CN111443145B - 一种用于测定生物样本中挥发性有机物的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于测定生物样本中挥发性有机物的方法，主要包括以下步骤：S1：样品采集并保存，并配制标准溶液，同时配制同位素内标使用液，待用；S2：分析前将样品和标准品恢复至室温，校正气相色谱‑质谱联用仪条件使符合分析要求；S3：在氮气环境下，加入消泡剂和同位素内标，样品注入吹脱捕集装置的吹脱管中，把样品中低水溶性的挥发性有机化合物及加入的同位素内标化合物吹脱出来；S4：绘制标准色谱图，并进行定量计算；S5：计算标准曲线，对取血样作加标测定回收率，得出回收率和精密度。本发明用于生物样本VOCs的定性定量分析，其检测效果准确，操作简便，可有效准确的测定生物样本中挥发性有机物。
Description
技术领域
本发明涉及检测方法技术领域，具体是涉及一种用于测定生物样本中挥发性有机物的方法。
背景技术
检验科是临床医学和基础医学之间的桥梁，常与我们息息相关的就是血样和尿样的检测，这两样检查通常是使用最高的检验项目，对于生物样本VOCs的定性定量分析常包括一下几种预处理方式：溶剂解吸法、低温预浓缩-热解吸法、固相微萃取法SPME、低温冷阱样品富集，而对于检测手段通常使用气相色谱技术GC和GC-MS、在线监测质子转移反应质谱PTR-MS、飞行时间质谱TOF-MS。
然后上述这些方法进行生物样本VOCs的定性定量分析，会相应出现分析误差较大、检测方法复杂、检测成本较为高昂等问题，而且在检测过程中，空气易对测试目标物产生干扰，而造成检测不准确的情况，因此，现需要一种新型的用于测定生物样本VOCs的方法来解决这些问题。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供了一种用于测定生物样本中挥发性有机物的方法。
本发明的技术方案是:一种用于测定生物样本中挥发性有机物的方法，主要包括以下步骤：
S1：样品采集并保存，并配制标准溶液，同时配制同位素内标使用液，待用；
S2：分析前将样品和标准品恢复至室温，校正气相色谱-质谱联用仪条件使符合分析要求；
S3：在氮气环境下，对40mL棕色进样瓶进行吹气；取出10mL水样，打开4mL样品瓶瓶盖，将血样倒入棕色进样瓶中，在4mL进样瓶中分别加入两次纯水进行充分震荡后，将4mL进样瓶中水样倒入40mL棕色进样瓶中，然后依次加入0.039g消泡剂、200μL同位素内标使用液，用纯水将样品瓶加至20mL，密封样品瓶，充分震荡样品瓶；
S4：绘制标准色谱图，并进行定量计算；
S5：计算标准曲线，对取血样分别作高浓度和低浓度两个水平的加标测定回收率，每个加标样品做六个平行样测定精密度，得出回收率和精密度。
进一步地，所述标准系列溶液的配制步骤具体为：
(1)称量并配置三氯甲烷2.52mg/mL、四氯化碳6.17mg/mL、苯2.81mg/mL、三氯乙烯3.45mg/mL、二氯一溴甲烷3.28mg/mL、甲苯3.44mg/mL、四氯乙烯2.91mg/mL、一氯二溴甲烷4.17mg/mL、乙苯2.48mg/mL、对二甲苯2.83mg/mL、邻二甲苯2.77mg/mL、三溴甲烷5.74mg/mL单标标准溶液；
(2)准确取上述配置的单标三氯甲烷794μL、四氯化碳324μL、苯712μL、三氯乙烯580μL、二氯一溴甲烷610μL、甲苯581μL、四氯乙烯687μL、一氯二溴甲烷480μL、乙苯806μL、对二甲苯707μL、邻二甲苯722μL、三溴甲烷348μL于10.0mL容量瓶中，配制成浓度为200.0μg/mL的标准贮备液，分装入1mL棕色安瓿瓶中，封口后置于冰箱中，冷藏保存；
(3)将标准贮备液用甲醇稀释10倍，摇匀混合，配制成浓度为20.0μg/mL的混标溶液，分装入1mL棕色安瓿瓶中，封口后置于冰箱中，冷藏保存；
(4)在15个进样小瓶中分别加入0.40mL甲醇，取0.40mL 20.0μg/mL的混标溶液(A)到第一个小瓶，混匀，得到浓度为10.0μg/mL的混标溶液(B)；
(5)同理取0.40mL B到第二个小瓶得到浓度为5.0μg/mL的混标溶液(C)；
(6)依次逐级“倍比”稀释，得到浓度为1250、625、313、157、78.3、39.1、9.6、9.78、4.89、2.45、1.22、0.61ng/mL的标准系列；
(7)再从这12个小瓶中分别取200μL到43mL进样瓶中，先加20mL纯水，同时加入200μL同位素内标和0.039g消泡剂，加满纯水，密封样品瓶得到梯度为0、0.003、0.006、0.011、0.023、0.045、0.090、0.180、0.361、0.721、1.44、2.88、5.76ng/mL的标准系列，将进样瓶放入超声波振荡器中震荡1min，上机测定。
进一步地，所述同位素内标的配制步骤具体为：
(1)分别取三氯甲烷(C13)0.5539g、四氯化碳(C13)0.0581g、苯(D5)0.0421g、三氯乙烯(C13)0.1057g、甲苯(D5)0.0435g、乙苯(D10)0.0451g、对二甲苯(D10)0.0452g、邻二甲苯(D4)0.0357g、三溴甲烷(C13)0.0908g，用甲醇定容至10.00mL，得到同位素单标储备液；分别取上述储备液三氯甲烷(C13)0.181mL、四氯化碳(C13)1.721mL、苯(D5)2.375mL、三氯乙烯0.946mL、甲苯(D5)2.299mL、乙苯(D10)2.217mL、对二甲苯(D10)2.212mL、邻二甲苯(D4)2.801mL、三溴甲烷(C13)1.101mL，用甲醇定容至50.00mL，得到浓度为200μg/mL的同位素混标贮备液，分装入1mL棕色安瓿瓶中，封口后置于冰箱中，冷藏保存；
(2)取上述同位素混标贮备液1.0mL，用甲醇稀释至10.00mL，得到浓度为20.0μg/mL同位素混标中间液；
(3)取同位素混标中间液0.2mL，用甲醇稀释至10.00mL，得到浓度为400.0ng/mL的同位素内标使用液，在标准曲线、空白、血液中分别加入200μL同位素内标使用液。
进一步地，所述定量具体为：计算血液中被测组分的浓度
ρi＝(Ci×Cis2/Cis1)×V1/V
其中，ρi：实际样品中目标物的浓度，ng/mL；Ci:标准曲线计算的样品测定液中被测组分的浓度，ng/mL；Cis1:标准系列内标物浓度，ng/mL；Cis2:样品中内标物的浓度，ng/mL；V1:血样稀释后的体积，mL；V:血样体积，mL。
进一步地，所述步骤S1的采集方法具体为：1)采样器皿，选用标识刻度4mL棕色玻璃瓶附螺旋盖及白色聚四氟乙烯垫片，采样前，需在80℃真空烘箱中烘烤24h，待烘箱冷却至室温后，使用高纯氮气将烘箱压力降至大气压；2)样品采集：将真空采样管中样品轻轻倾倒入4mL棕色螺口样品瓶中，使样品瓶完全充满，用带有白色特氟龙垫片的瓶盖拧紧；3)样品保存，样品于4℃冷藏保存，样品在采样后10周内完成分析。
进一步地，所述步骤S2中气相色谱-质谱联用仪参数具体为：
色谱条件：色谱柱:Rtx-VMS石英毛细管柱(30m×0.25mm×1.4μm)；柱温：柱温起始温度为35℃，保持5min，以6℃/min升至160℃，保持6min，20℃/min升至210℃,保持2min；载气：氦气，1.0mL/min，恒流方式；
质谱条件：离子源温度：230℃，四级杆温度：150℃。定量离子选择质谱图中离子丰度最高相对稳定的离子，每种化合物的保留时间和质谱峰顶点值由已知标准物质全扫描模式和SIM方式确定，色谱峰最宽为4s，SIM驻留时间要最好保证每个峰有15个到20个数据点，每个样品的分析时间为30min。
进一步地，所述步骤S3中吹气采用吹扫捕集装置处理，其中，吹扫捕集条件具体为：以高纯氦气(99.999％)为吹扫气，吹扫流速40mL/min；吹扫时间：11min；解吸温度：250℃，解吸时间：4min。
进一步地，所述步骤S3采用氮气氛围前处理操作台进行操作检验，所述氮气氛围前处理操作台主要包括操作台主体，所述操作台主体上表面设有多个用于放置进样瓶的放置孔，所述放置孔下方设有用于承载进样瓶的密封槽，所述每个放置孔均配设有一组滑动盖，所述滑动盖分为左右两部分，分别设置在操作台主体上对应配设的密封滑槽上，所述两个滑动盖连接缝处设有用于密封连接的密封对接条，所述密封槽内设有升降载板，所述升降载板下端与密封槽底通过弹簧连接，所述升降载板两侧通过滑块与密封槽配设的滑轨滑动连接，升降载板另外两侧各设有一个第一接线孔，所述放置孔与第一接线孔位置对应处各设有一个导轮，所述两个滑动盖内侧面各设有一个第二接线孔，所述第一接线孔、导轮、第二接线孔依次通过传动绳连接，所述两个滑动盖接缝处各设有一个对称的半圆型槽，用于安插吹气阀门并与进样瓶位置对应，滑动盖一侧侧面设有一组用于排气的气孔，所述气孔配设有堵塞。本发明的氮气氛围前处理操作台，通过升降载板、导轮以及传动绳等构成的机械结构，有效实现放置进样瓶后自动封闭上部空间的效果，无需电驱作用，可以适应更多的使用环境已经使用情况，氮气氛围前处理操作台通过气孔等进行排空处理，可以有效保证前处理过程在氮气环境下进行，可有效防止空气对测试目标物的干扰，提高检测的准确性
更进一步地，所述密封对接条包括对接A条、对接B条，所述对接A条为锥形凹槽，所述对接B条是锥形凸块，对接A条、对接B条分别设置在滑动盖上。通过设置对接A条、对接B条，利用锥形面契合，可以提高接合的密封效果，提高滑动盖之间的密封效果。
本发明氮气氛围前处理操作台的使用方法为：将进样瓶放置在放置孔内，通过进样瓶自身重力压动弹簧使升降载板下降，升降载板通过滑块沿着滑轨向下滑动，进而通过传动绳向下拉动，通过导轮的作用使传动绳拉动滑动盖向内侧滑动，从而使两侧滑动盖合并，随后将吹气阀门插入两个半圆形槽形成的圆形孔内，然后对一个气孔内注入氮气将其余气体从另一个气孔排出后，通过堵塞封堵一个气孔，然后进行吹气操作。
本发明方法的测定原理为：血样或尿样挥发性有机化合物测定采用吹扫捕集/气相色谱/同位素稀释质谱法。将被测生物样本用纯水稀释，加入消泡剂和同位素内标，样品注入吹脱捕集装置的吹脱管中，于室温下通以惰性气体(氦气)，把样品中低水溶性的挥发性有机化合物及加入的同位素内标化合物吹脱出来，捕集在装有吸附剂的捕集管内。吹脱程序完成后，捕集管被瞬间加热并以氦气反吹，将所吸附的组分解吸入气相色谱—质谱联用仪(GC-MS)进行检测。
本发明的有益效果是:
(1)本发明方法用于生物样本VOCs的定性定量分析，其检测效果准确，检测方法简单，操作简便，成本低，可有效准确的测定生物样本中挥发性有机物。
(2)本发明的氮气氛围前处理操作台，可以有效保证前处理过程在氮气环境下进行，可有效防止空气对测试目标物的干扰，提高检测的准确性，并且可以同时进行多组的检测操作且互不干扰影响。
附图说明
图1是挥发性有机物TIC图。
图2是实际样品血样中四氯化碳色谱图。
图3是本发明氮气氛围前处理操作台的整体外观图。
图4是本发明氮气氛围前处理操作台的去盖结构示意图。
图5是本发明氮气氛围前处理操作台的滑动盖结构示意图。
图6是本发明氮气氛围前处理操作台的结构示意图。
其中，1-操作台主体、11-密封滑槽、2-放置孔、21-导轮、3-密封槽、31-滑轨、4-滑动盖、41-第二接线孔、42-半圆形槽、43-气孔、44-堵塞、5-密封对接条、51-对接A条、52-对接B条、6-升降载板、61-滑块、62-第一接线孔、7-弹簧、8-传动绳。
具体实施方式
一种用于测定生物样本中挥发性有机物的方法，主要包括以下步骤：
S1：样品采集并保存，并配制标准溶液，同时配制同位素内标使用液，待用；
其中，采集并保存具体为：1)采样器皿，选用标识刻度4mL棕色玻璃瓶附螺旋盖及白色聚四氟乙烯垫片，采样前，需在80℃真空烘箱中烘烤24h，待烘箱冷却至室温后，使用高纯氮气将烘箱压力降至大气压；2)样品采集：将真空采样管中样品轻轻倾倒入4mL棕色螺口样品瓶中，使样品瓶完全充满，用带有白色特氟龙垫片的瓶盖拧紧；3)样品保存，样品于4℃冷藏保存，样品在采样后10周内完成分析。
S2：分析前将样品和标准品恢复至室温，校正气相色谱-质谱联用仪条件使符合分析要求；
其中，气相色谱-质谱联用仪参数具体为：
色谱条件：色谱柱:Rtx-VMS石英毛细管柱(30m×0.25mm×1.4μm)；柱温：柱温起始温度为35℃，保持5min，以6℃/min升至160℃，保持6min，20℃/min升至210℃,保持2min；载气：氦气，1.0mL/min，恒流方式；
质谱条件：离子源温度：230℃，四级杆温度：150℃。定量离子选择质谱图中离子丰度最高相对稳定的离子，每种化合物的保留时间和质谱峰顶点值由已知标准物质全扫描模式和SIM方式确定，色谱峰最宽为4s，SIM驻留时间要最好保证每个峰有15个到20个数据点，每个样品的分析时间为30min；
S3：在氮气环境下，对40mL棕色进样瓶进行吹气；取出10mL水样，打开4mL样品瓶瓶盖，将血样倒入棕色进样瓶中，在4mL进样瓶中分别加入两次纯水进行充分震荡后，将4mL进样瓶中水样倒入40mL棕色进样瓶中，然后依次加入0.039g消泡剂、200μL同位素内标使用液，用纯水将样品瓶加至20mL，密封样品瓶，充分震荡样品瓶；
其中，吹气采用吹扫捕集装置处理，其中，吹扫捕集条件具体为：以高纯氦气(99.999％)为吹扫气，吹扫流速40mL/min；吹扫时间：11min；解吸温度：250℃，解吸时间：4min；
S4：绘制标准色谱图，并进行定量计算，所述定量具体为：计算血液中被测组分的浓度
ρi＝(Ci×Cis2/Cis1)×V1/V
其中，ρi：实际样品中目标物的浓度，ng/mL；Ci:标准曲线计算的样品测定液中被测组分的浓度，ng/mL；Cis1:标准系列内标物浓度，ng/mL；Cis2:样品中内标物的浓度，ng/mL；V1:血样稀释后的体积，mL；V:血样体积，mL；
S5：计算标准曲线，对取血样分别作高浓度和低浓度两个水平的加标测定回收率，每个加标样品做六个平行样测定精密度，得出回收率和精密度。
其中，所述标准系列溶液的配制步骤具体为：
(1)准确称量三氯甲烷0.0252g、四氯化碳0.617g、苯0.0281g、三氯乙烯0.0345g、二氯一溴甲烷0.0328g、甲苯0.0344g、四氯乙烯0.0291g、一氯二溴甲烷0.0417g、乙苯0.0248g、对二甲苯0.0283g、邻二甲苯0.0277g、三溴甲烷0.0574g于10.0mL容量瓶中，得到三氯甲烷2.52mg/mL、四氯化碳6.17mg/mL、苯2.81mg/mL、三氯乙烯3.45mg/mL、二氯一溴甲烷3.28mg/mL、甲苯3.44mg/mL、四氯乙烯2.91mg/mL、一氯二溴甲烷4.17mg/mL、乙苯2.48mg/mL、对二甲苯2.83mg/mL、邻二甲苯2.77mg/mL、三溴甲烷5.74mg/mL单标标准溶液；
(2)准确取上述配置的单标三氯甲烷794μL、四氯化碳324μL、苯712μL、三氯乙烯580μL、二氯一溴甲烷610μL、甲苯581μL、四氯乙烯687μL、一氯二溴甲烷480μL、乙苯806μL、对二甲苯707μL、邻二甲苯722μL、三溴甲烷348μL于10.0mL容量瓶中，配制成浓度为200.0μg/mL的标准贮备液，分装入1mL棕色安瓿瓶中，封口后置于冰箱中，冷藏保存；
(3)将标准贮备液用甲醇稀释10倍，摇匀混合，配制成浓度为20.0μg/mL的混标溶液，分装入1mL棕色安瓿瓶中，封口后置于冰箱中，冷藏保存；
(4)在15个进样小瓶中分别加入0.40mL甲醇，取0.40mL 20.0μg/mL的混标溶液(A)到第一个小瓶，混匀，得到浓度为10.0μg/mL的混标溶液(B)；
(5)同理取0.40mL B到第二个小瓶得到浓度为5.0μg/mL的混标溶液(C)；
(6)依次逐级“倍比”稀释，得到浓度为1250、625、313、157、78.3、39.1、9.6、9.78、4.89、2.45、1.22、0.61ng/mL的标准系列；
(7)再从这12个小瓶中分别取200μL到43mL进样瓶中，先加20mL纯水，同时加入200μL同位素内标和0.039g消泡剂，加满纯水，密封样品瓶得到梯度为0、0.003、0.006、0.011、0.023、0.045、0.090、0.180、0.361、0.721、1.44、2.88、5.76ng/mL的标准系列，将进样瓶放入超声波振荡器中震荡1min，上机测定。
所述同位素内标的配制步骤具体为：
(1)分别取三氯甲烷(C13)0.5539g、四氯化碳(C13)0.0581g、苯(D5)0.0421g、三氯乙烯(C13)0.1057g、甲苯(D5)0.0435g、乙苯(D10)0.0451g、对二甲苯(D10)0.0452g、邻二甲苯(D4)0.0357g、三溴甲烷(C13)0.0908g，用甲醇定容至10.00mL，得到同位素单标储备液；分别取上述储备液三氯甲烷(C13)0.181mL、四氯化碳(C13)1.721mL、苯(D5)2.375mL、三氯乙烯0.946mL、甲苯(D5)2.299mL、乙苯(D10)2.217mL、对二甲苯(D10)2.212mL、邻二甲苯(D4)2.801mL、三溴甲烷(C13)1.101mL，用甲醇定容至50.00mL，得到浓度为200μg/mL的同位素混标贮备液，分装入1mL棕色安瓿瓶中，封口后置于冰箱中，冷藏保存；
(2)取上述同位素混标贮备液1.0mL，用甲醇稀释至10.00mL，得到浓度为20.0μg/mL同位素混标中间液；
(3)取同位素混标中间液0.2mL，用甲醇稀释至10.00mL，得到浓度为400.0ng/mL的同位素内标使用液，在标准曲线、空白、血液中分别加入200μL同位素内标使用液。
步骤S3采用氮气氛围前处理操作台进行操作检验，如图1所示，氮气氛围前处理操作台主要包括操作台主体1，如图2所示，操作台主体1上表面设有多个用于放置进样瓶的放置孔2，放置孔2下方设有用于承载进样瓶的密封槽3，如图2、3、4所示，每个放置孔2均配设有一组滑动盖4，滑动盖4分为左右两部分，分别设置在操作台主体1上对应配设的密封滑槽11上，两个滑动盖4连接缝处设有用于密封连接的密封对接条5，密封对接条5包括对接A条51、对接B条52，对接A条51为锥形凹槽，对接B条52是锥形凸块，对接A条51、对接B条52分别设置在滑动盖4上。通过设置对接A条51、对接B条52，利用锥形面契合，可以提高接合的密封效果，提高滑动盖4之间的密封效果；密封槽3内设有升降载板6，升降载板6下端与密封槽3底通过弹簧7连接，升降载板6两侧通过滑块61与密封槽3配设的滑轨31滑动连接，升降载板6另外两侧各设有一个第一接线孔62，放置孔2与第一接线孔62位置对应处各设有一个导轮21，两个滑动盖4内侧面各设有一个第二接线孔41，第一接线孔62、导轮21、第二接线孔41依次通过传动绳8连接，两个滑动盖4接缝处各设有一个对称的半圆型槽42，用于安插吹气阀门并与进样瓶位置对应，滑动盖4一侧侧面设有一组用于排气的气孔43，气孔43配设有堵塞44。本发明的氮气氛围前处理操作台，通过升降载板6、导轮21以及传动绳8等构成的机械结构，有效实现放置进样瓶后自动封闭上部空间的效果，无需电驱作用，可以适应更多的使用环境已经使用情况，氮气氛围前处理操作台通过气孔43等进行排空处理，可以有效保证前处理过程在氮气环境下进行，可有效防止空气对测试目标物的干扰，提高检测的准确性。
上述装置的使用方法为：将进样瓶放置在放置孔2内，通过进样瓶自身重力压动弹簧使升降载板6下降，升降载板6通过滑块61沿着滑轨31向下滑动，进而通过传动绳8向下拉动，通过导轮21的作用使传动绳8拉动滑动盖4向内侧滑动，从而使两侧滑动盖4合并，随后将吹气阀门插入两个半圆形槽42形成的圆形孔内，然后对一个气孔43内注入氮气将其余气体从另一个气孔43排出后，通过堵塞44封堵一个气孔43，然后进行吹气操作。
实验例
一、样品采集与保存
1、采样器皿
样品瓶：标识刻度4mL棕色玻璃瓶附螺旋盖及白色聚四氟乙烯垫片。采样前，需在80℃真空烘箱中烘烤24h，待烘箱冷却至室温后，使用高纯氮气将烘箱压力将至大气压。
2、样品采集
将真空采样管中样品轻轻倾倒入4mL棕色螺口样品瓶中，使样品瓶完全充满，用带有白色特氟龙垫片的瓶盖拧紧。
3、样品保存
样品于4℃冷藏保存(一定不能冷冻)，样品在采样后10周内完成分析。
二、试剂与材料
1、甲醇
气质分析挥发性有机化合物专用甲醇(Fluka公司)，用于配制标准品和清洗玻璃器皿。
2、实验纯水
用娃哈哈纯净水。实验中需选择同一批次纯水，用于溶液制备、空白、标准和质量控制。
3、消泡剂
SIGMA公司生产的Anifoam204，使用前放于真空干燥箱80℃烘烤12h。
4、标准品
标准及其内标均购买高纯标准物质，-4℃保存。稳定的同位素标记物主要是13C和D同位素内标。高纯标准物质及其同位素内标用甲醇配制成标准储备液，用棕色安剖瓶封装，-4℃保存。标准储备液在使用时用纯水稀释成所需要的浓度，同位素内标储备液用甲醇稀释。
表1标准物质信息
注：A-AccuStandard
表2内标物质信息
注：C-CDN isotopes；B-Cambridge Isotope Laboratories
5、样品瓶
40mL棕色玻璃瓶附螺旋盖及聚四氟乙烯垫片。进样之前，样品瓶需在80℃真空烘箱中烘烤24h，待烘箱冷却至室温后，使用高纯氮气将烘箱压力将至大气压。
6、色谱柱
Rtx-VMS石英毛细管柱(30m×0.25mm×1.4μm)或同等性能色谱柱。
7、载气
氦气，高纯(99.999％)，进入仪器之前用大体积捕集阱对氦气进行净化。
三、仪器和测定条件
1、仪器
(1)Agilent-GC7890/MS5975气相色谱—质谱联用仪。
(2)吹扫捕集装置为PT9800&Aquatek100(美国Tekmar公司)，25.0mL吹扫管。
(3)自动进样装置为TELEDYNE TRKMAR AQUATek 70vial Autosamper(美国Tekmar公司)。
2、仪器条件
(1)色谱条件：色谱柱:Rtx-VMS石英毛细管柱(30m×0.25mm×1.4μm)；柱温：柱温起始温度为35℃，保持5min，以6℃/min升至160℃，保持6min，20℃/min升至210℃,保持2min；载气：氦气，1.0mL/min，恒流方式。
(2)质谱条件：离子源温度：230℃，四级杆温度：150℃。定量离子选择质谱图中离子丰度最高相对稳定的离子，每种化合物的保留时间和质谱峰顶点值由已知标准物质全扫描模式和SIM方式确定，色谱峰最宽为4s，SIM驻留时间要最好保证每个峰有15个到20个数据点，每个样品的分析时间为30min(包括吹扫时间)。选择离子见表3。
(3)吹扫捕集条件：以高纯氦气(99.999％)为吹扫气，吹扫流速40mL/min；吹扫时间：11min。解吸温度：250℃，解吸时间：4min。(注：参照水中VOCs检测条件)
表3测定VOCs的分析参数
注：四氯乙烯用甲苯内标定量，一氯二溴甲烷和二氯一溴甲烷用三溴甲烷内标定量。
本方法适用于生物样本血样和尿样中挥发性有机物(VOCs)的痕量分析，方法分析参数见表1；检出限随仪器和操作条件而变，当取样量为5.0mL时，方法检出限0.03μg/L-0.58μg/L，方法测定13种VOCs(包括5种卤代烷烃、2种卤代烯烃和6种苯系物)的线性范围为3个数量级。
采用实施例方法进行测定后，得到以下数据：
标准色谱图，挥发性有机物TIC(总离子流图)如图1所示，实际样品血样中四氯化碳色谱图如图2所示。
12种化合物的线性方程、相关系数和检出限，如表4所示：
表4 12种化合物的线性方程、相关系数和检出限
12种化合物的回收率和精密度，如表5所示：
表5 12种化合物的回收率和精密度
Claims (8)
1.一种用于测定生物样本中挥发性有机物的方法，其特征在于，主要包括以下步骤：
S1：样品采集并保存，并配制标准系列溶液，同时配制同位素内标使用液，待用；
S2：分析前将样品和标准品恢复至室温，校正气相色谱-质谱联用仪条件使符合分析要求；
S3： 在氮气环境下，对40 mL棕色进样瓶进行吹气；取出10 mL水样，打开4 mL样品瓶瓶盖，将血样倒入棕色进样瓶中，在4 mL进样瓶中分别加入两次纯水进行充分震荡后，将4 mL进样瓶中水样倒入40 mL棕色进样瓶中，然后依次加入0.039 g消泡剂、200 μL同位素内标使用液，用纯水将样品瓶加至20 mL，密封样品瓶，充分震荡样品瓶；
S4：绘制标准色谱图，并进行定量计算；
S5：计算标准曲线，对取血样分别作高浓度和低浓度两个水平的加标测定回收率，每个加标样品做六个平行样测定精密度，得出回收率和精密度；
所述步骤S3采用氮气氛围前处理操作台进行操作检验，所述氮气氛围前处理操作台主要包括操作台主体（1），所述操作台主体（1）上表面设有多个用于放置进样瓶的放置孔（2），所述放置孔（2）下方设有用于承载进样瓶的密封槽（3），每个放置孔（2）均配设有一组滑动盖（4），所述滑动盖（4）分为左右两部分，分别设置在操作台主体（1）上对应配设的密封滑槽（11）上，两个滑动盖（4）连接缝处设有用于密封连接的密封对接条（5），所述密封槽（3）内设有升降载板（6），所述升降载板（6）下端与密封槽（3）底通过弹簧（7）连接，所述升降载板（6）两侧通过滑块（61）与密封槽（3）配设的滑轨（31）滑动连接，升降载板（6）另外两侧各设有一个第一接线孔（62），所述放置孔（2）与第一接线孔（62）位置对应处各设有一个导轮（21），两个滑动盖（4）内侧面各设有一个第二接线孔（41），所述第一接线孔（62）、导轮（21）、第二接线孔（41）依次通过传动绳（8）连接，两个滑动盖（4）接缝处各设有一个对称的半圆型槽（42），用于安插吹气阀门并与进样瓶位置对应，滑动盖（4）一侧侧面设有一组用于排气的气孔（43），所述气孔（43）配设有堵塞（44）。
2.如权利要求1所述的一种用于测定生物样本中挥发性有机物的方法，其特征在于，所述标准系列溶液的配制步骤具体为：
（1）称量并配制三氯甲烷2.52 mg/mL、四氯化碳6.17 mg/mL、苯2.81 mg/mL、三氯乙烯3.45 mg/mL、二氯一溴甲烷3.28 mg/mL、甲苯3.44 mg/mL、四氯乙烯2.91 mg/mL、一氯二溴甲烷4.17 mg/mL、乙苯2.48 mg/mL、对二甲苯2.83 mg/mL、邻二甲苯2.77 mg/mL、三溴甲烷5.74 mg/mL单标标准溶液；
（2）准确取上述配制的单标三氯甲烷794 μL、四氯化碳324 μL、苯712 μL、三氯乙烯580μL、二氯一溴甲烷610 μL、甲苯581 μL、四氯乙烯687 μL、一氯二溴甲烷480 μL、乙苯806 μL、对二甲苯707 μL、邻二甲苯722μL、三溴甲烷348 μL于10.0 mL容量瓶中，配制成浓度为200.0 μg/mL 的标准贮备液，分装入1 mL棕色安瓿瓶中，封口后置于冰箱中，冷藏保存；
（3）将标准贮备液用甲醇稀释10倍，摇匀混合，配制成浓度为20.0μg/mL 的混标溶液A，分装入1 mL棕色安瓿瓶中，封口后置于冰箱中，冷藏保存；
（4）在15个进样小瓶中分别加入0.40 mL甲醇，取0.40 mL 20.0 μg/mL 的混标溶液A到第一个小瓶，混匀，得到浓度为10.0 μg/mL的混标溶液B；
（5）同理取0.40 mL 混标溶液B 到第二个小瓶得到浓度为5.0 μg/mL的混标溶液C；
（6）依次逐级“倍比”稀释，得到浓度为1250、625、313、157、78.3、39.1、9.6、9.78、4.89、2.45、1.22、0.61 ng/mL的标准系列；
（7） 再从这12个小瓶中分别取200 μL到43 mL进样瓶中，先加20 mL纯水，同时加入200μL同位素内标和0.039 g消泡剂，加满纯水，密封样品瓶得到梯度为0、0.003、0.006、0.011、0.023、0.045、0.090、0.180、0.361、0.721、1.44、2.88、5.76 ng/mL的标准系列，将进样瓶放入超声波振荡器中震荡1 min，上机测定。
3.如权利要求1所述的一种用于测定生物样本中挥发性有机物的方法，其特征在于，所述同位素内标使用液的配制步骤具体为：
（1）分别取三氯甲烷-C13 0.5539 g、四氯化碳-C13 0.0581 g、苯-D5 0.0421 g、三氯乙烯-C13 0.1057 g、甲苯-D5 0.0435 g、乙苯-D10 0.0451 g、对二甲苯-D10 0.0452 g、邻二甲苯-D4 0.0357 g、三溴甲烷-C13 0.0908 g，用甲醇定容至10.00 mL，得到同位素单标储备液；分别取上述储备液三氯甲烷-C13 0.181 mL、四氯化碳-C13 1.721 mL、苯-D52.375 mL、三氯乙烯-C13 0.946 mL、甲苯-D5 2.299 mL、乙苯-D10 2.217 mL、对二甲苯-D10 2.212 mL、邻二甲苯-D4 2.801 mL、三溴甲烷-C13 1.101 mL，用甲醇定容至50.00 mL，得到浓度为200 μg/mL的同位素混标贮备液，分装入1 mL棕色安瓿瓶中，封口后置于冰箱中，冷藏保存；
（2） 取上述同位素混标贮备液1.0 mL，用甲醇稀释至10.00 mL，得到浓度为20.0 μg/mL同位素混标中间液；
（3）取同位素混标中间液0.2 mL，用甲醇稀释至10.00 mL，得到浓度为400.0 ng/mL的同位素内标使用液，在标准曲线、空白、血液中分别加入200 μL同位素内标使用液。
4.如权利要求1所述的一种用于测定生物样本中挥发性有机物的方法，其特征在于，所述定量具体为：计算血液中被测组分的浓度
ρi＝（Ci×Cis2/Cis1）×V1/V
其中，ρi： 实际样品中目标物的浓度，ng/mL；Ci: 标准曲线计算的样品测定液中被测组分的浓度，ng/mL；Cis1: 标准系列内标物浓度，ng/mL；Cis2: 样品中内标物的浓度，ng/mL； V1: 血样稀释后的体积，mL； V: 血样体积，mL。
5.如权利要求1所述的一种用于测定生物样本中挥发性有机物的方法，其特征在于，所述步骤S1的采集方法具体为：1）采样器皿，选用标识刻度4 mL棕色玻璃瓶附螺旋盖及白色聚四氟乙烯垫片，采样前，需在80 ℃真空烘箱中烘烤24 h，待烘箱冷却至室温后，使用高纯氮气将烘箱压力降至大气压；2）样品采集：将真空采样管中样品轻轻倾倒入4 mL棕色螺口样品瓶中，使样品瓶完全充满，用带有白色特氟龙垫片的瓶盖拧紧；3）样品保存，样品于4℃冷藏保存，样品在采样后10周内完成分析。
6.如权利要求1所述的一种用于测定生物样本中挥发性有机物的方法，其特征在于，所述步骤S2中气相色谱-质谱联用仪参数具体为：
色谱条件：色谱柱: Rtx-VMS石英毛细管柱，30 m×0.25 mm×1.4 μm；柱温：柱温起始温度为35 ℃，保持5 min ，以6 ℃/min 升至160 ℃，保持6 min，20 ℃/min 升至210 ℃,保持2 min；载气：氦气，1.0 mL/min，恒流方式；
质谱条件：离子源温度：230 ℃，四级杆温度：150 ℃；定量离子选择质谱图中离子丰度最高相对稳定的离子，每种化合物的保留时间和质谱峰顶点值由已知标准物质全扫描模式和SIM方式确定，色谱峰最宽为4 s，SIM驻留时间要最好保证每个峰有15个到20个数据点，每个样品的分析时间为30min。
7.如权利要求1所述的一种用于测定生物样本中挥发性有机物的方法，其特征在于，所述步骤S3中吹气采用吹扫捕集装置处理，其中，吹扫捕集条件具体为：以纯度99.999 %的高纯氦气 为吹扫气，吹扫流速40 mL/min；吹扫时间：11 min；解吸温度：250 ℃，解吸时间：4min。
8.如权利要求1所述的一种用于测定生物样本中挥发性有机物的方法，其特征在于，两个滑动盖（4）连接缝处设有密封对接条（5），所述密封对接条（5）用于两个滑动盖（4）之间的密封连接。
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