CN111542314B - 神经退行性疾病的治疗剂 - Google Patents

Abstract

本公开提供了治疗神经退行性疾病的方法，其包括施用亮氨酸、乙酰‑亮氨酸或其药学上可接受的盐。

Description

神经退行性疾病的治疗剂

本申请要求享有2017年2月16日提交的UK 1702551.1、2017年4月10日提交的UK1705766.2、2017年4月28日提交的UK 1706867.7、2017年8月11日提交的国际申请PCT/IB2017/054929以及2017年10月18日提交的美国临时专利申请62/574,137的优先权；所有这些文献通过引用整体并入本文。

神经退行性疾病是那些影响神经元的疾病。退行性过程可涉及神经元结构的进行性损失、神经元功能的进行性损失、或进行性神经元细胞死亡。这种进行性神经退行经常导致身体残疾和精神恶化。许多神经退行性疾病是严重的进行性和不间断疾病，并且治愈性治疗方法很少(如果有的话)。

尽管神经退行过程尚未得到完全了解，但认为显示具有广泛神经保护作用的治疗剂通常适用于神经退行性疾病。此外，许多神经退行性疾病与溶酶体功能障碍有关。这包括神经退行性溶酶体贮积病(LSD)和许多其他神经退行性疾病，如阿尔茨海默病和帕金森病，其中已提出与溶酶体缺陷的关联。

本公开解决对为神经退行性疾病开发改进且广泛适用的治疗方法的需求。特别地，本公开描述了用于治疗受试者中神经退行性疾病、或神经退行性疾病的一种或多种症状的亮氨酸和乙酰-亮氨酸。神经退行性疾病可以但不必与溶酶体功能障碍相关。

在一个实施方式中，本公开包括亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐，其用于治疗患有神经退行性疾病的受试者的不宁腿综合征(RLS)的方法中。在一个实施方式中，神经退行性疾病是帕金森综合征。在一个实施方式中，神经退行性疾病是运动神经元病。在一个实施方式中，神经退行性疾病是帕金森病。在一个实施方式中，神经退行性疾病与多巴胺能系统功能障碍相关。

在一个实施方式中，亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐用于治疗有需要的受试者的不宁腿综合征(RLS)的方法中，其中所述RLS是神经退行性疾病。

在一个实施方式中，公开了亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐，其用于治疗有需要的受试者的神经退行性疾病或者与神经退行性疾病有关的一种或多种症状。在一个实施方式中，神经退行性疾病不是小脑性共济失调或C型尼曼-皮克病。

在本公开的一个实施方式中，公开了亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐，其用于治疗有需要的受试者的神经退行性疾病的方法中，其中，所述受试者无症状。

在另一个实施方式中，公开了亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐，其用于延迟神经退行性疾病或神经退行性疾病的一种或多种症状的发作的方法中，所述疾病或症状原本预期会按照典型疾病进展显现。

在又一个实施方式中，本公开包括了亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐，其用于治疗有需要的受试者的神经退行性疾病或与神经退行性疾病相关的一种或多种症状的方法中，其中，所述方法包括对所述有需要的受试者施用治疗有效量的亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐一段持续时间，所述持续时间选自至少约3个月、至少约6个月、至少约1年、至少约2年和至少约5年。

在一个实施方式中，本公开内容描述了亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐，其用于与典型疾病进展相比延迟神经退行性疾病或与神经退行性疾病相关的一种或多种症状随时间的进展的方法中，其中，所述方法包括对有需要的受试者施用治疗有效量的亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐一段持续时间，所述持续时间选自至少约3个月、至少约6个月、至少约1年、至少约2年和至少约5年。

在又一个实施方式中，公开了亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐，其用于逆转神经退行性疾病或与神经退行性疾病相关的一种或多种症状随时间的进展的方法中，其中，所述方法包括对有需要的受试者施用治疗有效量的亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐一段持续时间，所述持续时间选自至少约3个月、至少约6个月、至少约1年、至少约2年和至少约5年。

在另一个实施方式中，公开了亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐，其用于随时间改善有需要的受试者的神经退行性疾病的生物化学标志物的方法中，其中，所述方法包括对所述有需要的受试者施用治疗有效量的亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐一段持续时间，所述持续时间选自至少约3个月、至少约6个月、至少约1年、至少约2年和至少约5年。

在另一个实施方式中，本公开内容包括亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐，其用于在有需要的受试者中降低神经退行性疾病的严重性、或降低与神经退行性疾病相关的一种或多种已有症状的严重性或消除与神经退行性疾病相关的一种或多种已有症状的方法中。在一个实施方式中，神经退行性疾病不是小脑性共济失调或C型尼曼匹克病。

在又一个实施方式中，本公开包括亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐，其用于在患有、疑似患有或有风险患有神经退行性疾病的受试者中提供神经保护的方法中，其中，所述方法包括对所述受试者施用治疗有效量的亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐一段持续时间，所述持续时间选自至少约3个月、至少约6个月、至少约1年、至少约2年和至少约5年。

在一个实施方式中，本公开包括亮氨酸或其药学上可接受的盐，其用于在本文公开的方法中直接递送至中枢神经系统，其中所述直接递送是通过选自鼻内施用、心室内施用、鞘内施用、颅内施用和经鼻粘膜移植施用的施用进行。

在一个实施方式中，公开了亮氨酸或其药学上可接受的盐，其用于在本文公开的方法中直接递送至中枢神经系统，其中所述直接递送是通过鞘内施用进行。

本公开的其他实施方式包括亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐，其用于延迟受试者的神经退行性疾病或溶酶体贮积病(LSD)进展的方法中。在另一实施方式中，亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐用于在患有神经退行性疾病或LSD的受试者中提供神经保护的方法中。在一个实施方式中，亮氨酸或乙酰-亮氨酸是外消旋体形式、对映体过量的L对映体或对映体过量的D对映体。在另一个实施方式中，该方法还包括施用乙酰-亮氨酸，剂量为1.5克至10克/天。另外，在一个实施方式中，该方法还包括施用亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐以治疗持续两周或更长时间。例如，该方法包括在所要治疗的疾病或病症的症状发作之前，施用亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐。而在另一个实施方式中，该方法还包括施用用于预防或治疗所要治疗的疾病或病症的其他疗法或药剂。在本公开的一个实施方式中，提供了用于延迟受试者中的神经退行性疾病或LSD进展的试剂盒，该试剂盒包括：用于诊断或预后神经退行性疾病或LSD的组件，以及亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐。例如，试剂盒包括：用于诊断或预后神经退行性疾病或LSD的组件，以及亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐。在本公开的另一实施方式中，提供了亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐作为患有神经退行性疾病或LSD的受试者中的神经保护剂的应用。在所述方法、试剂盒或应用的另一实施方式中，神经退行性疾病与溶酶体贮积缺陷有关。在所述方法、试剂盒或应用的一个实施方式中，神经退行性疾病是酒精中毒、亚历山大氏病、阿尔珀病、阿尔茨海默病、肌萎缩侧索硬化症(ALS)、共济失调毛细血管扩张症、神经元蜡样脂褐素沉积症、Batten病、牛海绵状脑病(BSE)、卡纳万病、脑性麻痹、科凯恩综合征、皮质基底节变性、克罗伊茨费尔特-雅各布病、额颞叶变性、亨廷顿氏病、HIV相关性痴呆、肯尼迪病(Kennedy's disease)、路易体痴呆症、神经包柔螺旋体病、马-约病、多系统萎缩、多发性硬化症、多种硫酸酯酶缺乏症、粘脂贮积病、发作性睡病、尼曼-匹克病、帕金森病、皮克氏病(Pick's disease)、庞皮病、原发性脊髓侧索硬化、朊病毒病、进行性核上性麻痹、雷夫素姆氏病(Refsum's disease)、谢耳德氏病(Schilder'sdisease)、继发于恶性贫血的脊髓亚急性联合变性、巴腾病(Spielmeyer-Vogt-Sjogren-Batten disease)、脊髓小脑性共济失调、脊髓性肌萎缩症、斯-里-奥三氏病(Steele-Richardson-Olszewski disease)或脊髓痨(Tabes dorsalis)。在所述方法、试剂盒或应用的其他实施方式中，LSD是C型尼曼-匹克病(NPC1和/或NPC2缺陷)、斯-李-奥综合征(SLOS)、胆固醇合成的先天性错误、丹吉尔病(Tangier disease)、佩-梅二氏病(Pelizaeus-Merzbacher disease)、神经元蜡样脂褐质沉着症、原发性糖鞘脂病、法伯病(Farberdisease)或多种硫酸酯酶缺乏症。例如，在所述方法、试剂盒或应用中，原发性糖鞘脂病是戈谢病(Gaucher disease)、法布里病(Fabry disease)、GM1神经节苷脂贮积病、GM2神经节苷脂贮积病、克拉伯病或异染性脑白质营养不良(MLD)。再例如，在所述方法、试剂盒或应用中，LSD是NPC、泰-萨克斯病、Sandhoff病、GM1神经节苷脂贮积病、法布里病、神经退行性粘多糖贮积病、MPS I、MPS IH、MPS IS、MPS II、MPS III、MPS IIIA、MPS IIIB、MPS IIIC、MPSHID、MPS IV、MPS IV A、MPS IV B、MPS VI、MPS VII、MPS IX、具有继发性溶酶体介入的疾病、SLOS或丹吉尔病。在所述方法、试剂盒或应用的其他实施方式中，神经退行性疾病是小脑性共济失调、尼曼-匹克病、帕金森综合征(parkinsonism)、神经病理性戈谢病、Sandhoff病、Louis-Barr综合征、阿尔茨海默病、帕金森病(Parkinson’s disease)、多系统萎缩、额颞叶痴呆或下半身帕金森氏综合征。在所述方法、试剂盒或应用的又一实施方式中，神经退行性疾病是尼曼-匹克病、C型尼曼-匹克病、A型尼曼匹克病、泰-萨克斯病、Sandhoff病、肌萎缩侧索硬化症(ALS)、多系统性萎缩小脑型(MSA-C)、伴有帕金森综合征的额颞叶痴呆、皮质基底节变性综合征、进行性核上性麻痹或小脑下跳性眼球震颤。在所述方法、试剂盒或应用的一个实施方式中，LSD是尼曼-匹克病、C型尼曼-匹克病、A型尼曼-匹克病、泰-萨克斯病、Sandhoff病或II型粘脂贮积病。

附图说明

图1显示了经治疗的(图1A)和未经治疗的(图1B)9周龄Npc1^-/-小鼠的照片。

图2A和2B显示了在从断奶起经和未经乙酰-DL-亮氨酸治疗的情况下Npc1^-/-小鼠与野生型(Npc1^+/+)小鼠相比的重量数据。

图3A-3G显示了在从断奶起经和未经乙酰-DL-亮氨酸治疗的情况下Npc1^-/-小鼠与野生型(Npc1^+/+)小鼠相比的步态分析数据。例如，图3A-3C分别显示了对角支撑、步频和步序列数据。图3D和3E示出了前爪(FP)数据(图D中为站立平均数和步伐周期；图E中为占空比)。图3F和3G示出了后爪(HP)数据(图F中为站立平均数和步伐周期；图G中为占空比)。

图4A-4H显示了在从断奶起经和未经乙酰-DL-亮氨酸治疗的情况下Npc1^-/-小鼠与野生型(Npc1^+/+)小鼠相比的运动功能分析数据。中心直立、活动性、直立和前至后(FR)计数分别示于图4A-4D中。活动时间、移动时间、直立时间和总人工直立计数分别示于图4E-4H中。

图5显示用乙酰-DL-亮氨酸(0.1g/kg，3周龄起)的治疗与Npc1-/-小鼠寿命的小幅但统计学上显著的增加相关。

图6A和6B显示了用乙酰-DL-亮氨酸处理后非神经元NPC细胞中溶酶体体积的减少。图6C-6H分别显示了用乙酰-DL-亮氨酸处理对NPA、MLII、MPS IIIB、天冬氨酰葡糖胺尿、MLIIIA和MPS VII患者成纤维细胞中溶酶体体积的影响。

图7A显示了表示未经治疗或经乙酰-亮氨酸治疗的野生型和Sandhoff小鼠的死亡率的存活曲线。图7B显示未经治疗的和经乙酰-亮氨酸治疗的Sandhoff模型小鼠的跨杆分数(Bar crossing score)。图7C显示了在12周龄时评估的未经治疗的和经乙酰-亮氨酸治疗的Sandhoff小鼠的步伐周期时间。

图8A-8C显示了用乙酰-DL-亮氨酸处理对GM2神经节苷脂贮积病患者成纤维细胞中的糖鞘脂(GSL)水平的影响(分别为泰-萨克斯病、Sandhoff病和泰-萨克斯病的AB变体)。

图9显示了被诊断患有皮质基底节变性综合征的75岁男性患者在用乙酰-亮氨酸治疗之前和治疗期间的步态分析矩阵，其中矩阵中较少粉红色区域表明与治疗前相比有所改善。

图10A和10B分别显示了用乙酰-DL-亮氨酸的治疗随时间对10名NPC患者的总体临床严重性评分(CSS)和总体年度严重性增量评分(ASIS)的影响。

图11A-11J显示了用乙酰-DL-亮氨酸的治疗随时间对于10名NPC患者中的每一个的CSS子分数的影响。

图12A和12B分别显示了用乙酰-DL-亮氨酸处理野生型NPC1^-/-小鼠对淀粉样蛋白前体蛋白C末端片段(APP-CTF)水平和微管相关蛋白1A/1B-轻链3-磷脂酰乙醇胺缀合物(LC3-II)水平的影响。

图13A-13C显示了被诊断患有下跳性眼球震颤综合征的患者在用乙酰-DL-亮氨酸治疗后可通过视觉固定来部分地抑制眼球震颤。

图14显示了分别用乙酰-DL-亮氨酸、乙酰-D-亮氨酸、乙酰-L-亮氨酸、DL-亮氨酸、D-亮氨酸和L-亮氨酸处理后NPC中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中溶酶体体积的减少。

具体实施方式

外消旋形式的乙酰-亮氨酸(乙酰-DL-亮氨酸)及其盐可有效治疗各种起源的眩晕，尤其是梅尼埃尔病眩晕(Meniere’s vertigo)和炎症(前庭神经炎)或毒性起源的眩晕。例如，乙酰-亮氨酸由Pierre Fabre Medicament以外消旋形式销售，作为抗眩晕药物，名称为不同作者报告的/>临床结果表明95％以上病例中眩晕症状改善，包括眩晕发作的消失。

自1957年以来，在法国已使用乙酰-DL-亮氨酸治疗急性眩晕，并且具有极好的安全性，但是在长期使用中其长期安全性尚未确定。尽管有许多假设，包括膜电位的稳定，但其药理学和电生理学作用模式仍然不清楚。(Vibert等(2001)Eur J Neurosci；13(4):735-48；Ferber-Viart等(2009)Audiol Neurootol；14(1):17-25)。在急性单侧迷路切除术的大鼠模型中的FDG-μPET研究(Zwergal等(2016)Brain Struct Funct；221(1):159-70)显示出L对映体(N-乙酰-L-亮氨酸)对于前庭小脑激活和后外侧丘脑失活导致的姿势补偿的显著效果(Gunther等(2015)PLoS One；10(3):e0120891)。使用乙酰-DL-亮氨酸对小脑性共济失调的症状改善示于小脑患者的系列病例中(Strupp等(2013)J Neurol；260(10):2556-61)。另一个系列病例没有发现益处(Pelz等(2015)J Neurol；262(5):1373-5)。量化步态分析显示，乙酰-DL-亮氨酸改善了有小脑性共济失调的患者的颞侧步态变异性(Schniepp等(2015)Cerebellum；3:8)。在一项涉及12名C型尼曼-匹克病(NPC)患者的为期一个月的研究中，显示了共济失调的症状改善(Bremova等(2015)Neurology；85(16):1368-75)。此外，对服用了乙酰-DL-亮氨酸的共济失调患者的PET研究表明在应答者的中脑和下脑干中代谢增加(Becker-Bense等(2015)Abstract EAN)。

然而，并不知道乙酰-亮氨酸能够治疗神经退行性疾病，神经退行性疾病通常在几年至几十年的过程中进展。本公开令人惊讶地表明，乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐可以用于通过以下方式治疗有需要的受试者的神经退行性疾病的方法中：例如，延迟神经退行性疾病或神经退行性疾病的一种或多种症状的发作来，所述疾病或症状原本预期会按照典型疾病进展而显现，和/或与典型疾病进展相比延迟或逆转神经退行性疾病或神经退行性疾病的一种或多种症状的进展(例如长期进展)。

如本公开所提出的，还已经发现，亮氨酸或其药学上可接受的盐可以用于通过以下方式治疗有需要的受试者的神经退行性疾病的方法中：例如，延迟神经退行性疾病或神经退行性疾病的一种或多种症状的发作来，所述疾病或症状原本预期会按照典型疾病进展而显现，和/或与典型疾病进展相比延迟或逆转神经退行性疾病或神经退行性疾病的一种或多种症状的进展(例如长期进展)。

本公开内容的这些示例性应用以及本文所述的其他应用是完全出乎意料的，因为这些益处此前没有观察到，并且从现有技术的教导无法推导出。正如对广泛的神经退行性疾病展示出有效性的实施例所证明的那样，发明人认为，亮氨酸和乙酰-亮氨酸作为神经保护剂起作用，因此抑制原本预期要出现的神经退行。此外，许多神经退行性疾病与溶酶体贮积的缺陷有关，并且溶酶体功能障碍(例如异常高水平的溶酶体贮积)可能是神经元功能障碍和死亡的原因。如实施例所证明的，但是不希望受任何具体理论的束缚，本发明人尤其发现，亮氨酸和乙酰-亮氨酸可以改善细胞功能障碍(例如通过将溶酶体体积向对照值降低)并且提供神经保护。

因此，本公开提供了亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐，其用于治疗有需要的受试者的神经退行性疾病或神经退行性疾病的一种或多种症状的方法中。

如本文所用，“受试者”可以是脊椎动物、哺乳动物或家养动物。因此，本公开的组合物可以用于治疗任何哺乳动物，例如家畜(例如马、牛、羊或猪)、宠物(例如猫、狗、兔或豚鼠)、实验动物(例如小鼠或大鼠)，或可用于其他兽医应用。在一个实施方式中，受试者是人。

如本文所用，“神经退行性疾病”是指影响神经元并且涉及神经元结构的进行性损失、神经元功能的进行性损失、或进行性神经元细胞死亡的任何病症。

如本文所用，单数形式“一”、“一个”和“该”包括复数形式。

术语“大约”和“约”是指与所指的数或值几乎相同，包括在给定的测量的性质或精度下测得的量的可接受程度的误差。

如本文所用，术语“大约”和“约”通常应理解为包含指定量、频率或值的±20％。除非另有说明，否则本文给出的数值是近似的，意指在没有明确说明的情况下可以推断术语“约”或“大约”。

本文所用的术语“施用”或“给药”是指(1)由保健医师或其授权代理人或在其指导下提供、给予、按剂量给药和/开处方本公开的组合物，和(2)由患者或他或她自己投入、服用或消费本公开的组合物。

全文提及“亮氨酸”和“乙酰-亮氨酸”包括其药学上可接受的盐，即使没有明确说明。

亮氨酸或乙酰-亮氨酸可以是外消旋形式，这意味着该化合物包含约等量的对映体。或者，它可以以L对映体或D对映体的对映体过量形式存在。亮氨酸或乙酰-亮氨酸可以是L对映体或D对映体的单一对映体形式。在一个实施方式中，单一对映体形式是L对映体。可以按照本领域已知的程序包含外消旋和对映体形式。

本文提及的“药学上可接受的盐”是适用于药物应用的任何盐制剂。药学上可接受的盐包括但不限于：胺盐，例如N,N'-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、氨、二乙醇胺和其他羟烷基胺、乙二胺、N-甲基葡糖胺、普鲁卡因、N-苄基苯乙胺、1-对氯苄基-2-吡咯烷-1'-基甲基苯并咪唑、二乙胺和其他烷基胺、哌嗪、三(羟甲基)氨基甲烷等；碱金属盐，例如锂、钾、钠等；碱土金属盐，例如钡、钙、镁等；过渡金属盐，例如锌、铝等；其他金属盐，例如磷酸氢钠、磷酸二钠等；无机酸，例如盐酸盐、硫酸盐等；有机酸盐，例如乙酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、丁酸盐、戊酸盐和富马酸盐等。

亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐可以根据本领域已知的教导配制和施用给受试者。例如，亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐可配制成药物组合物。药物组合物可包含亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体。提及药物组合物涵盖了仅活性剂(例如亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐)或药物组合物形式。

药物组合物可以采用多种不同形式中的任何一种，特别是取决于它的使用方式。因此，例如，它可以是粉末剂、片剂、胶囊、液体、软膏、乳膏、凝胶、水凝胶、气溶胶、喷雾剂、胶束溶液、透皮贴、脂质体悬浮液形式或可以施用于需要治疗的人或动物的任何其他合适的形式。

本文提及的“药学上可接受的载体”是本领域技术人员已知的可用于配制药物组合物的任何已知化合物或已知化合物的组合。应理解，药物组合物的载体应该是能够被服用其的受试者耐受的物质。

在一个实施方式中，药学上可接受的载体可以是固体，并且组合物可以是粉末或片剂的形式。药学上可接受的固体载体可以包括但不限于也可以充当调味剂、缓冲剂、润滑剂、稳定剂、增溶剂、悬浮剂、润湿剂、乳化剂、染料、填料、助流剂、压缩助剂、惰性粘合剂、甜味剂、防腐剂、染料、包衣或片剂崩解剂的一种或多种物质。载体也可以是包封材料。在粉末中，载体可以是细碎的固体，其与本发明的细碎活性剂混合。在片剂中，活性剂可以与具有必要压片性质的载体以适当比例混合并压制为所需的形状和大小。例如，粉末和片剂可含有至多99％的活性剂。合适的固体载体包括例如磷酸钙、硬脂酸镁、滑石、糖、乳糖、糊精、淀粉、明胶、纤维素、聚乙烯吡咯烷、低熔点蜡和离子交换树脂。在另一个实施方式中，药学上可接受的载体可以是凝胶，并且组合物可以是以乳膏等形式。

载体可包括但不限于一种或多种赋形剂或稀释剂。赋形剂的实例为明胶、阿拉伯胶、乳糖、微晶纤维素、淀粉、羟基乙酸淀粉钠、磷酸氢钙、硬脂酸镁、滑石和胶体二氧化硅等。

在另一个实施方式中，药学上可接受的载体可以是液体。在一个实施方式中，药物组合物是溶液形式。液体载体用于制备溶液、悬浮液、乳液、糖浆、酏剂和加压组合物。可以将亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐溶解或悬浮在药学上可接受的液体载体中，例如水、有机溶剂、两者的混合物或药学上可接受的油或脂肪。液体载体可以含有其他合适的药物添加剂，例如增溶剂、乳化剂、缓冲剂、防腐剂、甜味剂、调味剂、悬浮剂、增稠剂、着色剂、粘度调节剂、稳定剂或渗透压调节剂。用于口服和肠胃外施用的液体载体的合适实例包括：水(部分含有上述添加剂，例如纤维素衍生物，例如羧甲基纤维素钠溶液)，醇类(包括一元醇和多元醇，例如二醇)和它们的衍生物，以及油(例如分馏椰子油和花生油)。对于肠胃外施用，载体也可以是油性酯，例如油酸乙酯和肉豆蔻酸异丙酯。无菌液体载体可用于无菌液体形式的肠胃外施用的组合物。用于加压组合物的液体载体可以是卤代烃或其它药学上可接受的推进剂。

作为无菌溶液或悬浮液的液体药物组合物可以通过例如肌肉内、鞘内、硬膜外、腹膜内、静脉内和皮下注射来使用。活性剂可以制备成无菌固体组合物，其可以在施用时使用无菌水、盐水或其他适当的无菌注射介质溶解或者悬浮。

组合物可以以无菌溶液或悬浮液的形式口服施用，所述无菌溶液或悬浮液含有其他溶质或助悬剂(例如足够的盐水或葡萄糖以使溶液等渗)，胆汁盐，阿拉伯胶，明胶，脱水山梨糖醇单油酸酯，聚山梨醇酯80(山梨糖醇的油酸酯及其与环氧乙烷共聚的酸酐)等。组合物也可以以液体或固体组合物形式口服施用。适合于口服施用的组合物包括固体形式，例如丸剂、胶囊、颗粒、片剂和粉末，以及液体形式，例如溶液、糖浆、酏剂和悬浮液。可用于肠胃外施用的形式包括无菌溶液、乳液和悬浮液。

组合物可以替代地通过吸入(例如鼻内)施用。组合物也可以配制用于局部使用。例如，可以将乳膏或软膏应用于皮肤。

亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐可以加入缓慢释放或延迟释放装置中。这样的装置可以例如插入皮肤上或皮肤下，并且药物可以历时数周或甚至数月释放。当需要根据本公开内容使用亮氨酸或乙酰-亮氨酸进行长期治疗(可能需要频繁施用(例如至少每日施用))时，这样的装置可以是有利的。

在一个实施方式中，药物组合物是固体口服剂型，例如片剂。在片剂中，活性剂可以与具有必要压片性质的载剂(例如药学上可接受的载体)以适当比例混合，并且压制为所需的形状和大小。片剂可含有至多99％重量的活性剂。

固体口服剂型(例如片剂)的药物组合物可以通过药学领域已知的任何方法制备。药物组合物通常通过将活性剂与常规的药学上可接受的载体混合来制备。

片剂可以如本领域已知的那样配制。例如包括小麦淀粉、预胶化的玉米(苞米)淀粉、碳酸钙和硬脂酸镁作为赋形剂。相同或类似的赋形剂例如可以与本公开一起使用。

每片700mg的片剂的组成如下：500mg乙酰-DL-亮氨酸，88mg小麦淀粉，88mg预胶化玉米(苞米)淀粉，13mg碳酸钙和11mg硬脂酸镁。相同的片剂例如可以与本公开一起使用。

如上所述，亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐可以配制成多种不同形式的药物组合物并施用。例如，亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐可以配制成药物组合物以促进其穿过血脑屏障的递送。作为另一实例，亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐可以配制成绕过血脑屏障的药物组合物。促进穿过血脑屏障递送或适于以绕过血脑屏障的方式施用的制剂可用于制备和施用本文所述的亮氨酸(非乙酰化)。如本公开中所证明的，将显示溶酶体疾病表型的细胞暴露于亮氨酸，如暴露于乙酰-亮氨酸一样，改善了细胞功能障碍(例如，通过将溶酶体贮存体积减少至对照值)，从而证明亮氨酸和乙酰-亮氨酸的相似活性(参见图14)。

在一个实施方式中，药物组合物(例如，包含亮氨酸或其盐)配制用于纳米递送，例如，胶体药物-载体系统。合适的实例包括但不限于脂质体、纳米颗粒(例如，聚合物、脂质和无机纳米颗粒)、纳米凝胶、树枝状聚合物、胶束、纳米乳液、聚合物囊泡、外来体和量子点。参见例如Patel等，“Crossing the Blood-Brain Barrier:Recent Advances in DrugDelivery to the Brain,”CNS Drugs 31:109-133(2017)；Kabanov等，“New Technologiesfor Drug Delivery across the Blood Brain Barrier,”Curr Pharm Des.,10(12):1355-1363(2004)；Cheng等，“Highly Stabilized Curcumin Nanoparticles Tested inan In Vitro Blood–Brain Barrier Model and in Alzheimer’s Disease Tg2576Mice,”The AAPS Journal,vol.15,no.2,pp.324-336(2013)；等，“Production of L-Leucine Nanoparticles under Various Conditions Using an Aerosol Flow ReactorMethod,”Journal of Nanomaterials,vol.2008,article ID 680897(2008)。

在一个实施方式中，药物组合物(例如包含亮氨酸或其盐)配制成用于直接递送至中枢神经系统(CNS)，例如通过注射或输注来递送。直接递送到CNS的制剂和方法是本领域已知的。参见例如美国专利9,283,181。这种施用的实例包括但不限于鼻内、心室内、鞘内、颅内和通过鼻粘膜移植递送。

在一个实施方式中，药物组合物配制成用于鼻内递送(并通过鼻内递送施用)。参见例如Hanson等，“Intranasal delivery bypasses the blood-brain barrier totarget therapeutic agents to the central nervous system and treatneurodegenerative disease,”BMC Neurosci.9(Suppl 3):S5(2008)。在一个实施方式中，药物组合物配制成用于经由鼻粘膜移植递送(并通过鼻粘膜移植物施用)。在一个实施方式中，药物组合物配制成用于脑室内注射或输注(并通过脑室内注射或输注施用)。在另一个实施方式中，药物组合物配制成用于鞘内脑池内注射或输注(并通过鞘内脑池内注射或输注施用)。在一个实施方式中，药物组合物配制成用于鞘内腰部注射或输注(并通过鞘内腰部注射或输注施用)。例如，活性剂可以配成制用于鞘内施用，和/或以与Ory等，“Intrathecal2-hydroxypropyl-β-cyclodextrin decreases neurological diseaseprogression in Niemann-Pick disease,type C1:a non-randomised,open-label,phase1–2trial,”Vol.390,Issue 10104,pp.1758-1768(2017)所讨论相同或相似的方式鞘内施用。

可以使用各种技术，包括但不限于通过本领域已知的钻孔(burrhole)或脑池或腰部穿刺等进行的注射。各种装置，无论是内部的(例如植入的)还是外部的，都可以如本领域已知的用于递送，例如泵、导管、储药器等。在一个实施方式中，施用间隔是每两周一次。

在一个实施方式中，施用间隔是每月一次。在一个实施方式中，施用间隔是每两个月一次。在一个实施方式中，施用间隔是每月两次。在一个实施方式中，施用间隔是每周一次。在一个实施方式中，施用间隔是每周两次或数次。在一个实施方式中，施用间隔是每天。在一个实施方式中，施用是连续的，例如连续输注。

亮氨酸或其药学上可接受的盐可以以与本文公开的乙酰-亮氨酸等价的剂量或量施用，并考虑其直接递送到CNS或穿过血脑屏障递送来进行调整。

类似地，乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐可以以如本文公开的剂量或量施用；剂量可以根据其施用途径(例如直接递送到CNS)来调整。

本公开描述了亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐，包括其组合物和方法，用于治疗有需要的受试者的神经退行性疾病或神经退行性疾病的一种或多种症状。有需要的受试者可具有神经退行性疾病的遗传学、生物化学或其他类似的可识别标志物。例如，神经退行性疾病的标志物可以是细胞标志物。有需要的受试者可以被诊断为患有神经退行性疾病。例如，受试者可能已根据遗传学、生物化学或其他类似的可识别标志物被诊断为患有神经退行性疾病。有需要的受试者可能被怀疑患有或有风险患有神经退行性疾病。例如，受试者可能具有神经退行性疾病的遗传学倾向(例如，受试者可能有一个或多个患有神经退行性疾病的家族成员)。有需要的受试者可能有症状(即，有一个或多个与神经退行性疾病相关的症状)。有需要的受试者可能无症状。应该理解术语“有症状”和“无症状”是在提及神经退行性疾病的症状时使用。具有神经退行性疾病的遗传学、生物化学或其他类似可识别标志物的受试者，例如基于遗传学、生物化学或其他类似可识别标志物被诊断为患有神经退行性疾病但没有进一步的病症症状的受试者，为了本公开内容的目的而包括在“无症状”的范围内。

如本文所用，“治疗神经退行性疾病或神经退行性疾病的一种或多种症状”等指的是延迟神经退行性疾病或神经退行性疾病的一种或多种症状的发作(所述疾病或症状原本预期会按照典型疾病进展显现)，降低神经退行性疾病的严重性或降低与神经退行性疾病相关的一种或多种已有症状的严重性或消除与神经退行性疾病相关的一种或多种已有症状，与典型疾病进展相比延迟神经退行性疾病或神经退行性疾病的一种或多种症状随着时间推移的进展，和/或逆转进展神经退行性疾病或神经退行性疾病的一种或多种症状随着时间的推移的进展。“治疗神经退行性疾病或神经退行性疾病的一种或多种症状”也可指改善神经退行性疾病的生物化学标志物。

如本文所用，“典型疾病进展”、“通常会预期的疾病进展”等是指如果受试者未得到治疗，神经退行性疾病、与神经退行性疾病相关的一种或多种症状、或神经退行性疾病的生物化学标志物的典型或预期的进展。典型的或预期的疾病进展可以例如基于已知的量表、指数、评级或分数或其他合适的测试，以用于评估神经退行性疾病、神经退行性疾病的一种或多种症状或神经退行性疾病的生物化学标志物的进展，例如本文中作为实例描述的那些。所述量表、指数、评级、分数或其他合适的测试可以对应于疾病的整体进展或与疾病相关的一种或多种症状的进展。例如，典型的或预期的疾病进展可以基于神经退行性疾病或与神经退行性疾病相关的症状或症状集合的典型或预期的发作或严重性。典型的或预期的疾病进展可以逐个受试者确定，或者可以基于对受神经退行性疾病影响的受试者集合(例如受试者的群或亚群)所通常观察到或所经历的来确定。亚群可包括例如相同性别的亚群，相同或相似年龄的亚群，一个或多个症状的发作时机相同或相似的亚群，等等。

在一个实施方式中，“治疗神经退行性疾病或神经退行性疾病的一种或多种症状”指的是延迟神经退行性疾病或神经退行性疾病的一种或多种症状的发作(所述疾病或症状原本预期会按照典型疾病进展显现)。如本文所用，“延迟神经退行性疾病或神经退行性疾病的一种或多种症状的发作”等指的是增加神经退行性疾病或神经退行性疾病的一种或多种症状发作前的时间，或预防其发作。例如，当神经退行性疾病或神经退行性疾病的一种或多种症状的显现前的时间比根据典型疾病进展观察到的时间长至少5％时，可以说发作得到延迟。进一步，例如，观察到时间增加至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少100％。在一个实施方式中，受试者无症状。可以在受试者无症状时开始施用亮氨酸或乙酰-亮氨酸，以延迟神经退行性疾病或神经退行性疾病的一种或多种症状的发作(所述疾病或症状原本预期会按照典型疾病进展显现)。在另一个实施方式中，受试者有症状。可以在受试者有一些症状时开始施用亮氨酸或乙酰-亮氨酸，以延迟神经退行性疾病的一种或多种其他症状的发作(所述症状原本预期会按照典型疾病进展显现)。根据本文所述的持续时间，有需要的受试者可以继续接受亮氨酸或乙酰-亮氨酸治疗。在一个实施方式中，所述治疗预防了神经退行性疾病的一种或多种症状(所述症状原本预期会按照典型疾病进展显现)的发作。

在一个实施方式中，“治疗神经退行性疾病或神经退行性疾病的一种或多种症状”指的是降低神经退行性疾病的严重性、或者降低与神经退行性疾病相关的一种或多种已有症状的严重性或消除这些症状。神经退行性疾病或现有症状的严重性的评价可以利用已知的量表、指数、评级或分数，例如本文作为实例描述的那些，或用于评估严重性的其他合适的测试。例如，量表、指数、评级、分数或其他合适的测试可以对应于疾病的整体严重性或疾病相关的一种或多种症状的严重性。在一个实施方式中，该治疗将这种评估从有症状患者的特征性值或程度改善为非症状性患者的特征性值或程度。

在一个实施方式中，“治疗神经退行性疾病或神经退行性疾病的一种或多种症状”指的是与典型疾病进展相比，延迟神经退行性疾病或与神经退行性疾病相关的一种或多种症状随时间的进展，或逆转神经退行性疾病或与神经退行性疾病相关的一种或多种症状随时间的进展。治疗延迟或逆转进展的时间可与本文所述的治疗持续时间一致。治疗可以持续例如约7天或更长、约2周或更长、约3周或更长、约1个月或更长、约6周或更长、约7周或更长、或约2个月或更长的时间延迟或逆转进展。治疗可以持续例如约3个月或更长、约4个月或更长、约5个月或更长、或约6个月或更长的时间延迟或逆转进展。它可以持续例如约1年或更长、约2年或更长、约3年或更长、约4年或更长、约5年或更长、或约10年或更长的时间延迟或逆转进展。治疗可以在患者生命内延迟或逆转神经退行性疾病或与神经退行性疾病相关的一种或多种症状的进展。

在一个实施方式中，“治疗神经退行性疾病或神经退行性疾病的一种或多种症状”指的是与典型疾病进展相比延迟神经退行性疾病或神经退行性疾病的一种或多种症状随时间的进展。如本文所用，“延迟神经退行性疾病或神经退行性疾病的一种或多种症状随时间的进展”等指的是减慢和/或停止疾病或疾病的一种或多种症状随时间的进展(例如，减慢和/或停止疾病或疾病的一种或多种症状的恶化或严重性增加)。疾病进展的确定可以例如利用已知的量表、指数、评级或分数，例如本文作为实例描述的那些，或用于评估进展的其他合适的测试。例如，量表、指数、评级、分数或其他合适的测试可以对应于疾病的整体进展，或对应于与疾病相关的一种或多种症状的进展。在一个实施方式中，“延迟神经退行性疾病或神经退行性疾病的一种或多种症状的进展”是指通过量表、指数、评级、分数等或用于评价严重性的其他合适的测试确定的受试者的疾病严重性值(例如，整体严重性或一种或多种症状的严重性)并没有有意义的增加(例如，至少保持基本不变)。在一个实施方式中，“延迟神经退行性疾病或神经退行性疾病的一种或多种症状的进展”是指与对应于典型疾病进展的值相比，防止受试者达到严重性值、或增加受试者达到严重性值的时间(例如，降低严重性增加的变化速度)，所述严重性值根据已知的量表、指数、评级、分数等或用于评价进展的其他合适的测试确定。例如，当达到严重性值的时间比根据典型疾病进展观察到的时间长至少5％时，可以说进展得到延迟。再例如，观察到时间增加至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少100％。神经退行性疾病或神经退行性疾病的一种或多种症状的进展被所述治疗延迟的时间可与本文所述的治疗持续时间一致。在一个实施方式中，治疗延迟进展至少约3个月、至少约4个月、至少约5个月、或至少约6个月。治疗可以延迟进展至少约1年、至少约2年、至少约3年、至少约4年、至少约5年、或至少约10年。治疗可以在患者的整个生命过程中延迟进展。

在一个实施方式中，“治疗神经退行性疾病或神经退行性疾病的一种或多种症状”指的是逆转神经退行性疾病或神经退行性疾病的一种或多种症状随时间的进展。如本文所用，“逆转神经退行性疾病或神经退行性疾病的一种或多种症状随时间的进展”等指的是随着时间的推移，停止疾病或疾病的一种或多种症状的进展和降低疾病或疾病的一种或多种症状的严重性。疾病进展和严重性的确定可以例如利用已知的量表、指数、评级或分数，例如本文作为实例描述的那些，或利用用于评估进展和严重性的其他合适的测试。例如，量表、指数、评级、分数或其他合适的测试可以对应于疾病的整体进展和严重性，或对应于与疾病相关的一种或多种症状的进展和严重性。在一个实施方式中，“逆转神经退行性疾病或神经退行性疾病的一种或多种症状随时间的进展”是指通过已知的量表、指数、评级、分数等或用于评价严重性的其他合适的测试确定的受试者的疾病严重性值(例如，整体严重性或一种或多种症状的严重性)随时间得到改善(即显示出严重性随时间降低)。治疗逆转神经退行性疾病或神经退行性疾病的一种或多种症状进展的持续时间可与本文所述的治疗持续时间一致。在一个实施方式中，治疗逆转进展至少约3个月、至少约4个月、至少约5个月、或至少约6个月。在又一个实施方式中，治疗逆转进展至少约1年、至少约2年、至少约3年、至少约4年、至少约5年、或至少约10年。治疗可以在患者的整个生命过程中逆转进展。

在一个实施方式中，“治疗神经退行性疾病或神经退行性疾病的一种或多种症状”指的是改善受试者的神经退行性疾病的生物化学标志物(例如，增加的储存代谢物水平，或原发储存导致的继发性生化变化)。生物化学标志物是疾病活动的信号，可以提供疾病严重性和随时间进展的持续指示。在一个实施方式中，生物化学标志物相对于对照值改善。在一个实施方式中，生物化学标志物选自：增加的溶酶体体积、增加的鞘糖脂(GSL)水平、增加的微管相关蛋白1A/1B-轻链3-磷脂酰乙醇胺缀合物(LC3-II)水平、和增加的淀粉样蛋白前体蛋白C末端片段(APP-CTF)水平。在一个实施方式中，生物化学标志物是增加的溶酶体体积，并且治疗降低受试者的溶酶体体积。在一个实施方式中，生物化学标志物是增加的鞘糖脂(GSL)水平，并且治疗降低受试者的GSL水平。在一个实施方式中，生物化学标志物是增加的微管相关蛋白1A/1B-轻链3-磷脂酰乙醇胺缀合物(LC3-II)水平，并且治疗降低受试者中的LC3-II水平。在一个实施方案中，生化标志物是增加的淀粉样蛋白前体蛋白C-末端片段(APP-CTF)水平，并且治疗降低受试者中的APP-CTF水平。在一个实施方式中，治疗随着时间的推移改善生物化学标志物。例如，在一个实施方式中，随着时间的推移改善生物化学标志物意味着与典型疾病进展相比，随着时间的推移治疗将生物化学标志物向着对照值改善，防止生物化学标志物随时间的进展，和/或延迟生物化学标志物随时间的进展。治疗改善生物化学标志物的时间可与本文所述的治疗持续时间一致。在一个实施方式中，治疗改善生物化学标志物至少约3个月、至少约4个月、至少约5个月、或至少约6个月。治疗可以改善生物化学标志物至少约1年、至少约2年、至少约3年、至少约4年、至少约5年、或至少约10年。治疗可以在患者的整个生命过程中改善生物化学标志物。

神经退行性疾病的“症状”包括与神经退行性疾病相关的任何临床或实验室表现，并且不限于受试者能够感觉或观察到的内容。本文所述的症状包括但不限于神经学症状和精神病学症状。神经学症状的实例包括共济失调，其他运动障碍例如运动功能减退、僵直、震颤或肌张力失调，不宁腿综合征(RLS)，中枢性眼运动病症例如垂直和水平核上扫视/凝视麻痹，和神经心理缺陷，例如痴呆。在一个实施方式中，神经学症状是RLS。在一个实施方式中，治疗本文所述的神经退行性疾病包括治疗受试者的RLS，例如，减轻RLS的严重性或改善RLS，延迟或抑制RLS的进展，或消除RLS。精神病学症状的实例包括抑郁、行为障碍或精神病。症状的发作可能为从出生到成年。

可以监测神经退行性疾病随时间或在治疗下的进展，例如，在两个或更多个时间点使用一种或多种已知的测试并比较结果。可以评估疾病进展和/或严重性，例如，使用共济失调评价分级量表(SARA)、脊髓小脑性共济失调功能指数(SCAFI)、国际合作共济失调评定量表(ICARS)、简要共济失调评定量表(BARS)、改良残疾评定量表(mDRS)、EuroQol 5Q-5D-5L(EQ-5D-5L)、视觉模拟量表(VAS)、神经心理学测验，例如Wechsler成人智力量表修订版(WAIS-R)、Wechsler智力量表儿童-IV(WISC-IV)、蒙特利尔认知评估(MoCA)，以及运动障碍中使用的量表，例如统一帕金森评定量表(UPRS)或统一多系统萎缩评定量表(UMSARS)，或其他合适的测试。对于某些LSD，例如NPC，在过去几十年中已经开发和验证特定分数，例如临床严重性评分(CSS)和年度严重性增量评分(ASIS)(见Yanjanin等，“Linear ClinicalProgression,Independent of Age of Onset,in Niemann–Pick Disease,Type C,”Am JMed Genet Part B 153B:132–140)和修改后的6-域NP-C残疾量表(mDRS评分)。例如，NPC患者的严重性可以通过分配CSS来量化，其评估疾病的各种参数(离床活动、癫痫发作、眼球运动等)并给出每个参数在5分里的得分。更高的得分等于更严重的程度。ASIS量化CSS的年变化率，其通过将CSS除以患者年龄计算得到。在这方面，这些测试中的某些分数是有症状的神经退行性疾病患者和明确的疾病进展和/或严重性的特征。

因此，“治疗神经退行性疾病或神经退行性疾病的一种或多种症状”例如可以等同于实现改善的评价结果，例如本文所述的SARA、SCAFI、ICARS、BARS、mDRS、EQ-5D-5L、VAS、WAIS-R、WISC-IV、CSS、UPRS、UMSARS和/或MoCA分数，或适合表征神经退行性疾病患者的其他测试的结果。例如，在一个实施方式中，“降低神经退行性疾病的严重性、或者降低神经退行性疾病的一种或多种已有症状的严重性或这些已有症状”意味着改善SARA、SCAFI、ICARS、BARS、mDRS、EQ-5D-5L、VAS、WAIS-R、WISC-IV、CSS、UPRS、UMSARS和/或MoCA分数，或用于评价严重性的其他合适的测试的结果，例如，将分数或结果从有症状受试者的特征性严重性值改善到非症状受试者的特征性值。另一个实施方式中，“延迟神经退行性疾病或神经退行性疾病的一种或多种症状的进展”意味着受试者的SARA、SCAFI、ICARS、BARS、mDRS、EQ-5D-5L、VAS、WAIS-R、WISC-IV、CSS、UPRS、UMSARS和/或MoCA分数或用于评价进展的其他合适的测试的结果没有有意义的增加(例如，至少保持基本不变)。在又一个实施方式中，“延缓神经退行性疾病或与神经退行性疾病相关的一种或多种症状的进展”意味着防止受试者的SARA、SCAFI、ICARS、BARS、mDRS、EQ-5D-5L、VAS、WAIS-R、WISC-IV、CSS、UPRS、UMSARS和/或MoCA评分或用于评估进展的其他合适的测试的结果达到与典型疾病进展相比相当的值，或增加达到该值耗费的时间。在另一个实施方式中，“逆转神经退行性疾病或神经退行性疾病的一种或多种症状随时间的进展”意味着受试者的SARA、SCAFI、mDRS、EQ-5D-5L、VAS、WAIS-R、WISC-IV、CSS和/或MoCA评分或用于评估进展的其他合适的测试的结果随时间有所改善(即显示出严重性随时间降低)。

例如，为了评估整体神经学状态，可以应用mDRS，一种四域量表(离床活动、操纵、语言和吞咽)。小脑功能可以使用SARA和SCAFI来评估，SARA是一个八项临床评定量表(步态、站姿、坐姿，语言、精细运动功能和趋向性；范围0-40，其中0是最好的神经学状态，40是最差的)，SCAFI包括8米步行时间(8MW；让患者尽可能快地从一条线走到另一条线两次来进行，不包括转弯)、9孔插板测试(9HPT)和10秒内“PATA”重复次数。主观损伤和生活质量可以使用EQ-5D-5L问卷和VAS来评价。为了评估眼运动功能，可以使用三维视频眼动图(EyeSeeCam)来测量眼扫视的峰值速度，平滑追踪的增益，注视诱发的眼球震颤的峰值慢相速度(凝视保持功能)，视动力眼球震颤的峰值慢相速度，和水平前庭眼反射增益。为了评估认知状态，可以使用WAIS-R或WISC-IV和MoCA，评估不同的认知领域，包括注意力和集中、执行功能、记忆、语言、视觉结构技能、概念思维、计算和定向，最多30分，26分为阈值分数。技术人员将知道如何执行这些测试和其他此类测试。

不宁腿综合征(RLS)是神经病症，其特征在于使身体运动的压倒性冲动，通常在休息时发生并伴随不适的或奇怪的感觉。它最通常影响腿，特别是膝盖和脚踝之间，但也可能影响其它区域，例如手臂、躯干或甚至幻肢。在本公开的一个实施方式中，亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐用于治疗患有神经退行性疾病的受试者的RLS的方法中。该方法包括向受试者施用治疗有效量的亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐。在一个实施方式中，患有RLS的受试者患有选自帕金森综合征(例如如本文所述)、脊髓小脑性共济失调、亨廷顿病、遗传性痉挛性下肢轻瘫、肌萎缩性侧索硬化(ALS)和阿尔茨海默病的神经退行性疾病。在一个实施方式中，神经退行性疾病选自额颞叶痴呆、路易体痴呆、多系统萎缩、进行性核上麻痹和皮质基底节变性。在一个实施方式中，神经退行性疾病是运动神经元病(例如如本文所述)。在一个实施方式中，神经退行性疾病是帕金森病。在一个实施方式中，神经退行性疾病与多巴胺能系统功能障碍(例如多巴胺能细胞损失)有关。在一个实施方式中，RLS是神经退行性疾病的症状，或者可以与神经退行性疾病相关或关联。在本公开的另一个实施方式中，当RLS的特征是神经退行性疾病时，亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐用于治疗有需要的受试者的RLS。

如本文所讨论的治疗RLS可包括降低RLS的严重性或减少、抑制或消除RLS的一种或多种症状。RLS的"症状"包括与RLS相关的任何临床或实验室表现。RLS的症状通常是，但不是必须是，与疾病相关的受试者可以感觉或观察到的表现。与RLS相关的症状包括但不限于，小腿感觉钝化、睡眠的周期性腿部运动(PLMS)、不愉快的腿部感觉、运动冲动、多动、睡眠紊乱、白天过度嗜睡等。在一个实施方式中，被减少、抑制或消除的RLS相关症状选自小腿感觉钝化、睡眠的周期性腿部运动(PLMS)、不愉快的腿部感觉、运动冲动、多动、白天过度嗜睡和睡眠紊乱中的任何一种或组合。

RLS或RLS的一种或多种症状的严重性可例如利用已知的量表、指数、评级或分数来评价。例如，量表、指数、评级、分数或其它合适的测试可对应于RLS整体严重性或与RLS相关的一个或多个症状的严重性。在一个实施方式中，本文所述的治疗将这种评估结果从有症状受试者的特征性值或程度改善到非症状受试者的特征性值或程度。在一个实施方式中，与基线相比，本文所述的治疗改善了这种评估结果。基线可以是例如在开始RLS的任何治疗之前或在开始用亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐治疗RLS之前受试者的状况。或者，基线可以是例如治疗RLS一定时间后的受试者状况。

国际不宁腿综合征研究组(IRLSSG)(http://www.irlssg.org/)开发了一种广泛报道的评级量表，称为“国际不宁腿综合征研究组评级量表”(IRLS)(Walters等,Validation of the International Restless Legs Syndrome Study Group ratingscale for restless legs syndrome.Sleep medicine.2003Apr 01；4(2):121–32)。IRLS是10项的量表，评分范围为0(无症状)至40。>30分被认为是非常严重，严重(评分21-30)，中度(评分11-20)，和≤10轻度。该量表的使用对于RLS的临床评估、研究和治疗试验是常见的。在一个实施方式中，与基线相比，用本文所述的亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐进行治疗降低了受试者的国际不宁腿综合征研究组评级量表(IRLS)。在一个实施方式中，IRLS与基线相比降低至少10％、至少20％、至少30％、至少40％或至少50％。在一个实施方式中，IRLS降低了至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％。。

在一个实施方式中，乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐的施用剂量可以为例如约500mg至约15g/天或约500mg至约10g/天，例如约1.5g至约10g/天，可选地通过固体口服或液体口服途径施用。乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐的施用剂量可以例如参照的剂量，其对于成人处方为1.5g至2g/天，3-4片，早晚两剂。

如果施用一种对映体，则可相应地减少剂量。例如，如果仅施用乙酰-L-亮氨酸或仅施用乙酰-D-亮氨酸，则剂量可以为约250mg至约15g/天，约250mg至约10g/天，或约250mg至约5g/天，例如约0.75g至约5g/天。

在一个实施方式中，施用剂量为约1g至约15g/天、约1g至约10g/天、或约1.5g至约7g/天。其可以为约2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14g至约15g/天。其可以为约2、3、4、5、6、7、8或9g至约10g/天。其可以为超过约1.5g/天，但少于约15、14、13、12、11、10、9、8、7、6或5g/天。在一个实施方式中，剂量为约4g至约6g/天。在一个实施方式中，剂量为约4g至约5g/天。在一个实施方式中，剂量为约4.5g/天。在一个实施方式中，剂量为约5g/天。在一个实施方式中，这些剂量以固体口服剂型、特别是片剂施用。在另一个实施方式中，当为外消旋形式时，这些剂量用于乙酰-亮氨酸。当存在对映体过量时，乙酰-亮氨酸的剂量可低于此处所述的那些剂量，例如，低约50％。因此，本公开也明确涵盖减半时的上述剂量范围。

在一个实施方式中，每日总剂量可以分散在多次施用中，即施用可以每天进行两次或更多次以达到每日总剂量。例如，提供乙酰-亮氨酸的每日总剂量所需的片剂数量可分为两次施用(例如，早晨和晚上)或三次施用(例如，早晨、中午和晚上)。每次给药可以适当地随食物或不随食物一起施用。例如，乙酰-亮氨酸可在饭前约1或约2小时给药，例如饭前至少约20分钟，至少约30分钟，至少约40分钟，或至少约1小时给药，或可在饭后约1、约2或约3小时给药，例如在饭后等待至少约20分钟，至少约30分钟，至少约1小时，至少约1.5小时，至少约2小时，或至少约2.5小时给药。例如，4.5克乙酰-DL-亮氨酸的每日总剂量可以作为在早餐之前、之中或之后的3片(或等量)，在午餐之前、之中或之后另3片，和在晚餐之前、之中或之后的再3片施用。

本公开的亮氨酸或乙酰-亮氨酸的施用可以在发现受试者具有神经退行性疾病的遗传学、生物化学或其他类似可识别标志物之前或之后开始，例如，在前一种情况下，当受试者被怀疑患有神经退行性疾病或有风险患神经退行性疾病时开始。所述施用可以在发现受试者具有神经退行性疾病的遗传学、生物化学或其他类似可识别标志物的时间或附近开始。类似地，施用可以在受试者被诊断患有神经退行性疾病之前、之时或附近、或之后开始，例如在发现受试者具有神经退行性疾病的遗传学、生物化学或其他类似可识别标志物之前、之时或附近、或之后开始。亮氨酸或乙酰-亮氨酸可以在受试者有症状或无症状时开始施用。特别是，根据本公开用亮氨酸或乙酰-亮氨酸治疗的优点之一是可以早在发现受试者具有神经退行性疾病的遗传学和/或生物化学标志物之后即时、但在受试者显示出神经退行性疾病的症状(不同于遗传学和/或生物化学标志物，即，受试者无症状)之前或在受试者显示出被认为是所述疾病的特征的一种或多种症状之前开始施用。该治疗可以延迟神经退行性疾病或与神经退行性疾病相关的一种或多种症状的发作，如本文所述。该治疗也可以持续本文所述的持续时间。

如本文所讨论的，根据本公开用亮氨酸或乙酰-亮氨酸治疗的优点是其可以施用很长时间，从而例如与典型疾病进展相比延迟或者甚至逆转神经退行性疾病或神经退行性疾病的一种或多种症状在受试者中的进展。治疗持续时间可以是例如约7天或更长、约2周或更长、约3周或更长、约1个月或更长、约6周或更长、约7周或更长、或约2个月或更长。在一个实施方式中，它是约3个月或更长、约4个月或更长、约5个月或更长、或约6个月或更长。治疗持续时间可为约1年或更长、约2年或更长、约3年或更长、约4年或更长、约5年或更长、或约10年或更长。治疗持续时间可能是患者的生命期。

剂型、剂量、给药方案和治疗持续时间的任何和所有组合都是本发明所设想和涵盖的。在一个实施方式中，剂量为约4g至约10g/天，每天分1次、2次或3次施用，治疗持续时间约为2个月或更多。在另一个实施方式中，剂量超过4克但不超过5克/天，每天分1次、2次或3次施用，治疗持续时间约为6个月或更多。剂型可以是固体口服剂型，特别是片剂。

本文所述的药物组合物可以用作单一疗法(例如，仅使用活性剂)来治疗受试者的神经退行性疾病。或者，所述药物组合物可以用作其他已知疗法的辅助剂或与其他已知疗法组合，例如，以用于治疗受试者的神经退行性疾病。

神经退行性疾病可以(但不必需)与溶酶体功能障碍(例如，溶酶体贮积缺陷)相关。不与溶酶体功能障碍相关的本公开的神经退行性疾病包括但不限于：不宁腿综合征(RLS)、亚历山大氏病、阿尔珀病、脑性麻痹、科凯恩综合征、皮质基底节变性、HIV相关性痴呆、肯尼迪病、神经包柔螺旋体病、原发性脊髓侧索硬化、雷夫素姆氏病、谢耳德氏病、继发于恶性贫血的脊髓亚急性联合变性、伴有近端优势的遗传性运动和感觉神经病、刺猬摇摆综合征(WHS)、进行性肌萎缩(Duchenne-Aran肌肉萎缩)、进行性延髓麻痹、假性延髓麻痹、HIV相关神经认知障碍(HAND)、血管性帕金森综合征、下半身帕金森氏综合征、小脑下跳性眼球震颤和小脑性共济失调，小脑性共济失调包括脊髓小脑性共济失调(SCA)4、脊髓小脑性共济失调(SCA)5(Lincoln共济失调)、脊髓小脑性共济失调(SCA)8、脊髓小脑性共济失调(SCA)10、脊髓小脑性共济失调(SCA)11、脊髓小脑性共济失调(SCA)12、脊髓小脑性共济失调(SCA)13、脊髓小脑性共济失调(SCA)14、脊髓小脑性共济失调(SCA)15/16、脊髓小脑性共济失调(SCA)18(伴有共济失调的感觉/运动神经病)、脊髓小脑性共济失调(SCA)19/22、脊髓小脑性共济失调(SCA)20、脊髓小脑性共济失调(SCA)21、脊髓小脑性共济失调(SCA)23、脊髓小脑性共济失调(SCA)25、脊髓小脑性共济失调(SCA)26、脊髓小脑性共济失调(SCA)27、脊髓小脑性共济失调(SCA)29、脊髓小脑性共济失调(SCA)30、脊髓小脑性共济失调(SCA)31、脊髓小脑性共济失调(SCA)32、脊髓小脑性共济失调(SCA)35、脊髓小脑性共济失调(SCA)36、发作性共济失调(EA)1、发作性共济失调(EA)2、发作性共济失调(EA)3、发作性共济失调(EA)4、发作性共济失调(EA)5、发作性共济失调(EA)6、发作性共济失调(EA)7、脊髓小脑性共济失调(SCA)28、脊髓小脑性共济失调(SCA)24(4型脊髓小脑性共济失调常染色体隐性(SCAR4)；伴有扫视侵入的脊髓小脑性共济失调)、脊髓痨、1型伴有动眼失用的共济失调(AOA1)、2型共济失调伴动眼失用症(AOA2)、4型共济失调伴动眼失用症(AOA4)、10型脊髓小脑性共济失调常染色体隐性(SCAR 10)、线粒体隐性共济失调综合征(MIRAS)、肌阵挛性癫痫肌病感觉共济失调(MEMSA)、感觉性共济失调性神经病构音障碍眼肌麻痹(SANDO)、婴幼儿发病脊髓小脑性共济失调、遗传性痉挛性截瘫7(HSP SPG7基因)、线粒体肌病脑病乳酸性酸中毒中风综合征(MELAS)、伴有粗糙红纤维的肌阵挛性癫痫(MERRF)、神经源性肌无力共济失调和色素性视网膜炎(NARP)、Kearns-Sayre(KSS)、脆性X震颤/共济失调综合征(FXTAS)、Arts综合征、X连锁脊髓小脑性共济失调1、X连锁脊髓小脑性共济失调2、X连锁脊髓小脑性共济失调3、X连锁脊髓小脑性共济失调4或X连锁脊髓小脑性共济失调5、Christianson型X连锁综合征智力低下、X连锁的铁粒细胞性贫血、特发性晚发病小脑性共济失调、未知病因的散发性成人发作共济失调(SAOA)、和小脑性共济失调神经病变前庭无反射综合征(CANVAS)。在一个实施方式中，不与溶酶体功能障碍相关的神经退行性疾病是皮质基底节变性、SCA28和AOA4。

如上所述，许多神经退行性疾病与溶酶体功能障碍有关，其包括神经退行性溶酶体贮积病(LSD)和许多其他已提出与溶酶体缺陷关联的神经退行性疾病。例如见Boman等,Journal of Parkinson’s Disease,vol.6,no.2,pp.307-315(May 2016)；Makioka等,Neuroreport,23(5):270-276(March 2012)；Orr等,Alzheimer’s Research&Therapy,5:53(Oct.2013)；Barlow等,Proc.Nat’l.Acad.Sci.USA,18；97(2):871-6(2000)。

在一个实施方式中，神经退行性疾病与溶酶体功能障碍有关(例如，溶酶体贮积缺陷)。与溶酶体功能障碍相关的本公开的神经退行性疾病包括但不限于：酒精中毒、阿尔茨海默病、肌萎缩侧索硬化症(ALS)、卡纳万病、额颞叶变性、亨廷顿氏病、路易体痴呆症、多系统萎缩(MSA-P/MSA-C)、多发性硬化症、发作性睡病、帕金森病、斯-李-奥综合征(SLOS)(胆固醇合成的先天性错误)、丹吉尔病、佩-梅二氏病、皮克病、与17号染色体连锁的额颞叶痴呆帕金森综合征、朊病毒病，包括：瘙痒症、传染性水貂脑病、慢性消耗性疾病、牛海绵状脑病(BSE)、猫海绵状脑病、外来有蹄类动物脑病、库鲁病、Creutzfeldt-Jakob病、Gerstmann--Scheinker综合征和致命的家族性失眠症，进行性核上性麻痹、脊髓性肌萎缩症、神经退行性LSD和小脑性共济失调，小脑性共济失调包括脊髓小脑性共济失调(SCA)1、脊髓小脑性共济失调(SCA)2、脊髓小脑性共济失调(SCA)3(马-约病)、脊髓小脑性共济失调(SCA)6、脊髓小脑性共济失调(SCA)7、脊髓小脑性共济失调(SCA)17、齿状核红核苍白球丘脑下部核萎缩、沙勒瓦-萨格奈型的常染色体隐性痉挛性共济失调(ARSACS)、1型常染色体隐性小脑性共济失调(Beauce型隐性共济失调(RAB),SYNE-1突变)、2型常染色体隐性小脑性共济失调(脊髓小脑性共济失调常染色体隐性9,SCAR9)、伴有维生素E缺乏的共济失调(AVED)、共济失调毛细血管扩张症(路易斯巴尔病)、弗里德赖希氏共济失调(FRDA)和伴有辅酶Q10缺乏的共济失调。在一个实施方式中，与溶酶体功能障碍有关的神经退行性疾病选自酒精中毒、阿尔茨海默病、肌萎缩侧索硬化症(ALS)、卡纳万病、额颞叶变性、亨廷顿氏病、多系统萎缩(MSA-P/MSA-C)、多发性硬化症、发作性睡病、帕金森病、斯-李-奥综合征(SLOS)(胆固醇合成的先天性错误)、丹吉尔病、佩-梅二氏病、皮克病、额颞叶痴呆、伴有帕金森综合征的额颞叶痴呆、朊病毒病、进行性核上性麻痹和脊髓性肌萎缩症。在一个实施方式中，与溶酶体功能障碍有关的神经退行性疾病选自ALS、MSA-P、MSA-C、伴有帕金森综合征的额颞叶痴呆、进行性核上性麻痹、SCA 28、SCA 1和阿尔茨海默病。

神经退行性LSD的特征在于未消化的或部分消化的大分子的积累，其引起细胞功能障碍和神经退行，这通常是进行性的，导致身体残疾和/或精神恶化。这些情况往往出现在生命的最初几年，并且严重的进展导致频繁的住院治疗。如果不治疗，患者往往会在十几岁时死亡。还描述了成年发病患者。本公开所述的神经退行性LSD包括但不限于：神经元蜡样脂褐素沉积症(1-10型)、戈谢病2/3型(神经元性)、Krabbe病、多种硫酸酯酶缺乏、粘脂贮积病，包括粘脂贮积病I、粘脂贮积病II和粘脂贮积病IV，A型尼曼-匹克病、B型尼曼-匹克病、C型尼曼-匹克病、婴儿期发病庞皮病、晚发病庞皮病、泰-萨克斯病、Sandhoff病、法伯病、半乳糖唾液酸苷贮积病、法布里病、辛德勒病、GM1神经节苷脂贮积病、AB变体GM2神经节苷脂贮积病、异染性脑白质营养不良(MLD)、粘多糖贮积病，包括MPS IH、MPS IS、MPS IH-S、MPS II、MPS IIIA、MPS IIIB、MPS IIIC、MPS IIID和MPS VII，β-甘露糖苷贮积病、天冬氨酰氨基葡萄糖尿症、岩藻糖贮积病、Salla病、婴儿游离唾液酸贮积病(ISSD)和Danon病。在一个实施方式中，神经退行性LSD选自NPC、NPA、II型粘脂贮积病、MPS IIIB、天冬氨酰葡糖胺尿症、IIIA型粘脂贮积病、MPS VII、Sandhoff病、泰-萨克斯病、泰-萨克斯病的AB变体和GM1神经节苷脂贮积病。在一个实施方式中，神经退行性疾病不选自神经退行性LSD。

在一个实施方式中，神经退行性疾病是运动神经元病。在一个实施方式中，运动神经元病选自原发性脊髓侧索硬化、进行性肌萎缩、进行性延髓麻痹、假性延髓麻痹、ALS、阿尔茨海默病、卡纳万病、额颞叶变性、亨廷顿氏病、多发性硬化症、发作性睡病、帕金森病、佩-梅二氏病和脊髓性肌萎缩症。

如上所述，在本公开的一个实施方式中，亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐用于治疗患有运动神经元病的受试者的不宁腿综合征(RLS)，所述运动神经元病包括但不限于本文所述的任何运动神经元病。

在一个实施方式中，神经退行性疾病是小脑性共济失调。在一个实施方式中，神经退行性疾病是尼曼-匹克病。在一个实施方式中，神经退行性疾病是C型尼曼-匹克病。在一个实施方式中，神经退行性疾病是A型尼曼-匹克病。在一个实施方式中，神经退行性疾病是帕金森综合征。在一个实施方式中，神经退行性疾病是神经原戈谢病。在一个实施方式中，神经退行性疾病是泰-萨克斯病。在一个实施方式中，神经退行性疾病是Sandhoff病。在一个实施方式中，神经退行性疾病是法布里病。在一个实施方式中，神经退行性疾病是GM1神经节苷脂贮积病。在一个实施方式中，神经退行性疾病是Louis-Barr综合征。在一个实施方式中，神经退行性疾病是阿尔茨海默病。在一个实施方式中，神经退行性疾病是帕金森病。在一个实施方式中，神经退行性疾病是多系统萎缩。在一个实施方式中，神经退行性疾病是多系统萎缩C型(MSA-C)。在一个实施方式中，神经退行性疾病是多系统萎缩P型(MSA-P)。在一个实施方式中，神经退行性疾病是额颞叶痴呆。在一个实施方式中，神经退行性疾病是伴有帕金森综合征的额颞叶痴呆。在一个实施方式中，神经退行性疾病是下半身帕金森氏综合征。在一个实施方式中，神经退行性疾病是肌萎缩侧索硬化症(ALS)。在一个实施方式中，神经退行性疾病是皮质基底节变性综合征。在一个实施方式中，神经退行性疾病是进行性核上性麻痹。在一个实施方式中，神经退行性疾病是小脑下跳性眼球震颤。在一个实施方式中，神经退行性疾病是SCA 28。在一个实施方式中，神经退行性疾病是共济失调毛细血管扩张症。在一个实施方式中，神经退行性疾病是SCA 1。在一个实施方式中，神经退行性疾病是AOA4。

帕金森病(PD)的主要症状包括僵硬、震颤和缓慢运动。这些症状很普遍的还有其他疾病。这些疾病以及PD本身均属于帕金森综合征这一总称。PD可以称为原发性帕金森综合征。帕金森综合征的其他实例包括：多系统萎缩；进行性核上性麻痹；正常压力脑积水；和血管或动脉硬化帕金森综合征。可以被归类为帕金森综合征但不是PD的那些疾病也可以被称为“帕金森叠加(Parkinson-Plus)综合征”。与PD患者不同，患有帕金森叠加综合征的个体对左旋多巴无反应。这里使用的术语“帕金森综合征”可以指运动综合征，其主要症状是静止时的震颤、僵硬、运动减慢和姿势不稳定。帕金森类综合征可根据其起源分为四种亚型：原发性或特发性；继发性或获得性；遗传性帕金森综合征；和帕金森叠加综合征或多系统退化。

在一个实施方式中，帕金森综合征是帕金森叠加综合征或多系统退化。

在一个实施方式中，帕金森综合征是血管(动脉硬化)帕金森综合征、下半身帕金森综合征、以帕金森综合征为主的多系统萎缩(MSA-P)、伴有小脑特征的多系统萎缩(MSA-C；散发性橄榄体脑小脑萎缩(OPCA))、Shy–Drager综合征、进行性核上性麻痹(Steele-Richardson-Olszewski综合征)、路易体痴呆症、皮克病或与17号染色体连锁的额颞叶痴呆帕金森综合征。

如上所述，在本公开的一个实施方式中，亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐用于治疗患有帕金森综合征的受试者的不宁腿综合征(RLS)，所述帕金森综合征包括但不限于本文所述的任何帕金森综合征。

尼曼-匹克病是常染色体隐性LSD的异质组。常见的细胞特征包括单个核吞噬细胞和实质组织中的异常鞘磷脂(SM)储存，以及(肝)脾肿大。在尼曼-匹克病的三个主要亚组中(A-C)，NPC(以前被分类为NPC和NPD，现在被认为是同一种疾病)被归类为由晚期胞内体/溶酶体区室中由异常的细胞内胆固醇转运诱导的未酯化胆固醇积聚引起的致命脑脊髓交感神经系统LSD。在CNS外，NPC的细胞特征包括晚期胞内体/溶酶体区室内未酯化胆固醇和其他脂类(例如GSL)的异常积累。相反，CNS中胆固醇没有净升高(虽然它确实有改变的分布)，但是存在高度升高的GSL水平。进行性神经变性的特征特别地在于小脑中的GABA能Purkinje神经元的依次变性，其与小脑性共生失调以及NPC过程中出现的神经功能障碍的其他方面的发作和发展平行。遗传学研究表明，NPC病由Npc1或Npc2基因中的突变引起。这两种基因之间的精确机制联系仍然未知，并且这些蛋白质的功能作用仍然神秘。NPC1编码晚期胞内体/溶酶体限制性膜的多膜跨越蛋白，而NPC2是溶酶体的可溶性胆固醇结合蛋白。当NPC1失活时，鞘氨醇是第一个被储存的脂质，表明NPC1在从溶酶体中运输鞘氨醇时起作用，鞘氨醇在此通常作为鞘脂分解代谢的一部分产生。升高的鞘氨醇进而导致钙进入酸性储库方面的缺陷，导致从该室中的钙释放大大减少。这随后阻止晚期胞内体-溶酶体融合(钙依赖性过程)，并导致继发性的脂质(胆固醇、鞘磷脂和鞘糖脂)积累，这些脂质是通过晚期内吞途径运输的货物。抑制NPC1功能的其他继发后果包括有缺陷的内吞作用和清除自噬空泡的失败。已经表明NPC1/NPC2细胞途径被致病性分枝杆菌靶向以促进它们在晚期胞内体中的存活。

NPC小鼠模型与例如阿尔茨海默氏病(AD)有许多相同的病理特征。先前已报道微管相关蛋白1A/1B-轻链3-磷脂酰乙醇胺缀合物(LC3-II)水平在NPC小鼠中升高。LC3-II是自噬体形成的标志物，并且LC3-II水平的增加可以反映自噬泡的清除受损。形成了自噬体，但不清除。AD中自噬受损，AD脑表现出LC3-II水平升高。此外，淀粉样蛋白前体蛋白(APP)是蛋白水解产生β淀粉样蛋白(Aβ)的前体分子。Aβ斑块是AD脑的特征，并且已被提出在疾病病理学中是致病因素。淀粉样蛋白前体蛋白C末端片段(APP-CTF)是APP蛋白水解为Aβ的中间体，其在AD脑中积累并且还在NPC1小鼠的脑中逐渐累积。

泰-萨克斯病是一种特征特别在于CNS组织的致命性脂质代谢遗传性疾病，其由缺乏β-氨基己糖苷酶的A同工酶引起。编码β-己糖胺酶的α亚基的HEXA基因中的突变导致A同工酶缺乏。泰-萨克斯是一组病症GM2神经节苷脂贮积病的原型，其特征在于GM2神经节苷脂降解缺陷。GM2神经节苷脂(单唾液酸神经节苷脂2)在胎儿生命中已经开始在神经元中积累。

Sandhoff病是由β-己糖胺酶的A和B(碱性)同工酶缺乏引起的。在编码β-己糖胺酶的β亚基的HEXB基因中的突变导致B同工酶缺乏。

GM1神经节苷脂贮积病是由β-半乳糖苷酶缺乏引起的，其导致GM1神经节苷脂(单唾液酸化神经节苷脂1)的溶酶体贮存。

法布里病由α-半乳糖苷酶缺乏引起，其导致神经酰胺三己糖苷的溶酶体贮存。

在一个实施方式中，神经退行性疾病不是小脑性共济失调。在一个实施方式中，神经退行性疾病不是尼曼-匹克病。在一个实施方式中，神经退行性疾病不是C型尼曼匹克病。在一个实施方式中，神经退行性疾病不是小脑性共济失调或尼曼-匹克病(例如，C型尼曼-匹克病)。

在一个实施方式中，亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐治疗与尼曼-匹克病(例如，C或A型尼曼匹克病)或II型粘脂贮积病相关的体重下降、步态恶化和/或运动功能恶化。例如，亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐可以延迟与尼曼-匹克病(例如，C或A型尼曼匹克病)或II型粘脂贮积病相关的体重下降、步态恶化和/或运动功能恶化的发作，降低其严重性或将其消除，或者延迟或逆转其进展。在一个实施方式中，体重下降、步态恶化和/或运动功能恶化与A型尼曼匹克病或II型粘脂贮积病相关。

在一个实施方式中，亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐治疗与Sandhoff病相关的步态恶化、运动功能恶化和/或运动性下降。例如，亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐可以延迟与Sandhoff病相关的步态恶化、运动功能恶化和/或运动性下降的发作，降低其严重性或将其消除，或者延迟或逆转其进展。

在一个实施方式中，亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐治疗与泰-萨克斯病相关的协调性下降、震颤、运动性下降、认知受损和/或步态恶化。例如，亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐可以延迟与泰-萨克斯病相关的协调性下降、震颤、运动性下降、认知障碍和/或步态恶化的发作，降低其严重性或将其消除，或者延迟或逆转其进展。

在一个实施方式中，亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐治疗与肌萎缩侧索硬化症(ALS)相关的语言退化(例如，语言流畅度和/或语音调节)、步态恶化、运动性下降、吞咽功能降低和/或轻瘫。例如，亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐可以延迟与ALS相关的语言退化(例如，语言流畅度和/或语音调节)、步态恶化、运动性下降、吞咽功能降低和/或轻瘫的发作，降低其严重性或将其消除，或延迟或逆转其进展。在另一个实施方式中，亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐治疗与ALS相关的睡眠质量降低。例如，亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐可以延迟与ALS相关的睡眠质量降低的发作，降低其严重性或将其消除，或者延迟或逆转其进展。

在一个实施方式中，亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐治疗与多系统性萎缩小脑型(MSA-C)相关的语言退化、步态恶化和/或跌倒倾向增加。例如，亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐可以延迟与MSA-C相关的语言退化、步态恶化和/或跌倒倾向增加的发作，降低其严重性或将其消除，或者延迟或逆转其进展。

在一个实施方式中，亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐治疗与伴有帕金森综合征的额颞叶痴呆相关的步态恶化、跌倒倾向增加和/或语言退化。例如，亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐可以延迟与伴有帕金森综合征的额颞叶痴呆相关的步态恶化、跌倒倾向增加和/或语言退化的发作，降低其严重性或将其消除，或者延迟或逆转其进展。

在一个实施方式中，亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐治疗与皮质基底节变性综合征相关的跌倒倾向增加和/或步态恶化。例如，亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐可以延迟与皮质基底节变性综合征相关的跌倒倾向增加和/或步态恶化的发作，降低其严重性或将其消除，或者延迟或逆转其进展。

在一个实施方式中，亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐治疗与进行性核上性麻痹相关的步态恶化。例如，亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐可以延迟与进行性核上性麻痹相关的步态恶化的发作，降低其严重性或将其消除，或者延迟或逆转其进展。

在一个实施方式中，亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐治疗与小脑下跳性眼球震颤相关的振动幻觉、空间定向恶化、视力恶化和/或姿势摇摆增加。例如，亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐可以延迟与小脑下跳性眼球震颤相关的视振荡、空间定向恶化、视力恶化和/或姿势摇摆增加的发作，降低其严重性或将其消除，或者延迟或逆转其进展。

还提供了一种治疗有需要的受试者的神经退行性疾病或神经退行性疾病的一种或多种症状的方法，该方法包括对受试者施用治疗有效量的亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐。

药剂的“治疗有效量”是指当给予受试者时是产生所期望效果所需要的药剂量的任何量，对于本公开而言，所期望效果可以例如是治疗性的和/或预防性的。剂量可根据各种参数确定，例如所使用的亮氨酸或乙酰-亮氨酸的具体形式；待治疗的患者的年龄、体重和状况；疾病的类型；施用途径；和所需的治疗方案。医师将能够为任何特定患者确定所需的施用途径和剂量。例如，每日剂量可以是约10至约225mg/kg、约10至约150mg/kg、或约10至约100mg/kg体重。

还公开了一种治疗受试者的神经退行性疾病的试剂盒，其包含用于诊断或预后所述病症/病症的组件，以及亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐。

用于诊断或预后神经退行性疾病的组件可以包括特异性结合剂、探针、引物、引物对或引物组合、酶或抗体(包括抗体片段)，其能够检测或帮助检测本文定义的神经退行性疾病。试剂盒可以包含其是荧光标记物，并且可以从Invitrogen和Lonza商购获得。/>可以是蓝色、蓝白色、黄色、绿色或红色。

试剂盒还包含本文所定义的亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐。试剂盒可进一步包含缓冲液或水溶液。试剂盒可进一步包含在本发明的方法中使用亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐的说明书。

在又一个实施方式中，公开了亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐，其用于在有需要的受试者(例如，患有、疑似患有或有风险患有神经退行性疾病的受试者)中提供神经保护的方法中。

本文所用的“神经保护”及其同义词指的是预防神经变性、减缓和/或逆转神经变性的进展，神经变性包括但不限于神经元结构的进行性损失、神经元功能的进行性损失和/或进行性神经元死亡。提供神经保护可以导致延迟神经退行性疾病或神经退行性疾病的一种或多种症状的发作(所述疾病或症状原本预期会按照典型疾病进展显现)，降低神经退行性疾病的严重性，或者降低与神经退行性疾病相关的一种或多种已有症状的严重性或消除这些症状，与典型疾病进展相比延迟神经退行性疾病或神经退行性疾病的一种或多种症状随时间的进展，和/或逆转神经退行性疾病或神经退行性疾病的一种或多种症状随着时间的进展。提供神经保护的时间可以与本文所述的治疗持续时间一致。治疗可在例如约7天或更长、约2周或更长、约3周或更长、约1个月或更长、约6周或更长、约7周或更长、或约2个月或更长的持续时间内提供神经保护。治疗可在约3个月或更长、约4个月或更长、约5个月或更长、或约6个月或更长的持续时间内提供神经保护。它可在例如，约1年或更长、约2年或更长、约3年或更长、约4年或更长、约5年或更长、或约10年或更长的持续时间内提供神经保护。治疗可以在患者的生命期间提供神经保护。

在另一个实施方式中，在有需要的受试者(例如，患有、疑似患有或有风险患有神经退行性疾病的受试者)中提供神经保护的方法包括对受试者施用治疗有效量的亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐。

还公开了一种用于在有需要的受试者(例如，患有、疑似患有或有风险患有神经退行性疾病的受试者)中提供神经保护的试剂盒，该试剂盒包括用于诊断或预后该疾病/病症的组件，以及亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐。

本公开还包括亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐作为有需要的受试者(例如，患有、疑似患有或有风险患有神经退行性疾病的受试者)的神经保护剂的应用。

本文(包括任何所附权利要求、摘要和附图)描述的所有特征和/或如此公开的任何方法的所有步骤都可以与任何上述方面以任何组合方式组合，除了其中至少一些所述的特征和/或步骤是互斥的组合之外。

实施例

现将在以下实施例中进一步详细解释本发明，实施例证明了亮氨酸、乙酰-亮氨酸在受试者中治疗神经退行性疾病和在所述受试者中提供神经保护中的效用。

实施例1

体内小鼠研究-方法

小鼠模型

该研究利用了NPC的真实小鼠模型，即Npc1^-/-(BALB/cNctr-Npc1^m1N/J)小鼠，其没有NPC1蛋白并且显示临床疾病的所有特征(Loftus,1997)。

这种突变系自发产生，寿命在10-14周，因此具有比绝大多数患者更急性的病程。突变小鼠不仅已成功用于确定疾病的个体发生和潜在的致病机制，还成功用于评估实验性疗法。使用这些小鼠的分析已经在整个动物、细胞和分子水平进行(Baudry,2003；Smith,2009；Cologna,2014；Cologna,2012)。它是研究最多的NPC动物模型。

在约4-5周龄之前，Npc1^-/-小鼠没有使它们与野生型同窝小鼠区别开的可辨别的疾病行为指征。到第5-6周出现了行为缺陷的第一批指征，例如震颤和共济失调步态；到第7-8周，运动协调缺陷变得更加明显，并且到9-10周时，共济失调发展，伴随着由于进食和饮水变得困难而造成的体重减轻和皮毛状况不佳的加剧(采用人道终点)(Smith,2009)。

野生型(Npc1^+/+)同窝小鼠用作对照。

治疗程序

从断奶(3周龄)起，Npc1^-/-小鼠组和Npc1^+/+小鼠组用在小鼠饲料中混合提供的0.1g/kg乙酰-DL-亮氨酸治疗。单独的Npc1^-/-和Npc1^+/+小鼠组未治疗，作为对照。

皮毛情况

通过简单观察9周龄的小鼠来比较经过和未经过乙酰-DL-亮氨酸治疗的Npc1^-/-小鼠的皮毛条件。

体重数据

每周称重动物两次。对每组中所有小鼠的体重进行平均(平均值)并进行比较。

步态分析

根据制造商(Noldus,Nottingham,UK)的说明书，使用15.0系统对8周龄小鼠进行步态分析。每只动物记录五次运行。

测量的参数为：

1.站立平均值：爪与玻璃板接触的平均持续时间(s)；

2.步伐周期：同一爪的两个连续接触之间的持续时间；

3.占空比：爪与板接触的时间与完成步伐周期的时间相比的百分比；

4.步序列(AB):以LF-RH-RF-LH交替模式行走所花费的时间百分比(LF：左前；RH：右后；RF：右前；LH左后)；

5.步频:试验中每秒的步数；

6.对角支撑：对角爪与玻璃板同时接触的时间的百分比(RF&LH或RH&LF)。

运动功能分析

根据制造商(Linton Instruments,Amlogger Software)的说明书，使用OpenField Activity Monitor对8周龄和9周龄的小鼠进行运动功能分析。将每只小鼠置于带有垫层的塑料笼中并分析5分钟。人工计数直立数。

测量的运动功能参数为：

1.中心直立：小鼠在无支撑的情况下以后腿直立；

2.直立：小鼠在有和没有笼壁支撑的情况下以后腿直立；

3.活动性：动物的定期运动，包括行走；

4.前至后(FR)计数：动物从笼的前部到后部的移动；

5.活动时间：活动持续时间(s/min)，无论是否移动；

6.移动时间：移动持续时间(s/min)；

7.直立时间：任何直立的持续时间。

结果

皮毛情况

图1B显示了未经治疗的Npc1^-/-年龄匹配的同窝小鼠。因为进食和饮水变得困难，观察到Npc1^-/-小鼠在9周龄时具有差的皮毛状况(参见图1B)。

与此形成鲜明对比的是，图1A显示了来自从断奶起以乙酰-DL-亮氨酸治疗的Npc1^-/-小鼠。用乙酰-DL-亮氨酸治疗的Npc1^-/-小鼠具有光滑和有光泽的皮毛，让人联想到野生型(Npc1^+/+)同窝小鼠(见图1A)。

体重数据

如图2A所示，在研究期间，即从3周至10周龄，野生型(Npc1^+/+)小鼠体重逐渐增加。此外，图2A显示了每组小鼠在各时间点的平均体重(Npc1^-/-未治疗，n＝1；Npc1^-/-乙酰-DL-亮氨酸0.1g/kg，n＝3；Npc1^+/+未治疗，n＝3；Npc1^+/+乙酰-DL-亮氨酸0.1g/kg,n＝2)。

用乙酰-DL-亮氨酸治疗对该体重增加没有显著影响。

Npc1^-/-小鼠最初体重增加，基本与Npc1^+/+对照的方式相同。但是，Npc1^-/-小鼠从6周龄开始减重。在研究结束时(10周龄)，小鼠的体重几乎低至仅四周龄时那样。

与未经治疗的组相比，用乙酰-DL-亮氨酸治疗将这些体重减轻症状延迟了两周。

图2B中显示了Npc1^-/-小鼠在有和没有乙酰-DL-亮氨酸治疗的情况下的体重变化的比较。特别地，图2B仅对于Npc1^-/-小鼠显示了每个时间点的每组小鼠体重的变化(％)。从该图中清楚地看出乙酰-DL-亮氨酸治疗在延迟体重减轻方面的有益效果。

步态分析

步态分析的结果如图3所示。图3A-3C分别显示了对角支撑、步频和步序列数据。图3D和3E示出了前爪(FP)数据(图3D中为站立平均数和步伐周期；图3E中为占空比)。图3F和3G示出了后爪(HP)数据(图3F中为站立平均数和步伐周期；图3G中为占空比)。数据表示为平均数±SEM。未经治疗的Npc1^+/+，n＝3；经治疗的Npc1^+/+，n＝2；未经治疗的Npc1^-/-，n＝1(因此未进行统计学分析)；经治疗的Npc1^-/-，n＝3。

每个图中的第一个条柱显示了野生型(Npc1^+/+)小鼠的步态性质。

每个图中的第二个条柱显示了用乙酰-DL-亮氨酸治疗的野生型(Npc1^+/+)小鼠的步态性质。这些小鼠与其未经治疗的同窝小鼠之间，步态性质没有显著差异。

每个图中的第三个条柱显示了Npc1^-/-小鼠的步态性质。总体来说，该小鼠与Npc1^+/+小鼠相比表现出较差的步态。小鼠在对角支撑(图3A)或步序列(图3C)中花费极少的时间(如果有的话)，而其在站立平均值(图3F)和占空比(图3G)中的后爪功能也受到严重阻碍。

每个图中的第四个条柱显示了经乙酰-DL-亮氨酸治疗的Npc1^-/-小鼠的步态性质。与未经治疗的其同窝小鼠相比，这些小鼠表现出显著改善的步态。实际上，它们显示出与Npc1^+/+小鼠类似的步态性质。

运动功能分析

8周龄时的分析显示，Npc1^-/-和野生型(Npc1^+/+)小鼠之间的运动功能性质没有差异(数据未示出)。

然而，到9周龄时，运动协调缺陷已变得明显。

9周时的运动功能分析结果如图4所示。中心直立、活动性、直立和前至后(FR)计数分别示于图4A-4D中。活动时间、移动时间、直立时间和总人工直立计数分别示于图4E-4H中。数据表示为平均数±SEM。未经治疗的Npc1^+/+，n＝3；经治疗的Npc1^+/+，n＝2；未经治疗的Npc1^-/-，n＝1(因此未进行统计学分析)；经治疗的Npc1^-/-，n＝3。

每个图中的第一个条柱显示了野生型(Npc1^+/+)小鼠的运动功能性质。

每个图中的第二个条柱显示了用乙酰-DL-亮氨酸治疗的野生型(Npc1^+/+)小鼠的运动功能性质。这些小鼠与未经治疗的其同窝小鼠之间的运动功能性质没有显著差异。

每个图中的第三个条柱显示了Npc1^-/-小鼠的运动功能性质。总体来说，该小鼠与Npc1^+/+小鼠相比表现出较差的运动功能。小鼠在直立(图H)、特别是在无支撑的情况下以后腿直立(图A)上花费极少的时间(如果有的话)。

每个图中的第四个条柱显示了经乙酰-DL-亮氨酸治疗的Npc1^-/-小鼠的运动功能性质。与未经治疗的其同窝小鼠相比，这些小鼠表现出显著改善的运动功能。实际上，它们显示出与Npc1^+/+小鼠类似的运动功能性质。

寿命

还观察到用乙酰-DL-亮氨酸治疗(3周龄起，0.1g/kg)Npc1-/-小鼠与寿命的统计学显著的增加相关(图5)。该数据进一步表明乙酰-亮氨酸在延缓该疾病发作中的效果。

结论

在Npc1^-/-小鼠从5-6周龄起具有将其与野生型同窝小鼠区分开的可辨别的疾病指征的情况下，自断奶起经乙酰-DL-亮氨酸治疗的Npc1^-/-同窝小鼠直到两周或更长时间后没有表现出这样的症状。用乙酰-DL-亮氨酸治疗Npc1^-/-小鼠延迟了NPC症状的发作和进展，并显示出神经保护作用的证据。

可以合理地预期，由于乙酰-DL-亮氨酸提供了总体神经保护，在NPC中观察到的结果也将在其他神经退行性病症以及与溶酶体贮存缺陷相关的神经退行性疾病中观察到。

实施例2

方法

来自NPC患者的成纤维细胞系用N-乙酰-DL-亮氨酸(1mM)处理3天，并通过LysoTracker(一种在酸性细胞器中积累的荧光染料)定量相对溶酶体体积。增加的LysoTracker荧光指示溶酶体大小和/或数量的增加，并且是NPC细胞的特征。

此外，来自尼曼-匹克A(NPA)、II型粘脂贮积病(MLII)、IIIB型粘多糖贮积病(MPSIIIB)、天冬氨酰氨基葡萄糖尿、IIIA型粘脂贮积病IA(MLIIIA)和VII型粘多糖贮积病(MPSVII)患者的成纤维细胞用乙酰-DL-亮氨酸(1mM)处理6天，并通过LysoTracker定量溶酶体体积。

结果

用1mM N-乙酰-DL-亮氨酸处理源自轻度临床严重性的NPC患者的成纤维细胞与LysoTracker荧光的显著降低相关，表明溶酶体体积随时间减少(图6A)。这些发现在用1mMN-乙酰-DL-亮氨酸处理72小时的获自具有可变临床严重性的其他NPC患者的成纤维细胞中重现(图6B)。

观察到源自NPA和MLII、MPS IIIB、天冬氨酰氨基葡萄糖尿、MLIIIA和MPS VII患者的成纤维细胞相对于年龄匹配的野生型对照具有升高的LysoTracker荧光水平(图6C-6H)。这表明与来自健康个体的成纤维细胞相比，由于脂质储存而发生溶酶体扩大。分别相对于未经处理的NPA和MLII和MPS IIIB成纤维细胞，乙酰-亮氨酸处理与NPA和MLII和MPS IIIB成纤维细胞中的LysoTracker荧光向着对照水平的统计学显著降低相关(图6C-6E)，并且分别相对于未经处理的天冬氨酰氨基葡萄糖尿、MLIIIA和MPS VII成纤维细胞，乙酰-亮氨酸处理与天冬氨酰氨基葡萄糖尿、MLIIIA和MPS VII成纤维细胞中的LysoTracker荧光向着对照水平的降低趋势相关(图6F-6H)。LysoTracker荧光的减少表明溶酶体体积减少(图6C-6H和6D)。图6A-6D中所示的数据显示了对于每种细胞系分别用1mM乙酰-亮氨酸处理6天后的结果，其中溶酶体体积表示为相对于未经处理的野生型成纤维细胞的倍数变化。星号(*/****)表示与未处理的成纤维细胞相比的p值(<0.05/0.001)。

结论

N-乙酰-DL-亮氨酸治疗与通过减少溶酶体体积来纠正扰乱的溶酶体储存相关，因此乙酰-亮氨酸直接纠正了这些溶酶体储存病症的表型。这些疾病代表不同类型的LSD，因此这些结果进一步支持了乙酰-亮氨酸对抗多种溶酶体贮积病的效用。

实施例3

Sandhoff病是一种可能由HEXB基因突变的常染色隐性遗传引起的疾病，该基因编码β-己糖苷的β-亚基。结果，GM2神经节苷脂不能降解并在外周和中枢神经系统(CNS)细胞的溶酶体内积累。

这项研究利用了Sandhoff病的小鼠模型，Hexb^-/-小鼠，如Jeyakumar等所描述(Jeyakumar,M.等(1999)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 96:6388-6393)。

野生型(Hexb^+/+)小鼠用作对照。

寿命

乙酰-DL-亮氨酸治疗与Sandhoff小鼠寿命的统计学显著增加相关(图7A)。在图7A中，乙酰-亮氨酸治疗的小鼠自3周龄起以0.1g/kg乙酰-亮氨酸治疗。星号(*)表示与未经治疗的Sandhoff小鼠相比p值<0.05。数据是每组n＝6小鼠的平均值。在未治疗的情况下，Sandhoff小鼠的中位生存时间为112天。用乙酰-亮氨酸治疗(自3周龄起，0.1g/kg体重)使中位寿命延长至120天。

运动功能

用乙酰-亮氨酸治疗Sandhoff小鼠使得运动功能改善，如跨杆和步伐周期研究所示。

跨杆测试

跨杆测试是评估小鼠的运动功能的方法，其中将小鼠通过其前肢从水平杆的中心处悬挂放置。具有正常运动功能的野生型小鼠将能够踏进其后肢，从而移动至杆的任一端的一个平台，并且通过这样做完成测试。

未经治疗的Sandhoff小鼠直到约11周龄能够完成测试。在此之后，运动功能和后肢移动力/踏进已经恶化至小鼠无法完成测试的程度，并且将从杆上下落到下方的衬垫表面上。

使用乙酰-DL-亮氨酸(从3周龄起，0.1g/kg体重)治疗Sandhoff小鼠模型，与改善的运动功能和后肢移动力/踏进相关，如跨杆试验所评估的(图7B)。在图7B中，从3周龄起提供0.1g/kg体重的乙酰-亮氨酸治疗。乙酰-亮氨酸治疗的Sandhoff小鼠直至13周龄(含)都保留了完成测试的能力。显示的数据是每组6只小鼠的平均值。经治疗的Sandhoff小鼠直至13周龄(含)都保留了完成测试的能力。

步伐周期

步伐周期是肢体从离开地面到下一次离开地面时行进所需的时间。

在12周龄时评估未经治疗的和经乙酰-亮氨酸治疗的Sandhoff模型小鼠的步伐周期时间。乙酰-亮氨酸治疗包含从起3周龄的0.1g/kg体重的乙酰-亮氨酸。

用乙酰-亮氨酸治疗Sandhoff小鼠模型与显著加快的前步伐周期时间(p<0.05vs未经治疗的SH小鼠)、显著加快的后步伐周期时间(p<0.01vs未经治疗的SH小鼠)和显著加快的平均步伐周期时间(p<0.001vs未经治疗的SH小鼠)相关(图7C)。在图7C中，从3周龄起提供0.1g/kg体重的乙酰-亮氨酸治疗。前步伐周期指的是小鼠的前肢，后步伐周期指的是小鼠的后肢，平均步伐周期考虑了小鼠的全部四肢。星号(*/**/***)表示相对于未经治疗的Sandhoff小鼠的p值<0.05/0.01/0.001。所示数据为平均值±标准偏差。

因此，在Sandhoff小鼠模型中，乙酰-亮氨酸治疗与更快的步伐周期相关，这可以表明运动功能的改善。

结论

这些研究表明，如两次独立实验所评估的，对于Sandhoff病小鼠模型的乙酰-亮氨酸治疗可以改善运动功能，并且显著延长寿命。

实施例4

GM2神经节苷脂贮积病是由β-己糖胺酶活性缺陷引起的一组溶酶体贮积病。该组包括泰-萨克斯病、Sandhoff病和泰-萨克斯病的AB变种。

源自GM2患者(泰-萨克斯病、Sandhoff病和泰-萨克斯病的AB变种)患者和健康对照的成纤维细胞用乙酰-DL-亮氨酸处理(1mM，持续6天)，然后通过高效液相色谱(HPLC)提取糖鞘脂并定量糖鞘脂(GSL)水平。

在没有处理的情况下，来自所有3个种类的GM2神经节苷脂贮积病的成纤维细胞表现出与未经处理的野生型对照相比升高的GSL水平。在全部三种情况下，乙酰-DL-亮氨酸处理(1mM，持续6天)与GSL贮积减少相关。在泰-萨克斯病的情况下，这种下降具有统计学显著性(p<0.05)。在Sandhoff病和泰-萨克斯的AB变种的情况下，存在与治疗相关的GSL水平降低趋势。图8A-8C中所示的数据分别显示了对每种细胞系的处理结果，其中GSL水平针对蛋白质含量进行了调整，并表示为相对于未经处理的野生型成纤维细胞的水平的倍数变化。

实施例5

患者1

本案例研究中的患者是一名28岁的男性，经遗传诊断患有泰-萨克斯病，并表现出发音障碍(dysarthrophonia)、震颤、站姿和步态的共济失调、下肢轻瘫和肌肉萎缩。特别是，患者无法站立或行走，在强有力的支撑下可以迈出单步，并且具有明显的姿势不稳定、眼球运动障碍、吞咽困难和构音困难、以及轻度认知功能障碍。在16岁时观察到第一批症状。

在开始治疗之前，对患者的检查表明共济失调评价和分级量表(SARA)评分为15.5/40。另外，患者的脊髓小脑性共济失调功能指数(SCAFI)的分析结果如下：

平均8米行走测试(8MW):21.6s

MW 9孔插板测试优势(9HPTD)(右):48.3s

MW 9孔插板测试非优势(9HPTND):44.9s

MW PATA单词测试:20

蒙特利尔认知评估(MoCA):18/30

还记录了患者的视频以供稍后比较。

在该检查后的第二天，患者开始接受乙酰-亮氨酸治疗，第一周剂量为3g/天，然后第二周及以后的剂量为5g/天。

分别在一个月和四个月后，在继续治疗的同时对患者进行了重新检查。一个月后，患者改善了精细运动技能并减少了手部震颤，例如在进食或饮水时。步行没有明显改变。四个月后，患者处于稳定状态，认知功能略有改善，但站姿、步态和运动功能均有下降。患者的SARA评分和患者的SCAFI分析结果与基线相比如下所示。

	基线	用乙酰-DL-亮氨酸1个月后	用乙酰-DL-亮氨酸4个月后
				SARA	15.5/40	15.5/40	17/40
8MWT	21.6sec	7sec	25.49sec
				9HPTD	48.3sec	45.9sec	48.67sec
9HPTND	44.9sec	40.1sec	47.09sec
				PATA	20	22	21
MoCA	18/30	21/30	22/30

表1.患者评价参数

总体而言，患者在乙酰-亮氨酸治疗后表现出症状改善。

患者2

本案例研究中的患者是一位32岁的女性，经遗传诊断患有泰-萨克斯病，并且表现出站姿和步态的共济失调、精细运动受损、下肢轻瘫和肌肉萎缩。特别是没有支撑不能走路，并且患者患有吞咽困难和语言障碍、眼球运动障碍和轻度认知功能障碍。在7岁时观察到第一批症状。

在开始治疗之前，对患者的检查表明共济失调评价和分级量表(SARA)评分为10.5/40。此外，患者的脊髓小脑性共济失调功能指数(SCAFI)的分析结果如下：

平均8米行走测试(8MW):12.5s

MW 9孔插板测试优势(9HPTD)(右侧):21.5s

MW 9孔插板测试非优势(9HPTND):35.5s

MW PATA单词测试:18

蒙特利尔认知评估(MoCA):21/30

还记录了患者的视频以供稍后比较。

在检查当天，患者开始接受乙酰-亮氨酸治疗，第一周剂量为3g/天，然后第二周及以后的剂量为5g/天。

一个月后，在继续治疗的同时对患者进行了重新检查，并显示出增加的发音、改善的姿势稳定性和增强的认知功能。可以在没有支撑的情况下实现站姿和步态。患者的SARA评分和患者的SCAFI分析结果与基线相比如下所示。

	基线	用乙酰-DL-亮氨酸1个月后
			SARA	10.5/40	5/40
8MWT	12.5sec	9.55sec
			9HPTD	21.5sec	34.97sec
9HPTND	35.5sec	39.34sec
			PATA	18	17
MoCA	21/30	25/30

表2.患者评价参数

患者3

本案例研究中的患者是一名8岁的男性，经遗传诊断患有泰-萨克斯病，具有几乎每天入睡前的癫痫痉挛(强直-阵挛性，约10秒，自限性)、眼球运动障碍、构音不全、明显的认知功能和集中问题(神经系统检查不可能)，不能自行站立或行走，并且日常活动非常受限(不可能自己吃、洗、穿衣)。在9个大月时观察到第一批症状。

在开始治疗之前，对患者的检查表明共济失调评价和分级量表(SARA)评分为36/40，mRDS评分为18/24，EQ-5D-5L视觉量表为50，并且8MWT为18.1(只在强有力的支撑下)。

患者开始接受乙酰-亮氨酸治疗，第一周剂量为1.5g/天，然后第二周及以后剂量为3g/天。

一个月后，患者在继续治疗的同时进行了重新检查，并显示出增加的精细运动技能(能够抓住小的东西)、增加的动机(更多地尝试自己行走)、改善的姿势稳定性、步态和站姿，并且可以说单个单词。患者的SARA、mRDS、EQ-5D-5L视觉量表和8MWT评分与基线相比如下所示。

表3.患者评价参数

实施例6

本案例研究中的患者是一名13岁的男性，经遗传诊断患有GM1神经节苷脂贮积病，并且不能自行站立或行走，日常活动非常受限(不可能自己吃、洗、穿衣)，并有眼移动障碍、构音不全和明显的认知功能和集中问题(神经系统检查不可能)。在2岁时观察到第一批症状。

在开始治疗之前，对患者的检查表明共济失调评价和分级量表(SARA)评分为35/40，mRDS评分为15，EQ-5D-5L视觉量表为50。

患者开始接受乙酰-亮氨酸治疗，第一周剂量为1.5g/天，然后第二周及以后剂量为3g/天。

一个月后，患者在继续治疗的同时进行了重新检查，表现出稳定的总体情况，步态增加(更流畅)，并且自然姿势下的站姿稳定。患者的SARA、mRDS和EQ-5D-5L视觉量表分数与基线相比如下所示。

	基线	用乙酰-DL-亮氨酸1个月后
			SARA	35/40	35/40
mRDS	15	16
			EQ-5D-5L视觉量表	50	60

表4.患者评价参数

实施例7

患者1

本案例研究中的患者是一名73岁的男性，此前曾被诊断患有肌萎缩侧索硬化症(ALS)。

患者的症状学特征为进展性构音困难(鼻腔音和语言急促不清)以及右背屈的无力，以及在此前三年中出现足下垂。

临床上，患者显示出延髓病性言语，右脚背屈的3/5轻瘫和大脚趾抬高，全身过度反射和右下肢的痉挛性紧张度增加。EMG显示自发活动，cMRT未显示任何病理。

在ALS诊断时，患者开始使用Riluzol进行药物治疗。然而，临床症状仍未改变。

然后患者开始接受乙酰-DL-亮氨酸治疗，第一周剂量为3g/天，然后第二周及以后剂量为5g/天。结果通过视频记录。

治疗15天后，进行医学检查，其中患者报告语言显著改善。与用药前相比，患者能够说得更流利，并且能够更好地调整他的声音(通过视频记录)。

再过20天后，进行了进一步的医学检查，其中患者报告了语言的进一步改善。此外，患者报告了步态的改善。右足背屈的轻瘫以及因此的足下垂得到显著改善，并且在临床上几乎检测不到。此外，患者报告睡眠有所改善：入睡更快，睡得更久，早上明显感觉休息得更充分。

患者继续治疗大约另外30天。在患者停止治疗后约7天，进行了医学检查，其中患者报告语言或右背屈的轻瘫没有进一步主观改善。睡眠也有所恶化。在脱离乙酰-亮氨酸治疗约另外1-2周后，患者报告语言恶化。患者此时恢复治疗，约两个月后，报告症状稳定。与首次启动乙酰-亮氨酸治疗时相比，可观察到轻微的语言恶化。

由于患者没有观察到任何语言的改善，患者要求停止服药。约2-3周后，患者再次报告停止乙酰-DL-亮氨酸治疗后语言恶化。患者恢复了治疗，并报告改善了症状，特别是语言。

总体而言，患者在乙酰-亮氨酸治疗后表现出症状改善。

患者2

本案例研究中的患者是一名74岁的男性，此前曾被诊断患有ALS。

患者的症状学特征为进展性构音困难(鼻腔音和语言急促不清)，和伴随的吞咽困难，行走时虚弱超过一年，并且左上肢轻瘫约4个月。EMG在延髓、颈椎和腰椎节段中显示出广泛的多相活动和慢性神经原性损伤。

患者的临床检查显示出严重的构音困难，舌头运动不足，左臂2/5-3/5轻瘫，精细运动技能受损，全身过度反射和肌束震颤。Riluzol药物治疗已在一个月前开始。

患者开始接受乙酰-DL-亮氨酸治疗，第一周剂量为3g/天，然后第二周及以后剂量为5g/天。

约2个月之后，对患者重新检查，他报告了左手运动功能的进展性恶化，但步行有不连续改善。此外，吞咽功能保持稳定。

患者3

本案例研究中的患者是一名66岁的男性，此前曾被诊断患有ALS。

患者的症状学特征为进展性双侧近端上肢无力和萎缩，精细运动技能轻微受损，以及全身肌束震颤和痉挛。EMG显示病理性自发活动和慢性神经性改变，脑和颈柱的MRT未显示任何病理学。开始使用Riluzol进行药物治疗。

约两个月后，临床检查显示肩部和近端手臂均为3/5至4/5轻瘫，精细运动技能减慢，全身性肌束震颤和正常反射。患者开始用乙酰-DL-亮氨酸治疗，第一周剂量为3g/天，然后第二周及以后剂量为5g/天。

一个月后，患者没有报告症状改善，上肢肌肉力量没有改善。用乙酰-DL-亮氨酸治疗暂停，患者被要求报告症状恶化。

患者4

本案例研究中的患者是一名66岁的男性，此前曾被诊断患有ALS。患者的症状学特征为进展性双侧近端上肢无力和萎缩，精细运动技能轻微受损，以及全身肌束震颤和痉挛。EMG显示病理性自发活动和慢性神经性改变，脑和颈柱的MRT未显示任何病理学。开始使用Riluzole进行药物治疗。

临床检查显示肩部和近端手臂均为3/5至4/5轻瘫，精细运动技能减慢，全身性肌束震颤和正常反射，并且ALS-FRS评分为44/48。

患者开始用乙酰-DL-亮氨酸治疗，第一周剂量为3g/天，然后第二周及以后剂量为5g/天。

约一个月后，患者报告吞咽困难的主观改善，并且唾液过度分泌降低。他的亲属报告改善的和更有生机的面部表情。四肢无力没有改变。治疗暂停，10天后，患者报告症状恶化，特别是吞咽困难和唾液过度分泌的主观恶化。患者恢复了连续治疗。

约8周后对患者进行了重新评估，症状保持稳定。患者的ALS-FRS评分为43/48。与诊断时的症状相比，步态和上肢无力仅有轻微的进展。

实施例8

证实乙酰-亮氨酸治疗使3名诊断患有多系统性萎缩小脑型(MSA-C)的患者得到改善。

患者1

本案例研究中的患者1是一名50多岁后半段的女性，她在过去三年中表现出进行性共济失调，伴有语言障碍和行走问题。

患者的临床检查显示中枢小脑眼运动征，中度发音障碍，轻度肢共济失调，站姿和步态中度共济失调。此外，患者的MRI显示小脑和脑干、特别是脑桥和中脑的萎缩。因此患者被诊断为患有MSA-C。

患者开始用乙酰-DL-亮氨酸治疗，剂量为每天5g(醒来时2g，午餐前1.5g，晚餐前1.5g)。

治疗一周后，患者已经表现出明显的语言改善。

患者2

本案例研究中的患者是一名77岁的男性，被诊断出患有MSA-C。

患者的症状学特征为是进行性行走困难和不稳固步态且有跌倒倾向(患者每月跌倒约10次)。患者在过去四年中表现出头晕、运动功能减退-僵硬综合征、眼球急动、协调试验中的辨距不良和自主功能障碍，例如勃起功能障碍、直立性低血压和膀胱排空不完全。

在治疗开始之前，患者的症状保持了至少三个月不变。

患者开始用乙酰-DL-亮氨酸治疗，第一周剂量为每天3g，然后剂量为每天5g。

治疗3周后，进行进一步检查。患者和他的妻子报告了步态的显著改善：患者走得更稳固，跌倒完全停止。此外，患者经历的头晕大大改善。

患者被指示停止服药，一周后患者报告步态和头晕恶化。患者报告说感觉走路更不稳固，有强烈的跌倒倾向。

然后患者被指示重新开始服药，其再继续服用40天，然后再次停药。在停药后7天的临床检查期间，患者确认在停止治疗后2天有步态和头晕的进行性恶化，并且在停止治疗后5天有非常强烈的跌倒倾向。患者随后恢复了继续治疗。

患者3

本案例研究中的患者是一名76岁的男性，被诊断患有少症状型MSA-C。

患者的症状学特征为进行性行走困难和步态不稳固(没有跌倒)，以及头晕。

临床上，患者表现出眼球急动和协调测试中的辨距不良。cMRI显示中脑萎缩，脑的FDG-PET显示纹状体和小脑的代谢降低。患者的姿势测试结果是病态的，具有高的跌倒倾向。

在治疗开始之前，患者的临床症状保持了至少一年的时间不变。

进行了步态分析，分析显示无规则步态，与正常范围相比速度降低且足迹宽度增加，并且有步态波动。然后患者开始用乙酰-DL-亮氨酸治疗，第一周剂量为3g/天，然后第二周及以后剂量为5g/天。

治疗一个月后，进行进一步检查。步态分析显示步态速度有所改善，足迹宽度和步态波动降低。

	开始治疗后不久	治疗后27天	正常范围(±SD)
				速度(cm/sec)	72	106	110.81(18.33)
最大速度(cm/sec)	183	208	158.30(22.66)
				步频(步/分钟)	101	113	109.19(12.75)
足迹宽度(cm)	16.8	14.6	9.06(1.94)
				步伐周期长度(cm)	87	113	121.81(11.52)
双重站姿(％)	32.5	27.3	20.73(2.55)
				变化系数(颞侧)	3.3	3.1	1.94(0.85)
功能性步态评估	21/30	20/30	24.9(3.6)

表5.步态分析参数

患者被指示停止服药，他在停止服药后约2-3周报告步态和头晕逐渐恶化。

患者随后恢复持续治疗并且症状再次改善。治疗再次暂停，三周后对患者进行评估。患者报告症状、特别是头晕恶化。步态分析显示步宽度增加，与治疗前状态相当：

	再次暂停治疗后20天
		速度(cm/sec)	106
最大速度(cm/sec)	197
		步频(步/分钟)	112
足迹宽度(cm)	17.5
		步伐周期长度(cm)	115
双重站姿(％)	27.1
		变化系数(颞侧)	2.5
功能性步态评估	22/30

表6.步态分析参数

实施例9

本案例研究中的患者是一名59岁的男性，具有进行性性格改变，特征是表情淡漠、嗜睡和情感淡漠。此外，患者主要表现为左侧运动功能减退-刚性综合征，伴有精细运动技能受损和左臂共鸣降低。此外，患者表现出全身性运动迟缓和步态障碍，步伐较小，每月2-3次跌倒。患者还表现出语言急促不清和认知缺陷，涉及精神运动性减慢和语义词流畅性降低。

患者被诊断患有伴有帕金森综合征的额颞叶痴呆，Datscan显示支持该诊断结果的多巴胺受体降低。脑的FDG-PET显示主要是额侧的代谢降低。

患者在用L-多巴和罗匹尼罗(Ropinirol)治疗期间几乎没有改善。

患者开始用乙酰-DL-亮氨酸治疗，第一周剂量为3g/天，然后以5g/天的剂量持续4周。

在约一个月的乙酰-亮氨酸治疗后，停止用药并在13天后重新检查患者。

患者和他的妻子和女儿报告用乙酰-亮氨酸治疗时步态显著改善，此外患者停止跌倒。患者也表现出语言的改善，语言不那么急促不清，更容易理解，并且主观上控制力更强。停止治疗后症状恶化。

实施例10

本案例研究中的患者是一名75岁男性，患有进行性不稳固步态障碍和头晕，导致向后跌倒。此外，患者呈现出一种主要左侧运动功能减退-僵硬综合征，伴有失用症和异己肢体现象。

该患者被诊断患有皮质基底综合症。Datscan显示多巴胺受体降低，MRI显示右半球的萎缩性运动性皮质，支持了诊断结果。

患者在用左旋多巴治疗期间没有表现出改善。

患者开始用乙酰-DL-亮氨酸治疗，剂量为第一周每天3g，然后每天5g。在开始治疗之前进行了步态分析。

在乙酰-亮氨酸治疗20天后，重新检查患者。注意到头晕症状的改善和跌倒频率的显著降低。

	治疗前	治疗20天后	平均值(±SD)
				速度(cm/sec)	63	92	110.81(18.33)
最大速度(cm/sec)	131	152	158.30(22.66)
				步频(步/分钟)	90	106	109.19(12.75)
足迹宽度(cm)	12.1	12.3	9,06(1.94)
				步伐周期长度(cm)	84	104	121.81(11.52)
双重站姿(％)	29.8	26.6	20.73(2.55)
				变化系数(颞侧)	3.9	3.4	1.94(0.85)
功能性步态评估	13/30	18/30	24.9(3.6)

表7.步态分析参数

步态分析参数在客观上有改善，例如在速度、最大速度、步频和降低的双重站姿方面(表2和图9)。

在乙酰-亮氨酸治疗8周后，停止用药并在6天后重新检查患者。

患者报告在暂停治疗两天后头晕症状增加(醉酒的感觉)。

患者随后恢复了持续治疗。

实施例11

患者1

本案例研究中的患者是一名76岁女性，其患有头晕，主要发生在行走时。没有报告跌倒。患者还表现出步态紊乱，步小，全身性运动迟缓和垂直凝视麻痹，精细运动技能受损。

该患者被诊断患有进行性核上性麻痹。Datscan显示多巴胺受体降低，脑FDG-PET显示主要是额侧的代谢降低，支持了诊断结果。

患者在用左旋多巴治疗期间几乎没有改善。

患者开始用乙酰-DL-亮氨酸治疗，第一周剂量为每天3g，然后以每天5g剂量持续4周。在乙酰-亮氨酸治疗27天后，停止药物治疗，并在60天后重新检查患者。

患者报告用乙酰-亮氨酸治疗后头晕明显降低，步态略有改善。治疗暂停后，症状恶化。

约两个月后对患者进行了重新检查，并报告了代表进行性核上性麻痹的症状稳定；没有临床进展。PSPRS评分保持稳定，头晕的降低仍然很明显。

患者2

本案例研究中的患者是一名66岁女性，患有对称性运动功能减退-僵硬综合征，步态障碍，不稳固和小的步伐(强烈跌倒倾向)，以及垂直凝视麻痹，伴有精细运动技能受损。该患者被诊断患有进行性核上性麻痹。Datscan显示多巴胺受体降低，脑FDG-PET显示主要是额侧的代谢降低，支持了诊断结果。没有左旋多巴反应。

患者开始用乙酰-DL-亮氨酸治疗，第一周剂量为每天3g，然后每天5g。在治疗开始前进行步态分析。治疗17天后停止用药，4天后再次检查患者。患者报告步态或运动功能减退僵硬综合征没有显著改善。

-	治疗前	治疗17天后	正常值(±SD)
				速度(cm/sec)	51	68	119.12(17.27)
最大速度(cm/sec)	123	98	176.78(19.10)
				步频(步/分钟)	93	99	113.06(10.38)
足迹宽度(cm)	10.3	9.3	9.49(3.56)
				步伐周期长度(cm)	66	82	126.71(13.06)
双重站姿(％)	34.5	28.6	20.35(3.21)
				变化系数(颞侧)	8.5	6.6	1.76(0.73)
功能性步态评估	15/30	15/30	27.1(2.3)

表8.步态分析参数

约两个月后重新评估患者，并且其报告在停止服药后没有出现症状恶化的情况。

患者3

本案例研究中的患者是一名56岁男性，患有对称性运动功能减退-僵硬综合征，不稳固，跌倒史，和垂直凝视麻痹，伴有精细运动技能受损。该患者被诊断患有进行性核上性麻痹。Datscan显示多巴胺受体降低，脑FDG-PET显示额叶内侧和顶枕颞叶降低代谢，支持了诊断结果。没有左旋多巴反应。

患者开始用乙酰-DL-亮氨酸治疗，第一周剂量为每天3g，然后每天5g。在治疗开始前进行步态分析。治疗17天后停止用药，4天后再次检查患者。患者报告步态或运动功能减退僵硬综合征没有显著改善。

-	治疗前	治疗17天后	正常值(±SD)
				速度(cm/sec)	103	120	125.34(20.66)
最大速度(cm/sec)	163	194	180.07(26.57)
				步频(步/分钟)	106	112	115.27(12,02)
足迹宽度(cm)	15.5	15.1	9.12(2.97)
				步伐周期长度(cm)	118	129	130.34(13.01)
双重站姿(％)	25.8	24.3	19.65(2.75)
				变化系数(颞侧)	3.6	3.1	1.77(1.04)
功能性步态评估	28/30	27/30	28.4(1.6)

表9.步态分析参数

约两个月后重新评估患者，并且其报告在停止服药后没有出现症状恶化的情况。

患者4

本案例研究中的患者是一名76岁男性，患有进行性步态障碍，不稳固和小的步伐(强跌倒倾向)，驼背，慢速和低度眼跳，眼睑痉挛和精细运动技能受损。该患者被诊断患有进行性核上性麻痹。MRI显示中脑轻度萎缩(米老鼠标志)。有轻微的左旋多巴反应。

患者开始用乙酰-DL-亮氨酸治疗，第一周剂量为每天3g，然后每天5g。在开始治疗之前进行了步态分析。治疗三周后，停止用药并重新检查患者。患者报告步态主观稳固性增加，跌倒频率降低。步态分析显示步态改善，速度、最大速度和步伐周期长度增加，且足迹宽度、双重站姿和变化系数降低。

	治疗前	治疗3周后	正常值(±SD)
				速度(cm/sec)	39	65	110.81(18.33)
最大速度(cm/sec)	70	93	158.30(22.66)
				步频(步/分钟)	109	125	109.19(12.75)
足迹宽度(cm)	15.4	13.6	9.06(1.94)
				步伐周期长度(cm)	43	63	121.81(11.52)
双重站姿(％)	45.4	36	20.73(2.55)
				变化系数(颞侧)	8.2	6.8	1.94(0.85)
功能性步态评估		14/30	24.9(3.6)

表10.步态分析参数

在没有用药的三个月后，患者报告了运动功能减退-僵硬综合征的进展。步态恶化，且跌倒更频繁。

实施例12

患者1

本案例研究中的患者是一名42岁的男性工程师，患有头晕和姿势不平衡近一年。

该患者被诊断患有下跳性眼球震颤：患者由于眼球震颤而受到视力模糊(振动幻觉)的严重损害，并且在阅读和书写时遇到困难。患者的视力为：右眼0.75，左眼0.67，双眼0.83，并通过视频眼图记录下跳性眼球震颤。患者还表现出增加的身体摇摆，这通过姿势描记法来记录。

4-氨基吡啶(Fampyra，10mg，每天两次)治疗四周没有产生任何益处。

患者开始用乙酰-DL-亮氨酸治疗，剂量为每天3g(醒来时1g，午餐前1g，晚餐前1g)，持续一周，然后剂量为每天5g(醒来时2g，午餐前1.5g和晚餐前1.5g)。

10天后，患者报告了显著的益处，并且效果发展缓慢。患者继续使用该治疗剂量，并且没有产生副作用。暂时停药会导致明显恶化。

在开始乙酰-亮氨酸治疗后大约14周对患者进行了重新检查，在此期间患者报告对该益处非常满意。由于振动幻觉降低，患者的阅读和书写变得好得多：视觉环境的图像稳定。患者能够通过视觉固定来抑制眼球震颤。此外，患者的空间定位得到改善。

由两名独立检查者进行的临床检查显示出眼球震颤降低，视频眼动图显示患者可通过视觉固定抑制眼球震颤。患者的视力为：右眼0.83，左眼1.0，双眼1。

姿势描记图表明姿势摇摆减少。

总体而言，本案例研究表明患者的该适应症的症状得到改善。

患者2

本案例研究中的患者被诊断患有下跳性眼球震颤。患者表现出姿势不平衡和头晕。患者没有受益于

患者开始服用乙酰-DL-亮氨酸(第一周3g/天；此后5g/天)，随后显示步态改善，能够走更长的距离(一小时)，并且警觉度提高。患者的下跳性眼球震颤也得到了改善(通过视频眼动图记录)。使用目标中心(在显示器中心显示点30秒，图13A)和在完全黑暗中使用以特殊玻璃覆盖的护目镜45秒(图13B)进行评估，患者可以通过视觉固定来部分抑制眼球震颤。结果(慢相速度的中位数，SPV)如下：目标中心-水平：-0.02°/s，垂直：2.41°/s；完全黑暗-水平：0.05°/s，垂直：3.27°/s(图13C)。患者能够在固定时最小化眼睛移动，如图13A所示。

步态分析显示自选速度从56cm/sec增加到85cm/sec，最大步态速度从122cm/sec增加到155cm/sec。然后暂停服药。

停止乙酰-DL-亮氨酸治疗后约1个月，患者的症状恶化。步态分析显示自选速度从85cm/sec降低到72cm/sec，最大步态速度从155cm/sec降低到113cm/sec。

实施例13

患者1

本案例研究中的患者是一名70岁的女性，主要患有右侧运动功能减退-僵硬综合征以及震颤，颈项前屈，频繁跌倒，直立功能障碍和急迫性尿失禁。

该患者被诊断患有多系统萎缩帕金森型(MSA-P)。Datscan揭示了多巴胺受体主要在左侧降低，并且脑FDG-PET显示主要枕叶的代谢降低。有离散的左旋多巴反应(100/25mg3x每日)。

患者开始服用乙酰-DL-亮氨酸(第一周3g/天；此后5g/天)。在乙酰-DL-亮氨酸治疗3周后，患者接受评估并报告步态无显著改善，跌倒降低或僵硬综合症改善。停止了药物治疗。

6周后，患者在停止服药后没有报告症状恶化。

患者2

本案例研究中的患者是一名78岁的男性，诊断患有多系统萎缩帕金森型(MSA-P)。患者的症状学特征为进行性运动功能减退-僵硬综合征，直立功能障碍以及连续的头晕和平衡障碍。患者表现出眼球急动和两上肢的对称僵直。假想钢丝上的平衡行为与不稳定感和失去平衡有关。脑FDG-PET显示顶叶和枕叶皮质的代谢降低，提示路易体痴呆症。

患者开始用乙酰-DL-亮氨酸治疗，第一周剂量为每天3g，然后每天5g。在开始治疗前检查患者，其显示上述临床症状，具有非常明显的不稳定步态和头晕。

治疗一个月后，停止用药并对患者进行评估。患者报告了头晕的主观改善，并且临床检查显示假想钢丝平衡行为得到改善，患者与先前的检查相比没有任何困难地完成了假想钢丝平衡。进行了步态分析。

在没有药物治疗的一个月后，患者报告了稳定的症状。没有报告头晕恶化或步态不稳定。进行了步态分析。

在没有药物治疗的两个月后，进行了步态分析，显示步态速度降低、步长缩短和FGA评分恶化。患者报告总体症状恶化，包括腿部进行性无力和步态不稳定增加。

	治疗一个月后	无治疗1个月后	无治疗2个月后	正常值(±SD)
					速度(cm/sec)	109	114	94	110.81(18.33)
最大速度(cm/sec)	214	196	177	158.30(22.66)
					步频(步/分钟)	109	109	106	109.19(12.75)
足迹宽度(cm)	3.8	2.3	3.4	9.06(1.94)
					步伐周期长度(cm)	120	126	107	121.81(11.52)
双重站姿(％)	25.6	22.5	26.7	20.73(2.55)
					变化系数(颞侧)	2.7	1.7	2.1	1.94(0.85)
功能性步态评估	24/30	25/30	22/30	24.9(3.6)

表11.步态分析参数

患者3

本案例研究中的患者是一名78岁的男性，诊断患有多系统萎缩帕金森型(MSA-P)。患者的症状学特征为进行性运动功能减退-僵硬综合征，尿失禁，初期认知功能障碍，步态障碍(小步伐和每月2-3次跌倒)。认知缺陷的特点是精神运动性减慢和间歇性精神错乱。Datscan显示多巴胺受体降低，这支撑了诊断结果。脑FDG-PET显示主要是纹状体的代谢降低。由于副作用，左旋多巴治疗暂停。

患者开始用乙酰-DL-亮氨酸治疗，第一周剂量为每天3g，然后每天5g。在用乙酰-DL-亮氨酸一个月后评估患者。患者的妻子报告认知功能显著改善。精神错乱的发作完全消失。患者的认知结构看起来更清晰，更直接。步态功能没有改善。患者的妻子支持继续用药。

实施例14

本案例研究中的患者是一名45岁的男性，被诊断患有脊髓小脑性共济失调28(SCA28)。遗传性检测显示AFG3L2中已知的致病变异。患者的症状学特征是从30岁起的进行性小脑综合征，特征是语言急促不清，步态不平衡，平衡障碍和头晕。患者的父亲和祖母有类似的症状。患者表现出协调测试中的眼球急动和辨距不良，共济失调步态，语言急促不清，下肢反射过度，下肢痉挛和左侧的阳性巴宾斯基标志。cMRI显示出明显的小脑萎缩。

患者开始用乙酰-DL-亮氨酸治疗，剂量为5g/天。在治疗开始前进行步态分析。治疗约一个月后，停止用药并对患者进行评估。患者报告了症状改善，特别是头晕降低(几乎消失)，以及更稳的步态。患者报告他不再像机器人那样走路而且可以在不使用栏杆的情况下爬楼梯。进行了步态分析，显示了参数的改善。

	治疗前	治疗1个月后	标准值(±SD)
				自选速度(cm/sec)	101	118	126.61(21.43)
最大速度(cm/sec)	188	201	182.94(25.37)
				步频(步/分钟)	100	105	115.52(9.36)
足迹宽度(cm)	14.5	11.7	9.43(2.27)
				步伐周期长度(cm)	122	135	131.55(17.98)
双重站姿(％)	24.9	23.8	18.76(3.46)
				变化系数(颞侧)	4.1	2.1	1.88(0.79)
功能性步态评估	24/30	23/30	28.9(1.5)

表12.步态分析参数

实施例15

患者1&2

本案例研究中的患者为2名女性姐妹，分别为24岁(患者1)和19岁(患者2)。患者患有共济失调毛细血管扩张症。

患者1显示出发育迟缓的标志性事件。该患者直到2岁时才行走，并且有小脑性共济失调的症状和体征的进展、癫痫发作，以及全身性远端明显的张力亢进和在眼睛、耳以及胸部的毛细血管扩张症。在9岁确诊。患者1的眼球运动功能表现为下跳性眼球震颤，注视正前方，并且左眼注视大于右眼，注视保持眼球震颤向上，垂直和水平眼急动平滑追击，水平和垂直的低度眼急动，向上移动受限。

在开始治疗之前，对患者1的检查显示共济失调评估和评级量表(SARA)打分为22/40。患者的脊髓小脑性共济失调功能指数(SCAFI)的分析结果如下：

平均8米行走测试(8MW):21.8s

MW 9孔插板测试优势(9HPTD)(右侧):90.2s

MW 9孔插板测试非优势(9HPTND):125.8s

MW PATA单词测试:12.5

视觉模拟量表(由患者评估):99

视频眼动图结果为：

表13.视频眼动图参数

患者1在检查后开始用乙酰-DL-亮氨酸(5g/天)治疗。治疗一个月后，重新评估患者。护理人员报告语言和步态有所改善。患者自己没有察觉到任何变化。检查表明，共济失调评估和评级量表(SARA)打分为15.5/40。患者的脊髓小脑性共济失调功能指数(SCAFI)的分析结果如下：

平均8米行走测试(8MW):18.5s

MW 9孔插板测试优势(9HPTD)(右侧):77.9s

MW 9孔插板测试非优势(9HPTND):101.3s

MW PATA单词测试:13

视觉模拟量表(由患者评估):85

视频眼动图结果为：

表14.视频眼动图参数

患者1的SARA和SCAFI亚组在治疗后得到改善，视频眼动图显示出固定稳定性的显著改善和下跳眼球震颤强度的降低。

患者2显示出发育迟缓的标志性事件，1岁时癫痫发作，全身性张力过低，下肢挛缩伴双侧倔趾足，反射消失，3岁时急性淋巴细胞白血病，脾脏轻度增大，高胆固醇血症，低色素性小细胞性贫血，色素性痣和白癜风。患者的父母在15个月大时就注意到了第一批症状。患者2的眼球运动功能表现为方波震动，凝视眼球震颤的垂直分量左侧大于右侧，下跳性眼球震颤，眼急动平稳追踪，垂直凝视麻痹向上大于向下，并且汇聚受损。

在开始治疗之前，对患者2的检查显示共济失调评估和评级量表(SARA)打分为28.5/40。患者的脊髓小脑性共济失调功能指数(SCAFI)的分析结果如下：

平均8米行走测试(8MW):没有支撑就无法执行

MW 9孔插板测试优势(9HPTD)(右侧):300s

MW 9孔插板测试非优势(9HPTND):299.2s

MW PATA单词测试:13.5

视觉模拟量表(由患者评估):45

视频眼动图结果为：

表15.视频眼动图参数

患者2在检查后开始用乙酰-DL-亮氨酸(5g/天)治疗。治疗一个月后，重新评估患者。护理人员报告，精细运动功能、手震颤和语言有所改善。患者自己没有察觉到任何益处。检查表明，共济失调评估和评级量表(SARA)打分为23.5/40。患者的脊髓小脑性共济失调功能指数(SCAFI)的分析结果如下：

平均8米行走测试(8MW):没有支撑就无法执行

MW 9孔插板测试优势(9HPTD)(右侧t):300s

MW 9孔插板测试非优势(9HPTND):300s

MW PATA单词测试:14

视觉模拟量表(由患者评估):80

视频眼动图结果为：

表16.视频眼动图参数

视频眼动图显示了患者2中固定稳定性的改善和下跳眼球震颤强度的显著改善。

患者3

本案例研究中的患者是一名19岁的女性，从幼年时期就患有共济失调毛细血管扩张症，患有：

-延迟的运动发育，小脑性共济失调的体征和症状，明显的轴性张力过低伴肢端张力亢进，严重足挛缩伴矫形畸形，双侧马蹄内翻足，因而局限于轮椅，轮替运动障碍和下肢无反射，伴有本体感觉减弱；和

-非霍奇金淋巴瘤，多发性MTHFR(C677T)，下唇淋巴管瘤，胆囊结石，扩张型心肌病，色素痣，胸腰椎后凸畸形和双眼巩膜远端血管扩张。

患者的眼运动功能向右和向左显示凝视眼球震颤，眼球急动，各个方向、特别是水平方向的缓慢扫视，病理性前庭眼反射伴有矫正追赶扫视，和前庭眼反射的病理视觉固定抑制。

在开始治疗之前，对患者的检查显示共济失调评估和评级量表(SARA)打分为23/40。患者的脊髓小脑性共济失调功能指数(SCAFI)的分析结果如下：

平均8米行走测试(8MW):不能进行

MW 9孔插板测试优势(9HPTD)(右侧):150s

MW 9孔插板测试非优势(9HPTND):161.6s

MW PATA单词测试:14

视觉模拟量表(由患者评估):80

频眼动图结果为：

表17.视频眼动图参数

患者在检查后约6个月开始用乙酰-DL-亮氨酸(5g/天)治疗。经过略微超过7个月的治疗，对患者进行了重新评估。护理人员和患者报告了情况的总体改善，没有更清楚的明细。检查显示共济失调(SARA)评估和评级量表打分为21.5/40。患者的脊髓小脑性共济失调功能指数(SCAFI)的分析结果如下：

平均8米行走测试(8MW):不能进行

MW 9孔插板测试优势(9HPTD)(右侧):124.5s

MW 9孔插板测试非优势(9HPTND):147.5s

MW PATA单词测试:10

视觉模拟量表(由患者评估):80

视频眼动图结果为：

表18.视频眼动图参数

患者显示出SARA和SCAFI子集9HPT略有改善，以及固视稳定性的显著改善和所有位置的凝视保持眼球震颤强度的降低。

患者4

本案例研究中的患者是一名15岁的女性，从4岁起患有共济失调毛细血管扩张症。从7岁开始，患者表现出严重的小脑性共济失调症状和体征，精细运动障碍，肌张力过低伴反射消失，肌肉萎缩，和跖屈伴不连续挛缩。患者被限制在轮椅上，但能够在持续支撑下行走。患者有严重的溶血性贫血，低丙种球蛋白血症，巩膜和胸部毛细血管扩张症，由于皮质类固醇摄入引起的继发性库欣综合征，并被怀疑患有CNS非霍奇金淋巴瘤。

患者的眼运动功能表现为眼睛向上缓慢偏离，中心位置的左眼跳动眼球震颤，所有方向的凝视眼球震颤，水平伴有下跳成分，惊跳伴突然头部运动。

在开始治疗之前，对患者的检查显示共济失调评估和评级量表(SARA)打分为23.5/40。患者的脊髓小脑性共济失调功能指数(SCAFI)的分析结果如下：

平均8米行走测试(8MW):不能进行

MW 9孔插板测试优势(9HPTD)(右侧):124.5s

MW 9孔插板测试非优势(9HPTND):52.3s

MW PATA单词测试:14

视觉模拟量表(由患者评估):70

视频眼动图结果为：

表19.视频眼动图参数

患者在检查后开始用乙酰-DL-亮氨酸(5g/天)治疗。经过略微超过1个月的治疗，重新评估患者。患者和她的母亲报告了手写有所改善(特别是由于患者手的震颤减少导致的改善)并且精细运动功能有所改善。患者还报告了饮水更容易，不再需要吸管。家庭成员描述步态改善，稳定性增加，需要的支撑更少。检查显示共济失调评估和评级量表(SARA)打分为18.5/40。患者的脊髓小脑性共济失调功能指数(SCAFI)的分析结果如下：

平均8米行走测试(8MW):不能进行

MW 9孔插板测试优势(9HPTD)(右侧):93.5s

MW 9孔插板测试非优势(9HPTND):101.7s

MW PATA单词测试:15.5

视觉模拟量表(由患者评估):70

视频眼动图结果为：

表20.视频眼动图参数

患者显示了优势手的SARA和SCAFI子集9HPT有所改善。视频眼动图显示，固定稳定性有总体改善，并且所有位置的自发和凝视眼球震颤强度均有所降低。

患者5

本案例研究中的患者是一名10岁男孩，从其童年早期患有共济失调毛细血管扩张症，具有

-延迟的心理运动发育，14个月时行走不稳定，伴有跌倒次数增加，严重的小脑性共济失调的体征和症状，构音困难和言语困难，精细运动受损，罕见的头部震颤，迟缓的心理运动节律，肌张力过低伴有肌肉萎缩和反射减弱，头部前屈伴有胸背部驼背，足外翻，翼状肩胛骨，异态睡眠伴有夜惊，和孤独症；和

-显著的免疫抑制，软腭、巩膜的毛细血管扩张症，尿失禁，和习惯性无力。

患者被限制在轮椅上，但能够以强大的持续支撑下行走几步。患者的眼运动功能显示动眼失用，头部前反射明显，头部和眼部在向右和左看时“整体”运动，垂直凝视麻痹伴有慢垂直扫视和扫视平滑追踪，向左水平扫视缓慢，向右扫视麻痹，限制眼球移动，特别是垂直方向，并在所有位置固定不稳定。

在开始治疗之前，对患者的检查显示共济失调评估和评级量表(SARA)打分为24.5/40。患者的脊髓小脑性共济失调功能指数(SCAFI)的分析结果如下：

平均8米行走测试(8MW):没有持续支撑就无法行走

MW 9孔插板测试优势(9HPTD)(右侧):102.7s

MW 9孔插板测试非优势(9HPTND):116.8s

MW PATA单词测试:6

视觉模拟量表(由患者评估):90

视频眼动图结果为：

表21.视频眼动图参数

患者在检查后开始用乙酰-DL-亮氨酸(5g/天)治疗。治疗约1个月后，对患者进行了重新评估。患者的母亲描述了步态稳定性的显著改善；在治疗之前，他经常向后跌倒，不得不被部分“运送”。在服药期间，他能够只握着看护人员的手走路。

精细运动功能、手部震颤强度和身体保持力改善。精细运动功能的改善体现在例如独立进食和饮水等日常活动中。患者体重增加1.5公斤，食欲更好。检查显示共济失调评估和评级量表(SARA)打分为20.5/40。患者的脊髓小脑性共济失调功能指数(SCAFI)的分析结果如下：

平均8米行走测试(8MW):没有支撑就无法行走

MW 9孔插板测试优势(9HPTD)(右侧):103.6s

MW 9孔插板测试非优势(9HPTND):88.8s

MW PATA单词测试:7.5

视觉模拟量表(由患者评估):80

视频眼动图结果为：

表22.视频眼动图参数

经过近7个月的治疗后，重新评估患者。患者的母亲描述了显著更稳定的步态；这一发现从治疗后的第一次评估就保持不变。患者的集中和语言都得到了改善。患者可以自行站立，并且日常活动总体更加独立。患者又增加了3公斤，食欲改善，表现出力量增加。

检查显示共济失调评估和评级量表(SARA)打分为17.5/40。患者的脊髓小脑性共济失调功能指数(SCAFI)的分析结果如下：

平均8米行走测试(8MW):15.3s(握着手)

MW 9孔插板测试优势(9HPTD)(右侧):92.4s

MW 9孔插板测试非优势(9HPTND):98.3s

MW PATA单词测试:11

视觉模拟量表(由患者评估):100

患者在经过略微超过一年的治疗后进行了重新评估，并表现出社交互动、活动和敏捷性的改善。患者的父母报告失禁有所改善。患者发展出在早晨多次出现的额侧局部疼痛伴呕吐。基于家族史，怀疑局部疼痛可能是婴儿偏头痛引起的。

检查显示共济失调评估和评级量表(SARA)打分为16.5/40。患者的脊髓小脑性共济失调功能指数(SCAFI)的分析结果如下：

平均8米行走测试(8MW):13.9s(能够在母亲牵着手时自行行走)

MW 9孔插板测试优势(9HPTD)(右侧):95.6s

MW 9孔插板测试非优势(9HPTND):127.6s

MW PATA单词测试:14.5

视觉模拟量表(由患者评估):95

在使用乙酰-DL-亮氨酸治疗时，患者表现出改善的SARA和SCAFI子测验，提高了生活质量，总体提高了固定稳定性，降低了自发和凝视保持眼球震颤的强度，特别是在垂直平面(1个月后)。

患者6

本案例研究中的患者是一名10岁的女性，患有共济失调毛细血管扩张症，其具有共济失调步态和姿势，精细运动功能障碍伴手颤，吞咽困难和语言障碍，眼球移动障碍，有认知功能和集中问题。在一岁时观察到第一批症状。

在基线检查后，患者开始乙酰-DL-亮氨酸治疗，在第一周为1.5g/天，并且在第二周开始为3g/天。在治疗一个月和六个月后分别评估患者。治疗一个月后，患者表现出精细运动技能增强，手颤降低，姿势稳定性和步态改善，发音增强，自信心增强。经过六个月的治疗，患者有一般情况稳定，步态和站姿稳定，书写改善。然而，患者患有焦虑，预计会对这种响应产生负面影响。

患者在每次评估时的SARA和SCAFI分数如下所示。

	基线	乙酰-DL-亮氨酸治疗1个月后	乙酰-DL-亮氨酸治疗6个月后
				SARA	11/40	8.5/40	11/40
8MWT	8.95sec	8.45sec	7.53sec
				9HPTD	85.38sec	81.95sec	136.27sec
9HPTND	71.2sec	70.39sec	80.32sec
				PATA	14.5	15.5	13

表23.患者评估参数

实施例16

本案例研究中的患者是60岁出头的女性，经遗传学诊断其患有脊髓小脑性共济失调(SCA)1。治疗之前，患者说话和吞咽有严重问题，双臂震颤，痉挛，以及站姿和步态的中度共济失调。患者还有睡眠问题。

使用乙酰-DL-亮氨酸(5g/天)治疗三周后，包括痉挛和眼运动功能受损在内的所有症状均显著改善，如临床检查所进一步证实的。

三个月后药物停止。两周后，体征和症状的强度与治疗前相同。再次开始治疗，并且患者在相同剂量下保持并继续治疗超过两年，没有任何副作用。

患者的女儿报告了疾病随着时间的推移而有相当进展，有持续的症状效果，但有趣地观察到，治疗有长期的对症功效。

实施例17

本案例研究中的患者是一名70岁的女性，步态不稳定，频繁跌倒，夜间视幻觉，REM睡眠障碍。患者具有对称的运动功能减退-僵硬综合征，伴有精细运动技能受损以及注意力和意识的波动。

患者被诊断为患有路易体痴呆症。脑FDG-PET显示顶叶和枕叶突触功能障碍，DATscan显示突触前多巴胺转运蛋白的退化，支持了诊断结果。用左旋多巴100mg每日4次和晚上喹硫平25mg治疗改善了症状学。

患者开始服用乙酰-亮氨酸(3g/天持续一周；之后5g/天)，并在4周后评估。患者报告疲劳增加，平衡和语言恶化。药物治疗降低至3g/天，患者被指示在约两周后停止服药。

在停止用药后约1个月对患者进行了重新评估，并在剂量降低时且没有报告症状改善，停药后症状没有恶化。

表24.步态参数

实施例18

在该病例研究中，四名患者(男性兄弟)患有并且后来被诊断为4型共济失调伴动眼失用症。年龄较大的三个兄弟在疾病发病时分别为12岁，11岁和10岁。在开始接受乙酰-DL-亮氨酸治疗之前，到15岁/16岁时，据患者的母亲报告，三位年长的兄弟才方便地行走。三位年长的兄弟分别于25岁、23岁和19岁时开始用乙酰-亮氨酸治疗，并且已接受治疗约4年。对于这三位患者没有长期临床数据可用。

最年幼的兄弟在发病时年仅11岁。他在13岁时开始用乙酰-DL-亮氨酸治疗。治疗时，据患者的母亲报告，最年幼的兄弟直到将近18岁才开始方便地行走。患者的母亲还报告说，与其年长的兄弟相比，最年幼的兄弟在每个年龄段都改善了精细运动技能和语言。对于最年幼的兄弟，没有长期临床数据可用。

实施例19

可以通过指定临床严重性分数(CSS)来量化NPC患者的严重性，该分数评估疾病的各种参数并且对每个参数以5分为最高分给出得分(更高的分数＝更严重)。参见Yanjanin等,“Linear Clinical Progression,Independent of Age of Onset,in Niemann–PickDisease,”Am J Med Genet Part B 153B:132–140。在未治疗的患者中，通常可以预测CSS在个体中将如何随着时间的推移而变化，因为病症进展表现为线性。例如，如果患者A在0月和12个月之间从CSS为8变化到CSS为12，则可以预测到第36个月，患者的CSS将是20。年度严重性增量分数(ASIS)量化CSS的年变化率，通过将患者的CSS除以患者的年龄来计算。例如，如果未经治疗的患者B在两岁时的CSS为8，患者的ASIS将是4。每年，患者将被预期有至少4个CSS点的进展，这样在4岁时，患者的CSS将是16。如果治疗干预减慢或阻滞了疾病进展，预期患者在治疗后的ASIS评分低于基线ASIS评分。

向10名NPC患者长期以4.5g/天施用乙酰-亮氨酸。在基线和不同时间点确定眼球移动、离床活动、语言、吞咽、精细运动技能、认知、记忆和癫痫发作的CSS。通过将每个参数(眼球移动、离床活动等)的单独CSS值相加，在基线和每个这样的时间点计算整体CSS。评估CSS时的治疗开始后天数对于每个患者都不同，如表25所示。

患者I.D	基线(天数)	时间点2(天数)	时间点3(天数)	时间点4(天数)
					1	0	126	231
2	0	119	200	297
					3	0	91	240
4	0	107	196
					5	0	78	238	414
6	0	184	238	414
					7	0	81	165
8	0	90	217
					9	0	400	644
10	0	83

表25.评估CSS时的乙酰-亮氨酸施用开始后天数

以下表26-34分别显示了整体CSS、眼球移动、离床活动、语言、吞咽、精细运动技能、认知、记忆和癫痫发作的各CSS。

临床严重性评分(CSS)
					患者I.D	基线	时间点2	时间点3	时间点4
1	11	11	10
					2	33	33	33	33
3	13	12	11
					4	13	13	10
5	12	12	12	12
					6	21	23	21	21
7	19	19	19
					8	13	12	11
9	22	22	21
					10	14	11

表26.整体CSS

临床严重性评分(CSS)
					患者I.D	基线	时间点2	时间点3	时间点4
1	3	3	3
					2	3	3	3	3
3	3	3	3
					4	2	2	2
5	3	3	3	3
					6	3	3	3	3
7	3	3	3
					8	3	3	2
9	3	3	3
					10	3	3

表27.眼球移动CSS

临床严重性评分(CSS)
					患者I.D	基线	时间点2	时间点3	时间点4
1	2	2	1
					2	5	5	5	5
3	1	1	1
					4	2	2	1
5	1	1	1	1
					6	2	4	2	2
7	2	2	2
					8	1	1	1
9	2	2	2
					10	2	2

表28.离床活动CSS

临床严重性评分(CSS)
					患者I.D	基线	时间点2	时间点3	时间点4
1	1	1	1
					2	2	2	2	2
3	1	1	1
					4	2	2	1
5	1	1	1	1
					6	2	2	2	2
7	1	1	1
					8	1	1	1
9	2	2	2
					10	1	1

表29.语言CSS

临床严重性评分(CSS)
					患者I.D	基线	时间点2	时间点3	时间点4
1	0	0	0
					2	4	4	4	4
3	2	2	2
					4	2	2	2
5	2	2	2	2
					6	3	3	3	3
7	3	3	3
					8	2	2	2
9	3	3	3
					10	2	2

表30.吞咽CSS

临床严重性评分(CSS)
					患者I.D	基线	时间点2	时间点3	时间点4
1	1	1	1
					2	5	5	5	5
3	2	1	1
					4	1	1	1
5	1	1	1	1
					6	4	4	4	4
7	2	2	2
					8	2	1	1
9	4	4	4
					10	1	1

表31.精细运动技能CSS

临床严重性评分(CSS)
					患者I.D	基线	时间点2	时间点3	时间点4
1	3	3	3
					2	5	5	5	5
3	3	3	3
					4	3	3	3
5	3	3	3	3
					6	4	4	4	4
7	4	4	4
					8	3	3	3
9	4	4	4
					10	3	2

表32.认知CSS

临床严重性评分(CSS)
					患者I.D	基线	时间点2	时间点3	时间点4
1	1	1	1
					2	4	4	4	4
3	1	1	0
					4	1	1	0
5	1	1	1	1
					6	3	3	3	3
7	4	4	4
					8	1	1	1
9	4	4	3
					10	2	0

表33.记忆CSS

临床严重性评分(CSS)
					患者I.D	基线	时间点2	时间点3	时间点4
1	0	0	0
					2	5	5	5	5
3	0	0	0
					4	0	0	0
5	0	0	0	0
					6	0	0	0	0
7	0	0	0
					8	0	0	0
9	0	0	0
					10	0	0

表34.癫痫发作CSS

使用每个患者的CSS和评估时的年龄来计算基线和每个时间点的ASIS。每个时间点的每个患者的总体ASIS如下表35所示。

年度严重性增量评分(ASIS)
				基线	时间点2	时间点3	时间点4
0.381371618	0.376864272	0.339262493
				1.94125463	1.904748736	1.880675612	1.852636028
0.65	0.592617631	0.53250497
				0.481909063	0.476731928	0.363469002
0.433188377	0.429874461	0.423232908	0.416160273
				0.561964246	0.607297766	0.552333117	0.545420607
0.536675431	0.533334614	0.529913714
				0.486750384	0.445200609	0.402903129
0.738624874	0.71243018	0.665646967
				0.595597228	0.406038403

表35.整体ASIS

如表26和图10A所示，在实验过程中，10名患者中没有一人表现出CSS的总体增加。患者6显示基线和时间点2之间的CSS增加，但是在时间点3返回基线，并在时间点4保持在基线处。10名患者中的4名(患者2、5、6和7)在实验过程中有恒定的CSS，这表明疾病在这些个体中没有进展。10名患者中的6名(患者1、3、4、8、9和10)在实验过程中显示CSS减少，表明该疾病没有进展并且实际上严重性变低。在不同的子分数中观察到改善：患者1：离床活动；患者3：精细运动技能；患者4：离床活动和语言；患者8：眼球移动和精细运动技能；患者9：记忆；患者10：认知。图11A-11J中给出的数据分别显示每个患者的CSS子分数，以柱状图形式给出。

如表35和图10B所示，所有10名患者在治疗期间相对于基线ASIS都显示出ASIS减少。在患者的2、5、6和7中，在年龄增加时CSS保持相同，导致ASIS的小幅减少。在患者的1、3、4、8、9和10中，由于在年龄增加时CSS减少，ASIS的减少幅度更大。

实施例20

如本文所述，C型尼曼-匹克病(NPC)小鼠模型与阿尔茨海默病(AD)共有许多病理特征。野生型NPC1^-/-小鼠从3周龄开始用乙酰-dl-亮氨酸(每日0.1g/kg体重)治疗。在8周龄时处死小鼠。对于野生型、未治疗的野生型NPC1^-/-小鼠和经AL治疗的野生型NPC1^-/-小鼠，相对于小脑中的总淀粉样蛋白前体蛋白(APP)水平，评估了淀粉样蛋白前体蛋白C末端片段(APP-CTF)的水平。对于野生型、未治疗的野生型NPC1^-/-小鼠和经AL治疗的野生型NPC1^-/-小鼠，相对于微管蛋白上样对照的水平，还评估了微管相关蛋白1A/1B-轻链3-磷脂酰乙醇胺缀合物(LC3-II)的水平。

APP-CTF数据示于图12A中。数据重现了先前提到的在NPC1小鼠脑中的APP-CTF积累。乙酰-dl-亮氨酸治疗与APP-CTF的降低相关。

LC3-II数据示于图12B中。数据重现了先前提到的在NPC1小鼠脑中LC3-II的积累。乙酰-dl-亮氨酸治疗与LC3-II的降低相关，表明自噬通量的部分恢复。

结论

乙酰-亮氨酸治疗与NPC1小鼠脑中AD病理学的改善相关。

实施例21

NPC中国仓鼠卵巢(CHO)细胞在体外分别用1mM乙酰-DL-亮氨酸、乙酰-L-亮氨酸、乙酰-D-亮氨酸、DL-亮氨酸、L-亮氨酸和D-亮氨酸处理72小时。通过LysoTracker定量相对溶酶体体积。

观察到NPC CHO细胞相对于野生型对照具有升高的LysoTracker荧光水平，这表明患病表型的溶酶体体积增加。

分别用乙酰-DL-亮氨酸、乙酰-L-亮氨酸、乙酰-D-亮氨酸、DL-亮氨酸、L-亮氨酸和D-亮氨酸处理NPC CHO细胞，均显著减小了细胞中的溶酶体体积。图14中呈现的数据显示了每种处理的结果，溶酶体体积表示为相对于未处理的野生型成纤维细胞的倍数变化。星号(**)表示相对于未处理的NPC1-null的p值＜0.01。

数据显示亮氨酸和乙酰-亮氨酸在体外表现出相似的活性，并且都与通过减少溶酶体体积来纠正扰乱的溶酶体贮积相关，因此直接纠正了溶酶体贮积病的表型。

实施例22

患者1

本病例研究中的患者是55岁女性，显示下肢近端无力。她从42岁开始，头屈肌轻瘫缓慢进行，并被诊断(遗传证实)患有2型肌强直性营养不良。在55岁咨询时，她报告没有感官症状，但是抱怨了在夜间和白天休息期间的不宁腿综合征在过去两年中发生。用多巴胺激动剂的先前治疗没有缓解症状。血清肌酸激酶活性仅在高达400IU/L时轻微升高。使用RLS诊断指数(RLS-DI)评估了患者(参见Walters等，Sleep Med2003；4(2):121-132)。患者的国际不宁腿综合征评级量表评分(IRLS)为36，因此诊断为严重RLS。患者开始用乙酰-DL-亮氨酸治疗，剂量为第一周每天3g，接着从第二周起剂量为每天5g。在乙酰-DL-亮氨酸治疗14天内，IRLS降至26，再过5周后，IRLS降至9。在治疗的第12周后中断4周的治疗，使IRLS增加至28。重新引入治疗2周后将评分重新降至8。超过22周的连续治疗使IRLS评分稳定在8。

患者2

本病例研究中的患者是72岁女性，显示下肢近端无力。她从48岁开始，头屈肌轻瘫缓慢进行，并在15年前被诊断(遗传证实)患有2型肌强直性营养不良。在72岁咨询时，她报告没有感官症状，但是抱怨了在夜间和白天休息期间的不宁腿综合征在过去八年中发生。用多巴胺激动剂、L-多巴、普瑞巴林和阿片类进行的先前治疗没有持续的症状缓解。血清肌酸激酶活性在300IU/L时轻微升高。铁测量和所有其他实验室调查都是正常的。用RLS-DI对患者进行评价，患者的IRLS为32，因此诊断为中度至重度RLS。患者开始用乙酰-DL-亮氨酸治疗，第一周剂量为每天3g，从第二周开始剂量为每天5g。在乙酰-DL-亮氨酸治疗14天内，IRLS降至22，再过5周后，IRLS降至7。超过28周的连续治疗使IRLS评分稳定在8。

患者3

本病例研究中的患者是73岁男性，自50岁起，其显示缓慢进行的轻度的上肢和下肢近端无力。大约16年前患者被诊断(遗传证实)有McArdle肌病。在73岁咨询时，他报告没有感官症状，但是抱怨严重的疲劳和耐力减退。患者还报告了在夜间和白天休息期间的不宁腿综合征在过去12年的过程中发生。用多巴胺激动剂、L-多巴、普瑞巴林进行的先前治疗没有持续的症状缓解。血清肌酸激酶活性在200IU/L时轻微升高；然而，患者在过去20年中有5次横纹肌溶解事件。重复的铁测量和所有其他实验室调查都是正常的。用RLS-DI对患者进行评价，患者的IRLS为34，因此诊断为严重的RLS。患者开始用乙酰-DL-亮氨酸治疗，第一周剂量为每天3g，从第二周开始剂量为每天5g。在乙酰-DL-亮氨酸治疗21天内，IRLS降至20，再过10周后，IRLS降至10。超过30周的连续治疗使IRLS评分稳定在10。此外，患者的疲劳度从53下降到28(疲劳度严重性量表：9(最小值)至63(最大值))。

Claims (8)

1.亮氨酸、乙酰-亮氨酸或其药学上可接受的盐在制备用于治疗患有神经退行性疾病的受试者的不宁腿综合征(RLS)的药物中的应用。

2.如权利要求1所述的应用，其中所述神经退行性疾病是帕金森综合征。

3.如权利要求1所述的应用，其中所述神经退行性疾病是运动神经元病。

4.如权利要求1所述的应用，其中所述神经退行性疾病是帕金森病。

5.如权利要求1所述的应用，其中所述神经退行性疾病与多巴胺能系统功能障碍相关。

6.如权利要求1至5中任一项所述的应用，其中所述亮氨酸为DL-亮氨酸，或所述乙酰-亮氨酸为乙酰-DL-亮氨酸。

7.如权利要求1至5中任一项所述的应用，其中所述亮氨酸或乙酰-亮氨酸具有对映体过量的L-对映体或D-对映体。

8.如权利要求1至5中任一项所述的应用，其中所述药物用于向有需要的受试者施用1g/天至15g/天、1g/天至10g/天、1.5g/天至7g/天、4g/天至6g/天、或4g/天至5g/天的治疗有效量的所述乙酰-亮氨酸。