CN111533744B - 一种非病毒载体、制备方法及其应用 - Google Patents
一种非病毒载体、制备方法及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111533744B CN111533744B CN202010409248.9A CN202010409248A CN111533744B CN 111533744 B CN111533744 B CN 111533744B CN 202010409248 A CN202010409248 A CN 202010409248A CN 111533744 B CN111533744 B CN 111533744B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- viral vector
- formula
- vector
- gene
- compound
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 title claims abstract description 81
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 13
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 22
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 17
- -1 azido 1,5,9-triazacyclododecyl Chemical group 0.000 claims abstract description 15
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 13
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 9
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 8
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 claims abstract description 7
- 108700025694 p53 Genes Proteins 0.000 claims description 4
- 125000002347 octyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 17
- 239000013598 vector Substances 0.000 abstract description 15
- 238000001890 transfection Methods 0.000 abstract description 11
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 7
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 abstract description 6
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 abstract description 5
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 abstract description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 abstract description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 abstract description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 abstract description 2
- 238000011228 multimodal treatment Methods 0.000 abstract description 2
- 150000003242 quaternary ammonium salts Chemical class 0.000 abstract description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 68
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- ZKSVYBRJSMBDMV-UHFFFAOYSA-N 1,3-diphenyl-2-benzofuran Chemical compound C1=CC=CC=C1C1=C2C=CC=CC2=C(C=2C=CC=CC=2)O1 ZKSVYBRJSMBDMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 12
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 11
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 10
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 10
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 9
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 9
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 8
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 8
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 8
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- 230000008859 change Effects 0.000 description 6
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 6
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 6
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 6
- 229910021589 Copper(I) bromide Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000012097 Lipofectamine 2000 Substances 0.000 description 5
- 101150003085 Pdcl gene Proteins 0.000 description 5
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 5
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- CWMFRHBXRUITQE-UHFFFAOYSA-N trimethylsilylacetylene Chemical group C[Si](C)(C)C#C CWMFRHBXRUITQE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 4
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000006862 quantum yield reaction Methods 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- VMQMZMRVKUZKQL-UHFFFAOYSA-N Cu+ Chemical compound [Cu+] VMQMZMRVKUZKQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- SMWDFEZZVXVKRB-UHFFFAOYSA-N Quinoline Chemical compound N1=CC=CC2=CC=CC=C21 SMWDFEZZVXVKRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YTPLMLYBLZKORZ-UHFFFAOYSA-N Thiophene Chemical group C=1C=CSC=1 YTPLMLYBLZKORZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 2
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 238000012650 click reaction Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 2
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 description 2
- 230000004298 light response Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 description 2
- 230000036457 multidrug resistance Effects 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 238000002428 photodynamic therapy Methods 0.000 description 2
- 238000007626 photothermal therapy Methods 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- FYNROBRQIVCIQF-UHFFFAOYSA-N pyrrolo[3,2-b]pyrrole-5,6-dione Chemical class C1=CN=C2C(=O)C(=O)N=C21 FYNROBRQIVCIQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 2
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 2
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 2
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 2
- DYHSDKLCOJIUFX-UHFFFAOYSA-N tert-butoxycarbonyl anhydride Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)OC(=O)OC(C)(C)C DYHSDKLCOJIUFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001544 thienyl group Chemical group 0.000 description 2
- RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 3,7-bis(dimethylamino)phenothiazin-5-ium Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane Chemical compound C1CCCCC1 XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000738322 Homo sapiens Prothymosin alpha Proteins 0.000 description 1
- 102000014944 Lysosome-Associated Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010064171 Lysosome-Associated Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 1
- 102100033632 Tropomyosin alpha-1 chain Human genes 0.000 description 1
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- UCMLYSDKTFYOGD-UHFFFAOYSA-N acetylene;silicon Chemical group [Si].C#C UCMLYSDKTFYOGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical group 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000011712 cell development Effects 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 238000001218 confocal laser scanning microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- NKNDPYCGAZPOFS-UHFFFAOYSA-M copper(i) bromide Chemical compound Br[Cu] NKNDPYCGAZPOFS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- ZUOUZKKEUPVFJK-UHFFFAOYSA-N diphenyl Chemical group C1=CC=CC=C1C1=CC=CC=C1 ZUOUZKKEUPVFJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 230000009881 electrostatic interaction Effects 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 238000002189 fluorescence spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000002601 intratumoral effect Effects 0.000 description 1
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000003504 photosensitizing agent Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000967 suction filtration Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000005760 tumorsuppression Effects 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
- C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
- C07D487/04—Ortho-condensed systems
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明公开了一种非病毒载体，所述非病毒载体结构如式Ⅰ所示，所述式Ⅰ中，R1和R2均独立地选自下述任意一种：C6～C20的直链或支链烷基；R3和R4均独立地选自下述任意一种：叠氮基1,5,9‑三氮杂环十二烷基、葡萄糖、季铵盐。上述非病毒载体可在780nm的激光的照射下产生单线态氧，且产生热量使温度升至大约45℃；该载体可以在激光的刺激下，释放DNA，快速发生内含体逃逸，从而提高非病毒载体的转染率；同时，基于该非病毒载体运载基因的药物可实现基因、光动力学、光热的协同治疗，能够成功抑制了肿瘤的增长，因此该载体在癌症多模态治疗方面具有较大的应用潜力。
Description
技术领域
本发明属于基因疗法药物技术领域，具体涉及一种非病毒载体、制备方法及其应用。
背景技术
恶性肿瘤，是威胁人类健康与生命的重大疾病之一。针对恶性肿瘤，一些单一的疗法已在临床中使用或仍在初步临床研究中，包括化学疗法、放射疗法(Radiation Therapy，RT)、基因疗法(Gene Therapy,GT)、光热疗法(Photothermal Therapy,PTT)、光动力疗法(Photodynamic Therapy,PDT)、磁热疗法(Magnetic Heat Therapy,MHT)、免疫疗法(Immunotherapy)以及其他非主流疗法。然而，在许多实验程序中，单一治疗方法不能消除整个肿瘤，并且在预防癌症转移和复发方面无效。因此，科学家们希望通过利用协同疗法来实现更优异的治疗效果，克服多药耐药性(Multidrug Resistance，MDR)和癌细胞基因突变等缺点。
基因疗法是指将外源正常基因/药物通过载体导入靶细胞，以纠正或补偿缺陷和异常基因引起的疾病，以达到治疗目的，其成功的关键在于载体的高效和安全性。目前，应用于基因疗法的载体包括病毒载体和非病毒载体两大类。病毒载体可以高效率地进入特定的细胞类型，复制所携带DNA并表达自身蛋白产生新的病毒粒子，但病毒载体存在免疫原性(Immunogenicity)和病毒性重组(Viral Recombination)等安全性问题，此外还存在自身容量有限、制备滴度不高的缺陷。非病毒载体是利用非病毒载体材料的物化性质来介导基因的转移，其主要基于阳离子单元通过静电作用与阴离子核酸连接，与病毒载体相比，具有无传染性、不限制载体容量、材料来源广泛、化学结构可控以及可大量制备等优点。但是，由于细胞内部和外部的各种障碍，现有的非病毒载体的转染率低，目的基因只能实现瞬间表达，因此具有高转染效率的非病毒基因载体的研发仍然具有挑战性。
发明内容
本发明针对传统的非病毒载体转染率低的技术问题，提供一种非病毒载体、制备方法及其应用。
本发明提供的一种非病毒载体，所述非病毒载体结构如式Ⅰ所示：
所述式Ⅰ中，R1和R2均独立地选自下述任意一种：C6～C20的直链或支链烷基、C6～C20的直链或支链烯基、芳基；R3和R4均独立地选自下述任意一种：3-[3-(1,5,9-三氮杂环十二烷-1-基)丙基]-1,2,3-三氮杂环戊熳-4-基、葡萄糖、季铵盐。
在其中的一个实施例中，所述非病毒载体在激光刺激下产生单线态氧及光热。
在其中的一个实施例中，所述非病毒载体的结构如式Ⅱ所示：
所述式Ⅱ中，R1和R2均独立地选自下述任意一种：C6～C20的直链或支链烷基、C6～C20的直链或支链烯基、芳基。
在其中的一个实施例中，所述非病毒载体的结构如式Ⅲ所示：
所述式Ⅲ中，R1和R2均为辛烷基；R3和R4均为3-[3-(1,5,9-三氮杂环十二烷-1-基)丙基]-1,2,3-三氮杂环戊熳-4-基。
本发明还提供了一种如上所述的非病毒载体的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
第一步，将式Ⅳ所示化合物、CuI、PdCl2(PPh3)2、三甲基硅乙炔进行反应，得到式Ⅴ所示化合物；
第二步，在惰性气氛中，将式Ⅴ所示化合物、碳酸钾进行反应，得到式Ⅵ所示化合物；
第三步，将式Ⅵ所示化合物、式Ⅶ所示9-(3-叠氮丙基)-1,5,9-三氮杂环十二烷-1,5-二羧酸二叔丁酯、CuBr(PPh3)4进行反应，得到式Ⅷ所示化合物；
第四步，将式Ⅷ所示化合物、盐酸、乙酸乙酯进行反应，得到式Ⅰ所示化合物。
在其中的一个实施例中，所述3-[3-(1,5,9-三氮杂环十二烷-1-基)丙基]-1,2,3-三氮杂环戊熳-4-基具有Boc酸酐保护。
在其中的一个实施例中，所述第一步为在冰水浴中，将式Ⅳ所示化合物、CuI、PdCl2(PPh3)2、二氯甲烷、三乙胺混合20min～40min后，加入三甲基硅乙炔继续混合20min～40min后，转至室温条件下继续混合20min～40min后，于50℃～60条件下反应搅拌反应20.0h～28.0h，反应产物经柱层色谱分离纯化得到式Ⅴ所示化合物；
所述第二步为将式Ⅴ所示化合物溶解到含有二氯甲烷以及甲醇的混合溶剂中，与碳酸钾在室温条件下搅拌反应10.0h～14.0h，反应产物经柱层色谱分离纯化得到式Ⅵ所示化合物；
所述第三步为将式Ⅵ所示化合物、式Ⅶ所示9-(3-叠氮丙基)-1,5,9-三氮杂环十二烷-1,5-二羧酸二叔丁酯、CuBr(PPh3)4以及二氯甲烷混合，于40.0℃～60.0℃条件下回流反应20.0h～28.0h，反应产物经柱层色谱分离纯化得到式Ⅷ所示化合物；
所述第四步为将式Ⅷ所示化合物、盐酸、乙酸乙酯混合，于室温条件下搅拌反应1.0h～3.0h，反应产物经抽滤、洗涤得到式Ⅰ所示化合物。
本发明还提供了一种上述的非病毒载体的应用，其特征在于，所述非病毒载体用于运载药物或基因。
在其中的一个实施例中，所述非病毒载体用于运载p53基因。
本发明还提供了一种用于治疗癌症的药物所述用于治疗癌症的药物包括如上所述的非病毒载体以及所述非病毒载体运载的基因或药物。
上述非病毒载体可在780nm的激光的照射下产生单线态氧，且产生热量使温度升至大约45℃；该载体可以在激光的刺激下，释放DNA，快速发生内含体逃逸，从而提高非病毒载体的转染率；同时，基于该非病毒载体运载基因的药物可实现基因、光动力学、光热的协同治疗，能够成功抑制了肿瘤的增长，因此该载体在癌症多模态治疗方面具有较大的应用潜力。
进一步地，上述非病毒载体还可通过荧光共聚焦显微镜技术追踪该非病毒载体的基因递送和释放过程。
上述非病毒载体的制备方法中，以含噻吩基团的吡咯并吡咯二酮衍生物为初原料，通过铜(I)催化的“click”反应将带正电的3-[3-(1,5,9-三氮杂环十二烷-1-基)丙基]-1,2,3-三氮杂环戊熳-4-基引入到骨架中合成具有光响应的非病毒载体。从而使制备的非病毒载体不仅能够运载基因或药物，而且其含有的噻吩基团具有光学活性，可在780nm的激光的照射下产生单线态氧，且产生热量使温度升至大约45℃；该载体可以在激光的刺激下，释放DNA，快速发生内含体逃逸，从而提高非病毒载体的转染率；同时，基于该非病毒载体运载基因的药物可实现基因、光动力学、光热的协同治疗，能够成功抑制了肿瘤的增长。
附图说明
图1为本发明非病毒载体的制备方法流程示意图；
图2为1-2凝胶电泳实验的电泳结果照片；
图3为1-3单线态氧检测荧光强度曲线图；
图4为1-3单线态氧检测非病毒载体的单线态氧量子产率曲线图；
图5为1-4光热检测结果曲线图；
图6为1-5细胞毒性实验细胞存活率率柱形图；
图7为1-6基因递送变化照片；
图8为1-7在Hela中的绿色荧光蛋白表达共聚焦显影图；
图9为1-7在Hela中的绿色荧光蛋白表达柱形图；
图10为1-7在Hela中的荧光素酶的表达柱形图；
图11为1-8肿瘤抑制对比实验小鼠体重变化曲线图；
图12为1-8肿瘤抑制对比实验小鼠肿瘤体积变化曲线图；
图13为1-8肿瘤抑制对比实验小鼠肿瘤体积变化趋势照片。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施方式对本发明进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施方式仅仅用以解释本发明，但并不用于限定本发明。
为了清楚说明本发明非病毒载体制备方法各步骤化合物的结构变化，请参阅表1所示，对比了非病毒载体各步骤化合物的结构变化。
表1非病毒载体制备方法各步骤化合物结构式对比表
请参阅表1和附图1所示，为本发明一实施例的非病毒载体的制备方法包括以下步骤：
第一步，将式Ⅳ所示化合物、CuI、PdCl2(PPh3)2、三甲基硅乙炔进行反应，得到式Ⅴ所示化合物；
第二步，在惰性气氛中，将式Ⅴ所示化合物、碳酸钾进行反应，得到式Ⅵ所示化合物；
第三步，将式Ⅵ所示化合物、式Ⅶ所示9-(3-叠氮丙基)-1,5,9-三氮杂环十二烷-1,5-二羧酸二叔丁酯、溴化亚铜进行反应，得到式Ⅷ所示化合物；
第四步，将式Ⅷ所示化合物、盐酸、乙酸乙酯进行反应，得到式Ⅰ所示化合物。
其中，可选的，第一步为在冰水浴中，将式Ⅳ所示化合物、CuI、PdCl2(PPh3)2、二氯甲烷、三乙胺混合20min～40min后，加入三甲基硅乙炔继续混合20min～40min后，转至室温条件下继续混合20min～40min后，于50℃～60条件下反应搅拌反应20.0h～28.0h，反应产物经柱层色谱分离纯化得到式Ⅴ所示化合物。
第二步为将式Ⅴ所示化合物溶解到含有二氯甲烷以及甲醇的混合溶剂中，与碳酸钾在室温条件下搅拌反应10.0h～14.0h，反应产物经柱层色谱分离纯化得到式Ⅵ所示化合物。
第三步为将式Ⅵ所示化合物、式Ⅶ所示9-(3-叠氮丙基)-1,5,9-三氮杂环十二烷-1,5-二羧酸二叔丁酯、CuBr(PPh3)4以及二氯甲烷混合，于40.0℃～60.0℃条件下回流反应20.0h～28.0h，反应产物经柱层色谱分离纯化得到式Ⅷ所示化合物。
第四步为将式Ⅷ所示化合物、盐酸、乙酸乙酯混合，于室温条件下搅拌反应1.0h～3.0h，反应产物经抽滤、洗涤得到式Ⅰ所示化合物。
上述非病毒载体的制备方法中，以含噻吩基团的吡咯并吡咯二酮衍生物为初原料，通过铜(I)催化的“click”反应将带正电的3-[3-(1,5,9-三氮杂环十二烷-1-基)丙基]-1,2,3-三氮杂环戊熳-4-基引入到骨架中合成具有光响应的非病毒载体。从而使制备的非病毒载体不仅能够运载基因或药物，而且其含有的噻吩基团具有光学活性，可在780nm的激光的照射下产生单线态氧，且产生热量使温度升至大约45℃；该载体可以在激光的刺激下，释放DNA，快速发生内含体逃逸，从而提高非病毒载体的转染率；同时，基于该非病毒载体运载基因的药物可实现基因、光动力学、光热的协同治疗，能够成功抑制了肿瘤的增长。
进一步地，制备的非病毒载体还可通过荧光共聚焦显微镜技术追踪该非病毒载体的基因递送和释放过程。
实施例1
1-1、式Ⅱ所示非病毒载体的制备
第一步，式Ⅴ所示化合物的合成：冰水浴下，将式Ⅳ所示化合物(164.1mg,0.24mmol),CuI(4.04mg,5mol％),PdCl2(PPh3)2(14.9mg,5mol％)加入到100mL的双口瓶中，向双口瓶中注射进二氯甲烷(10mL)和三乙胺(10mL)，0℃条件下搅拌30min后，加入三甲基硅乙炔(TMSA,0.35mL,2.5mmol)继续在0℃条件下搅拌30min,转至室温条件下搅拌30min后，于55℃条件下继续搅拌反应24h。冷却至室温，蒸出溶剂后，柱层色谱分离(展开剂：PE/CH2Cl2＝3:1,v/v)，得300mg紫色固体，为式Ⅴ所示化合物。
第二步，式Ⅵ所示化合物的合成：N2保护下，将式Ⅴ所示化合物(300mg)的溶解到二氯甲烷(20mL)和甲醇(20mL)组成的混合溶液中，加入K2CO3(100.1mg,0.72mmol)，于室温条件下搅拌过夜，柱层色谱分离(展开剂：PE/CH2Cl2＝3:1,v/v)，得266.2mg紫色固体，为式Ⅵ所示化合物，其产率为50％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.86(d,J＝4.1Hz,2H),7.38(d,J＝4.1Hz,2H),4.12–3.94(m,4H),3.59(s,2H),1.25(s,24H),0.86(s,6H)。
第三步，式Ⅷ所示化合物的合成：
将式Ⅵ所示化合物(57mg,0.1mmol)，式Ⅶ所示化合物9-(3-叠氮丙基)-1,5,9-三氮杂环十二烷-1,5-二羧酸二叔丁酯(101mg,0.22mmol)，溶解在40mL DCM中，加入CuBr(PPh3)4(60mg,0.06mmol),于50℃回流搅拌24h，蒸出溶剂DCM,柱层色谱分离(展开剂：DCM/MeOH＝100/1,30/1,20/1,v/v)，得到油状物，少量乙醚溶解后，加入5mL环己烷，得到62mg紫色固体，为式Ⅷ所示化合物，其产率42％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.99(s,2H),7.84(s,2H),7.47(dd,J＝3.9,2.4Hz,2H),4.43(s,4H),4.12(t,J＝7.4Hz,4H),3.42–3.27(m,16H),2.45(s,10H),2.09(s,4H),1.80(dd,J＝33.9,6.5Hz,16H),1.44(s,36H),1.41(d,J＝0.8Hz,4H),1.24(s,18H),0.84(s,6H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ161.37,156.38,141.99,139.60,138.43,136.38,129.04,125.29,120.23,108.23,79.53,50.61,49.83,48.81,45.06,44.19,42.37,31.85,30.19,29.34,29.25,28.56,28.52,28.51,27.15,26.99,26.98,26.97,26.96,26.47,22.69,22.67,14.16.HRMS-ESI:m/zcalcd.[M+2H]2+for C78H126N14O10S2 2+,741.4611；found,741.4610。
第四步，式Ⅲ所示化合物非病毒载体的合成：
将式Ⅷ所示化合物(60mg)溶解于EA/HCl(5mL),于室温下搅拌反应2h，减压抽滤，得到40mg的紫色固体，为式Ⅲ所示化合物，记为化合物4-2，其产率91％。其表征如下：
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ9.00(d,J＝3.8Hz,2H),8.03(s,2H),7.48(s,2H),4.50(s,4H),4.11(d,J＝7.0Hz,4H),2.77(d,J＝38.8Hz,16H),2.54(d,J＝4.9Hz,10H),2.15(d,J＝6.9Hz,4H),1.64(s,20H),1.42(s,4H),1.24(s,18H),0.83(s,6H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ161.41,142.04,141.76,139.65,138.63,136.53,136.41,129.02,128.90,125.50,125.31,121.12,121.10,108.20,54.19,49.56,49.16,48.89,48.78,47.93,42.37,31.87,30.22,29.55,29.37,29.26,27.08,27.00,26.89,26.84,25.15,22.70,14.17.HRMS-ESI:m/zcalcd.[M+H]+for C58H93N14O2S2 +,1081.7047；found,1081.7036。
此外，本发明还采用同样的方法得到了式Ⅱ所示化合物的R1，R2均为6个碳和均12个碳的目标分子，分别记为化合物4-1和化合物4-3其表征分别如下：
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.99(s,2H),8.23(s,1H),7.54(s,2H),7.47(s,2H),4.50(s,4H),4.12(s,4H),2.95(s,8H),2.84(s,8H),2.59(d,J＝5.8Hz,8H),2.21(s,4H),1.89(s,2H),1.77(s,11H),1.57(s,8H),1.44(s,4H),1.31–1.28(m,10H),0.87(s,6H).13C NMR(125MHz,CDCl3)δ161.32,141.84,139.56,138.54,136.42,128.86,125.24,120.64,108.11,53.80,49.65,49.32,48.85,47.62,42.31,31.48,30.09,29.70,26.60,26.07,22.56,14.06.HRMS-ESI:m/z calcd.[M+H]+for C54H85N14O2S2 +,1025.6421；found,1025.6429。
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ9.01(s,2H),8.01(s,2H),7.47(s,2H),4.50(s,4H),4.14(s,4H),2.79(s,8H),2.73(s,8H),2.54(s,8H),2.46(s,4H),2.16(s,4H),2.00(d,J＝5.9Hz,2H),1.77(s,4H),1.63(s,12H),1.43(s,4H),1.33(s,6H),1.23(s,28H),0.84(s,6H).13C NMR(151MHz,CDCl3)δ161.44,141.96,139.68,138.61,136.48,129.99,129.96,128.97,125.34,120.69,108.25,53.91,49.50,48.90,47.81,42.40,31.98,30.24,29.85,29.76,29.68,29.62,29.41,27.30,27.03,26.07,22.75,14.18.HRMS-ESI:m/z calcd.[M+H]+for C66H108N14O2S2 +,1193.8299；found,1193.8298。
1-2、凝胶电泳实验
采用琼脂糖凝胶电泳法检测式Ⅱ所示化合物的非病毒载体下对质粒DNA(pUC-18)的凝集能力，将不同浓度的式Ⅱ所示化合物(5,10,20,30,40,50μM)与10μg/mL pUC-18混合后，在37℃水浴下孵育30min，在1×TAE电泳缓冲液中电压150V，电流80mA，电泳30min。然后在Vilber Lourmat显像系统的紫外灯下照射，请参阅附图2所示，当式Ⅱ所示化合物R1、R2为辛烷基(化合物4-2)和12烷基(化合物4-3)时在30μM完全凝聚DNA，当式Ⅱ所示化合物R1、R2为己烷基(化合物4-1)时在40μM完全凝聚DNA，说明随着烷基链的延长对载体对DNA的凝聚能力增强。
1-3、单线态氧检测实验
1,3-联苯基异香豆酮(1,3-Diphenylisobenzofuran，DPBF)是一种检测单线态氧的荧光探针，它在428nm的光激发下，在479nm处产生蓝色荧光，DPBF会和1O2反应生成其氧化物，从而破坏了DPBF的共轭结构，所以，通过研究DPBF吸收光谱或荧光光谱的变化证明单线态氧的产生。将浓度为1×10-5mol/L DPBF与载体按浓度为1:1混合，用780nm的激光照射一定时间后测试其吸收光谱，观察DPBF在410nm处的吸光度变化。请参与图3所示，光敏分子存在时，在激光的照射下，DPBF 400nm处吸收峰随着照射时间的延长逐渐减弱，说明载体可以产生单线态氧。
利用DPBF为检测标准，测定分子产生单线态氧的量子产率，利用亚甲基蓝作为参比，将DPBF分别与参比和待测物混合后，测试DPEF在479nm处的荧光发射强度变化，按以下公式计算单线态氧的量子产率。
K＝(-Δ[DPBF])/t＝(Io-It)/t＝I_inΦ_abΦ_ΔΦ_r (1)
其中Φab为光敏剂的吸光效率，Φr为DPBF的反应效率，ΦΔ为待测化合物的反应效率，Iin，Io，It为入射单色光强度，所以，K/Ks＝Φ/Φs，其中K,Ks为式Ⅱ所示非病毒载体与参比的斜率。请参阅图4所示，经过计算可知化合物4-1、4-2以及4-4的单线态氧量子产率分别为0.37,0.38,0.43。
1-4、光热检测实验
请参阅附图5所示，利用红外热成像仪观察浓度为40mg/mL的式Ⅱ所示非病毒载体，在780nm功率以1W/cm2的激光照射不同时间的温度变化。结果表明随着照射时间的延长，激光功率的增大，随着载体烷基链的增长，温度逐渐升高，温度可以达到45℃。
1-5、细胞毒性实验
在开始细胞试验之前，我们首先研究了式Ⅱ所示非病毒载体的细胞毒性，由于式Ⅱ所示非病毒载体为光敏分子，低暗细胞毒性和高光细胞毒性是光敏分子在光动力学治疗中的应用的关键。首先，我们测试式Ⅱ所示非病毒载体在避光下的细胞毒性，如图6所示，在浓度为0–50μM范围内，24h后细胞得存活率均在80％以上，说明载体的生物相容性较好。
1-6、基因递送实验
利用激光共聚焦显微镜技术，将式Ⅱ所示非病毒载体与FITC标记的DNA混合，与细胞共孵育，追踪载体1/DNA在激光照射下，DNA进入细胞的情况。
请参阅图7所示，首先，我们用式Ⅱ所示非病毒载体与FITC标记的DNA形成的复合物与Hela细胞孵育4h后，与溶酶体的商业染料Lyso Tracker Blue共定位，观察到复合物目前进入到溶酶体中；在激光照射2min后，式Ⅱ所示非病毒载体与溶酶体重合说明载体携带绿色荧光标记的核酸进入溶酶体，绿色的荧光点说明部分DNA在溶酶体释放，并进入细胞核；激光照射5min后，大量的DNA进入到细胞核中；在细胞培养液中加入1mM的Vc，DNA没有进入细胞核，说明单线态氧被Vc消耗掉后，其作用也被消除。外加喹啉后，不同实验组刺激后的细胞显影图。结果表明在激光的照射下溶酶体膜被破坏后，溶酶体被破坏，DNA能够更好地释放，从而进入细胞核中，该实验说明单线态可以促进核酸的释放。
1-7、基因表达实验
请参阅图8所示，其中A1-A5,B1-B5,C1-C5:4-1,4-2,4-3在Hela中的绿色荧光蛋白表达共聚焦显影图,浓度依次为10μM,20μM,30μM,40μM,50μM；D1:Lipofectamine 2000(10μM)在Hela中的绿色荧光蛋白表达共聚焦显影图；[DNA]＝10μg/mL。请参阅图9所示，为化合物4-1,4-2,4-3,Lipofectamine2000在Hela中的绿色荧光蛋白表达的具体数值。请参阅图10所示，为浓度为10-50μM的4-1,4-2,4-3,10μM的Lipofectamine 2000在Hela中的荧光素酶的表达情况[pGL-3DNA]＝10μg/mL。
选用绿色荧光蛋白和荧光素酶报告基因来研究三个复合物在Hela细胞中的转染效率。通过激光共聚焦试验测试了三个化合物浓度从10到50μM的三个化合物对绿色荧光蛋白基因的表达情况。在不避光的条件下，化合物在8h后完成了绿色荧光蛋白的表达，随着化合物浓度的增加，绿色荧光蛋白的表达先增大后降低。最佳的转染浓度均为20μM，转染效率均高于Lipofectamine 2000。化合物对荧光素酶的表达实验结果表明化合物4-2在浓度20μM，转染效率高于Lipofectamine 2000。
1-8、肿瘤抑制实验
通过构建小鼠肿瘤模型，待荷瘤鼠的肿瘤体积长到50mm3，分别通过瘤内注射的方式注射50μL PBS(第一组),式Ⅲ所示非病毒载体(第二组),式Ⅲ所示非病毒载体/p53(第三组)，式Ⅲ所示非病毒载体/p53(第四组)，其中第二组、第四组需要在注射2h后激光照射10min，每隔一天注射一次，持续15天。在整个治疗周期里，注射前称量小鼠的体重，并测量小鼠肿瘤的体积，肿瘤体积的测量公式为：瘤块长直径*瘤块短直径2/2。
实验结果如图11-13所示：式Ⅲ所示非病毒载体加激光照射组(第二组)，式Ⅲ所示非病毒载体/p53组(第三组)，式Ⅲ所示非病毒载体/p53加激光照射组(第四组)与PBS对照组(第一组)相比，均可以明显抑制肿瘤的生长，其中，式Ⅲ所示非病毒载体/p53加激光照射组小鼠体内的肿瘤抑制效果最佳，是因为基因、光动力、光热联合协同治疗的效果。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。
Claims (7)
1.一种非病毒载体，其特征在于，所述非病毒载体结构如式Ⅰ所示：
所述式Ⅰ中，R1和R2均独立地选自下述任意一种：C6～C20的直链或支链烷基；R3和R4均独立地选自3-[3-(1,5,9-三氮杂环十二烷-1-基)丙基]-1,2,3-三氮杂环戊熳-4-基。
2.根据权利要求1所述的非病毒载体，其特征在于，所述非病毒载体在激光刺激下产生单线态氧及光热。
3.根据权利要求2所述的非病毒载体，其特征在于，所述非病毒载体的结构如式Ⅱ所示：
所述式Ⅱ中，R1和R2均独立地选自下述任意一种：C6～C20的直链或支链烷基。
4.根据权利要求2所述的非病毒载体，其特征在于，所述非病毒载体的结构如式Ⅲ所示：
所述式Ⅲ中，R1和R2均为辛烷基；R3和R4均为3-[3-(1,5,9-三氮杂环十二烷-1-基)丙基]-1,2,3-三氮杂环戊熳-4-基。
5.一种如权利要求1至4任意一项所述的非病毒载体的非治疗目的应用，其特征在于，所述非病毒载体用于运载p53基因。
6.一种用于制备治疗肿瘤药物的用途，其特征在于，应用如权利要求1至4任意一项所述的非病毒载体以及所述非病毒载体运载的p53基因。
7.一种用于制备治疗肿瘤药物的用途，其特征在于，应用如权利要求1至4任意一项所述的非病毒载体以及所述非病毒载体运载的p53基因加激光照射。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010409248.9A CN111533744B (zh) | 2020-05-14 | 2020-05-14 | 一种非病毒载体、制备方法及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010409248.9A CN111533744B (zh) | 2020-05-14 | 2020-05-14 | 一种非病毒载体、制备方法及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111533744A CN111533744A (zh) | 2020-08-14 |
| CN111533744B true CN111533744B (zh) | 2022-10-04 |
Family
ID=71973883
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010409248.9A Expired - Fee Related CN111533744B (zh) | 2020-05-14 | 2020-05-14 | 一种非病毒载体、制备方法及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111533744B (zh) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001139552A (ja) * | 1999-11-11 | 2001-05-22 | Kankyo Meneki Gijutsu Kenkyusho:Kk | アセタミプリドのハプテン化合物、抗体及び測定方法 |
| CN109061169A (zh) * | 2018-09-21 | 2018-12-21 | 中国烟草总公司郑州烟草研究院 | 一种检测啶虫脒的酶联免疫试剂盒及其应用 |
| CN109111394A (zh) * | 2018-09-21 | 2019-01-01 | 中国烟草总公司郑州烟草研究院 | 一种啶虫脒半抗原与抗原的制备方法及应用 |
| CN110045114A (zh) * | 2018-01-17 | 2019-07-23 | 贵州勤邦食品安全科学技术有限公司 | 一种啶虫脒半抗原、抗原及其胶体金检测试纸条 |
-
2020
- 2020-05-14 CN CN202010409248.9A patent/CN111533744B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001139552A (ja) * | 1999-11-11 | 2001-05-22 | Kankyo Meneki Gijutsu Kenkyusho:Kk | アセタミプリドのハプテン化合物、抗体及び測定方法 |
| CN110045114A (zh) * | 2018-01-17 | 2019-07-23 | 贵州勤邦食品安全科学技术有限公司 | 一种啶虫脒半抗原、抗原及其胶体金检测试纸条 |
| CN109061169A (zh) * | 2018-09-21 | 2018-12-21 | 中国烟草总公司郑州烟草研究院 | 一种检测啶虫脒的酶联免疫试剂盒及其应用 |
| CN109111394A (zh) * | 2018-09-21 | 2019-01-01 | 中国烟草总公司郑州烟草研究院 | 一种啶虫脒半抗原与抗原的制备方法及应用 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| Bromo-Substituted Diketopyrrolopyrrole Derivative with Specific Targeting and High Efficiency for Photodynamic Therapy;Yu Cai等;《ACS Appl. Mater. Interfaces》;20160411;第8卷;107371-10742 * |
| Diketopyrrolopyrrole−Triphenylamine Organic Nanoparticles as Multifunctional Reagents for Photoacoustic Imaging-Guided Photodynamic/Photothermal Synergistic Tumor Therapy;Yu Cai等;《ACS Nano》;20161129;第11卷(第1期);1054-1063 * |
| Multifunctional supramolecular vesicles for combined photothermal/photodynamic/hypoxia-activated chemotherapy;Qi Wang等;《Chem.Comm.》;20180809;第54卷;10328-10331 * |
| Rapid release from near-infrared polymer loaded liposomes for photothermal and chemo-combined therapy†;Dehua Li等;《New J. Chem.》;20190115;第43卷;2274-2277 * |
| Small-molecule diketopyrrolopyrrole-based therapeutic nanoparticles for photoacoustic imaging-guided photothermal therapy;Yu Cai等;《Nano Research》;20161231;第10卷(第3期);794-801 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN111533744A (zh) | 2020-08-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Qi et al. | Simultaneously boosting the conjugation, brightness and solubility of organic fluorophores by using AIEgens | |
| Kirakci et al. | A water-soluble octahedral molybdenum cluster complex as a potential agent for X-ray induced photodynamic therapy | |
| Jiang et al. | A mitochondrion-targeting two-photon photosensitizer with aggregation-induced emission characteristics for hypoxia-tolerant photodynamic therapy | |
| CN109096170A (zh) | 近红外染料、其靶向成像剂、纳米载体和抗癌药物及应用 | |
| CN109796483B (zh) | 一种水溶性阳离子型光敏剂及其制备和应用 | |
| Bhattacharyya et al. | BODIPY-attached zinc (II) complexes of curcumin drug for visible light assisted photo-sensitization, cellular imaging and targeted PDT | |
| CN108440586A (zh) | 香豆素修饰的氟硼二吡咯衍生物及其制备和应用 | |
| CN109503455A (zh) | 一种以四苯乙烯吲哚衍生物为光敏剂的纳米复合材料及制备方法和在肿瘤治疗方面的应用 | |
| WO2023001317A1 (zh) | 基于切伦科夫效应的酸响应纳米胶束及其制备方法和应用 | |
| CN109575061A (zh) | 一种水溶性的抗癌光敏剂及其制备和应用 | |
| Wang et al. | A red-light-activated sulfonamide porphycene for highly efficient photodynamic therapy against hypoxic tumor | |
| CN111848658A (zh) | 一种靶向线粒体的氟硼二吡咯类化合物及其脂质体包裹纳米粒子的制备方法和用途 | |
| CN114853810A (zh) | 一种姜黄素衍生物及其制备方法和应用 | |
| Wang et al. | A targeted phototheranostic agent with strong AIE effect and boosted type I ROS generation | |
| CN105153412B (zh) | 一种多肽嵌段聚合物及其制备方法、用途 | |
| CN111533744B (zh) | 一种非病毒载体、制备方法及其应用 | |
| Zheng et al. | Recent advances in nanotechnology mediated mitochondria-targeted imaging | |
| WO2019210786A1 (zh) | 噁嗪类化合物及其应用 | |
| Zhou et al. | A tailored and red-emissive type I photosensitizer to potentiate photodynamic immunotherapy | |
| Wang et al. | Rational design of a dual organelle-targeted photosensitizer with dual-color emission for photodynamic therapy and cell death self-reporting | |
| CN112028871B (zh) | 一种溶酶体靶向光敏剂及合成方法和在生物成像上的应用 | |
| CN115109081A (zh) | 一种辣椒素衍生化光敏剂及其制备方法与应用 | |
| CN112521373B (zh) | 一种多模态探针及其制备方法和应用 | |
| Yang et al. | Controlled aggregation of a perylene-derived probe for near-infrared fluorescence imaging and phototherapy | |
| Wang et al. | A unique self-reporting photosensitizer enabling simultaneous photodynamic therapy and real-time monitoring of phototheranostic process in a dynamic dual-color mode |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20221004 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |