CN111544393A - 一种载药脂质体的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种脂质体载药方法，属于药物制剂技术领域。先制备空白脂质体，将待包封药物与空白脂质体混合，升高温度搅拌一定时间，然后降温，继续搅拌一定时间，如此重复高温‑低温循环操作若干次，得到载药脂质体。本发明所涉及的脂质体载药方法适用范围广，并且包封率、尤其是载药量较高。

Description

一种载药脂质体的制备方法
技术领域
本发明涉及一种脂质体载药方法，属于药物制剂技术领域。
背景技术
脂质体是一种由排列有序的脂质双分子层组成的单层或多层微囊。脂质体属于胶体系统，具有类似细胞的结构，与细胞膜亲和力强，可以增加被包封药物透过细胞膜的能力。脂质体生物相容性好，可实现药物体内靶向递送，具有延长药物作用时间、增加药物的体内外稳定性、降低药物毒性，增强药理作用等诸多优点。
目前，脂质体制备方法主要基于磷脂分散技术，可归纳为以下三大类：(1)基于溶剂或共溶剂分散技术，例如，薄膜分散法，将磷脂溶于有机溶媒中，之后在减压除去溶媒形成干燥的磷脂膜，水化即可形成多层脂质体，是最经典、应用最广的方法。逆相蒸发法对水溶性药物的包封率及载药量相对较高，最高能够达到60％，但仅适用于对于磷脂膜无通透性药物；而复乳法能够用于大规模制备微米级具有缓释功能的多囊脂质体。乙醇注入法简便、快速，且避免了毒性有机溶剂。(2)基于表面活性剂分散技术，如去污剂透析法，优点是不使用有机溶剂，适于蛋白、肽类生物药物，除了以静电结合外，难以包封水溶性药物。(3)基于机械分散技术，这种技术主要是通过机械做功，以降低或控制脂质体粒径大小，例如超声分散，挤出过膜分散，微射流冲击等。以上脂质体制备方法，对于多数水溶性药物包封率较低。为了提高脂质体包封率，研究人员发展了主动载药法。但是，离子梯度法适用范围有限，仅适于部分可解离的两性药物或能够与离子络合的药物，且不适于对酸、碱、金属离子敏感的药物；同时，脂质体内部偏高或偏低的pH值，也容易引发性质不稳定的磷脂发生分解、变质，甚至导致脂质体解体。因此，对多数药物而言，目前仍缺乏有效的载药方法，从而无法发展为具有临床使用价值的脂质体制剂。
发明内容
本发明的目的在于解决现有技术中药物脂质体包封率、尤其是载药量低等问题，提供一种脂质体载药新方法，本发明能将不同类型药物有效地载入脂质体，并且包封率、尤其是载药量较高。
技术方案
本发明人依据一般药物溶解度随温度升高而增大的特性，将脂质体与待包封药物在高于脂质体相变温度下孵育，药物溶解度增大，脂质体磷脂膜通透性增高，脂质体内外药物浓度差促使药物进入脂质体内部；随后温度降低，进入脂质体的药物沉淀于脂质体内部，当再升高温度，由于缺乏搅拌条件而仍处于沉淀状态；此时外部药物在搅拌条件下随温度升高而浓度增大，浓度差再次促进药物进入脂质体，达到内外浓度平衡；随后降温使得脂质体内部的药物继续发生沉淀。如此升温－降温周而复始，致使药物被不断沉淀于脂质体，最终形成包封率较高的载药脂质体。具体方案如下：
一种脂质体载药方法，包括如下步骤：
1、一种脂质体载药方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)制备空白脂质体；
(2)将待包封药物与含有空白脂质体的水溶液混合，高温下搅拌一定时间，然后降温，继续搅拌一定时间，再重复上述高温-低温循环操作若干次，得到载药脂质体；
2、如权利要求1所述一种脂质体载药方法，其特征在于，步骤(1)中，所述脂质体也包括采用非离子表面活性剂制备的类脂体(niosome)。
3、如权利要求1所述一种脂质体载药方法，其特征在于，步骤(2)中，空白脂质体水溶液，其中脂质体浓度按照脂质材料质量计算为0.1-10g/100ml。
4、如权利要求1所述一种脂质体载药方法，其特征在于，步骤(2)中，所述待包封药物包括各种化学药物、具有生物活性的多肽等。
5、如权利要求1所述一种脂质体载药方法，其特征在于，步骤(2)中，所述高温是指：当使用相变温度高于室温(25℃)的脂质材料时，温度高于脂质材料相变温度5℃及以上；当使用相变温度低于室温(25℃)的脂质材料时，温度不低于室温；所述低温指0～25℃。
6、如权利要求1所述一种脂质体载药方法，其特征在于，步骤(2)中，所述搅拌一定时间是指：20分钟以上。
7、如权利要求1所述一种脂质体载药方法，其特征在于，步骤(2)中，所述循环操作若干次是指重复操作1次以上。
本发明的有益效果：本发明提供了一种脂质体载药方法，除具备离子梯度法一些优势外，还具有以下显著优点：
(1)载药范围广，不受药物溶解度、解离或络合等性质限制；
由于多数药物溶解度均随温度变化而变化，本发明使用范围较广，尤其适用于溶解度在0～90℃范围随温度变化大的药物。
(2)包封率、尤其是载药量较高
能够提高多数药物脂质体包封率，尤其是提高药物载药量。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明的技术方案作进一步说明，但本发明的保护范围，不局限于此。下述实施例中英文字母缩写：SPC,豆磷脂酰胆碱；DPPC,
1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphocholine；CHO,胆固醇；DPPG,
1,2-dihexadecanoyl-sn-glycero-3-phospho-(1’-rac-glycerol)；DPPE-PEG2000，聚乙二醇2000修饰磷脂酰乙醇胺；DLS，动态光散射；PDI,多分散指数；SPAN-80,司盘-80；TWEEN-80，吐温-80；DOTAP,1,2-dioleoyloxy-3-(trimethyl ammonium)propane。
实施例1 荷负电PEG化脂质体载非解离药物姜黄素
以0.9％NaCl水溶液(以盐酸调pH＝9)为水相，以SPC/DPPG/DPPE-PEG2000(12:2:1，摩尔比)为成膜材料，采用薄膜分散-水化-挤出法制备空白脂质体(脂质总浓度为10％)，随后加入姜黄素，药物/磷脂(1:5,w/w)，升温至50℃并搅拌(300rpm)5h，冷却控温在2℃，继续搅拌3h；重复高温-低温循环操作0、1、3次，得到姜黄素脂质体。
载药前后，DLS检测平均粒径均为150nm，PDI＝0.30，ζ＝8mV。以葡聚糖凝胶G50色谱柱去除游离药物，HLPC检测含量，循环高温-低温操作0、1、3次，包封率分别为20％，37％，53％；载药量(药物/脂质膜材总量)分别为5％，7.4％，10.6％。
实施例2 中性PEG化脂质体载两性药物盐酸拓扑替康
以pH7.4磷酸盐缓冲液为水相，以DSPC/CHO/DPPE-PEG2000(12:7:1，摩尔比)为膜材，采用乙醇注入法制备空白脂质体(脂质总浓度为2％)，随后加入盐酸拓扑替康，药物/磷脂(1:10,w/w)，升温至70℃并搅拌(20rpm)0.5h，冷却控温在4℃，继续搅拌1h；再重复高温-低温循环操作3、5、7次，得到盐酸拓扑替康脂质体。
载药前后，DLS检测平均粒径均为120纳米，PDI＝0.21，ζ＝2mV。以葡聚糖凝胶G50色谱柱去除游离药物，HLPC检测含量，循环高温-低温操作3、5、7次，包封率分别为52％，85％，97％；载药量分别为5.2％，8.5％，9.7％。
实施例3 荷正电PEG化脂质体载黄芩素
以pH2.5磷酸盐缓冲液为水相，以DSPC/DPPE-PEG2000/DOTAP(15:5:1，moleratio)为膜材，采用薄膜分散-水化-超声制备空白脂质体(脂质总浓度为5％)，随后加入黄芩素，药物/磷脂(1:20,w/w)，升温至80℃并搅拌(80rpm)2h，冷却控温在10℃，继续搅拌4h；再重复高温-低温循环操作5、7、9次，分别得到黄芩素脂质体。
载药前后，DLS检测平均粒径均为120纳米，PDI约为0.21，ζ＝39mV，以葡聚糖凝胶G50色谱柱去除游离药物，HLPC检测含量，循环高温-低温操作5、7、9次，包封率分别为41％，59％，76％；载药量分别为2.1％，2.95％，3.8％。说明温控法适于荷电脂质体载药。
实施例4 非离子表面活性剂囊泡载5-氟尿嘧啶
以5％蔗糖溶液(以盐酸调pH9)为水相，以SPAN80/CHO/TWEEN80(12:7:1，moleratio)为膜材，采用薄膜分散-水化-挤出法制备空白脂质体(脂质总浓度为0.1％)，随后加入5-氟尿嘧啶，药物/磷脂(1:4,w/w)，升温至60℃并搅拌(30rpm)20min，冷却控温在1℃，继续搅拌0.5h；再重复高温-低温循环操作1、3、5次，得到5-氟尿嘧啶脂质体。
载药前后，DLS检测平均粒径均约为230纳米，PDI约为0.11，ζ＝3mV。以葡聚糖凝胶G50色谱柱去除游离药物，HLPC检测含量，循环高温-低温操作1、3、5次制备脂质体，包封率分别分别为22％，37％，45％；载药量分别为5.5％，8.8％，11.3％。说明温控法适于非离子表面活性剂囊泡载药。
实施例5 单一脂质材料脂质体载紫杉醇
以5％蔗糖水溶液(pH＝6.5)为水相，以SPC为膜材，称50mg溶于0.5mL乙醇，注入不停搅拌(300rpm)的5％蔗糖水溶液(9.5mL)，得到空白脂质体(约2％SPC)，超声控制粒径，随后加入紫杉醇乙醇溶液(2.5mg/0.5mL)，药物/磷脂(1:10,w/w)，升温至80℃并搅拌(120rpm)1h，冰水浴冷却控温在0℃，继续搅拌1h；再重复循环高-低温操作5次，得到紫杉醇脂质体。
载药前后，DLS检测平均粒径均约为95纳米，PDI约为0.19，ζ＝8mV。以葡聚糖凝胶G50色谱柱去除游离药物，HLPC检测含量，循环高温-低温操作5次，包封率为43％；载药量为4.3％。说明温控法适于功能材料修饰脂质体载药。
实施例6 叶酸修饰脂质体载5-氟尿嘧啶
以5％蔗糖水溶液(pH＝6.5)为水相，以SPC/CHO/DPPE-PEG2000-folate(11:8:1，mole ratio)为膜材，采用薄膜分散-水化-挤出法制备空白脂质体(脂质总浓度1％)，随后加入5-氟尿嘧啶，药物/磷脂(1:10,w/w)，升温至70℃并搅拌(120rpm)20min，冷却控温在4℃，继续搅拌2h；再重复循环高-低温操作7次，得到5-氟尿嘧啶脂质体。
载药前后，DLS检测平均粒径均约为120纳米，PDI约为0.21，ζ＝5mV。以葡聚糖凝胶G50色谱柱去除游离药物，HLPC检测含量，循环高温-低温操作7次，包封率为48％；载药量为4.8％。说明温控法适于功能材料修饰脂质体载药。
实施例7 叶酸修饰脂质体载5-氟尿嘧啶冻干
将实施例6，循环7次得到的叶酸修饰载5-氟尿嘧啶脂质体冷冻干燥，得到无水制剂，储存3个月再水化检测，平均粒径约为120纳米，PDI约为0.26，ζ＝5mV，包封率为43％,载药量为4.3％。说明进一步冷冻干燥可以提高脂质体制剂储存稳定性。
本发明所述TCL载药法，是针对脂质体对于多数药物包封率较低及离子梯度法适用范围窄等不足所建立的脂质体载药新方法，能够将不同类型药物有效载入脂质体，是适用范围广、产品稳定性的脂质体技术平台。
以上所述仅为本发明的部分实施例，并不用以此限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种脂质体载药方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)制备空白脂质体；
(2)将待包封药物与含有空白脂质体的水溶液混合，高温下搅拌一定时间，然后降温，继续搅拌一定时间，再重复上述高温-低温循环操作若干次，得到载药脂质体；
2.如权利要求1所述一种脂质体载药方法，其特征在于，步骤(1)中，所述脂质体也包括采用非离子表面活性剂制备的类脂体(niosome)。
3.如权利要求1所述一种脂质体载药方法，其特征在于，步骤(2)中，空白脂质体水溶液，其中脂质体浓度按照脂质材料质量计算为0.1-10g/100ml。
4.如权利要求1所述一种脂质体载药方法，其特征在于，步骤(2)中，所述待包封药物包括各种化学药物、具有生物活性的多肽等。
5.如权利要求1所述一种脂质体载药方法，其特征在于，步骤(2)中，所述高温是指：当使用相变温度高于室温(25℃)的脂质材料时，温度高于脂质材料相变温度5℃及以上；当使用相变温度低于室温(25℃)的脂质材料时，温度不低于室温；所述低温指0～25℃。
6.如权利要求1所述一种脂质体载药方法，其特征在于，步骤(2)中，所述搅拌一定时间是指：20分钟以上。
7.如权利要求1所述一种脂质体载药方法，其特征在于，步骤(2)中，所述循环操作若干次是指重复操作1次以上。
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CN106474057A (zh) * 2016-12-02 2017-03-08 中国药科大学 一种奥沙利铂热敏长循环脂质体的蔗糖溶液制剂及其制备方法

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杨美燕: "奥沙利铂长循环热敏脂质体研究", 《中国人民解放军军事医学科学院博士学位论文》 *

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