CN111533768B - 一种高纯度石榴皮亭a的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种高纯度石榴皮亭A的制备方法，该方法通过低温液相色谱及异构化切换纯化方法相结合，以石榴花提取物为原料，可从石榴皮提取物中获得纯度高于98%的石榴皮亭A对照品。该方法首次获得高纯度的石榴皮亭A对照品，满足石榴皮亭A国家标准品的申报要求，可为石榴花皮/花或其他以石榴皮亭A为有效成分的药材质量控制做出贡献。这对含有石榴皮亭A的药材的质量标准研究具有十分重要的意义。通过本发明所述的方法获得的石榴皮亭A纯度高，产率大，回收率高，满足石榴皮亭A国家标准品的申报要求，相应的纯化工艺较传统石榴皮亭A纯化工艺简单易行，纯度高，技术原创性很强，且具有一定的产业化价值。
Description
技术领域
本发明涉及一种高纯度石榴皮亭A的制备方法。
背景技术
色谱作为一种分离手段在现代社会被广泛用于制药、化工等领域。利用吸附力、分配系数、溶解度等原理上的差异，目标化合物在色谱柱上可取得连续的分布，形成可分开的色带(无颜色的物质在特定检测器下会显示不同的吸收峰)。色谱技术的应用领域很广，不同需求下对色谱技术的要求大不相同。对于特殊的样品，针对性地设计开发相应的分离技术以达到最佳分离效果，十分必要。
石榴，又称安石榴，是一种在我国尤其是新疆地区(古称“西域”)有着广泛种植的水果。石榴皮、花都可药用，有止泻、止鼻衄、吐血及外伤出血等作用，亦可治白带过多。外用则可治中耳炎。石榴皮、花中含有丰富的植物多酚类化合物，具有多种多样的抗菌抗炎活性。其中，石榴皮亭A是石榴皮/花中的一种主要活性成分。石榴皮亭A稳定性极差，且在分离过程中极易生成杂质，世界上尚无高纯度石榴皮亭A的纯化方法。针对这些特点，开发低温分离技术，获得高纯度的石榴皮亭A对照品，可用于国家标准品证书的申报，为石榴皮/花或其他以石榴皮亭A为有效成分的药材质量控制做出贡献。
发明内容
本发明的目的在于，提供一种高纯度石榴皮亭A的制备方法，该方法通过低温液相色谱及异构化切换纯化方法相结合，以石榴花提取物为原料，可从石榴皮提取物中获得纯度高于98％的石榴皮亭A对照品。该方法首次获得高纯度的石榴皮亭A对照品，满足石榴皮亭A国家标准品的申报要求，可为石榴花皮/花或其他以石榴皮亭A为有效成分的药材质量控制做出贡献。这对含有石榴皮亭A的药材的质量标准研究具有十分重要的意义。通过本发明所述的方法获得的石榴皮亭A纯度高，产率大，回收率高，满足石榴皮亭A国家标准品的申报要求，相应的纯化工艺较传统石榴皮亭A纯化工艺简单易行，纯度高，技术原创性很强，且具有一定的产业化价值。
本发明所述的一种高纯度石榴皮亭A的制备方法，分别采用使用甲醇和甲酸水的混合物作为流动相、使用甲醇-乙腈-甲酸水的混合物作为流动相或使用乙腈和甲酸水的混合物作为流动相，具体操作按下列步骤进行：
使用甲醇和甲酸水的混合物作为流动相：
a、将反相C18色谱柱连接在配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上，调整高效液相色谱仪波长为254nm和366nm，将柱温控制在30℃，流速控制在180mL/min，将甲醇和甲酸含量为0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪的溶剂泵混合作为流动相，其中甲醇含量20％，平衡色谱柱至基线水平，称取石榴皮提取物3g，溶于20mL水，离心除去沉淀，进样至高效液相色谱仪进行分离，接取石榴皮亭A的组分，用旋转蒸发仪在温度40℃下浓缩成5mL，真空冷冻干燥成黄色固体粉末230mg；
b、将反相C18色谱柱连接在配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上，调整高效液相色谱仪波长为254nm和366nm，将柱温控制在7--30℃，流速控制在0.3-2.4mL/min，将甲醇和甲酸含量为0.05-1.0％甲酸水通过高效液相色谱仪的溶剂泵混合作为流动相，其中甲醇含量控制在15-50％，平衡色谱柱至基线水平，称取步骤a中所得富含石榴皮亭A的部位5-40mg，溶于1mL流动相中，进样至色谱柱进行低温分离，分别接取石榴皮亭A的第一个峰和第二个峰，接取包含有石榴皮亭A的组分，用旋转蒸发仪在温度30-50℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
c、将反相C18色谱柱连接在配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上，调整高效液相色谱仪波长为254nm和366nm，将柱温控制在7℃--30℃，流速控制在0.3-2.4mL/min，将甲醇和甲酸含量为0.05-1.0％甲酸水通过高效液相色谱仪的溶剂泵混合作为流动相，其中甲醇含量控制在15％-50％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤b中所得包含第一个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第二个峰，将步骤b中所得包含第二个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第一个峰，合并这两次实验的组分，用旋转蒸发仪在温度30-50℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
d、将反相C18色谱柱连接在配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上，调整高效液相色谱仪波长为254nm和366nm，将柱温控制在7℃--2℃，流速控制在0.3-4.7/min，将乙腈和甲酸含量为0.05-1.0％甲酸水通过高效液相色谱仪的溶剂泵混合作为流动相，其中乙腈含量控制在10-30％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤c中所得组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A组分，用旋转蒸发仪在温度30-50℃下浓缩至1mL，真空冷冻干燥，得到高纯度石榴皮亭A淡黄色粉末，用高效液相色谱仪鉴定其纯度；
使用甲醇-乙腈-甲酸水的混合物作为流动相：
a、将反相C18色谱柱连接在配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上，调整高效液相色谱仪波长为254nm和366nm，将柱温控制在30℃，流速控制在180mL/min，将甲醇和甲酸含量为0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪的溶剂泵混合作为流动相，其中甲醇含量20％，平衡色谱柱至基线水平，称取石榴皮提取物3g，溶于20mL水，离心除去沉淀，进样至高效液相色谱仪进行分离，接取石榴皮亭A的组分，用旋转蒸发仪在温度40℃下浓缩成5mL，真空冷冻干燥成黄色固体粉末230mg；
b、调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在0.3-2.4mL/min，柱温控制在7℃--30℃，将甲醇、乙腈和甲酸含量0.05-1.0％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中甲醇的含量控制在15-40％，乙腈的含量控制在5-15％，甲酸水的含量控制在55-80％，平衡色谱柱至基线水平，称取步骤a中所得富含石榴皮亭A的部位5-40mg，溶于1mL流动相中，进样至色谱柱进行低温分离，分别接取石榴皮亭A的第一个峰和第二个峰，接取包含有石榴皮亭A的组分，用旋转蒸发仪在温度30-50℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
c、调整高效液相色谱仪波长为254nm和366nm，流速控制在0.3-2.4mL/min之间，柱温控制在7℃--30℃，将甲醇、乙腈和甲酸含量0.05-1.0％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中甲醇的含量控制在15％-40％，乙腈的含量控制在5％-15％，甲酸水的含量控制在55％-80％，平衡色谱柱10-40min，将步骤b中所得包含第一个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第二个峰，将步骤b中所得包含第二个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第一个峰，合并两次实验的组分，用旋转蒸发仪在温度30-50℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
d、将反相C18色谱柱连接在配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上，调整高效液相色谱仪波长为254nm和366nm，将柱温控制在7℃--2℃，流速控制在0.3-4.7/min，将乙腈和甲酸含量为0.05-1.0％甲酸水通过高效液相色谱仪的溶剂泵混合作为流动相，其中乙腈含量控制在10-30％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤c中所得组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A组分，用旋转蒸发仪在温度30-50℃下浓缩至1mL，真空冷冻干燥，得到高纯度石榴皮亭A淡黄色粉末，用高效液相色谱仪鉴定其纯度；
使用乙腈和甲酸水的混合物作为流动相：
a、将反相C18色谱柱连接在配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上，调整高效液相色谱仪波长为254nm和366nm，将柱温控制在30℃，流速控制在180mL/min，将甲醇和甲酸含量为0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪的溶剂泵混合作为流动相，其中甲醇含量20％，平衡色谱柱至基线水平，称取石榴皮提取物3g，溶于20mL水，离心除去沉淀，进样至高效液相色谱仪进行分离，接取石榴皮亭A的组分，用旋转蒸发仪在温度40℃下浓缩成5mL，真空冷冻干燥成黄色固体粉末230mg；
b、调整高效液相色谱仪波长为254nm和366nm，流速控制在0.3-2.4mL/min，柱温控制在7℃--2℃，将乙腈和甲酸含量0.05-1.0％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中乙腈的含量控制在10-30％，甲酸水的含量控制在70-90％，平衡色谱柱至基线水平，称取步骤a中所得富含石榴皮亭A的部位5-40mg，溶于1mL流动相中，进样至色谱柱进行低温分离，分别接取石榴皮亭A的第一个峰和第二个峰，接取包含有石榴皮亭A的组分，用旋转蒸发仪在温度30-50℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
c、调整高效液相色谱仪波长为254nm和366nm，流速控制在0.3-2.4mL/min，柱温控制在7℃--2℃，将乙腈和甲酸含量0.05-1.0％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中乙腈的含量控制在10％-30％，甲酸水的含量控制在70％-90％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤b中所得包含第一个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第二个峰，将步骤b中所得包含第二个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第一个峰，合并两次实验的组分，用旋转蒸发仪在温度30-50℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
d、将反相C18色谱柱连接在配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上，调整高效液相色谱仪波长为254nm和366nm，将柱温控制在7℃--2℃，流速控制在0.3-4.7/min，将乙腈和甲酸含量为0.05-1.0％甲酸水通过高效液相色谱仪的溶剂泵混合作为流动相，其中乙腈含量控制在10-30％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤c中所得组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A组分，用旋转蒸发仪在温度30-50℃下浓缩至1mL，真空冷冻干燥，得到高纯度石榴皮亭A淡黄色粉末，用高效液相色谱法鉴定其纯度。
使用甲醇和甲酸水的混合物作为流动相中步骤b、步骤c和步骤d中的甲酸水中甲酸含量控制在0.1-0.3％。
使用甲醇和甲酸水的混合物作为流动相、使用甲醇-乙腈-甲酸水的混合物作为流动相或使用乙腈和甲酸水的混合物作为流动相中步骤b、步骤c和步骤d中浓缩温度控制在30-37℃；
使用甲醇和甲酸水的混合物作为流动相或使用甲醇-乙腈-甲酸水的混合物作为流动相中的分离过程中步骤b中和步骤c中柱温控制在-15℃--25℃，步骤d中柱温控制在2℃--2℃，或使用乙腈和甲酸水的混合物作为流动相时的分离过程中步骤b中和步骤c中柱温控制在2℃--2℃，步骤d中柱温控制在2℃--2℃。
本发明所述的一种高纯度石榴皮亭A的制备方法，该方法通过低温色谱及非线性色谱原理相结合，并通过杂质产生机理研究，从石榴皮提取物中获得了高纯度的石榴皮亭A对照品。该方法获得的石榴皮亭A纯度高于98％，满足石榴皮亭A国家标准品的申报要求，可为石榴皮/花或其他以石榴皮亭A为有效成分的药材质量控制做出贡献。这对含有石榴皮亭A的药材的质量标准研究具有十分重要的意义。
附图说明
图1为本发明中石榴皮提取物在步骤b中的分离色谱示意图。
图2为本发明中步骤d所得石榴皮亭A的液相色谱纯度测定图。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步详细阐述本发明。
实施例1
使用甲醇和甲酸水的混合物作为流动相：
a、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径80毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，将柱温控制在30℃，流速控制在180mL/min，将甲醇和甲酸含量为0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪的溶剂泵混合作为流动相，其中甲醇含量20％，平衡色谱柱至基线水平，称取石榴皮提取物3g，溶于20mL水，离心除去沉淀，进样至高效液相色谱仪进行分离，接取石榴皮亭A的组分，用旋转蒸发仪在温度40℃下浓缩成5mL，真空冷冻干燥成黄色固体粉末230mg；，
b、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，将柱温控制在-20℃，流速控制在1.2ml/min，将甲醇和甲酸含量为0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪的溶剂泵混合作为流动相，其中甲醇含量控制在15％，平衡色谱柱至基线水平，称取步骤a中所得富含石榴皮亭A的部位5mg，溶于1mL流动相中，进样至色谱柱进行低温分离，分别接取石榴皮亭A的第一个峰和第二个峰，接取包含有石榴皮亭A的组分，用旋转蒸发仪在温度30℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
c、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，将柱温控制在-20℃，流速控制在1.2ml/min，将甲醇和甲酸含量为0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪的溶剂泵混合作为流动相，其中甲醇含量控制在15％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤b中所得包含第一个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第二个峰，将步骤b中所得包含第二个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第一个峰，合并这两次实验的组分，用旋转蒸发仪在温度30℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
d、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，将柱温控制在-2℃，流速控制在1.2ml/min，将乙腈和甲酸含量0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中乙腈的含量为10％，甲酸水的含量为90％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤c中所得组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A组分，用旋转蒸发仪在温度30℃下浓缩至1mL，真空冷冻干燥，得到高纯度石榴皮亭A淡黄色粉末0.3mg，纯度98.9％，回收率7.5％。
实施例2
使用甲醇和甲酸水的混合物作为流动相：
a、依据实施例1进行；
b、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，将柱温控制在-20℃，流速控制在0.3ml/min，将甲醇和甲酸含量为0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪的溶剂泵混合作为流动相，其中甲醇含量控制在15％，平衡色谱柱至基线水平，称取步骤a中所得富含石榴皮亭A的部位40mg，溶于1mL流动相中，进样至色谱柱进行低温分离，分别接取石榴皮亭A的第一个峰和第二个峰，接取包含有石榴皮亭A的组分，用旋转蒸发仪在30℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
c、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，将柱温控制在-20℃，流速控制在0.3ml/min，将甲醇和甲酸含量为0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪的溶剂泵混合作为流动相，其中甲醇含量控制在15％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤b中所得包含第一个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第二个峰，将步骤b中所得包含第二个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第一个峰，合并两次实验的组分，用旋转蒸发仪在温度30℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
d、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，将柱温控制在-2℃，流速控制在0.3ml/min，将乙腈和甲酸含量0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中乙腈的含量为10％，甲酸水的含量为90％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤c中所得组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A组分，用旋转蒸发仪在温度30℃下浓缩至1mL，真空冷冻干燥，得到高纯度石榴皮亭A淡黄色粉末9.8mg，纯度98.9％，回收率30.6％。
实施例3
使用甲醇和甲酸水的混合物作为流动相：
a、依据实施例1进行；
b、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，将柱温控制在7℃，流速控制在1.8ml/min，将甲醇和甲酸含量为0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪的溶剂泵混合作为流动相，其中甲醇含量控制在15％，平衡色谱柱至基线水平，称取步骤a中所得富含石榴皮亭A的部位20mg，溶于1mL流动相中，进样至色谱柱进行低温分离，分别接取石榴皮亭A的第一个峰和第二个峰，接取包含有石榴皮亭A的组分，用旋转蒸发仪在温度30℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
c、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，将柱温控制在7℃，流速控制在1.8ml/min，将甲醇和甲酸含量为0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪的溶剂泵混合作为流动相，其中甲醇含量控制在15％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤b中所得包含第一个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第二个峰，将步骤b中所得包含第二个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第一个峰，合并这两次实验的组分，用旋转蒸发仪在30℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
d、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，将柱温控制在7℃，流速控制在2.5ml/min，将乙腈和甲酸含量0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中乙腈的含量为10％，甲酸水的含量为90％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤c中所得组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A组分，用旋转蒸发仪在30℃下浓缩至1mL，真空冷冻干燥，得到高纯度石榴皮亭A淡黄色粉末6.0mg，纯度89.8％，回收率33.7％。
实施例4
使用甲醇和甲酸水的混合物作为流动相：
a、依据实施例1进行；
b、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，将柱温控制在-30℃，流速控制在1.2ml/min，将甲醇和甲酸含量为0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪的溶剂泵混合作为流动相，其中甲醇含量控制在15％，平衡色谱柱至基线水平，称取步骤a中所得富含石榴皮亭A的部位40mg，溶于1mL流动相中，进样至色谱柱进行低温分离，分别接取石榴皮亭A的第一个峰和第二个峰，接取包含有石榴皮亭A的组分，用旋转蒸发仪在30℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
c、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，将柱温控制在-30℃，流速控制在1.2ml/min，将甲醇和甲酸含量为0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪的溶剂泵混合作为流动相，其中甲醇含量控制在15％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤b中所得包含第一个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第二个峰，将步骤b中所得包含第二个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第一个峰，合并两次实验的组分，用旋转蒸发仪在30℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
d、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，将柱温控制在5℃，流速控制在3.0ml/min，将乙腈和甲酸含量0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中乙腈的含量为10％，甲酸水的含量为90％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤c中所得组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A组分，用旋转蒸发仪在温度30℃下浓缩至1mL，真空冷冻干燥，得到高纯度石榴皮亭A淡黄色粉末9.2mg，纯度99.1％，回收率28.8％。
实施例5
使用甲醇和甲酸水的混合物作为流动相：
a、依据实施例1进行；
b、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，将柱温控制在-15℃，流速控制在1.2ml/min，将甲醇和甲酸含量为0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪的溶剂泵混合作为流动相，其中甲醇含量控制在30％，平衡色谱柱至基线水平，称取步骤a中所得富含石榴皮亭A的部位40mg，溶于1mL流动相中，进样至色谱柱进行低温分离，分别接取石榴皮亭A的第一个峰和第二个峰，接取包含有石榴皮亭A的组分，用旋转蒸发仪在温度30℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
c、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，将柱温控制在-15℃，流速控制在1.2ml/min，将甲醇和甲酸含量为0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪的溶剂泵混合作为流动相，其中甲醇含量控制在30％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤b中所得包含第一个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第二个峰，将步骤b中所得包含第二个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第一个峰，合并两次实验的组分，用旋转蒸发仪在温度30℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
d、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，将柱温控制在-1℃，流速控制在1.2ml/min，将乙腈和甲酸含量0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中乙腈的含量为10％，甲酸水的含量为90％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤c中所得组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A组分。用旋转蒸发仪在温度30℃下浓缩至1mL，真空冷冻干燥，得到高纯度石榴皮亭A淡黄色粉末10.6mg，纯度96.5％，回收率33.1％。
实施例6
使用甲醇和甲酸水的混合物作为流动相：
a、依据实施例1进行；
b、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，将柱温控制在-25℃，流速控制在2.0ml/min，将甲醇和甲酸含量为0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪的溶剂泵混合作为流动相，其中甲醇含量控制在15％，平衡色谱柱至基线水平，称取步骤a中所得富含石榴皮亭A的部位40mg，溶于1mL流动相中，进样至色谱柱进行低温分离，分别接取石榴皮亭A的第一个峰和第二个峰，接取包含有石榴皮亭A的组分，用旋转蒸发仪在温度30℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
c、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，将柱温控制在-25℃，流速控制在2.0ml/min，将甲醇和甲酸含量为0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪的溶剂泵混合作为流动相，其中甲醇含量控制在15％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤b中所得包含第一个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第二个峰，将步骤b中所得包含第二个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第一个峰，合并两次实验的组分，用旋转蒸发仪在温度30℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
d、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，将柱温控制在2℃，流速控制在4.7ml/min，将乙腈和甲酸含量0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中乙腈的含量为10％，甲酸水的含量为90％，平衡色谱柱至基线水平。将步骤c中所得组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A组分，用旋转蒸发仪在温度30℃下浓缩至1mL，真空冷冻干燥，得到高纯度石榴皮亭A淡黄色粉末9.5mg，纯度99.1％，回收率29.7％。
实施例7
使用甲醇和甲酸水的混合物作为流动相：
a、依据实施例1进行；
b、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，将柱温控制在-25℃，流速控制在2.24ml/min，将甲醇和甲酸含量为0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪的溶剂泵混合作为流动相，其中甲醇含量控制在50％，平衡色谱柱20min，称取步骤a中所得富含石榴皮亭A的部位40mg，溶于1mL流动相中，进样至色谱柱进行低温分离，分别接取石榴皮亭A的第一个峰和第二个峰，接取包含有石榴皮亭A的组分，用旋转蒸发仪在温度30℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
c、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，将柱温控制在-25℃，流速控制在2.4ml/min，将甲醇和甲酸含量为0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪的溶剂泵混合作为流动相，其中甲醇含量控制在50％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤b中所得包含第一个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第二个峰，将步骤b中所得包含第二个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第一个峰，合并两次实验的组分，用旋转蒸发仪在温度30℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
d、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，将柱温控制在6℃，流速控制在1.2ml/min，将乙腈和甲酸含量0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中乙腈的含量为10％，甲酸水的含量为90％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤c中所得组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A组分，用旋转蒸发仪在温度30℃下浓缩至1mL，真空冷冻干燥，得到高纯度石榴皮亭A淡黄色粉末4.5mg，纯度95.2％，回收率14.1％。
实施例8
使用甲醇-乙腈-甲酸水的混合物作为流动相：
a、依据实施例1进行；
b、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在0.3mL/min，将柱温控制在-20℃，将甲醇、乙腈和甲酸含量0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中甲醇的含量控制在15％，乙腈的含量为5％，甲酸水的含量为80％，平衡色谱柱至基线水平，称取步骤a中所得富含石榴皮亭A的部位40mg，溶于1mL流动相中，进样至色谱柱进行低温分离，分别接取石榴皮亭A的第一个峰和第二个峰，接取包含有石榴皮亭A的组分，用旋转蒸发仪在温度30℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
c、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在0.3mL/min，将柱温控制在-20℃，将甲醇、乙腈和甲酸含量0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中甲醇的含量控制在15％，乙腈的含量为5％，甲酸水的含量为80％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤b中所得包含第一个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第二个峰，将步骤b中所得包含第二个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第一个峰，合并两次实验的组分，用旋转蒸发仪在30℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
d、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在1.2ml/min，将柱温控制在-2℃，将乙腈和甲酸含量0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中乙腈的含量为10％，甲酸水的含量为90％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤c中所得组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A组分，用旋转蒸发仪在温度30℃下浓缩至1mL，真空冷冻干燥，得到高纯度石榴皮亭A淡黄色粉末12.2mg，纯度98.9％，回收率38.1％。
实施例9
使用甲醇-乙腈-甲酸水的混合物作为流动相：
a、依据实施例1进行；
b、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在1.2mL/min，将柱温控制在-30℃，将甲醇、乙腈和甲酸含量0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中甲醇的含量控制在40％，乙腈的含量为5％，甲酸水的含量为55％，平衡色谱柱至基线水平，称取步骤a中所得富含石榴皮亭A的部位40mg，溶于1mL流动相中，进样至色谱柱进行低温分离，分别接取石榴皮亭A的第一个峰和第二个峰，接取包含有石榴皮亭A的组分，用旋转蒸发仪在温度30℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
c、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在1.2ml/min，将柱温控制在-30℃，将甲醇、乙腈和甲酸含量0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中甲醇的含量控制在40％，乙腈的含量为5％，甲酸水的含量为55％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤b中所得包含第一个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第二个峰，将步骤b中所得包含第二个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第一个峰，合并两次实验的组分，用旋转蒸发仪在温度30℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
d、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在0.3ml/min，将柱温控制在7℃，将乙腈和甲酸含量0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中乙腈的含量为10％，甲酸水的含量为90％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤c中所得组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A组分，用旋转蒸发仪在温度30℃下浓缩至1mL，真空冷冻干燥，得到高纯度石榴皮亭A淡黄色粉末11.5mg，纯度98.5％，回收率35.9％。
实施例10
使用甲醇-乙腈-甲酸水的混合物作为流动相
a、依据实施例1进行；
b、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在2.4ml/min，将柱温控制在7℃，将甲醇、乙腈和甲酸含量0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中甲醇的含量控制在20％，乙腈的含量为15％，甲酸水的含量为65％，平衡色谱柱至基线水平，称取步骤a中所得富含石榴皮亭A的部位40mg，溶于1mL流动相中，进样至色谱柱进行低温分离，分别接取石榴皮亭A的第一个峰和第二个峰，接取包含有石榴皮亭A的组分，用旋转蒸发仪在温度30℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
c、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在2.4ml/min，将柱温控制在7℃，将甲醇、乙腈和甲酸含量0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中甲醇的含量控制在20％，乙腈的含量为15％，甲酸水的含量为65％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤b中所得包含第一个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第二个峰，将步骤b中所得包含第二个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第一个峰，合并两次实验的组分，用旋转蒸发仪在温度30℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
d、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在2.4ml/min，将柱温控制在-30℃，将乙腈和甲酸含量0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中乙腈的含量为10％，甲酸水的含量为90％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤c中所得组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A组分，用旋转蒸发仪在温度30℃下浓缩至1mL，真空冷冻干燥，得到高纯度石榴皮亭A淡黄色粉末13.2mg，纯度98.1％，回收率41.2％。
实施例11
使用乙腈和甲酸水的混合物作为流动相：
a、依据实施例1进行；
b、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径80毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在1.2ml/min，将柱温控制在-2℃，将乙腈和甲酸含量0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中乙腈的含量为5％，甲酸水的含量为95％，平衡色谱柱至基线水平，称取步骤a中所得富含石榴皮亭A的部位40mg，溶于1mL流动相中，进样至色谱柱进行低温分离，分别接取石榴皮亭A的第一个峰和第二个峰，接取包含有石榴皮亭A的组分，用旋转蒸发仪在温度30℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
c、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径80毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在1.2ml/min，将柱温控制在-2℃，将乙腈和甲酸含量0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中乙腈的含量为5％，甲酸水的含量为95％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤b中所得包含第一个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第二个峰，将步骤b中所得包含第二个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第一个峰，合并两次实验的组分，用旋转蒸发仪在30℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
d、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在1.2ml/min，将柱温控制在-2℃，将乙腈和甲酸含量0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中乙腈的含量为5％，甲酸水的含量为90％，平衡色谱柱至基线水平。将步骤c中所得组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A组分，用旋转蒸发仪在温度30℃下浓缩至1mL，真空冷冻干燥，得到高纯度石榴皮亭A淡黄色粉末11.2mg，纯度90.1％，回收率31.5％。
实施例12
使用乙腈和甲酸水的混合物作为流动相：
a、依据实施例1进行；
b、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径80毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在0.3ml/min，将柱温控制在7℃，将乙腈和甲酸含量0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中乙腈的含量为15％，甲酸水的含量为95％，平衡色谱柱至基线水平，称取步骤a中所得富含石榴皮亭A的部位40mg，溶于1mL流动相中，进样至色谱柱进行低温分离，分别接取石榴皮亭A的第一个峰和第二个峰，接取包含有石榴皮亭A的组分，用旋转蒸发仪在温度30℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
c、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径80毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在0.3ml/min，将柱温控制在7℃，将乙腈和甲酸含量0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中乙腈的含量为15％，甲酸水的含量为95％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤b中所得包含第一个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第二个峰，将步骤b中所得包含第二个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第一个峰，合并两次实验的组分，用旋转蒸发仪在30℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
d、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在1.2ml/min。将柱温控制在-2℃，将乙腈和甲酸含量0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中乙腈的含量为15％，甲酸水的含量为90％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤c中所得组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A组分，用旋转蒸发仪在温度30℃下浓缩至1mL，真空冷冻干燥，得到高纯度石榴皮亭A淡黄色粉末14.0mg，纯度86.3％，回收率37.8％。
实施例13
使用甲醇-乙腈-甲酸水的混合物作为流动相：
a、依据实施例1进行；
b、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在1.2ml/min。将柱温控制在-20℃，将甲醇、乙腈和甲酸含量0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中甲醇的含量控制在20％，乙腈的含量为15％，甲酸水的含量为65％，平衡色谱柱至基线水平，称取步骤a中所得富含石榴皮亭A的部位40mg，溶于1mL流动相中，进样至色谱柱进行低温分离，分别接取石榴皮亭A的第一个峰和第二个峰，接取包含有石榴皮亭A的组分，用旋转蒸发仪在温度30℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
c、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在1.2ml/min，将柱温控制在-20℃，将甲醇、乙腈和甲酸含量0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中甲醇的含量控制在20％，乙腈的含量为15％，甲酸水的含量为65％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤b中所得包含第一个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第二个峰，将步骤b中所得包含第二个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第一个峰，合并两次实验的组分，用旋转蒸发仪在温度50℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
d、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在0.3ml/min，将柱温控制在-2℃，将乙腈和甲酸含量0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中乙腈的含量为10％，甲酸水的含量为90％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤c中所得组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A组分，用旋转蒸发仪在温度50℃下浓缩至1mL，真空冷冻干燥，得到高纯度石榴皮亭A淡黄色粉末12.8mg，纯度96.5％，回收率40.0％。
实施例14
使用甲醇-乙腈-甲酸水的混合物作为流动相：
a、依据实施例1进行；
b、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在2.0ml/min，将柱温控制在-10℃，将甲醇、乙腈和甲酸含量0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中甲醇的含量控制在20％，乙腈的含量为15％，甲酸水的含量为65％，平衡色谱柱至基线水平，称取步骤a中所得富含石榴皮亭A的部位40mg，溶于1mL流动相中，进样至色谱柱进行低温分离，分别接取石榴皮亭A的第一个峰和第二个峰，接取包含有石榴皮亭A的组分，用旋转蒸发仪在温度30℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
c、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在2.0ml/min，将柱温控制在-10℃，将甲醇、乙腈和甲酸含量0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中甲醇的含量控制在20％，乙腈的含量为15％，甲酸水的含量为65％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤b中所得包含第一个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第二个峰，将步骤b中所得包含第二个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第一个峰，合并两次实验的组分，用旋转蒸发仪在温度37℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
d、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在2.5ml/min，将柱温控制在-1℃，将乙腈和甲酸含量0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中乙腈的含量为30％，甲酸水的含量为90％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤c中所得组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A组分，用旋转蒸发仪在温度37℃下浓缩至1mL，真空冷冻干燥，得到高纯度石榴皮亭A淡黄色粉末13.4mg，纯度98.3％，回收率41.9％。
实施例15
使用甲醇-乙腈-甲酸水的混合物作为流动相：
a、依据实施例1进行；
b、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在2.4ml/min，将柱温控制在7℃，将甲醇、乙腈和甲酸含量0.05％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中甲醇的含量控制在20％，乙腈的含量为15％，甲酸水的含量为65％，平衡色谱柱至基线水平，称取步骤a中所得富含石榴皮亭A的部位40mg，溶于1mL流动相中，进样至色谱柱进行低温分离，分别接取石榴皮亭A的第一个峰和第二个峰，接取包含有石榴皮亭A的组分，用旋转蒸发仪在温度30℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
c、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在2.4ml/min，将柱温控制在7℃，将甲醇、乙腈和甲酸含量0.05％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中甲醇的含量控制在20％，乙腈的含量为15％，甲酸水的含量为65％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤b中所得包含第一个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第二个峰，将步骤b中所得包含第二个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第一个峰，合并两次实验的组分，用旋转蒸发仪在温度37℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
d、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在4.7ml/min，将柱温控制在7℃，将乙腈和甲酸含量0.05％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中乙腈的含量为20％，甲酸水的含量为90％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤c中所得组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A组分，用旋转蒸发仪在温度37℃下浓缩至1mL，真空冷冻干燥，得到高纯度石榴皮亭A淡黄色粉末15mg，纯度90.8％，回收率42.6％。
实施例16
使用甲醇-乙腈-甲酸水的混合物作为流动相：
a、依据实施例1进行；
b、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在1.5ml/min，将柱温控制在-15℃，将甲醇、乙腈和甲酸含量0.3％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中甲醇的含量控制在20％，乙腈的含量为15％，甲酸水的含量为65％，平衡色谱柱至基线水平，称取步骤a中所得富含石榴皮亭A的部位40mg，溶于1mL流动相中，进样至色谱柱进行低温分离，分别接取石榴皮亭A的第一个峰和第二个峰，接取包含有石榴皮亭A的组分，用旋转蒸发仪在温度30℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
c、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在1.5ml/min，将柱温控制在-15℃，将甲醇、乙腈和甲酸含量0.3％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中甲醇的含量控制在20％，乙腈的含量为15％，甲酸水的含量为65％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤b中所得包含第一个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第二个峰，将步骤b中所得包含第二个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第一个峰，合并这两次实验的组分，用旋转蒸发仪在温度37℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
d、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在3.5ml/min，将柱温控制在5℃，将乙腈和甲酸含量0.3％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中乙腈的含量为10％，甲酸水的含量为90％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤c中所得组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A组分，用旋转蒸发仪在温度37℃下浓缩至1mL，真空冷冻干燥，得到高纯度石榴皮亭A淡黄色粉末12.1mg，纯度98.0％，回收率37.0％。
实施例17
使用甲醇-乙腈-甲酸水的混合物作为流动相：
a、依据实施例1进行；
b、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在1.5ml/min，将柱温控制在-30℃，将甲醇、乙腈和甲酸含量1.0％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中甲醇的含量控制在20％，乙腈的含量为15％，甲酸水的含量为65％，平衡色谱柱至基线水平，称取步骤a中所得富含石榴皮亭A的部位40mg，溶于1mL流动相中，进样至色谱柱进行低温分离，分别接取石榴皮亭A的第一个峰和第二个峰，接取包含有石榴皮亭A的组分，用旋转蒸发仪在温度30℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
c、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在1.5ml/min，将柱温控制在-30℃，将甲醇、乙腈和甲酸含量1.0％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中甲醇的含量控制在20％，乙腈的含量为15％，甲酸水的含量为65％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤b中所得包含第一个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第二个峰，将步骤b中所得包含第二个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第一个峰，合并这两次实验的组分，用旋转蒸发仪在温度37℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
d、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在4.0ml/min，将柱温控制在1℃，将乙腈和甲酸含量1.0％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中乙腈的含量为10％，甲酸水的含量为90％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤c中所得组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A组分，用旋转蒸发仪在温度37℃下浓缩至1mL，真空冷冻干燥，得到高纯度石榴皮亭A淡黄色粉末10.7mg，纯度96.4％，回收率32.1％。
实施例18
使用甲醇-乙腈-甲酸水的混合物作为流动相：
a、依据实施例1进行；
b、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在0.8ml/min，将柱温控制在1℃，将甲醇、乙腈和甲酸含量0.2％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中甲醇的含量控制在30％，乙腈的含量为5％，甲酸水的含量为65％，平衡色谱柱至基线水平，称取步骤a中所得富含石榴皮亭A的部位40mg，溶于1mL流动相中，进样至色谱柱进行低温分离，如图1所示，分别接取石榴皮亭A的第一个峰和第二个峰，接取包含有石榴皮亭A的组分，用旋转蒸发仪在温度30℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
c、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在0.8ml/min，将柱温控制在1℃，将甲醇、乙腈和甲酸含量0.2％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中甲醇的含量控制在30％，乙腈的含量为5％，甲酸水的含量为65％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤b中所得包含第一个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第二个峰，将步骤b中所得包含第二个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第一个峰，合并这两次实验的组分，用旋转蒸发仪在温度37℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
d、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在0.8ml/min将柱温控制在2℃，将乙腈和甲酸含量0.2％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中乙腈的含量为15％，甲酸水的含量为85％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤c中所得组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A组分，用旋转蒸发仪在温度37℃下浓缩至1mL，真空冷冻干燥，得到高纯度石榴皮亭A淡黄色粉末13.5mg，如图2所示，纯度99.1％，回收率42.2％。
实施例19
使用甲醇-乙腈-甲酸水的混合物作为流动相：
a、依据实施例1进行；
b、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在0.3ml/min，将柱温控制在-20℃，将甲醇、乙腈和甲酸含量1.0％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中甲醇的含量控制在30％，乙腈的含量为5％，甲酸水的含量为65％，平衡色谱柱至基线水平，称取步骤a中所得富含石榴皮亭A的部位40mg，溶于1mL流动相中，进样至色谱柱进行低温分离，如图1所示，分别接取石榴皮亭A的第一个峰和第二个峰，接取包含有石榴皮亭A的组分，用旋转蒸发仪在温度30℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
c、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在0.3ml/min，将柱温控制在-20℃，将甲醇、乙腈和甲酸含量0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中甲醇的含量控制在30％，乙腈的含量为5％，甲酸水的含量为65％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤b中所得包含第一个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第二个峰，将步骤b中所得包含第二个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第一个峰，合并两次实验的组分，用旋转蒸发仪在温度37℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
d、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在0.3ml/min，将柱温控制在-2℃，将乙腈和甲酸含量0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中乙腈的含量为15％，甲酸水的含量为85％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤c中所得组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A组分，用旋转蒸发仪在温度37℃下浓缩至1mL，真空冷冻干燥，得到高纯度石榴皮亭A淡黄色粉末12.4mg，如图2所示，纯度97.6％，回收率38.8％。
实施例20
使用甲醇-乙腈-甲酸水的混合物作为流动相：
a、依据实施例1进行；
b、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在2.4ml/min，将柱温控制在-30℃，将甲醇、乙腈和甲酸含量0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中甲醇的含量控制在30％，乙腈的含量为12％，甲酸水的含量为58％，平衡色谱柱至基线水平，称取步骤a中所得富含石榴皮亭A的部位40mg，溶于1mL流动相中，进样至色谱柱进行低温分离，分别接取石榴皮亭A的第一个峰和第二个峰，接取包含有石榴皮亭A的组分，用旋转蒸发仪在温度30℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
c、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在2.4ml/min，将柱温控制在-30℃，将甲醇、乙腈和甲酸含量1.0％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中甲醇的含量控制在30％，乙腈的含量为12％，甲酸水的含量为58％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤b中所得包含第一个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第二个峰，将步骤b中所得包含第二个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第一个峰，合并这两次实验的组分，用旋转蒸发仪在温度37℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
d、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在4.7ml/min，将柱温控制在-2℃，将乙腈和甲酸含量0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中乙腈的含量为15％，甲酸水的含量为85％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤c中所得组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A组分，用旋转蒸发仪在温度37℃下浓缩至1mL，真空冷冻干燥，得到高纯度石榴皮亭A淡黄色粉末11.1mg，纯度94.9％，回收率32.9％。
实施例21
使用甲醇-乙腈-甲酸水的混合物作为流动相：
a、依据实施例1进行；
b、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在0.3ml/min，将柱温控制在5℃，将甲醇、乙腈和甲酸含量0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中甲醇的含量控制在15％，乙腈含量15％，甲酸水的含量为70％，平衡色谱柱至基线水平，称取步骤a中所得富含石榴皮亭A的部位40mg，溶于1mL流动相中，进样至色谱柱进行低温分离，分别接取石榴皮亭A的第一个峰和第二个峰，接取包含有石榴皮亭A的组分，用旋转蒸发仪在温度30℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
c、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在0.3ml/min，将柱温控制在5℃，将甲醇、乙腈和甲酸含量0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中甲醇的含量控制在15％，乙腈含量15％，甲酸水的含量为70％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤b中所得包含第一个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第二个峰，将步骤b中所得包含第二个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第一个峰，合并两次实验的组分，用旋转蒸发仪在温度37℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
d、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在0.3ml/min，将柱温控制在7℃，将乙腈和甲酸含量1.0％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中乙腈的含量为15％，甲酸水的含量为85％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤c中所得组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A组分，用旋转蒸发仪在温度37℃下浓缩至1mL，真空冷冻干燥，得到高纯度石榴皮亭A淡黄色粉末10.1mg，纯度94.1％，回收率29.7％。
实施例22
使用甲醇-乙腈-甲酸水的混合物作为流动相：
a、依据实施例1进行；
b、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在2.4ml/min，将柱温控制在7℃，将甲醇、乙腈和甲酸含量0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中甲醇的含量控制在40％，乙腈含量5％，甲酸水的含量为55％，平衡色谱柱至基线水平，称取步骤a中所得富含石榴皮亭A的部位40mg，溶于1mL流动相中，进样至色谱柱进行低温分离，分别接取石榴皮亭A的第一个峰和第二个峰，接取包含有石榴皮亭A的组分，用旋转蒸发仪在温度30℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
c、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在2.4ml/min，将柱温控制在7℃，将甲醇、乙腈和甲酸含量0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中甲醇的含量控制在40％，乙腈含量5％，甲酸水的含量为55％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤b中所得包含第一个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第二个峰，将步骤b中所得包含第二个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第一个峰，合并两次实验的组分，用旋转蒸发仪在温度37℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
d、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在2.4ml/min，将柱温控制在-2℃，将乙腈和甲酸含量1.0％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中乙腈的含量为15％，甲酸水的含量为85％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤c中所得组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A组分，用旋转蒸发仪在温度37℃下浓缩至1mL，真空冷冻干燥，得到高纯度石榴皮亭A淡黄色粉末12.8mg，纯度96.8％，回收率38.7％。
实施例23
使用乙腈和甲酸水的混合物作为流动相：
a、依据实施例1进行；
b、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在2.4ml/min，将柱温控制在-2℃，将乙腈和甲酸含量0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中乙腈的含量控制在10％，甲酸水的含量为90％，平衡色谱柱至基线水平，称取步骤a中所得富含石榴皮亭A的部位40mg，溶于1mL流动相中，进样至色谱柱进行低温分离，分别接取石榴皮亭A的第一个峰和第二个峰，接取包含有石榴皮亭A的组分，用旋转蒸发仪在温度30℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
c、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在2.4ml/min，将柱温控制在-2℃，将乙腈和甲酸含量0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中乙腈的含量控制在10％，甲酸水的含量为90％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤b中所得包含第一个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第二个峰，将步骤b中所得包含第二个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第一个峰，合并两次实验的组分，用旋转蒸发仪在温度35℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
d、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在4.7ml/min，将柱温控制在-2℃，将乙腈和甲酸含量1.0％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中乙腈的含量为10％，甲酸水的含量为90％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤c中所得组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A组分，用旋转蒸发仪在温度35℃下浓缩至1mL，真空冷冻干燥，得到高纯度石榴皮亭A淡黄色粉末14.3mg，纯度87.1％，回收率38.9％。
实施例24
使用乙腈和甲酸水的混合物作为流动相：
a、依据实施例1进行；
b、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在1.0ml/min，将柱温控制在7℃，将乙腈和甲酸含量0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中乙腈的含量控制在30％，甲酸水的含量为70％，平衡色谱柱至基线水平，称取步骤a中所得富含石榴皮亭A的部位40mg，溶于1mL流动相中，进样至色谱柱进行低温分离，分别接取石榴皮亭A的第一个峰和第二个峰，接取包含有石榴皮亭A的组分，用旋转蒸发仪在温度30℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
c、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在1.0ml/min，将柱温控制在7℃，将乙腈和甲酸含量0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中乙腈的含量控制在20％，甲酸水的含量为80％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤b中所得包含第一个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第二个峰，将步骤b中所得包含第二个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第一个峰，合并两次实验的组分，用旋转蒸发仪在37℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
d、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在4.7ml/min，将柱温控制在2℃，将乙腈和甲酸含量1.0％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中乙腈的含量为30％，甲酸水的含量为70％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤c中所得组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A组分，用旋转蒸发仪在温度37℃下浓缩至1mL，真空冷冻干燥，得到高纯度石榴皮亭A淡黄色粉末14.1mg，纯度85.4％，回收率37.6％。
实施例25
使用乙腈和甲酸水的混合物作为流动相：
a、依据实施例1进行；
b、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在0.3ml/min，将柱温控制在2℃，将乙腈和甲酸含量0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中乙腈的含量控制在20％，甲酸水的含量为80％，平衡色谱柱至基线水平，称取步骤a中所得富含石榴皮亭A的部位20mg，溶于1mL流动相中，进样至色谱柱进行低温分离，分别接取石榴皮亭A的第一个峰和第二个峰，接取包含有石榴皮亭A的组分，用旋转蒸发仪在温度30℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
c、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在0.3ml/min，将柱温控制在2℃，将乙腈和甲酸含量0.1％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中乙腈的含量控制在20％，甲酸水的含量为80％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤b中所得包含第一个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第二个峰，将步骤b中所得包含第二个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第一个峰，合并两次实验的组分，用旋转蒸发仪在37℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
d、将一根反相C18色谱柱(规格为长250毫米，直径10毫米，填料粒径10微米)连接在一台配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上(又称DAD检测器)，调整DAD检测器波长为254nm和366nm，流速控制在4.7ml/min，将柱温控制在7℃，将乙腈和甲酸含量1.0％的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中乙腈的含量为30％，甲酸水的含量为70％，平衡色谱柱至基线水平，将步骤c中所得组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A组分，用旋转蒸发仪在温度37℃下浓缩至1mL，真空冷冻干燥，得到高纯度石榴皮亭A淡黄色粉末3.8mg，纯度95.4％，回收率19.4％。
实施例26
将实施例1-25的任意一种石榴皮亭A都可用作对照品用于富含石榴皮亭A的药材如石榴皮、石榴花的药材中石榴皮亭A的含量测定，其中纯度高于98％的石榴皮亭A满足国家标准品的申报要求，可为石榴皮/花或其他以石榴皮亭A为有效成分的药材质量控制做出贡献。这对含有石榴皮亭A的药材的质量标准研究具有十分重要的意义。
Claims (4)
1.一种高纯度石榴皮亭A的制备方法，其特征在于分别使用甲醇和甲酸水的混合物作为流动相、使用甲醇-乙腈-甲酸水的混合物作为流动相或使用乙腈和甲酸水的混合物作为流动相，具体操作按下列步骤进行：
使用甲醇和甲酸水的混合物作为流动相：
a、将反相C18色谱柱连接在配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上，调整高效液相色谱仪波长为254 nm和366 nm，将柱温控制在30℃，流速控制在180 mL/min，将甲醇和甲酸含量为0.1%的甲酸水通过高效液相色谱仪的溶剂泵混合作为流动相，其中甲醇含量20%，平衡色谱柱至基线水平，称取石榴皮提取物3 g，溶于20mL水，离心除去沉淀，进样至高效液相色谱仪进行分离，接取石榴皮亭A的组分，用旋转蒸发仪在温度40℃下浓缩成5 mL，真空冷冻干燥成黄色固体粉末230 mg；
b、将反相C18色谱柱连接在配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上，调整高效液相色谱仪波长为254 nm和366 nm，将柱温控制在7- -30℃，流速控制在0.3-2.4 mL/min，将甲醇和甲酸含量为0.05-1.0%甲酸水通过高效液相色谱仪的溶剂泵混合作为流动相，其中甲醇含量控制在15-50%，平衡色谱柱至基线水平，称取步骤a中所得富含石榴皮亭A的部位5-40 mg，溶于1 mL流动相中，进样至色谱柱进行低温分离，分别接取石榴皮亭A的第一个峰和第二个峰，接取包含有石榴皮亭A的组分，用旋转蒸发仪在温度30-50℃下浓缩干燥，加1mL流动相溶解，待用；
c、将反相C18色谱柱连接在配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上，调整高效液相色谱仪波长为254 nm和366 nm，将柱温控制在7℃- -30℃，流速控制在0.3 -2.4 mL/min，将甲醇和甲酸含量为0.05-1.0%甲酸水通过高效液相色谱仪的溶剂泵混合作为流动相，其中甲醇含量控制在15%-50%，平衡色谱柱基线水平，将步骤b中所得包含第一个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第二个峰，将步骤b中所得包含第二个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第一个峰，合并这两次实验的组分，用旋转蒸发仪在温度30-50℃下浓缩干燥，加1 mL流动相溶解，待用；
d、将反相C18色谱柱连接在配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上，调整高效液相色谱仪波长为254 nm和366 nm，将柱温控制在7℃- -2℃，流速控制在0.3 -4.7ml/min，将乙腈和甲酸含量为0.05-1.0%甲酸水通过高效液相色谱仪的溶剂泵混合作为流动相，其中乙腈含量控制在10-30%，平衡色谱柱至基线水平，将步骤c中所得组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A组分，用旋转蒸发仪在温度30-50℃下浓缩至1 mL，真空冷冻干燥，得到高纯度石榴皮亭A淡黄色粉末，用高效液相色谱仪鉴定其纯度；
使用甲醇-乙腈-甲酸水的混合物作为流动相：
a、将反相C18色谱柱连接在配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上，调整高效液相色谱仪波长为254 nm和366 nm，将柱温控制在30℃，流速控制在180 mL/min，将甲醇和甲酸含量为0.1%的甲酸水通过高效液相色谱仪的溶剂泵混合作为流动相，其中甲醇含量20%，平衡色谱柱至基线水平，称取石榴皮提取物3 g，溶于20mL水，离心除去沉淀，进样至高效液相色谱仪进行分离，接取石榴皮亭A的组分，用旋转蒸发仪在温度40℃下浓缩成5 mL，真空冷冻干燥成黄色固体粉末230 mg；
b、调整DAD检测器波长为254 nm和366 nm，流速控制在0.3 -2.4 mL/min，柱温控制在7℃- -30℃，将甲醇、乙腈和甲酸含量0.05-1.0%的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中甲醇的含量控制在15-40%，乙腈的含量控制在5-15%，甲酸水的含量控制在55-80%，平衡色谱柱至基线水平，称取步骤a中所得富含石榴皮亭A的部位5-40mg，溶于1 mL流动相中，进样至色谱柱进行低温分离，分别接取石榴皮亭A的第一个峰和第二个峰，接取包含有石榴皮亭A的组分，用旋转蒸发仪在温度30-50℃下浓缩干燥，加1 mL流动相溶解，待用；
c、调整高效液相色谱仪波长为254 nm和366 nm，流速控制在0.3-2.4 mL/min之间，柱温控制在7℃- -30℃，将甲醇、乙腈和甲酸含量0.05-1.0%的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中甲醇的含量控制在15%-40%，乙腈的含量控制在5%-15%，甲酸水的含量控制在55%-80%，平衡色谱柱至基线水平，将步骤b中所得包含第一个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第二个峰，将步骤b中所得包含第二个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第一个峰，合并两次实验的组分，用旋转蒸发仪在温度30-50℃下浓缩干燥，加1 mL流动相溶解，待用；
d、将反相C18色谱柱连接在配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上，调整高效液相色谱仪波长为254 nm和366 nm，将柱温控制在7℃- -2℃，流速控制在0.3 -4.7/min，将乙腈和甲酸含量为0.05-1.0%甲酸水通过高效液相色谱仪的溶剂泵混合作为流动相，其中乙腈含量控制在10-30%，平衡色谱柱至基线水平，将步骤c中所得组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A组分，用旋转蒸发仪在温度30-50℃下浓缩至1 mL，真空冷冻干燥，得到高纯度石榴皮亭A淡黄色粉末，用高效液相色谱仪鉴定其纯度；
使用乙腈和甲酸水的混合物作为流动相：
a、将反相C18色谱柱连接在配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上，调整高效液相色谱仪波长为254 nm和366 nm，将柱温控制在30℃，流速控制在180 mL/min，将甲醇和甲酸含量为0.1%的甲酸水通过高效液相色谱仪的溶剂泵混合作为流动相，其中甲醇含量20%，平衡色谱柱至基线水平，称取石榴皮提取物3 g，溶于20mL水，离心除去沉淀，进样至高效液相色谱仪进行分离，接取石榴皮亭A的组分，用旋转蒸发仪在温度40℃下浓缩成5 mL，真空冷冻干燥成黄色固体粉末230 mg；
b、调整高效液相色谱仪波长为254 nm和366 nm，流速控制在0.3 -2.4 mL/min，柱温控制在7℃- -2℃，将乙腈和甲酸含量0.05-1.0%的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中乙腈的含量控制在10-30%，甲酸水的含量控制在70-90%，平衡色谱柱至基线水平，称取步骤a中所得富含石榴皮亭A的部位5-40 mg，溶于1 mL流动相中，进样至色谱柱进行低温分离，分别接取石榴皮亭A的第一个峰和第二个峰，接取包含有石榴皮亭A的组分，用旋转蒸发仪在温度30-50℃下浓缩干燥，加1 mL流动相溶解，待用；
c、调整高效液相色谱仪波长为254 nm和366 nm，流速控制在0.3-2.4 mL/min，柱温控制在7℃- -2℃，将乙腈和甲酸含量0.05-1.0%的甲酸水通过高效液相色谱仪泵混合作为流动相，其中乙腈的含量控制在10%-30%，甲酸水的含量控制在70%-90%，平衡色谱柱至基线水平，将步骤b中所得包含第一个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第二个峰，将步骤b中所得包含第二个峰的组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A的第一个峰，合并两次实验的组分，用旋转蒸发仪在温度30-50℃下浓缩干燥，加1 mL流动相溶解，待用；
d、将反相C18色谱柱连接在配有双通道紫外检测器的高效液相色谱仪上，调整高效液相色谱仪波长为254 nm和366 nm，将柱温控制在7℃- -2℃，流速控制在0.3 -4.7/min，将乙腈和甲酸含量为0.05-1.0%甲酸水通过高效液相色谱仪的溶剂泵混合作为流动相，其中乙腈含量控制在10-30%，平衡色谱柱至基线水平，将步骤c中所得组分，进样至色谱柱进行低温分离，接取石榴皮亭A组分，用旋转蒸发仪在温度30-50℃下浓缩至1 mL，真空冷冻干燥，得到高纯度石榴皮亭A淡黄色粉末，用高效液相色谱仪鉴定其纯度。
2.如权利要求1所述的一种高纯度石榴皮亭A的制备方法，其特征在于使用甲醇和甲酸水的混合物作为流动相中步骤b、步骤c和步骤d中的甲酸水中甲酸含量控制在0.1-0.3%。
3.如权利要求1所述的一种高纯度石榴皮亭A的制备方法，其特征在于使用甲醇和甲酸水的混合物作为流动相、使用甲醇-乙腈-甲酸水的混合物作为流动相或使用乙腈和甲酸水的混合物作为流动相中步骤b、步骤c和步骤d中浓缩温度控制在30-37℃。
4.如权利要求1所述的一种高纯度石榴皮亭A的制备方法，其特征在于，使用甲醇和甲酸水的混合物作为流动相或使用甲醇-乙腈-甲酸水的混合物作为流动相中的分离过程中步骤b中和步骤c中柱温控制在-15℃- -25℃，步骤d中柱温控制在2℃- -2℃，或使用乙腈和甲酸水的混合物作为流动相时的分离过程中步骤b中和步骤c中柱温控制在2℃- -2℃，步骤d中柱温控制在2℃- -2℃。
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