CN111511766A - 修饰的抗SIRPa抗体及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了与免疫治疗剂连接的新型修饰的抗SIRPa抗体及其用途，该抗SIRPa抗体具有双功能并且能够特异性增强免疫应答。
Description
本发明涉及免疫疗法领域。本发明提供了与免疫治疗剂连接的新型修饰的抗SIRPa抗体及其用途，该修饰的抗SIRPa抗体具有双功能并且能够特异性增强免疫应答。
针对适应性免疫的免疫检查点已经在对抗多种疾病(尤其是癌症)中显示出巨大治疗效果，但是该治疗效果只在有限比例的患者中。对先天性骨髓细胞(巨噬细胞、树突细胞、MDSC、PMN)的免疫检查点的研究仍然不足，而这些细胞代表许多实体瘤中最丰富的免疫细胞类型并且通常与不良结果相关联。结合针对先天性(由骨髓细胞介导)和适应性(由T细胞介导)免疫应答的免疫检查点疗法，在临床前模型中已显示出巨大功效，但在临床上仍然是一个挑战。
本发明公开了具有独特结构的双功能抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，当免疫治疗剂被接枝(graft)到抗SIRPa抗体或其抗原结合片段的重链上而不是抗SIRPa抗体的轻链上时，该双功能抗SIRPa抗体或其抗原结合片段显示出增强的功效。
在本文中，发明人提供了修饰的抗SIRPa抗体，特别是人源化抗体，其i)拮抗SIRPa-CD47相互作用(以缓解对骨髓细胞的阻碍)，但不特异性结合SIRPg(不影响有效T细胞活化和粘附所需的SIRPg-CD47相互作用)，并且同时，ii)能够通过抑制PD1/PDL1或CTLA-4/CD80或CD80/PDL1轴以及将4-1BB/4-1BBL或CD80/CD28信号电位化，来诱导T细胞活化和/或增殖(从而诱导有效的适应性免疫应答，特别是抗肿瘤应答和/或诱导长寿命记忆T细胞)。
与其他抗体或分别提供的抗体之组合相比，本发明的化合物对骨髓细胞以及T细胞活化和/或增殖的作用增强。
特定的结构赋予该分子对其靶标的意想不到的功效，并在提高临床疗效和降低治疗成本上显示出令人感兴趣的潜力。
信号调节蛋白α或SIRPa(也称为SIRPα、CD172a或SHPS-1)在单核细胞、大多数组织巨噬细胞亚群、粒细胞、淋巴组织中的树突细胞亚群、一些骨髓祖细胞和神经元上不同水平表达，在脑的富含突触的区域中具有显著的高表达。由骨髓细胞表达的SIRPa与普遍存在的受体CD47(以较低的水平在大多数健康细胞中广泛表达，但在某些癌细胞中也过表达)的相互作用是先天反应的重要免疫检查点，涉及骨髓功能的调节。
CD47与SIRPa相互作用，并导致“别吃我”的信号传递给吞噬巨噬细胞，于是使靶细胞不受影响。如今，对SIRPa/CD47通路进行了不同的药物开发以增强巨噬细胞吞噬作用。通过增强巨噬细胞的抗体依赖性吞噬作用，经由靶向CD47的试剂阻断CD47/SIRPa通路已被描述为与耗尽治疗性抗癌抗体如曲妥珠单抗(抗Her2)、西妥昔单抗(抗EGFR)、利妥昔单抗(抗CD20)和阿仑单抗(抗CD52)协同作用。
然而，最近显示，靶向CD47的试剂(抗CD47或SIRPa-Fc)呈现与CD47生理作用相关的血液学毒性(贫血或血小板减少症)。
此外，CD47也与SIRP家族的另一成员SIRP-γ(也称为SIRPg、SIRPγ、CD172g或SIRPβ2)结合，SIRP-γ存在于人T细胞表面上而不在人骨髓细胞上。SIRPg是近3500万年前古代世界灵长类动物中的SIRPb基因复制的结果，其在T淋巴细胞上以限制性方式表达，与骨髓细胞上的SIRPa表达相反。小鼠中不存在SIRPg。已经表明，SIRPg-CD47相互作用介导细胞-细胞粘附、增强超抗原依赖性T细胞介导的增殖，以及共刺激T细胞活化(Piccio等，Blood，105：6，2005)。
由于SIRPa和SIRPg之间(特别是在与CD47相互作用的区域)的序列高度相似性，现有技术中公开的抗SIRPa抗体也结合SIRPg并在人体中具有不良作用，例如抑制T细胞增殖和降低免疫应答。由于已知抗体的测试是在不具有SIRPg基因因而不存在这样的副作用的小鼠模型中进行的，因此无法预测抗CD47或非选择性抗SIRPa抗体的这种副作用。
免疫细胞的活化受平衡共刺激信号和共抑制信号的整合控制。T细胞受体(TCR)介导的T细胞活化受共刺激信号和共抑制信号这两者的调节。不依赖抗原的第二信号修饰第一信号，该信号是由抗原肽-MHC复合物与TCR的相互作用所提供的，从而赋予了反应特异性。T细胞的共刺激和共抑制通路具有广泛的免疫调节功能，可控制效应子、记忆T细胞和调节性T细胞以及幼稚T细胞。这些通路的治疗性调节正转化为治疗癌症的有效新策略(综述参见Schildberg等，44(5)，Immunity，2016)。该第二信号由两类分子介导：Ig超家族(例如LAG3、CD226-TIGIT-CD96)和TNF-TNF受体超家族。T细胞活化是通过TCR识别抗原(第一信号)开始的，然后是主要由T细胞表达的CD28共刺激分子介导的共刺激信号(第二信号)，该CD28共刺激分子与抗原呈递细胞表达的CD80和CD86分子接合。
这两个信号诱导T细胞活化，同时诱导诱导性共刺激分子和共抑制分子的表达，这将确定已经经历过抗原的淋巴细胞和/或记忆T淋巴细胞的活化阈值。OX40与OX40-配体(OX40L)的相互作用，ICOS与ICOS配体(ICOSL)的相互作用以及4-1BB与4-1BB配体(4-1BBL)的结合是诱导性共刺激分子的主要来源。同时，可诱导的CTLA-4与CD80和CD86的结合(相同的配体为CD28)和可诱导的PD-1与PD-L1或PD-L2的结合是免疫细胞抑制作用(以抵消过多的活化)的主要来源。由于迄今为止，在人类中已经描述了CD80与PDL-1之间的相互作用以及ICOSL与CD28或CTLA-4之间的相互作用，因此该通路之间的互联使给定分子的解释变得复杂。
PD1仅在活化的T细胞上表达，PDL1可以在许多细胞类型(包括免疫系统、上皮细胞和内皮细胞)上表达。PD1具有两个配体：PDL1和PDL2，对PDL2具有更好的亲和力。PD1具有在人PBMC上表达的四个剪接变体。许多这样的剪接变体的功能仍不清楚，但是缺少跨膜部分的可溶性变体参与自身免疫性疾病，并在炎性疾病中被检测到(Nielsen等，Cell Immunol，2005，235：109-116；Ueda等，Nature，2003 423：506-511；Wan等人，J.Immunol，2006，177：8844-8850)。在疫苗载体中包含可溶性PD1可能会通过结合其配体并抑制PD1信号活化来提高疫苗效力。PD1连接减少了TCR刺激T细胞下游的信号，抑制T细胞应答并导致活化和细胞因子产生的减少。使用抗PD1或抗PDL1破坏相互作用的这两种策略在癌症治疗中都是成功的(Brahmer等，N Eng J Med，366(26)，2012；Powles等，Nature，515(7528)，2014；Topalian等，N Eng J Med，366(26)，2012；Ansell，Curr Opin Hematol，22(4)，2015)。
PDL1比另一种PD1配体即PDL2更广泛地表达。PDL1被多种造血细胞和非造血细胞表达。它在组织中的表达能够局部调节T细胞应答。促炎性刺激诱导PDL1表达，从而在下游调节组织中的T细胞应答，保护组织免受免疫介导的免疫攻击的肿瘤损害。导致慢性感染的肿瘤和微生物已利用共抑制通路逃避免疫防御。
正在进行的有关免疫应答调节的研究已导致鉴定了多种其他可能是癌症治疗发展目标的免疫通路。这些分子在本文中称为免疫检查点共激活剂或共抑制剂，例如CTLA4，CD28、CD80、CD86、OX40、OX40L和4-1BB、4-1BBL(参见综述Sharma等，Cell，161(2)，2015和Pardoll，Nature Reviews Cancer，12(4)，2012)。
CD80(B7-1)和CD86(B7-2)在T细胞上的作用也可能有助于免疫应答的下调。尽管抗原呈递细胞(APC)上的CD80和CD86具有公认的T细胞共刺激分子的作用，但CD80和CD86在T细胞上表达的功能意义尚不清楚。CD86在一些静息T细胞上组成性表达，而CD80在静息T细胞上不存在。两种分子均可在T细胞上被上调。肿瘤不表达B7分子，可以逃避免疫系统的调节。CD80和CD86以比CD28更好的亲和力与CTLA4结合，最终通过竞争和负信号减弱或阻止CD28共刺激。由于CD28共刺激对于T细胞活化至关重要，因此通过阻断CD28/CD80/CD86进行免疫调节是一种有前途的方法，可以防止在移植过程中不适当地的T细胞活化，还可以潜在地治疗T细胞介导的自身免疫性疾病。(Crepeau等，Expert Opin Biol Ther，2017，17(8)：1001-1012)。
ICOSL、OX40L和4-1BBL分别是共刺激分子ICOS，OX40和4-1BB的配体，这些新的免疫检查点正在临床前肿瘤模型和/或癌症患者的临床中进行评估。ICOSL是T细胞增殖和细胞因子分泌的共刺激信号，它诱导B细胞增殖和分化为浆细胞，并可能在介导局部组织对炎性疾病的应答以及通过共刺激记忆性T细胞功能来调节继发性免疫应答中发挥重要作用。OX40与其配体OX40L的结合在抗原特异性T细胞扩增和存活中起重要作用。OX40L在抗原激活后早期主要在T淋巴细胞上表达，而OX40L在急性炎症环境中的活化抗原呈递细胞和内皮细胞上表达。调节OX40信号和/或消除不同的T细胞亚群有可能同时介导自身免疫的免疫抑制和抗癌治疗的免疫刺激(Willoughby等，Mol.Immunol，2017年3月，83：13-22)。
OX40L和4-1BBL是TNF配体超家族的成员，并且是未知可溶形式的膜配体。4-1BBL在骨髓细胞、淋巴细胞和基质细胞上表达，并与4-1BB(CD137)结合，4-1BB(CD137)是TNF受体家族的成员。靶向4-1BB或4-1BBL在许多临床疾病(例如自身免疫性疾病或病毒感染，以及包括癌症)中具有重要意义(Wang等，Immunol.Rev.，2009：229(1)：192-215)(综述参见Vinay等，Expert Opin Ther Targets，2016；20(3)：361-73)。4-1BB介导的抗癌作用是基于其诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活化以及大量IFN-γ的能力。4-1BB受体在许多细胞(包括Foxp3+ Treg细胞和树突状细胞)上组成性表达，尽管水平很低。在活化后，CD4+和CD8+ T细胞以相当的水平表达4-1BB，无论是在体内还是体外，通过4-1BB传递的信号都更偏向于CD8+ T细胞。
发明内容
肿瘤微环境中免疫抑制和低刺激性骨髓细胞的积累限制了T细胞应答的效率和免疫疗法的功效，特别是针对免疫检查点如CTLA-4或PD-1/PD-L1的那些。然而，与此同时，由于T细胞应答主要由于肿瘤微环境中缺乏共刺激和/或共抑制分子与肿瘤细胞或抗原呈递细胞表达的配体的结合而保持被阻断，故针对先天免疫检查点的免疫疗法仅显示出有限的功效。针对适应性细胞(T细胞)和先天性细胞(骨髓细胞)这两者的免疫检查点的联合免疫疗法已证明在临床前水平上具有有效的功效。然而，联合免疫疗法的验证和发展受到生物疗法的成本和获得此类免疫疗法的有限途径的强烈限制。因此，本领域仍然需要用于安全免疫疗法的新的和改进的试剂(特别是针对癌症)，其靶向先天性骨髓免疫细胞，对适应性免疫应答，特别是T细胞免疫应答具有有效的积极影响。本发明人藉由本文公开的发明而向前迈出了重要的一步。
在此，发明人提供修饰的抗SIRPa抗体，特别是人源化抗体，其i)拮抗SIRPa-CD47相互作用(以缓解对骨髓细胞的阻碍)但不特异性结合SIRPg(不影响有效T细胞活化和粘附所需的SIRPg-CD47相互作用)，并且同时，ii)能够通过抑制PD1/PDL1或CTLA-4/CD80或CD80/PDL1轴以及将4-1BB/4-1BBL或CD80/CD28信号电位化，来诱导T细胞活化和/或增殖(从而诱导有效的适应性免疫应答，特别是抗肿瘤应答和/或诱导长寿命记忆T细胞)。
本发明的修饰的抗体是双功能的，因为它们结合了特异性的抗SIRPa作用和接枝到抗体上的免疫治疗剂的作用。
尤其是，它们具有以下优点：
-它们激活先天性和适应性免疫应答，对检查点抑制剂和共刺激剂产生协同作用；
-由于SIRPa表达受限(不与人红细胞(RBC)和血小板结合)，它们避免了血液学毒性，这与CD47靶向剂(抗CD47mAb或SIRPa-fc重组蛋白)相反；
-它们在单一疗法中减少肿瘤生长并改变肿瘤微环境；它们通过改变免疫微环境并消除免疫抑制来刺激适应性免疫应答，从而在癌症、疫苗策略、感染性疾病或创伤后中产生持久而强大的记忆T细胞应答；
-它们诱发持久的和强大的抗肿瘤记忆T淋巴细胞应答；
-它们促进人类T细胞免疫应答，是SIRPa-CD47相互作用的选择性拮抗剂，而不干扰CD47/SIRPg的相互作用。
出乎意料的是，尽管SIRPa和SIRPg序列之间具有高度序列同一性，并且尽管接枝到抗体的某些免疫治疗剂可能失去其功能特性，发明人提供了这种选择性和功能性抗体。
这些修饰的抗体特别适用于许多治疗应用，特别是用于治疗癌症，包括炎性癌症和具有浸润性骨髓细胞(特别是具有浸润性MDSC和/或TAM细胞)的癌症。
修饰的SIRPa抗体(具有表位)
一方面，本发明涉及一种修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其特异性结合至少一种肽，该肽包含选自下组的氨基酸序列或由选自下组的氨基酸序列组成：SIRPa中的SEQ ID NO：1(SLIPVGP)、SEQ ID NO：2(G/ARELIYNQKEGH)、SEQ ID NO：3(KFRKGSPD[DV]/[T]E)、SEQ ID NO：4(QHTVSFTCESHGFSPRDITLKWF)、SEQ ID NO：5(ICEVAHVTLQG)和SEQ ID NO：6(YPQRLQLTWLE)，所述修饰的抗SIRPa抗体或抗原结合片段包含免疫治疗剂，特别是与免疫治疗剂连接。
本发明的修饰的抗SIRPa抗体对应于专利申请PCT/EP/2017/059071中描述的抗SIRPa抗体，其与免疫治疗剂连接。
由于多种原因，本发明的修饰的抗体的功能特性是出乎意料的。特别地，在本申请中显示，接枝至抗体的免疫治疗剂尽管仍然能够结合其配体，却可能失去其功能特性。同样，结合相同配体的两种免疫治疗剂在接枝到抗体上时的效率可能有所不同(请参见示例中的CD80和CD86)。出乎意料的是，本申请通过将抗SIRPa和免疫治疗剂组合成一种本发明的双功能抗体(特别是关于实施例中的PBMC分泌TNFa)显示出协同作用。
除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与相关领域技术人员通常理解的含义相同的含义。
为方便起见，提供了说明书、实施例和权利要求中使用的某些术语和短语的含义。
如本文所用，术语“抗体”是指任何类型的抗体，例如单克隆抗体、多克隆抗体、重组抗体、嵌合抗体和人源化抗体。
本发明的抗体包括单克隆抗体和多克隆抗体。如本文所用，“单克隆抗体”意指具有共同的重链氨基酸序列和共同的轻链氨基酸序列的抗体分子、抗体的制剂，这与含有不同氨基酸序列的抗体混合物的“多克隆”抗体制剂相反。单克隆抗体可以通过几种已知技术(例如噬菌体、细菌、酵母或核糖体展示(display))产生，，以及通过由杂交瘤衍生的抗体举例说明的经典方法产生。因此，术语“单克隆”指衍生自一个核酸克隆的所有抗体。
本发明的抗体包括重组抗体。如本文所用，术语“重组抗体”是指通过重组方法制造、表达、产生或分离的抗体，例如用转染至宿主细胞的重组表达载体表达的抗体；从重组组合抗体文库中分离的抗体；从动物(例如小鼠)中分离的抗体，其因人免疫球蛋白基因而是转基因的；或以任何其他方式制造、表达、产生或分离的抗体，其中特定免疫球蛋白基因序列(例如人免疫球蛋白基因序列)与其他DNA序列组装。重组抗体包括，例如嵌合抗体和人源化抗体。
本发明的抗体包括嵌合抗体。如本文所用，“嵌合抗体”是指这样的抗体，其中来自哺乳动物物种(例如小鼠)的种系的可变结构域的序列被移植到来源于另一种哺乳动物物种(例如人)的种系的恒定结构域的序列上。
本发明的抗体包括人源化抗体。如本文所用，“人源化抗体”是指这样的抗体，其中衍生自另一种哺乳动物物种(例如小鼠)的种系的CDR序列被移植到人框架序列上。
如本文所用，“抗体的抗原结合片段”是指抗体的一部分，即，对应于本发明抗体结构的一部分的分子，其可能以自然状态表现出对SIRPa的抗原结合能力；与相应的四链抗体的抗原结合特异性相比，这种片段尤其对所述抗原表现出相同或基本相同的抗原结合特异性。为此，抗体的抗原结合片段包含重链，所述重链包含重链可变结构域和重链恒定结构域的片段，所述重链可变结构域包含HCDR1、HCDR2和HCDR3。因此，应该理解，对于重链恒定结构域的片段，抗原结合片段包含完整重链恒定结构域的至少一部分。例如，重链恒定结构域可包含重链的至少CH1结构域，或重链的至少CH1和CH2结构域，或重链的至少CH1、CH2和CH3结构域，或者由其组成。重链恒定结构域的片段也可以定义为包含重链的Fc(可结晶的片段)结构域的至少一部分。因此，抗体的抗原结合片段包括完整抗体的Fab部分、完整抗体的F(ab’)2部分、完整抗体的Fab’部分。重链恒定结构域也可以包含完整的重链恒定结构域或由完整的重链恒定结构域组成，例如在本说明书中所述，其中描述了几个完整的重链恒定结构域。在本发明的一个特定实施方案中，当抗体的抗原结合片段包含重链恒定结构域的片段(该片段包含完整的重链恒定结构域的一部分或由完整的重链恒定结构域的一部分组成)时，该重链恒定结构域片段可以由至少10个氨基酸残基组成；或可以由10至300个氨基酸残基，特别是210个氨基酸残基组成。
有利地，该抗原结合片段具有与相应的四链抗体相似的结合亲和力。然而，相对于相应的四链抗体具有降低的抗原结合亲和力的抗原结合片段也包括在本发明内。可以通过测量抗体和靶片段之间的亲和力来确定抗原结合能力。这些抗原结合片段也可称为抗体的“功能片段”。
抗体的抗原结合片段是包含其称为CDR(互补决定区)或其部分的高变域的片段，其包括抗原的识别位点，即，SIRPa的胞外域，从而确定抗原识别特异性。
四链免疫球蛋白的每个轻链可变结构域和每个重链可变结构域(分别为VL和VH)具有三个CDR，分别称为VL-CDR1(或LCDR1)、VL-CDR2(或LCDR2)、VL-CDR3(或LCDR3)和VH-CDR1(或HCDR1)、VH-CDR2(或HCDR2)、VH-CDR3(或HCDR3)
技术人员能够通过参考所述的这方面的标准定义(包括参考编号系统、参考KABAT的编号系统)或通过应用IMGT“collier de perle”算法来确定抗体的各个区域/结构域的位置。在这方面，关于本发明序列的定义，应注意，区域/结构域的界定可以从一个参考系统变化到另一个。因此，本发明中定义的区域/结构域包括在抗体可变结构域的全长序列内的相关序列的长度或定位变化显示为约+/-10％的序列。
基于四链免疫球蛋白的结构，抗原结合片段因此可以通过与现有数据库和现有技术中的抗体序列进行比较来定义，尤其是通过比较这些序列中功能结构域的位置来定义，注意到对于各种类型的抗体，特别是对于IgG，特别是对于哺乳动物IgG，框架和恒定结构域的位置被明确定义。这种比较还涉及与抗体的三维结构有关的数据。
为了说明本发明具体实施方案，含有包含所述抗体的CDR的可变结构域的抗体的抗原结合片段包括Fv、dsFv、scFv、Fab、Fab'、F(ab')2。Fv片段由通过疏水相互作用结合在一起的抗体的VL和VH结构域组成；在dsFv片段中，VH：VL异质二聚体通过二硫键稳定；在scFv片段中，VL和VH结构域通过柔性肽接头彼此连接，从而形成单链蛋白质。Fab片段是通过木瓜蛋白酶消化抗体可获得的单体片段；它们包含整个L链，以及H链的VH-CH1片段，通过二硫键结合在一起。F(ab')2片段可以通过胃蛋白酶消化铰链二硫化物下的抗体产生；它包含两个Fab'片段，另外还包含免疫球蛋白分子的一部分铰链区。Fab'片段可通过切割铰链区中的二硫键由F(ab')2片段获得。F(ab')2片段是二价的，即它们包含两个抗原结合位点，如天然免疫球蛋白分子；另一方面，Fv(构成Fab的可变部分的VHVL调节剂(VHVL dimmer))、dsFv、scFv、Fab和Fab'片段是单价的，即它们包含单个抗原结合位点。本发明的这些基础抗原结合片段可以组合在一起以获得多价抗原结合片段，例如双抗体、三抗体或四抗体。这些多价抗原结合片段也是本发明的一部分。
如本文所用，术语“双特异性”抗体是指通过拥有至少一个对第一抗原特异的区域(例如，来源于第一抗体的可变区)和至少对第二抗原特异的第二区域(例如，来源于第二抗体的可变区)而识别两种不同抗原的抗体。双特异性抗体特异性结合两种靶抗原，因此是多特异性抗体的一种。识别两种以上不同抗原的多特异性抗体可以通过重组DNA方法制备，或者包括但不限于通过任何便捷的方法化学制备的抗体。双特异性抗体包括能够识别两种不同抗原的所有抗体或抗体的缀合物，或聚合形式的抗体。双特异性抗体包括被还原和重组以保留其二价特征的抗体，以及被化学偶联使得它们可以具有针对每种抗原的几个抗原识别位点的抗体，例如BiME(双特异性巨噬细胞增强抗体)、BiTE(双特异性T细胞衔接子(bispecific T cell engager))、DART(双亲和重靶向)；DNL(对接和锁定(dock-and-lock))、DVD-Ig(双可变结构域免疫球蛋白)、HAS(人血清白蛋白)、kih(杵臼结构(knobsinto holes))。
因此，一些双特异性抗体可以针对SIRPa和第二抗原。特别地，所述第二抗原不同于免疫治疗剂的配体。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的双特异性的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段。示例性的修饰的抗体包括靶向作为第一抗原的SIRPa和靶向作为第二抗原的免疫调节检查点免疫细胞标志物的那些抗体，免疫调节检查点免疫细胞标志物为例如PD1、PDL1、PDL2、CTLA-4、CD80、CD86、CD28、4-1BB、4-1BBL、CD40、CD40L、ICOS、ICOS-L、OX40L、GITR、HVEM、BTLA、CD160、LIGHT、TNFRSF25、2B4、CD48、Tim1、Tim3、Tim4、Gal9、LAG-3、CD40、CD40L、CD70、CD27、VISTA、B7H3、B7H4(B7x)、TIGIT、CD112、HHLA2(B7-H7)、TMIGD2(CD28H)和嗜乳脂蛋白样2(BTNL2)，特别是PDL1、PD1、CD80、CD86、OX40L、4-1BBL或ICOSL。
开发治疗性抗体的一些研究已经导向设计Fc区以优化抗体性质，从而允许产生更适合于它们所需的药理学活性的分子。抗体的Fc区介导其血清半衰期和效应子功能，例如补体依赖性细胞毒性(CDC)、抗体依赖性细胞毒性(ADCC)和抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)。位于CH2和CH3结构域之间界面的几个突变，例如T250Q/M428L和M252Y/S254T/T256E+H433K/N434F，表现出增强对FcRn的结合亲和力和体内IgG1的半衰期。然而，增加的FcRn结合性和改善的半衰期之间并不总具有直接关系。提高治疗性抗体功效的一种方法是增加其血清持久性，从而允许更高的循环水平、更低的施用频率和减少的剂量。可能需要工程化Fc区来降低或增加抗体的效应子功能。对于靶向细胞表面分子的抗体，特别是免疫细胞上的那些，需要消除效应子功能。相反，对于用于肿瘤学用途的抗体，增强效应子功能可以改善治疗活性。四种人IgG同种型以不同的亲和力结合活化的Fcγ受体(FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIIa)、抑制性FcγRIIb受体和补体的第一组分(C1q)，产生非常不同的效应子功能。IgG与FcγR或C1q的结合取决于位于铰链区和CH2结构域中的残基。CH2结构域的两个区域对于FcγR和C1q的结合是关键的，且在IgG2和IgG4中具有独特的序列。
本发明包含抗体及其片段，但也包含大分子，例如人工蛋白质、肽和任何能够结合抗原的模拟抗体的化合物(本文也称为“抗原结合抗体模拟物”)。这些蛋白质包括亲和素(affitin)和anticalin。Affitin是具有选择性结合抗原能力的人工蛋白质。它们在结构上衍生自在Sulfolobus acidocaldarius(属于古细菌属结构域的微生物)中发现的DNA结合蛋白Sac7d。通过随机化Sac7d结合表面上的氨基酸，例如，通过产生对应于Sac7d结合界面的11个残基的随机取代的变体，可以生成亲和素文库并使得到的蛋白质文库经历多轮核糖体展示，亲和力可以针对各种靶标，例如肽、蛋白质、病毒和细菌。Affitin是抗体模拟物，正在开发作为生物技术中的工具。它们还被用作各种酶的特异性抑制剂(Krehenbrink等，J.mol.Biol.，383：5，2008)。技术人员可以使用本领域已知的方法容易地发展具有所需结合特性的anticalin，特别是如专利申请WO2008068637和上述出版物中所公开的方法，特别是噬菌体展示和/或核糖体展示文库的产生以及使用本文公开的抗原进行的筛选。Anticalin是人工蛋白质，能够与抗原结合，与蛋白质或小分子结合。它们是衍生自天然结合蛋白的家族的人脂笼蛋白的抗体模拟物。Anticalin约小8倍，大小约180个氨基酸，质量约20kDa(Skerra，Febs J.，275：11，2008)。已经产生了Anticalin噬菌体展示文库，其允许筛选和选择anticalin，特别是具有特异性结合特性的anticalin。本领域技术人员可以使用本领域已知的方法容易地开发具有所需结合特性的Affitin，特别是如EP专利EP1270725B1、美国专利US8536307B2，(Schlehuber和Skerra，Biophys.Chem.，96:2-3，2002)和上述出版物中所公开的方法，特别是噬菌体展示和/或核糖体展示文库的产生以及使用本文公开的抗原进行的筛选。Anticalin和affitin都可以在包含细菌表达系统的许多表达系统中产生。因此，本发明提供具有本文所述修饰的抗体特征的Affitin、anticalin和其他类似的抗体模拟物，所有这些都被认为是本发明的大分子，这些特征特别是关于与SIRPa的结合，SIRPa和CD47之间的相互作用的抑制，不结合SIRPg，不抑制T细胞的增殖，提高T细胞增殖，不抑制SIRPg和CD47之间的相互作用。关于本文公开的抗体或其片段的所有实施方案经必要的变型后转换为本发明的大分子，特别是抗原结合抗体模拟物。
如本文所用，术语“表位”是指抗体结合的抗原部分。蛋白质抗原的表位可以分为两类，构象表位和线性表位。构象表位对应于抗原氨基酸序列的不连续区段。线性表位对应于来自抗原的连续氨基酸序列。
在本发明中，存在于SIRPa内且被抗SIRPa抗体结合的肽构成这些抗体特异性识别的表位。
如本文所用，“修饰的抗体”对应于包含抗体或其抗原结合片段的分子，其中所述抗体或其功能片段与功能性不同的分子结合。本发明的经修饰的抗体可以是融合嵌合蛋白或由任何合适形式的连接而得到的缀合物，合适形式的连接包括共价连接、接枝、与化学基团或生物基团或与分子(例如PEG聚合物或适于在体内保护免受蛋白酶切割的另一种保护基团或分子)的化学键合，用于改善抗体或功能片段的稳定性和/或半衰期。使用类似的技术，特别是通过化学偶联或接枝，可以用生物活性分子制备经修饰的抗体，所述活性分子例如选自毒素，特别是假单胞菌外毒素A、植物毒素蓖麻毒素或皂草素毒素的A链，尤其是治疗性活性成分，适用于将抗体或功能片段靶向人体特定细胞或组织的载体(尤其包括蛋白质载体)，或者它可以与标志物或接头结合，尤其是当使用抗体片段时。抗体或其功能片段的PEG化是特别令人感兴趣的实施方案，因为它改善了活性物质向宿主的递送条件，特别是对于治疗应用。PEG化可以是位点特异性的，以防止干扰抗体或功能片段的识别位点，并且可以用高分子量的PEG进行。PEG化可以通过抗体或功能片段的序列中存在的游离半胱氨酸残基或通过抗体或功能片段的氨基序列中所添加的游离半胱氨酸残基来实现。
在本发明中，修饰的抗SIRPa抗体或其片段包含免疫治疗剂，特别是与免疫治疗剂连接。此类修饰的抗体也称为“双功能”，即它们具有两种治疗作用：第一种作用来源于抗SIRPa抗体与SIRPa的相互作用，第二种作用来源于免疫治疗剂与其配体的相互作用。本发明的双功能抗体不仅结合SIRPa和免疫治疗剂的配体，而且还保持了与CD47-SIRPa和免疫治疗剂-配体的相互作用相关的功能特性。
如本文所用，术语“免疫治疗剂”尤其是指可以将癌症疫苗从有趣的生物学现象转变为有效治疗剂的试剂，包括：T细胞生长因子，以增加幼稚T细胞的数量和库；生长因子，以增加树突细胞(DC)的数量；激动剂，以活化DC和其他抗原呈递细胞(APC)；佐剂，以允许和增加癌症疫苗；激动剂，以活化和刺激T细胞；阻断T细胞检查点的抑制剂；T细胞生长因子，以增加免疫T细胞的生长和存活；抑制、阻断或中和癌细胞和免疫细胞衍生的免疫抑制细胞因子的试剂。
更特别地，可用于本发明的免疫治疗剂选自免疫检查点阻断剂或激活剂，特别是适应性免疫细胞(T或B淋巴细胞)的免疫检查点阻断剂或激活剂，治疗性疫苗(DNA、RNA或肽疫苗)或免疫偶联物，例如抗体-药物偶联物。
许多免疫检查点阻断剂或激活剂是本领域已知的。在本发明中，可能有用的适应性免疫细胞(B或T淋巴细胞)的免疫检查点阻断剂或激活剂的例子是PD1、PDL1、PDL2、CTLA-4、CD80、CD86、CD28、4-1BB、4-1BBL、CD40、CD40L、ICOS、ICOS-L、OX40L、GITR、HVEM、BTLA、CD160、LIGHT、TNFRSF25、2B4、CD48、Tim1、Tim3、Tim4、Gal9、LAG-3、CD40、CD40L、CD70、CD27、VISTA、B7H3、B7H4(B7x)、TIGIT、CD112、HHLA2(B7-H7)、TMIGD2(CD28H)、嗜乳脂蛋白样2(BTNL2)、它们的变体和片段，尤其是PDL1、PD1、CD80、CD86、OX40L、4-1BBL、ICOSL、它们的变体和片段，更特别是PD1、PDL1、CD80、4-1BBL以及它们的变体和片段。
特别地，本发明的抗体可以通过将免疫检查点阻断剂或激活剂的功能变体或功能片段添加至抗SIRPa抗体而获得。优选地，功能片段对应于免疫检查点阻断剂或激活剂的胞外域(ECD)。
特别地，本发明的双功能抗体中包含的免疫治疗剂的变体和片段保留与免疫治疗剂-配体的相互作用相关的功能特性。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其特异性结合至少两种、三种、四种或五种肽，所述肽包含选自下组的氨基酸序列，或由选自下组的氨基酸序列组成：SIRPa中的SEQ ID NO：1(SLIPVGP)、SEQ ID NO：2(G/ARELIYNQKEGH)、SEQ ID NO：3(KFRKGSPD[DV]/[T]E)、SEQ ID NO：4(QHTVSFTCESHGFSPRDITLKWF)、SEQ ID NO：5(ICEVAHVTLQG)和SEQ ID NO：6(YPQRLQLTWLE)，所述修饰的抗SIRPa抗体或抗原结合片段与免疫治疗剂连接。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其特异性结合包含以下氨基酸序列(或由以下氨基酸序列组成)的肽：SIRPa中的SEQ IDNO：3(KFRKGSPD[DV]/[T]E)以及至少一种包含选自下组的氨基酸序列(或由选自下组的氨基酸序列组成)的肽：SIRPa中的SEQ ID NO：1(SLIPVGP)、SEQ ID NO：2(G/ARELIYNQKEGH)、SEQ ID NO：4(QHTVSFTCESHGFSPRDITLKWF)、SEQ ID NO：5(ICEVAHVTLQG)和SEQ ID NO：6(YPQRLQLTWLE)，所述修饰的抗SIRPa抗体或抗原结合片段与免疫治疗剂连接。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其特异性结合包含选自下组的氨基酸序列(或由选自下组的氨基酸序列组成)的肽：SIRPa中的SEQ ID NO：1(SLIPVGP)、SEQ ID NO：2(G/ARELIYNQKEGH)、SEQ ID NO：3(KFRKGSPD[DV]/[T]E)、SEQ ID NO：4(QHTVSFTCESHGFSPRDITLKWF)、SEQ ID NO：5(ICEVAHVTLQG)和SEQ ID NO：6(YPQRLQLTWLE)，所述修饰的抗SIRPa抗体或抗原结合片段与免疫治疗剂连接。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其特异性结合至少一种包含选自下组的氨基酸序列(或由选自下组的氨基酸序列组成)的肽：SIRPa中的SEQ ID NO：1(SLIPVGP)、SEQ ID NO：7(GRELIYNQKEGH)、SEQ ID NO：8(KFRKGSPDDVE)、SEQ ID NO：4(QHTVSFTCESHGFSPRDITLKWF)、SEQ ID NO：5(ICEVAHVTLQG)和SEQ ID NO：6(YPQRLQLTWLE)，所述修饰的抗SIRPa抗体或抗原结合片段与免疫治疗剂连接。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其特异性结合如下的肽：SIRPa中的SEQ ID NO：1(SLIPVGP)、SEQ ID NO：7(GRELIYNQKEGH)、SEQ ID NO：8(KFRKGSPDDVE)、SEQ ID NO：4(QHTVSFTCESHGFSPRDITLKWF)、SEQ ID NO：5(ICEVAHVTLQG)和SEQ ID NO：6(YPQRLQLTWLE)，所述修饰的抗SIRPa抗体或抗原结合片段与免疫治疗剂连接。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其特异性结合至少一种包含选自下组的氨基酸序列(或由选自下组的氨基酸序列组成)的肽：SEQ ID NO：1(SLIPVGP)、SEQ ID NO：9(ARELIYNQKEGH)、SEQ ID NO：10(KFRKGSPDTE)、SEQ ID NO：4(QHTVSFTCESHGFSPRDITLKWF)、SEQ ID NO：5(ICEVAHVTLQG)和SEQ ID NO：6(YPQRLQLTWLE)，所述修饰的抗SIRPa抗体或抗原结合片段与免疫治疗剂连接。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其特异性结合如下的肽：SIRPa中的SEQ ID NO：1(SLIPVGP)、SEQ ID NO：9(ARELIYNQKEGH)、SEQ ID NO：10(KFRKGSPDTE)、SEQ ID NO：4(QHTVSFTCESHGFSPRDITLKWF)、SEQ ID NO：5(ICEVAHVTLQG)和SEQ ID NO：6(YPQRLQLTWLE)，所述修饰的抗SIRPa抗体或抗原结合片段与免疫治疗剂连接。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其特异性结合至少一种包含选自下组的氨基酸序列(或由选自下组的氨基酸序列组成)的肽：SIRPa中的SEQ ID NO：1(SLIPVGP)、SEQ ID NO：11(GRELIYN)、DVE、SEQ ID NO：12(HTVSFTCESHGFSPRDITLKWF)、SEQ ID NO：5(ICEVAHVTLQG)和SEQ ID NO：6(YPQRLQLTWLE)，所述修饰的抗SIRPa抗体或抗原结合片段与免疫治疗剂连接。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其特异性结合如下的肽：SIRPa中的SEQ ID NO：1(SLIPVGP)、SEQ ID NO：11(GRELIYN)、DVE、SEQ ID NO：12(HTVSFTCESHGFSPRDITLKWF)、SEQ ID NO：5(ICEVAHVTLQG)和SEQ ID NO：6(YPQRLQLTWLE)，所述修饰的抗SIRPa抗体或抗原结合片段与免疫治疗剂连接。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其特异性结合至少一种包含选自下组的氨基酸序列(或由选自下组的氨基酸序列组成)的肽：SIRPa中的SEQ ID NO：1(SLIPVGP)、SEQ ID NO：13(ARELIYN)、SEQ ID NO：12(HTVSFTCESHGFSPRDITLKWF)、SEQ ID NO：5(ICEVAHVTLQG)和SEQ ID NO：6(YPQRLQLTWLE)，所述修饰的抗SIRPa抗体或抗原结合片段与免疫治疗剂连接。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其特异性结合如下的肽：SIRPa中的SEQ ID NO：1(SLIPVGP)、SEQ ID NO：13(ARELIYN)、SEQ ID NO：12(HTVSFTCESHGFSPRDITLKWF)、SEQ ID NO：5(ICEVAHVTLQG)和SEQ ID NO：6(YPQRLQLTWLE)，所述修饰的抗SIRPa抗体或抗原结合片段与免疫治疗剂连接。
以下的肽对应于线性表位：SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4,SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12和SEQ ID NO：13。
本发明人通过基于阵列的寡肽扫描(有时称为重叠肽扫描或胃蛋白酶分析)鉴定了这些线性表位。该技术使用来自靶蛋白的重叠和非重叠区段的寡肽序列文库，并测试它们结合目标抗体的能力。通过组合来自靶蛋白的不同部分的非相邻肽序列并对该组合肽施加构象刚性(例如使用CLIPS支架)(Timmerman等，2007，J Mol Recognit.，9月-10月；20(5)：283-99)，可以以非常高的可靠性和精确度定位不连续表位(Gaseitsiwe等，2010-ClinVaccine Immunol.1月；17(1)：168–175)。本发明的所有测试抗体，包括HEFLB，特异性结合所述表位。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其特异性结合构象表位，所述构象表位包含至少一种选自以下的肽：SIRPa中的SEQ IDNO：70(ELIYNQKEGHFPR)、SEQ ID NO：71(RNNMDFSIRIGN)和SEQ ID NO：72(SPRDITLKW)，所述修饰的抗SIRPa抗体或抗原结合片段与免疫治疗剂连接。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其特异性结合构象表位，所述构象表位包含以下的肽(或由以下的肽组成)：SIRPa中的SEQ ID NO：70(ELIYNQKEGHFPR)、SEQ ID NO：71(RNNMDFSIRIGN)和SEQ ID NO：72(SPRDITLKW)，所述修饰的抗SIRPa抗体或抗原结合片段与免疫治疗剂连接。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其特异性结合构象表位，所述构象表位包含至少一种选自以下的肽：SEQ ID NO：70(ELIYNQKEGHFPR)和SEQ ID NO：71(RNNMDFSIRIGN)，所述修饰的抗SIRPa抗体或抗原结合片段与免疫治疗剂连接。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其特异性结合构象表位，所述构象表位包含以下的肽(或由以下的肽组成)：SIRPa中的SEQ ID NO：70(ELIYNQKEGHFPR)和SEQ ID NO：71(RNNMDFSIRIGN)，所述修饰的抗SIRPa抗体或抗原结合片段与免疫治疗剂连接。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其特异性结合构象表位，所述构象表位包含至少一种选自以下的肽：SIRPa中的SEQ IDNO：73(YNQK)和“SIR”，所述修饰的抗SIRPa抗体或抗原结合片段与免疫治疗剂连接。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其特异性结合构象表位，所述构象表位包含SIRPa中的SEQ ID NO：73(YNQK)所示的氨基酸序列的肽和SIR氨基酸序列的肽，或所述构象表位由SIRPa中的SEQ ID NO：73(YNQK)所示的氨基酸序列的肽和SIR氨基酸序列的肽组成，所述修饰的抗SIRPa抗体或抗原结合片段与免疫治疗剂连接。
SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：73和SIRP的肽对应于构象表位。如本领域技术人员所熟知的(Van de Water等，Clinical ImmunologyandImmunopathology，1997，85卷)，本发明人已经使用蛋白水解保护方法(酶消化：亲和层析固定的抗体-抗原复合物的胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶)确定了这些构象表位，然后用质谱分析(MALDI-TOF/TOF)检测和测序这些目标肽。使用的抗原是人SIRPa(登录号NP_542970)，并且所用的本发明的抗体之一是HEFLB变体。
根据本发明的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其特异性地结合所述构象表位，所述构象表位在天然SIRPa内以其构象排列包含所述肽(或由所述肽组成)。
SEQ ID NO：73(YNQK)中所示的氨基酸序列的肽对应于由登录号为NP_542970的人SIRPa氨基酸序列中第80-83位氨基酸组成的肽。
SIR氨基酸序列的肽(SIR肽)对应于由登录号为NP_542970的人SIRPa氨基酸序列中第105-107位氨基酸组成的肽。
如本文所用，术语“SIRPa”是指来自哺乳动物物种的SIRPa蛋白，优选人SIRPa(例如，登录号NP_542970(P78324)和CAA71403)。
如本文所用，术语“抗SIRPa抗体”是指特异性结合SIRPa，特别是人SIRPa的抗体。
本发明的抗体或其抗原结合片段与表位(或包含表位的区域)之间的特异性结合意味着抗体对特定蛋白质或抗原(此处为SIRPa或与抗体偶联的免疫治疗剂的配体)的表位(包含表位的区域)表现出明显的亲和力。“明显的亲和力”包括具有约10-9M(KD)以上亲和力的结合。优选地，当结合亲和力在10-9M和10-12M之间，任选地在10-9M和10-10M之间，特别是10-10M时，认为结合是特异性的。尤其是通过将所述结合结构域与靶蛋白或抗原的反应与所述结合结构域与除靶蛋白之外的蛋白质或抗原的反应相比较，可以容易地测试结合结构域是否与靶标特异性反应或与靶标结合。
可以通过本领域技术人员熟知的各种方法确定亲和力。这些方法包括但不限于Biacore分析、Blitz分析和Scatchard图。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其对SIRPa的KD值(特别是通过Biacore分析)低于10-9M，优选低于10-10M，更优选低于1.10-11M。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其降低SIRPa和CD47之间的相互作用。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其部分地或完全地，特别是完全地抑制CD47与SIRPa的结合，特别是人CD47与人SIRPa的结合。
本发明的这种抗体特异性结合SIRPa并拮抗SIRPa和CD47之间的相互作用。
特别地，在结合测定中，与阴性对照分子相比，本发明的抗SIRPa拮抗物抗体能够将CD47与SIRPa的结合降低或抑制至少50％、60％、70％、优选80％，更优选90％或最优选100％。
特别地，在结合测定中，与阴性对照分子相比，本发明的抗SIRPa拮抗物抗体能够将CD47与SIRPa的结合减少或抑制50％至100％，优选60％至90％，更优选70％至80％。
通过竞争性抑制确定抗体特异性和亲和力的方法是本领域已知的(参见，例如，Harlow等，抗体：实验室手册，冷泉港实验室出版社，冷泉港，纽约(1998)；Colligan等，免疫学现行方案(Current Protocols in Immunology),Green Publishing Assoc.,纽约(1992；1993)；Muller，Meth.Enzym.，92:589-601(1983))并在下面的实施例中描述。
这些方法包括但不限于Biacore分析、Blitz分析、流式细胞术和ELISA测定。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体，其通过ELISA在CD47与抗SIRPa抗体间的竞争性SIRPa结合测定中测定的IC50低于500ng/ml，特别是低于400ng/ml、300ng/ml、更特别是低于200ng/ml。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体，其通过对人单核细胞的CD47与抗SIRPa抗体间的竞争性细胞计数测定法测定的IC50低于500ng/ml，特别是低于400ng/ml、300ng/ml、更特别是低于200ng/ml，低于150ng/ml，甚至更特别是低于100ng/ml。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其不特异性结合SIRPg，优选不特异性结合人SIRPg。
本发明的这种抗体不影响或不阻止SIRPg和CD47之间的相互作用。
如本文所用，术语“SIRPg”涉及来自哺乳动物物种，优选人SIRPg的信号调节蛋白γ(也称为SIRPγ、CD172g或SIRPβ2)。
用于本申请实施例的人SIRPg蛋白的参考序列对应于登录号Q9P1W8的序列。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其对SIRPg的KD值(特别是通过Blitz分析)高于10-9M，优选高于10-8M，更优选高于10-7M。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其不显著抑制、拮抗CD47与SIRPg的结合，其对于CD47与SIRPg的结合没有显著竞争。
可以用本申请实施例中定义的方法确定该拮抗作用。
在本发明中，如果所述抗体(或其抗原结合片段)在Blitz的SIRPg结合竞争性测定中没有诱导CD47的KD值增加或诱导的增加低于1log，则可以认为该抗体(或其抗原结合片段)没有拮抗CD47与SIRPg的结合。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其不经由SIRPg特异性结合T细胞，特别是CD3+ T细胞。
特别地，本发明的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段不经由SIRPg结合来自哺乳动物物种的T细胞，特别是人T细胞。
该效果可以通过本申请实施例中描述的方法测量。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其不会显著抑制优选来自哺乳动物物种的T细胞，特别是CD3+ T细胞的增殖，更优选不会显著抑制人T细胞的增殖。
特别地，如果与不存在所述抗体的阳性对照相比，特别是与不存在所述抗体但包含产生第一激活信号的试剂(例如抗CD3)的阳性对照相比，T细胞增殖的减少小于30％，优选小于20％，更优选小于10％，最优选小于5％，则认为抗SIRPa抗体不显著抑制T细胞的增殖。
优选地，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其增加优选来自哺乳动物物种的T细胞，特别是CD3+ T细胞的增殖，更优选增加人T细胞的增殖。
如果所述抗体(或其抗原结合片段)诱导的T细胞增殖比不存在所述抗体的对照(特别是不存在所述抗体但包含产生第一激活信号的试剂(例如抗CD3)的对照)诱导的T细胞增殖高至少1.5倍，优选至少2倍，更优选至少10倍，则认为抗体(或其抗原结合片段)增加了T细胞的增殖。
T细胞的增殖可以通过各种方法确定。例如，T细胞的增殖可以通过加入H3-胸苷来测量，如本申请的实施例中所述。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其不显著抑制、拮抗表面活性蛋白与SIRPa的结合，其相对表面活性蛋白与SIRPa的结合没有显著竞争。
如本文所用，“表面活性蛋白”是含胶原的C型(钙依赖性)凝集素，其显著促进表面活性剂稳态和肺免疫(综述参见Kishore等，表面活性蛋白SP-A和SP-D：结构、功能和受体，Mol Immunol，43(9)，1293-315，2006)。
如本文所用，术语“表面活性蛋白”是指来自哺乳动物物种的表面活性蛋白，优选人表面活性蛋白。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其不抑制人表面活性蛋白D(SP-D)与SIRPa的结合。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其不抑制人表面活性蛋白A(SP-A)与SIRPa的结合。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其不拮抗表面活性蛋白和SIRPa之间的相互作用。
可以使用本领域技术人员熟知的方法，通过竞争性测定来确定SIRPa和表面活性蛋白之间的竞争。这些方法包括但不限于Biacore分析、Blitz分析和ELISA测定。
在本发明中，如果所述抗体(或其抗原结合片段)在Blitz的SIRPa结合竞争性测定中没有诱导表面活性蛋白的KD值增加或诱导的增加低于1log，则可以认为该抗体(或其抗原结合片段)没有拮抗表面活性蛋白与SIRPa的结合。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其弱结合或不特异性结合SIRPb。
如本文所用，术语“SIRPb”是指来自哺乳动物物种的SIRPb蛋白(也称为SIRPβ，信号调节蛋白β-1，SIRP-β-1，CD172抗原样家族成员B或CD172b)，优选人SIRPb。
在本申请的实施例中使用的人SIRPb蛋白的一个参考序列对应于与登录号Q5TFQ8-1相关的序列。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其对SIRPb的KD值(特别是通过Blitz分析)高于10-9M，优选高于10-8M。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其增加PBMC和/或T淋巴细胞的TNFa分泌。
TNFa的分泌可以使用本领域技术人员众所周知的方法通过ELISA测定来确定(如本发明的实施例所示)。
在本发明中，如果所述抗体(或其抗原结合片段)诱导的TNFa分泌比不存在所述抗体的阴性对照(特别是不存在所述抗体但包含产生第一激活信号的试剂(例如抗CD3)的阴性对照)诱导的TNFa分泌高至少1.5倍，优选至少2倍，则认为抗体(或其抗原结合片段)增加了TNFa的分泌。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其增加了PBMC的IFNg分泌。
IFNg的分泌可以使用本领域技术人员众所周知的方法通过ELISA测定来确定(如本发明的实施例所示)。
在本发明中，如果所述抗体(或其抗原结合片段)诱导的IFNg分泌比不存在所述抗体的阴性对照(特别是不存在所述抗体但包含产生第一激活信号的试剂(例如抗CD3)的阴性对照)诱导的IFNg分泌高至少1.5倍，优选至少2倍，更优选至少4倍，则认为抗体(或其抗原结合片段)增加了IFNg的分泌。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其增加巨噬细胞的MIP1a分泌。
MIP1a的分泌可以使用本领域技术人员众所周知的方法通过ELISA测定来确定(如本发明的实施例所示)。
在本发明中，如果所述抗体(或其抗原结合片段)诱导的MIP1a分泌比不存在所述抗体的阴性对照(特别是不存在所述抗体但包含产生第一激活信号的试剂(例如抗CD3)的阴性对照)诱导的MIP1a分泌高至少1.5倍，优选至少2倍，更优选至少10倍，则认为抗体(或其抗原结合片段)增加了MIP1a的分泌。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其增加人T细胞，特别是人T淋巴细胞的活化。如本文所用，T细胞和T淋巴细胞具有相同的含义并且可以互换使用。
人T细胞和人T淋巴细胞的活化可以通过本领域已知的方法来测定，例如但不限于CD标志物(特别是CD25和/或CD69)的分析，流式细胞术，蛋白质印迹，ELISA和/或如本发明的实施例所示，通过评估IFNg的分泌，或如本发明的实施例所示，通过人T细胞即人T淋巴细胞对钙掺入的延时(Time-lapse)分析。
在本发明中，如果与不存在所述抗体的阴性对照(特别是不存在所述抗体但包含产生第一激活信号的试剂(例如抗CD3)的阴性对照)相比，所述抗体或其抗原结合片段使人T细胞(即人T淋巴细胞)的活化增加至少1.5倍，优选至少2倍，更优选至少4倍，则认为抗体(或其抗原结合片段)增加了人T细胞(即人T淋巴细胞)的活化。
根据第一实施方案，本发明涉及双功能抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段，所述双功能抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段包含：
a)含有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重链可变结构域，以及
b)含有LCDR1、LCDR2和LCDR3的轻链可变结构域，
其中，
-HCDR1包含SEQ ID NO：14所示的氨基酸序列或由其组成，
-HCDR2包含SEQ ID NO：15或SEQ ID NO：16所示的氨基酸序列或由其组成，
-HCDR3包含SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19或SEQ ID NO：20所示的氨基酸序列或由其组成，
-LCDR1包含SEQ ID NO：21所示的氨基酸序列或由其组成，
-LCDR2包含SEQ ID NO：22所示的氨基酸序列或由其组成，并且
-LCDR3包含SEQ ID NO：23所示的氨基酸序列或由其组成，
并且，所述抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段包含重链恒定结构域或其片段，所述重链恒定结构域或其片段与免疫治疗剂连接，所述免疫治疗剂包含选自下组的蛋白质或由选自下组的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、其免疫治疗剂变体及其免疫治疗剂片段，优选其胞外域。
根据另一个实施方案，本发明涉及修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含：
a)重链，所述重链包含重链可变结构域和重链恒定结构域或其片段，所述重链可变结构域包含HCDR1、HCDR2和HCDR3；和
b)轻链，所述轻链包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，
其中，所述CDR定义如下：
-HCDR1，包含SEQ ID NO：14(SYWVH)所示的氨基酸序列或由其组成，
-HCDR2，包含SEQ ID NO：15(NIDPSDSDTHYNQKFKD)或SEQ ID NO：16(NIDPSDSDTHYSPSFQG)所示的氨基酸序列或由其组成，
-HCDR3，包含SEQ ID NO：17(GGTGTMAWFAY)、SEQ ID NO：18(GGTGTLAWFAY)、SEQ IDNO：19(GGTGTMAYFAY)或SEQ ID NO：20(GGTGTLAYFAY)所示的氨基酸序列或由其组成，
-LCDR1，包含SEQ ID NO：21(RSSQSLVHSYGNTYLY)所示的氨基酸序列或由其组成，
-LCDR2，包含SEQ ID NO：22(RVSNRFS)所示的氨基酸序列或由其组成，以及
-LCDR3，包含SEQ ID NO：23(FQGTHVPYT)所示的氨基酸序列或由其组成，
并且，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含重链恒定结构域或其片段，所述重链恒定结构域或其片段特别是通过其C末端与免疫治疗剂连接，所述免疫治疗剂包含选自下组的蛋白质或由选自下组的蛋白质组成：PD1、PDL1、CD80、4-1BBL、其免疫治疗剂变体及其免疫治疗剂片段，优选其胞外域。
根据另一个实施方案，本发明涉及抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，所述抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含：
a)重链，所述重链包含HCDR1、HCDR2、HDCR3和重链恒定结构域的至少一个片段，特别是至少包含如下的片段：重链恒定结构域的CH1结构域；或CH1结构域和CH3结构域；或CH2结构域和CH3结构域；或CH1结构域、CH2结构域和CH3结构域；特别是，与Fc区和/或铰链区的至少一个片段组合；和
b)轻链，包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，
其中所述CDR定义如下：
-HCDR1，包含SEQ ID NO：14(SYWVH)所示的氨基酸序列或由其组成，
-HCDR2，包含SEQ ID NO：15(NIDPSDSDTHYNQKFKD)或SEQ ID NO：16(NIDPSDSDTHYSPSFQG)所示的氨基酸序列或由其组成，
-HCDR3，包含SEQ ID NO：17(GGTGTMAWFAY)、SEQ ID NO：18(GGTGTLAWFAY)、SEQ IDNO：19(GGTGTMAYFAY)或SEQ ID NO：20(GGTGTLAYFAY)所示的氨基酸序列或由其组成，
-LCDR1，包含SEQ ID NO：21(RSSQSLVHSYGNTYLY)所示的氨基酸序列或由其组成，
-LCDR2，包含SEQ ID NO：22(RVSNRFS)所示的氨基酸序列或由其组成，以及
-LCDR3，包含SEQ ID NO：23(FQGTHVPYT)所示的氨基酸序列或由其组成，
并且，所述重链恒定结构域或其片段特别是通过其C末端与免疫治疗剂连接，所述免疫治疗剂包含选自下组的蛋白质或由选自下组的蛋白质组成：PD1、PDL1、CD80、4-1BBL、其免疫治疗剂变体及其免疫治疗剂片段，优选其胞外域。
在说明书的以下部分中，术语“重链包含HCDR1、HCDR2和HCDR3”还涵盖术语“重链包含重链可变结构域和重链恒定结构域或其片段，所述重链可变结构域包含HCDR1、HCDR2和HCDR3”、“重链可变结构域包含HCDR1、HCDR2和HCDR3”和“重链从N末端至C末端包含HCDR1、HCDR2、HDCR3和重链恒定结构域的至少一个片段，特别是至少包含重链恒定结构域的CH1结构域的片段”。
在说明书的以下部分中，当提及特征“其中，重链或其片段与免疫治疗剂连接”时，它也包括“修饰的抗SIRPa抗体或抗原结合片段包含与免疫治疗剂连接的重链恒定结构域或其片段，所述免疫治疗剂包含选自下组的蛋白质或由选自下组的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、其免疫治疗剂变体及其免疫治疗剂片段，优选其胞外域”。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含：
a)重链，所述重链包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，和/或
b)轻链，所述轻链包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，
其中，所述CDR定义如下：
-HCDR1，包含SEQ ID NO：14(SYWVH)所示的氨基酸序列或由其组成，
-HCDR2，包含SEQ ID NO：15(NIDPSDSDTHYNQKFKD)或SEQ ID NO：16(NIDPSDSDTHYSPSFQG)所示的氨基酸序列或由其组成，
-HCDR3，包含SEQ ID NO：17(GGTGTMAWFAY)、SEQ ID NO：18(GGTGTLAWFAY)、SEQ IDNO：19(GGTGTMAYFAY)或SEQ ID NO：20(GGTGTLAYFAY)所示的氨基酸序列或由其组成，
-LCDR1，包含SEQ ID NO：21(RSSQSLVHSYGNTYLY)所示的氨基酸序列或由其组成，
-LCDR2，包含SEQ ID NO：22(RVSNRFS)所示的氨基酸序列或由其组成，以及
-LCDR3，包含SEQ ID NO：23(FQGTHVPYT)所示的氨基酸序列或由其组成，
所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段与免疫治疗剂连接，
特别地，所述抗体或其抗原结合片段包含重链恒定结构域或其片段，所述重链恒定结构域或其片段与免疫治疗剂连接。
18D5/变体A/变体B
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含：
a)重链，包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，和/或
b)轻链，包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，
其中，所述CDR定义如下：
-HCDR1，包含SEQ ID NO：14(SYWVH)所示的氨基酸序列或由其组成，
-HCDR2，包含SEQ ID NO：15(NIDPSDSDTHYNQKFKD)所示的氨基酸序列或由其组成，
-HCDR3，包含SEQ ID NO：17(GGTGTMAWFAY)所示的氨基酸序列或由其组成，
-LCDR1，包含SEQ ID NO：21(RSSQSLVHSYGNTYLY)所示的氨基酸序列或由其组成，
-LCDR2，包含SEQ ID NO：22(RVSNRFS)所示的氨基酸序列或由其组成，以及
-LCDR3，包含SEQ ID NO：23(FQGTHVPYT)所示的氨基酸序列或由其组成，
所述修饰的抗SIRPa抗体或抗原结合片段与免疫治疗剂连接。
变体C
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含：
a)重链，所述重链包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，和/或
b)轻链，所述轻链包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，
其中所述CDR定义如下：
-HCDR1，包含SEQ ID NO：14(SYWVH)所示的氨基酸序列或由其组成，
-HCDR2，包含SEQ ID NO：16(NIDPSDSDTHYSPSFQG)所示的氨基酸序列或由其组成，
-HCDR3，包含SEQ ID NO：17(GGTGTMAWFAY)所示的氨基酸序列或由其组成，
-LCDR1，包含SEQ ID NO：21(RSSQSLVHSYGNTYLY)所示的氨基酸序列或由其组成，
-LCDR2，包含SEQ ID NO：22(RVSNRFS)所示的氨基酸序列或由其组成，以及
-LCDR3，包含SEQ ID NO：23(FQGTHVPYT)所示的氨基酸序列或由其组成，
所述修饰的抗SIRPa抗体或抗原结合片段与免疫治疗剂连接。
变体E
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含：
a)重链，所述重链包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，和/或
b)轻链，所述轻链包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，
其中，所述CDR定义如下：
-HCDR1，包含SEQ ID NO：14(SYWVH)所示的氨基酸序列或由其组成，
-HCDR2，包含SEQ ID NO：16(NIDPSDSDTHYSPSFQG)所示的氨基酸序列或由其组成，
-HCDR3，包含SEQ ID NO：18(GGTGTLAWFAY)所示的氨基酸序列或由其组成，
-LCDR1，包含SEQ ID NO：21(RSSQSLVHSYGNTYLY)所示的氨基酸序列或由其组成，
-LCDR2，包含SEQ ID NO：22(RVSNRFS)所示的氨基酸序列或由其组成，以及
-LCDR3，包含SEQ ID NO：23(FQGTHVPYT)所示的氨基酸序列或由其组成，
所述修饰的抗SIRPa抗体或抗原结合片段与免疫治疗剂连接。
变体F
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含：
a)重链，所述重链包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，和/或
b)轻链，所述轻链包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，
其中，所述CDR定义如下：
-HCDR1，包含SEQ ID NO：14(SYWVH)所示的氨基酸序列或由其组成，
-HCDR2，包含SEQ ID NO：16(NIDPSDSDTHYSPSFQG)所示的氨基酸序列或由其组成，
-HCDR3，包含SEQ ID NO：19(GGTGTMAYFAY)所示的氨基酸序列或由其组成，
-LCDR1，包含SEQ ID NO：21(RSSQSLVHSYGNTYLY)所示的氨基酸序列或由其组成，
-LCDR2，包含SEQ ID NO：22(RVSNRFS)所示的氨基酸序列或由其组成，以及
-LCDR3，包含SEQ ID NO：23(FQGTHVPYT)所示的氨基酸序列或由其组成，
所述修饰的抗SIRPa抗体或抗原结合片段与免疫治疗剂连接。
变体EF
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含：
a)重链，所述重链包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，和/或
b)轻链，所述轻链包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，
其中，所述CDR定义如下：
-HCDR1，包含SEQ ID NO：14(SYWVH)所示的氨基酸序列或由其组成，
-HCDR2，包含SEQ ID NO：16(NIDPSDSDTHYSPSFQG)所示的氨基酸序列或由其组成，
-HCDR3，包含SEQ ID NO：20(GGTGTLAYFAY)所示的氨基酸序列或由其组成，
-LCDR1，包含SEQ ID NO：21(RSSQSLVHSYGNTYLY)所示的氨基酸序列或由其组成，
-LCDR2，包含SEQ ID NO：22(RVSNRFS)所示的氨基酸序列或由其组成，以及
-LCDR3，包含SEQ ID NO：23(FQGTHVPYT)所示的氨基酸序列或由其组成，
所述修饰的抗SIRPa抗体或抗原结合片段与免疫治疗剂连接。
本发明的抗SIRPa抗体可具有重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区包含本文提供的人抗体的HCDR1和/或HCDR2和/或HCDR3的氨基酸序列；所述轻链可变区包含本文提供的人抗体的LCDR1和/或LCDR2和/或LCDR3的氨基酸序列。
在一个实施方案中，该修饰的抗体包含所提供的人抗体的一个或多个CDR的氨基酸序列变体，该变体包含CDR残基内或附近的一个或多个氨基酸插入和/或CDR残基内或附近的缺失和/或CDR残基的取代(取代是产生此类变体的优选氨基酸变换类型)。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含：
-重链可变结构域，其包含选自以下的氨基酸序列(或由选自以下的氨基酸序列组成)：SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27、SEQ IDNO：28、SEQ IDNO：29和SEQ ID NO：30，和/或
-轻链可变结构域，其包含选自以下的氨基酸序列(或由选自以下的氨基酸序列组成)：SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32和SEQ ID NO：33，
所述修饰的抗SIRPa抗体或抗原结合片段与免疫治疗剂连接。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其包含：
-重链可变结构域，其包含选自以下的氨基酸序列(或由选自以下的氨基酸序列组成)：SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27、SEQ IDNO：28、SEQ IDNO：29和SEQ ID NO：30，和
-轻链可变结构域，其包含选自以下的氨基酸序列(或由选自以下的氨基酸序列组成)：SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32和SEQ ID NO：33，
所述修饰的抗SIRPa抗体或抗原结合片段与免疫治疗剂连接。
在下表1中给出可变结构域的具体序列。
表1.本发明的抗体的重链可变结构域和轻链可变结构域的例子
本发明中例示的抗体的可变结构域的序列可以从表2中所示序列的组合而演绎出。
表2.本发明的特异性抗体的重链可变结构域和轻链可变结构域
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其包含轻链可变结构域，该轻链可变结构域含有氨基酸序列SEQ ID NO：33或由氨基酸序列SEQ ID NO：33组成，所述修饰的抗SIRPa抗体或抗原结合片段与免疫治疗剂连接。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其包含：
-轻链可变结构域，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：33或由其组成，以及
-重链可变结构域，其包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO：28、SEQ IDNO：29和SEQ ID NO：30，
优选地，
-重链可变结构域，其包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ ID NO：29和SEQ ID NO：30，
更优选地，
-重链可变结构域，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：30或由其组成，
所述修饰的抗SIRPa抗体或抗原结合片段与免疫治疗剂连接。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含：
-重链可变结构域，其包含SEQ ID NO：24所示的氨基酸序列或由其组成，和
-轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO：31所示的氨基酸序列或由其组成，
或
-重链可变结构域，其包含SEQ ID NO：25所示的氨基酸序列或由其组成，和
-轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO：32所示的氨基酸序列或由其组成，或
-重链可变结构域，其包含SEQ ID NO：25所示的氨基酸序列或由其组成，和
-轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO：33所示的氨基酸序列或由其组成，
或
-重链可变结构域，其包含SEQ ID NO：26所示的氨基酸序列或由其组成，和
-轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO：32所示的氨基酸序列或由其组成，
或
-重链可变结构域，其包含SEQ ID NO：26所示的氨基酸序列或由其组成，和
-轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO：33所示的氨基酸序列或由其组成，
或
-重链可变结构域，其包含SEQ ID NO：27所示的氨基酸序列或由其组成，和
-轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO：32所示的氨基酸序列或由其组成，
或
-重链可变结构域，其包含SEQ ID NO：27所示的氨基酸序列或由其组成，和
-轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO：33所示的氨基酸序列或由其组成，
或
-重链可变结构域，其包含SEQ ID NO：28所示的氨基酸序列或由其组成，和
-轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO：32所示的氨基酸序列或由其组成，
或
-重链可变结构域，其包含SEQ ID NO：28所示的氨基酸序列或由其组成，和
-轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO：33所示的氨基酸序列或由其组成，
或
-重链可变结构域，其包含SEQ ID NO：29所示的氨基酸序列或由其组成，和
-轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO：32所示的氨基酸序列或由其组成，
或
-重链可变结构域，其包含SEQ ID NO：29所示的氨基酸序列或由其组成，和
-轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO：33所示的氨基酸序列或由其组成，
或
-重链可变结构域，其包含SEQ ID NO：30所示的氨基酸序列或由其组成，和
-轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO：32所示的氨基酸序列或由其组成，
或
-重链可变结构域，其包含SEQ ID NO：30所示的氨基酸序列或由其组成，和
-轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO：33所示的氨基酸序列或由其组成，
所述修饰的抗SIRPa抗体或抗原结合片段与免疫治疗剂连接。
在一个实施方案中，该修饰的抗体或抗原结合片段没有取代重链可变结构域中第33位的氨基酸W(W33)，所述位置被识别于SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：26、SEQID NO：27、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29或SEQ ID NO：30，和/或没有取代轻链可变结构域中第39位的氨基酸Y(Y39)、第55位的R(R55)和/或第60位的F(F60)，所述位置被识别于SEQID NO：31、SEQ ID NO：32或SEQ ID：33，特别地，在重链可变结构域的位置W33处没有取代，在轻链可变结构域的位置Y39、R55和F60处没有取代。
在本发明中，可以用任何重链恒定结构域和轻链恒定结构域和其片段生产该修饰的抗体。
在一个实施方案中，本发明的修饰的抗人SIRPa抗体是人源化单克隆抗体，特别地，其中抗体轻链恒定结构域衍生自人κ轻链恒定结构域，更特别地，其中轻链恒定结构域由SEQ ID NO：35的序列组成，和/或其中抗体重链恒定结构域衍生自人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4(野生型或突变型)重链恒定结构域，特别衍生自人IgG4重链恒定结构域，更特别地，其中抗体重链恒定结构域由SEQ ID NO：34的序列组成。
如本领域技术人员所熟知的，重链恒定结构域的IgG同种型的选择集中在是否需要特定功能和对合适的体内半衰期的需求。例如，设计用于选择性根除癌细胞的抗体通常需要活性同种型，其允许通过抗体依赖性细胞介导的细胞毒性进行补体活化和效应子介导的细胞杀伤。人IgG1和IgG3(半衰期较短)同种型均满足这些标准，特别是人IgG1同种型(野生型和变体)。特别地，取决于重链恒定结构域的IgG同种型(特别是人类野生型和变体IgG1同种型)，本发明的抗人SIRPa抗体可通过CDC、ADCC和/或ADCP机制对表达SIRPa的细胞具有细胞毒性(Salfeld，自然生物技术，卷25，N°12，2007；Irani等，分子免疫学，卷67，第2期，A部分，2015)。事实上，可结晶片段(Fc)区域与多种辅助分子相互作用以介导间接效应子功能，例如抗体依赖性细胞毒性(ADCC)、抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)和补体依赖性细胞毒性(CDC)。
表3.适用于本发明的抗体的重链恒定结构域和轻链恒定结构域的例子
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体，所述修饰的抗SIRPa抗体包含：
-重链，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：56或由其组成，和
-轻链，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：57或由其组成，
或
-重链，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：36或由其组成，和
-轻链，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：43或由其组成，
或
-重链，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：37或由其组成，和
-轻链，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：44或由其组成，
或
-重链，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：37或由其组成，和
-轻链，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：45或由其组成，
或
-重链，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：38或由其组成，和
-轻链，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：44或由其组成，
或
-重链，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：38或由其组成，和
-轻链，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：45或由其组成，
或
-重链，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：39或由其组成，和
-轻链，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：44或由其组成，
或
-重链，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：39或由其组成，和
-轻链，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：45或由其组成，
或
-重链，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：40或由其组成，和
-轻链，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：44或由其组成，
或
-重链，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：40或由其组成，和
-轻链，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：45或由其组成，
或
-重链，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：41或由其组成，和
-轻链，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：44或由其组成，
或
-重链，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：41或由其组成，和
-轻链，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：45或由其组成，
或
-重链，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：42或由其组成，和
-轻链，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：44或由其组成，
或
-重链，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：42或由其组成，和
-轻链，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：45或由其组成，
所述修饰的抗SIRPa抗体与免疫治疗剂连接。
表4.本发明的特异性抗体的重链序列和轻链序列
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其能够诱导髓源性抑制细胞(MDSC)分化成分化的MDSC，特别是分化成表达至少一种选自CD80、CD86和CD103的人类标志物的分化MDSC，特别是分化成表达至少两种选自CD80、CD86和CD103的人类标志物的分化MDSC，更特别地，分化成表达人类标志物CD80、CD86和CD103的细胞；和/或分化成表达CD11b的分化MDSC。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其中所述非抑制性细胞分泌促炎细胞因子如IL6、IL12和TNF，以及没有或低水平的抗炎细胞因子如IL10和TGFβ。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其中所述非抑制性细胞表达iNOS。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其中所述非抑制性细胞不表达MHC II类标志物并表达标志物CD80-CD86。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其中所述非抑制性细胞表达自然杀伤(NK)细胞的至少一种标志物。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其中所述修饰的抗体或其抗原结合片段能够抑制巨噬细胞的M2极化，和/或促进促炎性M1型巨噬细胞。
本发明的修饰的抗体可以改变巨噬细胞极化以诱发促炎环境，即，它们可以抑制由M2型巨噬细胞提供的抗炎信号和/或促进由M1型巨噬细胞提供的促炎信号。该方法使得可以重建有利于T效应细胞作用的炎性环境，特别是在癌细胞消除中。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其中重链或其片段，特别是重链恒定结构域或其片段与免疫治疗剂连接。
出乎意料的是，发明人观察到，虽然所有测试的免疫治疗剂都能与它们的配体结合，但是当将测试的免疫治疗剂接枝到重链或其片段上时，被测试的免疫治疗剂保持其功能，而当接枝到轻链上时，被测试的免疫治疗剂不能保持其功能。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其中所述免疫治疗剂与所述抗体的重链恒定结构域或其片段的C末端连接。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其中所述免疫治疗剂与所述抗体的重链恒定结构域或其片段的N末端连接。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链，特别是所述轻链恒定结构域或其片段与免疫治疗剂连接。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其中所述免疫治疗剂与所述抗体的轻链恒定结构域的C-末端连接。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其中所述免疫治疗剂与所述抗体的轻链恒定结构域的N-末端连接。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其中所述免疫治疗剂选自：PD1、PDL1、PDL2、CTLA-4、CD80、CD86、CD28、4-1BB、4-1BBL、CD40、CD40L、ICOS、ICOS-L、OX40L、GITR、HVEM、BTLA、CD160、LIGHT、TNFRSF25、2B4、CD48、Tim1、Tim3、Tim4、Gal9、LAG-3、CD40、CD40L、CD70、CD27、VISTA、B7H3、B7H4(B7x)、TIGIT、CD112、HHLA2(B7-H7)、TMIGD2(CD28H)、嗜乳脂蛋白样2(BTNL2)、它们的变体和片段，特别是PDL1、PD1、CD80、CD86、OX40L、4-1BBL、ICOSL、它们的变体和片段，更特别是PD1、PDL1、CD80、4-1BBL、它们的变体和片段。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其中免疫治疗剂来自哺乳动物物种，特别是人。
人PD1的参考序列对应于序列SEQ ID NO：74。如上所述，PD1蛋白的四个剪接变体是已知的，包括PD1的可溶形式(Nielsen等，Cellular immunology，235：2，109-116，2005)。在本发明中，术语“PD1”涵盖了Nielsen等(2005)中描述的四个PD1变体。
人PDL1的参考序列对应于序列SEQ ID NO：75。
人CD80的参考序列对应于序列SEQ ID NO：76。
人OX40L的参考序列对应于序列SEQ ID NO：77。
人4-1BBL的参考序列对应于序列SEQ ID NO：78。
人ICOSL的参考序列对应于序列SEQ ID NO：79。
人CD86的参考序列对应于序列SEQ ID NO：80。
表5.PD1、PDL1、CD80、OX40L、4-1BBL、ICOSL和CD86的参考序列。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其中免疫治疗剂是蛋白质，所述蛋白质包含选自下组的序列或由选自下组的序列组成：SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：76、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：79和SEQ ID NO：80，优选选自：SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：76和SEQ ID NO：78。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其中免疫治疗剂是蛋白质，所述蛋白质包含选自下组的序列或由选自下组的序列组成：SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：76、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：79和SEQ ID NO：80，优选选自：SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：76和SEQ ID NO：78，所述蛋白质与所述抗体的重链恒定结构域或其片段的C末端连接。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其中免疫治疗剂是蛋白质，所述蛋白质包含选自下组的序列或由选自下组的序列组成：SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：76、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：79和SEQ ID NO：80，优选选自：SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：76和SEQ ID NO：78，所述蛋白质与所述抗体的轻链恒定结构域或其片段的C末端连接。
在一个实施方案中，本发明涉及如上文定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其中所述免疫治疗剂包含蛋白质或由蛋白质组成，所述蛋白质选自PD1、PDL1、PDL2、CTLA-4、CD80、CD86、CD28、4-1BB、4-1BBL、CD40、CD40L、ICOS、ICOS-L、OX40L、GITR、HVEM、BTLA、CD160、LIGHT、TNFRSF25、2B4、CD48、Tim1、Tim3、Tim4、Gal9、LAG-3、CD40、CD40L、CD70、CD27、VISTA、B7H3、B7H4(B7x)、TIGIT、CD112、HHLA2(B7-H7)、TMIGD2(CD28H)、嗜乳脂蛋白样2(BTNL2)、它们的变体和片段，优选其胞外域(或ECD)，
特别地，所述蛋白质选自PDL1、PD1、CD80、CD86、OX40L、4-1BBL、ICOSL、它们的变体和片段，优选其胞外域，或由其胞外域组成的多肽，
更特别地，所述蛋白质选自PD1、PDL1、CD80、4-1BBL、它们的变体和片段，优选其胞外域，或由其胞外域组成的多肽。
特别地，根据本发明的免疫治疗剂的片段的尺寸小于或等于500、400、300、200、100或50个氨基酸，或由小于或等于500、400、300、200、100或50个氨基酸组成，和/或，优选地，至少具有结合其配体的能力。
特别地，根据本发明的免疫治疗剂的片段的尺寸为80至500，特别是100至500，特别是100至300，特别是80至160，更特别是100至200个氨基酸(或由80至500个氨基酸、尤其是100至500个氨基酸、特别是100至300个氨基酸、特别是80至160个氨基酸、更特别是100至200个氨基酸组成)，并且至少具有结合其配体的能力。
特别地，根据本发明的免疫治疗剂(即PD1、PDL1、CD80、OX40L、4-1BBL、ICOSL和CD86)的片段分别对应于SEQ ID No.74、SEQ ID No.75、SEQ ID No.76、SEQ ID No.77、SEQID No.78、SEQ ID No.79和SEQ ID No.80所示的氨基酸序列的至少30％、更优选至少40％、最优选至少50％的片段。
特别地，根据本发明的免疫治疗剂的片段，即PD1、PDL1、CD80、OX40L、4-1BBL、ICOSL和CD86的胞外域的片段，分别对应于SEQ ID No.81、SEQ ID No.82、SEQ ID No.83、SEQ ID No.84、SEQ ID No.85、SEQ ID No.86、SEQ ID No.87和SEQ ID No.88所示的氨基酸序列的至少30％、更优选至少40％、更优选至少50％、更优选至少60％、最优选至少70％的片段。
在一个特定的实施方案中，免疫治疗剂CD80、PD1、PDL1和4-1BBL的片段可以包含下表所示的片段或由其组成：
表6.本发明的免疫治疗剂的几个活性片段的描述以及它们在描述的CD80、PD1、PDL1和4-1BBL的序列中的位置。
特别地，根据本发明的免疫治疗剂(即PD1、PDL1、CD80、OX40L、4-1BBL、ICOSL和CD86)的变体分别是SEQ ID No.74、SEQ ID No.75、SEQ ID No.76、SEQ ID No.77、SEQ IDNo.78、SEQ ID No.79和SEQ ID No.80的取代变体，并且至少具有结合其配体的能力。
特别地，根据本发明的免疫治疗剂(即PD1、PDL1、CD80、OX40L、4-1BBL、ICOSL和CD86)的变体分别与SEQ ID No.74、SEQ ID No.75、SEQ ID No.76、SEQ ID No.77、SEQ IDNo.78、SEQ ID No.79和SEQ ID No.80在整个长度上具有至少70％、更优选至少80％、还更优选至少90％，最优选至少95％的同一性。
特别地，根据本发明的免疫治疗剂的变体(即PD1、PDL1、CD80、OX40L、4-1BBL、ICOSL和CD86的胞外域的变体)分别与SEQ ID No.81、SEQ ID No.82、SEQID No.83、SEQ IDNo.84、SEQ ID No.85、SEQ ID No.86、SEQ ID No.87和SEQ ID No.88在整个长度上具有至少70％、更优选至少80％、还更优选至少90％，最优选至少95％的同一性。
特别地，本发明的免疫治疗剂的变体包含如下序列或由如下序列组成：与天然免疫治疗剂的序列在整个长度上具有至少80％同一性并具有天然免疫治疗剂的至少一种生物活性的序列，特别地，所述天然免疫治疗剂的序列是SEQ ID No.74、SEQ ID No.75、SEQID No.76、SEQ ID No.77、SEQ ID No.78、SEQ ID No.79和SEQ ID No.80的氨基酸序列。在一个替代实施方案中，天然免疫治疗剂的序列可以是通过比对免疫治疗剂的已知可变形式而形成的共有序列。
特别地，本发明的免疫治疗剂的变体包含如下序列或由如下序列组成：与天然免疫治疗剂的序列在整个长度上具有至少80％，尤其是至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，甚至更特别是至少99％同一性的序列。
例如使用Needleman和Wunsch 1970的算法，根据要比较的序列的整体比对，即基于序列在其整个长度上的比对，确定在本发明的描述中所提及的同一性百分比。例如，可以使用Needle软件通过使用等于10.0的参数“Gap open”、等于0.5的参数“Gap Extend”和矩阵“BLOSUM 62”来完成此序列比较。诸如Needle之类的软件可在全球网站ebi.ac.uk上在“needle”的名称下获得。
在本申请的实施例中使用的人PD1的胞外域的参考序列对应于与SEQ ID NO：81相关的序列。
在本申请的实施例中使用的人PDL1的胞外域的参考序列对应于与SEQ ID NO：82相关的序列。
在本申请的实施例中使用的人CD80的胞外域的参考序列对应于与SEQ ID NO：83相关的序列。
在本申请的实施例中使用的人OX40L的胞外域的参考序列对应于与SEQ ID NO：84相关的序列。
在本申请的实施例中使用的人4-1BBL的胞外域的参考序列对应于与SEQ ID NO：85相关的序列。
在本申请的实施例中使用的人ICOSL的胞外域的参考序列对应于与SEQ ID NO：86相关的序列。
在本申请的实施例中使用的人CD86的胞外域的参考序列对应于与SEQ ID NO：87相关的序列。
表7.PD1、PDL1、CD80、OX40L、4-1BBL、ICOSL和CD86的ECD的参考序列：表6中所述的功能性活性结构域以粗体显示或带下划线。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其中所述免疫治疗剂是蛋白质，所述蛋白质包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQ IDNO：86和SEQ ID NO：87，优选选自：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83和SEQ IDNO：85。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其中所述免疫治疗剂是蛋白质，所述蛋白质包含SEQ ID NO：88的序列或由SEQ ID NO：88的序列组成。
表8.PD1的ECD的长版：IgV结构域以粗体显示。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其中所述免疫治疗剂是蛋白质，所述蛋白质包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQ IDNO：86、SEQ ID NO：87和SEQ ID NO：88，优选选自：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ IDNO：83、SEQ ID NO：85和SEQ ID NO：88，所述蛋白质与所述抗体的重链恒定结构域或其片段的C-末端连接。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其中所述免疫治疗剂是蛋白质，所述蛋白质包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQ IDNO：86、SEQ ID NO：87和SEQ ID NO：88，优选选自：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ IDNO：83、SEQ ID NO：85和SEQ ID NO：88，所述蛋白质与所述抗体的轻链恒定结构域的C-末端连接。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含：
-重链可变结构域，其包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：28、SEQ IDNO：29和SEQ ID NO：30，和
-轻链可变结构域，其包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32和SEQ ID NO：33，
特别是，
-重链可变结构域，其包含SEQ ID NO：24所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：24所示的氨基酸序列组成，和
-轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO：31所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：31所示的氨基酸序列组成，
或
-重链可变结构域，其包含SEQ ID NO：25所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：25所示的氨基酸序列组成，和
-轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO：32所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：32所示的氨基酸序列组成，
或
-重链可变结构域，其包含SEQ ID NO：25所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：25所示的氨基酸序列组成，和
-轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO：33所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：33所示的氨基酸序列组成，
或
-重链可变结构域，其包含SEQ ID NO：26所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：26所示的氨基酸序列组成，和
-轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO：32所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：32所示的氨基酸序列组成，
或
-重链可变结构域，其包含SEQ ID NO：26所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：26所示的氨基酸序列组成，和
-轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO：33所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：33所示的氨基酸序列组成，
或
-重链可变结构域，其包含SEQ ID NO：27所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：27所示的氨基酸序列组成，和
-轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO：32所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：32所示的氨基酸序列组成，
或
-重链可变结构域，其包含SEQ ID NO：27所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：27所示的氨基酸序列组成，和
-轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO：33所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：33所示的氨基酸序列组成，
或
-重链可变结构域，其包含SEQ ID NO：28所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：28所示的氨基酸序列组成，和
-轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO：32所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：32所示的氨基酸序列组成，
或
-重链可变结构域，其包含SEQ ID NO：28所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：28所示的氨基酸序列组成，和
-轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO：33所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：33所示的氨基酸序列组成，
或
-重链可变结构域，其包含SEQ ID NO：29所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：29所示的氨基酸序列组成，和
-轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO：32所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：32所示的氨基酸序列组成，
或
-重链可变结构域，其包含SEQ ID NO：29所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：29所示的氨基酸序列组成，和
-轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO：33所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：33所示的氨基酸序列组成，
或
-重链可变结构域，其包含SEQ ID NO：30所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：30所示的氨基酸序列组成，和
-轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO：32所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：32所示的氨基酸序列组成，
或
-重链可变结构域，其包含SEQ ID NO：30所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：30所示的氨基酸序列组成，和
-轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO：33所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：33所示的氨基酸序列组成，
其中，重链恒定结构域或其片段在其C末端连接至免疫治疗剂，该免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：PDL1，PD1，CD80，CD86，OX40L，4-1BBL，ICOSL，它们的变体和片段，优选它们的胞外域(ECD)，
尤其是选自PD1，PDL1，CD80、4-1BBL，它们的变体和片段，优选它们的胞外域。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体，所述修饰的抗SIRPa抗体包含：
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：56或由氨基酸序列SEQ ID NO：56组成，所述重链在其C末端与蛋白质连接，所述蛋白质包含免疫治疗剂的片段(优选胞外域(或ECD))或由免疫治疗剂的片段(优选胞外域(或ECD))组成，所述免疫治疗剂选自：PDL1、PD1、CD80、CD86、OX40L、4-1BBL、ICOSL及它们的变体，更特别地选自：PD1、PDL1、CD80、4-1BBL及它们的变体，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：57或由氨基酸序列SEQ ID NO：57组成，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：36或由氨基酸序列SEQ ID NO：36组成，所述重链在其C末端与蛋白质连接，所述蛋白质包含免疫治疗剂的片段(优选胞外域(或ECD))或由免疫治疗剂的片段(优选胞外域(或ECD))组成，所述免疫治疗剂选自：PDL1、PD1、CD80、CD86、OX40L、4-1BBL、ICOSL及它们的变体，更特别地选自：PD1、PDL1、CD80、4-1BBL及它们的变体，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：43或由氨基酸序列SEQ ID NO：43组成，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：37或由氨基酸序列SEQ ID NO：37组成，所述重链在其C末端与蛋白质连接，所述蛋白质包含免疫治疗剂的片段(优选胞外域(或ECD))或由免疫治疗剂的片段(优选胞外域(或ECD))组成，所述免疫治疗剂选自：PDL1、PD1、CD80、CD86、OX40L、4-1BBL、ICOSL及它们的变体，更特别地选自：PD1、PDL1、CD80、4-1BBL及它们的变体，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：44或由氨基酸序列SEQ ID NO：44组成，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：37或由氨基酸序列SEQ ID NO：37组成，所述重链在其C末端与蛋白质连接，所述蛋白质包含免疫治疗剂的片段(优选胞外域(或ECD))或由免疫治疗剂的片段(优选胞外域(或ECD))组成，所述免疫治疗剂选自：PDL1、PD1、CD80、CD86、OX40L、4-1BBL、ICOSL及它们的变体，更特别地选自：PD1、PDL1、CD80、4-1BBL及它们的变体，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：45或由氨基酸序列SEQ ID NO：45组成，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：38或由氨基酸序列SEQ ID NO：38组成，所述重链在其C末端与蛋白质连接，所述蛋白质包含免疫治疗剂的片段(优选胞外域(或ECD))或由免疫治疗剂的片段(优选胞外域(或ECD))组成，所述免疫治疗剂选自：PDL1、PD1、CD80、CD86、OX40L、4-1BBL、ICOSL及它们的变体，更特别地选自：PD1、PDL1、CD80、4-1BBL及它们的变体，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：44或由氨基酸序列SEQ ID NO：44组成，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：38或由氨基酸序列SEQ ID NO：38组成，所述重链在其C末端与蛋白质连接，所述蛋白质包含免疫治疗剂的片段(优选胞外域(或ECD))或由免疫治疗剂的片段(优选胞外域(或ECD))组成，所述免疫治疗剂选自：PDL1、PD1、CD80、CD86、OX40L、4-1BBL、ICOSL及它们的变体，更特别地选自：PD1、PDL1、CD80、4-1BBL及它们的变体，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：45或由氨基酸序列SEQ ID NO：45组成，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：39或由氨基酸序列SEQ ID NO：39组成，所述重链在其C末端与蛋白质连接，所述蛋白质包含免疫治疗剂的片段(优选胞外域(或ECD))或由免疫治疗剂的片段(优选胞外域(或ECD))组成，所述免疫治疗剂选自：PDL1、PD1、CD80、CD86、OX40L、4-1BBL、ICOSL及它们的变体，更特别地选自：PD1、PDL1、CD80、4-1BBL及它们的变体，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：44或由氨基酸序列SEQ ID NO：44组成，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：39或由氨基酸序列SEQ ID NO：39组成，所述重链在其C末端与蛋白质连接，所述蛋白质包含免疫治疗剂的片段(优选胞外域(或ECD))或由免疫治疗剂的片段(优选胞外域(或ECD))组成，所述免疫治疗剂选自：PDL1、PD1、CD80、CD86、OX40L、4-1BBL、ICOSL及它们的变体，更特别地选自：PD1、PDL1、CD80、4-1BBL及它们的变体，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：45或由氨基酸序列SEQ ID NO：45组成，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：40或由氨基酸序列SEQ ID NO：40组成，所述重链在其C末端与蛋白质连接，所述蛋白质包含免疫治疗剂的片段(优选胞外域(或ECD))或由免疫治疗剂的片段(优选胞外域(或ECD))组成，所述免疫治疗剂选自：PDL1、PD1、CD80、CD86、OX40L、4-1BBL、ICOSL及它们的变体，更特别地选自：PD1、PDL1、CD80、4-1BBL及它们的变体，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：44或由氨基酸序列SEQ ID NO：44组成，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：40或由氨基酸序列SEQ ID NO：40组成，所述重链在其C末端与蛋白质连接，所述蛋白质包含免疫治疗剂的片段(优选胞外域(或ECD))或由免疫治疗剂的片段(优选胞外域(或ECD))组成，所述免疫治疗剂选自：PDL1、PD1、CD80、CD86、OX40L、4-1BBL、ICOSL及它们的变体，更特别地选自：PD1、PDL1、CD80、4-1BBL及它们的变体，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：45或由氨基酸序列SEQ ID NO：45组成，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：41或由氨基酸序列SEQ ID NO：41组成，所述重链在其C末端与蛋白质连接，所述蛋白质包含免疫治疗剂的片段(优选胞外域(或ECD))或由免疫治疗剂的片段(优选胞外域(或ECD))组成，所述免疫治疗剂选自：PDL1、PD1、CD80、CD86、OX40L、4-1BBL、ICOSL及它们的变体，更特别地选自：PD1、PDL1、CD80、4-1BBL及它们的变体，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：44或由氨基酸序列SEQ ID NO：44组成，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：41或由氨基酸序列SEQ ID NO：41组成，所述重链在其C末端与蛋白质连接，所述蛋白质包含免疫治疗剂的片段(优选胞外域(或ECD))或由免疫治疗剂的片段(优选胞外域(或ECD))组成，所述免疫治疗剂选自：PDL1、PD1、CD80、CD86、OX40L、4-1BBL、ICOSL及它们的变体，更特别地选自：PD1、PDL1、CD80、4-1BBL及它们的变体，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：45或由氨基酸序列SEQ ID NO：45组成，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：42或由氨基酸序列SEQ ID NO：42组成，所述重链在其C末端与蛋白质连接，所述蛋白质包含免疫治疗剂的片段(优选胞外域(或ECD))或由免疫治疗剂的片段(优选胞外域(或ECD))组成，所述免疫治疗剂选自：PDL1、PD1、CD80、CD86、OX40L、4-1BBL、ICOSL及它们的变体，更特别地选自：PD1、PDL1、CD80、4-1BBL及它们的变体，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：44或由氨基酸序列SEQ ID NO：44组成，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：42或由氨基酸序列SEQ ID NO：42组成，所述重链在其C末端与蛋白质连接，所述蛋白质包含免疫治疗剂的片段(优选胞外域(或ECD))或由免疫治疗剂的片段(优选胞外域(或ECD))组成，所述免疫治疗剂选自：PDL1、PD1、CD80、CD86、OX40L、4-1BBL、ICOSL及它们的变体，更特别地选自：PD1、PDL1、CD80、4-1BBL及它们的变体，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：45或由氨基酸序列SEQ ID NO：45组成。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体，所述修饰的抗SIRPa抗体包含：
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：56或由氨基酸序列SEQ ID NO：56组成，所述重链在其C末端与蛋白质连接，所述蛋白质包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQID NO：86、SEQ ID NO：87和SEQ ID NO：88，优选选自：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ IDNO：83和SEQ ID NO：85，以及SEQ ID NO：88，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：57或由氨基酸序列SEQ ID NO：57组成，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：36或由氨基酸序列SEQ ID NO：36组成，所述重链在其C末端与蛋白质连接，所述蛋白质包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQID NO：86、SEQ ID NO：87和SEQ ID NO：88，优选选自：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ IDNO：83和SEQ ID NO：85，以及SEQ ID NO：88，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：43或由氨基酸序列SEQ ID NO：43组成，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：37或由氨基酸序列SEQ ID NO：37组成，所述重链在其C末端与蛋白质连接，所述蛋白质包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQID NO：86、SEQ ID NO：87和SEQ ID NO：88，优选选自：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ IDNO：83、SEQ ID NO：85，以及SEQ ID NO：88，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：44或由氨基酸序列SEQ ID NO：44组成，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：37或由氨基酸序列SEQ ID NO：37组成，所述重链在其C末端与蛋白质连接，所述蛋白质包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQID NO：86、SEQ ID NO：87和SEQ ID NO：88，优选选自：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ IDNO：83、SEQ ID NO：85，以及SEQ ID NO：88，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：45或由氨基酸序列SEQ ID NO：45组成，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：38或由氨基酸序列SEQ ID NO：38组成，所述重链在其C末端与蛋白质连接，所述蛋白质包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQID NO：86、SEQ ID NO：87和SEQ ID NO：88，优选选自：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ IDNO：83、SEQ ID NO：85，以及SEQ ID NO：88，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：44或由氨基酸序列SEQ ID NO：44组成，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：38或由氨基酸序列SEQ ID NO：38组成，所述重链在其C末端与蛋白质连接，所述蛋白质包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQID NO：86、SEQ ID NO：87和SEQ ID NO：88，优选选自：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ IDNO：83、SEQ ID NO：85，以及SEQ ID NO：88，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：45或由氨基酸序列SEQ ID NO：45组成，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：39或由氨基酸序列SEQ ID NO：39组成，所述重链在其C末端与蛋白质连接，所述蛋白质包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQID NO：86、SEQ ID NO：87和SEQ ID NO：88，优选选自：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ IDNO：83、SEQ ID NO：85，以及SEQ ID NO：88，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：44或由氨基酸序列SEQ ID NO：44组成，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：39或由氨基酸序列SEQ ID NO：39组成，所述重链在其C末端与蛋白质连接，所述蛋白质包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQID NO：86、SEQ ID NO：87和SEQ ID NO：88，优选选自：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ IDNO：83、SEQ ID NO：85，以及SEQ ID NO：88，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：45或由氨基酸序列SEQ ID NO：45组成，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：40或由氨基酸序列SEQ ID NO：40组成，所述重链在其C末端与蛋白质连接，所述蛋白质包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQID NO：86、SEQ ID NO：87和SEQ ID NO：88，优选选自：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ IDNO：83、SEQ ID NO：85，以及SEQ ID NO：88，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：44或由氨基酸序列SEQ ID NO：44组成，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：40或由氨基酸序列SEQ ID NO：40组成，所述重链在其C末端与蛋白质连接，所述蛋白质包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQID NO：86、SEQ ID NO：87和SEQ ID NO：88，优选选自：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ IDNO：83、SEQ ID NO：85，以及SEQ ID NO：88，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：45或由氨基酸序列SEQ ID NO：45组成，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：41或由氨基酸序列SEQ ID NO：41组成，所述重链在其C末端与蛋白质连接，所述蛋白质包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQID NO：86、SEQ ID NO：87和SEQ ID NO：88，优选选自：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ IDNO：83、SEQ ID NO：85，以及SEQ ID NO：88，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：44或由氨基酸序列SEQ ID NO：44组成，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：41或由氨基酸序列SEQ ID NO：41组成，所述重链在其C末端与蛋白质连接，所述蛋白质包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQID NO：86、SEQ ID NO：87和SEQ ID NO：88，优选选自：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ IDNO：83、SEQ ID NO：85，以及SEQ ID NO：88，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：45或由氨基酸序列SEQ ID NO：45组成，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：42或由氨基酸序列SEQ ID NO：42组成，所述重链在其C末端与蛋白质连接，所述蛋白质包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQID NO：86、SEQ ID NO：87和SEQ ID NO：88，优选选自：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ IDNO：83、SEQ ID NO：85，以及SEQ ID NO：88，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：44或由氨基酸序列SEQ ID NO：44组成，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：42或由氨基酸序列SEQ ID NO：42组成，所述重链在其C末端与蛋白质连接，所述蛋白质包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQID NO：86、SEQ ID NO：87和SEQ ID NO：88，优选选自：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ IDNO：85、SEQ ID NO：85，以及SEQ ID NO：88，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：45或由氨基酸序列SEQ ID NO：45组成。
特别地，在本发明中，修饰的抗体通过接头与免疫治疗剂连接。换句话说，本发明涉及修饰的抗体，其中其链或片段，优选其重链或其片段，更优选其重链恒定结构域或其片段，特别地通过接头与免疫治疗剂连接。如本文所用，术语“接头”是指连接免疫治疗剂和抗SIRPa免疫球蛋白序列部分的至少一个氨基酸的序列。这样的接头可用于防止空间位阻。在一些实施方案中，接头具有3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个氨基酸残基。然而，上限不是关键性的，而是出于例如关于此类多肽的生物药物生产方便的原因而选择。接头序列可以是天然存在的序列或非天然存在的序列。如果用于治疗目的，则优选该接头在施用免疫粘附素的受试者中是非免疫原性的。一组有用的接头序列是如WO 96/34103和WO 94/04678中所述的衍生自重链抗体的铰链区的接头。其他例子有聚丙氨酸接头序列。接头序列的进一步优选实例是不同长度的甘氨酸/丝氨酸(Gly/Ser)接头，包括：(gly4ser)3(SEQ ID NO：89，GGGGS GGGGS GGGGS)、(gly4ser)4(SEQ ID NO：90，GGGGS GGGGS GGGGS GGGGS)、(gly4ser)(SEQ ID NO：91，GGGGS)、(gly3ser)(SEQ ID NO：92，GGGS)、(gly3)(GGG)、(gly2ser)(GGS)和(gly3ser2)3(SEQ IDNO：93，GGGSS GGGSS GGGSS)，特别是(gly4ser)3。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体(或其片段)，其中所述抗体(或其片段)通过接头序列连接至免疫治疗剂，所述接头序列优选地选自：SEQ IDNO：89、SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：92、GGG、GGS和SEQ ID NO：93，特别是SEQID NO：89。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其片段，其中所述抗体的重链(或其片段)，特别是重链恒定结构域或其片段通过接头序列连接至免疫治疗剂，所述接头序列优选选自SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：92、GGG、GGS和SEQ ID NO：93，特别是SEQ ID NO：89。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其片段，其中所述抗体的轻链(或其片段)通过接头序列连接至免疫治疗剂，所述接头序列优选选自：SEQID NO：89、SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：92、GGG、GGS和SEQ ID NO：93，特别是SEQ ID NO：89。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体，所述修饰的抗SIRPa抗体包含：
-重链，其包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ IDNO：94、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：99、SEQ IDNO：100和SEQ ID NO：178，优选选自：SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：96、SEQ IDNO：98和SEQ ID NO：178，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：57或由氨基酸序列SEQ ID NO：57组成，
或
-重链，其包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ IDNO：101、SEQ ID NO：102、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：106、SEQ ID NO：107和SEQ ID NO：179，优选选自：SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：102、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：105和SEQ ID NO：179，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：43或由氨基酸序列SEQ ID NO：43组成，
或
-重链，其包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ IDNO：108、SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：110、SEQ ID NO：111、SEQ ID NO：112、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：114和SEQ ID NO：180，优选选自：SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：110、SEQ ID NO：112和SEQ ID NO：180，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：44或由氨基酸序列SEQ ID NO：44组成，
或
-重链，其包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ IDNO：108、SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：110、SEQ ID NO：111、SEQ ID NO：112、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：114和SEQ ID NO：180，优选选自：SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：110、SEQ ID NO：112和SEQ ID NO：180，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：45或由氨基酸序列SEQ ID NO：45组成，
或
-重链，其包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ IDNO：115、SEQ ID NO：116、SEQ ID NO：117、SEQ ID NO：118、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：120、SEQ ID NO：121和SEQ ID NO：181，优选选自：SEQ ID NO：115、SEQ ID NO：116、SEQ ID NO：117、SEQ ID NO：119和SEQ ID NO：181，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：44或由氨基酸序列SEQ ID NO：44组成，
或
-重链，其包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ IDNO：115、SEQ ID NO：116、SEQ ID NO：117、SEQ ID NO：118、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：120、SEQ ID NO：121和SEQ ID NO：181，优选选自：SEQ ID NO：115、SEQ ID NO：116、SEQ ID NO：117、SEQ ID NO：119和SEQ ID NO：181，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：45或由氨基酸序列SEQ ID NO：45组成，
或
-重链，其包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ IDNO：122、SEQ ID NO：123、SEQ ID NO：124、SEQ ID NO：125、SEQ ID NO：126、SEQ ID NO：127、SEQ ID NO：128和SEQ ID NO：182，优选选自：SEQ ID NO：122、SEQ ID NO：123、SEQ ID NO：124、SEQ ID NO：126和SEQ ID NO：182，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：44或由氨基酸序列SEQ ID NO：44组成，
或
-重链，其包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ IDNO：122、SEQ ID NO：123、SEQ ID NO：124、SEQ ID NO：125、SEQ ID NO：126、SEQ ID NO：127、SEQ ID NO：128和SEQ ID NO：182，优选选自：SEQ ID NO：122、SEQ ID NO：123、SEQ ID NO：124、SEQ ID NO：126和SEQ ID NO：182，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：45或由氨基酸序列SEQ ID NO：45组成，
或
-重链，其包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ IDNO：129、SEQ ID NO：130、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：132、SEQ ID NO：133、SEQ ID NO：134、SEQ ID NO：135和SEQ ID NO：183，优选选自：SEQ ID NO：129、SEQ ID NO：130、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133和SEQ ID NO：183，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：44或由氨基酸序列SEQ ID NO：44组成，
或
-重链，其包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ IDNO：129、SEQ ID NO：130、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：132、SEQ ID NO：133、SEQ ID NO：134、SEQ ID NO：135和SEQ ID NO：183，优选选自：SEQ ID NO：129、SEQ ID NO：130、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133和SEQ ID NO：183，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：45或由氨基酸序列SEQ ID NO：45组成，
或
-重链，其包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ IDNO：136、SEQ ID NO：137、SEQ ID NO：138、SEQ ID NO：139、SEQ ID NO：140、SEQ ID NO：141、SEQ ID NO：142和SEQ ID NO：184，优选选自：SEQ ID NO：136、SEQ ID NO：137、SEQ ID NO：138、SEQ ID NO：140和SEQ ID NO：184，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：44或由氨基酸序列SEQ ID NO：44组成，
或
-重链，其包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ IDNO：136、SEQ ID NO：137、SEQ ID NO：138、SEQ ID NO：139、SEQ ID NO：140、SEQ ID NO：141、SEQ ID NO：142和SEQ ID NO：184，优选选自：SEQ ID NO：136、SEQ ID NO：137、SEQ ID NO：138、SEQ ID NO：140和SEQ ID NO：184，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：45或由氨基酸序列SEQ ID NO：45组成，
或
-重链，其包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ IDNO：143、SEQ ID NO：144、SEQ ID NO：145、SEQ ID NO：146、SEQ ID NO：147、SEQ ID NO：148、SEQ ID NO：149和SEQ ID NO：185，优选选自：SEQ ID NO：143、SEQ ID NO：144、SEQ ID NO：145、SEQ ID NO：147和SEQ ID NO：185，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：44或由氨基酸序列SEQ ID NO：44组成，
或
-重链，其包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ IDNO：143、SEQ ID NO：144、SEQ ID NO：145、SEQ ID NO：146、SEQ ID NO：147、SEQ ID NO：148、SEQ ID NO：149和SEQ ID NO：185，优选选自：SEQ ID NO：143、SEQ ID NO：144、SEQ ID NO：145、SEQ ID NO：147和SEQ ID NO：185，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：45或由氨基酸序列SEQ ID NO：45组成。
表9.本发明的修饰的抗体的具体重链。从N-末端到C-末端，修饰的重链由通过接头(gly4ser)3连接至免疫治疗剂的胞外域的重链组成。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体，所述修饰的抗SIRPa抗体包含：
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：56或由氨基酸序列SEQ ID NO：56组成，和
-轻链，所述轻链包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ ID NO：150、SEQ ID NO：151、SEQ ID NO：152、SEQ ID NO：153、SEQ ID NO：154、SEQ IDNO：155和SEQ ID NO：156，优选选自：SEQ ID NO：150、SEQ ID NO：151、SEQ ID NO：152和SEQID NO：154，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：36或由氨基酸序列SEQ ID NO：36组成，和
-轻链，所述轻链包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ ID NO：157、SEQ ID NO：158、SEQ ID NO：159、SEQ ID NO：160、SEQ ID NO：161、SEQ IDNO：162和SEQ ID NO：163，优选选自：SEQ ID NO：157、SEQ ID NO：158、SEQ ID NO：159和SEQID NO：161，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：37或由氨基酸序列SEQ ID NO：37组成，和
-轻链，所述轻链包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ ID NO：164、SEQ ID NO：165、SEQ ID NO：166、SEQ ID NO：167、SEQ ID NO：168、SEQ IDNO：169和SEQ ID NO：170，优选选自：SEQ ID NO：164、SEQ ID NO：165、SEQ ID NO：166和SEQID NO：168，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：37或由氨基酸序列SEQ ID NO：37组成，和
-轻链，所述轻链包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ ID NO：171、SEQ ID NO：172、SEQ ID NO：173、SEQ ID NO：174、SEQ ID NO：175、SEQ IDNO：176和SEQ ID NO：177，优选选自：SEQ ID NO：171、SEQ ID NO：172、SEQ ID NO：173和SEQID NO：175，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：38或由氨基酸序列SEQ ID NO：38组成，和
-轻链，所述轻链包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ ID NO：164、SEQ ID NO：165、SEQ ID NO：166、SEQ ID NO：167、SEQ ID NO：168、SEQ IDNO：169和SEQ ID NO：170，优选选自：SEQ ID NO：164、SEQ ID NO：165、SEQ ID NO：166和SEQID NO：168，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：38或由氨基酸序列SEQ ID NO：38组成，和
-轻链，所述轻链包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ ID NO：171、SEQ ID NO：172、SEQ ID NO：173、SEQ ID NO：174、SEQ ID NO：175、SEQ IDNO：176和SEQ ID NO：177，优选选自：SEQ ID NO：171、SEQ ID NO：172、SEQ ID NO：173和SEQID NO：175，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：39或由氨基酸序列SEQ ID NO：39组成，和
-轻链，所述轻链包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ ID NO：164、SEQ ID NO：165、SEQ ID NO：166、SEQ ID NO：167、SEQ ID NO：168、SEQ IDNO：169和SEQ ID NO：170，优选选自：SEQ ID NO：164、SEQ ID NO：165、SEQ ID NO：166和SEQID NO：168，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：39或由氨基酸序列SEQ ID NO：39组成，和
-轻链，所述轻链包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ ID NO：171、SEQ ID NO：172、SEQ ID NO：173、SEQ ID NO：174、SEQ ID NO：175、SEQ IDNO：176和SEQ ID NO：177，优选选自：SEQ ID NO：171、SEQ ID NO：172、SEQ ID NO：173和SEQID NO：175，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：40或由氨基酸序列SEQ ID NO：40组成，和
-轻链，所述轻链包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ ID NO：164、SEQ ID NO：165、SEQ ID NO：166、SEQ ID NO：167、SEQ ID NO：168、SEQ IDNO：169和SEQ ID NO：170，优选选自：SEQ ID NO：164、SEQ ID NO：165、SEQ ID NO：166和SEQID NO：168，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：40或由氨基酸序列SEQ ID NO：40组成，和
-轻链，所述轻链包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：
SEQ ID NO：171、SEQ ID NO：172、SEQ ID NO：173、SEQ ID NO：174、SEQ ID NO：175、SEQ ID NO：176和SEQ ID NO：177，优选选自：SEQ ID NO：171、SEQ ID NO：172、SEQ IDNO：173和SEQ ID NO：175，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：41或由氨基酸序列SEQ ID NO：41组成，和
-轻链，所述轻链包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ ID NO：164、SEQ ID NO：165、SEQ ID NO：166、SEQ ID NO：167、SEQ ID NO：168、SEQ IDNO：169和SEQ ID NO：170，优选选自：SEQ ID NO：164、SEQ ID NO：165、SEQ ID NO：166和SEQID NO：168，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：41或由氨基酸序列SEQ ID NO：41组成，和
-轻链，所述轻链包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ ID NO：171、SEQ ID NO：172、SEQ ID NO：173、SEQ ID NO：174、SEQ ID NO：175、SEQ IDNO：176和SEQ ID NO：177，优选选自：SEQ ID NO：171、SEQ ID NO：172、SEQ ID NO：173和SEQID NO：175，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：42或由氨基酸序列SEQ ID NO：42组成，和
-轻链，所述轻链包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ ID NO：164、SEQ ID NO：165、SEQ ID NO：166、SEQ ID NO：167、SEQ ID NO：168、SEQ IDNO：169和SEQ ID NO：170，优选选自：SEQ ID NO：164、SEQ ID NO：165、SEQ ID NO：166和SEQID NO：168，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：42或由氨基酸序列SEQ ID NO：42组成，和
-轻链，所述轻链包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ ID NO：171、SEQ ID NO：172、SEQ ID NO：173、SEQ ID NO：174、SEQ ID NO：175、SEQ IDNO：176和SEQ ID NO：177，优选选自：SEQ ID NO：171、SEQ ID NO：172、SEQ ID NO：173和SEQID NO：175。
表10.本发明的修饰的抗体的具体轻链。从N-末端到C-末端，修饰的轻链由通过接头(gly4ser)3连接至免疫治疗剂的胞外域的轻链组成。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含：
-重链，所述重链包含SEQ ID NO：143所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：143所示的氨基酸序列组成，和
-轻链，所述轻链包含SEQ ID NO：45所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：45所示的氨基酸序列组成，
或
-重链，所述重链包含SEQ ID NO：144所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：144所示的氨基酸序列组成，和
-轻链，所述轻链包含SEQ ID NO：45所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：45所示的氨基酸序列组成，
或
-重链，所述重链包含SEQ ID NO：145所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：145所示的氨基酸序列组成，和
-轻链，所述轻链包含SEQ ID NO：45所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：45所示的氨基酸序列组成，
或
-重链，所述重链包含SEQ ID NO：146所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：146所示的氨基酸序列组成，和
-轻链，所述轻链包含SEQ ID NO：45所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：45所示的氨基酸序列组成，
或
-重链，所述重链包含SEQ ID NO：147所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：147所示的氨基酸序列组成，和
-轻链，所述轻链包含SEQ ID NO：45所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：45所示的氨基酸序列组成，
或
-重链，所述重链包含SEQ ID NO：148所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：148所示的氨基酸序列组成，和
-轻链，所述轻链包含SEQ ID NO：45所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：45所示的氨基酸序列组成，
或
-重链，所述重链包含SEQ ID NO：149所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：149所示的氨基酸序列组成，和
-轻链，所述轻链包含SEQ ID NO：45所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：45所示的氨基酸序列组成，
或
-重链，所述重链包含SEQ ID NO：185所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：185所示的氨基酸序列组成，和
-轻链，所述轻链包含SEQ ID NO：45所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：45所示的氨基酸序列组成，
或
-重链，所述重链包含SEQ ID NO：42所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：42所示的氨基酸序列组成，和
-轻链，所述轻链包含SEQ ID NO：171所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：171所示的氨基酸序列组成，
或
-重链，所述重链包含SEQ ID NO：42所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：42所示的氨基酸序列组成，和
-轻链，所述轻链包含SEQ ID NO：172所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：172所示的氨基酸序列组成，
或
-重链，所述重链包含SEQ ID NO：42所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：42所示的氨基酸序列组成，和
-轻链，所述轻链包含SEQ ID NO：173所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：173所示的氨基酸序列组成，
或
-重链，所述重链包含SEQ ID NO：42所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：42所示的氨基酸序列组成，和
-轻链，所述轻链包含SEQ ID NO：174所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：174所示的氨基酸序列组成，
或
-重链，所述重链包含SEQ ID NO：42所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：42所示的氨基酸序列组成，和
-轻链，所述轻链包含SEQ ID NO：175所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：175所示的氨基酸序列组成，
或
-重链，所述重链包含SEQ ID NO：42所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：42所示的氨基酸序列组成，和
-轻链，所述轻链包含SEQ ID NO：176所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：176所示的氨基酸序列组成，
或
-重链，所述重链包含SEQ ID NO：42所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：42所示的氨基酸序列组成，和
-轻链，所述轻链包含SEQ ID NO：177所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO：177所示的氨基酸序列组成。
表11.修饰的抗体HEFLB的具体序列，其中可变区为粗体，恒定区带下划线，接头为斜体，免疫治疗剂为正常字符。
修饰的SIRPa抗体
关于如上定义的修饰的抗体的实施方案，可参照本发明其他方面中描述的修饰的抗体。
另一方面，本发明涉及修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其特异性结合构象表位，所述构象表位包含至少一种选自下组的肽：SIRPa中的SEQ ID NO：70(ELIYNQKEGHFPR)、SEQ ID NO：71(RNNMDFSIRIGN)和SEQ ID NO：72(SPRDITLKW)，所述修饰的抗SIRPa抗体或抗原结合片段与免疫治疗剂连接。
另一方面，本发明涉及修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其特异性结合构象表位，所述构象表位包含以下的肽或由以下的肽组成：SIRPa中的SEQ ID NO：70(ELIYNQKEGHFPR)、SEQ ID NO：71(RNNMDFSIRIGN)和SEQ ID NO：72(SPRDITLKW)，所述修饰的抗SIRPa抗体或抗原结合片段与免疫治疗剂连接。
另一方面，本发明涉及修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其特异性结合构象表位，所述构象表位包含至少一种选自下组的肽：SEQ ID NO：70(ELIYNQKEGHFPR)和SEQ IDNO：71(RNNMDFSIRIGN)，所述修饰的抗SIRPa抗体或抗原结合片段与免疫治疗剂连接。
另一方面，本发明涉及修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其特异性结合构象表位，所述构象表位包含以下的肽或由以下的肽组成：SIRPa中的SEQ ID NO：70(ELIYNQKEGHFPR)和SEQ ID NO：71(RNNMDFSIRIGN)，所述修饰的抗SIRPa抗体或抗原结合片段与免疫治疗剂连接。
另一方面，本发明涉及修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其特异性结合构象表位，所述构象表位包含至少一种选自下组的肽：SEQ ID NO：73(YNQK)和SIR，所述修饰的抗SIRPa抗体或抗原结合片段与免疫治疗剂连接。
另一方面，本发明涉及修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其特异性结合构象表位，所述构象表位包含以下的肽或由以下的肽组成：SIRPa中的SEQ ID NO：73(YNQK)和SIR，所述修饰的抗SIRPa抗体或抗原结合片段与免疫治疗剂连接。
另一方面，本发明涉及修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其包含：
a)重链，包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，和/或
b)轻链，包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，
其中，所述CDR定义如下：
-HCDR1，包含氨基酸序列SEQ ID NO：14(SYWVH)的肽或由其组成，
-HCDR2，包含氨基酸序列SEQ ID NO：15(NIDPSDSDTHYNQKFKD)或SEQ ID NO：16(NIDPSDSDTHYSPSFQG)的肽或由其组成，
-HCDR3，包含氨基酸序列SEQ ID NO：17(GGTGTMAWFAY)、SEQ ID NO：18(GGTGTLAWFAY)、SEQ ID NO：19(GGTGTMAYFAY)或SEQ ID NO：20(GGTGTLAYFAY)的肽或由其组成，
-LCDR1，包含氨基酸序列SEQ ID NO：21(RSSQSLVHSYGNTYLY)的肽或由其组成，
-LCDR2，包含氨基酸序列SEQ ID NO：22(RVSNRFS)的肽或由其组成，以及
-LCDR3，包含氨基酸序列SEQ ID NO：23(FQGTHVPYT)的肽或由其组成，
所述修饰的抗SIRPa抗体或抗原结合片段包含重链恒定结构域或其片段，所述重链恒定结构域或其片段与免疫治疗剂连接。
本发明还涉及修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，
-所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段抑制人CD47与人SIRPa的结合并且不与人SIRPg特异性结合，和/或
-所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含与免疫治疗剂连接的重链恒定结构域或其片段，所述免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、它们的免疫治疗剂变体及免疫治疗剂片段，优选它们的胞外域，和/或
-所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段不抑制人T细胞的增殖，优选增加人T细胞的增殖，和/或
-所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段不抑制人CD47与人SIRPg的结合，和/或
-所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段增加人PBMC和/或T细胞的TNFa分泌，和/或
-所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段增加人PBMC的IFNg分泌，和/或
-所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段增加人巨噬细胞的MIP1a分泌，和/或
-所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段增加人T细胞的活化，
特别地，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段抑制人CD47与人SIRPa的结合，不与人SIRPg特异性结合，不抑制人T细胞的增殖(优选增加人T细胞的增殖)，不抑制人CD47与人SIRPg的结合，增加人PBMC和T细胞的TNFa分泌，增加人PBMC的IFNg分泌，增加人巨噬细胞的MIP1a分泌，增加人T细胞的活化，
所述修饰的抗SIRPa抗体或抗原结合片段与免疫治疗剂连接，特别地，所述修饰的抗SIRPa抗体或抗原结合片段包含与免疫治疗剂连接的重链恒定结构域或其片段，所述免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、它们的免疫治疗剂变体及免疫治疗剂片段，优选它们的胞外域。
应用
针对如上定义的本发明的修饰抗体所描述的应用是：对本发明的单个核酸分子或单个核酸分子的组、本发明的载体、本发明的宿主细胞、本发明的药物组合物和根据本发明的产物的组合重复必要的变更。
另一方面，本发明涉及用作药物的以下物质：
-如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，或
-修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含与免疫治疗剂连接的重链恒定结构域或其片段，所述免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、它们的免疫治疗剂变体及免疫治疗剂片段，优选它们的胞外域，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段抑制CD47与SIRPa的结合并且不与SIRPg特异性结合，和/或不抑制T细胞的增殖(优选增加T细胞的增殖)，和/或不抑制CD47与SIRPg的结合，和/或增加PBMC和/或T细胞的TNFa分泌，和/或增加PBMC的IFNg分泌，和/或增加巨噬细胞的MIP1a分泌，和/或增加人T细胞的活化，
特别地，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含与免疫治疗剂连接的重链恒定结构域或其片段，所述免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、它们的免疫治疗剂变体及免疫治疗剂片段，优选它们的胞外域，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段抑制CD47与SIRPa的结合，不与SIRPg特异性结合，不抑制T细胞的增殖(优选增加T细胞的增殖)，不抑制CD47与SIRPg的结合，增加PBMC和T细胞的TNFa分泌，增加PBMC的IFNg分泌，增加巨噬细胞的MIP1a分泌，增加人T细胞的活化。
本发明还涉及治疗有此需要的受试者的方法，包括向所述受试者施用有效量的以下物质：
-如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，或
-抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，所述抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含与免疫治疗剂连接的重链恒定结构域或其片段，所述免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、它们的免疫治疗剂变体及免疫治疗剂片段，优选它们的胞外域，所述抗SIRPa抗体或其抗原结合片段抑制CD47与SIRPa的结合，不与SIRPg特异性结合，和/或不抑制T细胞的增殖(优选增加T细胞的增殖)，和/或不抑制CD47与SIRPg的结合，和/或增加PBMC和T细胞的TNFa分泌，和/或增加PBMC的IFNg分泌，和/或增加巨噬细胞的MIP1a分泌，和/或增加人T细胞的活化，
特别地，所述抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含与免疫治疗剂连接的重链恒定结构域或其片段，所述免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、它们的免疫治疗剂变体及免疫治疗剂片段，优选它们的胞外域，所述抗SIRPa抗体或其抗原结合片段抑制CD47与SIRPa的结合，不与SIRPg特异性结合，不抑制T细胞的增殖(优选增加T细胞的增殖)，不抑制CD47与SIRPg的结合，增加PBMC和T细胞的TNFa分泌，增加PBMC的IFNg分泌，增加巨噬细胞的MIP1a分泌，增加人T细胞的活化。
本发明还涉及以下物质在制造药物中的应用：
-如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，或
-修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含与免疫治疗剂连接的重链恒定结构域或其片段，所述免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、它们的免疫治疗剂变体及免疫治疗剂片段，优选它们的胞外域，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段抑制CD47与SIRPa的结合，不与SIRPg特异性结合，和/或不抑制T细胞的增殖(优选增加T细胞的增殖)，和/或不抑制CD47与SIRPg的结合，和/或增加PBMC和T细胞的TNFa分泌，和/或增加PBMC的IFNg分泌，和/或增加巨噬细胞的MIP1a分泌，和/或增加人T细胞的活化，
特别地，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含与免疫治疗剂连接的重链恒定结构域或其片段，所述免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、它们的免疫治疗剂变体及免疫治疗剂片段，优选它们的胞外域，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段抑制CD47与SIRPa的结合，不与SIRPg特异性结合，不抑制T细胞的增殖(优选增加T细胞的增殖)，不抑制CD47与SIRPg的结合，增加PBMC和T细胞的TNFa分泌，增加PBMC的IFNg分泌，增加巨噬细胞的MIP1a分泌，增加人T细胞的活化。
另一方面，本发明涉及用于治疗病症的以下物质：
-如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，或
-修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含与免疫治疗剂连接的重链恒定结构域或其片段，所述免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、它们的免疫治疗剂变体及免疫治疗剂片段，优选它们的胞外域，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段抑制CD47与SIRPa的结合，不与SIRPg特异性结合，和/或不抑制T细胞的增殖(优选增加T细胞的增殖)，和/或不抑制CD47与SIRPg的结合，和/或增加PBMC和T细胞的TNFa分泌，和/或增加PBMC的IFNg分泌，和/或增加巨噬细胞的MIP1a分泌，和/或增加人T细胞的活化，
特别地，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含与免疫治疗剂连接的重链恒定结构域或其片段，所述免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、它们的免疫治疗剂变体及免疫治疗剂片段，优选它们的胞外域，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段抑制CD47与SIRPa的结合，不与SIRPg特异性结合，不抑制T细胞的增殖(优选增加T细胞的增殖)，不抑制CD47与SIRPg的结合，增加PBMC和T细胞的TNFa分泌，增加PBMC的IFNg分泌，增加巨噬细胞的MIP1a分泌，增加人T细胞的活化，
其中，通过使髓源性抑制细胞(MDSC)分化成分化MDSC，特别是分化成表达至少一种选自CD80、CD86和CD103的人类标志物的分化MDSC，特别是分化成表达至少两种选自CD80、CD86和CD103的人类标志物的分化MDSC，更特别是分化成表达人类标志物CD80、CD86和CD103的细胞；和/或分化成表达CD11b的分化MDSC，可以改善或预防所述病症。
如本文所定义的，“可以通过使髓源性抑制细胞(MDSC)分化成分化MDSC而被改善或预防的病症”对应于包括炎性癌症的癌症和具有浸润性骨髓细胞(特别是具有浸润性MDSC和/或TAM细胞)的癌症、传染病、创伤、自身免疫性疾病(如类风湿性关节炎、1型糖尿病、狼疮、牛皮癣)、疫苗接种、慢性炎症性疾病(如炎症性肠病，包括克罗恩病和溃疡性结肠炎)、败血性休克、慢性传染病(如假单胞菌或CMV)、纤维化、动脉粥样硬化或移植功能障碍。
在实施方式中，本发明还涉及治疗有此需要的受试者的病症的方法，所述病症可以通过使髓源性抑制细胞(MDSC)分化成分化MDSC而被改善或预防，所述方法包括向所述受试者施用有效量的以下物质：
-如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，或
-修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含与免疫治疗剂连接的重链恒定结构域或其片段，所述免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、它们的免疫治疗剂变体及免疫治疗剂片段，优选它们的胞外域，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段抑制CD47与SIRPa的结合，不与SIRPg特异性结合，和/或不抑制T细胞的增殖(优选增加T细胞的增殖)，和/或不抑制CD47与SIRPg的结合，和/或增加PBMC和T细胞的TNFa分泌，和/或增加PBMC的IFNg分泌，和/或增加巨噬细胞的MIP1a分泌，和/或增加人T细胞的活化，
特别地，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含与免疫治疗剂连接的重链恒定结构域或其片段，所述免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、它们的免疫治疗剂变体及免疫治疗剂片段，优选它们的胞外域，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段抑制CD47与SIRPa的结合，不与SIRPg特异性结合，不抑制T细胞的增殖(优选增加T细胞的增殖)，不抑制CD47与SIRPg的结合，增加PBMC和T细胞的TNFa分泌，增加PBMC的IFNg分泌，增加巨噬细胞的MIP1a分泌，增加人T细胞的活化。
本发明还涉及以下物质在制备用于治疗病症的药物中的应用：
-如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，或
-修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含与免疫治疗剂连接的重链恒定结构域或其片段，所述免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、它们的免疫治疗剂变体及免疫治疗剂片段，优选它们的胞外域，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段抑制CD47与SIRPa的结合，不与SIRPg特异性结合，和/或不抑制T细胞的增殖(优选增加T细胞的增殖)，和/或不抑制CD47与SIRPg的结合，和/或增加PBMC和T细胞的TNFa分泌，和/或增加PBMC的IFNg分泌，和/或增加巨噬细胞的MIP1a分泌，和/或增加人T细胞的活化，
特别地，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含与免疫治疗剂连接的重链恒定结构域或其片段，所述免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、它们的免疫治疗剂变体及免疫治疗剂片段，优选它们的胞外域，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段抑制CD47与SIRPa的结合，不与SIRPg特异性结合，不抑制T细胞的增殖(优选增加T细胞的增殖)，不抑制CD47与SIRPg的结合，增加PBMC和T细胞的TNFa分泌，增加PBMC的IFNg分泌，增加巨噬细胞的MIP1a分泌，增加人T细胞的活化，
其中，所述病症可以通过使单核髓源性抑制细胞(Mo-MDSC)分化成非抑制细胞而被改善或预防。
在一个实施方案中，本发明涉及用于治疗病症的以下物质：
-如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，或
-修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含与免疫治疗剂连接的重链恒定结构域或其片段，所述免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、它们的免疫治疗剂变体及免疫治疗剂片段，优选它们的胞外域，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段抑制CD47与SIRPa的结合，不与SIRPg特异性结合，和/或不抑制T细胞的增殖(优选增加T细胞的增殖)，和/或不抑制CD47与SIRPg的结合，和/或增加PBMC和T细胞的TNFa分泌，和/或增加PBMC的IFNg分泌，和/或增加巨噬细胞的MIP1a分泌，和/或增加人T细胞的活化，
特别地，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含与免疫治疗剂连接的重链恒定结构域或其片段，所述免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、它们的免疫治疗剂变体及免疫治疗剂片段，优选它们的胞外域，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段抑制CD47与SIRPa的结合，不与SIRPg特异性结合，不抑制T细胞的增殖(优选增加T细胞的增殖)，不抑制CD47与SIRPg的结合，增加PBMC和T细胞的TNFa分泌，增加PBMC的IFNg分泌，增加巨噬细胞的MIP1a分泌，增加人T细胞的活化，
其中，所述病症可以通过使巨噬细胞极化改变为促炎性巨噬细胞而被改善或预防。
实际上，SIRPa作为检查点抑制剂并参与巨噬细胞极化。特别地，由于巨噬细胞的促炎作用是以2型巨噬细胞为代价而获得的(M2型高吞噬活性＝M(IL4))，因此阻断SIRPa诱发了与1型巨噬细胞相关的巨噬细胞的促炎功能(M1促炎性＝M(IFNg))并且抑制了肿瘤中巨噬细胞的抑制活性。因此，SIRPa的拮抗剂能够抑制巨噬细胞的M2表型极化和/或有利于促炎性M1型巨噬细胞的功能，并且可以用于治疗。
如本文所定义的，“可以通过使巨噬细胞极化改变为促炎性巨噬细胞而被改善或预防的病症”对应于例如实体癌、液体癌、传染病、创伤、自身免疫疾病、疫苗接种、脑损伤、神经损伤、红细胞增多症、血色素沉着症或慢性炎症性疾病。
本发明还涉及治疗有此需要的受试者的病症的方法，所述病症可以通过使巨噬细胞极化改变为促炎性巨噬细胞而被改善或预防，所述方法包括向所述受试者施用有效量的以下物质：
-如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，或
-修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含与免疫治疗剂连接的重链恒定结构域或其片段，所述免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、它们的免疫治疗剂变体及免疫治疗剂片段，优选它们的胞外域，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段抑制CD47与SIRPa的结合，不与SIRPg特异性结合，和/或不抑制T细胞的增殖(优选增加T细胞的增殖)，和/或不抑制CD47与SIRPg的结合，和/或增加PBMC和T细胞的TNFa分泌，和/或增加PBMC的IFNg分泌，和/或增加巨噬细胞的MIP1a分泌，和/或增加人T细胞的活化，
特别地，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含与免疫治疗剂连接的重链恒定结构域或其片段，所述免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、它们的免疫治疗剂变体及免疫治疗剂片段，优选它们的胞外域，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段抑制CD47与SIRPa的结合，不与SIRPg特异性结合，不抑制T细胞的增殖(优选增加T细胞的增殖)，不抑制CD47与SIRPg的结合，增加PBMC和T细胞的TNFa分泌，增加PBMC的IFNg分泌，增加巨噬细胞的MIP1a分泌，增加人T细胞的活化。
在一个实施方案中，本发明还涉及以下物质在制备用于治疗病症的药物中的应用：
-如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，或
-修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含与免疫治疗剂连接的重链恒定结构域或其片段，所述免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、它们的免疫治疗剂变体及免疫治疗剂片段，优选它们的胞外域，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段抑制CD47与SIRPa的结合，不与SIRPg特异性结合，和/或不抑制T细胞的增殖(优选增加T细胞的增殖)，和/或不抑制CD47与SIRPg的结合，和/或增加PBMC和T细胞的TNFa分泌，和/或增加PBMC的IFNg分泌，和/或增加巨噬细胞的MIP1a分泌，和/或增加人T细胞的活化，
特别地，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含与免疫治疗剂连接的重链恒定结构域或其片段，所述免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、它们的免疫治疗剂变体及免疫治疗剂片段，优选它们的胞外域，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段抑制CD47与SIRPa的结合，不与SIRPg特异性结合，不抑制T细胞的增殖(优选增加T细胞的增殖)，不抑制CD47与SIRPg的结合，增加PBMC和T细胞的TNFa分泌，增加PBMC的IFNg分泌，增加巨噬细胞的MIP1a分泌，增加人T细胞的活化，
其中，所述病症可以通过使巨噬细胞极化改变为促炎性巨噬细胞而被改善或预防。
改变巨噬细胞的极化以促进促炎细胞可用于许多病理或病况。如上所述，该改变特别适用于癌症，以恢复巨噬细胞的抗肿瘤活性和/或预防M2型巨噬细胞的促肿瘤活性。由于过量的M2型巨噬细胞极化导致的不适当的免疫应答也发生在传染病、纤维化、疫苗接种、创伤和慢性炎性疾病中。
因此，根据一个具体实施方案，本发明的修饰的抗SIRPa抗体可用于治疗患有癌症的个体，所述癌症选自肺癌、间皮瘤癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、肉瘤、胰腺癌、头颈癌、肾癌、胸腺瘤、胶质瘤、黑色素瘤和血液系统癌症，例如淋巴瘤(霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤)、白血病如T和B急性或慢性淋巴细胞白血病(ALL或CLL)或者急性或慢性髓性白血病(AML或CML)和骨髓瘤。
在一个实施方案中，本发明涉及用于治疗病况的以下物质：
-如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，或
-修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含与免疫治疗剂连接的重链恒定结构域或其片段，所述免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、它们的免疫治疗剂变体及免疫治疗剂片段，优选它们的胞外域，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段抑制CD47与SIRPa的结合，不与SIRPg特异性结合，和/或不抑制T细胞的增殖(优选增加T细胞的增殖)，和/或不抑制CD47与SIRPg的结合，和/或增加PBMC和T细胞的TNFa分泌，和/或增加PBMC的IFNg分泌，和/或增加巨噬细胞的MIP1a分泌，和/或增加人T细胞的活化，
特别地，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含与免疫治疗剂连接的重链恒定结构域或其片段，所述免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、它们的免疫治疗剂变体及免疫治疗剂片段，优选它们的胞外域，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段抑制CD47与SIRPa的结合，不与SIRPg特异性结合，不抑制T细胞的增殖(优选增加T细胞的增殖)，不抑制CD47与SIRPg的结合，增加PBMC和T细胞的TNFa分泌，增加PBMC的IFNg分泌，增加巨噬细胞的MIP1a分泌，增加人T细胞的活化，
其中，所述病况选自癌症(特别是炎性癌症和具有浸润性骨髓细胞(尤其是浸润性MDSC和/或TAM细胞)的癌症)、传染病、慢性炎症性疾病、自身免疫疾病、神经系统疾病、脑损伤、神经损伤、红细胞增多症、血色素沉着症、创伤、败血性休克、慢性传染病(如假单胞菌或CMV)、纤维化、动脉粥样硬化、肥胖、II型糖尿病和移植功能障碍。
在一个实施方案中，本发明涉及治疗有此需要的受试者的病况的方法，所述病况选自癌症(特别是炎性癌症和具有浸润性骨髓细胞(尤其是浸润性MDSC和/或TAM细胞)的癌症)、传染病、慢性炎症性疾病、自身免疫疾病、神经系统疾病、脑损伤、神经损伤、红细胞增多症、血色素沉着症、创伤、败血性休克、慢性传染病(如假单胞菌或CMV)、纤维化、动脉粥样硬化、肥胖、II型糖尿病和移植功能障碍，所述方法包括向所述受试者施用有效量的以下物质：
-如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，或
-修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含与免疫治疗剂连接的重链恒定结构域或其片段，所述免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、它们的免疫治疗剂变体及免疫治疗剂片段，优选它们的胞外域，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段抑制CD47与SIRPa的结合，不与SIRPg特异性结合，和/或不抑制T细胞的增殖(优选增加T细胞的增殖)，和/或不抑制CD47与SIRPg的结合，和/或增加PBMC和T细胞的TNFa分泌，和/或增加PBMC的IFNg分泌，和/或增加巨噬细胞的MIP1a分泌，和/或增加人T细胞的活化，
特别地，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含与免疫治疗剂连接的重链恒定结构域或其片段，所述免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、它们的免疫治疗剂变体及免疫治疗剂片段，优选它们的胞外域，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段抑制CD47与SIRPa的结合，不与SIRPg特异性结合，不抑制T细胞的增殖(优选增加T细胞的增殖)，不抑制CD47与SIRPg的结合，增加PBMC和T细胞的TNFa分泌，增加PBMC的IFNg分泌，增加巨噬细胞的MIP1a分泌，增加人T细胞的活化。
在一个实施方案中，本发明还涉及以下物质在制备用于治疗病况的药物中的应用：
-如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，或
-修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含与免疫治疗剂连接的重链恒定结构域或其片段，所述免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、它们的免疫治疗剂变体及免疫治疗剂片段，优选它们的胞外域，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段抑制CD47与SIRPa的结合，不与SIRPg特异性结合，和/或不抑制T细胞的增殖(优选增加T细胞的增殖)，和/或不抑制CD47与SIRPg的结合，和/或增加PBMC和T细胞的TNFa分泌，和/或增加PBMC的IFNg分泌，和/或增加巨噬细胞的MIP1a分泌，和/或增加人T细胞的活化，
特别地，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含与免疫治疗剂连接的重链恒定结构域或其片段，所述免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、它们的免疫治疗剂变体及免疫治疗剂片段，优选它们的胞外域，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段抑制CD47与SIRPa的结合，不与SIRPg特异性结合，不抑制T细胞的增殖(优选增加T细胞的增殖)，不抑制CD47与SIRPg的结合，增加PBMC和T细胞的TNFa分泌，增加PBMC的IFNg分泌，增加巨噬细胞的MIP1a分泌，增加人T细胞的活化，
其中，所述病况选自癌症(特别是炎性癌症和具有浸润性骨髓细胞(尤其是浸润性MDSC和/或TAM细胞)的癌症)、传染病、慢性炎症性疾病、自身免疫疾病、神经系统疾病、脑损伤、神经损伤、红细胞增多症、血色素沉着症、创伤、败血性休克、慢性传染病(如假单胞菌或CMV)、纤维化、动脉粥样硬化、肥胖、II型糖尿病和移植功能障碍。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的修饰的抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段用于如上定义的用途，其中，向出现SIRPa阳性肿瘤的患者施用本发明的所述修饰的抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段。
在一个实施方案中，本发明涉及用于疫苗接种的以下物质：
-如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，或
-修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含与免疫治疗剂连接的重链恒定结构域或其片段，所述免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、它们的免疫治疗剂变体及免疫治疗剂片段，优选它们的胞外域，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段抑制CD47与SIRPa的结合，不与SIRPg特异性结合，和/或不抑制T细胞的增殖(优选增加T细胞的增殖)，和/或不抑制CD47与SIRPg的结合，和/或增加PBMC和T细胞的TNFa分泌，和/或增加PBMC的IFNg分泌，和/或增加巨噬细胞的MIP1a分泌，和/或增加人T细胞的活化，
特别地，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含与免疫治疗剂连接的重链恒定结构域或其片段，所述免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、它们的免疫治疗剂变体及免疫治疗剂片段，优选它们的胞外域，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段抑制CD47与SIRPa的结合，不与SIRPg特异性结合，不抑制T细胞的增殖(优选增加T细胞的增殖)，不抑制CD47与SIRPg的结合，增加PBMC和T细胞的TNFa分泌，增加PBMC的IFNg分泌，增加巨噬细胞的MIP1a分泌，增加人T细胞的活化。
在一个实施方案中，本发明涉及疫苗接种受试者的方法，包括向所述受试者施用有效量的以下物质：
-如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，或
-修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含与免疫治疗剂连接的重链恒定结构域或其片段，所述免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、它们的免疫治疗剂变体及免疫治疗剂片段，优选它们的胞外域，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段抑制CD47与SIRPa的结合，不与SIRPg特异性结合，和/或不抑制T细胞的增殖(优选增加T细胞的增殖)，和/或不抑制CD47与SIRPg的结合，和/或增加PBMC和T细胞的TNFa分泌，和/或增加PBMC的IFNg分泌，和/或增加巨噬细胞的MIP1a分泌，和/或增加人T细胞的活化，
特别地，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含与免疫治疗剂连接的重链恒定结构域或其片段，所述免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、它们的免疫治疗剂变体及免疫治疗剂片段，优选它们的胞外域，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段抑制CD47与SIRPa的结合，不与SIRPg特异性结合，不抑制T细胞的增殖(优选增加T细胞的增殖)，不抑制CD47与SIRPg的结合，增加PBMC和T细胞的TNFa分泌，增加PBMC的IFNg分泌，增加巨噬细胞的MIP1a分泌，增加人T细胞的活化。
在一个实施方案中，本发明涉及以下物质在制备疫苗中的应用：
-如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，或
-修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含与免疫治疗剂连接的重链恒定结构域或其片段，所述免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、它们的免疫治疗剂变体及免疫治疗剂片段，优选它们的胞外域，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段抑制CD47与SIRPa的结合，不与SIRPg特异性结合，和/或不抑制T细胞的增殖(优选增加T细胞的增殖)，和/或不抑制CD47与SIRPg的结合，和/或增加PBMC和T细胞的TNFa分泌，和/或增加PBMC的IFNg分泌，和/或增加巨噬细胞的MIP1a分泌，和/或增加人T细胞的活化，
特别地，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含与免疫治疗剂连接的重链恒定结构域或其片段，所述免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、它们的免疫治疗剂变体及免疫治疗剂片段，优选它们的胞外域，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段抑制CD47与SIRPa的结合，不与SIRPg特异性结合，不抑制T细胞的增殖(优选增加T细胞的增殖)，不抑制CD47与SIRPg的结合，增加PBMC和T细胞的TNFa分泌，增加PBMC的IFNg分泌，增加巨噬细胞的MIP1a分泌，增加人T细胞的活化。
抑制性骨髓细胞限制了疫苗接种的有效性，特别是在幼儿中。因此，抗SIRPa/g会限制抗SIRPa对疫苗应答所提供的益处，阻止T淋巴细胞响应疫苗接种。
本发明的修饰的抗体或其抗原结合片段可以以多种合适的通路给药，例如静脉内(IV)、皮下(SC)或肌内(IM)施用至受试者。
该修饰的抗体或其抗原结合片段可以单独给药或与另一种治疗剂例如第二种人单克隆抗体或其抗原结合片段组合给药。在另一个实施例中，抗体与另一种药剂例如免疫抑制剂、红细胞生成刺激剂(ESA)一起施用，与治疗性细胞组合物等组合施用。
在一个实施方案中，本发明涉及用于如上定义的用途的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，其中，抗SIRPa抗体或抗原结合片段与第二治疗剂组合。
特别地，本发明的抗SIRPa抗体可以与一些其他潜在策略组合，其中所述其他潜在策略使用临床开发中的或市售的药剂来克服肿瘤免疫逃避机制(参见Antonia等，免疫肿瘤学组合：临床经验和未来前景的综述，Clin.Cancer Res.Off.J.Am.Assoc.Cancer Res.20，6258–6268，2014的表1)：
1-例如，通过使用抗CTLA4、抗PD1或抗PD-L1分子，逆转适应性免疫的抑制(阻断T细胞检查点通路)；
2-例如通过使用拮抗剂分子(包括拮抗剂抗CD137(抗4-1BB)抗体或CD137(4-1BB)配体)靶向CD137(4-1BB)，开启适应性免疫(使用拮抗剂分子(特别是抗体)促进T细胞共刺激受体信号传导)；
3-改善先天免疫细胞的功能；
4-例如通过基于疫苗的策略，激活免疫系统(增强免疫细胞效应子功能)。
第二治疗剂的施用可以与抗SIRPa抗体同时施用或不同时施用。取决于第二治疗剂的性质，共同施用可以以组合药物(产品)的形式制备，也称为“组合”(combo)。组合是固定剂量的组合，其包括以单一剂型组合的两种以上活性药物成分，其以固定的剂量制造和分散。但是剂量方案和/或给药通路也可以不同。
在优选的实施方案中，该第二治疗剂选自化学治疗剂、放射治疗剂、免疫治疗剂、细胞治疗剂(例如CAR-T细胞)、抗生素和益生菌。所述免疫治疗剂还可以是靶向肿瘤抗原的抗体，特别是选自抗Her2、抗EGFR、抗CD20、抗CD19、抗CD52的抗体。
该修饰的抗体可以以约1ng/kg体重至约30mg/kg体重以上的有效剂量提供。在具体的实施方案中，剂量可以为1μg/kg至约20mg/kg，可选地为10μg/kg至10mg/kg或100μg/kg至5mg/kg。
术语“有效剂量(dose)”或“有效剂量(dosage)”或“有效量”定义为足以达到或至少部分达到所需效果的量。术语“有效剂量”意指包含足以治愈或至少部分地阻止患有疾病的患者的该疾病及其并发症的量。该应用的有效量或有效剂量将取决于待治疗的病症、递送的抗体构建体、治疗的背景和目标、疾病的严重程度、前期治疗、患者的临床病史和对治疗剂的反应、给药通路、患者的大小(体重、体表或器官大小)和/或情况(年龄和总体健康状况)，以及患者自身免疫系统的总体状态。可以调节适当的剂量，使得其可以一次给药或通过一系列给药施用至患者，并且获得最佳治疗效果。
可以根据需要重复用于此目的的剂量，例如每日、半周、每周、半月、每月或根据复发期间的需要。
在一个方面，本发明还涉及用于诊断测试(特别是个性化医疗，更特别是伴随诊断测试)的以下物质：
-如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，或
-修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含与免疫治疗剂连接的重链恒定结构域或其片段，所述免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、它们的免疫治疗剂变体及免疫治疗剂片段，优选它们的胞外域，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段抑制CD47与SIRPa的结合，不与SIRPg特异性结合，和/或不抑制T细胞的增殖(优选增加T细胞的增殖)，和/或不抑制CD47与SIRPg的结合，和/或增加PBMC和T细胞的TNFa分泌，和/或增加PBMC的IFNg分泌，和/或增加巨噬细胞的MIP1a分泌，和/或增加人T细胞的活化，
特别地，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含与免疫治疗剂连接的重链恒定结构域或其片段，所述免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、它们的免疫治疗剂变体及免疫治疗剂片段，优选它们的胞外域，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段抑制CD47与SIRPa的结合，不与SIRPg特异性结合，不抑制T细胞的增殖(优选增加T细胞的增殖)，不抑制CD47与SIRPg的结合，增加PBMC和T细胞的TNFa分泌，增加PBMC的IFNg分泌，增加巨噬细胞的MIP1a分泌，增加人T细胞的活化。
在一个实施方案中，本发明涉及一种诊断方法，特别是在个性化医疗中，更特别是在伴随诊断测试中，使用以下物质：
-如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，或
-修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含与免疫治疗剂连接的重链恒定结构域或其片段，所述免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、它们的免疫治疗剂变体及免疫治疗剂片段，优选它们的胞外域，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段抑制CD47与SIRPa的结合，不与SIRPg特异性结合，和/或不抑制T细胞的增殖(优选增加T细胞的增殖)，和/或不抑制CD47与SIRPg的结合，和/或增加PBMC和T细胞的TNFa分泌，和/或增加PBMC的IFNg分泌，和/或增加巨噬细胞的MIP1a分泌，和/或增加人T细胞的活化，
特别地，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含与免疫治疗剂连接的重链恒定结构域或其片段，所述免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、它们的免疫治疗剂变体及免疫治疗剂片段，优选它们的胞外域，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段抑制CD47与SIRPa的结合，不与SIRPg特异性结合，不抑制T细胞的增殖(优选增加T细胞的增殖)，不抑制CD47与SIRPg的结合，增加PBMC和T细胞的TNFa分泌，增加PBMC的IFNg分泌，增加巨噬细胞的MIP1a分泌，增加人T细胞的活化。
在一个实施方案中，本发明涉及以下物质在制备用于诊断测试(特别是个性化医疗，更特别是伴随诊断测试)的药物中的应用：
-如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，或
-修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含与免疫治疗剂连接的重链恒定结构域或其片段，所述免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、它们的免疫治疗剂变体及免疫治疗剂片段，优选它们的胞外域，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段抑制CD47与SIRPa的结合，不与SIRPg特异性结合，和/或不抑制T细胞的增殖(优选增加T细胞的增殖)，和/或不抑制CD47与SIRPg的结合，和/或增加PBMC和T细胞的TNFa分泌，和/或增加PBMC的IFNg分泌，和/或增加巨噬细胞的MIP1a分泌，和/或增加人T细胞的活化，
特别地，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段包含与免疫治疗剂连接的重链恒定结构域或其片段，所述免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、它们的免疫治疗剂变体及免疫治疗剂片段，优选它们的胞外域，所述修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段抑制CD47与SIRPa的结合，不与SIRPg特异性结合，不抑制T细胞的增殖(优选增加T细胞的增殖)，不抑制CD47与SIRPg的结合，增加PBMC和T细胞的TNFa分泌，增加PBMC的IFNg分泌，增加巨噬细胞的MIP1a分泌，增加人T细胞的活化。
在一个方面，本发明还涉及体外或离体诊断方法，特别是适用于个性化医疗(更特别是伴随诊断)的诊断方法，其中，本发明的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段用于检测预先从受试者获得的样品中的SIRPa+细胞，以及可选地用于定量SIRPa的表达。
在一个方面，本发明还涉及本发明的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段在制备适用于诊断测试(特别是用于个性化医疗或伴随诊断测试)的药物中的应用。
一方面，本发明还涉及至少一种本发明的修饰的抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段作为用于测定预先从个体获得的生物样品中SIRPa的表达和/或表达水平的手段的应用。
在一个方面，本发明还涉及一种体外或离体测定方法，用于测定预先从所述受试者获得的生物样品中受试者的SIRPa阳性细胞，所述方法包括：
i)使用本发明的修饰的抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段，在预先从所述受试者获得的生物样品中体外测定SIRPa的表达和/或表达水平。
一方面，本发明还涉及至少一种本发明的修饰的抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段在方法中的应用(特别是体外或离体)，其中SIRPa用作可预测受试者(特别是癌症受试者)对治疗的反应的生物标志物。
在一个方面，本发明还涉及预测癌症受试者对治疗的反应的体外或离体方法，特别是用本发明的修饰的抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段，所述方法包括：
-确定预先从受试者获得的肿瘤样品中SIRPa的表达水平，特别是用本发明的修饰的抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段，以及
-将SIRPa的表达水平与代表无应答受试者群体中SIRPa表达水平的值相比较，
其中，受试者的肿瘤样品中SIRPa表达水平较高代表受试者对治疗有响应。
在一个方面，本发明还涉及测定预先从受试者获得的样品中SIRPa+细胞的存在的体外或离体方法，其包括确定SIRPa作为生物标志物的存在，所述生物标志物预测受试者对治疗的反应，特别是被诊断患有癌症的受试者的反应，其中所述方法包括：
-测定预先从受试者获得的肿瘤样品中SIRPa的表达水平，特别是用任何如上所述的修饰的抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段，以及
-将SIRPa的表达水平与代表无应答受试者群体中SIRPa表达水平的值相比较，
其中，受试者的肿瘤样品中SIRPa表达水平较高代表患者对治疗有反应。
组合物
另一方面，本发明涉及一种药物组合物，其包含如上定义的修饰的抗体或其抗原结合片段和/或本发明的单个核酸分子或单个核酸分子的组和药学上可接受的载体。
如本文所用，“药物组合物”意指包含适合施用至受试者或患者(例如哺乳动物，尤其是人)的组合物。通常，“药物组合物”是无菌的并且通常不含能在受试者体内引起不希望的反应的污染物(例如，药物组合物中的化合物是药物级的)。药物组合物可以被设计用于通过许多不同的给药通路施用至有需要的受试者或患者，给药通路包括口服、口腔、直肠、肠胃外、腹膜内、皮内、气管内等。
如本文所用，“药学上可接受的载体”意在包括可用于制备药物组合物的赋形剂、稀释剂、载体和佐剂，所述药物组合物通常是安全的、无毒的、既不是生物学上也不是其他方面不良的，并包括可用于兽医用途以及人类药物用途的赋形剂、稀释剂、载体和佐剂。如本文所用的“药学上可接受的载体”包括一种和多于一种这样的赋形剂、稀释剂，载体和佐剂。
特别地，本发明涉及一种药物组合物，其包含作为活性成分的如上定义的修饰的抗体或其抗原结合片段和药学上可接受的载体。
组合产品
另一方面，本发明涉及一种治疗手段，特别是组合产品手段，其包含以下物质作为活性成分：如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段和/或本发明的单个核酸分子或单个核酸分子的组和第二治疗剂，其中所述活性成分被配制用于单独的、连续的或组合的治疗，特别是用于组合或连续使用。
特别地，本发明涉及一种组合产品，其包含如上定义的修饰的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段和/或本发明的单个核酸分子或单个核酸分子的组和第二治疗剂，用于同时、单独或连续使用药物。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的组合产品，其中第二治疗剂选自化学治疗剂、放射治疗剂、细胞治疗剂、免疫治疗剂、抗生素和益生菌。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的组合产品，其中所述免疫治疗剂选自治疗性疫苗、免疫检查点阻断剂或激活剂，特别是适应性免疫细胞(T或B淋巴细胞)和抗体-药物偶联物的免疫检查点阻断剂或激活剂。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的组合产品，其中适应性免疫细胞(T和B淋巴细胞)的所述免疫检查点阻断剂或激活剂选自由以下组成的组：抗PDL1、抗PD1、抗CTLA4、抗CD137、抗CD2、抗CD28、抗CD40、抗HVEM、抗BTLA、抗CD160、抗TIGIT、抗TIM-1/3、抗LAG-3、抗2B4和抗OX40、抗CD40拮抗剂、CD40-L、TLR拮抗剂、抗ICOS、ICOS-L和B细胞受体拮抗剂，特别是选自抗PDL1、抗PD1、抗CD137。
在一个实施方案中，所述免疫治疗剂是靶向肿瘤抗原的抗体，特别是选自抗Her2、抗EGFR、抗CD20、抗CD19、抗CD52的抗体。
一方面，本发明涉及如上定义的组合产品，其用于同时、单独或连续治疗病症，所述病症可以通过使髓源性抑制细胞(MDSC)分化成分化MDSC，特别是分化成表达至少一种选自CD80、CD86和CD103的人类标志物的分化MDSC，特别是分化成表达至少两种选自CD80、CD86和CD103的人类标志物的分化MDSC，更特别是分化成表达人类标志物CD80、CD86和CD103的细胞；和/或分化成表达CD11b的分化MDSC，来改善或预防。
在一个实施方案中，本发明涉及治疗有此需要的受试者的病症的方法，所述病症可以通过使髓源性抑制细胞(MDSC)分化成分化MDSC而被改善或预防，所述方法包括同时、单独或连续向所述受试者施用有效量的如上定义的组合产品。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的组合产品在制备用于治疗病症的药物中的应用，所述病症可以通过使髓源性抑制细胞(MDSC)分化成分化MDSC而被改善或预防。
一方面，本发明涉及如上定义的组合产品，其用于同时、单独或连续治疗病症，所述病症可以通过使巨噬细胞极化改变为促炎性巨噬细胞而被改善或预防。
在一个实施方案中，本发明涉及治疗有此需要的受试者的病症的方法，所述病症可以通过使巨噬细胞极化改变为促炎性巨噬细胞而被改善或预防，所述方法包括同时、单独或连续向所述受试者施用有效量的如上定义的组合产品。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的组合产品在制备用于治疗病症的药物中的应用，所述病症可以通过使巨噬细胞极化改变为促炎性巨噬细胞而被改善或预防。
一方面，本发明涉及如上定义的组合产品，其用于同时、单独或连续治疗病况或用于疫苗接种，所述病况选自癌症、传染病、慢性炎症性疾病、自身免疫疾病、神经系统疾病、脑损伤、神经损伤、红细胞增多症、血色素沉着症、创伤、败血性休克、慢性传染病(如假单胞菌或CMV)、纤维化、动脉粥样硬化、肥胖、II型糖尿病和移植功能障碍。
在一个实施方案中，本发明涉及治疗有此需要的受试者的病况的方法，所述病况选自癌症、传染病、慢性炎症性疾病、自身免疫疾病、神经系统疾病、脑损伤、神经损伤、红细胞增多症、血色素沉着症、创伤、败血性休克、慢性传染病(如假单胞菌或CMV)、纤维化、动脉粥样硬化、肥胖、II型糖尿病和移植功能障碍，所述方法包括同时、单独或连续向所述受试者施用有效量的如上定义的组合产品。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的组合产品在制备用于治疗病况或用于疫苗接种的药物中的应用，所述病况选自癌症、传染病、慢性炎症性疾病、自身免疫疾病、神经系统疾病、脑损伤、神经损伤、红细胞增多症、血色素沉着症、创伤、败血性休克、慢性传染病(如假单胞菌或CMV)、纤维化、动脉粥样硬化、肥胖、II型糖尿病和移植功能障碍。
核酸
另一方面，本发明涉及编码如上定义的修饰的抗体或其抗原结合片段的单个核酸分子或单个核酸分子的组。
如本文所用，核酸分子可以是双链的和单链的、线性的和环状的。优选地，它包含在载体中，该载体优选包含在宿主细胞中。
在一个实施方案中，本发明涉及编码如上定义的修饰的抗体或其抗原结合片段的单个核酸分子或单个核酸分子的组，所述核酸分子包含选自以下的至少一种序列或由选自以下的至少一种序列组成：SEQ ID NO：58、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：60、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：68和SEQ ID NO：69；和至少一种编码免疫治疗剂的序列，特别是PDL1、PD1、CD80、CD86、OX40L、4-1BBL、ICOSL及其变体和片段，更特别是PD1、PDL1、CD80、4-1BBL及其变体和片段。
在一个实施方案中，本发明涉及编码如上定义的抗体或其抗原结合片段的单个核酸分子或单个核酸分子的组，所述核酸分子包含：
-编码所述抗体的重链可变结构域的序列，优选包含：
-SEQ ID NO：58、SEQ ID NO：59或SEQ ID NO：60，
-SEQ ID NO：61或SEQ ID NO：62，和
-SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：65或SEQ ID NO：66，
和/或
-编码所述抗体的轻链可变结构域的序列，优选包含：
-SEQ ID NO：67，
-SEQ ID NO：68，和
-SEQ ID NO：69，
以及，至少一种编码免疫治疗剂的序列，特别是PDL1、PD1、CD80、CD86、OX40L、4-1BBL、ICOSL及其变体，更特别是PD1、PDL1、CD80、4-1BBL及其变体。
表12.编码本发明的抗体的重链可变结构域的CDR和轻链可变结构域的CDR的序列
特别地，本发明涉及核酸分子，所述核酸分子包含以下序列或由以下序列组成：SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：54和SEQ ID NO：55；以及所述核酸分子包含至少一种编码免疫治疗剂的序列或由其组成，所述编码免疫治疗剂的序列特别选自PDL1、PD1、CD80、CD86、OX40L、4-1BBL、ICOSL以及它们的变体和片段，更特别选自PD1、PDL1、CD80、4-1BBL以及它们的变体和片段。
表13.编码本发明的抗体的重链可变结构域和轻链可变结构域的序列
特别地，本发明涉及一种核酸分子，所述核酸分子包含编码氨基酸序列的序列或由编码氨基酸序列的序列组成，所述氨基酸序列选自：SEQ ID NO：SEQ ID NO：94、SEQ IDNO：95、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：100、SEQID NO：101、SEQ ID NO：102、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：106、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：110、SEQ ID NO：111、SEQID NO：112、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：114、SEQ ID NO：115、SEQ ID NO：116、SEQ ID NO：117、SEQ ID NO：118、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：120、SEQ ID NO：121、SEQ ID NO：122、SEQID NO：123、SEQ ID NO：124、SEQ ID NO：125、SEQ ID NO：126、SEQ ID NO：127、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：129、SEQ ID NO：130、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：132、SEQ ID NO：133、SEQID NO：134、SEQ ID NO：135、SEQ ID NO：136、SEQ ID NO：137、SEQ ID NO：138、SEQ ID NO：139、SEQ ID NO：140、SEQ ID NO：141、SEQ ID NO：142、SEQ ID NO：143、SEQ ID NO：144、SEQID NO：145、SEQ ID NO：146、SEQ ID NO：147、SEQ ID NO：148、SEQ ID NO：149、SEQ ID NO：150、SEQ ID NO：151、SEQ ID NO：152、SEQ ID NO：153、SEQ ID NO：154、SEQ ID NO：155、SEQID NO：156、SEQ ID NO：157、SEQ ID NO：158、SEQ ID NO：159、SEQ ID NO：160、SEQ ID NO：161、SEQ ID NO：162、SEQ ID NO：163、SEQ ID NO：164、SEQ ID NO：165、SEQ ID NO：166、SEQID NO：167、SEQ ID NO：168、SEQ ID NO：169、SEQ ID NO：170、SEQ ID NO：171、SEQ ID NO：172、SEQ ID NO：173、SEQ ID NO：174、SEQ ID NO：175、SEQ ID NO：176、SEQ ID NO：177、SEQID NO：178、SEQ ID NO：179、SEQ ID NO：180、SEQ ID NO：181、SEQ ID NO：182、SEQ ID NO：183、SEQ ID NO：184和SEQ ID NO：185。
特别地，本发明涉及包含以下序列或由以下序列组成的核酸分子：
-编码选自以下的氨基酸序列的序列：SEQ ID NO：143、SEQ ID NO：144、SEQ IDNO：145、SEQ ID NO：146、SEQ ID NO：147、SEQ ID NO：148、SEQ ID NO：149和SEQ ID NO：185，以及
-序列SEQ ID NO:55。
特别地，本发明涉及包含以下序列或由以下序列组成的核酸分子：
-序列SEQ ID NO：52，以及
-编码选自以下的氨基酸序列的序列：SEQ ID NO：171、SEQ ID NO：172、SEQ IDNO：173、SEQ ID NO：174、SEQ ID NO：175、SEQ ID NO：176和SEQ ID NO：177。
载体
另一方面，本发明涉及包含如上定义的核酸分子的载体。
如本文所用，“载体”是用作将遗传物质转移到细胞中的载体的核酸分子。术语“载体”包括质粒、病毒、粘粒和人工染色体。通常，工程化载体包含复制起点、多克隆位点和选择标记。载体本身通常是核苷酸序列，通常是DNA序列，其包含插入物(转基因)和用作载体“骨架”的较大序列。目前的载体还可以包括除转基因插入物和骨架之外的其他特征：启动子、遗传标记、抗生素抗性、报告基因、靶向序列、蛋白质纯化标签。称为表达载体(表达构建体)的载体特异性地用于在靶细胞中表达转基因，并且通常具有控制序列。
宿主细胞
另一方面，本发明涉及单个宿主细胞，其包含如上定义的载体和/或本发明的单个核酸分子或单个核酸分子的组。
如本文所用，术语“宿主细胞”旨在包括可以是或者已经是载体接受体的任何单个细胞或细胞培养物、外源核酸分子和编码本发明的抗体构建体的多核苷酸；和/或抗体构建体本身的接受体。可以通过转化、转染等方式将各种材料引入细胞中。术语“宿主细胞”还旨在包括单个细胞的后代或潜在后代。合适的宿主细胞包括原核或真核细胞，还包括但不限于细菌、酵母细胞、真菌细胞、植物细胞和动物细胞，如昆虫细胞和哺乳动物细胞，例如鼠、大鼠、兔、猕猴或人。
试剂盒
另一方面，本发明涉及一种试剂盒，包括：
-如上定义的修饰的抗体或其抗原结合片段，
-编码所述修饰的抗体或其抗原结合片段的核酸分子，
-包含所述核酸分子的载体，和/或
-包含所述载体的细胞。
为方便起见，本发明的修饰的抗体可以以试剂盒(即，试剂的包装组合)提供。
在本发明的上下文中，术语“试剂盒”是指两个以上组分(其中一个对应于本发明的抗体或其抗原结合、核酸分子、载体或细胞)一起包装在容器、接受体或其他中。因此，试剂盒可以被描述为足以实现某个目标的一组产品和/或器具，其可以作为单个单元销售。
所述试剂盒可包含任何适当形状、大小的一个以上接受体(例如小瓶、安瓿、容器、注射器、瓶子、袋)以及含有适合给药剂量的本发明的修饰的抗体构建体的材料。试剂盒可以另外包含使用说明(例如以小册子或说明书的形式)、施用本发明的修饰的抗体构建体的装置，例如注射器、泵、注入器(infuser)等、用于重构本发明的抗体构建体的装置和/或用于稀释本发明的抗体构建体的装置。
在一个实施方案中，本发明涉及如上定义的用于单剂量施用单元的试剂盒。本发明的试剂盒还可含有包含干燥/冻干的修饰的抗体构建体的第一接受体和包含含水制剂的第二接受体。在本发明的某些实施方案中，提供了包含单室和多室预填充注射器(例如，液体注射器和冻干注射器)的试剂盒。
制造抗体的方法
一方面，本发明还涉及一种制备抗体(特别是本发明的抗体)的方法，包括使非人动物，特别是非人哺乳动物对至少一种如上定义的抗原免疫，以及特别是从所述免疫的非人动物中收集所得血清，以获得针对所述抗原的抗体。
特别地，本发明还涉及一种制备抗体的方法，该方法包括使非人动物对一种抗原免疫，所述抗原包含由SEQ ID NO：3(KFRKGSPD[DV]/[T]E)构成的人SIRPa的表位序列或由该表位序列组成，以及特别是从所述免疫的非人动物中收集所得血清，以获得针对所述抗原的抗体。
特别地，本发明还涉及一种制备抗体的方法，包括使非人动物对一种抗原免疫，所述抗原包含由SEQ ID NO：3(KFRKGSPD[DV]/[T]E)构成的人SIRPa的表位序列和选自SEQ IDNO：1(SLIPVGP)、SEQ ID NO：2(G/ARELIYNQKEGH)、SEQ ID NO：4(QHTVSFTCESHGFSPRDITLKWF)、SEQ ID NO：5(ICEVAHVTLQG)或SEQ ID NO：6(YPQRLQLTWLE)的人SIRPa的至少一个表位序列，或由上述表位序列组成，以及特别是从所述免疫的非人动物中收集所得血清，以获得针对所述抗原的抗体。
特别地，本发明还涉及一种制备抗体的方法，包括使非人动物对一种抗原免疫，所述抗原包含由SEQ ID NO：1(SLIPVGP)、SEQ ID NO：2(G/ARELIYNQKEGH)、SEQ ID NO：3(KFRKGSPD[DV]/[T]E)、SEQ ID NO：4(QHTVSFTCESHGFSPRDITLKWF)、SEQ ID NO：5(ICEVAHVTLQG)和SEQ ID NO：6(YPQRLQLTWLE)构成的人SIRPa的表位序列，或由该表位序列组成，以及特别是从所述免疫的非人动物中收集所得血清，以获得针对所述抗原的抗体。
特别地，本发明还涉及一种制造如上定义的抗体的方法，该方法包括如上所述地将抗体与免疫治疗剂连接的步骤。
选择修饰的抗体的方法
一方面，本发明涉及选择本发明的修饰的抗体或该抗体的抗原结合片段的方法，其包含以下步骤中的至少一个或由以下步骤组成：
a.测试(例如，根据实施例1、2和3中描述的方法)修饰的抗体或该抗体的抗原结合片段与SIRPa(特别是如上定义的抗原)结合的能力，
b.测试(例如，根据实施例7和8中描述的方法)修饰的抗体或该抗体的抗原结合片段与SIRPb结合的能力，
c.测试(例如，根据实施例9和10中描述的方法)修饰的抗体或该抗体的抗原结合片段与SIRPg结合的能力，
d.测试(例如，根据实施例4和5中描述的方法)修饰的抗体或该抗体的抗原结合片段抑制人CD47与人SIRPa结合的能力；
e.测试(例如，根据实施例12中描述的方法)修饰的抗体或该抗体的抗原结合片段与T细胞结合的能力；
f.测试(例如，根据实施例13中描述的方法)修饰的抗体或该抗体的抗原结合片段不抑制T细胞增殖的能力，特别是增加T细胞增殖的能力；
g.测试(例如，根据实施例11中描述的方法)修饰的抗体或该抗体的抗原结合片段抑制人CD47与人SIRPg结合的能力；
h.测试(例如，根据实施例28或31中描述的方法)修饰的抗体或该抗体的抗原结合片段增加人PBMC和/或人T淋巴细胞分泌TNFα的能力；
i.测试(例如，根据实施例29中描述的方法)修饰的抗体或该抗体的抗原结合片段增加人PBMC的IFNg分泌的能力；
j.测试(例如，根据实施例35中所述的方法)修饰的抗体或该抗体的抗原结合片段增加人T细胞的活化的能力；
以及，可选地包括以下步骤：
-选择修饰的抗体或该抗体的抗原结合片段，所述修饰的抗体或该抗体的抗原结合片段特异性结合SIRPa，特别是结合如上定义的抗原，显著抑制CD47与SIRPa的结合，不与人SIRPg特异性结合，和/或不与人T细胞特异性结合，和/或不显著抑制人T细胞的增殖(优选增加人T细胞的增殖)，和/或不显著抑制人CD47与人SIRPg的结合，和/或增加人PBMC和/或人T淋巴细胞的TNFa分泌和/或增加人PBMC的IFNg分泌和/或增加人T细胞的活化；
更特别地，所述修饰的抗体或该抗体的抗原结合片段特异性结合SIRPa，特别是结合如上定义的抗原，显著抑制CD47与SIRPa的结合，不与人SIRPg特异性结合，不与人T细胞特异性结合，不显著抑制人T细胞的增殖(优选增加人T细胞的增殖)，不显著抑制人CD47与人SIRPg的结合，增加人PBMC和/或人T淋巴细胞的TNFa分泌，增加人PBMC的IFNg分泌，增加人T细胞(特别是人T淋巴细胞)的活化。
有利地，可以在本发明的抗体的制备方法后进行选择本发明的修饰的抗体的方法。
提出以下附图和实施例，以便为本领域普通技术人员提供关于如何制备和使用本发明的完整公开和描述，并且不旨在限制发明人的发明范围，也不旨在表示以下实验是全部或仅进行的实验。虽然已经参考本发明的特定实施方案描述了本发明，但是本领域技术人员应该理解，在不脱离本发明的真实精神和范围的情况下，可以进行各种改变并且可以进行等同替换。另外，可以进行许多修改以使特定情况、材料、物质组成、方法、方法步骤或步骤适应本发明的目的、精神和范围。所有这些修改都在所附权利要求的范围内。
附图说明
图1.抗SIRPa抗体通过ELISA测定的结合分析(人SIRPa-His涂覆和抗人κ检测)。
图A：通过ELISA对固定化SIRPa-His上的嵌合体(◆)、HALA(□)、HFLA(*)、HFLB(+)、HEFLA(▲)、HEFLB(■)、SIRP29(Δ)、Kwar23(o)进行评价；图B：通过ELISA对固定化SIRPa-His上的HCLA(●)、HCLB(x)、HELA(◇)、HELB(-)进行评价；图C：通过ELISA对固定化SIRPa-His上的HALB(-)、HBLA(_)、HBLB(■)进行评价；用驴抗人抗体进行显露(revelation)，并使用TMB底物通过比色法在450nm处显示。ED50是标记的抗体在该测定中达到信号的50％的浓度。图D：m18D5克隆(■)(n＝4)、SE5A5商业克隆(▲)(n＝7)、6G10克隆(▽)(n＝3)以及12D7克隆(□)(n＝4)的结合。
图2.通过Biacore对人SIRPa重组蛋白的抗SIRP抗体的亲和力分析。
将SIRPa-His重组蛋白以5μg/ml(500RU)固定在CM5芯片上，并以不同浓度添加标记的抗体。3分钟的结合期(ka)、然后10分钟的解离期(kd)后，测量数值，以确定亲和常数(KD)。
图3.人单核细胞(SIRPa变体1的纯合子(v1/v1))上抗SIRPa抗体的结合分析。
(A,B)通过细胞荧光测定法对人单核细胞v1/v1(预先用人Fc受体结合抑制剂抗体染色)上的嵌合体(◆)、HALA(□)、HFLA(*)、HFLB(+)、HEFLA(▲)、HEFLB(■)、SIRP29(Δ)、Kwar23(o)进行评价。在CantoII细胞计数器上用PE标记的小鼠抗人Fc mAb进行显露，其值对应于染色的单核细胞的百分比。ED50是标记的抗体在该测定中达到信号的50％的浓度。图A对应于染色的单核细胞v1/v1的百分比。图B对应于单核细胞v1/v1的荧光强度(MFI)的平均值。
(C,D)通过流式细胞术(FACS)对人单核细胞上的SIRPa抗体的结合研究：测试了不同的抗SIRPa抗体：m18D5(■)(n＝1)、SE7C2(▲)(n＝2)、12D7(□)(n＝2)、6G10(◆)(n＝4)：图C表示不同抗体对剂量响应的平均荧光强度(MFI)。图D表示染色的单核细胞对抗体剂量响应的百分比。在可能的情况下进行统计分析。
(E,F,G)通过抗hSIRPa抗体在群体中结合SIRPa变体：通过FACS用PE-抗小鼠IgG测量32名志愿者中不同抗hSIRPa抗体结合SIRPa变体的能力。所有克隆均以10μg/ml进行测试：m18D5(■)、12D7(▼)、6G10(◆)和商业抗体SE5A5(□)、SE7C2(Δ)。图E表示纯合子变体1志愿者(n＝16)。图F表示纯合子变体2志愿者(n＝8)。图G表示杂合子V1/V2志愿者(n＝8)。
图4.抗SIRPa抗体与CD47在SIRPa上的竞争。
(A)通过ELISA对固定化SIRPa-His上用恒定浓度的生物素化的CD47-Fc(6μg/ml)孵育的不同浓度的嵌合体(◆)、HFLA(*)、HFLB(+)、HEFLA(▲)、HEFLB(■)、SIRP29(Δ)、Kwar23(o)进行评价。用链霉亲和素过氧化物酶进行显露，以检测CD47分子，并使用TMB底物通过比色法在450nm处显示。第二个实验的结果以IC50值呈现。IC50是标记的抗体在该测定中抑制50％信号的浓度。
(B)通过ELISA对抗SIRPa抗体对SIRPa-CD47相互作用的拮抗活性研究：在剂量响应下测试不同的抗SIRPa抗体：m18D5克隆(■)(n＝1)、商业抗体SE5A5(▲)(n＝2)和m12D7(□)(n＝2)。该图表示在抗hSIRPa抗体的剂量响应期间通过ELISA测量的CD47阳性SIRPa-CD47相互作用的百分比。
图5.抗SIRPa抗体与CD47在人单核细胞上的竞争。
(A,B)通过细胞计数法对在人单核细胞v1/v1上用恒定浓度的生物素化的CD47-Fc(10μg/ml)孵育的不同浓度的嵌合体(◆)、HFLA(*)、HFLB(+)、HEFLA(▲)、HEFLB(■)进行评价。用藻红蛋白-链霉亲和素进行显露，以检测CD47分子，并通过CantoII细胞计数器显示。IC50是标记的抗体在该测定中抑制50％信号的浓度。图A对应于阳性细胞的百分比。图B对应于荧光强度的平均值。
(C)通过FACS对抗SIRPa抗体对SIRPa-CD47相互作用的拮抗活性研究：在剂量响应下测试不同的抗SIRPa抗体：m18D5克隆(■)(n＝1)、商业抗体SE7C2(▲)(n＝2)和m12D7(□)(n＝2)。图C表示在与抗hSIRPa抗体竞争后通过FACS测量的CD47阳性细胞的百分比。
图6.(A)通过Blitz对用SP-D配体预孵育或不预孵育的人SIRPa重组蛋白上的抗SIRP抗体的亲和力分析。将SIRPa-His重组蛋白以10μg/ml固定在NINTA生物传感器上，并以100μg/ml(饱和浓度)加入SP-D配体。然后以20μg/ml加入抗SIRPa抗体，并在120秒的结合期(ka)、接着经过120秒(kd)的解离期后推断亲和力值，以确定亲和常数(KD)。(B)通过Blitz对用小鼠18D5抗体预孵育的人SIRPa重组蛋白上的抗SIRP抗体的亲和力分析。将SIRPa-His重组蛋白以10μg/ml固定在NINTA生物传感器上，并以20μg/ml(饱和浓度)加入抗SIRPa抗体。然后以100μg/ml加入SP-D配体，并在120秒的结合期(ka)、接着经过120秒(kd)的解离期后推断亲和力值，以确定亲和常数(KD)。
图7.(A)通过Blitz对人SIRPb重组蛋白的抗SIRP抗体的亲和力分析。
将SIRPb-His重组蛋白固定在NINTA生物传感器上，并以20μg/ml加入标记的抗体。在120秒的结合期(ka)、接着经过120秒的解离期(kd)后推断出值，以确定亲和常数(KD)。(B)抗SIRP抗体的结合分析(人SIRPb-His涂覆和抗人κ检测)。通过ELISA对HEFLB(■)、SIRP29(Δ)、Kwar23(o)、B4B6(◆)和IgG4Ab对照(■)的固定化的SIRPb-His进行评价。除用小鼠抗体显露B4B6之外，用驴抗人抗体进行显露，并使用TMB底物通过比色法在450nm处显示。
图8.(A)通过Blitz对人SIRPg重组蛋白上的抗SIRP抗体的亲和力分析。
将SIRPg-His重组蛋白固定在NINTA生物传感器上，并以10μg/ml加入标记的抗体。在120秒的结合期(ka)、接着经过120秒的解离期(kd)后推断出值，以确定亲和常数(KD)。(B)通过ELISA测定抗SIRP抗体在SIRPg上的结合分析(人SIRPg-His涂覆和抗人κ检测)。通过ELISA对HEFLB(■)、SIRP29(Δ)、Kwar23(o)、LSB2-20(●)和IgG4Ab对照(■)的固定化的SIRPb-His进行评价。用驴抗人抗体进行显露，并使用TMB底物通过比色法在450nm处显示。
图9.通过Blitz对用抗SIRP抗体预孵育的人SIRPg重组蛋白上的CD47的亲和力分析。将SIRPg-His重组蛋白以10μg/ml固定在NINTA生物传感器上，并以20μg/ml(饱和浓度)加入标记的抗体。然后，以100μg/ml加入CD47Fc，并在120秒的结合期(ka)、接着经过120秒的解离期(kd)之后推断亲和力值，以确定亲和常数(KD)。
图10.用不同单克隆抗体染色并用第二抗-IgG荧光抗体显示后，通过流式细胞术在(A)外周人CD3+ T细胞、(B)红细胞或(C)血小板上测量的几何平均荧光强度。
图11.用不同的单克隆抗体染色后阳性外周人CD3+ T细胞的百分比。该表显示了重复实验中阳性细胞的值(％)。
图12.(A)(C)用抗CD3+抗CD28磁珠以1：1的比例刺激从健康志愿者的外周血单核细胞分离的人T细胞3天，或(B)(D)用同种异体树突状细胞(DC)以5T细胞：1DC的比例刺激5天，或(E)用不同浓度的结核菌素未纯化的蛋白衍生物(PPD)刺激5天。在培养的第0天加入抗体。通过在培养的最后12小时内加入H3-胸苷来测量增殖。
图13.从首次接受试验的小鼠的脾细胞中分离小鼠CD8+ T细胞。用抗CD3+抗CD28磁珠以1：1的比例刺激CD8 T细胞3天。在培养的第0天加入抗体。通过在培养的最后12小时内加入H3-胸苷来测量增殖。
图14.用同种异体树突状细胞(DC)以5T细胞：1DC的比例刺激从健康志愿者的外周血单核细胞分离的人T细胞5天。在培养的第0天加入抗体。通过在培养的最后12小时内加入H3-胸苷来测量增殖。
图15.(A)抗SIRPa(P84克隆)的抗肿瘤作用，在小鼠肝癌的原位模型(anorthotropic model)中(第0天通过门静脉注射的2.5×106Hepa 1.6细胞)，每周三次腹膜内给药抗SIRPa，连续4周(300μg/注射)，组合或不组合两次注射(第4天和第8天)抗4-1-BB mAb(3H3克隆，100μg/注射)或组合注射(每周两次)抗PDL-1(10F.9G2克隆，200μg/注射，4周内治疗)。当小鼠存活三倍于所有对照小鼠死亡所需的时间时，认为小鼠被治愈。(B)在肿瘤接种后第13天分析肿瘤浸润细胞。(C)在肿瘤接种后第13天分析肿瘤浸润细胞和脾细胞。(D)通过抗SIRPa+抗4-1BB注射而预先在肝癌模型中被治愈的小鼠或用抗4-1BB治疗的SIRPa突变小鼠通过在脾中注射Hepa 1.6细胞(2.5×106细胞/小鼠)而被再次攻击。以相同通路平行注射首次接受试验的小鼠，以与再次攻击的小鼠比较肿瘤发展。然后不处理小鼠。(E)通过抗SIRPa+抗4-1BB而预先在肝癌模型中被治愈的小鼠通过在脾中注射Hepa 1.6细胞(2.5×106细胞/小鼠)而被再次攻击，并在再次攻击后30天收取它们的脾。分离脾细胞和T细胞脾细胞。给首次接受试验的小鼠静脉注射载体、全脾细胞(10×106细胞/小鼠)或从脾细胞中纯化的T细胞(2.5×106细胞/小鼠)以及全部都在脾中接受Hepa1.6细胞注射(2.5×106细胞/小鼠)。然后不处理小鼠，当它们存活三倍于所有对照小鼠死亡所需的时间时，认为它们被治愈。
图16.通过抗SIRPa+抗PDL1注射而预先在肝癌模型中被治愈的小鼠通过在脾中注射Hepa 1.6细胞(2.5×106细胞/小鼠)而被再次攻击。以相同通路平行注射首次接受试验的小鼠，以与再次攻击的小鼠比较肿瘤发展。然后不处理小鼠。
图17.抗SIRPa(P84克隆)的抗肿瘤作用，在小鼠乳腺癌的原位模型中，每周三次腹膜内给药抗SIRPa，持续4周(200μg/注射)(在乳腺中注射0.25×106的4T1细胞)。通过测量肿瘤直径并根据下式计算：＝(0.52(d2))1.5，来评价肿瘤的发展。根据伦理指南，当肿瘤发展接近1000mm3时对小鼠实施安乐死。
图18.用抗SIRPa(P84克隆)或ctrl mAb处理的小鼠的脾、肿瘤和淋巴结中的免疫细胞表型分析，在小鼠乳腺癌的原位模型中，每周三次腹膜内给药抗SIRPa，持续两周(200μg/注射)(在乳腺中注射0.25×106的4T1细胞)。在肿瘤接种后两周进行免疫细胞分析。
图19.在第0天和第2天以12mg/kg在C57Bl/6小鼠中腹膜内施用抗SIRPa(P84克隆)、抗CD47(MIAP410克隆)和无关同种型对照。在第0天和第3天在含有EDTA的管中收集血液样品，并用XS-800i血液分析器(Sysmex)进行血细胞计数。在第3天评价血红蛋白的水平(左)和血细胞比容的百分比(右)。虚线表示C57Bl/6小鼠中每个参数的正常范围值。
图20.(上)与从健康供体的血液中新鲜分离的人血小板上的对照mAb(虚线)相比，抗SIRPa(HEFLB，灰色)和抗CD47(B6H12，黑色)mAb的流式细胞术分析。(下)在50μg/ml对照mAb、抗SIRPa(HEFLB)、抗CD47(B6H12)或抗整联蛋白αIIb作为聚集抑制剂的阳性对照的存在下，使用光学凝集计测量人血小板聚集。在未活化血小板和ADP-活化的血小板上评价抗体。
图21.同种异体CD4+ T细胞与从(A)新鲜的卵巢癌腹水或(B)冷冻的卵巢癌腹水(使用10μg/ml对照抗体(白)、抗SIRPa HEFLB(黑)或抗CD47mAb(灰))中提取的CD14+骨髓细胞(以1：1的比例)一起培养。在第5天通过加入3H-胸苷来测量增殖。(C)或者，同种异体T细胞以5：1的比例与同种异体树突细胞以及不同比例的CD14+骨髓细胞一起培养，CD14+骨髓细胞是在10μg/ml抗体的存在下从卵巢癌腹水(如(A))中提取的。
图22.修饰的抗体的SIRPa ELISA结合测定。通过ELISA评估固定化SIRPa-His上未修饰的抗SIRPa抗体(HEFLB)和不同的修饰的抗SIRPa HEFLB抗体，修饰的抗SIRPaHEFLB抗体具有连接至重链(VHprot+VL(■))或轻链(VH+VLprot(Δ))的多肽。结果用修饰的抗SIRPa抗体获得，该抗体与PD1、PDL1、CD80、CD86、OX40L、4-1BBL或ICOSL的胞外域(ECD)偶联。
图23.通过ELISA检测修饰的抗SIRPa抗体上融合蛋白的ECD。通过ELISA评估固定化SIRPa-His上抗SIRPa抗体(HEFLB)和不同的修饰的抗SIRPa HEFLB抗体，修饰的抗SIRPaHEFLB抗体在重链(VHprot+VL(■))或轻链(VH+Vlprot(Δ))上具有融合蛋白。结果使用修饰的抗SIRPa抗体获得，该抗体与PD1、PDL1、CD80、CD86、OX40L、4-1BBL或ICOSL的胞外域(ECD)偶联。
图24.通过ELISA用不同的修饰的抗SIRPa抗体进行配体结合测定。通过ELISA评估固定化SIRPa-His上不同的修饰的抗SIRPa抗体，修饰的抗SIRPa抗体具有连接至重链(VHprot+VL(■))或连接至轻链(VH+VLprot(Δ))的融合蛋白。检测用不同融合的缀合物的特异性配体进行：PDL1Fc(针对PD1)、PD1His(针对PDL1)、CTLA4-Fc(针对CD80和CD86)、OX40Fc(针对OX40L)、4-1BBFcHis(针对4-1BBL)、CD28Fc(针对ICOSL)，分别通过小鼠抗人PDL1、小鼠抗His、小鼠抗人CTLA4Fc、小鼠抗人OX40、小鼠抗人His、小鼠抗人CD28进行显示，接着用过氧化物酶标记的抗小鼠IgG，然后使用TMB底物通过比色法在450nm处显示。
图25.通过ELISA对不同的修饰的抗SIRPa抗体的SIRPa-CD47相互作用竞争测定。不同的修饰的抗SIRPa抗体的拮抗剂活性测量。通过ELISA评估包被的SIRPa-His上单独的抗SIRPa(HEFLB(x))、不同的修饰的抗SIRPa HEFLB抗体，该修饰的抗SIRPaHEFLB抗体具有连接至重链(VHprot+VL(■))或连接至轻链(VH+VLprot(Δ))的不同浓度的融合蛋白，并与恒定浓度的生物素化CD47-Fc(6μg/ml)一起孵育。结果用修饰的抗SIRPa抗体获得，该抗体与PD1、PDL1、CD80、CD86、OX40L、4-1BBL或ICOSL的胞外域(ECD)偶联。
图26.使用可溶性修饰的抗SIRPa抗体的PBMC的TNFa分泌测定。通过ELISA评估由如下物质在37℃、5％CO2下活化2天的PBMC分泌的TNFa：OKT3(1μg/ml)和10μg/ml的可溶性抗SIRPa HELFB抗体、抗PD1(Keytruda mAb)、HEFLB+重组蛋白(未融合)、修饰的抗SIRPaHEFLB抗体(在抗体的重链(VHprot+VL)或轻链(VH+VLprot)上具有融合蛋白)，或作为阳性对照的Pha-L。结果用修饰的抗SIRPaHEFLB抗体获得，该抗体与PD1、PDL1、CD80、CD86、OX40L、4-1BBL或ICOSL融合。结果代表了3个不同的捐助者。
Figure 27.使用可溶性修饰的抗SIRPa抗体的PBMC(n＝3)的IFNg分泌测定。通过ELISA评估由如下物质在37℃、5％CO2下活化2天的PBMC分泌的IFNg：OKT3(1μg/ml)和10μg/ml的可溶性抗SIRPa HELFB抗体、抗PD1(Keytruda mAb)、HEFLB+重组蛋白(未融合)、修饰的抗SIRPa HEFLB抗体(在抗体的重链VHprot+VL或轻链VH+VLprot上具有融合蛋白)，或作为阳性对照的Pha-L。结果用修饰的抗SIRPaHEFLB抗体获得，该抗体与PD1、PDL1、CD80、CD86、OX40L、4-1BBL或ICOL融合。
图28.使用可溶性修饰的抗SIRPa抗体的分离的人T淋巴细胞的增殖测定。评估使用如下可溶的不同蛋白质的包被的OKT3(1μg/ml)的T细胞增殖(在37℃、5％CO2下进行3天)：10μg/ml的抗SIRPa HEFLB抗体、抗PD1Keytruda mAb、重组蛋白、HEFLB+重组蛋白，或修饰的抗SIRPa HEFLB抗体(在重链VHprot+VL或轻链VH+VLprot上融合有蛋白)、或Pha-L阳性对照。在测量前8小时掺入3H胸苷，结果以cpm表示，以确定增殖水平。结果用修饰的抗SIRPaHEFLB抗体获得，该抗体与PD1、PDL1、CD80、CD86、OX40L、4-1BBL或ICOSL融合。
图29.使用可溶性修饰的抗SIRPa抗体的分离的人T淋巴细胞的TNFa分泌测定。通过ELISA评估使用10μg/ml的如下不同的可溶性蛋白的OKT3包被的T细胞(1μg/ml)在37℃、5％CO2下连续2天分泌的TNFa：抗SIRPa HEFLB抗体、抗PD1KeytrudamAb、重组蛋白、HEFLB抗体+重组蛋白(未融合)，或修饰的抗SIRPa HEFLB抗体(在重链VHprot+VL或轻链VH+VLprot上融合有蛋白)。结果用修饰的抗SIRPa HEFLB抗体获得，该抗体与PD1、PDL1、CD80、CD86、OX40L、4-1BBL或ICOSL融合。
图30.通过ELISA对未成熟的人巨噬细胞进行MIP1a(CCL3)分泌测定。用CD47Fc培养未成熟的巨噬细胞，然后加入10μg/ml的如下可溶性蛋白：抗SIRPa HEFLB抗体、抗PD1Keytruda mAb或修饰的抗SIRPa HEFLB抗体(在重链VHprot+VL上与PD1、PDL1、CD80或4-1BBL融合)，培养在37℃、5％CO2下进行24h。收集上清液，并通过ELISA测量MIP1a分泌。结果用修饰的抗SIRPa HEFLB抗体获得，该抗体与PD1、PDL1、CD80、CD86、OX40L、4-1BBL或ICOSL融合。
图31.修饰的抗SIRPa抗体和结合抗SIRPg ELISA分析。通过ELISA评估固定化人SIRPg-His上的HEFLB抗体、在VH链上与PDL1、CD80或CD86融合的修饰的抗SIRPa抗体，或Kwar23抗体。用过氧化物酶标记的抗人IgG-Fc进行显露，并使用TMB底物通过比色法在450nm处显示。
图32.修饰的抗SIRPa抗体对巨噬细胞和T细胞生物测定中的MIP1a、TNFa和IFNg分泌的影响。培养CD47包被的(1μg/ml)未成熟巨噬细胞(GM-CSF浓度为10ng/ml的人类单核细胞培养2天)，加入10μg/ml的以下所述的不同抗体，在37℃、5％的CO2中培养24h，并加入OKT3预活化T细胞。
测试了单独或与重组蛋白(PDL1Fc、4-1BBL1Fc、CD80His或CD86His)结合的可溶性HEFLB抗体，与PDL-1或4-1BBL1或CD80或CD86融合的抗B12-4作为双功能同种型对照抗体，或在重链上与PDL1、4-1BBL、CD80或CD86融合的修饰的抗SIRPa抗体(VHprot+VL)。
A.使用可溶性修饰的抗SIRPa抗体的未成熟巨噬细胞的MIP1a(CCL3)分泌测定。收集上清液，并通过ELISA测量MIP1a分泌。
B.在37℃、5％CO2下，以10μg/ml的浓度存在上述不同的可溶性蛋白质时，通过ELISA评估TNFa的分泌。
C.在37℃、5％CO2下，以10μg/ml的浓度存在上述不同的可溶性蛋白质时，通过ELISA评估IFNg的分泌。
图33.使用细胞内钙的延时分析法测量T细胞活化。在修饰的抗SIRPa抗体(具有融合在VH链上的PDL1)存在下，将CD47预包被的未成熟巨噬细胞与Fura-OKT3染色的T细胞共培养24小时。在添加T细胞后的T0和T38分钟测量钙活性。
实施例
在以下实施例中，抗体“18D5”(或“m18D5”)对应于小鼠抗体18D5，“嵌合”抗体对应于嵌合小鼠/人18D5抗体，抗体“HALA、HALB、HBLA、HBLB、HCLA、HCLB、HELA、HELB、HFLA、HFLB、HEFLA和HEFLB“对应于特定的人源化18D5变体。抗体6G10和12D7属于申请人；这些抗体通过与m18D5相同的方法获得，并用作对照。这些对照抗体是IgG2a小鼠单克隆抗人SIRPa抗体。
另外，商业抗体用作比较。第一种是抗SIRPa抗体，命名为SE7C2(Santa Cruz sc-23863)；第二种抗体是能够识别SIRPα/β的抗体，并命名为SE5A5(BioLegendBLE323802)；第三种是抗人SIRPa抗体，命名为Kwar23(Creative Biolabs)。在PCT申请WO2013056352中描述的来自多伦多大学的命名为SIRP29的抗人SIRPa抗体也用作比较。
为了构建修饰的抗SIRPa抗体，人源化抗SIRPa抗体IgG4m(HEFLB)的序列(重链或轻链)在抗体的重链或轻链的C末端与共刺激或共抑制免疫检查点蛋白的胞外域(ECD)偶联。为了在HEFLB重链上融合各种不同的蛋白质，PD1、PDL1、CD80、CD86、OX40L、4-1BBL或ICOSL的胞外域被合成并在VH-pFuseCHIg-hG4m表达质粒(来自图卢兹Invivogen的pFuseCHIg-hG4m载体)中通过NsiI克隆，VH-pFuseCHIg-hG4m表达质粒包含人源化HEFLB重链和人IgG4突变的Fc(S228P)以稳定铰链区。为了在HEFLB的轻链上融合各种不同的蛋白质，PD1、PDL1、CD80、CD86、OX40L、4-1BBL或ICOSL的胞外域被合成并在VL-pFuse2CLIg-hk表达质粒(来自图卢兹Invivogen的pFuse2CLIg-hk)中通过AccI/NheI克隆，VL-pFuse2CLIg-hk表达质粒包含HEFLB和人CLkappa的人源化轻链。
在HEK 293Freestyle细胞中，通过lipofectamine方法将含有VHhFcG4野生型或与蛋白质融合的质粒与含有VL-CLk wt(VHprot+VL)的质粒共转染；并且用含有VL-CLk野生型或与一种蛋白质(VH+VLprot)融合的质粒共转染VHhFcG4野生型。孵育48-72h后，回收上清液，并在蛋白质A色谱(HiTrap，GeHealthcare)上用柠檬酸0.1M pH 3洗脱缓冲液进行亲和纯化。将纯化的抗体在PBS中透析并浓缩。通过夹心ELISA对每种抗体进行定量，并在针对SIRPa或配体样抗原的活性测定中进行测试。
实施例1至23显示了用未修饰的抗SIRPa 18D5变体获得的实验结果(图1至21)。
实施例24至32显示了用修饰的HEFLB变体(在其重链或轻链的C末端连接至不同的免疫治疗剂)所获得的实验结果(图22至30)。
实施例1.通过ELISA对SIRPa上的抗SIRPa抗体进行结合分析
方法：通过ELISA评估抗SIRPa抗体的结合活性。对于嵌合抗体、人源化抗体、SIRP29和Kwar23的ELISA测定，将重组hSIRPa(生物制药有限公司，北京，中国；参考号11612-H08H)以0.5μg/ml(在碳酸盐缓冲液(pH9.2)中)固定在塑料上，并加入纯化的抗体，测量结合。孵育和洗涤后，加入过氧化物酶标记的驴抗人IgG(杰克逊免疫研究；美国；参考号709-035-149)，并通过常规方法显示。
对于使用小鼠抗体的ELISA测定，将重组hSIRPa(生物制药有限公司，北京，中国；参考号10975-H08H)以0.5μg/ml(在碳酸盐缓冲液(pH9.2)中)固定在塑料上，并加入纯化的抗体，测量结合。孵育和洗涤后，加入过氧化物酶标记的山羊抗小鼠Fc链(杰克逊免疫研究；参考号115-036-071)，并通过常规方法显示。
结果：如图1A，1B和1C所示，通过ELISA测量的不同抗SIRPa抗体对SIRPa的结合活性显示如下有效浓度(EC50)：在第一次实验中，嵌合抗体为2.9ng/ml，HALA为3.9ng/ml，HFLA为5.1ng/ml，HFLB为4.0ng/ml，HEFLA为7.1ng/ml，HEFLB为4.4ng/ml；在第二次实验中，嵌合抗体为4.06ng/ml，HCLA为5.60ng/ml，HCLB为5.59ng/ml，HELA为4.61ng/ml，HELB为4.13ng/ml；以及在第三次实验中，嵌合抗体为2.74ng/ml，HALB为2.53ng/ml，HBLA为2.68ng/ml，HBLB为2.95ng/ml。这些结果表明，与其他已知的抗SIRPa抗体SIRP29(3.7ng/ml)和Kwar23(3.3ng/ml)相比，通过ELISA测试的本发明的抗体是良好的SIRPa结合物。这些结果表明，当SIRPa涂覆在塑料孔上时，所有本发明的抗体识别的表位都是可接近的。
如图1D所示，通过ELISA测量的不同抗SIRPa抗体对SIRPa的结合活性显示如下有效剂量(ED50)：SE5A5为0.16nM(24ng/ml)，克隆m18D5为0.06nM(9ng/ml)。根据ELISA测定，克隆6G10和克隆12D7似乎不结合SIRPa。这些结果表明，根据ELISA测定，与商业抗体相比，克隆m18D5是良好的SIRPa结合物，并且表明，与克隆6G10和克隆12D7相比，当SIRPa涂覆在塑料孔上时，该克隆识别的表位是可接近的。
实施例2.针对SIRPa的抗SIRPa抗体的生物传感器亲和力测量
方法：将重组hSIRPa(生物制药有限公司，北京，中国；参考号11612-H08H)以5μg/ml(500RU)固定在CM5传感器芯片(GE医疗；法国)中，应用不同浓度的抗体，流速为40μl/min。用BIAcore 3000(Biacore，GE医疗)进行分析。在3分钟的结合期(ka)、然后10分钟的解离期(kd)之后测量值，以确定亲和常数(KD)。
结果：如图2所示，本发明的抗体对SIRPa具有强亲和力(KD)(从1.93e-10M到3.67e-10M)，这相当于已知的抗SIRPa抗体SIRP29和Kwar23的亲和力，并且优于商业抗SIRPa抗体SE7C2和SE5A5的亲和力。
实施例3.通过细胞荧光测定法对人单核细胞上SIRPa结合进行测定
方法：为了测量人单核细胞上抗SIRPa抗体的结合，首先，在室温下加入人Fc受体结合抑制剂(BD pharmingen；美国；参考号564220)30分钟，以阻断人单核细胞上的人Fc受体，以减少背景。然后，将抗体在4℃孵育30分钟，并洗涤，然后在4℃用PE标记的抗人IgG Fc(Biolegend；美国；参考号409303)染色30分钟。对于小鼠抗体，使用PE标记的抗小鼠IgG(杰克逊免疫研究；参考号715-116-151)。在BD LSRII或Canto II细胞荧光仪上分析样品。
结果：如图3所示，结果显示，相对于已知的抗SIRPa抗体Kwar23、SE7C2和SE5A5，本发明的抗SIRPa抗体与人单核细胞强结合，以及结合物结合(a binder binding)(用MFI(中值荧光强度)测量)。
实施例4.通过拮抗剂ELISA测定CD47与抗SIRPa抗体之间的竞争性分析
方法：对于竞争性ELISA测定，将重组hSIRPa(生物制药有限公司，北京，中国；参考号11612-H08H)以0.5μg/ml(在碳酸盐缓冲液(pH9.2)中)固定在塑料上。对于嵌合抗体，将人源化抗体(SIRP29和Kwar23)、纯化的抗体(不同浓度)与终浓度为6μg/ml(固定浓度)的生物素化的人CD47Fc(AcroBiosystems interchim；法国；参考号：#CD7-H82F6)在37℃下混合2小时，测量竞争性结合。孵育和洗涤后，加入过氧化物酶标记的链霉亲和素(Vectorlaboratoring；美国；参考号SA-5004)，以检测生物素-CD47Fc结合，并通过常规方法显示。
对于小鼠抗体，将纯化的抗体(不同浓度)与0.04μg/ml CD47Fc(生物制药有限公司，北京，中国；参考号12283-H02H)在37℃下混合2小时，测量竞争性结合。孵育和洗涤后，加入过氧化物酶标记的驴抗人Fc链(杰克逊免疫研究；参考号709-035-149)，以检测CD47Fc结合，并通过常规方法显示。
结果：如图4所示，本发明的抗体对SIRPa-CD47的相互作用具有拮抗活性。特别地，观察到与SIRP29和商业抗SIRPa抗体SE5A5的拮抗活性相比，嵌合抗体、HFLA、HFLB、HEFLA和HEFLB具有更好的拮抗活性。
实施例5.通过拮抗剂细胞荧光测定法测定人单核细胞上的CD47与人源化抗SIRPa
抗体之间的竞争性分析
方法：为了测量人单核细胞上的CD47与人源化抗SIRPa抗体之间的竞争，在4℃下在单核细胞上加入纯化的抗体15分钟，然后与5μg/ml(终浓度)的生物素化的人CD47Fc(AcroBiosystems interchim；法国；参考号：#CD7-H82F6)混合，并在4℃孵育30分钟，测量竞争性结合抗体。孵育和洗涤后，在4℃下加入PE标记的链霉亲和素(BDBiosciences；美国；参考号554061)15分钟，以检测生物素-CD47Fc的结合，并在BD LSRII或Canto II细胞荧光仪上进行分析。
为了测量人单核细胞上的CD47与小鼠抗hSIRPa抗体之间的竞争，在4℃下在单核细胞上加入纯化的抗体15分钟，然后与5μg/ml(终浓度)的CD47Fc(生物制药有限公司，北京，中国；参考号12283-H02H)混合，并在4℃下孵育15分钟，测量竞争性结合抗体。孵育和洗涤后，在4℃下加入FITC标记的抗人Fc(Beckman Coulter；参考号IM1627)15分钟，以检测CD47Fc的结合，并在BD LSRII或Canto II细胞荧光仪上进行分析。
结果：如图5所示，本发明的抗体对人单核细胞上的SIRPa-CD47相互作用具有拮抗活性。
实施例6.用SP-D进行Blitz法竞争
方法：该方法用Blitz进行(FortéBio；美国；参考号C22-2No 61010-1)。
条件A：SIRPa+抗SIRPa抗体+表面活化蛋白D(SP-D)。在第一步中，将SIRPa(His)重组蛋白(生物制药有限公司，北京，中国；参考号11612-H08H)通过组氨酸尾部以10μg/ml固定在Ni-NTA生物传感器(FortéBio；美国；参考号18-0029)中30秒。在第二步中，以20μg/mL(饱和浓度)加入抗SIRPa抗体120秒。然后，人SP-D(R et D Systems；美国；参考号1920-SP-050)以100μg/mL结合120秒，与抗SIRPa抗体竞争。在动力学缓冲液中进行120秒SP-D的解离。使用Blitz pro 1.2软件进行数据分析，计算结合常数(ka)和解离常数(kd)并确定亲和常数KD(ka/kd)。
条件B：SIRPa+表面活化蛋白D(SP-D)+抗SIRPa抗体。在第一步中，将Sirp-a(His)重组蛋白(生物制药有限公司，北京，中国；参考号11612-H08H)通过组氨酸尾部以10μg/ml固定在Ni-NTA生物传感器(FortéBio；美国；参考号18-0029)中30秒。在第二步中，以100μg/mL加入人SP-D(R et D Systems；美国；参考号1920-SP-050)120秒。然后，抗SIRPa抗体以20μg/mL(饱和浓度)结合120秒。在动力学缓冲液中进行120秒抗SIRPa抗体的解离。使用Blitzpro 1.2软件进行数据分析，计算结合常数(ka)和解离常数(kd)并确定亲和常数KD(ka/kd)。
结果：如图6所示，抗SIRPa抗体18D5的结合不阻断SP-D与SIRPa的结合，并且SP-D的结合不阻断18D5与SIRPa的结合。因此，本发明的抗体不抑制SIRPa与SP-D之间的相互作用。
实施例7.通过Blitz法测定抗SIRPa抗体对SIRPb的亲和力
方法：该方法用Blitz进行(FortéBio；美国；参考号C22-2No 61010-1)。将重组hSIRPb-His(抗体-在线；美国；参考号ABIN3077231)以10μg/ml通过组氨酸尾部固定在Ni-NTA生物传感器(FortéBio；美国；参考号18-0029)中30秒。然后，抗SIRPa抗体以20μg/mL结合120秒。在动力学缓冲液中进行120秒抗SIRPa抗体的解离。使用Blitz pro 1.2软件进行数据分析，计算结合常数(ka)和解离常数(kd)并确定亲和常数KD(ka/kd)。
结果：如图7A所示，与SIRPa相比，本发明的抗体对SIRPb具有较低的亲和力。特别地，注意到与SIRP29和Kwar23相比，嵌合抗体、HFLA、HFLB、HEFLA、HEFLB对SIRPb的亲和力降低。
实施例8.SIRPb上抗SIRP抗体的ELISA结合
方法：对于活性ELISA测定，将重组hSIRPb-His(抗体-在线；美国；参考号ABIN1466557)以1μg/ml(在碳酸盐缓冲液(pH9.2)中)固定在塑料上，并加入纯化的抗体，测量结合。孵育和洗涤后，加入过氧化物酶标记的驴抗人IgG(杰克逊免疫研究；美国；参考号709-035-149)，并用常规方法显示。
结果：如图7B所示，抗SIRPa抗体对SIRPb具有低亲和力。必须指出，对于除B4B6(用小鼠抗体显示)之外的所有抗体，用驴抗人抗体进行显露，这可以解释抗SIRPb抗体B4B6获得的信号低于抗SIRPa抗体获得的信号。
实施例9.通过Blitz法的抗SIRPa抗体对SIRPg的亲和力分析
方法：该方法用Blitz进行(FortéBio；美国；参考号C22-2No 61010-1)。将重组hSIRPg-His(生物制药有限公司，北京，中国；参考号11828-H08H)以10μg/ml通过组氨酸尾部固定在Ni-NTA生物传感器(FortéBio；美国；参考号18-0029)中30秒。然后，抗SIRPa抗体以20μg/mL结合120秒。在动力学缓冲液中进行120秒抗SIRPa抗体的解离。使用Blitz pro1.2软件进行数据分析，计算结合常数(ka)和解离常数(kd)并确定亲和常数KD(ka/kd)。
结果：如图8A所示，本发明的抗SIRPa抗体对SIRPg具有低亲和力。该亲和力略微弱于已知的抗SIRPa抗体(SIRP29和Kwar23)的亲和力。然而，抗SIRPa抗体、SIRP29和Kwar23之间的动力学性质不同，与SIRP29和Kwar23相比，抗SIRPa抗体具有高解离率常数(Kd)。特别地，HFLB对SIRPg的亲和力最低，其KD值为1.036e-7M，与SIRP29和Kwar23的KD值相比，相当于2-log的差异。
实施例10.抗SIRP抗体对SIRPg的ELISA结合
方法：对于活性ELISA测定，将hSIRPg-His(生物制药有限公司，北京，中国；参考号11828-H08H)以1μg/ml(在碳酸盐缓冲液(pH9.2)中)固定在塑料上，并加入纯化的抗体，测量结合。孵育和洗涤后，加入过氧化物酶标记的驴抗人IgG(杰克逊免疫研究；美国；参考号709-035-149)，并用常规方法显示。
结果：如图8B所示，抗SIRPa抗体HEFLB不结合SIRPg，而已知的抗SIRPa抗体SIRP29和Kwar23显示出与SIRPg的显著结合。
实施例11.用CD47对SIRPg进行Blitz法竞争：SIRPg+抗SIRPa抗体+CD47
方法：该方法用Blitz进行(FortéBio；美国；参考号C22-2No 61010-1)。在第一步中，将hSIRPg-His(生物制药有限公司，北京，中国；参考号11828-H08H)通过组氨酸尾部以10μg/ml固定在Ni-NTA生物传感器(FortéBio；美国；参考号18-0029)中30秒。在第二步中，以20μg/mL(饱和浓度)加入抗SIRPa抗体120秒。然后，人CD47Fc(生物制药有限公司，北京，中国；参考号12283-H02H)以100μg/mL结合120秒，与抗SIRPa抗体竞争。在动力学缓冲液中进行120秒CD47Fc的解离。使用Blitz pro 1.2软件进行数据分析，计算结合常数(ka)和解离常数(kd)并确定亲和常数KD(ka/kd)。
结果：如图9所示，本发明的抗SIRPa HEFLB不竞争CD47与SIRPg的结合。相反，其他已知抗体SIRP29，特别是kwar23竞争CD47与SIRPg的结合。
实施例12.通过流式细胞术测定与血细胞的结合
方法：实验旨在分析抗SIRPa抗体在人血细胞上的结合。从健康志愿者的纯化血液中提取CD3阳性T淋巴细胞、红细胞和血小板。然后将细胞在4℃下用10微克/ml的每种测试抗体染色30分钟，洗涤，然后用第二荧光抗IgG抗体在4℃再染色30分钟。洗涤后，在CANTOII(BD Bioscience)流式细胞仪上分析细胞。
结果：如图10所示，T细胞、红细胞和血小板对CD47是阳性的，其普遍表达，并且它们用B6H12抗体染色。SIRP29和Kwar23抗体，如LSB2.20(特异性抗SIRPγ抗体)，与已知表达SIRPγ的T细胞结合。然而，抗SIRPa人源化18D5抗体不与T细胞结合(用测试的四种不同18D5人源化变体获得相同结果)。红细胞和血小板不表达SIRPa，因此，它们未被人源化18D5抗体和其他抗SIRPa抗体显示。该结果显示，与已知的抗SIRPa抗体相比，人源化18D5抗体对活细胞的SIRPa具有特异性。
如图11所示，T细胞不被人源化18D5抗体染色(用测试的5种不同18D5人源化变体获得相同结果)和嵌合体18D5染色(数据未显示)，而超过70％的T细胞被SIRP29和Kwar23染色。
实施例13.人CD3+ T细胞增殖
方法：从健康志愿者的血沉棕黄层中分离出hPBMC。使用AutoMACS(Miltenyi)通过阳性选择法选择CD4或CD8 T细胞，并接种于96孔板(50000细胞/孔)中。增殖信号由抗CD3/抗CD28涂覆的微珠(LifeTechnologies)(以1个微珠/1个T细胞的比例)在3天内提供，或由体外产生的同种异体成熟树突细胞(以5个T细胞/1个mDC1的比例)在5天内提供，或由不同浓度的结核菌素未纯化蛋白衍生物(PPD)提供5天。从增殖试验开始，以饱和浓度(10μg/mL)加入靶向SIRPa/CD47通路的抗体。通过在培养的最后12小时内加入H3-胸苷来测量增殖。
结果：如图12所示，当用抗CD3+抗CD28珠(A)(C)或用同种异体树突细胞(B)(D)或用PPD(E)刺激T细胞时，抗SIRPa抗体HALA和HEFLB变体不抑制T细胞的增殖，而当用同种异体树突细胞刺激T细胞时，抗SIRPa Kwar23抑制T细胞的增殖。如所预期的，抗CD47抗体和抗SIRPg抗体是T细胞增殖的抑制剂。
实施例14.小鼠CD8+ T细胞的增殖
方法：从首次接受试验的小鼠中分离出脾细胞。使用AutoMACS(Miltenyi)通过阳性选择法选择CD8 T细胞，并接种于96孔板(50000细胞/孔)中。增殖信号由抗CD3/抗CD28涂覆的微珠(LifeTechnologies)(以1个微珠/1个T细胞的比例)在3天内提供。从增殖试验开始，以饱和浓度(10μg/mL)加入靶向SIRPa/CD47通路的小鼠抗SIRPa抗体(P84)和抗CD47抗体(MIAP310)。通过在培养的最后12小时内加入H3-胸苷来测量增殖。
结果：如图13所示，抗SIRPa或抗CD47抗体对小鼠T细胞的增殖没有抑制作用。该结果可通过小鼠不表达SIRPg基因的事实来解释。因此，小鼠可以用作模型来预测不结合SIRPg的特异性抗SIRPa抗体的体内作用。相反，抗CD47或非选择性抗SIRPa抗体的体内临床前效力(特别是适应性免疫和记忆T淋巴细胞的产生)不能预测人类情况。
实施例15.人T细胞的增殖
方法：从健康志愿者的血沉棕黄层中分离出hPBMC。使用AutoMACS(Miltenyi)通过阳性选择法选择CD4或CD8 T细胞，并接种于96孔板(50000细胞/孔)中。增殖信号由抗CD3/抗CD28涂覆的微珠(LifeTechnologies)(以1个微珠/1个T细胞的比例)在3天内提供，或由体外产生的同种异体成熟树突细胞(以5个T细胞/1个mDC1的比例)在5天内提供。从增殖试验开始，以饱和浓度添加抗体(抗CD47和抗SIRPa抗体为5μg/mL，抗PD-1/PD-L1抗体和重组4-1BBL为2.5μg/mL)。通过在培养的最后12小时内加入H3-胸苷来测量增殖。
结果：如图14所示，抗PD-1/PD-L1抗体和重组4-1BBL对人T细胞的增殖具有增强作用，而抗CD47对人T细胞的增殖具有不利影响。特别地，抗CD47抗体阻止抗PD-1/PD-L1或4-1BB拮抗剂的人T细胞免疫刺激效力。抗SIRPa HEFLB对T细胞的增殖没有显著影响。
实施例16.小鼠中的抗肿瘤作用
方法：用甲苯噻嗪/氯胺酮混合物麻醉小鼠。剖腹手术后，通过门静脉在PBS中注射肿瘤Hepa 1.6细胞(2.5×106个细胞/100μL)。在肿瘤注射后4天，开始治疗。在PBS腹膜内注射Hepa 1.6细胞(肝癌细胞，HCC)后，在第4天和第8天注射拮抗性抗4-1BB单克隆抗体(3H3)两次(100μg/注射)。每周两次在PBS中腹膜内注射抗PDL1单克隆抗体(200μg/注射)，持续4周。在PBS中腹膜内注射的4周期间，每周三次注射拮抗性抗SIRPa抗体(P84)(300μg/注射)。
在肿瘤接种后13天，在HCC的原位模型中评估抗肿瘤反应。此时，收集肿瘤和脾，以对浸入肿瘤或全身方式的免疫细胞进行表型分析。用四种不同的混合物染色作为浸润性免疫细胞的肝脏的脾细胞和非实质细胞(NPC)，用于流式细胞术获取。
结果：如图15A所示，单独的抗SIRPa抗体显著延长了一小部分小鼠(28％)的存活率。与抗4-1BB或抗PDL1抗体组合，抗SIRPa抗体甚至允许在停药后存活的小鼠的非常高的响应率
如图15B所示，抗SIRPa与共刺激剂(例如抗4-1BB)或T细胞检查点抑制剂(例如抗PDL1)的组合通过降低调节和免疫抑制性免疫细胞(Tregs，Mo-MDSC)来改变肿瘤微环境，同时增加效应记忆CD8+ T细胞与抗4-1BB组合的积累。Mo-MDSC的特征在于CD11b阳性和MHCII类阴性群体中高表达Ly6C且不表达Ly6G。
如图15C所示，通过降低未成熟和初始B细胞的频率，同时增加记忆细胞和浆母细胞的积累，抗SIRPa与共刺激剂(例如抗4-1BB)或T细胞检查点抑制剂(例如抗PDL1)的组合改变了肿瘤微环境的细胞组成和脾脏周围的细胞组成。类似地，通过抗SIRPa与抗41BB或抗PDL1的组合，细胞溶解(CD27阴性)NK细胞的积累诱发肿瘤和外周。
总之，抗SIRPa修饰肿瘤和外周免疫，特别是适应性(T细胞、Treg、B细胞)和先天性(MDSC、巨噬细胞、NK细胞)免疫细胞，有助于肿瘤的消除和长期保护。
实施例17.预先治愈的小鼠中的抗肿瘤作用
方法：通过抗SIRPa+抗4-1BB注射而预先在肝癌模型中被治愈的小鼠或用抗4-1BB治疗的SIRPa突变小鼠通过在脾中注射Hepa 1.6细胞(2.5×106细胞/小鼠)而被再次攻击。用空气中3％的异氟烷麻醉小鼠。在小鼠侧腹切开并分离脾后，将肿瘤Hepa 1.6细胞注射到PBS的脾中(2.5×106细胞/50μL)。以相同通路平行注射首次接受试验的小鼠，以与再次攻击的小鼠比较肿瘤发展。
结果：如图15D所示，所有治愈的小鼠在再次攻击时存活，而相反，所有首次接受试验的小鼠死亡。该结果表明记忆T细胞在抗SIRPa治疗下或没有SIRPa信号(SIRPa突变小鼠)时被诱发，并且在治愈的小鼠中仍然长期存在。
实施例18.从预先治愈的小鼠中收集的T细胞脾细胞或全脾细胞的抗肿瘤作用
方法：对抗SIRPa+抗4-1BB再次攻击的治愈的小鼠实施安乐死并收集脾脏。在红细胞裂解后，提取脾细胞并用AutoMACS从脾细胞的一部分中分离CD3阳性T细胞。麻醉后，给小鼠静脉注射T细胞脾细胞(2.5×106细胞/100μL)或全脾细胞(10×106细胞/100μL)或单独的赋形剂(PBS)。如前所述，所有小鼠通过门静脉接受Hepa 1.6细胞(2.5×106细胞/100μL)。
结果：如图15E所示，从治愈的小鼠中收集的脾细胞和分离的T淋巴细胞对小鼠的存活具有高的积极作用。该结果表明，在治疗肝癌后，记忆T细胞存在于治愈小鼠的脾细胞中，并且是长期适应性免疫记忆的原因。
实施例19.预先治愈的小鼠中的抗肿瘤作用
方法：通过抗SIRPa+抗PDL-1注射而预先在肝癌模型中被治愈的小鼠通过在脾中注射Hepa 1.6细胞(2.5×106细胞/小鼠)而被再次攻击。用空气中3％的异氟烷麻醉小鼠。在小鼠侧腹切开并分离脾后，将肿瘤Hepa 1.6细胞注射到PBS的脾中(2.5×106细胞/50μL)。以相同通路平行注射首次接受试验的小鼠，以与再次攻击的小鼠比较肿瘤发展。
结果：如图16所示，所有治愈的小鼠在再次攻击时存活，而相反，所有首次接受试验的小鼠死亡。该结果表明记忆T细胞仍然存在于治愈的小鼠中。该结果表明记忆T细胞在抗SIRPa疗法下被诱发并且仍然在治愈的小鼠中长期存在。
实施例20.在乳腺癌模型中肿瘤生长的影响
方法：用空气中3％的异氟烷麻醉小鼠。小鼠在腹部剃毛，并用胰岛素注射器(30量规)(50μL PBS中)将4T1细胞注射到乳腺中。每周三次在PBS腹膜内注射拮抗性抗SIRPa抗体(P84)或对照抗体(200μg/注射)，注射4周。
结果：如图17所示，与对照抗体相比，抗SIRPa抗体显著(p<0.01)降低了乳腺癌模型中肿瘤的生长。
图18显示接种后两周的免疫细胞分析。抗SIRPa对肿瘤和外周(脾)中的骨髓和非骨髓细胞(T细胞和NK细胞)都具有积极作用，其中Tregs和记忆T细胞的积累显著减少。
实施例21.SIRPa抗体对血红蛋白浓度和血细胞比容的影响
方法：在第0天和第2天以12mg/kg在C57Bl/6小鼠中腹膜内施用抗SIRPa(P84克隆)、抗CD47(MIAP410克隆)和无关同种型对照。在第0天和第3天在含有EDTA的管中收集血液样品，并用XS-800i血液学分析仪(Sysmex)进行血细胞计数。在第3天评估血红蛋白水平(左)和血细胞比容的百分比(右)。
结果：如图19所示，抗SIRPa抗体对血红蛋白浓度和血细胞比容没有毒性作用。相反，根据在人的第1阶段观察到的贫血，抗CD47抗体诱导了血红蛋白浓度和血细胞比容的降低。
实施例22.血小板的聚集
方法：从健康供体志愿者中将血液收集到用柠檬酸钠缓冲的Vacuette收集管(Greiner Bio-One)中。通过在200g离心10分钟和在3500g离心15分钟分别获得富血小板血浆(PRP)和贫血小板血浆(PPP)。将工作PRP调整至3×108血小板·L-1。抑制测定：将mAb与PRP预孵育至终浓度为40或50μg·mL-1的测试抗体。在不搅拌下3分钟后，加入5μM ADP引发血小板聚集。通过使用标准光学聚集计(TA-8V Thrombo-Aggregometer，SD InnovationSAS，弗鲁阿尔，法国)在37℃下连续搅拌测量光通过样品的透射率来确定聚集。PPP的透射率设置为100％。在搅拌下记录聚集，共5分钟。诱导测定：通过添加mAb(50μg·mL-1)直接引发血小板聚集。在搅拌下记录聚集，共最大10分钟。
结果：如图20所示，与抗CD47抗体相反，抗SIRPa抗体不与人红细胞或血小板结合。因此，抗CD47诱发体外人血小板的聚集，而抗SIRPa抗体则不诱发。类似地，抗SIRPa抗体不会干扰可逆的ADP诱发的人血小板聚集，而抗整联蛋白α2b则完全消除可逆的ADP诱发的人血小板聚集。
实施例23.通过来自卵巢癌腹水的SIRPa-阻断CD14+细胞增殖同种异体T细胞
方法：使用AutoMACS(Miltenyi)通过阳性选择从健康志愿者的血沉棕黄层的hPBMC分离同种异体CD4 T细胞。将CD4接种在96孔板(50000细胞/孔)中。用相同的方法从卵巢癌患者的腹水中分离CD14+细胞。将CD14+细胞与同种异体CD4 T细胞以1：1的比例接种5天。在一些条件下，以1：5的比例加入人LPS成熟的同种异体单核细胞衍生的树突细胞(moDC)以刺激T细胞，并分析从腹水中纯化的不同比例的CD14+MDSC的免疫抑制作用。从增殖试验开始，以饱和浓度(10μg/mL)加入靶向SIRPa/CD47通路的抗体。通过在培养的最后12小时内加入H3-胸苷来测量增殖。
结果：如图21A和21B所示，从卵巢癌腹水中纯化的新鲜的和冷冻的人骨髓细胞(TAM)是低刺激性同种异体人T淋巴细胞。与抗CD47抗体相反，抗SIRPa抗体调节骨髓细胞特性，允许人T细胞的活化和增殖。
如图21C所示，从卵巢癌腹水中纯化的人骨髓细胞(MDSC)可以抑制由同种异体moDC(以1：1和2：1的骨髓细胞对T细胞的比例)诱发的人T细胞增殖。与抗CD47抗体相反，抗SIRPa抗体不会增强人MDSC诱导的免疫抑制。
实施例24.通过ELISA用修饰的抗体进行的SIRPa ELISA结合测定
方法：为了进行ELISA分析，将重组hSIRPa(Sino Biologicals，北京，中国；参考号11612-H08H)以0.5μg/ml的浓度(在碳酸盐缓冲液(pH9.2)中)固定在塑料上，并添加了不同的修饰的抗SIRPa抗体，测量与SIRPa的结合。孵育和洗涤后，加入过氧化物酶标记的驴抗人IgG(Jackson Immunoresearch；美国；参考号709-035-149)，并通过常规方法显示。用过氧化物酶标记的抗人IgG-Fc进行显示，并使用TMB底物在450nm处通过比色法显示。然后测量ED50，其为该测定中达到信号的50％的指示抗体的浓度。
结果：图22显示，与用作阳性对照的亲本抗体(HEFLB)相比，所有包含免疫治疗剂的修饰的抗SIRPa抗体都以良好的浓度功能性结合至SIRPa。
实施例25.通过ELISA检测修饰的抗体上融合蛋白的ECD
方法：将重组hSIRPa(Sino Biologicals，北京；中国；参考号11612-H08H)以0.5μg/ml的浓度(在碳酸盐缓冲液(pH9.2)中)固定在塑料上，并添加修饰的抗体。用小鼠抗人PD1(eBiosciences；参考号12-2799-41)、小鼠抗人PDL1(BD biosciences；参考号558065)、小鼠抗人CD80(BD biosciences；参考号557226)、小鼠抗人CD86(BD biosciences；参考号555658)、小鼠抗人OX40L(R&Dsystems；参考号MAB10541)、小鼠抗人4-1BBL(BDbiosciences；参考号559446)或小鼠抗人ICOSL(BD biosciences；参考号552502)，对修饰的SIRPa抗体上的融合蛋白进行检测。孵育和洗涤后，加入过氧化物酶标记的抗小鼠IgG(Jackson Immunoresearch；美国；参考号715-036-151)，并通过常规方法显示。
结果：图23显示，当与重链或轻链连接时，修饰的抗SIRPa抗体的融合蛋白的每个ECD都被特异性单克隆抗体很好地识别。
实施例26.用不同的修饰的抗SIRPa抗体的配体结合测定
方法：通过ELISA评估固定化SIRPa-His上不同的修饰的抗SIRPa抗体，修饰的抗SIRPa抗体具有连接至重链(VHprot+VL(■))或连接至轻链(VH+VLprot(Δ))的融合蛋白。检测用不同融合的缀合物的特异性配体进行：PDL1Fc(针对PD1)、PD1His(针对PDL1)、CTLA4-Fc(针对CD80和CD86)、OX40Fc(针对OX40L)、4-1BBFcHis(针对4-1BBL)、CD28Fc(针对ICOSL)，分别通过小鼠抗人PDL1、小鼠抗His、小鼠抗人CTLA4Fc、小鼠抗人OX40、小鼠抗人His、小鼠抗人CD28进行显示，接着用过氧化物酶标记的抗小鼠IgG，然后使用TMB底物通过比色法在450nm处进行显示。
结果：图24显示，包含PD1、PDL1、CD80、CD86、OX40L、4-1BBL和ICOSL的修饰的抗SIRPa抗体可以独立地结合到融合蛋白的特异性配体上，该特异性配体连接在抗体的重链或轻链上。
实施例27.通过ELISA对不同的修饰的抗SIRPa抗体的SIRPa-CD47相互作用竞争测
定
方法：为了进行竞争性ELISA分析，将重组hSIRPa(Sino Biologicals，北京，中国；参考号11612-H08H)以0.5μg/ml的浓度(在碳酸盐缓冲液(pH9.2)中)固定在塑料上。将每种纯化的抗体(不同浓度)与6μg/ml最终(固定浓度)的生物素化人CD47Fc(AcroBiosystemsinterchim；法国；参考号：#CD7-H82F6)混合，测定在37℃下2h的竞争结合。孵育和洗涤后，加入过氧化物酶标记的链霉亲和素(VectorLaboratoring；美国；参考号SA-5004)，检测生物素-CD47Fc的结合并通过常规方法显示。
结果：图25显示，所有包含免疫治疗剂的修饰的抗SIRPa抗体都能够与CD47竞争与SIRPa的结合。在包含融合在重链或轻链上的蛋白质的修饰抗体与单独的亲本抗SIRPa抗体(HEFLB)之间，未观察到显著差异。与用作阳性对照的单独抗SIRPa(HEFLB)相比，所有构建物均保留了其对抗CD47-SIRPa相互作用的拮抗活性。
实施例28.通过ELISA测定人PBMC的TNFα分泌
方法：用1μg/ml的OKT3(抗CD3抗体)包被聚丙烯P96板。用PBS洗涤后，向人PBMC(100000个细胞/孔)中加入10μg/ml的可溶性HELFB抗体、抗PD1KeytrudamAb、重组蛋白、OSE172+重组蛋白(PD1-His；PDL1-Fc；CD80-Fc；CD86-Fc；4-1BBL-Fc或ICOSL-his)作为每种融合蛋白的对照(比率1：1)、修饰的抗SIRPa抗体或Pha-L作为阳性对照，在完全培养基(含2％人SAB)中在37℃、5％CO2下3天。在测量前8小时掺入3H胸苷，结果以cpm表示，以确定增殖水平。刺激48小时后(掺入3H前24小时)，回收25μl/孔的上清液，测量细胞因子分泌的浓度。使用人TNFa试剂盒(BD biosciences；参考号555212)通过ELISA测定TNFa。结果以上清液中细胞因子的pg/ml表示。
结果：图26显示，将细胞与抗SIRPa抗体(HEFLB)或抗PD1keytruda或非融合免疫治疗剂一起孵育时，TNFa分泌没有差异，但单独的PD1His或CD86-Fc会诱导TNFa的过度分泌。当细胞与抗SIRPa(HEFLB)和重组蛋白PD1His或CD86-Fc一起孵育时，这些过度分泌没有改善。同样，抗SIRPa HEFLB和非融合重组蛋白的其他组合也不会增加TNFa的分泌。
有趣的是，当免疫治疗剂位于重链的C末端结构域时，包含PD1、PDL1、CD80或4-1BBL的修饰的抗SIRPa抗体诱导TNFa的重要分泌。总之，这些结果表明，在重链上包含PD1、PDL1、CD80或4-1BBL的修饰的抗SIRPa抗体对促炎性细胞因子TNFa分泌具有有效的积极作用。
实施例29.通过ELISA测定人PBMC的IFNg分泌
方法：用1μg/ml的OKT3(抗CD3抗体)包被聚丙烯P96板。用PBS洗涤后，向人PBMC(100000个细胞/孔)中加入10μg/ml的可溶性HELFB抗体、抗PD1KeytrudamAb、重组蛋白、OSE172+重组蛋白(PD1-His；PDL1-Fc；CD80-Fc；CD86-Fc；4-1BBL-Fc或ICOSL-his)作为每种融合蛋白的对照(比率1：1)、修饰的抗SIRPa抗体或Pha-L作为阳性对照，在完全培养基(含2％人SAB)中在37℃、5％CO2下3天。在测量前8小时掺入3H胸苷，结果以cpm表示，以确定增殖水平。刺激48小时后(掺入3H前24小时)，回收25μl/孔的上清液，测量细胞因子分泌的浓度。使用人IFNg试剂盒(BD biosciences；参考号555142)通过ELISA测定IFNg。结果以上清液中细胞因子的pg/ml表示。
结果：图27证实了以上关于TNFa分泌的观察结果，因为使用在重链的C端结构域上包含PD1、PDL1、CD80或4-1BBL的修饰的抗SIRPa抗体导致促炎性IFNg细胞因子的分泌(T细胞特异性细胞因子)大大增加。
实施例30.测定人T淋巴细胞的增殖
方法：使用Pan T细胞分离试剂盒(Miltenyi Biotec；参考号130-096-535)从人PBMC中分选人T淋巴细胞(LT)，并在37℃、5％CO2的TexMaCS培养基中孵育过夜(MiltenyiBiotec；参考号130-097-196)。第二天，用1μg/ml的OKT3包被聚丙烯P96板(预活化信号)。用PBS洗涤后，向人LT(100000个细胞/孔)加入10μg/ml的可溶性HEFLB、抗PD1Keytruda mAb、重组蛋白(PD1-His；PDL1-Fc；CD80-Fc；CD86-Fc；4-1BBL-Fc或ICOSL-his)作为每种融合蛋白的对照、HELFB+重组蛋白(比率1：1)、每种不同的修饰的抗SIRPa抗体或Pha-L作为阳性对照，在完全培养基(含2％人SAB)中在37℃、5％CO2下3天。在测量前8小时掺入3H胸苷，结果以cpm表示，以确定增殖水平。
结果：图28显示，用抗CD3诱导的人T细胞增殖没有单独用修饰的抗SIRPa抗体(HEFLB)显著。在重链上包含PD1、PDL1、CD80、CD86或4-1BBL的修饰的抗SIRPa抗体提高了分离的人T细胞的增殖。当蛋白质与轻链融合或与OX40L或ICOSL(重链或轻链)融合时，用相同的双功能抗SIRPa抗体未观察到效果。
实施例31.通过ELISA测定分离的人T淋巴细胞的TNFa分泌
方法：使用Pan T细胞分离试剂盒(Miltenyi Biotec；参考号130-096-535)从人PBMC中分选人T淋巴细胞(LT)，并在37℃、5％CO2的TexMaCS培养基中孵育过夜(MiltenyiBiotec；参考号130-097-196)。第二天，用1μg/ml的OKT3包被聚丙烯P96板(预活化信号)。用PBS洗涤后，向人LT(100000个细胞/孔)加入10μg/ml的可溶性HEFLB、抗PD1Keytruda mAb、重组蛋白(PD1-His；PDL1-Fc；CD80-Fc；CD86-Fc；4-1BBL-Fc或ICOSL-his)作为每种融合蛋白的对照、HELFB+重组蛋白(比率1：1)、每种不同的修饰的抗SIRPa抗体或Pha-L作为阳性对照，在完全培养基(含2％人SAB)中在37℃、5％CO2下3天。在测量前8小时掺入3H胸苷，结果以cpm表示，以确定增殖水平。刺激48小时后(掺入3H前24小时)，回收25μl/孔的上清液，测量细胞因子分泌的浓度。通过ELISA使用人TNFa试剂盒(BD biosciences；参考号555212)测定TNFa，通过ELISA使用人IFNg试剂盒(BD biosciences；参考号555142)测定IFNg。结果以上清液中细胞因子的pg/ml表示。
结果：与T细胞增殖研究相似，图29中描述的TNFa分泌表明，即使加入抗SIRPaHEFLB mAb，用抗CD3(OKT3)刺激，T细胞也不分泌大量TNFa。相反，TNFa分泌被修饰的抗SIRPa抗体诱导，该抗体在重链上包含PD1、PDL1、CD80或4-1BBL。这些结果与PBMC分泌的TNFa的结果相当(参见实施例28)，并证实了融合蛋白对其特异性T细胞通路的功能活性。
实施例32.通过ELISA测定人巨噬细胞的MIP1a分泌
方法：使用从PBMC(UTCG plateform，南特)中淘析的人单核细胞，产生人类未成熟的巨噬细胞，将其与GM-CSF(CellGenix；参考号1412-050)以10ng/ml在完全培养基(具有10％SVF)中于37℃、5％CO2下孵育2天。聚丙烯P96板用PBS中10μg/ml的CD47Fc(SinoBiologicals，北京；中国；参考号12283-H02H)包被。用PBS洗涤后，向人类未成熟的巨噬细胞(刮取和洗涤)(100000个细胞/孔)添加10μg/ml的可溶性HEFLB抗体、抗PD1Keytruda mAb或修饰的抗SIRPa抗体，在37℃、5％CO2下24h。回收上清液，测量MIP1a(CCL3)分泌物的浓度。使用人MIP1a/CCL3试剂盒(R&Dsystems；参考号DY270)通过ELISA测定MIP1a。结果以上清液中细胞因子的pg/ml表示。
结果：为了确认包含免疫治疗剂的不同的修饰抗体的功能性SIRPa拮抗剂活性，已对MIP1a(一种受CD47-Sirpa相互作用抑制的潜在靶标)进行了测试。如图30所示，巨噬细胞分泌基础状态的MIP1a(无CD47)。当巨噬细胞用CD47Fc孵育时，分泌被强烈抑制，这表明CD47激活SIRPa抑制信号诱导了免疫抑制并抑制MIP1a分泌。阻断与抗SIRPa HEFLB抗体的相互作用使这种分泌恢复到基础MIP1a分泌水平。这证实了抗SIRPa抗体对CD47-SIRPa相互作用具有良好的拮抗活性。如图30所示，包含PD1、PDL1、CD80或4-1BBL的修饰的抗SIRPa抗体比单独的抗SIRPa抗体可以诱导人巨噬细胞分泌更高的MIP1a。这些结果表明，与未融合蛋白的抗SIRPa HEFLB抗体相比，修饰的抗体具有更高的SIPPa拮抗剂特性，因为它们能够产生更高水平的MIP1a分泌。再次，包含CD86的修饰的抗体呈现与单独的抗SIRPa抗体相同的结果。
本发明人表明，在实施例中称为修饰的抗SIRPa抗体的双功能抗SIRPa抗体能够结合SIRPa和称为融合蛋白的免疫治疗剂的配体这两者(融合蛋白的配体是PD1、PDL1、PDL2、CD28、CTLA4、4-1BB、ICOS或OX40)。双功能抗SIRPa抗体上的免疫治疗剂被特异性抗体很好地识别，表明双功能抗SIRPa抗体的每种免疫治疗剂的ECD均表达良好。
以令人惊讶的方式，重链上包含作为免疫治疗剂的PD1、PDL1、CD80或4-1BBL的ECD的双功能抗SIRPa抗体在抑制SIRPa与CD47的相互作用诱导MIP1a过度分泌方面具有功能，并且在诱导或不抑制T细胞活化和增殖方面具有功能。与单独的免疫治疗剂或与抗SIRPa抗体组合的免疫治疗剂相比，在重链上包含PD1、PDL1、CD80或4-1BBL的ECD的双功能抗SIRPa抗体对PBMC的TNFa和IFNg分泌(促炎细胞因子)具有协同作用，潜在具有诱导促炎性肿瘤环境的能力。
实施例33.通过ELISA对修饰的抗SIRPa抗体在SIRPg上的结合分析
方法：为了进行活性ELISA分析，将hSIRPg-His(Sino Biologicals，北京；中国；参考号11828-H08H)以1μg/ml的浓度(在碳酸盐缓冲液(pH9.2)中)固定在塑料上，加入纯化的抗体，测量与人源化抗SIRPa抗体HEFLB、抗SIRPa Kwar抗体和融合至PDL1、CD80、CD86或4-1BBL的ECD的修饰的抗SIRPa抗体的结合。孵育和洗涤后，加入过氧化物酶标记的驴抗人IgG(Jackson Immunoresearch；美国；参考号709-035-149)，并通过常规方法显示。
结果：如图31所示，Kwar抗体能够结合SIRPg。然而，与任何免疫治疗剂融合的本发明的双功能形式的抗SIRPa抗体不结合SIRPg，例如HEFLB亲本抗体，表明双功能抗SIRPa抗体针对SIRPa-CD47相互作用的特异性。
实施例34.通过ELISA测定共培养的人巨噬细胞与人T淋巴细胞的MIP1a、TNFa和
IFNg分泌
方法：使用从PBMC(UTCG plateform，南特)中淘析的人单核细胞，产生人类未成熟的巨噬细胞，将其与GM-CSF(CellGenix；参考号1412-050)以10ng/ml在完全培养基(具有10％SVF)中于37℃、5％CO2下孵育2天。聚丙烯P96板用PBS中10μg/ml的CD47Fc(SinoBiologicals，北京；中国；参考号12283-H02H)包被。用PBS洗涤后，向人类未成熟的巨噬细胞(刮取和洗涤)(100000个细胞/孔)添加10μg/ml的可溶性HEFLB抗体或修饰的抗SIRPa抗体(VH-PDL1、VH-4-1BBL、VH-CD80或VH-CD86)，在37℃、5％CO2下24h。然后，我们添加了用OKT3预活化的人T淋巴细胞(根据实施例31中所述的方法分离了T淋巴细胞)。回收上清液，测量MIP1a(CCL3)(试剂盒R&Dsystems；参考号DY270)、TNFa(试剂盒BD biosciences；参考号555212)或IFNg分泌(试剂盒BD biosciences；参考号555142)的浓度。
结果：在允许在同一试验中测量对SIRPa-CD47相互作用和T细胞活化的抑制作用的共培养体系中，我们以一种有趣但意想不到的方式观察到，与单独的抗SIRPa抗体或与重组PDL1或CD80或4-1BBL单独组合的抗SIRPa抗体相比(图32)，与PDL1、CD80或4-1BBL融合的双功能抗SIRPa抗体能够诱导更高的M1Pa(A)、TNFa(B)和IFNg(C)分泌。此外，当免疫治疗剂融合在抗SIRPa抗体的VH链的C末端部分上时，观察到双功能抗SIRPa的功能功效(如图26和27所示)。当融合在轻链上或免疫治疗剂是CD86、ICOS-L或OX40L时，对于双功能抗SIRPa没有观察到这种功能作用(数据未显示)。这些结果表明，与单独的抗SIRPa抗体或抗SIRPa抗体与重组免疫治疗剂分别组合相比，或者与不相关的双功能抗体(例如B12-PDL1、B12-CD80或B12-4-1BBL)相比，与PDL1、CD80和4-1BBL结合的修饰的抗SIRPa抗体对SIRPa-CD47相互作用具有更强的抑制作用，并且对T细胞活化具有更好的功效。本文所述的双功能分子能够通过抑制PD1/PDL1或CTLA-4/80或CD80/PDL1轴以及使4-1BB/4-1BBL或CD80/CD28信号电位化(potentializing)来诱导T细胞活化(以诱导有效的适应性免疫应答，特别是抗肿瘤应答和/或诱导长寿命记忆T细胞)。
实施例35.延时(Time-Lapse)T细胞活化
方法：使用从PBMC(UTCG plateform，南特)中淘析的人单核细胞，产生人类未成熟的巨噬细胞，将其与GM-CSF(CellGenix；参考号1412-050)以10ng/ml在完全培养基(具有10％SVF)中于37℃、5％CO2下孵育24h。IBIDI 8孔腔室(IBIDI；德国；参考号80826)用PBS中10μg/ml的CD47Fc(Sino Biologicals，北京；中国；参考号12283-H02H)包被。用PBS洗涤后，向人类未成熟的巨噬细胞(刮取和洗涤)(300000个细胞/孔)添加10μg/ml的可溶性HEFLB抗体和双功能抗Sirpa-PDL1，在IBIDI腔室中在37℃、5％CO2下24h。回收上清液，测量MIP1a(CCL3)分泌物的浓度。然后，Ficoll后使用Pan T细胞分离试剂盒(Miltenyi Biotec；参考号130-096-535)分离另一名健康供体的T淋巴细胞，并用FURA-2钙指示剂(Invitrogen；参考号F1221)染色。将Fura-2标记的T细胞(300000个细胞/孔)添加到含有未成熟巨噬细胞和抗体的孔中，并加入最终浓度为3μg/ml的激动剂抗CD3进行刺激(Inserm U1064；南特，克隆OKT3)。用尼康显微镜在每个孔上进行延时拍摄。Fura-2指示剂在未刺激的T细胞中显示为蓝色，并随着T细胞活化而变得越来越红。
结果：如图33所示，在共培养测定中，双功能抗SIRPa-PDL1抗体由于抑制了SIRPa和CD47之间的相互作用以及抑制了内源性PDL1-PD1的相互作用而引起了强烈的T细胞活化。与图33右侧的对照相比，细胞中存在的钙含量更高(橙色/红色细胞)反映了这种对内源性PD1/PDL1相互作用的阻断。该测定证实，双功能抗SIRPa-PDL1能够活化T细胞。
序列表
<110> OSE免疫疗法（OSE IMMUNOTHERAPEUTICS）
<120> 修饰的抗SIRPa抗体及其应用
<130> B12989A /AD/HLQ
<140> PCT/EP2018/xxxxxx
<141> 2018-10-15
<150> EP 17306396.7
<151> 2017-10-13
<160> 185
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 7
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 1
Ser Leu Ile Pro Val Gly Pro
1 5
<210> 2
<211> 12
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa = G或A
<400> 2
Xaa Arg Glu Leu Ile Tyr Asn Gln Lys Glu Gly His
1 5 10
<210> 3
<211> 10
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> Xaa = DV或T
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> Xaa可以是任何天然氨基酸
<400> 3
Lys Phe Arg Lys Gly Ser Pro Asp Xaa Glu
1 5 10
<210> 4
<211> 23
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 4
Gln His Thr Val Ser Phe Thr Cys Glu Ser His Gly Phe Ser Pro Arg
1 5 10 15
Asp Ile Thr Leu Lys Trp Phe
20
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<211> 11
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 5
Ile Cys Glu Val Ala His Val Thr Leu Gln Gly
1 5 10
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<211> 11
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 6
Tyr Pro Gln Arg Leu Gln Leu Thr Trp Leu Glu
1 5 10
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<211> 12
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 7
Gly Arg Glu Leu Ile Tyr Asn Gln Lys Glu Gly His
1 5 10
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<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 8
Lys Phe Arg Lys Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu
1 5 10
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<211> 12
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 9
Ala Arg Glu Leu Ile Tyr Asn Gln Lys Glu Gly His
1 5 10
<210> 10
<211> 10
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 10
Lys Phe Arg Lys Gly Ser Pro Asp Thr Glu
1 5 10
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<211> 7
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 11
Gly Arg Glu Leu Ile Tyr Asn
1 5
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<211> 22
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 12
His Thr Val Ser Phe Thr Cys Glu Ser His Gly Phe Ser Pro Arg Asp
1 5 10 15
Ile Thr Leu Lys Trp Phe
20
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<211> 7
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 13
Ala Arg Glu Leu Ile Tyr Asn
1 5
<210> 14
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 重链CDR1
<400> 14
Ser Tyr Trp Val His
1 5
<210> 15
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 重链CDR2
<400> 15
Asn Ile Asp Pro Ser Asp Ser Asp Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 16
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 重链CDR2
<400> 16
Asn Ile Asp Pro Ser Asp Ser Asp Thr His Tyr Ser Pro Ser Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 17
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 重链CDR3
<400> 17
Gly Gly Thr Gly Thr Met Ala Trp Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 18
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 重链CDR3
<400> 18
Gly Gly Thr Gly Thr Leu Ala Trp Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 19
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 重链CDR3
<400> 19
Gly Gly Thr Gly Thr Met Ala Tyr Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 20
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 重链CDR3
<400> 20
Gly Gly Thr Gly Thr Leu Ala Tyr Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 21
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<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 轻链CDR1
<400> 21
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr
1 5 10 15
<210> 22
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 轻链CDR2
<400> 22
Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser
1 5
<210> 23
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 轻链CDR3
<400> 23
Phe Gln Gly Thr His Val Pro Tyr Thr
1 5
<210> 24
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 重链可变结构域
<400> 24
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Val His Trp Val Lys Gln Arg Pro Ile Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asp Pro Ser Asp Ser Asp Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Ser Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly Gly Thr Gly Thr Met Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120
<210> 25
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 重链可变结构域
<400> 25
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Val His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asp Pro Ser Asp Ser Asp Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp His Val Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly Gly Thr Gly Thr Met Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 26
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 重链可变结构域
<400> 26
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Val His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asn Ile Asp Pro Ser Asp Ser Asp Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp His Val Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly Gly Thr Gly Thr Met Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 27
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 重链可变结构域
<400> 27
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Val His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asn Ile Asp Pro Ser Asp Ser Asp Thr His Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly His Val Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly Gly Thr Gly Thr Met Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 28
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 重链可变结构域
<400> 28
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Val His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asn Ile Asp Pro Ser Asp Ser Asp Thr His Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly His Val Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly Gly Thr Gly Thr Leu Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 29
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 重链可变结构域
<400> 29
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Val His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asn Ile Asp Pro Ser Asp Ser Asp Thr His Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly His Val Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly Gly Thr Gly Thr Met Ala Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 30
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 重链可变结构域
<400> 30
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Val His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asn Ile Asp Pro Ser Asp Ser Asp Thr His Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly His Val Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly Gly Thr Gly Thr Leu Ala Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 31
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 轻链可变结构域
<400> 31
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 32
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 轻链可变结构域
<400> 32
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 33
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 轻链可变结构域
<400> 33
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 34
<211> 327
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 重链恒定结构域-IgG4m-S228P
<400> 34
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 35
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 轻链恒定结构域-CLkappa
<400> 35
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 36
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 重链序列 18D5
<400> 36
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Val His Trp Val Lys Gln Arg Pro Ile Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asp Pro Ser Asp Ser Asp Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Ser Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly Gly Thr Gly Thr Met Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 37
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 重链序列 HA
<400> 37
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Val His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asp Pro Ser Asp Ser Asp Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp His Val Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly Gly Thr Gly Thr Met Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 38
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 重链序列 HB
<400> 38
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Val His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asn Ile Asp Pro Ser Asp Ser Asp Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp His Val Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly Gly Thr Gly Thr Met Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 39
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 重链序列 HC
<400> 39
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Val His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asn Ile Asp Pro Ser Asp Ser Asp Thr His Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly His Val Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly Gly Thr Gly Thr Met Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 40
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 重链序列 HE
<400> 40
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Val His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asn Ile Asp Pro Ser Asp Ser Asp Thr His Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly His Val Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly Gly Thr Gly Thr Leu Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 41
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 重链序列 HF
<400> 41
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Val His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asn Ile Asp Pro Ser Asp Ser Asp Thr His Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly His Val Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly Gly Thr Gly Thr Met Ala Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 42
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 重链序列 HEF
<400> 42
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Val His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asn Ile Asp Pro Ser Asp Ser Asp Thr His Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly His Val Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly Gly Thr Gly Thr Leu Ala Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 43
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 轻链序列 18D5
<400> 43
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 44
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 轻链序列 LA
<400> 44
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 45
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 轻链序列 LB
<400> 45
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 46
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 编码重链可变结构域 18D5的核酸序列
<400> 46
caggtgcagc tgcagcagcc aggagctgag ctggtgaggc ctggctccag cgtgaagctg 60
tcctgcaagg ctagcggcta caccttcaca agctattggg tgcactgggt gaagcagcgg 120
ccaatccagg gcctggagtg gatcggcaac atcgacccca gcgactctga tacccattac 180
aatcagaagt ttaaggacaa ggcctctctg accgtggata agtcttccag cacagcttat 240
atgcagctgt cttccctgac attcgaggat tccgccgtgt actattgcgt gaggggagga 300
accggaacaa tggcttggtt tgcttactgg ggccagggca ccctggtgac agtgtctgct 360
<210> 47
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 编码重链可变结构域 HA的核酸序列
<400> 47
gaggtgcagc tggtgcagag cggagctgag gtgaagaagc caggcgagtc tctgaggatc 60
tcctgcaagg ctagcggcta caccttcaca tcttattggg tgcactgggt gcggcagatg 120
ccaggcaagg gcctggagtg gatcggcaac atcgacccta gcgactctga tacccactac 180
aatcagaagt ttaaggacca tgtgaccctg tctgtggata agtccatcag cacagcctat 240
ctgcagctgt ccagcctgaa ggcctccgat acagctatgt actattgcgt gaggggagga 300
accggaacaa tggcttggtt cgcttactgg ggccagggca ccctggtgac agtgtcttcc 360
<210> 48
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 编码重链可变结构域 HB的核酸序列
<400> 48
gaggtgcagc tggtgcagtc cggagctgag gtgaagaagc caggcgagtc tctgaggatc 60
tcctgcaagg cttctggcta ctccttcacc agctattggg tgcactgggt gcggcagatg 120
ccaggcaagg gcctggagtg gatgggcaac atcgacccta gcgactctga tacacactac 180
aatcagaagt ttaaggacca tgtgaccctg agcgtggata agtccatcag cacagcctat 240
ctgcagctgt ccagcctgaa ggcctctgat accgctatgt actattgcgt gaggggagga 300
accggaacaa tggcttggtt cgcttactgg ggccagggca ccctggtgac agtgtcttcc 360
<210> 49
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 编码重链可变结构域 HC的核酸序列
<400> 49
gaggtgcagc tggtgcagtc tggcgccgag gtgaagaagc caggcgagag cctgaggatc 60
tcttgcaagg ctagcggcta ctctttcacc tcctattggg tgcactgggt gcggcagatg 120
ccaggcaagg gcctggagtg gatgggcaac atcgacccca gcgactctga tacacactac 180
tcccctagct ttcagggcca tgtgaccctg tccgtggaca agtctatctc cacagcctat 240
ctgcagctgt ccagcctgaa ggccagcgat accgctatgt actattgcgt gaggggagga 300
accggaacaa tggcttggtt cgcttactgg ggccagggca ccctggtgac agtgtcttcc 360
<210> 50
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 编码重链可变结构域 HE的核酸序列
<400> 50
gaggtgcagc tggtgcagtc tggcgccgag gtgaagaagc caggcgagag cctgaggatc 60
tcttgcaagg ctagcggcta ctctttcacc tcctattggg tgcactgggt gcggcagatg 120
ccaggcaagg gcctggagtg gatgggcaac atcgacccca gcgactctga tacacactac 180
tcccctagct ttcagggcca tgtgaccctg tccgtggaca agtctatctc cacagcctat 240
ctgcagctgt ccagcctgaa ggccagcgat accgctatgt actattgcgt gaggggagga 300
accggcacac tggcttggtt cgcttactgg ggccagggca ccctggtgac agtgtcttcc 360
<210> 51
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 编码重链可变结构域 HF的核酸序列
<400> 51
gaggtgcagc tggtgcagtc tggcgccgag gtgaagaagc caggcgagag cctgaggatc 60
tcttgcaagg ctagcggcta ctctttcacc tcctattggg tgcactgggt gcggcagatg 120
ccaggcaagg gcctggagtg gatgggcaac atcgacccca gcgactctga tacacactac 180
tcccctagct ttcagggcca tgtgaccctg tccgtggaca agtctatctc cacagcctat 240
ctgcagctgt ccagcctgaa ggccagcgat accgctatgt actattgcgt gaggggagga 300
accggaacaa tggcttactt cgcttattgg ggccagggca ccctggtgac agtgtcttcc 360
<210> 52
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 编码重链可变结构域 HEF的核酸序列
<400> 52
gaggtgcagc tggtgcagtc tggcgccgag gtgaagaagc caggcgagag cctgaggatc 60
tcttgcaagg ctagcggcta ctctttcacc tcctattggg tgcactgggt gcggcagatg 120
ccaggcaagg gcctggagtg gatgggcaac atcgacccca gcgactctga tacacactac 180
tcccctagct ttcagggcca tgtgaccctg tccgtggaca agtctatctc cacagcctat 240
ctgcagctgt ccagcctgaa ggccagcgat accgctatgt actattgcgt gaggggagga 300
accggcacac tggcttactt cgcttattgg ggccagggca ccctggtgac agtgtcttcc 360
<210> 53
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 编码轻链可变结构域 18D5的核酸序列
<400> 53
gacgtggtca tgacccagac accactgagc ctgcccgtgt ccctgggcga tcaggcctct 60
atctcctgca ggtccagcca gtccctggtg cacagctatg gcaacacata cctgtattgg 120
tacctgcaga agccaggcca gtcccccaag ctgctgatct acagggtgtc taatcggttc 180
tccggcgtgc ctgacaggtt ctccggctct ggctccggca ccgatttcac actgaagatc 240
agcagggtgg aggctgagga cctgggcgtg tatttctgtt ttcagggcac ccatgtgcca 300
tacacatttg gctctggcac caagctggag atcaag 336
<210> 54
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 编码轻链可变结构域 LA的核酸序列
<400> 54
gacgtggtca tgacacagag cccactgtct ctgcctgtga ccctgggaca gccagcctct 60
atctcctgca ggtccagcca gtccctggtg cacagctatg gcaacacata cctgtattgg 120
taccagcaga ggcccggaca gagcccaagg ctgctgatct acagggtgtc taatcggttc 180
tccggcgtgc ctgacaggtt tagcggctct ggctccggca ccgatttcac actgaagatc 240
tctagagtgg aggctgagga tgtgggcgtg tatttctgtt ttcagggcac ccatgtgcca 300
tacacatttg gcggcggcac caaggtggag atcaag 336
<210> 55
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 编码轻链可变结构域 LB的核酸序列
<400> 55
gacgtggtca tgacacagag cccactgtct ctgcctgtga ccctgggaca gccagcctct 60
atctcctgca ggtccagcca gtccctggtg cacagctacg gcaacacata cctgtattgg 120
ttccagcaga ggcccggaca gagcccaagg ctgctgatct atagggtgtc taatcggttc 180
tccggcgtgc ctgacaggtt tagcggatct ggatccggaa ccgacttcac cctgaagatc 240
tctagagtgg aggctgagga tgtgggcgtg tactattgtt tccagggcac ccatgtgcca 300
tacacatttg gcggcggcac caaggtggag atcaag 336
<210> 56
<211> 456
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 56
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Val His Trp Val Lys Gln Arg Pro Ile Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asp Pro Ser Asp Ser Asp Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Ser Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly Gly Thr Gly Thr Met Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val
115 120 125
Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Ser Val Thr Val Thr
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Ser Val His Thr Phe Pro Ala Leu
165 170 175
Leu Gln Ser Gly Leu Tyr Thr Met Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Thr Trp Pro Ser Gln Thr Val Thr Cys Ser Val Ala His Pro Ala
195 200 205
Ser Ser Thr Thr Val Asp Lys Lys Leu Glu Pro Ser Gly Pro Ile Ser
210 215 220
Thr Ile Asn Pro Cys Pro Pro Cys Lys Glu Cys His Lys Cys Pro Ala
225 230 235 240
Pro Asn Leu Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Asn Ile
245 250 255
Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val
260 265 270
Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val
275 280 285
Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp
290 295 300
Tyr Asn Ser Thr Ile Arg Val Val Ser Thr Leu Pro Ile Gln His Gln
305 310 315 320
Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp
325 330 335
Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ile Lys Gly Leu Val
340 345 350
Arg Ala Pro Gln Val Tyr Ile Leu Pro Pro Pro Ala Glu Gln Leu Ser
355 360 365
Arg Lys Asp Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Val Gly Phe Asn Pro Gly
370 375 380
Asp Ile Ser Val Glu Trp Thr Ser Asn Gly His Thr Glu Glu Asn Tyr
385 390 395 400
Lys Asp Thr Ala Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Ile Tyr
405 410 415
Ser Lys Leu Asn Met Lys Thr Ser Lys Trp Glu Lys Thr Asp Ser Phe
420 425 430
Ser Cys Asn Val Arg His Glu Gly Leu Lys Asn Tyr Tyr Leu Lys Lys
435 440 445
Thr Ile Ser Arg Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 57
<211> 219
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 57
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu
115 120 125
Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg
145 150 155 160
Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu
180 185 190
Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser
195 200 205
Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys
210 215
<210> 58
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 编码HCDR1的序列
<400> 58
agctattggg tgcac 15
<210> 59
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 编码HCDR1的序列
<400> 59
tcttattggg tgcac 15
<210> 60
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 编码HCDR1的序列
<400> 60
tcctattggg tgcac 15
<210> 61
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 编码HCDR2的序列
<400> 61
aacatcgacc ccagcgactc tgatacccat tacaatcaga agtttaagga c 51
<210> 62
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 编码HCDR2的序列
<400> 62
aacatcgacc ccagcgactc tgatacacac tactccccta gctttcaggg c 51
<210> 63
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 编码HCDR3的序列
<400> 63
ggaggaaccg gaacaatggc ttggtttgct tac 33
<210> 64
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 编码HCDR3的序列
<400> 64
ggaggaaccg gcacactggc ttggttcgct tac 33
<210> 65
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 编码HCDR3的序列
<400> 65
ggaggaaccg gaacaatggc ttacttcgct tat 33
<210> 66
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 编码HCDR3的序列
<400> 66
ggaggaaccg gcacactggc ttacttcgct tat 33
<210> 67
<211> 48
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 编码LCDR1的序列
<400> 67
aggtccagcc agtccctggt gcacagctat ggcaacacat acctgtat 48
<210> 68
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 编码LCDR2的序列
<400> 68
agggtgtcta atcggttctc c 21
<210> 69
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 编码LCDR3的序列
<400> 69
tttcagggca cccatgtgcc atacaca 27
<210> 70
<211> 13
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 70
Glu Leu Ile Tyr Asn Gln Lys Glu Gly His Phe Pro Arg
1 5 10
<210> 71
<211> 12
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 71
Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Asn
1 5 10
<210> 72
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 72
Ser Pro Arg Asp Ile Thr Leu Lys Trp
1 5
<210> 73
<211> 4
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 73
Tyr Asn Gln Lys
1
<210> 74
<211> 288
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 74
Met Gln Ile Pro Gln Ala Pro Trp Pro Val Val Trp Ala Val Leu Gln
1 5 10 15
Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp
20 25 30
Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp
35 40 45
Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val
50 55 60
Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala
65 70 75 80
Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg
85 90 95
Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg
100 105 110
Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu
115 120 125
Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val
130 135 140
Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro
145 150 155 160
Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu Val Val Gly Val Val Gly Gly
165 170 175
Leu Leu Gly Ser Leu Val Leu Leu Val Trp Val Leu Ala Val Ile Cys
180 185 190
Ser Arg Ala Ala Arg Gly Thr Ile Gly Ala Arg Arg Thr Gly Gln Pro
195 200 205
Leu Lys Glu Asp Pro Ser Ala Val Pro Val Phe Ser Val Asp Tyr Gly
210 215 220
Glu Leu Asp Phe Gln Trp Arg Glu Lys Thr Pro Glu Pro Pro Val Pro
225 230 235 240
Cys Val Pro Glu Gln Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Pro Ser Gly
245 250 255
Met Gly Thr Ser Ser Pro Ala Arg Arg Gly Ser Ala Asp Gly Pro Arg
260 265 270
Ser Ala Gln Pro Leu Arg Pro Glu Asp Gly His Cys Ser Trp Pro Leu
275 280 285
<210> 75
<211> 290
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 75
Met Arg Ile Phe Ala Val Phe Ile Phe Met Thr Tyr Trp His Leu Leu
1 5 10 15
Asn Ala Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr
20 25 30
Gly Ser Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu
35 40 45
Asp Leu Ala Ala Leu Ile Val Tyr Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn Ile
50 55 60
Ile Gln Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser
65 70 75 80
Tyr Arg Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn
85 90 95
Ala Ala Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr
100 105 110
Arg Cys Met Ile Ser Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val
115 120 125
Lys Val Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val
130 135 140
Asp Pro Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr
145 150 155 160
Pro Lys Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser
165 170 175
Gly Lys Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn
180 185 190
Val Thr Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr
195 200 205
Cys Thr Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu
210 215 220
Val Ile Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Thr His
225 230 235 240
Leu Val Ile Leu Gly Ala Ile Leu Leu Cys Leu Gly Val Ala Leu Thr
245 250 255
Phe Ile Phe Arg Leu Arg Lys Gly Arg Met Met Asp Val Lys Lys Cys
260 265 270
Gly Ile Gln Asp Thr Asn Ser Lys Lys Gln Ser Asp Thr His Leu Glu
275 280 285
Glu Thr
290
<210> 76
<211> 288
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 76
Met Gly His Thr Arg Arg Gln Gly Thr Ser Pro Ser Lys Cys Pro Tyr
1 5 10 15
Leu Asn Phe Phe Gln Leu Leu Val Leu Ala Gly Leu Ser His Phe Cys
20 25 30
Ser Gly Val Ile His Val Thr Lys Glu Val Lys Glu Val Ala Thr Leu
35 40 45
Ser Cys Gly His Asn Val Ser Val Glu Glu Leu Ala Gln Thr Arg Ile
50 55 60
Tyr Trp Gln Lys Glu Lys Lys Met Val Leu Thr Met Met Ser Gly Asp
65 70 75 80
Met Asn Ile Trp Pro Glu Tyr Lys Asn Arg Thr Ile Phe Asp Ile Thr
85 90 95
Asn Asn Leu Ser Ile Val Ile Leu Ala Leu Arg Pro Ser Asp Glu Gly
100 105 110
Thr Tyr Glu Cys Val Val Leu Lys Tyr Glu Lys Asp Ala Phe Lys Arg
115 120 125
Glu His Leu Ala Glu Val Thr Leu Ser Val Lys Ala Asp Phe Pro Thr
130 135 140
Pro Ser Ile Ser Asp Phe Glu Ile Pro Thr Ser Asn Ile Arg Arg Ile
145 150 155 160
Ile Cys Ser Thr Ser Gly Gly Phe Pro Glu Pro His Leu Ser Trp Leu
165 170 175
Glu Asn Gly Glu Glu Leu Asn Ala Ile Asn Thr Thr Val Ser Gln Asp
180 185 190
Pro Glu Thr Glu Leu Tyr Ala Val Ser Ser Lys Leu Asp Phe Asn Met
195 200 205
Thr Thr Asn His Ser Phe Met Cys Leu Ile Lys Tyr Gly His Leu Arg
210 215 220
Val Asn Gln Thr Phe Asn Trp Asn Thr Thr Lys Gln Glu His Phe Pro
225 230 235 240
Asp Asn Leu Leu Pro Ser Trp Ala Ile Thr Leu Ile Ser Val Asn Gly
245 250 255
Ile Phe Val Ile Cys Cys Leu Thr Tyr Cys Phe Ala Pro Arg Cys Arg
260 265 270
Glu Arg Arg Arg Asn Glu Arg Leu Arg Arg Glu Ser Val Arg Pro Val
275 280 285
<210> 77
<211> 183
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 77
Met Glu Arg Val Gln Pro Leu Glu Glu Asn Val Gly Asn Ala Ala Arg
1 5 10 15
Pro Arg Phe Glu Arg Asn Lys Leu Leu Leu Val Ala Ser Val Ile Gln
20 25 30
Gly Leu Gly Leu Leu Leu Cys Phe Thr Tyr Ile Cys Leu His Phe Ser
35 40 45
Ala Leu Gln Val Ser His Arg Tyr Pro Arg Ile Gln Ser Ile Lys Val
50 55 60
Gln Phe Thr Glu Tyr Lys Lys Glu Lys Gly Phe Ile Leu Thr Ser Gln
65 70 75 80
Lys Glu Asp Glu Ile Met Lys Val Gln Asn Asn Ser Val Ile Ile Asn
85 90 95
Cys Asp Gly Phe Tyr Leu Ile Ser Leu Lys Gly Tyr Phe Ser Gln Glu
100 105 110
Val Asn Ile Ser Leu His Tyr Gln Lys Asp Glu Glu Pro Leu Phe Gln
115 120 125
Leu Lys Lys Val Arg Ser Val Asn Ser Leu Met Val Ala Ser Leu Thr
130 135 140
Tyr Lys Asp Lys Val Tyr Leu Asn Val Thr Thr Asp Asn Thr Ser Leu
145 150 155 160
Asp Asp Phe His Val Asn Gly Gly Glu Leu Ile Leu Ile His Gln Asn
165 170 175
Pro Gly Glu Phe Cys Val Leu
180
<210> 78
<211> 254
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 78
Met Glu Tyr Ala Ser Asp Ala Ser Leu Asp Pro Glu Ala Pro Trp Pro
1 5 10 15
Pro Ala Pro Arg Ala Arg Ala Cys Arg Val Leu Pro Trp Ala Leu Val
20 25 30
Ala Gly Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Ala Ala Ala Cys Ala Val Phe
35 40 45
Leu Ala Cys Pro Trp Ala Val Ser Gly Ala Arg Ala Ser Pro Gly Ser
50 55 60
Ala Ala Ser Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp
65 70 75 80
Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val
85 90 95
Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp
100 105 110
Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu
115 120 125
Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe
130 135 140
Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser
145 150 155 160
Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala
165 170 175
Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala
180 185 190
Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala
195 200 205
Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His
210 215 220
Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val
225 230 235 240
Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
245 250
<210> 79
<211> 302
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 79
Met Arg Leu Gly Ser Pro Gly Leu Leu Phe Leu Leu Phe Ser Ser Leu
1 5 10 15
Arg Ala Asp Thr Gln Glu Lys Glu Val Arg Ala Met Val Gly Ser Asp
20 25 30
Val Glu Leu Ser Cys Ala Cys Pro Glu Gly Ser Arg Phe Asp Leu Asn
35 40 45
Asp Val Tyr Val Tyr Trp Gln Thr Ser Glu Ser Lys Thr Val Val Thr
50 55 60
Tyr His Ile Pro Gln Asn Ser Ser Leu Glu Asn Val Asp Ser Arg Tyr
65 70 75 80
Arg Asn Arg Ala Leu Met Ser Pro Ala Gly Met Leu Arg Gly Asp Phe
85 90 95
Ser Leu Arg Leu Phe Asn Val Thr Pro Gln Asp Glu Gln Lys Phe His
100 105 110
Cys Leu Val Leu Ser Gln Ser Leu Gly Phe Gln Glu Val Leu Ser Val
115 120 125
Glu Val Thr Leu His Val Ala Ala Asn Phe Ser Val Pro Val Val Ser
130 135 140
Ala Pro His Ser Pro Ser Gln Asp Glu Leu Thr Phe Thr Cys Thr Ser
145 150 155 160
Ile Asn Gly Tyr Pro Arg Pro Asn Val Tyr Trp Ile Asn Lys Thr Asp
165 170 175
Asn Ser Leu Leu Asp Gln Ala Leu Gln Asn Asp Thr Val Phe Leu Asn
180 185 190
Met Arg Gly Leu Tyr Asp Val Val Ser Val Leu Arg Ile Ala Arg Thr
195 200 205
Pro Ser Val Asn Ile Gly Cys Cys Ile Glu Asn Val Leu Leu Gln Gln
210 215 220
Asn Leu Thr Val Gly Ser Gln Thr Gly Asn Asp Ile Gly Glu Arg Asp
225 230 235 240
Lys Ile Thr Glu Asn Pro Val Ser Thr Gly Glu Lys Asn Ala Ala Thr
245 250 255
Trp Ser Ile Leu Ala Val Leu Cys Leu Leu Val Val Val Ala Val Ala
260 265 270
Ile Gly Trp Val Cys Arg Asp Arg Cys Leu Gln His Ser Tyr Ala Gly
275 280 285
Ala Trp Ala Val Ser Pro Glu Thr Glu Leu Thr Gly His Val
290 295 300
<210> 80
<211> 329
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 80
Met Asp Pro Gln Cys Thr Met Gly Leu Ser Asn Ile Leu Phe Val Met
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ser Gly Ala Ala Pro Leu Lys Ile Gln Ala Tyr Phe
20 25 30
Asn Glu Thr Ala Asp Leu Pro Cys Gln Phe Ala Asn Ser Gln Asn Gln
35 40 45
Ser Leu Ser Glu Leu Val Val Phe Trp Gln Asp Gln Glu Asn Leu Val
50 55 60
Leu Asn Glu Val Tyr Leu Gly Lys Glu Lys Phe Asp Ser Val His Ser
65 70 75 80
Lys Tyr Met Gly Arg Thr Ser Phe Asp Ser Asp Ser Trp Thr Leu Arg
85 90 95
Leu His Asn Leu Gln Ile Lys Asp Lys Gly Leu Tyr Gln Cys Ile Ile
100 105 110
His His Lys Lys Pro Thr Gly Met Ile Arg Ile His Gln Met Asn Ser
115 120 125
Glu Leu Ser Val Leu Ala Asn Phe Ser Gln Pro Glu Ile Val Pro Ile
130 135 140
Ser Asn Ile Thr Glu Asn Val Tyr Ile Asn Leu Thr Cys Ser Ser Ile
145 150 155 160
His Gly Tyr Pro Glu Pro Lys Lys Met Ser Val Leu Leu Arg Thr Lys
165 170 175
Asn Ser Thr Ile Glu Tyr Asp Gly Val Met Gln Lys Ser Gln Asp Asn
180 185 190
Val Thr Glu Leu Tyr Asp Val Ser Ile Ser Leu Ser Val Ser Phe Pro
195 200 205
Asp Val Thr Ser Asn Met Thr Ile Phe Cys Ile Leu Glu Thr Asp Lys
210 215 220
Thr Arg Leu Leu Ser Ser Pro Phe Ser Ile Glu Leu Glu Asp Pro Gln
225 230 235 240
Pro Pro Pro Asp His Ile Pro Trp Ile Thr Ala Val Leu Pro Thr Val
245 250 255
Ile Ile Cys Val Met Val Phe Cys Leu Ile Leu Trp Lys Trp Lys Lys
260 265 270
Lys Lys Arg Pro Arg Asn Ser Tyr Lys Cys Gly Thr Asn Thr Met Glu
275 280 285
Arg Glu Glu Ser Glu Gln Thr Lys Lys Arg Glu Lys Ile His Ile Pro
290 295 300
Glu Arg Ser Asp Glu Ala Gln Arg Val Phe Lys Ser Ser Lys Thr Ser
305 310 315 320
Ser Cys Asp Lys Ser Asp Thr Cys Phe
325
<210> 81
<211> 147
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 81
Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr
1 5 10 15
Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe
20 25 30
Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr
35 40 45
Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu
50 55 60
Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu
65 70 75 80
Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn
85 90 95
Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala
100 105 110
Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg
115 120 125
Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly
130 135 140
Gln Phe Gln
145
<210> 82
<211> 220
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 82
Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser
1 5 10 15
Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu
20 25 30
Ala Ala Leu Ile Val Tyr Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln
35 40 45
Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg
50 55 60
Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala
65 70 75 80
Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Arg Cys
85 90 95
Met Ile Ser Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val
100 105 110
Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro
115 120 125
Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys
130 135 140
Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys
145 150 155 160
Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn Val Thr
165 170 175
Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr
180 185 190
Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile
195 200 205
Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg
210 215 220
<210> 83
<211> 208
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 83
Val Ile His Val Thr Lys Glu Val Lys Glu Val Ala Thr Leu Ser Cys
1 5 10 15
Gly His Asn Val Ser Val Glu Glu Leu Ala Gln Thr Arg Ile Tyr Trp
20 25 30
Gln Lys Glu Lys Lys Met Val Leu Thr Met Met Ser Gly Asp Met Asn
35 40 45
Ile Trp Pro Glu Tyr Lys Asn Arg Thr Ile Phe Asp Ile Thr Asn Asn
50 55 60
Leu Ser Ile Val Ile Leu Ala Leu Arg Pro Ser Asp Glu Gly Thr Tyr
65 70 75 80
Glu Cys Val Val Leu Lys Tyr Glu Lys Asp Ala Phe Lys Arg Glu His
85 90 95
Leu Ala Glu Val Thr Leu Ser Val Lys Ala Asp Phe Pro Thr Pro Ser
100 105 110
Ile Ser Asp Phe Glu Ile Pro Thr Ser Asn Ile Arg Arg Ile Ile Cys
115 120 125
Ser Thr Ser Gly Gly Phe Pro Glu Pro His Leu Ser Trp Leu Glu Asn
130 135 140
Gly Glu Glu Leu Asn Ala Ile Asn Thr Thr Val Ser Gln Asp Pro Glu
145 150 155 160
Thr Glu Leu Tyr Ala Val Ser Ser Lys Leu Asp Phe Asn Met Thr Thr
165 170 175
Asn His Ser Phe Met Cys Leu Ile Lys Tyr Gly His Leu Arg Val Asn
180 185 190
Gln Thr Phe Asn Trp Asn Thr Thr Lys Gln Glu His Phe Pro Asp Asn
195 200 205
<210> 84
<211> 133
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 84
Gln Val Ser His Arg Tyr Pro Arg Ile Gln Ser Ile Lys Val Gln Phe
1 5 10 15
Thr Glu Tyr Lys Lys Glu Lys Gly Phe Ile Leu Thr Ser Gln Lys Glu
20 25 30
Asp Glu Ile Met Lys Val Gln Asn Asn Ser Val Ile Ile Asn Cys Asp
35 40 45
Gly Phe Tyr Leu Ile Ser Leu Lys Gly Tyr Phe Ser Gln Glu Val Asn
50 55 60
Ile Ser Leu His Tyr Gln Lys Asp Glu Glu Pro Leu Phe Gln Leu Lys
65 70 75 80
Lys Val Arg Ser Val Asn Ser Leu Met Val Ala Ser Leu Thr Tyr Lys
85 90 95
Asp Lys Val Tyr Leu Asn Val Thr Thr Asp Asn Thr Ser Leu Asp Asp
100 105 110
Phe His Val Asn Gly Gly Glu Leu Ile Leu Ile His Gln Asn Pro Gly
115 120 125
Glu Phe Cys Val Leu
130
<210> 85
<211> 184
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 85
Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp
1 5 10 15
Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu
20 25 30
Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val
35 40 45
Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val
50 55 60
Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg
65 70 75 80
Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His
85 90 95
Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr
100 105 110
Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly
115 120 125
Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val
130 135 140
His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln
145 150 155 160
Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala
165 170 175
Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
180
<210> 86
<211> 238
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 86
Asp Thr Gln Glu Lys Glu Val Arg Ala Met Val Gly Ser Asp Val Glu
1 5 10 15
Leu Ser Cys Ala Cys Pro Glu Gly Ser Arg Phe Asp Leu Asn Asp Val
20 25 30
Tyr Val Tyr Trp Gln Thr Ser Glu Ser Lys Thr Val Val Thr Tyr His
35 40 45
Ile Pro Gln Asn Ser Ser Leu Glu Asn Val Asp Ser Arg Tyr Arg Asn
50 55 60
Arg Ala Leu Met Ser Pro Ala Gly Met Leu Arg Gly Asp Phe Ser Leu
65 70 75 80
Arg Leu Phe Asn Val Thr Pro Gln Asp Glu Gln Lys Phe His Cys Leu
85 90 95
Val Leu Ser Gln Ser Leu Gly Phe Gln Glu Val Leu Ser Val Glu Val
100 105 110
Thr Leu His Val Ala Ala Asn Phe Ser Val Pro Val Val Ser Ala Pro
115 120 125
His Ser Pro Ser Gln Asp Glu Leu Thr Phe Thr Cys Thr Ser Ile Asn
130 135 140
Gly Tyr Pro Arg Pro Asn Val Tyr Trp Ile Asn Lys Thr Asp Asn Ser
145 150 155 160
Leu Leu Asp Gln Ala Leu Gln Asn Asp Thr Val Phe Leu Asn Met Arg
165 170 175
Gly Leu Tyr Asp Val Val Ser Val Leu Arg Ile Ala Arg Thr Pro Ser
180 185 190
Val Asn Ile Gly Cys Cys Ile Glu Asn Val Leu Leu Gln Gln Asn Leu
195 200 205
Thr Val Gly Ser Gln Thr Gly Asn Asp Ile Gly Glu Arg Asp Lys Ile
210 215 220
Thr Glu Asn Pro Val Ser Thr Gly Glu Lys Asn Ala Ala Thr
225 230 235
<210> 87
<211> 222
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 87
Ala Pro Leu Lys Ile Gln Ala Tyr Phe Asn Glu Thr Ala Asp Leu Pro
1 5 10 15
Cys Gln Phe Ala Asn Ser Gln Asn Gln Ser Leu Ser Glu Leu Val Val
20 25 30
Phe Trp Gln Asp Gln Glu Asn Leu Val Leu Asn Glu Val Tyr Leu Gly
35 40 45
Lys Glu Lys Phe Asp Ser Val His Ser Lys Tyr Met Gly Arg Thr Ser
50 55 60
Phe Asp Ser Asp Ser Trp Thr Leu Arg Leu His Asn Leu Gln Ile Lys
65 70 75 80
Asp Lys Gly Leu Tyr Gln Cys Ile Ile His His Lys Lys Pro Thr Gly
85 90 95
Met Ile Arg Ile His Gln Met Asn Ser Glu Leu Ser Val Leu Ala Asn
100 105 110
Phe Ser Gln Pro Glu Ile Val Pro Ile Ser Asn Ile Thr Glu Asn Val
115 120 125
Tyr Ile Asn Leu Thr Cys Ser Ser Ile His Gly Tyr Pro Glu Pro Lys
130 135 140
Lys Met Ser Val Leu Leu Arg Thr Lys Asn Ser Thr Ile Glu Tyr Asp
145 150 155 160
Gly Val Met Gln Lys Ser Gln Asp Asn Val Thr Glu Leu Tyr Asp Val
165 170 175
Ser Ile Ser Leu Ser Val Ser Phe Pro Asp Val Thr Ser Asn Met Thr
180 185 190
Ile Phe Cys Ile Leu Glu Thr Asp Lys Thr Arg Leu Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Phe Ser Ile Glu Leu Glu Asp Pro Gln Pro Pro Pro Asp His
210 215 220
<210> 88
<211> 153
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 88
Leu Gln Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg
1 5 10 15
Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu
20 25 30
Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser
35 40 45
Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys
50 55 60
Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg
65 70 75 80
Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val
85 90 95
Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile
100 105 110
Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu
115 120 125
Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro
130 135 140
Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln
145 150
<210> 89
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 接头序列
<400> 89
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 90
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 接头序列
<400> 90
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser
20
<210> 91
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 接头序列
<400> 91
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 92
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 接头序列
<400> 92
Gly Gly Gly Ser
1
<210> 93
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 接头序列
<400> 93
Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser
1 5 10 15
<210> 94
<211> 618
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 94
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
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Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Val His Trp Val Lys Gln Arg Pro Ile Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asp Pro Ser Asp Ser Asp Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Ser Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
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100 105 110
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595 600 605
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610 615
<210> 95
<211> 691
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 95
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1 5 10 15
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35 40 45
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100 105 110
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115 120 125
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<400> 96
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<210> 97
<211> 604
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 97
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<220>
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<400> 98
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<211> 709
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 99
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
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195 200 205
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245 250 255
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260 265 270
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610 615 620
Ile Asn Lys Thr Asp Asn Ser Leu Leu Asp Gln Ala Leu Gln Asn Asp
625 630 635 640
Thr Val Phe Leu Asn Met Arg Gly Leu Tyr Asp Val Val Ser Val Leu
645 650 655
Arg Ile Ala Arg Thr Pro Ser Val Asn Ile Gly Cys Cys Ile Glu Asn
660 665 670
Val Leu Leu Gln Gln Asn Leu Thr Val Gly Ser Gln Thr Gly Asn Asp
675 680 685
Ile Gly Glu Arg Asp Lys Ile Thr Glu Asn Pro Val Ser Thr Gly Glu
690 695 700
Lys Asn Ala Ala Thr
705
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<211> 693
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 100
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1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Val His Trp Val Lys Gln Arg Pro Ile Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asp Pro Ser Asp Ser Asp Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Ser Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly Gly Thr Gly Thr Met Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val
115 120 125
Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Ser Val Thr Val Thr
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210 215 220
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Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val
260 265 270
Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val
275 280 285
Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp
290 295 300
Tyr Asn Ser Thr Ile Arg Val Val Ser Thr Leu Pro Ile Gln His Gln
305 310 315 320
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325 330 335
Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ile Lys Gly Leu Val
340 345 350
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355 360 365
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370 375 380
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385 390 395 400
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405 410 415
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Ser Cys Asn Val Arg His Glu Gly Leu Lys Asn Tyr Tyr Leu Lys Lys
435 440 445
Thr Ile Ser Arg Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
450 455 460
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Pro Leu Lys Ile Gln Ala Tyr Phe
465 470 475 480
Asn Glu Thr Ala Asp Leu Pro Cys Gln Phe Ala Asn Ser Gln Asn Gln
485 490 495
Ser Leu Ser Glu Leu Val Val Phe Trp Gln Asp Gln Glu Asn Leu Val
500 505 510
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515 520 525
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530 535 540
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545 550 555 560
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565 570 575
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580 585 590
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595 600 605
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610 615 620
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675 680 685
Pro Pro Pro Asp His
690
<210> 101
<211> 609
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 101
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165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
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Gln
<210> 102
<211> 682
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 102
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
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325 330 335
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450 455 460
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500 505 510
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675 680
<210> 103
<211> 670
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 103
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
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165 170 175
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His Val Thr Lys Glu Val Lys Glu Val Ala Thr Leu Ser Cys Gly His
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Asn Val Ser Val Glu Glu Leu Ala Gln Thr Arg Ile Tyr Trp Gln Lys
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515 520 525
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Phe Asn Trp Asn Thr Thr Lys Gln Glu His Phe Pro Asp Asn
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<210> 104
<211> 595
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 104
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
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Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
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Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
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<211> 646
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 105
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
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165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
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225 230 235 240
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245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
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325 330 335
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340 345 350
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355 360 365
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370 375 380
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450 455 460
Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg
465 470 475 480
Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp
485 490 495
Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu
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Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala
515 520 525
Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val
530 535 540
Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln
545 550 555 560
Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp
565 570 575
Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln
580 585 590
Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu
595 600 605
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610 615 620
Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu
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Pro Ser Pro Arg Ser Glu
645
<210> 106
<211> 700
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 106
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
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20 25 30
Trp Val His Trp Val Lys Gln Arg Pro Ile Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asp Pro Ser Asp Ser Asp Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Ser Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
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115 120 125
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130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
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Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
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305 310 315 320
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325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
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355 360 365
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370 375 380
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420 425 430
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435 440 445
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450 455 460
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465 470 475 480
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500 505 510
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515 520 525
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<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 107
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
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<210> 108
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 108
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<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 109
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
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<211> 595
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 111
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275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly
435 440 445
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val
450 455 460
Ser His Arg Tyr Pro Arg Ile Gln Ser Ile Lys Val Gln Phe Thr Glu
465 470 475 480
Tyr Lys Lys Glu Lys Gly Phe Ile Leu Thr Ser Gln Lys Glu Asp Glu
485 490 495
Ile Met Lys Val Gln Asn Asn Ser Val Ile Ile Asn Cys Asp Gly Phe
500 505 510
Tyr Leu Ile Ser Leu Lys Gly Tyr Phe Ser Gln Glu Val Asn Ile Ser
515 520 525
Leu His Tyr Gln Lys Asp Glu Glu Pro Leu Phe Gln Leu Lys Lys Val
530 535 540
Arg Ser Val Asn Ser Leu Met Val Ala Ser Leu Thr Tyr Lys Asp Lys
545 550 555 560
Val Tyr Leu Asn Val Thr Thr Asp Asn Thr Ser Leu Asp Asp Phe His
565 570 575
Val Asn Gly Gly Glu Leu Ile Leu Ile His Gln Asn Pro Gly Glu Phe
580 585 590
Cys Val Leu
595
<210> 112
<211> 646
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 112
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Val His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asp Pro Ser Asp Ser Asp Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp His Val Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
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100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
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290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
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340 345 350
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355 360 365
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370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
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420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly
435 440 445
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu
450 455 460
Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg
465 470 475 480
Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp
485 490 495
Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu
500 505 510
Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala
515 520 525
Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val
530 535 540
Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln
545 550 555 560
Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp
565 570 575
Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln
580 585 590
Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu
595 600 605
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610 615 620
Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu
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Pro Ser Pro Arg Ser Glu
645
<210> 113
<211> 700
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 113
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
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165 170 175
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180 185 190
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325 330 335
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420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly
435 440 445
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Thr
450 455 460
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<210> 114
<211> 684
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 114
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
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50 55 60
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100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
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165 170 175
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Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
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Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
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Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
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355 360 365
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435 440 445
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Pro
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500 505 510
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Ser Val Leu Leu Arg Thr Lys Asn Ser Thr Ile Glu Tyr Asp Gly Val
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Ile Glu Leu Glu Asp Pro Gln Pro Pro Pro Asp His
675 680
<210> 115
<211> 609
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 115
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
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Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
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165 170 175
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Gln
<210> 116
<211> 682
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 116
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
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165 170 175
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420 425 430
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485 490 495
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500 505 510
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545 550 555 560
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565 570 575
Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro Val Thr
580 585 590
Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys Ala Glu
595 600 605
Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys Thr Thr
610 615 620
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645 650 655
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675 680
<210> 117
<211> 670
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 117
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
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145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly
435 440 445
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Val Ile
450 455 460
His Val Thr Lys Glu Val Lys Glu Val Ala Thr Leu Ser Cys Gly His
465 470 475 480
Asn Val Ser Val Glu Glu Leu Ala Gln Thr Arg Ile Tyr Trp Gln Lys
485 490 495
Glu Lys Lys Met Val Leu Thr Met Met Ser Gly Asp Met Asn Ile Trp
500 505 510
Pro Glu Tyr Lys Asn Arg Thr Ile Phe Asp Ile Thr Asn Asn Leu Ser
515 520 525
Ile Val Ile Leu Ala Leu Arg Pro Ser Asp Glu Gly Thr Tyr Glu Cys
530 535 540
Val Val Leu Lys Tyr Glu Lys Asp Ala Phe Lys Arg Glu His Leu Ala
545 550 555 560
Glu Val Thr Leu Ser Val Lys Ala Asp Phe Pro Thr Pro Ser Ile Ser
565 570 575
Asp Phe Glu Ile Pro Thr Ser Asn Ile Arg Arg Ile Ile Cys Ser Thr
580 585 590
Ser Gly Gly Phe Pro Glu Pro His Leu Ser Trp Leu Glu Asn Gly Glu
595 600 605
Glu Leu Asn Ala Ile Asn Thr Thr Val Ser Gln Asp Pro Glu Thr Glu
610 615 620
Leu Tyr Ala Val Ser Ser Lys Leu Asp Phe Asn Met Thr Thr Asn His
625 630 635 640
Ser Phe Met Cys Leu Ile Lys Tyr Gly His Leu Arg Val Asn Gln Thr
645 650 655
Phe Asn Trp Asn Thr Thr Lys Gln Glu His Phe Pro Asp Asn
660 665 670
<210> 118
<211> 595
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 118
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Val His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asn Ile Asp Pro Ser Asp Ser Asp Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp His Val Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly Gly Thr Gly Thr Met Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly
435 440 445
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val
450 455 460
Ser His Arg Tyr Pro Arg Ile Gln Ser Ile Lys Val Gln Phe Thr Glu
465 470 475 480
Tyr Lys Lys Glu Lys Gly Phe Ile Leu Thr Ser Gln Lys Glu Asp Glu
485 490 495
Ile Met Lys Val Gln Asn Asn Ser Val Ile Ile Asn Cys Asp Gly Phe
500 505 510
Tyr Leu Ile Ser Leu Lys Gly Tyr Phe Ser Gln Glu Val Asn Ile Ser
515 520 525
Leu His Tyr Gln Lys Asp Glu Glu Pro Leu Phe Gln Leu Lys Lys Val
530 535 540
Arg Ser Val Asn Ser Leu Met Val Ala Ser Leu Thr Tyr Lys Asp Lys
545 550 555 560
Val Tyr Leu Asn Val Thr Thr Asp Asn Thr Ser Leu Asp Asp Phe His
565 570 575
Val Asn Gly Gly Glu Leu Ile Leu Ile His Gln Asn Pro Gly Glu Phe
580 585 590
Cys Val Leu
595
<210> 119
<211> 646
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 119
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Val His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asn Ile Asp Pro Ser Asp Ser Asp Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp His Val Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly Gly Thr Gly Thr Met Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly
435 440 445
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu
450 455 460
Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg
465 470 475 480
Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp
485 490 495
Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu
500 505 510
Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala
515 520 525
Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val
530 535 540
Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln
545 550 555 560
Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp
565 570 575
Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln
580 585 590
Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu
595 600 605
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610 615 620
Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu
625 630 635 640
Pro Ser Pro Arg Ser Glu
645
<210> 120
<211> 700
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 120
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Val His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asn Ile Asp Pro Ser Asp Ser Asp Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp His Val Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly Gly Thr Gly Thr Met Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly
435 440 445
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Thr
450 455 460
Gln Glu Lys Glu Val Arg Ala Met Val Gly Ser Asp Val Glu Leu Ser
465 470 475 480
Cys Ala Cys Pro Glu Gly Ser Arg Phe Asp Leu Asn Asp Val Tyr Val
485 490 495
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500 505 510
Gln Asn Ser Ser Leu Glu Asn Val Asp Ser Arg Tyr Arg Asn Arg Ala
515 520 525
Leu Met Ser Pro Ala Gly Met Leu Arg Gly Asp Phe Ser Leu Arg Leu
530 535 540
Phe Asn Val Thr Pro Gln Asp Glu Gln Lys Phe His Cys Leu Val Leu
545 550 555 560
Ser Gln Ser Leu Gly Phe Gln Glu Val Leu Ser Val Glu Val Thr Leu
565 570 575
His Val Ala Ala Asn Phe Ser Val Pro Val Val Ser Ala Pro His Ser
580 585 590
Pro Ser Gln Asp Glu Leu Thr Phe Thr Cys Thr Ser Ile Asn Gly Tyr
595 600 605
Pro Arg Pro Asn Val Tyr Trp Ile Asn Lys Thr Asp Asn Ser Leu Leu
610 615 620
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625 630 635 640
Tyr Asp Val Val Ser Val Leu Arg Ile Ala Arg Thr Pro Ser Val Asn
645 650 655
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660 665 670
Gly Ser Gln Thr Gly Asn Asp Ile Gly Glu Arg Asp Lys Ile Thr Glu
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Asn Pro Val Ser Thr Gly Glu Lys Asn Ala Ala Thr
690 695 700
<210> 121
<211> 684
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 121
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Val His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asn Ile Asp Pro Ser Asp Ser Asp Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe
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Lys Asp His Val Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
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Val Arg Gly Gly Thr Gly Thr Met Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
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355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
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Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
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Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly
435 440 445
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Pro
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Gln Asp Gln Glu Asn Leu Val Leu Asn Glu Val Tyr Leu Gly Lys Glu
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Lys Phe Asp Ser Val His Ser Lys Tyr Met Gly Arg Thr Ser Phe Asp
515 520 525
Ser Asp Ser Trp Thr Leu Arg Leu His Asn Leu Gln Ile Lys Asp Lys
530 535 540
Gly Leu Tyr Gln Cys Ile Ile His His Lys Lys Pro Thr Gly Met Ile
545 550 555 560
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565 570 575
Gln Pro Glu Ile Val Pro Ile Ser Asn Ile Thr Glu Asn Val Tyr Ile
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595 600 605
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Met Gln Lys Ser Gln Asp Asn Val Thr Glu Leu Tyr Asp Val Ser Ile
625 630 635 640
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645 650 655
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660 665 670
Ile Glu Leu Glu Asp Pro Gln Pro Pro Pro Asp His
675 680
<210> 122
<211> 609
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 122
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
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Trp Val His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
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Gln Gly His Val Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly Gly Thr Gly Thr Met Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly
435 440 445
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Pro Gly
450 455 460
Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser
465 470 475 480
Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys
485 490 495
Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met
500 505 510
Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg
515 520 525
Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn
530 535 540
Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser
545 550 555 560
Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile
565 570 575
Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu
580 585 590
Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Phe
595 600 605
Gln
<210> 123
<211> 682
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 123
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Val His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
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Gly Asn Ile Asp Pro Ser Asp Ser Asp Thr His Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly His Val Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly Gly Thr Gly Thr Met Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly
435 440 445
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Phe Thr
450 455 460
Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser Asn Met
465 470 475 480
Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu Ala Ala
485 490 495
Leu Ile Val Tyr Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln Phe Val
500 505 510
His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg Gln Arg
515 520 525
Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala Leu Gln
530 535 540
Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Arg Cys Met Ile
545 550 555 560
Ser Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val Asn Ala
565 570 575
Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro Val Thr
580 585 590
Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys Ala Glu
595 600 605
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610 615 620
Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn Val Thr Ser Thr
625 630 635 640
Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr Phe Arg
645 650 655
Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile Pro Glu
660 665 670
Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg
675 680
<210> 124
<211> 670
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 124
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Val His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asn Ile Asp Pro Ser Asp Ser Asp Thr His Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
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65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly Gly Thr Gly Thr Met Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
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130 135 140
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145 150 155 160
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165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
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195 200 205
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Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
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Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
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Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
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355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
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<210> 125
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<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 125
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
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325 330 335
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435 440 445
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<210> 126
<211> 646
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 126
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
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195 200 205
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210 215 220
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225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
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275 280 285
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290 295 300
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305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
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340 345 350
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355 360 365
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370 375 380
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385 390 395 400
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405 410 415
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420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly
435 440 445
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu
450 455 460
Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg
465 470 475 480
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485 490 495
Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu
500 505 510
Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala
515 520 525
Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val
530 535 540
Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln
545 550 555 560
Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp
565 570 575
Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln
580 585 590
Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu
595 600 605
His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala
610 615 620
Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu
625 630 635 640
Pro Ser Pro Arg Ser Glu
645
<210> 127
<211> 700
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 127
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
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Trp Val His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
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65 70 75 80
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100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
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245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
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275 280 285
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290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
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420 425 430
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435 440 445
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530 535 540
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565 570 575
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580 585 590
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595 600 605
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610 615 620
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660 665 670
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675 680 685
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690 695 700
<210> 128
<211> 684
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 128
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Val His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
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50 55 60
Gln Gly His Val Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly Gly Thr Gly Thr Met Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly
435 440 445
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Pro
450 455 460
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465 470 475 480
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485 490 495
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515 520 525
Ser Asp Ser Trp Thr Leu Arg Leu His Asn Leu Gln Ile Lys Asp Lys
530 535 540
Gly Leu Tyr Gln Cys Ile Ile His His Lys Lys Pro Thr Gly Met Ile
545 550 555 560
Arg Ile His Gln Met Asn Ser Glu Leu Ser Val Leu Ala Asn Phe Ser
565 570 575
Gln Pro Glu Ile Val Pro Ile Ser Asn Ile Thr Glu Asn Val Tyr Ile
580 585 590
Asn Leu Thr Cys Ser Ser Ile His Gly Tyr Pro Glu Pro Lys Lys Met
595 600 605
Ser Val Leu Leu Arg Thr Lys Asn Ser Thr Ile Glu Tyr Asp Gly Val
610 615 620
Met Gln Lys Ser Gln Asp Asn Val Thr Glu Leu Tyr Asp Val Ser Ile
625 630 635 640
Ser Leu Ser Val Ser Phe Pro Asp Val Thr Ser Asn Met Thr Ile Phe
645 650 655
Cys Ile Leu Glu Thr Asp Lys Thr Arg Leu Leu Ser Ser Pro Phe Ser
660 665 670
Ile Glu Leu Glu Asp Pro Gln Pro Pro Pro Asp His
675 680
<210> 129
<211> 609
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 129
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Val His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asn Ile Asp Pro Ser Asp Ser Asp Thr His Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly His Val Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly Gly Thr Gly Thr Leu Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
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165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
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195 200 205
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210 215 220
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Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
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290 295 300
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305 310 315 320
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Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
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435 440 445
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Pro Gly
450 455 460
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465 470 475 480
Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys
485 490 495
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500 505 510
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530 535 540
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565 570 575
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580 585 590
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595 600 605
Gln
<210> 130
<211> 682
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 130
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
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50 55 60
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100 105 110
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Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
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Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
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Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Phe Thr
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595 600 605
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675 680
<210> 131
<211> 670
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 131
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
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Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
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660 665 670
<210> 132
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<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 132
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Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
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595
<210> 133
<211> 646
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 133
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
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<210> 134
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<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 134
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
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Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
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165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
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210 215 220
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225 230 235 240
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245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly
435 440 445
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Thr
450 455 460
Gln Glu Lys Glu Val Arg Ala Met Val Gly Ser Asp Val Glu Leu Ser
465 470 475 480
Cys Ala Cys Pro Glu Gly Ser Arg Phe Asp Leu Asn Asp Val Tyr Val
485 490 495
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515 520 525
Leu Met Ser Pro Ala Gly Met Leu Arg Gly Asp Phe Ser Leu Arg Leu
530 535 540
Phe Asn Val Thr Pro Gln Asp Glu Gln Lys Phe His Cys Leu Val Leu
545 550 555 560
Ser Gln Ser Leu Gly Phe Gln Glu Val Leu Ser Val Glu Val Thr Leu
565 570 575
His Val Ala Ala Asn Phe Ser Val Pro Val Val Ser Ala Pro His Ser
580 585 590
Pro Ser Gln Asp Glu Leu Thr Phe Thr Cys Thr Ser Ile Asn Gly Tyr
595 600 605
Pro Arg Pro Asn Val Tyr Trp Ile Asn Lys Thr Asp Asn Ser Leu Leu
610 615 620
Asp Gln Ala Leu Gln Asn Asp Thr Val Phe Leu Asn Met Arg Gly Leu
625 630 635 640
Tyr Asp Val Val Ser Val Leu Arg Ile Ala Arg Thr Pro Ser Val Asn
645 650 655
Ile Gly Cys Cys Ile Glu Asn Val Leu Leu Gln Gln Asn Leu Thr Val
660 665 670
Gly Ser Gln Thr Gly Asn Asp Ile Gly Glu Arg Asp Lys Ile Thr Glu
675 680 685
Asn Pro Val Ser Thr Gly Glu Lys Asn Ala Ala Thr
690 695 700
<210> 135
<211> 684
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 135
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Val His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asn Ile Asp Pro Ser Asp Ser Asp Thr His Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly His Val Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
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Val Arg Gly Gly Thr Gly Thr Leu Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
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Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
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Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
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435 440 445
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Pro
450 455 460
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465 470 475 480
Phe Ala Asn Ser Gln Asn Gln Ser Leu Ser Glu Leu Val Val Phe Trp
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Gln Asp Gln Glu Asn Leu Val Leu Asn Glu Val Tyr Leu Gly Lys Glu
500 505 510
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515 520 525
Ser Asp Ser Trp Thr Leu Arg Leu His Asn Leu Gln Ile Lys Asp Lys
530 535 540
Gly Leu Tyr Gln Cys Ile Ile His His Lys Lys Pro Thr Gly Met Ile
545 550 555 560
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565 570 575
Gln Pro Glu Ile Val Pro Ile Ser Asn Ile Thr Glu Asn Val Tyr Ile
580 585 590
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595 600 605
Ser Val Leu Leu Arg Thr Lys Asn Ser Thr Ile Glu Tyr Asp Gly Val
610 615 620
Met Gln Lys Ser Gln Asp Asn Val Thr Glu Leu Tyr Asp Val Ser Ile
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645 650 655
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675 680
<210> 136
<211> 609
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 136
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
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595 600 605
Gln
<210> 137
<211> 682
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 137
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<210> 138
<211> 670
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 138
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<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 139
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<211> 646
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 140
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
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370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly
435 440 445
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu
450 455 460
Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg
465 470 475 480
Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp
485 490 495
Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu
500 505 510
Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala
515 520 525
Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val
530 535 540
Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln
545 550 555 560
Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp
565 570 575
Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln
580 585 590
Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu
595 600 605
His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala
610 615 620
Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu
625 630 635 640
Pro Ser Pro Arg Ser Glu
645
<210> 141
<211> 700
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 141
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Val His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asn Ile Asp Pro Ser Asp Ser Asp Thr His Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly His Val Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly Gly Thr Gly Thr Met Ala Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
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405 410 415
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420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly
435 440 445
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Thr
450 455 460
Gln Glu Lys Glu Val Arg Ala Met Val Gly Ser Asp Val Glu Leu Ser
465 470 475 480
Cys Ala Cys Pro Glu Gly Ser Arg Phe Asp Leu Asn Asp Val Tyr Val
485 490 495
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500 505 510
Gln Asn Ser Ser Leu Glu Asn Val Asp Ser Arg Tyr Arg Asn Arg Ala
515 520 525
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545 550 555 560
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565 570 575
His Val Ala Ala Asn Phe Ser Val Pro Val Val Ser Ala Pro His Ser
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Asn Pro Val Ser Thr Gly Glu Lys Asn Ala Ala Thr
690 695 700
<210> 142
<211> 684
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 142
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
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50 55 60
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65 70 75 80
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Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
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165 170 175
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245 250 255
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355 360 365
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405 410 415
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His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly
435 440 445
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Pro
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Phe Ala Asn Ser Gln Asn Gln Ser Leu Ser Glu Leu Val Val Phe Trp
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Gln Asp Gln Glu Asn Leu Val Leu Asn Glu Val Tyr Leu Gly Lys Glu
500 505 510
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515 520 525
Ser Asp Ser Trp Thr Leu Arg Leu His Asn Leu Gln Ile Lys Asp Lys
530 535 540
Gly Leu Tyr Gln Cys Ile Ile His His Lys Lys Pro Thr Gly Met Ile
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580 585 590
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595 600 605
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675 680
<210> 143
<211> 609
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 143
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
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130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
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165 170 175
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195 200 205
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245 250 255
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325 330 335
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Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
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Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Pro Gly
450 455 460
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530 535 540
Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser
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595 600 605
Gln
<210> 144
<211> 682
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 144
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1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
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115 120 125
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Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
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165 170 175
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Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu Ala Ala
485 490 495
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500 505 510
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<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 146
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Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly
435 440 445
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val
450 455 460
Ser His Arg Tyr Pro Arg Ile Gln Ser Ile Lys Val Gln Phe Thr Glu
465 470 475 480
Tyr Lys Lys Glu Lys Gly Phe Ile Leu Thr Ser Gln Lys Glu Asp Glu
485 490 495
Ile Met Lys Val Gln Asn Asn Ser Val Ile Ile Asn Cys Asp Gly Phe
500 505 510
Tyr Leu Ile Ser Leu Lys Gly Tyr Phe Ser Gln Glu Val Asn Ile Ser
515 520 525
Leu His Tyr Gln Lys Asp Glu Glu Pro Leu Phe Gln Leu Lys Lys Val
530 535 540
Arg Ser Val Asn Ser Leu Met Val Ala Ser Leu Thr Tyr Lys Asp Lys
545 550 555 560
Val Tyr Leu Asn Val Thr Thr Asp Asn Thr Ser Leu Asp Asp Phe His
565 570 575
Val Asn Gly Gly Glu Leu Ile Leu Ile His Gln Asn Pro Gly Glu Phe
580 585 590
Cys Val Leu
595
<210> 147
<211> 646
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 147
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Val His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asn Ile Asp Pro Ser Asp Ser Asp Thr His Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly His Val Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly Gly Thr Gly Thr Leu Ala Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly
435 440 445
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu
450 455 460
Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg
465 470 475 480
Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp
485 490 495
Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu
500 505 510
Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala
515 520 525
Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val
530 535 540
Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln
545 550 555 560
Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp
565 570 575
Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln
580 585 590
Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu
595 600 605
His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala
610 615 620
Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu
625 630 635 640
Pro Ser Pro Arg Ser Glu
645
<210> 148
<211> 700
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 148
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Val His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asn Ile Asp Pro Ser Asp Ser Asp Thr His Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly His Val Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly Gly Thr Gly Thr Leu Ala Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly
435 440 445
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Thr
450 455 460
Gln Glu Lys Glu Val Arg Ala Met Val Gly Ser Asp Val Glu Leu Ser
465 470 475 480
Cys Ala Cys Pro Glu Gly Ser Arg Phe Asp Leu Asn Asp Val Tyr Val
485 490 495
Tyr Trp Gln Thr Ser Glu Ser Lys Thr Val Val Thr Tyr His Ile Pro
500 505 510
Gln Asn Ser Ser Leu Glu Asn Val Asp Ser Arg Tyr Arg Asn Arg Ala
515 520 525
Leu Met Ser Pro Ala Gly Met Leu Arg Gly Asp Phe Ser Leu Arg Leu
530 535 540
Phe Asn Val Thr Pro Gln Asp Glu Gln Lys Phe His Cys Leu Val Leu
545 550 555 560
Ser Gln Ser Leu Gly Phe Gln Glu Val Leu Ser Val Glu Val Thr Leu
565 570 575
His Val Ala Ala Asn Phe Ser Val Pro Val Val Ser Ala Pro His Ser
580 585 590
Pro Ser Gln Asp Glu Leu Thr Phe Thr Cys Thr Ser Ile Asn Gly Tyr
595 600 605
Pro Arg Pro Asn Val Tyr Trp Ile Asn Lys Thr Asp Asn Ser Leu Leu
610 615 620
Asp Gln Ala Leu Gln Asn Asp Thr Val Phe Leu Asn Met Arg Gly Leu
625 630 635 640
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645 650 655
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660 665 670
Gly Ser Gln Thr Gly Asn Asp Ile Gly Glu Arg Asp Lys Ile Thr Glu
675 680 685
Asn Pro Val Ser Thr Gly Glu Lys Asn Ala Ala Thr
690 695 700
<210> 149
<211> 684
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 149
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Val His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asn Ile Asp Pro Ser Asp Ser Asp Thr His Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly His Val Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly Gly Thr Gly Thr Leu Ala Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly
435 440 445
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Pro
450 455 460
Leu Lys Ile Gln Ala Tyr Phe Asn Glu Thr Ala Asp Leu Pro Cys Gln
465 470 475 480
Phe Ala Asn Ser Gln Asn Gln Ser Leu Ser Glu Leu Val Val Phe Trp
485 490 495
Gln Asp Gln Glu Asn Leu Val Leu Asn Glu Val Tyr Leu Gly Lys Glu
500 505 510
Lys Phe Asp Ser Val His Ser Lys Tyr Met Gly Arg Thr Ser Phe Asp
515 520 525
Ser Asp Ser Trp Thr Leu Arg Leu His Asn Leu Gln Ile Lys Asp Lys
530 535 540
Gly Leu Tyr Gln Cys Ile Ile His His Lys Lys Pro Thr Gly Met Ile
545 550 555 560
Arg Ile His Gln Met Asn Ser Glu Leu Ser Val Leu Ala Asn Phe Ser
565 570 575
Gln Pro Glu Ile Val Pro Ile Ser Asn Ile Thr Glu Asn Val Tyr Ile
580 585 590
Asn Leu Thr Cys Ser Ser Ile His Gly Tyr Pro Glu Pro Lys Lys Met
595 600 605
Ser Val Leu Leu Arg Thr Lys Asn Ser Thr Ile Glu Tyr Asp Gly Val
610 615 620
Met Gln Lys Ser Gln Asp Asn Val Thr Glu Leu Tyr Asp Val Ser Ile
625 630 635 640
Ser Leu Ser Val Ser Phe Pro Asp Val Thr Ser Asn Met Thr Ile Phe
645 650 655
Cys Ile Leu Glu Thr Asp Lys Thr Arg Leu Leu Ser Ser Pro Phe Ser
660 665 670
Ile Glu Leu Glu Asp Pro Gln Pro Pro Pro Asp His
675 680
<210> 150
<211> 381
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的轻链
<400> 150
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu
115 120 125
Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg
145 150 155 160
Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu
180 185 190
Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser
195 200 205
Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser
210 215 220
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Pro Gly Trp Phe Leu Asp
225 230 235 240
Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu
245 250 255
Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn
260 265 270
Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn
275 280 285
Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly
290 295 300
Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe
305 310 315 320
His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu
325 330 335
Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu
340 345 350
Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala
355 360 365
His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln
370 375 380
<210> 151
<211> 454
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的轻链
<400> 151
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu
115 120 125
Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg
145 150 155 160
Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu
180 185 190
Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser
195 200 205
Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser
210 215 220
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Phe Thr Val Thr Val Pro
225 230 235 240
Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser Asn Met Thr Ile Glu Cys
245 250 255
Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu Ala Ala Leu Ile Val Tyr
260 265 270
Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln Phe Val His Gly Glu Glu
275 280 285
Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg Gln Arg Ala Arg Leu Leu
290 295 300
Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala Leu Gln Ile Thr Asp Val
305 310 315 320
Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Arg Cys Met Ile Ser Tyr Gly Gly
325 330 335
Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val Asn Ala Pro Tyr Asn Lys
340 345 350
Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro Val Thr Ser Glu His Glu
355 360 365
Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys Ala Glu Val Ile Trp Thr
370 375 380
Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys Thr Thr Thr Thr Asn Ser
385 390 395 400
Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn Val Thr Ser Thr Leu Arg Ile Asn
405 410 415
Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr Phe Arg Arg Leu Asp Pro
420 425 430
Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile Pro Glu Leu Pro Leu Ala
435 440 445
His Pro Pro Asn Glu Arg
450
<210> 152
<211> 442
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的轻链
<400> 152
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu
115 120 125
Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg
145 150 155 160
Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu
180 185 190
Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser
195 200 205
Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser
210 215 220
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Val Ile His Val Thr Lys
225 230 235 240
Glu Val Lys Glu Val Ala Thr Leu Ser Cys Gly His Asn Val Ser Val
245 250 255
Glu Glu Leu Ala Gln Thr Arg Ile Tyr Trp Gln Lys Glu Lys Lys Met
260 265 270
Val Leu Thr Met Met Ser Gly Asp Met Asn Ile Trp Pro Glu Tyr Lys
275 280 285
Asn Arg Thr Ile Phe Asp Ile Thr Asn Asn Leu Ser Ile Val Ile Leu
290 295 300
Ala Leu Arg Pro Ser Asp Glu Gly Thr Tyr Glu Cys Val Val Leu Lys
305 310 315 320
Tyr Glu Lys Asp Ala Phe Lys Arg Glu His Leu Ala Glu Val Thr Leu
325 330 335
Ser Val Lys Ala Asp Phe Pro Thr Pro Ser Ile Ser Asp Phe Glu Ile
340 345 350
Pro Thr Ser Asn Ile Arg Arg Ile Ile Cys Ser Thr Ser Gly Gly Phe
355 360 365
Pro Glu Pro His Leu Ser Trp Leu Glu Asn Gly Glu Glu Leu Asn Ala
370 375 380
Ile Asn Thr Thr Val Ser Gln Asp Pro Glu Thr Glu Leu Tyr Ala Val
385 390 395 400
Ser Ser Lys Leu Asp Phe Asn Met Thr Thr Asn His Ser Phe Met Cys
405 410 415
Leu Ile Lys Tyr Gly His Leu Arg Val Asn Gln Thr Phe Asn Trp Asn
420 425 430
Thr Thr Lys Gln Glu His Phe Pro Asp Asn
435 440
<210> 153
<211> 367
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的轻链
<400> 153
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu
115 120 125
Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg
145 150 155 160
Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu
180 185 190
Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser
195 200 205
Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser
210 215 220
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Ser His Arg Tyr
225 230 235 240
Pro Arg Ile Gln Ser Ile Lys Val Gln Phe Thr Glu Tyr Lys Lys Glu
245 250 255
Lys Gly Phe Ile Leu Thr Ser Gln Lys Glu Asp Glu Ile Met Lys Val
260 265 270
Gln Asn Asn Ser Val Ile Ile Asn Cys Asp Gly Phe Tyr Leu Ile Ser
275 280 285
Leu Lys Gly Tyr Phe Ser Gln Glu Val Asn Ile Ser Leu His Tyr Gln
290 295 300
Lys Asp Glu Glu Pro Leu Phe Gln Leu Lys Lys Val Arg Ser Val Asn
305 310 315 320
Ser Leu Met Val Ala Ser Leu Thr Tyr Lys Asp Lys Val Tyr Leu Asn
325 330 335
Val Thr Thr Asp Asn Thr Ser Leu Asp Asp Phe His Val Asn Gly Gly
340 345 350
Glu Leu Ile Leu Ile His Gln Asn Pro Gly Glu Phe Cys Val Leu
355 360 365
<210> 154
<211> 418
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的轻链
<400> 154
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu
115 120 125
Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg
145 150 155 160
Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu
180 185 190
Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser
195 200 205
Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser
210 215 220
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu
225 230 235 240
Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe
245 250 255
Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser
260 265 270
Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu
275 280 285
Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val
290 295 300
Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu
305 310 315 320
Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser
325 330 335
Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala
340 345 350
Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu
355 360 365
His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala
370 375 380
Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly
385 390 395 400
Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg
405 410 415
Ser Glu
<210> 155
<211> 472
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的轻链
<400> 155
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu
115 120 125
Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg
145 150 155 160
Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu
180 185 190
Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser
195 200 205
Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser
210 215 220
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Thr Gln Glu Lys Glu
225 230 235 240
Val Arg Ala Met Val Gly Ser Asp Val Glu Leu Ser Cys Ala Cys Pro
245 250 255
Glu Gly Ser Arg Phe Asp Leu Asn Asp Val Tyr Val Tyr Trp Gln Thr
260 265 270
Ser Glu Ser Lys Thr Val Val Thr Tyr His Ile Pro Gln Asn Ser Ser
275 280 285
Leu Glu Asn Val Asp Ser Arg Tyr Arg Asn Arg Ala Leu Met Ser Pro
290 295 300
Ala Gly Met Leu Arg Gly Asp Phe Ser Leu Arg Leu Phe Asn Val Thr
305 310 315 320
Pro Gln Asp Glu Gln Lys Phe His Cys Leu Val Leu Ser Gln Ser Leu
325 330 335
Gly Phe Gln Glu Val Leu Ser Val Glu Val Thr Leu His Val Ala Ala
340 345 350
Asn Phe Ser Val Pro Val Val Ser Ala Pro His Ser Pro Ser Gln Asp
355 360 365
Glu Leu Thr Phe Thr Cys Thr Ser Ile Asn Gly Tyr Pro Arg Pro Asn
370 375 380
Val Tyr Trp Ile Asn Lys Thr Asp Asn Ser Leu Leu Asp Gln Ala Leu
385 390 395 400
Gln Asn Asp Thr Val Phe Leu Asn Met Arg Gly Leu Tyr Asp Val Val
405 410 415
Ser Val Leu Arg Ile Ala Arg Thr Pro Ser Val Asn Ile Gly Cys Cys
420 425 430
Ile Glu Asn Val Leu Leu Gln Gln Asn Leu Thr Val Gly Ser Gln Thr
435 440 445
Gly Asn Asp Ile Gly Glu Arg Asp Lys Ile Thr Glu Asn Pro Val Ser
450 455 460
Thr Gly Glu Lys Asn Ala Ala Thr
465 470
<210> 156
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的轻链
<400> 156
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu
115 120 125
Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg
145 150 155 160
Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu
180 185 190
Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser
195 200 205
Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser
210 215 220
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Pro Leu Lys Ile Gln
225 230 235 240
Ala Tyr Phe Asn Glu Thr Ala Asp Leu Pro Cys Gln Phe Ala Asn Ser
245 250 255
Gln Asn Gln Ser Leu Ser Glu Leu Val Val Phe Trp Gln Asp Gln Glu
260 265 270
Asn Leu Val Leu Asn Glu Val Tyr Leu Gly Lys Glu Lys Phe Asp Ser
275 280 285
Val His Ser Lys Tyr Met Gly Arg Thr Ser Phe Asp Ser Asp Ser Trp
290 295 300
Thr Leu Arg Leu His Asn Leu Gln Ile Lys Asp Lys Gly Leu Tyr Gln
305 310 315 320
Cys Ile Ile His His Lys Lys Pro Thr Gly Met Ile Arg Ile His Gln
325 330 335
Met Asn Ser Glu Leu Ser Val Leu Ala Asn Phe Ser Gln Pro Glu Ile
340 345 350
Val Pro Ile Ser Asn Ile Thr Glu Asn Val Tyr Ile Asn Leu Thr Cys
355 360 365
Ser Ser Ile His Gly Tyr Pro Glu Pro Lys Lys Met Ser Val Leu Leu
370 375 380
Arg Thr Lys Asn Ser Thr Ile Glu Tyr Asp Gly Val Met Gln Lys Ser
385 390 395 400
Gln Asp Asn Val Thr Glu Leu Tyr Asp Val Ser Ile Ser Leu Ser Val
405 410 415
Ser Phe Pro Asp Val Thr Ser Asn Met Thr Ile Phe Cys Ile Leu Glu
420 425 430
Thr Asp Lys Thr Arg Leu Leu Ser Ser Pro Phe Ser Ile Glu Leu Glu
435 440 445
Asp Pro Gln Pro Pro Pro Asp His
450 455
<210> 157
<211> 381
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的轻链
<400> 157
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser
210 215 220
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Pro Gly Trp Phe Leu Asp
225 230 235 240
Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu
245 250 255
Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn
260 265 270
Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn
275 280 285
Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly
290 295 300
Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe
305 310 315 320
His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu
325 330 335
Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu
340 345 350
Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala
355 360 365
His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln
370 375 380
<210> 158
<211> 454
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的轻链
<400> 158
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser
210 215 220
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Phe Thr Val Thr Val Pro
225 230 235 240
Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser Asn Met Thr Ile Glu Cys
245 250 255
Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu Ala Ala Leu Ile Val Tyr
260 265 270
Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln Phe Val His Gly Glu Glu
275 280 285
Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg Gln Arg Ala Arg Leu Leu
290 295 300
Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala Leu Gln Ile Thr Asp Val
305 310 315 320
Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Arg Cys Met Ile Ser Tyr Gly Gly
325 330 335
Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val Asn Ala Pro Tyr Asn Lys
340 345 350
Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro Val Thr Ser Glu His Glu
355 360 365
Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys Ala Glu Val Ile Trp Thr
370 375 380
Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys Thr Thr Thr Thr Asn Ser
385 390 395 400
Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn Val Thr Ser Thr Leu Arg Ile Asn
405 410 415
Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr Phe Arg Arg Leu Asp Pro
420 425 430
Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile Pro Glu Leu Pro Leu Ala
435 440 445
His Pro Pro Asn Glu Arg
450
<210> 159
<211> 442
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的轻链
<400> 159
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser
210 215 220
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Val Ile His Val Thr Lys
225 230 235 240
Glu Val Lys Glu Val Ala Thr Leu Ser Cys Gly His Asn Val Ser Val
245 250 255
Glu Glu Leu Ala Gln Thr Arg Ile Tyr Trp Gln Lys Glu Lys Lys Met
260 265 270
Val Leu Thr Met Met Ser Gly Asp Met Asn Ile Trp Pro Glu Tyr Lys
275 280 285
Asn Arg Thr Ile Phe Asp Ile Thr Asn Asn Leu Ser Ile Val Ile Leu
290 295 300
Ala Leu Arg Pro Ser Asp Glu Gly Thr Tyr Glu Cys Val Val Leu Lys
305 310 315 320
Tyr Glu Lys Asp Ala Phe Lys Arg Glu His Leu Ala Glu Val Thr Leu
325 330 335
Ser Val Lys Ala Asp Phe Pro Thr Pro Ser Ile Ser Asp Phe Glu Ile
340 345 350
Pro Thr Ser Asn Ile Arg Arg Ile Ile Cys Ser Thr Ser Gly Gly Phe
355 360 365
Pro Glu Pro His Leu Ser Trp Leu Glu Asn Gly Glu Glu Leu Asn Ala
370 375 380
Ile Asn Thr Thr Val Ser Gln Asp Pro Glu Thr Glu Leu Tyr Ala Val
385 390 395 400
Ser Ser Lys Leu Asp Phe Asn Met Thr Thr Asn His Ser Phe Met Cys
405 410 415
Leu Ile Lys Tyr Gly His Leu Arg Val Asn Gln Thr Phe Asn Trp Asn
420 425 430
Thr Thr Lys Gln Glu His Phe Pro Asp Asn
435 440
<210> 160
<211> 367
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的轻链
<400> 160
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser
210 215 220
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Ser His Arg Tyr
225 230 235 240
Pro Arg Ile Gln Ser Ile Lys Val Gln Phe Thr Glu Tyr Lys Lys Glu
245 250 255
Lys Gly Phe Ile Leu Thr Ser Gln Lys Glu Asp Glu Ile Met Lys Val
260 265 270
Gln Asn Asn Ser Val Ile Ile Asn Cys Asp Gly Phe Tyr Leu Ile Ser
275 280 285
Leu Lys Gly Tyr Phe Ser Gln Glu Val Asn Ile Ser Leu His Tyr Gln
290 295 300
Lys Asp Glu Glu Pro Leu Phe Gln Leu Lys Lys Val Arg Ser Val Asn
305 310 315 320
Ser Leu Met Val Ala Ser Leu Thr Tyr Lys Asp Lys Val Tyr Leu Asn
325 330 335
Val Thr Thr Asp Asn Thr Ser Leu Asp Asp Phe His Val Asn Gly Gly
340 345 350
Glu Leu Ile Leu Ile His Gln Asn Pro Gly Glu Phe Cys Val Leu
355 360 365
<210> 161
<211> 418
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的轻链
<400> 161
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser
210 215 220
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu
225 230 235 240
Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe
245 250 255
Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser
260 265 270
Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu
275 280 285
Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val
290 295 300
Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu
305 310 315 320
Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser
325 330 335
Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala
340 345 350
Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu
355 360 365
His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala
370 375 380
Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly
385 390 395 400
Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg
405 410 415
Ser Glu
<210> 162
<211> 472
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的轻链
<400> 162
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser
210 215 220
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Thr Gln Glu Lys Glu
225 230 235 240
Val Arg Ala Met Val Gly Ser Asp Val Glu Leu Ser Cys Ala Cys Pro
245 250 255
Glu Gly Ser Arg Phe Asp Leu Asn Asp Val Tyr Val Tyr Trp Gln Thr
260 265 270
Ser Glu Ser Lys Thr Val Val Thr Tyr His Ile Pro Gln Asn Ser Ser
275 280 285
Leu Glu Asn Val Asp Ser Arg Tyr Arg Asn Arg Ala Leu Met Ser Pro
290 295 300
Ala Gly Met Leu Arg Gly Asp Phe Ser Leu Arg Leu Phe Asn Val Thr
305 310 315 320
Pro Gln Asp Glu Gln Lys Phe His Cys Leu Val Leu Ser Gln Ser Leu
325 330 335
Gly Phe Gln Glu Val Leu Ser Val Glu Val Thr Leu His Val Ala Ala
340 345 350
Asn Phe Ser Val Pro Val Val Ser Ala Pro His Ser Pro Ser Gln Asp
355 360 365
Glu Leu Thr Phe Thr Cys Thr Ser Ile Asn Gly Tyr Pro Arg Pro Asn
370 375 380
Val Tyr Trp Ile Asn Lys Thr Asp Asn Ser Leu Leu Asp Gln Ala Leu
385 390 395 400
Gln Asn Asp Thr Val Phe Leu Asn Met Arg Gly Leu Tyr Asp Val Val
405 410 415
Ser Val Leu Arg Ile Ala Arg Thr Pro Ser Val Asn Ile Gly Cys Cys
420 425 430
Ile Glu Asn Val Leu Leu Gln Gln Asn Leu Thr Val Gly Ser Gln Thr
435 440 445
Gly Asn Asp Ile Gly Glu Arg Asp Lys Ile Thr Glu Asn Pro Val Ser
450 455 460
Thr Gly Glu Lys Asn Ala Ala Thr
465 470
<210> 163
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的轻链
<400> 163
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser
210 215 220
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Pro Leu Lys Ile Gln
225 230 235 240
Ala Tyr Phe Asn Glu Thr Ala Asp Leu Pro Cys Gln Phe Ala Asn Ser
245 250 255
Gln Asn Gln Ser Leu Ser Glu Leu Val Val Phe Trp Gln Asp Gln Glu
260 265 270
Asn Leu Val Leu Asn Glu Val Tyr Leu Gly Lys Glu Lys Phe Asp Ser
275 280 285
Val His Ser Lys Tyr Met Gly Arg Thr Ser Phe Asp Ser Asp Ser Trp
290 295 300
Thr Leu Arg Leu His Asn Leu Gln Ile Lys Asp Lys Gly Leu Tyr Gln
305 310 315 320
Cys Ile Ile His His Lys Lys Pro Thr Gly Met Ile Arg Ile His Gln
325 330 335
Met Asn Ser Glu Leu Ser Val Leu Ala Asn Phe Ser Gln Pro Glu Ile
340 345 350
Val Pro Ile Ser Asn Ile Thr Glu Asn Val Tyr Ile Asn Leu Thr Cys
355 360 365
Ser Ser Ile His Gly Tyr Pro Glu Pro Lys Lys Met Ser Val Leu Leu
370 375 380
Arg Thr Lys Asn Ser Thr Ile Glu Tyr Asp Gly Val Met Gln Lys Ser
385 390 395 400
Gln Asp Asn Val Thr Glu Leu Tyr Asp Val Ser Ile Ser Leu Ser Val
405 410 415
Ser Phe Pro Asp Val Thr Ser Asn Met Thr Ile Phe Cys Ile Leu Glu
420 425 430
Thr Asp Lys Thr Arg Leu Leu Ser Ser Pro Phe Ser Ile Glu Leu Glu
435 440 445
Asp Pro Gln Pro Pro Pro Asp His
450 455
<210> 164
<211> 381
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的轻链
<400> 164
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
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130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
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Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
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210 215 220
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Pro Gly Trp Phe Leu Asp
225 230 235 240
Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu
245 250 255
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260 265 270
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275 280 285
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290 295 300
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305 310 315 320
His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu
325 330 335
Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu
340 345 350
Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala
355 360 365
His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln
370 375 380
<210> 165
<211> 454
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的轻链
<400> 165
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser
210 215 220
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Phe Thr Val Thr Val Pro
225 230 235 240
Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser Asn Met Thr Ile Glu Cys
245 250 255
Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu Ala Ala Leu Ile Val Tyr
260 265 270
Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln Phe Val His Gly Glu Glu
275 280 285
Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg Gln Arg Ala Arg Leu Leu
290 295 300
Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala Leu Gln Ile Thr Asp Val
305 310 315 320
Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Arg Cys Met Ile Ser Tyr Gly Gly
325 330 335
Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val Asn Ala Pro Tyr Asn Lys
340 345 350
Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro Val Thr Ser Glu His Glu
355 360 365
Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys Ala Glu Val Ile Trp Thr
370 375 380
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385 390 395 400
Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn Val Thr Ser Thr Leu Arg Ile Asn
405 410 415
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420 425 430
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435 440 445
His Pro Pro Asn Glu Arg
450
<210> 166
<211> 442
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的轻链
<400> 166
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser
210 215 220
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Val Ile His Val Thr Lys
225 230 235 240
Glu Val Lys Glu Val Ala Thr Leu Ser Cys Gly His Asn Val Ser Val
245 250 255
Glu Glu Leu Ala Gln Thr Arg Ile Tyr Trp Gln Lys Glu Lys Lys Met
260 265 270
Val Leu Thr Met Met Ser Gly Asp Met Asn Ile Trp Pro Glu Tyr Lys
275 280 285
Asn Arg Thr Ile Phe Asp Ile Thr Asn Asn Leu Ser Ile Val Ile Leu
290 295 300
Ala Leu Arg Pro Ser Asp Glu Gly Thr Tyr Glu Cys Val Val Leu Lys
305 310 315 320
Tyr Glu Lys Asp Ala Phe Lys Arg Glu His Leu Ala Glu Val Thr Leu
325 330 335
Ser Val Lys Ala Asp Phe Pro Thr Pro Ser Ile Ser Asp Phe Glu Ile
340 345 350
Pro Thr Ser Asn Ile Arg Arg Ile Ile Cys Ser Thr Ser Gly Gly Phe
355 360 365
Pro Glu Pro His Leu Ser Trp Leu Glu Asn Gly Glu Glu Leu Asn Ala
370 375 380
Ile Asn Thr Thr Val Ser Gln Asp Pro Glu Thr Glu Leu Tyr Ala Val
385 390 395 400
Ser Ser Lys Leu Asp Phe Asn Met Thr Thr Asn His Ser Phe Met Cys
405 410 415
Leu Ile Lys Tyr Gly His Leu Arg Val Asn Gln Thr Phe Asn Trp Asn
420 425 430
Thr Thr Lys Gln Glu His Phe Pro Asp Asn
435 440
<210> 167
<211> 367
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的轻链
<400> 167
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser
210 215 220
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Ser His Arg Tyr
225 230 235 240
Pro Arg Ile Gln Ser Ile Lys Val Gln Phe Thr Glu Tyr Lys Lys Glu
245 250 255
Lys Gly Phe Ile Leu Thr Ser Gln Lys Glu Asp Glu Ile Met Lys Val
260 265 270
Gln Asn Asn Ser Val Ile Ile Asn Cys Asp Gly Phe Tyr Leu Ile Ser
275 280 285
Leu Lys Gly Tyr Phe Ser Gln Glu Val Asn Ile Ser Leu His Tyr Gln
290 295 300
Lys Asp Glu Glu Pro Leu Phe Gln Leu Lys Lys Val Arg Ser Val Asn
305 310 315 320
Ser Leu Met Val Ala Ser Leu Thr Tyr Lys Asp Lys Val Tyr Leu Asn
325 330 335
Val Thr Thr Asp Asn Thr Ser Leu Asp Asp Phe His Val Asn Gly Gly
340 345 350
Glu Leu Ile Leu Ile His Gln Asn Pro Gly Glu Phe Cys Val Leu
355 360 365
<210> 168
<211> 418
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的轻链
<400> 168
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser
210 215 220
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu
225 230 235 240
Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe
245 250 255
Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser
260 265 270
Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu
275 280 285
Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val
290 295 300
Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu
305 310 315 320
Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser
325 330 335
Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala
340 345 350
Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu
355 360 365
His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala
370 375 380
Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly
385 390 395 400
Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg
405 410 415
Ser Glu
<210> 169
<211> 472
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的轻链
<400> 169
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser
210 215 220
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Thr Gln Glu Lys Glu
225 230 235 240
Val Arg Ala Met Val Gly Ser Asp Val Glu Leu Ser Cys Ala Cys Pro
245 250 255
Glu Gly Ser Arg Phe Asp Leu Asn Asp Val Tyr Val Tyr Trp Gln Thr
260 265 270
Ser Glu Ser Lys Thr Val Val Thr Tyr His Ile Pro Gln Asn Ser Ser
275 280 285
Leu Glu Asn Val Asp Ser Arg Tyr Arg Asn Arg Ala Leu Met Ser Pro
290 295 300
Ala Gly Met Leu Arg Gly Asp Phe Ser Leu Arg Leu Phe Asn Val Thr
305 310 315 320
Pro Gln Asp Glu Gln Lys Phe His Cys Leu Val Leu Ser Gln Ser Leu
325 330 335
Gly Phe Gln Glu Val Leu Ser Val Glu Val Thr Leu His Val Ala Ala
340 345 350
Asn Phe Ser Val Pro Val Val Ser Ala Pro His Ser Pro Ser Gln Asp
355 360 365
Glu Leu Thr Phe Thr Cys Thr Ser Ile Asn Gly Tyr Pro Arg Pro Asn
370 375 380
Val Tyr Trp Ile Asn Lys Thr Asp Asn Ser Leu Leu Asp Gln Ala Leu
385 390 395 400
Gln Asn Asp Thr Val Phe Leu Asn Met Arg Gly Leu Tyr Asp Val Val
405 410 415
Ser Val Leu Arg Ile Ala Arg Thr Pro Ser Val Asn Ile Gly Cys Cys
420 425 430
Ile Glu Asn Val Leu Leu Gln Gln Asn Leu Thr Val Gly Ser Gln Thr
435 440 445
Gly Asn Asp Ile Gly Glu Arg Asp Lys Ile Thr Glu Asn Pro Val Ser
450 455 460
Thr Gly Glu Lys Asn Ala Ala Thr
465 470
<210> 170
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的轻链
<400> 170
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser
210 215 220
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Pro Leu Lys Ile Gln
225 230 235 240
Ala Tyr Phe Asn Glu Thr Ala Asp Leu Pro Cys Gln Phe Ala Asn Ser
245 250 255
Gln Asn Gln Ser Leu Ser Glu Leu Val Val Phe Trp Gln Asp Gln Glu
260 265 270
Asn Leu Val Leu Asn Glu Val Tyr Leu Gly Lys Glu Lys Phe Asp Ser
275 280 285
Val His Ser Lys Tyr Met Gly Arg Thr Ser Phe Asp Ser Asp Ser Trp
290 295 300
Thr Leu Arg Leu His Asn Leu Gln Ile Lys Asp Lys Gly Leu Tyr Gln
305 310 315 320
Cys Ile Ile His His Lys Lys Pro Thr Gly Met Ile Arg Ile His Gln
325 330 335
Met Asn Ser Glu Leu Ser Val Leu Ala Asn Phe Ser Gln Pro Glu Ile
340 345 350
Val Pro Ile Ser Asn Ile Thr Glu Asn Val Tyr Ile Asn Leu Thr Cys
355 360 365
Ser Ser Ile His Gly Tyr Pro Glu Pro Lys Lys Met Ser Val Leu Leu
370 375 380
Arg Thr Lys Asn Ser Thr Ile Glu Tyr Asp Gly Val Met Gln Lys Ser
385 390 395 400
Gln Asp Asn Val Thr Glu Leu Tyr Asp Val Ser Ile Ser Leu Ser Val
405 410 415
Ser Phe Pro Asp Val Thr Ser Asn Met Thr Ile Phe Cys Ile Leu Glu
420 425 430
Thr Asp Lys Thr Arg Leu Leu Ser Ser Pro Phe Ser Ile Glu Leu Glu
435 440 445
Asp Pro Gln Pro Pro Pro Asp His
450 455
<210> 171
<211> 381
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的轻链
<400> 171
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser
210 215 220
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Pro Gly Trp Phe Leu Asp
225 230 235 240
Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu
245 250 255
Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn
260 265 270
Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn
275 280 285
Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly
290 295 300
Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe
305 310 315 320
His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu
325 330 335
Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu
340 345 350
Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala
355 360 365
His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln
370 375 380
<210> 172
<211> 454
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的轻链
<400> 172
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser
210 215 220
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Phe Thr Val Thr Val Pro
225 230 235 240
Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser Asn Met Thr Ile Glu Cys
245 250 255
Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu Ala Ala Leu Ile Val Tyr
260 265 270
Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln Phe Val His Gly Glu Glu
275 280 285
Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg Gln Arg Ala Arg Leu Leu
290 295 300
Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala Leu Gln Ile Thr Asp Val
305 310 315 320
Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Arg Cys Met Ile Ser Tyr Gly Gly
325 330 335
Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val Asn Ala Pro Tyr Asn Lys
340 345 350
Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro Val Thr Ser Glu His Glu
355 360 365
Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys Ala Glu Val Ile Trp Thr
370 375 380
Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys Thr Thr Thr Thr Asn Ser
385 390 395 400
Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn Val Thr Ser Thr Leu Arg Ile Asn
405 410 415
Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr Phe Arg Arg Leu Asp Pro
420 425 430
Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile Pro Glu Leu Pro Leu Ala
435 440 445
His Pro Pro Asn Glu Arg
450
<210> 173
<211> 442
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的轻链
<400> 173
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser
210 215 220
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Val Ile His Val Thr Lys
225 230 235 240
Glu Val Lys Glu Val Ala Thr Leu Ser Cys Gly His Asn Val Ser Val
245 250 255
Glu Glu Leu Ala Gln Thr Arg Ile Tyr Trp Gln Lys Glu Lys Lys Met
260 265 270
Val Leu Thr Met Met Ser Gly Asp Met Asn Ile Trp Pro Glu Tyr Lys
275 280 285
Asn Arg Thr Ile Phe Asp Ile Thr Asn Asn Leu Ser Ile Val Ile Leu
290 295 300
Ala Leu Arg Pro Ser Asp Glu Gly Thr Tyr Glu Cys Val Val Leu Lys
305 310 315 320
Tyr Glu Lys Asp Ala Phe Lys Arg Glu His Leu Ala Glu Val Thr Leu
325 330 335
Ser Val Lys Ala Asp Phe Pro Thr Pro Ser Ile Ser Asp Phe Glu Ile
340 345 350
Pro Thr Ser Asn Ile Arg Arg Ile Ile Cys Ser Thr Ser Gly Gly Phe
355 360 365
Pro Glu Pro His Leu Ser Trp Leu Glu Asn Gly Glu Glu Leu Asn Ala
370 375 380
Ile Asn Thr Thr Val Ser Gln Asp Pro Glu Thr Glu Leu Tyr Ala Val
385 390 395 400
Ser Ser Lys Leu Asp Phe Asn Met Thr Thr Asn His Ser Phe Met Cys
405 410 415
Leu Ile Lys Tyr Gly His Leu Arg Val Asn Gln Thr Phe Asn Trp Asn
420 425 430
Thr Thr Lys Gln Glu His Phe Pro Asp Asn
435 440
<210> 174
<211> 367
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的轻链
<400> 174
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser
210 215 220
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Ser His Arg Tyr
225 230 235 240
Pro Arg Ile Gln Ser Ile Lys Val Gln Phe Thr Glu Tyr Lys Lys Glu
245 250 255
Lys Gly Phe Ile Leu Thr Ser Gln Lys Glu Asp Glu Ile Met Lys Val
260 265 270
Gln Asn Asn Ser Val Ile Ile Asn Cys Asp Gly Phe Tyr Leu Ile Ser
275 280 285
Leu Lys Gly Tyr Phe Ser Gln Glu Val Asn Ile Ser Leu His Tyr Gln
290 295 300
Lys Asp Glu Glu Pro Leu Phe Gln Leu Lys Lys Val Arg Ser Val Asn
305 310 315 320
Ser Leu Met Val Ala Ser Leu Thr Tyr Lys Asp Lys Val Tyr Leu Asn
325 330 335
Val Thr Thr Asp Asn Thr Ser Leu Asp Asp Phe His Val Asn Gly Gly
340 345 350
Glu Leu Ile Leu Ile His Gln Asn Pro Gly Glu Phe Cys Val Leu
355 360 365
<210> 175
<211> 418
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的轻链
<400> 175
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser
210 215 220
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Glu Gly Pro Glu Leu
225 230 235 240
Ser Pro Asp Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe
245 250 255
Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser
260 265 270
Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu
275 280 285
Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val
290 295 300
Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu
305 310 315 320
Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser
325 330 335
Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala
340 345 350
Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu
355 360 365
His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala
370 375 380
Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly
385 390 395 400
Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg
405 410 415
Ser Glu
<210> 176
<211> 472
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的轻链
<400> 176
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser
210 215 220
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Thr Gln Glu Lys Glu
225 230 235 240
Val Arg Ala Met Val Gly Ser Asp Val Glu Leu Ser Cys Ala Cys Pro
245 250 255
Glu Gly Ser Arg Phe Asp Leu Asn Asp Val Tyr Val Tyr Trp Gln Thr
260 265 270
Ser Glu Ser Lys Thr Val Val Thr Tyr His Ile Pro Gln Asn Ser Ser
275 280 285
Leu Glu Asn Val Asp Ser Arg Tyr Arg Asn Arg Ala Leu Met Ser Pro
290 295 300
Ala Gly Met Leu Arg Gly Asp Phe Ser Leu Arg Leu Phe Asn Val Thr
305 310 315 320
Pro Gln Asp Glu Gln Lys Phe His Cys Leu Val Leu Ser Gln Ser Leu
325 330 335
Gly Phe Gln Glu Val Leu Ser Val Glu Val Thr Leu His Val Ala Ala
340 345 350
Asn Phe Ser Val Pro Val Val Ser Ala Pro His Ser Pro Ser Gln Asp
355 360 365
Glu Leu Thr Phe Thr Cys Thr Ser Ile Asn Gly Tyr Pro Arg Pro Asn
370 375 380
Val Tyr Trp Ile Asn Lys Thr Asp Asn Ser Leu Leu Asp Gln Ala Leu
385 390 395 400
Gln Asn Asp Thr Val Phe Leu Asn Met Arg Gly Leu Tyr Asp Val Val
405 410 415
Ser Val Leu Arg Ile Ala Arg Thr Pro Ser Val Asn Ile Gly Cys Cys
420 425 430
Ile Glu Asn Val Leu Leu Gln Gln Asn Leu Thr Val Gly Ser Gln Thr
435 440 445
Gly Asn Asp Ile Gly Glu Arg Asp Lys Ile Thr Glu Asn Pro Val Ser
450 455 460
Thr Gly Glu Lys Asn Ala Ala Thr
465 470
<210> 177
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的轻链
<400> 177
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser
210 215 220
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Pro Leu Lys Ile Gln
225 230 235 240
Ala Tyr Phe Asn Glu Thr Ala Asp Leu Pro Cys Gln Phe Ala Asn Ser
245 250 255
Gln Asn Gln Ser Leu Ser Glu Leu Val Val Phe Trp Gln Asp Gln Glu
260 265 270
Asn Leu Val Leu Asn Glu Val Tyr Leu Gly Lys Glu Lys Phe Asp Ser
275 280 285
Val His Ser Lys Tyr Met Gly Arg Thr Ser Phe Asp Ser Asp Ser Trp
290 295 300
Thr Leu Arg Leu His Asn Leu Gln Ile Lys Asp Lys Gly Leu Tyr Gln
305 310 315 320
Cys Ile Ile His His Lys Lys Pro Thr Gly Met Ile Arg Ile His Gln
325 330 335
Met Asn Ser Glu Leu Ser Val Leu Ala Asn Phe Ser Gln Pro Glu Ile
340 345 350
Val Pro Ile Ser Asn Ile Thr Glu Asn Val Tyr Ile Asn Leu Thr Cys
355 360 365
Ser Ser Ile His Gly Tyr Pro Glu Pro Lys Lys Met Ser Val Leu Leu
370 375 380
Arg Thr Lys Asn Ser Thr Ile Glu Tyr Asp Gly Val Met Gln Lys Ser
385 390 395 400
Gln Asp Asn Val Thr Glu Leu Tyr Asp Val Ser Ile Ser Leu Ser Val
405 410 415
Ser Phe Pro Asp Val Thr Ser Asn Met Thr Ile Phe Cys Ile Leu Glu
420 425 430
Thr Asp Lys Thr Arg Leu Leu Ser Ser Pro Phe Ser Ile Glu Leu Glu
435 440 445
Asp Pro Gln Pro Pro Pro Asp His
450 455
<210> 178
<211> 624
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 178
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Val His Trp Val Lys Gln Arg Pro Ile Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asp Pro Ser Asp Ser Asp Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Ser Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly Gly Thr Gly Thr Met Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val
115 120 125
Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Ser Val Thr Val Thr
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Ser Val His Thr Phe Pro Ala Leu
165 170 175
Leu Gln Ser Gly Leu Tyr Thr Met Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Thr Trp Pro Ser Gln Thr Val Thr Cys Ser Val Ala His Pro Ala
195 200 205
Ser Ser Thr Thr Val Asp Lys Lys Leu Glu Pro Ser Gly Pro Ile Ser
210 215 220
Thr Ile Asn Pro Cys Pro Pro Cys Lys Glu Cys His Lys Cys Pro Ala
225 230 235 240
Pro Asn Leu Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Asn Ile
245 250 255
Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val
260 265 270
Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val
275 280 285
Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp
290 295 300
Tyr Asn Ser Thr Ile Arg Val Val Ser Thr Leu Pro Ile Gln His Gln
305 310 315 320
Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp
325 330 335
Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ile Lys Gly Leu Val
340 345 350
Arg Ala Pro Gln Val Tyr Ile Leu Pro Pro Pro Ala Glu Gln Leu Ser
355 360 365
Arg Lys Asp Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Val Gly Phe Asn Pro Gly
370 375 380
Asp Ile Ser Val Glu Trp Thr Ser Asn Gly His Thr Glu Glu Asn Tyr
385 390 395 400
Lys Asp Thr Ala Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Ile Tyr
405 410 415
Ser Lys Leu Asn Met Lys Thr Ser Lys Trp Glu Lys Thr Asp Ser Phe
420 425 430
Ser Cys Asn Val Arg His Glu Gly Leu Lys Asn Tyr Tyr Leu Lys Lys
435 440 445
Thr Ile Ser Arg Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
450 455 460
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Gln Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp
465 470 475 480
Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro
485 490 495
Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser
500 505 510
Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser
515 520 525
Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser
530 535 540
Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly
545 550 555 560
Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly
565 570 575
Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys
580 585 590
Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val
595 600 605
Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln
610 615 620
<210> 179
<211> 615
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 179
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1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Val His Trp Val Lys Gln Arg Pro Ile Gln Gly Leu Glu Trp Ile
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Gly Asn Ile Asp Pro Ser Asp Ser Asp Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe
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Lys Asp Lys Ala Ser Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
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Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
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610 615
<210> 180
<211> 615
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 180
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
<400> 181
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 修饰的抗体的重链
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<223> 修饰的抗体的重链
<400> 183
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<220>
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<400> 185
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Gln Gly His Val Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly Gly Thr Gly Thr Leu Ala Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly
435 440 445
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Gln
450 455 460
Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp
465 470 475 480
Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp
485 490 495
Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val
500 505 510
Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala
515 520 525
Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg
530 535 540
Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg
545 550 555 560
Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu
565 570 575
Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val
580 585 590
Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro
595 600 605
Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln
610 615
Claims (24)
1.双功能抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段，包含：
a)含有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重链可变结构域，以及
b)含有LCDR1、LCDR2和LCDR3的轻链可变结构域，
其中，
-HCDR1包含SEQ ID NO：14所示的氨基酸序列或由其组成，
-HCDR2包含SEQ ID NO：15或SEQ ID NO：16所示的氨基酸序列或由其组成，
-HCDR3包含SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19或SEQ ID NO：20所示的氨基酸序列或由其组成，
-LCDR1包含SEQ ID NO：21所示的氨基酸序列或由其组成，
-LCDR2包含SEQ ID NO：22所示的氨基酸序列或由其组成，
-LCDR3包含SEQ ID NO：23所示的氨基酸序列或由其组成，
所述双功能抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段包含重链恒定结构域或其片段，所述重链恒定结构域或其片段与免疫治疗剂连接，所述免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、它们的免疫治疗剂变体及免疫治疗剂片段，优选它们的胞外域。
2.根据权利要求1所述的双功能抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段，其中，所述双功能抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段为抗SIRPa拮抗剂抗体，并且抑制人CD47与人SIRPa的结合。
3.根据权利要求1或2所述的双功能抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段，其中，所述双功能抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段不特异性结合人SIRPg，不抑制人CD47与人SIRPg的结合，不抑制人T细胞的增殖，优选增加人T细胞的增殖。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的双功能抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段，其中，所述双功能抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段不特异性结合人SIRPg，不抑制人CD47与人SIRPg的结合，不抑制人T细胞的活化，优选增加人T细胞的活化。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的双功能抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段，其中，所述双功能抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段包含：
-重链可变结构域，其包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29和SEQ ID NO：30，和
-轻链可变结构域，其包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32和SEQ ID NO：33，
特别地，所述双功能抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段包含：
-轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO：33所示的氨基酸序列或由其组成，和
-重链可变结构域，其包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29和SEQ ID NO：30，特别是SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：30，更特别是SEQ ID NO：30。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的双功能抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段，其中，所述双功能抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段包含：
-重链可变结构域，其包含SEQ ID NO：24所示的氨基酸序列或由其组成，和
-轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO：31所示的氨基酸序列或由其组成，
或
-重链可变结构域，其包含SEQ ID NO：25所示的氨基酸序列或由其组成，和
-轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO：32所示的氨基酸序列或由其组成，
或
-重链可变结构域，其包含SEQ ID NO：25所示的氨基酸序列或由其组成，和
-轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO：33所示的氨基酸序列或由其组成，
或
-重链可变结构域，其包含SEQ ID NO：26所示的氨基酸序列或由其组成，和
-轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO：32所示的氨基酸序列或由其组成，
或
-重链可变结构域，其包含SEQ ID NO：26所示的氨基酸序列或由其组成，和
-轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO：33所示的氨基酸序列或由其组成，
或
-重链可变结构域，其包含SEQ ID NO：27所示的氨基酸序列或由其组成，和
-轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO：32所示的氨基酸序列或由其组成，
或
-重链可变结构域，其包含SEQ ID NO：27所示的氨基酸序列或由其组成，和
-轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO：33所示的氨基酸序列或由其组成，
或
-重链可变结构域，其包含SEQ ID NO：28所示的氨基酸序列或由其组成，和
-轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO：32所示的氨基酸序列或由其组成，
或
-重链可变结构域，其包含SEQ ID NO：28所示的氨基酸序列或由其组成，和
-轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO：33所示的氨基酸序列或由其组成，
或
-重链可变结构域，其包含SEQ ID NO：29所示的氨基酸序列或由其组成，和
-轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO：32所示的氨基酸序列或由其组成，
或
-重链可变结构域，其包含SEQ ID NO：29所示的氨基酸序列或由其组成，和
-轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO：33所示的氨基酸序列或由其组成，
或
-重链可变结构域，其包含SEQ ID NO：30所示的氨基酸序列或由其组成，和
-轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO：32所示的氨基酸序列或由其组成，
或
-重链可变结构域，其包含SEQ ID NO：30所示的氨基酸序列或由其组成，和
-轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO：33所示的氨基酸序列或由其组成。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的双功能抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段，其中，所述免疫治疗剂是蛋白质，所述蛋白质包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：SEQID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85和SEQ ID NO：88。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的双功能抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段，其中，所述重链通过接头序列与免疫治疗剂连接，所述接头序列优选选自SEQ ID NO：89、SEQ IDNO：90、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：92、GGG、GGS和SEQ ID NO：93。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的双功能抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段，其中，所述免疫治疗剂与所述抗体或其抗原结合片段的重链恒定结构域或其片段的C末端连接。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的双功能抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段，其中，所述双功能抗体是人源化单克隆抗体，特别地，抗体轻链恒定结构域衍生自人κ轻链恒定结构域，更特别地，轻链恒定结构域由SEQ ID NO：35的序列组成，和/或抗体重链恒定结构域衍生自人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4重链恒定结构域，特别衍生自人IgG4重链恒定结构域，更特别地，抗体重链恒定结构域由SEQ ID NO：34的序列组成。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的双功能抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段，其中，所述双功能抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段包含：
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：56或由氨基酸序列SEQ ID NO：56组成，所述重链在其C末端与蛋白质连接，所述蛋白质包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85，以及SEQ ID NO：88，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：57或由氨基酸序列SEQ ID NO：57组成，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：36或由氨基酸序列SEQ ID NO：36组成，所述重链在其C末端与蛋白质连接，所述蛋白质包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85，以及SEQ ID NO：88，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：43或由氨基酸序列SEQ ID NO：43组成，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：37或由氨基酸序列SEQ ID NO：37组成，所述重链在其C末端与蛋白质连接，所述蛋白质包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85，以及SEQ ID NO：88，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：44或由氨基酸序列SEQ ID NO：44组成，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：37或由氨基酸序列SEQ ID NO：37组成，所述重链在其C末端与蛋白质连接，所述蛋白质包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85，以及SEQ ID NO：88，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：45或由氨基酸序列SEQ ID NO：45组成，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：38或由氨基酸序列SEQ ID NO：38组成，所述重链在其C末端与蛋白质连接，所述蛋白质包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85，以及SEQ ID NO：88，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：44或由氨基酸序列SEQ ID NO：44组成，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：38或由氨基酸序列SEQ ID NO：38组成，所述重链在其C末端与蛋白质连接，所述蛋白质包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85，以及SEQ ID NO：88，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：45或由氨基酸序列SEQ ID NO：45组成，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：39或由氨基酸序列SEQ ID NO：39组成，所述重链在其C末端与蛋白质连接，所述蛋白质包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85，以及SEQ ID NO：88，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：44或由氨基酸序列SEQ ID NO：44组成，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：39或由氨基酸序列SEQ ID NO：39组成，所述重链在其C末端与蛋白质连接，所述蛋白质包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85，以及SEQ ID NO：88，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：45或由氨基酸序列SEQ ID NO：45组成，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：40或由氨基酸序列SEQ ID NO：40组成，所述重链在其C末端与蛋白质连接，所述蛋白质包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85，以及SEQ ID NO：88，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：44或由氨基酸序列SEQ ID NO：44组成，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：40或由氨基酸序列SEQ ID NO：40组成，所述重链在其C末端与蛋白质连接，所述蛋白质包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85，以及SEQ ID NO：88，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：45或由氨基酸序列SEQ ID NO：45组成，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：41或由氨基酸序列SEQ ID NO：41组成，所述重链在其C末端与蛋白质连接，所述蛋白质包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85，以及SEQ ID NO：88，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：44或由氨基酸序列SEQ ID NO：44组成，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：41或由氨基酸序列SEQ ID NO：41组成，所述重链在其C末端与蛋白质连接，所述蛋白质包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85，以及SEQ ID NO：88，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：45或由氨基酸序列SEQ ID NO：45组成，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：42或由氨基酸序列SEQ ID NO：42组成，所述重链在其C末端与蛋白质连接，所述蛋白质包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85，以及SEQ ID NO：88，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：44或由氨基酸序列SEQ ID NO：44组成，
或
-重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO：42或由氨基酸序列SEQ ID NO：42组成，所述重链在其C末端与蛋白质连接，所述蛋白质包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85，以及SEQ ID NO：88，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：45或由氨基酸序列SEQ ID NO：45组成。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的双功能抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段，其中，所述双功能抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段包含：
-重链，其包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：98和SEQ ID NO：178，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：57或由氨基酸序列SEQ ID NO：57组成，
或
-重链，其包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：102、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：105和SEQ ID NO：179，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：43或由氨基酸序列SEQ ID NO：43组成，
或
-重链，其包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：110、SEQ ID NO：112和SEQ ID NO：180，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：44或由氨基酸序列SEQ ID NO：44组成，
或
-重链，其包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：110、SEQ ID NO：112和SEQ ID NO：180，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：45或由氨基酸序列SEQ ID NO：45组成，
或
-重链，其包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ ID NO：115、SEQ ID NO：116、SEQ ID NO：117、SEQ ID NO：119和SEQ ID NO：181，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：44或由氨基酸序列SEQ ID NO：44组成，
或
-重链，其包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ ID NO：115、SEQ ID NO：116、SEQ ID NO：117、SEQ ID NO：119和SEQ ID NO：181，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：45或由氨基酸序列SEQ ID NO：45组成，
或
-重链，其包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ ID NO：122、SEQ ID NO：123、SEQ ID NO：124、SEQ ID NO：126和SEQ ID NO：182，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：44或由氨基酸序列SEQ ID NO：44组成，
或
-重链，其包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ ID NO：122、SEQ ID NO：123、SEQ ID NO：124、SEQ ID NO：126和SEQ ID NO：182，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：45或由氨基酸序列SEQ ID NO：45组成，
或
-重链，其包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ ID NO：129、SEQ ID NO：130、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133和SEQ ID NO：183，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：44或由氨基酸序列SEQ ID NO：44组成，
或
-重链，其包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ ID NO：129、SEQ ID NO：130、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133和SEQ ID NO：183，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：45或由氨基酸序列SEQ ID NO：45组成，
或
-重链，其包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ ID NO：136、SEQ ID NO：137、SEQ ID NO：138、SEQ ID NO：140和SEQ ID NO：184，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：44或由氨基酸序列SEQ ID NO：44组成，
或
-重链，其包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ ID NO：136、SEQ ID NO：137、SEQ ID NO：138、SEQ ID NO：140和SEQ ID NO：184，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：45或由氨基酸序列SEQ ID NO：45组成，
或
-重链，其包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ ID NO：143、SEQ ID NO：144、SEQ ID NO：145、SEQ ID NO：147和SEQ ID NO：185，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：44或由氨基酸序列SEQ ID NO：44组成，
或
-重链，其包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：SEQ ID NO：143、SEQ ID NO：144、SEQ ID NO：145、SEQ ID NO：147和SEQ ID NO：185，和
-轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO：45或由氨基酸序列SEQ ID NO：45组成。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的双功能抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段，其中，选自PD1、PDL1、CD80和4-1BBL变体的免疫治疗剂变体与选自以下的一种氨基酸序列具有至少70％的同一性：SEQ ID No.81、SEQ ID No.82、SEQ ID No.83、SEQ ID No.85和SEQID No.88。
14.根据权利要求1至12中任一项所述的双功能抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段，其中，所述免疫治疗剂片段由50至300个氨基酸残基组成。
15.权利要求1至14中任一项所述的双功能抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段，或者双功能抗人SIRPa拮抗剂抗体或其抗原结合片段作为药物的应用，
所述双功能抗人SIRPa拮抗剂抗体或其抗原结合片段包含与免疫治疗剂连接的重链恒定结构域或其片段，所述免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、它们的免疫治疗剂变体及免疫治疗剂片段，优选它们的胞外域，所述双功能抗人SIRPa拮抗剂抗体或其抗原结合片段抑制人CD47与人SIRPa的结合，不与人SIRPg特异性结合，特别是不抑制人T细胞的增殖，优选增加人T细胞的增殖，和/或不抑制人CD47与人SIRPg的结合，和/或增加人PBMC和/或T细胞的TNFa分泌，和/或增加人PBMC的IFNg分泌，和/或增加人巨噬细胞的MIP1a分泌，和/或增加人T细胞的活化。
16.根据权利要求15所述的应用，其中，权利要求1至14中任一项所述的双功能抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段，或者双功能抗人SIRPa拮抗剂抗体或其抗原结合片段用于预防或治疗疾病或用于疫苗接种，
所述双功能抗人SIRPa拮抗剂抗体或其抗原结合片段包含与免疫治疗剂连接的重链恒定结构域或其片段，所述免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、它们的免疫治疗剂变体及免疫治疗剂片段，优选它们的胞外域，所述双功能抗人SIRPa拮抗剂抗体或其抗原结合片段抑制人CD47与人SIRPa的结合，不与人SIRPg特异性结合，特别是不抑制人T细胞的增殖，优选增加人T细胞的增殖，和/或不抑制人CD47与人SIRPg的结合，和/或增加人PBMC和/或T细胞的TNFa分泌，和/或增加人PBMC的IFNg分泌，和/或增加人巨噬细胞的MIP1a分泌，和/或增加人T细胞的活化，
所述疾病选自：癌症，特别是炎性癌症和具有浸润性骨髓细胞的癌症，特别是具有浸润性MDSC和/或TAM细胞的癌症，传染病、慢性炎症性疾病、自身免疫性疾病、神经系统疾病、脑损伤、神经损伤、红细胞增多症、血色素沉着病、创伤、败血性休克、慢性传染病，尤其是假单胞菌和CMV、纤维化、动脉粥样硬化、肥胖、II型糖尿病和移植功能障碍。
17.根据权利要求16所述的应用，其中，权利要求1至14中任一项所述的双功能抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段，或者双功能抗人SIRPa拮抗剂抗体或其抗原结合片段用于预防或治疗癌症，
所述双功能抗人SIRPa拮抗剂抗体或其抗原结合片段包含与免疫治疗剂连接的重链恒定结构域或其片段，所述免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、它们的免疫治疗剂变体及免疫治疗剂片段，优选它们的胞外域，所述双功能抗人SIRPa拮抗剂抗体或其抗原结合片段抑制人CD47与人SIRPa的结合，不与人SIRPg特异性结合，特别是不抑制人T细胞的增殖，优选增加人T细胞的增殖，和/或不抑制人CD47与人SIRPg的结合，和/或增加人PBMC和/或T细胞的TNFa分泌，和/或增加人PBMC的IFNg分泌，和/或增加人巨噬细胞的MIP1a分泌，和/或增加人T细胞的活化，
所述癌症特别是炎性癌症和具有浸润性骨髓细胞的癌症，特别是具有浸润性MDSC和/或TAM细胞的癌症。
18.根据权利要求17所述的应用，其中，权利要求1至14中任一项所述的双功能抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段，或者双功能抗人SIRPa拮抗剂抗体或其抗原结合片段施用于出现SIRPa阳性肿瘤的患者，
所述双功能抗人SIRPa拮抗剂抗体或其抗原结合片段包含与免疫治疗剂连接的重链恒定结构域或其片段，所述免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、它们的免疫治疗剂变体及免疫治疗剂片段，优选它们的胞外域，所述双功能抗人SIRPa拮抗剂抗体或其抗原结合片段抑制人CD47与人SIRPa的结合，不与人SIRPg特异性结合，特别是不抑制人T细胞的增殖，优选增加人T细胞的增殖，和/或不抑制人CD47与人SIRPg的结合，和/或增加人PBMC和/或T细胞的TNFa分泌，和/或增加人PBMC的IFNg分泌，和/或增加人巨噬细胞的MIP1a分泌，和/或增加人T细胞的活化。
19.单个核酸分子或单个核酸分子的组，其编码权利要求1至14中任一项所述的双功能抗体或其抗原结合片段。
20.载体，其包含权利要求19所述的核酸分子。
21.单个宿主细胞，其包含权利要求19所述的核酸分子或单个核酸分子的组和/或权利要求20所述的载体。
22.药物组合物，其包含至少一种权利要求1至14中任一项所述的双功能抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段；和/或双功能抗人SIRPa拮抗剂抗体或其抗原结合片段；和/或权利要求19所述的单个核酸分子或单个核酸分子的组；和/或权利要求20所述的载体；和/或权利要求21所述的细胞；和药学上可接受的载体，
所述双功能抗人SIRPa拮抗剂抗体或其抗原结合片段包含与免疫治疗剂连接的重链恒定结构域或其片段，所述免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、它们的免疫治疗剂变体及免疫治疗剂片段，优选它们的胞外域，所述双功能抗人SIRPa拮抗剂抗体或其抗原结合片段抑制人CD47与人SIRPa的结合，不与人SIRPg特异性结合，特别是不抑制人T细胞的增殖，优选增加人T细胞的增殖，和/或不抑制人CD47与人SIRPg的结合，和/或增加人PBMC和/或T细胞的TNFa分泌，和/或增加人PBMC的IFNg分泌，和/或增加人巨噬细胞的MIP1a分泌，和/或增加人T细胞的活化。
23.组合产品，其包含至少一种权利要求1至14中任一项所述的双功能抗人SIRPa抗体或其抗原结合片段；和/或双功能抗人SIRPa拮抗剂抗体或其抗原结合片段；和/或权利要求19所述的单个核酸分子或单个核酸分子的组；和/或权利要求20所述的载体；和/或权利要求21所述的细胞；和第二治疗剂，
所述双功能抗人SIRPa拮抗剂抗体或其抗原结合片段包含与免疫治疗剂连接的重链恒定结构域或其片段，所述免疫治疗剂包含选自以下的蛋白质或由选自以下的蛋白质组成：人PD1、人PDL1、人CD80、人4-1BBL、它们的免疫治疗剂变体及免疫治疗剂片段，优选它们的胞外域，所述双功能抗人SIRPa拮抗剂抗体或其抗原结合片段抑制人CD47与人SIRPa的结合，不与人SIRPg特异性结合，特别是不抑制人T细胞的增殖，优选增加人T细胞的增殖，和/或不抑制人CD47与人SIRPg的结合，和/或增加人PBMC和/或T细胞的TNFa分泌，和/或增加人PBMC的IFNg分泌，和/或增加人巨噬细胞的MIP1a分泌，和/或增加人T细胞的活化，
所述第二治疗剂选自：化学治疗剂、放射治疗剂、细胞治疗剂、免疫治疗剂、抗生素、益生菌、治疗性疫苗，免疫检查点阻断剂或激活剂，特别是适应性免疫细胞，尤其是T淋巴细胞和B淋巴细胞的免疫检查点阻断剂或激活剂，和抗体-药物偶联物。
24.根据权利要求23所述的组合产品，其中，所述双功能抗人SIRPa拮抗剂抗体或其抗原结合片段或所述单个核酸分子或单个核酸分子的组或所述载体或所述细胞和所述第二治疗剂被配制用于单独的、连续的或组合的治疗，特别是用于组合或连续使用。
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