CN111455012B - 一种由二氧化碳制备聚羟基脂肪酸酯的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种由二氧化碳制备聚羟基脂肪酸酯的方法，所述方法包括以下步骤：将微生物菌种接种到培养基上进行有氧发酵，得到活化菌种；将所得活化菌种加入到发酵液中，通入含有二氧化碳的混合气体，进行加压发酵，得到聚羟基脂肪酸酯。本发明利用发酵菌种的特性，以二氧化碳为无机碳源，在加压条件下发酵生产聚羟基脂肪酸酯，极大提高了聚羟基脂肪酸酯的生产效率，有利于工业化大规模生产；所述发酵反应原料来源广泛，成本降低，可起到生物固碳的作用，无反应残渣，绿色环保。

Description

一种由二氧化碳制备聚羟基脂肪酸酯的方法
技术领域
本发明属于微生物发酵技术领域，涉及一种由二氧化碳制备聚羟基脂肪酸酯的方法。
背景技术
聚羟基脂肪酸酯(PHA)是原核微生物在碳、氮营养失衡的情况下，作为碳源和能源贮存而合成的一类热塑性聚酯，具有类似于合成塑料的物化特性及合成塑料所不具备的生物可降解性、生物相容性、气体相隔性等性能，在可生物降解的包装材料、缓释材料、电学材料以及医疗材料等方面有广阔的应用前景。
目前，聚羟基脂肪酸酯主要以有机碳源为原料生产，主要包括纤维素、蔗糖、葡萄糖等，价格昂贵，寻找廉价原料发酵是聚羟基脂肪酸酯大规模生产的关键。CN 106189130A公开了一种微生物合成聚羟基脂肪酸酯制备复合包装膜的方法，将枯草芽孢杆菌和真养产碱杆菌接种到培养基中培养得活化菌种液，将活化菌种液加入到蔗糖废水中进行发酵培养，并向液体底部交替曝气二氧化碳、氧气、氢气，加入碳源后继续交替曝气，曝气结束后离心分离得菌体，干燥后加入氯仿浸泡弃去细胞碎片，将得到提取液加入乙醇溶液析出沉淀并干燥，得聚羟基脂肪酸酯，将其和聚乳酸混合，并加入增塑剂、增强剂等助剂，高速混合后挤出造粒，最后将颗粒树脂吹膜，即可得到包装膜；该方法中聚羟基脂肪酸酯的合成仍然是以蔗糖等有机物作为碳源，生产成本较高。
CN 103571894A公开了一种以纤维素为碳源发酵制备中长链聚羟基脂肪酸酯的方法，首先构建包含聚羟基脂肪酸酯合成酶基因的重组工程菌，在含有纤维素的培养基中发酵，发酵产物过滤菌体后，使用不同溶剂分别萃取、重结晶，得到中长链聚羟基脂肪酸酯；该方法同样是以有机碳源为原料进行发酵，仍然存在原料成本高、产率低的问题。
因此，对于聚羟基脂肪酸酯的微生物合成，还需要寻求低成本碳源，同时改进发酵的工艺条件，提高生产效率，使之适合工业化生产应用。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于提供一种由二氧化碳制备聚羟基脂肪酸酯的方法，所述方法利用发酵菌种的特性，以二氧化碳为无机碳源，在加压条件下发酵生产聚羟基脂肪酸酯，有效提高产生聚羟基脂肪酸酯的效率；将二氧化碳转化为聚羟基脂肪酸酯同时起到生物固碳的作用，原料来源广泛且稳定，可以降低可降解塑料聚羟基脂肪酸酯的制备成本。
为达此目的，本发明采用以下技术方案：
本发明提供了一种由二氧化碳制备聚羟基脂肪酸酯的方法，所述方法包括以下步骤：
(1)将微生物菌种接种到培养基上进行有氧发酵，得到活化菌种；
(2)将步骤(1)得到的活化菌种加入到发酵液中，通入含有二氧化碳的混合气体，进行加压发酵，得到聚羟基脂肪酸酯。
本发明中，以二氧化碳为无机碳源，利用发酵菌种的特性，在加压条件下发酵生产聚羟基脂肪酸酯，有效提高生产聚羟基脂肪酸酯的效率，同时起到生物固碳的作用，原料来源广泛且稳定，可有效降低聚羟基脂肪酸酯的制备成本。
以下作为本发明优选的技术方案，但不作为本发明提供的技术方案的限制，通过以下技术方案，可以更好地达到和实现本发明的技术目的和有益效果。
作为本发明优选的技术方案，步骤(1)所述微生物菌种包括真养产碱杆菌、铜绿假单胞菌或紫色色杆菌中任意一种或至少两种的组合，所述组合典型但非限制性实例有：真养产碱杆菌和铜绿假单胞菌的组合，铜绿假单胞菌和紫色色杆菌的组合，真养产碱杆菌、铜绿假单胞菌和紫色色杆菌的组合等。
本发明中，真养产碱杆菌作为一种兼性化能自养菌，其能以CO2和H2为碳源和能源，在有少量的O2条件下产生并且大量积累聚羟基脂肪酸酯；同理，铜绿假单胞菌、紫色色杆菌也能够以CO2为碳源发酵合成聚羟基脂肪酸酯。
优选地，步骤(1)所述微生物菌种按照覆盖率1～10％接种到培养基上，例如1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％等，但并不仅限于所列举的数值，该数值范围内其他未列举的数值同样适用。
作为本发明优选的技术方案，步骤(1)所述培养基的组成包括有机碳源、无机盐和酵母浸出物。
本发明中，培养基的组成需要包括微生物菌种生长所需的营养成分，如有机碳源选择葡萄糖、蛋白胨等，无机盐包括NaCl、NH4Cl、Na2HPO4、KH2PO4、MgSO4、CaCl2等；酵母浸出物作为一种多营养成分，是以高蛋白面包酵母或啤酒酵母为原料，经自溶、酶解、浓缩、干燥等工艺制成的一种富含蛋白质、氨基酸、肽、多肽、核酸、维生素及微量元素等营养成分的生物培养基产品。
优选地，步骤(1)所述培养基上有氧发酵的条件为：温度30～45℃，例如30℃、32℃、35℃、37℃、40℃、42℃或45℃等，但并不仅限于所列举的数值，该数值范围内其他未列举的数值同样适用；转速100～400r/min，例如100r/min、150r/min、200r/min、250r/min、300r/min、350r/min或400r/min等，但并不仅限于所列举的数值，该数值范围内其他未列举的数值同样适用；时间24～48h，例如24h、28h、32h、36h、40h、44h或48h等，但并不仅限于所列举的数值，该数值范围内其他未列举的数值同样适用；pH值为7～9，例如7、7.5、8、8.5或9等，但并不仅限于所列举的数值，该数值范围内其他未列举的数值同样适用。
作为本发明优选的技术方案，步骤(1)所述有氧发酵时通入的气体为氧气和氮气的混合气。
优选地，所述混合气中氧气的体积分数为2～5％，例如2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％或5％等，但并不仅限于所列举的数值，该数值范围内其他未列举的数值同样适用。
作为本发明优选的技术方案，步骤(2)所述发酵液中不含有机碳源。
优选地，步骤(2)所述发酵液的组成主要包括无机盐，其中无机盐的种类有NaCl、NH4Cl、Na2HPO4、KH2PO4、MgSO4、CaCl2等。
作为本发明优选的技术方案，步骤(2)活化菌种加入后，发酵液中活化菌种的体积浓度为1～5％，例如1％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％或5％等，但并不仅限于所列举的数值，该数值范围内其他未列举的数值同样适用。
作为本发明优选的技术方案，步骤(2)所述混合气体包括二氧化碳、氢气和氧气。
优选地，步骤(2)所述混合气体的体积组成为二氧化碳10～80％、氢气5～20％和氧气1～5％，其余为氮气。
其中，二氧化碳体积分数可选择10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％或80％等，但并不仅限于所列举的数值，该数值范围内其他未列举的数值同样适用；氢气体积分数可选择5％、8％、10％、12％、15％、18％或20％等，但并不仅限于所列举的数值，该数值范围内其他未列举的数值同样适用；氧气体积分数可选择1％、2％、3％、4％或5％等，但并不仅限于所列举的数值，该数值范围内其他未列举的数值同样适用；上述三种气体在各自范围内选择，不足的体积分数比例由氮气补充，达到100％。
作为本发明优选的技术方案，步骤(2)所述发酵时的压力为0.1～5MPa，例如0.1MPa、0.5MPa、1MPa、1.5MPa、2MPa、2.5MPa、3MPa、3.5MPa、4MPa、4.5MPa或5MPa等，但并不仅限于所列举的数值，该数值范围内其他未列举的数值同样适用，优选为2～5MPa。
本发明中，所述发酵的压力为表压，高压条件有助于增加气体在发酵液中的溶解度，提高聚羟基脂肪酸酯的合成速率，但压力也不宜过高，否则会使得细胞破裂而灭活。
优选地，步骤(2)所述发酵过程中维持发酵液的pH为6～9，例如6、6.5、7、7.5、8、8.5或9等，但并不仅限于所列举的数值，该数值范围内其他未列举的数值同样适用，优选为7～8。
优选地，步骤(2)所述发酵时间为1～24h，例如1h、4h、8h、12h、16h、20h或24h等，但并不仅限于所列举的数值，该数值范围内其他未列举的数值同样适用。
优选地，步骤(2)所述发酵温度为20～35℃，例如20℃、22℃、24℃、25℃、27℃、30℃、32℃或35℃等，但并不仅限于所列举的数值，该数值范围内其他未列举的数值同样适用。
作为本发明优选的技术方案，步骤(2)发酵结束后，将菌种进行提取分离，得到聚羟基脂肪酸酯；
优选地，所述提取分离的操作包括依次包括破碎溶出、离心分离、产品浸出和干燥。
本发明中，上述提取分离操作中，溶出是指采用有机溶剂进行混合回流，溶出聚羟基脂肪酸酯，然后离心分离去除残渣，留上层清液，再采用乙醇从上层清液中浸出沉淀，再进行真空干燥，得到产品。
作为本发明优选的技术方案，所述方法包括以下步骤：
(1)将微生物菌种按照覆盖率1～10％接种到培养基上进行有氧发酵，所述微生物菌种包括真养产碱杆菌、铜绿假单胞菌或紫色色杆菌中任意一种或至少两种的组合，所述培养基的组成包括有机碳源、无机盐和酵母浸出物，有氧发酵时通入氧气和氮气的混合气，有氧发酵条件为：温度30～45℃，转速100～400r/min，时间24～48h，pH值为7～9，得到活化菌种；
(2)将步骤(1)得到的活化菌种加入到不含有机碳源的发酵液中，所述发酵液的组成主要包括无机盐，活化菌种加入后，发酵液中活化菌种的体积浓度为1～5％，通入含有二氧化碳、氢气和氧气的混合气体，进行加压发酵，发酵过程中维持发酵液的pH为6～9，发酵压力为0.1～5MPa，发酵温度为20～35℃，发酵时间为1～24h，发酵结束后，将菌种进行提取分离，得到聚羟基脂肪酸酯。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明所述方法利用发酵菌种的特性，以二氧化碳为无机碳源，在加压条件下发酵生产聚羟基脂肪酸酯，极大提高了聚羟基脂肪酸酯的生产效率，有利于工业化大规模生产；
(2)本发明发酵反应原料来源广泛，成本降低，可起到生物固碳的作用，无反应残渣，绿色环保。
具体实施方式
为更好地说明本发明，便于理解本发明的技术方案，下面对本发明进一步详细说明。但下述的实施例仅是本发明的简易例子，并不代表或限制本发明的权利保护范围，本发明保护范围以权利要求书为准。
本发明具体实施方式部分提供了一种由二氧化碳制备聚羟基脂肪酸酯的方法，所述方法包括以下步骤：
(1)将微生物菌种接种到培养基上进行有氧发酵，得到活化菌种；
(2)将步骤(1)得到的活化菌种加入到发酵液中，通入含有二氧化碳的混合气体，进行加压发酵，得到聚羟基脂肪酸酯。
以下为本发明典型但非限制性实施例：
实施例1：
本实施例提供了一种由二氧化碳制备聚羟基脂肪酸酯的方法，所述方法包括以下步骤：
(1)将真养产碱杆菌按照覆盖率5％接种到培养基上，所述培养基组成包括NaCl0.3g/L、NH4Cl 0.5g/L、Na2HPO4 5g/L、KH2PO4 2g/L、酵母浸出物3g/L、MgSO4 2mmol/L、CaCl220.1mmol/L、葡萄糖20g/L，在有氧条件下进行发酵，有氧发酵时通入的气体为氧气和氮气的混合气，其中氧气浓度为3％，有氧发酵条件为：温度36℃，摇床转速为250r/min，发酵时间36h，pH值为7，得到活化菌种；
(2)将步骤(1)得到的活化菌种加入到不含有机碳源的发酵液中，所述发酵液的主要组成包括无机盐，所述无机盐种类与步骤(1)中培养基中的无机盐相同，活化菌种加入后，发酵液中活化菌种的体积浓度为5％，通入二氧化碳、氢气和氧气的混合气体，其中二氧化碳、氢气和氧气体积分数分别为80％、15％和5％，在3MPa压力条件下进行化能自养发酵，发酵过程中维持发酵液的pH为7，发酵时间为10h，温度为25℃，发酵结束后，将菌种进行提取分离，得到聚羟基脂肪酸酯产物，所述产物占菌体的干重质量分数为80％。
实施例2：
本实施例提供了一种由二氧化碳制备聚羟基脂肪酸酯的方法，所述方法包括以下步骤：
(1)将真养产碱杆菌按照覆盖率1％接种到培养基上，所述培养基组成包括NaCl0.1g/L、NH4Cl 0.3g/L、Na2HPO4 5g/L、KH2PO4 2g/L、酵母浸出物4g/L、MgSO4 2mmol/L、CaCl220.1mmol/L、葡萄糖30g/L，在有氧条件下进行发酵，有氧发酵时通入的气体为氧气和氮气的混合气，其中氧气浓度为5％，有氧发酵条件为：温度30℃，摇床转速为400r/min，发酵时间48h，pH值为8，得到活化菌种；
(2)将步骤(1)得到的活化菌种加入到不含有机碳源的发酵液中，所述发酵液的主要组成包括无机盐，所述无机盐种类与步骤(1)中培养基中的无机盐相同，活化菌种加入后，发酵液中活化菌种的体积浓度为3％，通入含二氧化碳、氢气和氧气的混合气体，其中二氧化碳、氢气和氧气体积分数分别为60％、20％和3％，其余为氮气，在5MPa压力条件下进行化能自养发酵，发酵过程中维持发酵液的pH为8，发酵时间为15h，温度为20℃，发酵结束后，将菌种进行提取分离，得到聚羟基脂肪酸酯产物，所述产物占菌体的干重质量分数为78％。
实施例3：
本实施例提供了一种由二氧化碳制备聚羟基脂肪酸酯的方法，所述方法包括以下步骤：
(1)将真养产碱杆菌按照覆盖率10％接种到培养基上，所述培养基组成包括NaCl0.1g/L、NH4Cl 0.3g/L、Na2HPO4 3g/L、KH2PO4 3g/L、酵母浸出物2g/L、MgSO4 2mmol/L、CaCl220.1mmol/L、葡萄糖10g/L，在有氧条件下进行发酵，有氧发酵时通入的气体为氧气和氮气的混合气，其中氧气浓度为2％，有氧发酵条件为：温度45℃，摇床转速为100r/min，发酵时间24h，pH值为7.5，得到活化菌种；
(2)将步骤(1)得到的活化菌种加入到不含有机碳源的发酵液中，所述发酵液的主要组成包括无机盐，所述无机盐种类与步骤(1)中培养基中的无机盐相同，活化菌种加入后，发酵液中活化菌种的体积浓度为1％，通入含二氧化碳、氢气和氧气的混合气体，其中二氧化碳、氢气和氧气体积分数分别为40％、20％和5％，其余为氮气，在1MPa压力条件下进行化能自养发酵，发酵过程中维持发酵液的pH为6.5，发酵时间为2h，温度为35℃，发酵结束后，将菌种进行提取分离，得到聚羟基脂肪酸酯产物，所述产物占菌体的干重质量分数为55％。
实施例4：
本实施例提供了一种由二氧化碳制备聚羟基脂肪酸酯的方法，所述方法包括以下步骤：
(1)将铜绿假单胞菌按照覆盖率8％接种到培养基上，所述培养基组成包括NaCl0.5g/L、NH4Cl 0.5g/L、Na2HPO4 4g/L、KH2PO4 3g/L、酵母浸出物2.5g/L、MgSO4 3mmol/L、CaCl2 20.1mmol/L、葡萄糖15g/L，在有氧条件下进行发酵，有氧发酵时通入的气体为氧气和氮气的混合气，其中氧气浓度为4％，有氧发酵条件为：温度40℃，摇床转速为200r/min，发酵时间30h，pH值为8.5，得到活化菌种；
(2)将步骤(1)得到的活化菌种加入到不含有机碳源的发酵液中，所述发酵液主要组成包括无机盐，所述无机盐种类与步骤(1)中培养基中的无机盐相同，活化菌种加入后，发酵液中活化菌种的体积浓度为2％，通入含二氧化碳、氢气和氧气的混合气体，其中二氧化碳、氢气和氧气体积分数分别为50％、10％和2％，其余为氮气，在2MPa压力条件下进行化能自养发酵，发酵过程中维持发酵液的pH为7.5，发酵时间为20h，温度为30℃，发酵结束后，将菌种进行提取分离，得到聚羟基脂肪酸酯产物，所述产物占菌体的干重质量分数为75％。
实施例5：
本实施例提供了一种由二氧化碳制备聚羟基脂肪酸酯的方法，所述方法包括以下步骤：
(1)将真养产碱杆菌按照覆盖率3％接种到培养基上，所述培养基组成包括NaCl0.1g/L、NH4Cl 0.4g/L、Na2HPO4 5g/L、KH2PO4 3g/L、酵母浸出物3.5g/L、MgSO4 2mmol/L、CaCl2 20mmol/L、葡萄糖25g/L，在有氧条件下进行发酵，有氧发酵时通入的气体为氧气和氮气的混合气，其中氧气浓度为3.5％，有氧发酵条件为：温度45℃，摇床转速为300r/min，发酵时间40h，pH值为9，得到活化菌种；
(2)将步骤(1)得到的活化菌种加入到不含有机碳源的发酵液中，所述发酵液的主要组成包括无机盐，所述无机盐种类与步骤(1)中培养基中的无机盐相同，活化菌种加入后，发酵液中活化菌种的体积浓度为4％，通入含二氧化碳、氢气和氧气的混合气体，其中二氧化碳、氢气和氧气体积分数分别为60％、15％和4％，其余为氮气，在3.5MPa压力条件下进行化能自养发酵，发酵过程中维持发酵液的pH为8.5，发酵时间为12h，温度为27℃，发酵结束后，将菌种进行提取分离，得到聚羟基脂肪酸酯产物，所述产物占菌体的干重质量分数为82％。
实施例6：
本实施例提供了一种由二氧化碳制备聚羟基脂肪酸酯的方法，所述方法包括以下步骤：
(1)将紫色色杆菌按照覆盖率6％接种到培养基上，所述培养基组成包括NaCl0.3g/L、NH4Cl 0.5g/L、Na2HPO4 5g/L、KH2PO4 2g/L、酵母浸出物3g/L、MgSO4 2mmol/L、CaCl220.1mmol/L、葡萄糖32g/L，在有氧条件下进行发酵，有氧发酵时通入的气体为氧气和氮气的混合气，其中氧气浓度为4.5％，有氧发酵条件为：温度38℃，摇床转速为350r/min，发酵时间42h，pH值为7，得到活化菌种；
(2)将步骤(1)得到的活化菌种加入到不含有机碳源的发酵液中，所述发酵液的主要组成包括无机盐，所述无机盐种类与步骤(1)中培养基中的无机盐相同，活化菌种加入后，发酵液中活化菌种的体积浓度为1.5％，通入含二氧化碳、氢气和氧气的混合气体，其中二氧化碳、氢气和氧气体积分数分别为20％、18％和2％，其余为氮气，在0.5MPa压力条件下进行化能自养发酵，发酵过程中维持发酵液的pH为6，发酵时间为24h，温度为30℃，发酵结束后，将菌种进行提取分离，得到聚羟基脂肪酸酯产物，所述产物占菌体的干重质量分数为50％。
对比例1：
本实施例提供了一种由二氧化碳制备聚羟基脂肪酸酯的方法，所述方法参照实施例1中的方法，区别仅在于：步骤(2)所述发酵的压力为常压。
本对比例中，由于发酵在常压条件下进行，气体的溶解度较小，造成发酵菌种合成速率慢，甚至因碳源不足而难以生长存活，严重影响聚羟基脂肪酸酯的产率，最后获得的菌体中产物干重质量分数仅为45％。
对比例2：
本实施例提供了一种由二氧化碳制备聚羟基脂肪酸酯的方法，所述方法参照实施例1中的方法，区别仅在于：步骤(2)所述发酵的压力为6MPa。
本对比例中，由于菌种发酵压力过高，细菌细胞破裂，导致部分细菌灭活，反而使得聚羟基脂肪酸酯的产率降低，最后获得的菌体中产物干重质量分数仅为37％。
综合上述实施例和对比例可以看出，本发明利用发酵菌种的特性，以二氧化碳为无机碳源，在加压条件下发酵生产聚羟基脂肪酸酯，极大提高了聚羟基脂肪酸酯的生产效率，产品价格可降低50％以上，有利于工业化大规模生产；所述发酵反应原料来源广泛，成本降低，可起到生物固碳的作用，无反应残渣，绿色环保。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细方法，但本发明并不局限于上述详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明方法的等效替换及辅助操作的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (16)

1.一种由二氧化碳制备聚羟基脂肪酸酯的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)将微生物菌种接种到培养基上进行有氧发酵，得到活化菌种，所述微生物菌种包括真养产碱杆菌、铜绿假单胞菌或紫色色杆菌中任意一种或至少两种的组合；
(2)将步骤(1)得到的活化菌种加入到发酵液中，所述发酵液中不含有机碳源，通入含有二氧化碳的混合气体，进行加压发酵，所述发酵时的压力为2～5MPa，所述发酵过程中维持发酵液的pH为6～9，得到聚羟基脂肪酸酯。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述微生物菌种按照覆盖率1～10％接种到培养基上。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述培养基的组成包括有机碳源、无机盐和酵母浸出物。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述培养基上有氧发酵的条件为：温度30～45℃，转速100～400r/min，时间24～48h，pH值为7～9。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述有氧发酵时通入的气体为氧气和氮气的混合气。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述混合气中氧气的体积分数为2～5％。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述发酵液的组成主要包括无机盐。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)活化菌种加入后，发酵液中活化菌种的体积浓度为1～5％。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述混合气体包括二氧化碳、氢气和氧气。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述混合气体的体积组成包括二氧化碳10～80％、氢气5～20％和氧气1～5％，其余为氮气。
11.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述发酵过程中维持发酵液的pH为7～8。
12.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述发酵温度为20～35℃。
13.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述发酵时间为1～24h。
14.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)发酵结束后，将菌种进行提取分离，得到聚羟基脂肪酸酯。
15.根据权利要求14所述的方法，其特征在于，所述提取分离的操作依次包括破碎溶出、离心分离、产品浸出和干燥。
16.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)将微生物菌种按照覆盖率1～10％接种到培养基上进行有氧发酵，所述微生物菌种包括真养产碱杆菌、铜绿假单胞菌或紫色色杆菌中任意一种或至少两种的组合，所述培养基的组成包括有机碳源、无机盐和酵母浸出物，有氧发酵时通入氧气和氮气的混合气，有氧发酵条件为：温度30～45℃，转速100～400r/min，时间24～48h，pH值为7～9，得到活化菌种；
(2)将步骤(1)得到的活化菌种加入到不含有机碳源的发酵液中，所述发酵液的组成主要包括无机盐，活化菌种加入后，发酵液中活化菌种的体积浓度为1～5％，通入含有二氧化碳、氢气和氧气的混合气体，进行加压发酵，发酵过程中维持发酵液的pH为6～9，发酵压力为2～5MPa，发酵温度为20～35℃，发酵时间为1～24h，发酵结束后，将菌种进行提取分离，得到聚羟基脂肪酸酯。
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