眼部，胶原/SAC不断溶解并渗入皮肤；水凝胶眼贴输送营养液保持湿度、柔软有弹性与韧度、紧密黏贴皮肤防止水份蒸发，保持充分湿润环境至少30分种，有利于保证药物递送效果。
I型胶原和丹参提取物都可以商购获得。
实施例1：胶原蛋白的制备及物理化学性能检测
前处理：牛筋腱切碎，清洗，生理盐水洗涤后包封，经Co60消毒。余下步骤在无菌条件下进行。
制备高纯度的Ⅰ型胶原溶液：牛筋腱碎粒中加入0.5M醋酸适量，并加入胃蛋白酶(每20g牛筋腱加入1克胃蛋白酶)，酶解30小时，高速离心收取上清液为Ⅰ型胶原溶液，沉淀可以重复此步骤继续提取胶原。此过程在4℃以下进行。
纯化：按体积1:1加入胶原溶液及10％NaCl盐析，静置过夜。离心获取沉淀，用0.5M醋酸溶解，去离子水中透析，得到高纯度的Ⅰ型胶原溶液(8mg/ml以上)。
标准对照产品：Sigma I型胶原产品C9301，称取0.6mg，加入0.5M乙酸120μL缓慢震荡使其溶解，配置成5mg/ml溶液。取10μL加入平衡液中备用。
Ⅰ型胶原蛋白质量检测(参照中国医药行业标准YY0954-2015附录B杂蛋白检测方法)：采用Tris-甘氨酸不连续分离系统，配制6％分离胶、5％浓缩胶。取浓度为10mg/ml的Ⅰ型胶原溶液及Sigma标准对照液，各10μl，加入90μL双蒸水稀释后，按比例加入2x Loadingbuffer混匀，沸水浴10min；12000xg，5min离心取上清液15μL进行SDS-PAGE电泳。条件：60V，20min；120V，1h 25min(仪器型号：Bio-Rad，PowerPac Universal)，用考马斯亮蓝R-250染色液对凝胶进行染色，扫描凝胶成像(Umax，PowerLook，2100XL-USB)，得到高纯度特征性I型胶原条带。
取2μL样品，使用超微量核酸蛋白检测仪(Nanodrop 2000)扫描，波长200nm-800nm，胶原特征峰230nm读数分别为1.397，符合Ⅰ型胶原蛋白特征要求。
采用实施例1制备的I型胶原进行后续实验。
实施例2：制备护眼贴
a.配制平衡(70ml)物质：在去离子水中加入Tris 0.605g；HCl 0.138g，葡萄糖2g，1,3丙二醇1.5ml，吐温80 0.5ml。
b.量取10mg/ml的Ⅰ型胶原液30ml。
c.混合步骤a、b，并加入羟甲基丙基纤维素，获得含有Ⅰ型胶原的复合凝胶液100ml，该凝胶液的pH为7，Tris的浓度为0.605重量％；HCl的浓度为0.138重量％，葡萄糖的浓度为2重量％，1,3丙二醇的浓度为1.5ml/ml，吐温80的浓度为0.5ml/ml，羟甲基丙基纤维素的浓度为2mg/ml，Ⅰ型胶原的浓度为3mg/ml。
d.将丹参提取物粉末加入到c步骤中获得的复合物中，丹参的加入量为使活性成分(按照丹酚酸B有效浓度计)为20μg/ml；混合均匀后倒入涂布有甘油的模具中，复合物的用量为0.5ml/cm2，室温自然晾干成膜。
实施例3：制备护眼贴
a.配制平衡(70ml)物质：在去离子水中加入Tris 0.605g；HCl 0.138g，葡萄糖2g，1,3丙二醇1.5ml，吐温80 0.5ml。
b.量取10mg/ml的Ⅰ型胶原液30ml。
c.混合步骤a、b，并加入羟甲基丙基纤维素，获得含有Ⅰ型胶原的复合凝胶液100ml，该凝胶液的pH为7，Tris的浓度为0.605重量％；HCl的浓度为0.138重量％，葡萄糖的浓度为2重量％，1,3丙二醇的浓度为1.5ml/ml，吐温80的浓度为0.5ml/ml，羟甲基丙基纤维素的浓度为2mg/ml，Ⅰ型胶原的浓度为3mg/ml。
d.将c步骤中获得的复合物倒入涂布有甘油的模具中，复合物的用量为0.5ml/cm2，室温自然晾干成膜。
e.将丹参提取物粉末均匀喷洒在步骤d获得的膜的一侧，丹参提取物粉末的用量(按照丹酚酸B计)20μg/cm2。
f.将聚丙烯酸钠5重量％，甘油15重量，甘羟铝0.1重量％，余量为纯净水，混合搅拌均匀；
g.将酒石酸0.2重量％，聚乙烯基吡咯烷酮9重量％，余量为纯净水，混合搅拌均匀；
h.微孔水凝胶：将f步骤获得的混合物投入g步骤中获得的混合物，搅拌均匀，倒入不锈钢模具中聚合成胶，打孔；胶体厚度为3mm；
i.用压制法制备营养液软胶囊，以明胶为囊材包，1mg/ml透明质酸溶液为囊心，由步骤a获得的平衡物质配制。
j.模具底层铺上防水透明膜，按步骤h制备水凝胶，胶体厚度为5mm；60％聚合时加入营养液软胶囊，并继续贴上步骤h制备的微孔水凝胶，形成带孔营养夹层；
k.将微孔水凝胶与丹参提取物粉末层贴合。
制备的护眼贴如图1所示：其中1表示I型胶原基质膜层；2表示丹参提取物粉末层；3表示微孔水凝胶基质层；4表示水凝胶层；5表示营养液层；6表示放水透明膜。
以下实验将检测本发明提供的护眼贴在改善视觉疲劳和眼干等方面的效果。
采用的护眼贴为实施例3制备的。入选观察对象情况及分组(20名志愿者)：包括长时间使用电脑的人员(每天6小时或以上)，手术医生，长时间使用手机者(每天6小时或以上)；随机分为实验与对照两组；实验组使用上述复合物，对照组使用珍珠明目滴眼液滴眼。
使用方法：临睡前用常规办法流水清洁脸部皮肤，擦干。实验组用实施例3制备的护眼贴，闭上眼睛后，将护眼贴置于眼皮上保持30分钟；对照组使用珍珠明目滴眼液滴眼(天龙制药有限公司)。
评判方法：按照眼睛眼干、涩、痒、肿胀、视力模糊等症状情况评分，5分最严重，0为消失。
结果：第二天，实验组所有志愿者眼睛眼干、涩、痒、肿胀、视力模糊等症状明显消失，全天感觉明显改善；对照组上述症状清晨有所减退，但午后又重新出现，如下表：
护眼贴疗效对照表
Figure BDA0002475266200000091

Claims (10)

1.一种护眼贴，其特征在于，该护眼贴包括I型胶原和丹参提取物，其中，与皮肤接触的层为含有I型胶原的膜层，丹参提取物分布在含有I型胶原的膜层中或者不分布在含有I型胶原的膜层中，I型胶原膜层在复水后的pH为6-8。
2.根据权利要求1所述的护眼贴，其中，丹参提取物形成干粉层，附着于所述含有I型胶原的膜层的一侧。
3.根据权利要求1所述的护眼贴，其中，所述含有I型胶原的膜层的厚度为0.01-0.15mm；优选地，I型胶原的膜层的厚度为0.013-0.1mm；优选地，所述含有I型胶原的膜层具有海绵结构。
4.根据权利要求1所述的护眼贴，其中，所述含有I型胶原的膜层是由以下复合物形成：该复合物含有I型胶原和平衡物质；其中，所述平衡物质包括Tris-HCl体系、Tris-马来酸体系或HEPES体系，以及包括葡萄糖、1,3丙二醇，和吐温80中的一种或几种；该复合物的pH为6-8；优选地，所述平衡物质包括Tris-HCl体系、Tris-马来酸体系或HEPES体系、葡萄糖、1,3丙二醇和吐温80；优选地，所述葡萄糖的浓度为0.1-10重量％，所述1,3丙二醇的浓度为0.5-3mg/ml，所述吐温80的浓度为0.1-1mg/ml；优选地，该复合物还含有凝胶基质辅料；优选地，所述凝胶基质辅料的浓度0.1-3重量％。
5.根据权利要求4所述的护眼贴，其中，在所述复合物中，所述I型胶原的浓度为0.5-8mg/ml；优选地，所述I型胶原的浓度为1-5mg/ml。
6.根据权利要求4所述的护眼贴，其中，所述复合物还含有丹参提取物；优选地，所述丹参提取物中活性成分的浓度为7-100μg/ml，优选地，所述活性成分的浓度为10-50μg/ml；优选地，所述丹参提取物中活性成分的含量为50-99重量％，优选为60-90重量％；优选地，所述丹参提取物以微胶囊的形式存在于所述复合物中。
7.根据权利要1所述的护眼贴，其中，所述含有I型胶原的膜层是由以下复合物形成：该复合物由I型胶原、丹参提取物和平衡物质组成；其中，所述平衡物质包括Tris-HCl体系、Tris-马来酸体系或HEPES体系，以及包括葡萄糖、1,3丙二醇，和吐温80中的一种或几种；该复合物的pH为6-8；优选地，所述平衡物质包括Tris-HCl体系、Tris-马来酸体系或HEPES体系、葡萄糖、1,3丙二醇和吐温80；优选地，所述葡萄糖的浓度为0.1-10重量％，所述1,3丙二醇的浓度为0.5-3mg/ml，所述吐温80的浓度为0.1-1mg/ml。
8.根据权利要求1所述的护眼贴，其中，该护眼贴还包括带微孔水凝胶基质层、水凝胶基质层、营养液层或水层、防水膜层中的一层或几层；优选地，所述护眼贴在含有I型胶原的膜层的一层依次包括丹参提取物干粉层、微孔水凝胶基质层、营养液层或水层、水凝胶基质层、防水膜层。
9.根据权利要求1-8中任意一项所述的护眼贴用于预防或缓解视疲劳、干眼症、近视和老花中的一种或几种症状。
10.一种制备护眼贴的方法，其中，该方法包括以下步骤：
a.配制平衡物质：向水中加入Tris-HCl体系的物质、Tris-马来酸体系的物质或HEPES体系的物质；
b.向所述平衡物质中加入I型胶原或向所述平衡物质中加入I型胶原和丹参提取物，获得复合物，该复合物的pH为6-8；
c.将b步骤中获得的复合物倒入模具，干燥成膜。
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