CN111543329A - 一种盐地碱蓬组织培养快速繁殖培养基及培养方法 - Google Patents

一种盐地碱蓬组织培养快速繁殖培养基及培养方法 Download PDF

Info

Publication number
CN111543329A
CN111543329A CN202010582979.3A CN202010582979A CN111543329A CN 111543329 A CN111543329 A CN 111543329A CN 202010582979 A CN202010582979 A CN 202010582979A CN 111543329 A CN111543329 A CN 111543329A
Authority
CN
China
Prior art keywords
culture
suaeda salsa
culture medium
medium
proliferation
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202010582979.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111543329B (zh
Inventor
汪正飞
张本厚
张代臻
牛志韬
丁鸽
李寅森
韦祎
虞舒婷
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Yancheng Teachers University
Original Assignee
Yancheng Teachers University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Yancheng Teachers University filed Critical Yancheng Teachers University
Priority to CN202010582979.3A priority Critical patent/CN111543329B/zh
Publication of CN111543329A publication Critical patent/CN111543329A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111543329B publication Critical patent/CN111543329B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/001—Culture apparatus for tissue culture
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)

Abstract

本发明公开了一种盐地碱蓬组织培养快速繁殖培养基及培养方法，其中培养基包括三个培养阶段的种子萌发培养基、增殖培养基和生根壮苗培养基，其中，种子萌发培养基的配方为：MS+NaCl 0～0.05g/L+蔗糖10～30g/L；增殖培养基的配方为MS+6‑BA 0.5～1.5mg/L+IAA0.1～0.6mg/L+NaCl 0.05～0.2g/L+蔗糖20～40g/L；生根壮苗培养基的配方为：MS+NAA 0.2～0.6mg/L+NaCl 0.3～0.8g/L+蔗糖20～40g/L。利用本发明的培养基配方进行盐地碱蓬种苗的生产，具有生产能力强、培养周期短、增殖系数高、种苗抗性强等特点。

Description

一种盐地碱蓬组织培养快速繁殖培养基及培养方法
技术领域
本发明属于植物细胞工程技术领域，具体涉及一种盐地碱蓬组织培养快速繁殖培养基及培养方法。
背景技术
盐地碱蓬(Suaeda salsa(L.)Pall.)，东北称翅碱蓬，河北称黄须菜，内蒙古称碱葱，为藜科碱蓬属的植物。是一年生的草本植物，一般情况下生长在海滨或者荒漠低处的盐碱荒地上，是一种十分典型的指示盐碱地存在的植物。
盐地碱蓬是一类真盐生的生物，在长期的进化过程中大概形成了一部分独特的耐盐机制，其中的愈伤组织也同样具有很强的抗盐性。并且植物通过细胞水平和整株水平而感知到环境胁迫的变化后，可以生产出相同或者类似的生化和分子层面上的应激作用。因此，不管是在细胞水平上还是在整株水平上，盐地碱蓬在植物耐盐基因工程的研究利用方面都显示出了广阔的应用前景和巨大的利用价值。
植物组织培养有助于提供对细胞、组织、器官培养及其生长和发育的物理和化学要求的基本条件。植物细胞和组织以及控制其发育的能力形成了农业、园艺工业中许多实际应用的基础，并且是植物基因工程的先决条件。通过研究盐地碱蓬植物组织培养再生技术可使盐地碱蓬大量种植在需要其发挥调节生态平衡、控制污染、维持生态系统多样性的功能的地区，对改善盐碱地与海滩环境或进一步进行研究都有很大的价值。
因此，有必要开发一种盐地碱蓬组织培养快速繁殖培养基及培养方法，能够实现盐地碱蓬大量种植在需要其发挥调节生态平衡、控制污染、维持生态系统多样性的功能的地区。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种盐地碱蓬组织培养快速繁殖培养基，使盐地碱蓬的生产能力强、培养周期短、增殖系数高，能够实现盐地碱蓬大量种植在需要其发挥调节生态平衡、控制污染、维持生态系统多样性的功能的地区。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：该盐地碱蓬组织培养快速繁殖培养基包括三个培养阶段的种子萌发培养基、增殖培养基和生根壮苗培养基，其中，所述种子萌发培养基的配方为：MS+NaCl 0～0.05g/L+蔗糖10～30g/L；所述增殖培养基的配方为MS+6-BA 0.5～1.5mg/L+IAA0.1～0.6mg/L+NaCl0.05～0.2g/L+蔗糖20～40g/L；所述生根壮苗培养基的配方为：MS+NAA0.2～0.6mg/L+NaCl 0.3～0.8g/L+蔗糖20～40g/L。其中MS为植物组织培养的基本培养基，三种培养基中的MS的用量是一样的，NaCl为氯化钠，6-BA为6-苄氨基腺嘌呤，IAA为吲哚-3-乙酸，NAA为萘乙酸，所使用的培养基原料市场上较容易采购、培养基配制简单，采用上述技术方案，通过大量实验证实，该盐地碱蓬组织培养快速繁殖培养基能够实现增殖率高，生物产量大，培养周期短；组培苗质量好，种苗健壮，栽培成活率高。
作为本发明的优选技术方案，所述种子萌发培养基的配方为MS+NaCl0.01～0.03g/L+蔗糖15～25g/L；所述增殖培养基的配方为MS+6-BA0.8～1.2mg/L+IAA 0.3～0.5mg/L+NaCl 0.1～0.15g/L+蔗糖25～35g/L；所述生根壮苗培养基的配方为MS+NAA 0.3～0.5mg/L+NaCl 0.4～0.6g/L+蔗糖30～40g/L。
作为本发明的优选技术方案，所述种子萌发培养基的配方为MS+NaCl0.02g/L+蔗糖20g/L；所述增殖培养基的配方为MS+6-BA 1.0mg/L+IAA0.4mg/L+NaCl 0.12g/L+蔗糖30g/L；所述生根壮苗培养基的配方为MS+NAA0.4mg/L+NaCl 0.5g/L+蔗糖35g/L。
作为本发明的优选技术方案，所述种子萌发培养基、增殖培养基和生根壮苗培养基均是以琼脂为支撑物的固体培养基，其中所述琼脂的添加量均为5.5～6.5g/L，所述种子萌发培养基、增殖培养基和生根壮苗培养基pH值均为6.0～6.5。
作为本发明的优选技术方案，所述培养基的制备方法，具体包括以下步骤：
(1)配置MS基本培养基：
(1-1)将氮元素、硫元素、磷元素配置成20×浓度的第一母液，备用；
(1-2)将钙盐配置成200×浓度的第二母液，备用；
(1-3)将铁盐配置成200×浓度的第三母液，备用；
(1-4)将微量元素配置成200×浓度的第四母液，备用；
(1-5)将有机成分配置成200×浓度的第五母液，备用；
(2)分别在蒸馏水中按比例加入第一母液、第二母液、第三母液、第四母液、第五母液、蔗糖、NaCl溶液或/和植物激素，煮沸；
(3)水溶液沸腾后，一边搅拌一边添加琼脂，直到琼脂全部溶解；
(4)pH试纸或pH计检测培养基pH值，利用NaOH溶液和稀HCl溶液调节pH；
(5)将培养基分装到组培瓶中，高温高压灭菌，冷却后备用。其中搅拌为手动搅拌，为了防止琼脂凝固。
作为本发明的优选技术方案，所述步骤(1-1)中的氮元素为NH4NO3和KNO3，所述硫元素为MgSO4·7H2O，所述磷元素KH2PO4，所述钙盐为CaCl2·2H2O，所述铁盐为FeSO4·7H2O和Na2EDTA·2H2O，所述微量元素包括KI、H3BO3、MnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O、Na2MoO4·2H2O、CuSO4·5H2O和CoCl2·6H2O；所述有机成分包括肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇、盐酸硫胺素和甘氨酸；所述步骤(2)中添加的第一母液、第二母液、第三母液、第四母液和第五母液的体积比为10：1：1：1：1，所述植物激素为IAA或NAA。
本发明要解决的技术问题是提供一种盐地碱蓬组织培养的方法，使盐地碱蓬的生产能力强、培养周期短、增殖系数高，能够实现盐地碱蓬大量种植在需要其发挥调节生态平衡、控制污染、维持生态系统多样性的功能的地区。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：该盐地碱蓬组织培养的方法，具体包括以下步骤：
S1外植体选取与预处理：选取盐地碱蓬种子作为外植体，并对所述盐地碱蓬种子进行预处理，备用；
S2种子萌发培养：将步骤S1中预处理后的所述盐地碱蓬种子播种到种子萌发培养基中进行种子萌发培养，种子萌发培养时间为13～18天；
S3增殖培养：待所述种子萌发培养后至植株高度生长为1～2cm后，将根切除后接种到增殖培养基中进行增殖培养，所述增殖培养时间为25～35天，获得增殖苗；
S4生根壮苗培养：将所述增殖培养后株高在3cm以上的所述增殖苗分成单株，置于生根壮苗培养基中进行生根壮苗培养，所述生根壮苗培养时间为30～45天，获得盐地碱蓬生根苗。本发明选用盐地碱蓬种子作为外植体，既方便外植体的获得，又节省了材料避免了浪费。
作为本发明的优选技术方案，所述步骤S1中对所述盐地碱蓬种子进行预处理的方法为：将所述盐地碱蓬种子用滤纸或纱布包裹，放入75％酒精中浸泡20～40秒，用无菌水清洗2～3次，再放入10％的次氯酸钠溶液中浸泡15～30分钟，再采用无菌水清洗3～5次。对盐地碱蓬种子进行预处理有利于后续的培养，缩短培养周期；其中采用次氯酸钠溶液进行浸泡消毒，对后续的培养过程是非常关键的，直接影响后续培养的增殖率以及生根率，通过大量实验验证，该消毒方法对后续的培养最好。
作为本发明的优选技术方案，所述步骤S2、步骤S3和步骤S4中的培养时的环境条件为：温度为25±1℃，光照强度为1800～2000Lx，光照时间为14h/d。
采用本发明的技术方案，其产生的有益效果是：利用本发明的培养基配方进行盐地碱蓬种苗的生产，具有生产能力强、培养周期短、增殖系数高、种苗抗性强等特点，由于采用组织培养的无性繁殖技术，不但能够保持母本的优良性状，而且能够获得脱毒种苗，可以作为原种使用；适合盐地碱蓬规模化培育生产，从而使盐地碱蓬大量种植在需要其发挥调节生态平衡、控制污染、维持生态系统多样性的功能的地区。
附图说明
图1是利用本发明培养基配方培养30d的盐地碱蓬增殖苗；
图2为利用本发明培养基配方培养40d的盐地碱蓬生根苗。
具体实施方式
实施例1：该盐地碱蓬组织培养的方法，具体包括以下步骤：
S1外植体选取与预处理：选取盐地碱蓬种子作为外植体，并对所述盐地碱蓬种子进行预处理，预处理的方法为：将所述盐地碱蓬种子用滤纸或纱布包裹，放入75％酒精中浸泡30秒，用无菌水清洗2次，再放入10％的次氯酸钠溶液中浸泡20分钟，再采用无菌水清洗4次，备用；
S2种子萌发培养：将步骤S1中预处理后的所述盐地碱蓬种子播种到种子萌发培养基中进行种子萌发培养，种子萌发培养时的环境条件为：温度为25±1℃，光照强度为1800～2000Lx，光照时间为14h/d，种子培养基的配方为：MS+NaCl0.02g/L+蔗糖20g/L+琼脂5.5g/L pH 6.0，种子萌发培养时间为15天；
S3增殖培养：待所述种子萌发培养后至植株高度生长为1～2cm后，将根切除后接种到增殖培养基中进行增殖培养，所述增殖培养时的环境条件为：温度为25±1℃，光照强度为1800～2000Lx，光照时间为14h/d，增殖培养基配方为：MS+6-BA 1.0mg/L+IAA 0.4mg/L+NaCl 0.12g/L+蔗糖30g/L+琼脂5.5g/L pH 6.2，所述增殖培养时间为30天，获得增殖苗，如图1所示；
S4生根壮苗培养：将所述增殖培养后株高在3cm以上的所述增殖苗分成单株，置于生根壮苗培养基中进行生根壮苗培养，生根壮苗培养时的环境条件为：温度为25±1℃，光照强度为1800～2000Lx，光照时间为14h/d，生根壮苗培养基配方为：MS+NAA 0.4mg/L+NaCl0.5g/L+蔗糖35g/L+琼脂5.5g/L pH 6.5，所述生根壮苗培养时间为40天，获得盐地碱蓬生根苗，生根苗株高6～10厘米，根长3～5厘米，如图2所示。
实施例2：该盐地碱蓬组织培养的方法，具体包括以下步骤：
S1外植体选取与预处理：选取盐地碱蓬种子作为外植体，并对所述盐地碱蓬种子进行预处理，预处理的方法为：将所述盐地碱蓬种子用滤纸或纱布包裹，放入75％酒精中浸泡30秒，用无菌水清洗2次，再放入10％的次氯酸钠溶液中浸泡20分钟，再采用无菌水清洗4次，备用；
S2种子萌发培养：将步骤S1中预处理后的所述盐地碱蓬种子播种到种子萌发培养基中进行种子萌发培养，种子萌发培养时的环境条件为：温度为25±1℃，光照强度为1800～2000Lx，光照时间为14h/d，种子培养基的配方为：MS+NaCl0.05g/L+蔗糖30g/L+琼脂5.5g/L pH 6.0，种子萌发培养时间为15天；
S3增殖培养：待所述种子萌发培养后至植株高度生长为1～2cm后，将根切除后接种到增殖培养基中进行增殖培养，所述增殖培养时的环境条件为：温度为25±1℃，光照强度为1800～2000Lx，光照时间为14h/d，增殖培养基配方为：MS+6-BA 1.5mg/L+IAA 0.6mg/L+NaCl 0.2g/L+蔗糖40g/L+琼脂5.5g/L pH 6.2，所述增殖培养时间为30天，获得增殖苗；
S4生根壮苗培养：将所述增殖培养后株高在3cm以上的所述增殖苗分成单株，置于生根壮苗培养基中进行生根壮苗培养，生根壮苗培养时的环境条件为：温度为25±1℃，光照强度为1800～2000Lx，光照时间为14h/d，生根壮苗培养基配方为：MS+NAA 0.6mg/L+NaCl0.8g/L+蔗糖40g/L+琼脂5.5g/L pH 6.5，所述生根壮苗培养时间为40天，获得盐地碱蓬生根苗，生根苗株高5～9厘米，根长3～4厘米。
实施例3：该盐地碱蓬组织培养的方法，具体包括以下步骤：
S1外植体选取与预处理：选取盐地碱蓬种子作为外植体，并对所述盐地碱蓬种子进行预处理，预处理的方法为：将所述盐地碱蓬种子用滤纸或纱布包裹，放入75％酒精中浸泡30秒，用无菌水清洗2次，再放入10％的次氯酸钠溶液中浸泡20分钟，再采用无菌水清洗4次，备用；
S2种子萌发培养：将步骤S1中预处理后的所述盐地碱蓬种子播种到种子萌发培养基中进行种子萌发培养，种子萌发培养时的环境条件为：温度为25±1℃，光照强度为1800～2000Lx，光照时间为14h/d，种子培养基的配方为：MS+蔗糖10～30g/L+琼脂5.5g/L pH6.0，种子萌发培养时间为15天；
S3增殖培养：待所述种子萌发培养后至植株高度生长为1～2cm后，将根切除后接种到增殖培养基中进行增殖培养，所述增殖培养时的环境条件为：温度为25±1℃，光照强度为1800～2000Lx，光照时间为14h/d，增殖培养基配方为：MS+6-BA 0.5mg/L+IAA 0.1mg/L+NaCl 0.05g/L+蔗糖20g/L+琼脂5.5g/L pH 6.2，所述增殖培养时间为30天，获得增殖苗；
S4生根壮苗培养：将所述增殖培养后株高在3cm以上的所述增殖苗分成单株，置于生根壮苗培养基中进行生根壮苗培养，生根壮苗培养时的环境条件为：温度为25±1℃，光照强度为1800～2000Lx，光照时间为14h/d，生根壮苗培养基配方为：MS+NAA 0.2mg/L+NaCl0.3g/L+蔗糖20g/L+琼脂5.5g/L pH 6.5，所述生根壮苗培养时间为40天，获得盐地碱蓬生根苗，生根苗株高7～10厘米，根长4～5厘米。
上述实施例1～3中的三种培养基的制备方法，具体包括以下步骤：
(1)配置MS基本培养基：
(1-1)将氮元素、硫元素、磷元素配置成20×浓度的第一母液，备用；其中氮元素为NH4NO3和KNO3，所述硫元素为MgSO4·7H2O，所述磷元素KH2PO4，
(1-2)将钙盐配置成200×浓度的第二母液，备用；其中钙盐为CaCl2·2H2O；
(1-3)将铁盐配置成200×浓度的第三母液，备用；其中铁盐为FeSO4·7H2O和Na2EDTA·2H2O；
(1-4)将微量元素配置成200×浓度的第四母液，备用；其中微量元素包括KI、H3BO3、MnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O、Na2MoO4·2H2O、CuSO4·5H2O和CoCl2·6H2O
(1-5)将有机成分配置成200×浓度的第五母液，备用；其中有机成分包括肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇、盐酸硫胺素和甘氨酸；
(2)分别在蒸馏水中按比例加入第一母液、第二母液、第三母液、第四母液、第五母液、蔗糖、NaCl溶液或/和植物激素，煮沸；其中添加的第一母液的体积为50ml，第二母液的体积为5mL，第三母液的体积为5mL，第四母液的体积为5mL，第五母液的体积为5mL；植物激素为IAA或NAA；其中第一母液中的NH4NO3的浓度为33.0g/L，KNO3的浓度为38.0g/L，MgSO4·7H2O的浓度为7.4g/L，KH2PO4的浓度为3.4g/L；
第二母液中的CaCl2·2H2O的浓度为88.0g/L；
第三母液中的FeSO4·7H2O的浓度为5560mg/L、Na2EDTA·2H2O的浓度为7460mg/L；
第四母液中的KI的浓度为166mg/L、H3BO3的浓度为1240mg/L、MnSO4·4H2O的浓度为4460mg/L、ZnSO4·7H2O的浓度为1720mg/L、Na2MoO4·2H2O的浓度为50mg/L、CuSO4·5H2O的浓度为5mg/L、CoCl2·6H2O的浓度为5mg/L；第五母液中的肌醇的浓度为20g/L、烟酸的浓度为100mg/L、盐酸吡哆醇的浓度为100mg/L、盐酸硫胺素的浓度为100mg/L、甘氨酸的浓度为400mg/L；
(3)水溶液沸腾后，一边搅拌一边添加琼脂，直到琼脂全部溶解；
(4)pH试纸或pH计检测培养基pH值，利用NaOH溶液和稀HCl溶液调节pH；
(5)将培养基分装到组培瓶中，高温高压灭菌(115kPa，121℃)，灭菌处理20min，冷却后备用。
其中种子萌发培养基的配方为：MS+NaCl 0～0.05g/L+蔗糖10～30g/L；所述增殖培养基的配方为MS+6-BA 0.5～1.5mg/L+IAA 0.1～0.6mg/L+NaCl0.05～0.2g/L+蔗糖20～40g/L；所述生根壮苗培养基的配方为：MS+NAA0.2～0.6mg/L+NaCl 0.3～0.8g/L+蔗糖20～40g/L；这三种培养基中的MS的用量是一样的。
最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。

Claims (9)

1.一种盐地碱蓬组织培养快速繁殖培养基，其特征在于，该盐地碱蓬组织培养快速繁殖培养基包括三个培养阶段的种子萌发培养基、增殖培养基和生根壮苗培养基，其中，所述种子萌发培养基的配方为：MS+NaCl 0～0.05g/L+蔗糖10～30g/L；所述增殖培养基的配方为MS+6-BA 0.5～1.5mg/L+IAA 0.1～0.6mg/L+NaCl 0.05～0.2g/L+蔗糖20～40g/L；所述生根壮苗培养基的配方为：MS+NAA 0.2～0.6mg/L+NaCl 0.3～0.8g/L+蔗糖20～40g/L。
2.根据权利要求1所述的盐地碱蓬组织培养快速繁殖培养基，其特征在于，所述种子萌发培养基的配方为MS+NaCl 0.01～0.03g/L+蔗糖15～25g/L；所述增殖培养基的配方为MS+6-BA 0.8～1.2mg/L+IAA 0.3～0.5mg/L+NaCl 0.1～0.15g/L+蔗糖25～35g/L；所述生根壮苗培养基的配方为MS+NAA 0.3～0.5mg/L+NaCl 0.4～0.6g/L+蔗糖30～40g/L。
3.根据权利要求1所述的盐地碱蓬组织培养快速繁殖培养基，其特征在于，所述种子萌发培养基的配方为MS+NaCl 0.02g/L+蔗糖20g/L；所述增殖培养基的配方为MS+6-BA1.0mg/L+IAA 0.4mg/L+NaCl 0.12g/L+蔗糖30g/L；所述生根壮苗培养基的配方为MS+NAA0.4mg/L+NaCl 0.5g/L+蔗糖35g/L。
4.根据权利要求1-3任一项所述的盐地碱蓬组织培养快速繁殖培养基，其特征在于，所述种子萌发培养基、增殖培养基和生根壮苗培养基均是以琼脂为支撑物的固体培养基，其中所述琼脂的添加量均为5.5～6.5g/L，所述种子萌发培养基、增殖培养基和生根壮苗培养基pH值均为6.0～6.5。
5.根据权利要求4所述的盐地碱蓬组织培养快速繁殖培养基，其特征在于，所述培养基的制备方法，具体包括以下步骤：
(1)配置MS基本培养基：
(1-1)将氮元素、硫元素、磷元素配置成20×浓度的第一母液，备用；
(1-2)将钙盐配置成200×浓度的第二母液，备用；
(1-3)将铁盐配置成200×浓度的第三母液，备用；
(1-4)将微量元素配置成200×浓度的第四母液，备用；
(1-5)将有机成分配置成200×浓度的第五母液，备用；
(2)分别在蒸馏水中按比例加入第一母液、第二母液、第三母液、第四母液、第五母液、蔗糖、NaCl溶液或/和植物激素，煮沸；
(3)水溶液沸腾后，一边搅拌一边添加琼脂，直到琼脂全部溶解；
(4)pH试纸或pH计检测培养基pH值，利用NaOH溶液和稀HCl溶液调节pH；
(5)将培养基分装到组培瓶中，高温高压灭菌，冷却后备用。
6.根据权利要求5所述的盐地碱蓬组织培养快速繁殖培养基，其特征在于，所述步骤(1-1)中的氮元素为NH4NO3和KNO3，所述硫元素为MgSO4·7H2O，所述磷元素KH2PO4，所述钙盐为CaCl2·2H2O，所述铁盐为FeSO4·7H2O和Na2EDTA·2H2O，所述微量元素包括KI、H3BO3、MnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O、Na2MoO4·2H2O、CuSO4·5H2O和CoCl2·6H2O；所述有机成分包括肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇、盐酸硫胺素和甘氨酸；所述步骤(2)中添加的第一母液、第二母液、第三母液、第四母液和第五母液的体积比为10：1：1：1：1，所述植物激素为IAA或NAA。
7.一种使用权利要求1-6所述的盐地碱蓬组织培养快速繁殖培养基进行盐地碱蓬组织培养的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
S1外植体选取与预处理：选取盐地碱蓬种子作为外植体，并对所述盐地碱蓬种子进行预处理，备用；
S2种子萌发培养：将步骤S1中预处理后的所述盐地碱蓬种子播种到种子萌发培养基中进行种子萌发培养，种子萌发培养时间为13～18天；
S3增殖培养：待所述种子萌发培养后至植株高度生长为1～2cm后，将根切除后接种到增殖培养基中进行增殖培养，所述增殖培养时间为25～35天，获得增殖苗；
S4生根壮苗培养：将所述增殖培养后株高在3cm以上的所述增殖苗分成单株，置于生根壮苗培养基中进行生根壮苗培养，所述生根壮苗培养时间为30～45天，获得盐地碱蓬生根苗。
8.根据权利要求7所述的盐地碱蓬组织培养的方法，其特征在于，所述步骤S1中对所述盐地碱蓬种子进行预处理的方法为：将所述盐地碱蓬种子用滤纸或纱布包裹，放入75％酒精中浸泡20～40秒，用无菌水清洗2～3次，再放入10％的次氯酸钠溶液中浸泡15～30分钟，再采用无菌水清洗3～5次。
9.根据权利要求8所述的盐地碱蓬组织培养的方法，其特征在于，所述步骤S2、步骤S3和步骤S4中的培养时的环境条件为：温度为25±1℃，光照强度为1800～2000Lx，光照时间为14h/d。
CN202010582979.3A 2020-06-23 2020-06-23 一种盐地碱蓬组织培养快速繁殖培养基及培养方法 Active CN111543329B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010582979.3A CN111543329B (zh) 2020-06-23 2020-06-23 一种盐地碱蓬组织培养快速繁殖培养基及培养方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010582979.3A CN111543329B (zh) 2020-06-23 2020-06-23 一种盐地碱蓬组织培养快速繁殖培养基及培养方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111543329A true CN111543329A (zh) 2020-08-18
CN111543329B CN111543329B (zh) 2022-04-22

Family

ID=71997481

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010582979.3A Active CN111543329B (zh) 2020-06-23 2020-06-23 一种盐地碱蓬组织培养快速繁殖培养基及培养方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111543329B (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113349057A (zh) * 2021-07-12 2021-09-07 锡林郭勒职业学院 一种盐碱地提高牧草幼苗耐盐生长能力的方法
CN113796185A (zh) * 2021-08-24 2021-12-17 北京市园林绿化集团有限公司 一种耐盐碱植物南方碱蓬的栽培养护方法及其培养液

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060195948A1 (en) * 1998-03-18 2006-08-31 Eduardo Blumwald High salt plants and uses for bioremediation
WO2012040353A2 (en) * 2010-09-21 2012-03-29 Donald Danforth Plant Science Center Metabolic control of seed germination
CN102719503A (zh) * 2012-07-05 2012-10-10 天津科技大学 一种利用碱蓬细胞悬浮培养生产脯氨酸的方法
CN107278909A (zh) * 2017-08-22 2017-10-24 南京工业大学大丰海洋产业研究院 一种碱地蒲公英快速繁殖培养基配方
CN108002926A (zh) * 2017-12-28 2018-05-08 大连海洋大学 一种培养翅碱蓬的营养液
US20190153478A1 (en) * 2017-10-25 2019-05-23 Sheng Wang Alkaline plant salt and method for extracting the same

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060195948A1 (en) * 1998-03-18 2006-08-31 Eduardo Blumwald High salt plants and uses for bioremediation
WO2012040353A2 (en) * 2010-09-21 2012-03-29 Donald Danforth Plant Science Center Metabolic control of seed germination
CN102719503A (zh) * 2012-07-05 2012-10-10 天津科技大学 一种利用碱蓬细胞悬浮培养生产脯氨酸的方法
CN107278909A (zh) * 2017-08-22 2017-10-24 南京工业大学大丰海洋产业研究院 一种碱地蒲公英快速繁殖培养基配方
US20190153478A1 (en) * 2017-10-25 2019-05-23 Sheng Wang Alkaline plant salt and method for extracting the same
CN108002926A (zh) * 2017-12-28 2018-05-08 大连海洋大学 一种培养翅碱蓬的营养液

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
张明菊: "《园林植物遗传育种》", 31 July 2001, 中国农业出版社 *
王晓琴等: "《中药资源与开发综合实验指导》", 30 April 2020, 华中科技大学出版社 *
赵术珍等: "真盐生植物盐地碱蓬茎尖组织培养和植株再生", 《山东师范大学学报(自然科学版)》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113349057A (zh) * 2021-07-12 2021-09-07 锡林郭勒职业学院 一种盐碱地提高牧草幼苗耐盐生长能力的方法
CN113349057B (zh) * 2021-07-12 2022-11-29 锡林郭勒职业学院 一种盐碱地提高牧草幼苗耐盐生长能力的方法
CN113796185A (zh) * 2021-08-24 2021-12-17 北京市园林绿化集团有限公司 一种耐盐碱植物南方碱蓬的栽培养护方法及其培养液

Also Published As

Publication number Publication date
CN111543329B (zh) 2022-04-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111543329B (zh) 一种盐地碱蓬组织培养快速繁殖培养基及培养方法
CN103992972A (zh) 一种用于苗木种植的复合微生态制剂
CN103583369B (zh) 一种用于大麦小孢子培养愈伤组织诱导的培养基
CN101720670B (zh) 旱半夏组织培养快速繁殖方法
CN102391960B (zh) 一种氯酚节杆菌及其应用
CN111149704B (zh) 一种粉葛单芽茎段增殖及一步成苗培养方法
CN105130685A (zh) 一种含γ-聚谷氨酸有机肥的制备方法
CN103740607B (zh) 一种摩加夫芽胞杆菌及微生物菌剂和它们的应用
CN100381045C (zh) 一种山桐子的组织培养方法
CN109678597A (zh) 抗盐液体肥及其制备方法
CN106665044A (zh) 一种富硒西红柿的培育方法
CN106831260A (zh) 酿酒葡萄园土壤调理剂及其制备方法
CN107371712A (zh) 一种富硒一串铃冬瓜种植方法
CN104447054A (zh) 生物有机茶叶专用肥
CN102796674B (zh) 寡雄腐霉发酵液制备方法
CN111631133A (zh) 快速培育耐盐芦竹种苗的方法
CN1299584A (zh) 盐碱地水稻钵育大苗抗逆栽培技术
CN108285915A (zh) 赤霉酸的发酵方法
CN111647527B (zh) 一种利用枯草芽孢杆菌改良盐碱土和保肥的方法
CN106561422B (zh) 一种适用于甜瓜袋式栽培的基质及其应用
CN111718888A (zh) 一种提高甘草悬浮培养细胞中甘草酸含量的培养方法
CN111234841A (zh) 一种防病虫害新型土壤改良剂的制备和应用
CN106977292B (zh) 一种含钙水溶型复合肥料及其制备工艺
CN116814459A (zh) 一种兼具诱导黄瓜促生和耐盐碱功能的微生物菌株及其施用配方
CN101695269B (zh) 一种马缨花漂浮育苗方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant