CN111398194A - 一种用于测定艾考糊精中肽聚糖的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于肽聚糖生物测定技术领域，具体的说是一种用于测定艾考糊精中肽聚糖的方法，该测定艾考糊精中肽聚糖的方法包括以下步骤：S1.取15g艾考糊精置电热恒温水槽内进行水浴中，处于65℃水浴40min，并且持续对水浴进行加热均匀处理；通过设置第一转轴、翻动叶、第二转轴、搅拌叶、电机、驱动齿轮、传动齿轮、棘轮机构，起到了对搁置盘周围的水进行均匀混合的作用，并且将螺旋电阻丝产生的热量进行均匀传递，使得槽体内的水温更加稳定，避免造成搁置盘周围温度存在差异而造成对艾考糊精热处理不均匀的问题，从而保证了对艾考糊精彻底热处理，缩小了实验误差，提高了对肽聚糖测定的准确性。

Description

一种用于测定艾考糊精中肽聚糖的方法
技术领域
本发明属于肽聚糖生物测定技术领域，具体的说是一种用于测定艾考糊精中肽聚糖的方法。
背景技术
无菌性炎症性发病是在使用用于治疗性目的(例如：腹膜透析，肠外营养，通过静脉途径注射)的制品治疗期间观察到的主要并发症。尽管这些炎症性发病中的一些与化学性质问题相关，但大多数病例是由于在制造工艺期间释放的微生物来源的污染物的存在所致。现已明确确认，脂多糖(LPS)和肽聚糖(PGN)是主要污染物，在其以痕量水平存在于制品中时，其呈现触发所述炎症性发病的高风险。
现有技术中也出现了一些肽聚糖测定的技术方案，如申请号为201480018300.0的一项中国专利公开了一种用于测定样品、特别是艾考糊精样品中的肽聚糖(PGN)的生物学方法。该PGN测定包括：a)通过声处理、加热和/或碱性化处理该艾考糊精样品；b)使处理后的样品或其稀释物与重组细胞接触，该重组细胞表达外源TLR2(Toll样受体2)和直接依赖与该TLR2相关的信号传导路径的报道基因。该报道基因编码有色或荧光蛋白质或编码其活性可用或不用底物来测量的蛋白质；c)测量该报道基因信号；和d)使用PGN的量与该报道基因信号强度之间的关联性的标准曲线来确定该样品中PGN的量。
现有技术中存在对艾考糊精的肽聚糖测定时，对艾考糊精进行热处理过程中容易产生热处理均匀的问题，导致部分艾考糊精没有被彻底热处理，使得艾考糊精的生物结构仍然处于活跃状态，导致对后期肽聚糖组分的采集造成误差，影响测定的准确性，造成实验误差过大，影响实验结果。
发明内容
为了弥补现有技术的不足，解决在艾考糊精的肽聚糖测定时，对艾考糊精进行热处理过程中容易产生热处理均匀的问题，导致部分艾考糊精没有被彻底热处理，使得艾考糊精的生物结构仍然处于活跃状态，导致对后期肽聚糖组分的采集造成误差，影响测定的准确性，造成实验误差过大，影响实验结果的问题，本发明提出的一种用于测定艾考糊精中肽聚糖的方法。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：本发明所述的一种用于测定艾考糊精中肽聚糖的方法，该测定艾考糊精中肽聚糖的方法包括以下步骤：
S1.取15g艾考糊精置电热恒温水槽内进行水浴中，处于65℃水浴40min,并且持续对水浴进行加热均匀处理，使得艾考糊精失去活性,然后加入0.5%TritonX-100溶液50mL,80～85℃水浴1h,同时不断连续搅拌溶液；取出溶液置冰浴中,使之立即冷却,20000g离心10min后弃上清,沉淀再用双蒸水充分洗涤2次,每次20000×g离心10min弃上清；再依次用甲醇:水(2:lV/V)、甲醇、丙酮同前连续洗涤,去除沉淀中的去垢剂；如果热处理时，水浴中水无法均匀对艾考糊精进行均匀加热，会造成艾考糊精无法被充分受热，造成部分处理完成，部分还未彻底处理，通过电热恒温水槽内的水进行均匀受热，使得水各位置的水温相同，观测起来更加容易，从而避免造成温度过高或者温度过低而造成艾考糊精无法被均匀热处理的问题，保证对艾考糊精充分的热处理，保证对艾考糊精热处理的彻底性，避免造成部分热处理完成部分未热处理完成的情况，从而确保对肽聚糖测定的准确性；通过设置TritonX-100、甲醇:水(2:lV/V)、甲醇和丙酮进行充分清洗，避免污垢对艾考糊精产生的污染，降低了外部因素的影响，降低测定误差；
S2.上述沉淀加入40mL酶溶液Ⅰ,37℃水浴消化14h,4℃20000×g离心40min弃上清；沉淀再用40mL酶溶液同前处理,接着用20mL酶溶液处理20min,同前离心弃上清；沉淀用20mL酶溶液再消化14h,然后4℃20000×g离心40min弃上清，得到沉淀物；通过美容液将艾考糊精内除了肽聚糖以外的物质进行充分溶解，避免造成残留而影响提取肽聚糖的纯度，从而有效保证测定质量；
S3.所得沉淀再依次经甲醇、甲醇:氯仿(1:1V/V)及氯仿各40mL洗涤脱脂,离心方法同前；脱脂后的提取物用20mL酶溶液在37℃水浴14h消化,重复3次，消化后的提取物用去离子水在4℃条件下连续透析3d；最后,提取物经0.01mol·L-1H2SO410mL85～95℃处理5min；冰水浴中立即冷却,4℃15000×g离心30min后弃上清,沉淀用去离子水在4℃条件下连续透析7d,冷冻干燥后置4℃保存备用，得到肽聚糖；沉淀物中会残留大量的物质，这些物质时酶溶液清理沉淀物中脱脂后产生的其他杂物组成，通过离子水进行反复透析，得到较纯的肽聚糖，避免杂物影响肽聚糖的纯度，降低测定肽聚糖的误差；
S4.取出适量，将肽聚糖用适量生理盐水充分溶解后,投入超声波破碎器内进行充分破碎,破碎后收集出的样品作为检测总糖含量和蛋白质含量的样品；如果破碎不彻底，会造成肽聚糖组分蛋白质和总糖无法被彻底分离，造成各自成分的纯度降低，影响测定质量，通过充分破碎，使得肽聚糖内的蛋白质和总糖量进行充分分离，保证各自成分的纯度，提高测定质量；
S5.采用酚-硫酸法，制作出葡萄糖标准曲线的，并同步对肽聚糖中总糖含量进行测定采用Lowry法对蛋白含量测定，制作出蛋白标准曲线，并同步对肽聚糖中蛋白质含量进行测定；
其中，方法S1中电热恒温水槽包括槽体，槽体包括保温内层和外壳层；所述槽体的顶部铰接有密封盖；所述槽体背面靠顶部拐角的位置连通有进水管；所述槽体内壁的两侧均固定连接有U形电阻丝安装架；所述U形电阻丝安装架的表面上开设有线性排列的通水槽；所述U形电阻丝安装架的内壁上固定连接有线性排列的螺旋电阻丝；所述槽体内壁底部的中间位置固定连接有U形安装架；所述U形安装架的背面固定安装有温感器；所述U形安装架的顶部通过升降机构连接有搁置盘；所述槽体内壁靠近底部的位置转动连接有两个相互平行且对称设置的第一转轴；所述第一转轴的表面上固定连接有翻动叶；所述槽体的内壁上且位于翻动叶上方的位置转动连接有两个相互平行且对称设置的第二转轴；所述第二转轴的表面固定连接有线性排列的搅拌叶；所述搅拌叶分布在U形安装架的一旁；其中一个所述第二转轴的前端穿过槽体并连接有电机；所述第二转轴的后端穿过槽体并连接有驱动齿轮；两个所述驱动齿轮之间共同啮合有传动齿轮；所述传动齿轮通过支撑轴转动连接在槽体背面；所述驱动齿轮的表面通过棘轮机构与第一转轴传动连接；工作时，通过设置温感器，可以与外接显示控制装置进行连接，起到了对水槽内部的水进行及时监控的作用，方便对水温度的控制；槽体会对内部的温度进行传导，造成热量的散失，通过设置保温内层，可以将槽体内部的热量进行保温，避免造成槽体对热量快速散热的问题；槽体内壁两侧的螺旋电阻丝给槽体内的水提供加热源，U形电阻丝安装架会对螺旋电阻丝周围水的流动造成阻挡，通过在U形电阻丝安装架的表面开设通水槽，一方面可以避免U形电阻丝安装架对螺旋电阻丝周围水流动造成阻碍的问题，保证水在螺旋电阻丝周围的正常流动，进而保证热量的均匀传递，另一方面可以对螺旋电阻丝的周围进行保护，避免工作人员在操作的过程中触碰到螺旋电阻丝而造成伤害的问题，对螺旋电阻丝进行了遮挡保护；在将艾考糊精存储瓶搁置到搁置盘上，如果搁置盘的位置固定，需要在工作人员将艾考糊精存储瓶深入到水内部，并且容易对水造成污染，通过设置升降机构和U形安装架，可以调节搁置盘的位置，在搁置艾考糊精存储瓶时，可以先将搁置盘升出水浴，搁置完成后在通过升降机构调整搁置盘和艾考糊精存储瓶进入至U形安装架顶部即可，方便了工作人员的操作，同时也减少对水浴的污染；然后在热处理的过程中，通过外设的控制器控制电机启动，电机带动第二转轴转动，第二转轴同步带动搅拌叶和驱动齿轮转动，两个驱动齿轮在传动齿轮的传动下同向同步转动，驱动齿轮通过棘轮机构传动第一转轴，第一转轴同步带动翻动叶将螺旋电阻丝附近加热后的水向内侧翻动，并且被翻动向内侧的水可以同步被搅拌叶进行混合搅拌，使得搁置盘两侧的水得到均匀混合，使得槽体内的水温更加稳定，避免造成搁置盘周围温度存在差异而造成对艾考糊精热处理不均匀的问题，从而保证了对艾考糊精彻底热处理，缩小了实验误差，提高了对肽聚糖测定的准确性。
优选的，所述超声波破碎器在160W的功率下对肽聚糖进行20～30min的破碎；工作时，如果破碎时间太短，会造成将肽聚糖内的总糖和蛋白质分离不彻底，影响S3方法中的数据检测，处于160W的功率下对进行20～30min的破碎，可以充分对肽聚糖进行离心，从而将总糖含量和蛋白质含量进行彻底分开，并进行采集，保证S3方法中得到的检测样品是有保证的。
优选的，所述酶溶液Ⅰ:MgCl20.1017g,蛋白酶,溶解于50mLTris-HCl(pH7.2)溶液中,使之成为内含MgCl(21mg·mL-1)、蛋白酶(1mg·mL-1)的酶溶液,4℃保存。
优选的，根据所述S5步骤所述葡萄糖标准曲线的制作方法：分别量取葡萄糖标准溶液分组测定吸光值,以葡萄糖含量为横坐标,以光密度为纵坐标绘制标准曲线；所述蛋白标准曲线精密称取标准蛋白质溶液，对不同容量的蛋白质溶液分组进行测定吸光度值,蛋白浓度(μg·mL-1)为横坐标,以光密度为纵坐标绘制标准曲线；肽聚糖内的总糖含量和蛋白含量无法直接检测得到，通过制作出葡萄糖含量标准曲线和蛋白质标准曲线，可以通过回归方程公式进行换算，从而得到肽聚糖内总糖和蛋白质含量。
优选的，所述升降机构包括螺纹杆；所述螺纹杆转动连接有U形安装架的顶部；所述螺纹杆滑动连接在搁置盘中间的连接孔内壁上；所述螺纹杆的顶部固定连接有连接销；所述螺纹杆的底部穿过U形安装架并转动连接有在槽体的底部；所述螺纹杆的表面上螺纹连接有驱动板；所述驱动板位于U形安装架的内侧；所述驱动板顶部的两端均固定连接有支撑杆；所述支撑杆的顶部穿出U形安装架；两个所述支撑杆的顶部共同固定连接在搁置盘底部；工作时，如果搁置盘无法调节高度，在将艾考糊精存储瓶搁置到搁置盘的过程中，需要在工作人员将艾考糊精存储瓶深入到水内部，容易对水造成污染，通过设置将螺纹杆顶部的连接销表面插接上转盘，可以手动旋转螺纹杆，螺纹杆的外螺纹会驱使驱动板纵向移动，驱动板同步带动支撑杆上下移动，支撑杆同步带动搁置盘纵向移动，达到调节搁置盘高度的效果，在搁置艾考糊精存储瓶时，可以先将搁置盘升出水浴，搁置完成后在通过升降机构调整搁置盘和艾考糊精存储瓶进入至U形安装架顶部即可，方便了工作人员的操作，同时也减少对水浴的污染。
优选的，所述搁置盘等距离环绕设置有四个管状搁置篮；所述管状搁置篮由不锈钢制成；所述管状搁置篮内壁的两侧均通过弹性机构连接有弧形夹持板；工作时，艾考糊精存储瓶搁置在搁置盘的顶部，由于槽体内的水在搅拌叶和翻动叶的作用下，会不断的流动，会对艾考糊精存储瓶造成晃动，艾考糊精存储瓶不能稳定地搁置在搁置盘顶部，艾考糊精存储瓶容易落至槽体搁置盘外部，造成艾考糊精存储瓶的损坏，影响测定的进程，通过设置管状搁置篮，可以将艾考糊精存储瓶搁置在管状搁置篮内部，可以同时对四个艾考糊精存储瓶进行同步分隔开，同步进行热处理，并且在弧形夹持板的作用下，可以将艾考糊精存储瓶夹持在管状搁置篮内部，避免艾考糊精存储瓶的晃动，因此避免艾考糊精存储瓶脱离管状搁置篮和搁置盘，使得整个热处理的过程更加稳定，避免造成艾考糊精存储瓶的损坏，保证了对热处理工作流程的正常进行。
优选的，所述弹性机构包括两个连接杆；两个所述连接杆固定连接在弧形夹持板的侧面；所述连接杆端部穿过管状搁置篮并连接有限位端；所述连接杆的表面套接有支撑弹簧；所述支撑弹簧的两端分别固定连接在管状搁置篮表面和限位端内侧；工作时，弧形夹持板需要对艾考糊精存储瓶进行夹持，需要外部的力进行支撑，如果使用直线驱动装置进行推动，不便于控制夹持力度，会对艾考糊精存储瓶损耗，通过设置支撑弹簧和连接杆，起到了对弧形夹持板提供夹持力的作用，并且可以通过艾考糊精存储瓶将两侧的弧形夹持板撑开，将艾考糊精存储瓶插入两个弧形夹持板之间，即可实现固定，无需外部直线驱动装置进行驱动，简单方便，并且支持弹簧提供的夹持复位力是柔性的，不会对艾考糊精存储瓶产生较大作用力，减少磨损。
优选的，所述弧形夹持板的顶部固定连接有向外侧偏移的弧面引入板；工作时，将艾考糊精存储瓶插入两个弧形夹持板之间时，需要手动将两个弧形夹持板调整开，但是插入艾考糊精存储瓶还是容易磕到弧形夹持板的顶端，不便于工作人员操作，通过设置弧面引入板，无需作用弧形夹持板，直接将艾考糊精存储瓶插入两个弧面引入板之间，在弧面引入板的弧面滑动支撑下，自动推开两侧的弧形夹持板，直至艾考糊精存储瓶进入两个弧形夹持板之间，夹持完成，方便了工作人员的操作，方便了对准，并且不会对艾考糊精存储瓶底造成较大磕碰，给工作人员提供了便利。
优选的，所述棘轮机构包括槽轮，所述槽轮的表面等距离环绕开设有四个圆弧槽，并且所述槽轮正面的四个拐角均开设有槽口，所述槽轮固定连接在第一转轴延伸出槽体背面的端部，所述槽轮顶部的圆弧槽内壁上滑动连接有传动轮，所述传动轮的背面通过连接轴转动连接在槽体背面，所述传动轮表面的一侧与驱动齿轮表面相互啮合，所述传动轮的正面固定连接有连接杆，所述连接杆远离传动轮圆心的端部固定连接有驱动销，所述驱动销滑动连接在槽口内壁上；工作时，如果驱动齿轮直接驱动第一转轴转动时，第一转轴会不断带动翻动叶进行转动，会将螺旋电阻丝周围水进行较猛烈地翻动，导致水还没有得到充分加热就被翻动走，影响加热，通过设置槽轮和传动轮，可以将第二转轴的转动力间歇式传递到第一转轴，使得第一转轴带动翻动叶缓慢翻动一段距离离后间歇一下再进行翻动，避免翻动叶翻转太频繁、太迅速而造成螺旋电阻丝周围水无法进行充分加热的问题，有利于对水的充分加热。
本发明的有益效果如下：
1.本发明所述的一种用于测定艾考糊精中肽聚糖的方法，通过设置第一转轴、翻动叶、第二转轴、搅拌叶、电机、驱动齿轮、传动齿轮、棘轮机构，起到了对搁置盘周围的水进行均匀混合的作用，并且将螺旋电阻丝产生的热量进行均匀传递，使得槽体内的水温更加稳定，避免造成搁置盘周围温度存在差异而造成对艾考糊精热处理不均匀的问题，从而保证了对艾考糊精彻底热处理，缩小了实验误差，提高了对肽聚糖测定的准确性。
2.本发明所述的一种用于测定艾考糊精中肽聚糖的方法，通过设置管状搁置篮、弹性机构、连接销、限位端、支撑弹簧、弧形夹持板、弧面引入板，不仅方便了工作人员将艾考糊精存储瓶稳定地固定在搁置篮的顶部，并且方便了工作人员将艾考糊精存储瓶安全安装到管状搁置篮内，一方面对艾考糊精存储瓶进行了稳定地支撑，避免艾考糊精存储瓶的晃动，因此避免艾考糊精存储瓶脱离管状搁置篮和搁置盘，使得整个热处理的过程更加稳定，避免造成艾考糊精存储瓶的损坏，保证了对热处理工作流程的正常进行，另一方面方便了工作人员的安装，减少安装时对艾考糊精存储瓶的磨损。
附图说明
下面结合附图对本发明作进一步说明。
图1是本发明的测定流程图；
图2是本发明中电热恒温水槽局部剖面后的第一立体图；
图3是本发明中电热恒温水槽局部剖面后的第二立体图；
图4是本发明中搁置盘、管状搁置篮及螺纹杆连接情况的局部剖面立体图；
图5是图4中A部分局部放大图；
图6是本发明中电热恒温水槽的第一立体图；
图7是本发明中电热恒温水槽的第二立体图；
图8是本发明中葡萄糖标准曲线；
图9是本发明中蛋白质标准曲线；
图中：槽体1、保温内层101、外壳层102、密封盖2、进水管3、U形电阻丝安装架4、通水槽5、螺旋电阻丝6、U形安装架7、温感器8、升降机构9、螺纹杆901、连接销902、驱动板903、支撑杆904、搁置盘10、第一转轴11、翻动叶12、第二转轴13、搅拌叶14、电机15、驱动齿轮16、传动齿轮17、棘轮机构18、槽轮1801、槽口1802、传动轮1803、连接杆1804、驱动销1805、管状搁置篮19、弹性机构20、连接杆2001、限位端2002、支撑弹簧2003、弧形夹持板21、弧面引入板22。
具体实施方式
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。
如图1至图9所示，本发明所述的一种用于测定艾考糊精中肽聚糖的方法，该测定艾考糊精中肽聚糖的方法包括以下步骤：
S1.取15g艾考糊精置电热恒温水槽内进行水浴中，处于65℃水浴40min,并且持续对水浴进行加热均匀处理，使得艾考糊精失去活性,然后加入0.5%TritonX-100溶液50mL,80～85℃水浴1h,同时不断连续搅拌溶液；取出溶液置冰浴中,使之立即冷却,20000g离心10min后弃上清,沉淀再用双蒸水充分洗涤2次,每次20000×g离心10min弃上清；再依次用甲醇:水(2:lV/V)、甲醇、丙酮同前连续洗涤,去除沉淀中的去垢剂；如果热处理时，水浴中水无法均匀对艾考糊精进行均匀加热，会造成艾考糊精无法被充分受热，造成部分处理完成，部分还未彻底处理，通过电热恒温水槽内的水进行均匀受热，使得水各位置的水温相同，观测起来更加容易，从而避免造成温度过高或者温度过低而造成艾考糊精无法被均匀热处理的问题，保证对艾考糊精充分的热处理，保证对艾考糊精热处理的彻底性，避免造成部分热处理完成部分未热处理完成的情况，从而确保对肽聚糖测定的准确性；通过设置TritonX-100、甲醇:水(2:lV/V)、甲醇和丙酮进行充分清洗，避免污垢对艾考糊精产生的污染，降低了外部因素的影响，降低测定误差；
S2.上述沉淀加入40mL酶溶液Ⅰ,37℃水浴消化14h,4℃20000×g离心40min弃上清；沉淀再用40mL酶溶液同前处理,接着用20mL酶溶液处理20min,同前离心弃上清；沉淀用20mL酶溶液再消化14h,然后4℃20000×g离心40min弃上清，得到沉淀物；通过美容液将艾考糊精内除了肽聚糖以外的物质进行充分溶解，避免造成残留而影响提取肽聚糖的纯度，从而有效保证测定质量；
S3.所得沉淀再依次经甲醇、甲醇:氯仿(1:1V/V)及氯仿各40mL洗涤脱脂,离心方法同前；脱脂后的提取物用20mL酶溶液在37℃水浴14h消化,重复3次，消化后的提取物用去离子水在4℃条件下连续透析3d；最后,提取物经0.01mol·L-1H2SO410mL85～95℃处理5min；冰水浴中立即冷却,4℃15000×g离心30min后弃上清,沉淀用去离子水在4℃条件下连续透析7d,冷冻干燥后置4℃保存备用，得到肽聚糖；沉淀物中会残留大量的物质，这些物质时酶溶液清理沉淀物中脱脂后产生的其他杂物组成，通过离子水进行反复透析，得到较纯的肽聚糖，避免杂物影响肽聚糖的纯度，降低测定肽聚糖的误差；
S4.取出适量，将肽聚糖用适量生理盐水充分溶解后,投入超声波破碎器内进行充分破碎,破碎后收集出的样品作为检测总糖含量和蛋白质含量的样品；如果破碎不彻底，会造成肽聚糖组分蛋白质和总糖无法被彻底分离，造成各自成分的纯度降低，影响测定质量，通过充分破碎，使得肽聚糖内的蛋白质和总糖量进行充分分离，保证各自成分的纯度，提高测定质量；
S5.采用酚-硫酸法，制作出葡萄糖标准曲线的，并同步对肽聚糖中总糖含量进行测定采用Lowry法对蛋白含量测定，制作出蛋白标准曲线，并同步对肽聚糖中蛋白质含量进行测定；
其中，方法S1中电热恒温水槽包括槽体1，槽体1包括保温内层101和外壳层102；所述槽体1的顶部铰接有密封盖2；所述槽体1背面靠顶部拐角的位置连通有进水管3；所述槽体1内壁的两侧均固定连接有U形电阻丝安装架4；所述U形电阻丝安装架4的表面上开设有线性排列的通水槽5；所述U形电阻丝安装架4的内壁上固定连接有线性排列的螺旋电阻丝6；所述槽体1内壁底部的中间位置固定连接有U形安装架7；所述U形安装架7的背面固定安装有温感器8；所述U形安装架7的顶部通过升降机构9连接有搁置盘10；所述槽体1内壁靠近底部的位置转动连接有两个相互平行且对称设置的第一转轴11；所述第一转轴11的表面上固定连接有翻动叶12；所述槽体1的内壁上且位于翻动叶12上方的位置转动连接有两个相互平行且对称设置的第二转轴13；所述第二转轴13的表面固定连接有线性排列的搅拌叶14；所述搅拌叶14分布在U形安装架7的一旁；其中一个所述第二转轴13的前端穿过槽体1并连接有电机15；所述第二转轴13的后端穿过槽体1并连接有驱动齿轮16；两个所述驱动齿轮16之间共同啮合有传动齿轮17；所述传动齿轮17通过支撑轴转动连接在槽体1背面；所述驱动齿轮16的表面通过棘轮机构18与第一转轴11传动连接；工作时，通过设置温感器8，可以与外接显示控制装置进行连接，起到了对水槽内部的水进行及时监控的作用，方便对水温度的控制；槽体1会对内部的温度进行传导，造成热量的散失，通过设置保温内层101，可以将槽体1内部的热量进行保温，避免造成槽体1对热量快速散热的问题；槽体1内壁两侧的螺旋电阻丝6给槽体1内的水提供加热源，U形电阻丝安装架4会对螺旋电阻丝6周围水的流动造成阻挡，通过在U形电阻丝安装架4的表面开设通水槽5，一方面可以避免U形电阻丝安装架4对螺旋电阻丝6周围水流动造成阻碍的问题，保证水在螺旋电阻丝6周围的正常流动，进而保证热量的均匀传递，另一方面可以对螺旋电阻丝6的周围进行保护，避免工作人员在操作的过程中触碰到螺旋电阻丝6而造成伤害的问题，对螺旋电阻丝6进行了遮挡保护；在将艾考糊精存储瓶搁置到搁置盘10上，如果搁置盘10的位置固定，需要在工作人员将艾考糊精存储瓶深入到水内部，并且容易对水造成污染，通过设置升降机构9和U形安装架7，可以调节搁置盘10的位置，在搁置艾考糊精存储瓶时，可以先将搁置盘10升出水浴，搁置完成后在通过升降机构9调整搁置盘10和艾考糊精存储瓶进入至U形安装架7顶部即可，方便了工作人员的操作，同时也减少对水浴的污染；然后在热处理的过程中，通过外设的控制器控制电机15启动，电机15带动第二转轴13转动，第二转轴13同步带动搅拌叶14和驱动齿轮16转动，两个驱动齿轮16在传动齿轮17的传动下同向同步转动，驱动齿轮16通过棘轮机构18传动第一转轴11，第一转轴11同步带动翻动叶12将螺旋电阻丝6附近加热后的水向内侧翻动，并且被翻动向内侧的水可以同步被搅拌叶14进行混合搅拌，使得搁置盘10两侧的水得到均匀混合，使得槽体1内的水温更加稳定，避免造成搁置盘10周围温度存在差异而造成对艾考糊精热处理不均匀的问题，从而保证了对艾考糊精彻底热处理，缩小了实验误差，提高了对肽聚糖测定的准确性。
作为本发明的一种实施方式，所述超声波破碎器在160W的功率下对肽聚糖进行20～30min的破碎；工作时，如果破碎时间太短，会造成将肽聚糖内的总糖和蛋白质分离不彻底，影响S3方法中的数据检测，处于160W的功率下对进行20～30min的破碎，可以充分对肽聚糖进行离心，从而将总糖含量和蛋白质含量进行彻底分开，并进行采集，保证S3方法中得到的检测样品是有保证的。
作为本发明的一种实施方式，所述酶溶液Ⅰ:MgCl20.1017g,蛋白酶,溶解于50mLTris-HCl(pH7.2)溶液中,使之成为内含MgCl(21mg·mL-1)、蛋白酶(1mg·mL-1)的酶溶液,4℃保存。
作为本发明的一种实施方式，根据所述S5步骤所述葡萄糖标准曲线的制作方法：分别量取葡萄糖标准溶液分组测定吸光值,以葡萄糖含量为横坐标,以光密度为纵坐标绘制标准曲线；所述蛋白标准曲线精密称取标准蛋白质溶液，对不同容量的蛋白质溶液分组进行测定吸光度值,蛋白浓度(μg·mL-1)为横坐标,以光密度为纵坐标绘制标准曲线；肽聚糖内的总糖含量和蛋白含量无法直接检测得到，通过制作出葡萄糖含量标准曲线和蛋白质标准曲线，可以通过回归方程公式进行换算，从而得到肽聚糖内总糖和蛋白质含量。
作为本发明的一种实施方式，所述升降机构9包括螺纹杆901；所述螺纹杆901转动连接有U形安装架7的顶部；所述螺纹杆901滑动连接在搁置盘10中间的连接孔内壁上；所述螺纹杆901的顶部固定连接有连接销902；所述螺纹杆901的底部穿过U形安装架7并转动连接有在槽体1的底部；所述螺纹杆901的表面上螺纹连接有驱动板903；所述驱动板903位于U形安装架7的内侧；所述驱动板903顶部的两端均固定连接有支撑杆904；所述支撑杆904的顶部穿出U形安装架7；两个所述支撑杆904的顶部共同固定连接在搁置盘10底部；工作时，如果搁置盘10无法调节高度，在将艾考糊精存储瓶搁置到搁置盘10的过程中，需要在工作人员将艾考糊精存储瓶深入到水内部，容易对水造成污染，通过设置将螺纹杆901顶部的连接销902表面插接上转盘，可以手动旋转螺纹杆901，螺纹杆901的外螺纹会驱使驱动板903纵向移动，驱动板903同步带动支撑杆904上下移动，支撑杆904同步带动搁置盘10纵向移动，达到调节搁置盘10高度的效果，在搁置艾考糊精存储瓶时，可以先将搁置盘10升出水浴，搁置完成后在通过升降机构9调整搁置盘10和艾考糊精存储瓶进入至U形安装架7顶部即可，方便了工作人员的操作，同时也减少对水浴的污染。
作为本发明的一种实施方式，所述搁置盘10等距离环绕设置有四个管状搁置篮19；所述管状搁置篮19由不锈钢制成；所述管状搁置篮19内壁的两侧均通过弹性机构20连接有弧形夹持板21；工作时，艾考糊精存储瓶搁置在搁置盘10的顶部，由于槽体1内的水在搅拌叶14和翻动叶12的作用下，会不断的流动，会对艾考糊精存储瓶造成晃动，艾考糊精存储瓶不能稳定地搁置在搁置盘10顶部，艾考糊精存储瓶容易落至槽体1搁置盘10外部，造成艾考糊精存储瓶的损坏，影响测定的进程，通过设置管状搁置篮19，可以将艾考糊精存储瓶搁置在管状搁置篮19内部，可以同时对四个艾考糊精存储瓶进行同步分隔开，同步进行热处理，并且在弧形夹持板21的作用下，可以将艾考糊精存储瓶夹持在管状搁置篮19内部，避免艾考糊精存储瓶的晃动，因此避免艾考糊精存储瓶脱离管状搁置篮19和搁置盘10，使得整个热处理的过程更加稳定，避免造成艾考糊精存储瓶的损坏，保证了对热处理工作流程的正常进行。
作为本发明的一种实施方式，所述弹性机构20包括两个连接杆2001；两个所述连接杆2001固定连接在弧形夹持板21的侧面；所述连接杆2001端部穿过管状搁置篮19并连接有限位端2002；所述连接杆2001的表面套接有支撑弹簧2003；所述支撑弹簧2003的两端分别固定连接在管状搁置篮19表面和限位端2002内侧；工作时，弧形夹持板21需要对艾考糊精存储瓶进行夹持，需要外部的力进行支撑，如果使用直线驱动装置进行推动，不便于控制夹持力度，会对艾考糊精存储瓶损耗，通过设置支撑弹簧2003和连接杆2001，起到了对弧形夹持板21提供夹持力的作用，并且可以通过艾考糊精存储瓶将两侧的弧形夹持板21撑开，将艾考糊精存储瓶插入两个弧形夹持板21之间，即可实现固定，无需外部直线驱动装置进行驱动，简单方便，并且支持弹簧提供的夹持复位力是柔性的，不会对艾考糊精存储瓶产生较大作用力，减少磨损。
作为本发明的一种实施方式，所述弧形夹持板21的顶部固定连接有向外侧偏移的弧面引入板22；工作时，将艾考糊精存储瓶插入两个弧形夹持板21之间时，需要手动将两个弧形夹持板21调整开，但是插入艾考糊精存储瓶还是容易磕到弧形夹持板21的顶端，不便于工作人员操作，通过设置弧面引入板22，无需作用弧形夹持板21，直接将艾考糊精存储瓶插入两个弧面引入板22之间，在弧面引入板22的弧面滑动支撑下，自动推开两侧的弧形夹持板21，直至艾考糊精存储瓶进入两个弧形夹持板21之间，夹持完成，方便了工作人员的操作，方便了对准，并且不会对艾考糊精存储瓶底造成较大磕碰，给工作人员提供了便利。
作为本发明的一种实施方式，所述棘轮机构18包括槽轮1801，所述槽轮1801的表面等距离环绕开设有四个圆弧槽，并且所述槽轮1801正面的四个拐角均开设有槽口1802，所述槽轮1801固定连接在第一转轴11延伸出槽体1背面的端部，所述槽轮1801顶部的圆弧槽内壁上滑动连接有传动轮1803，所述传动轮1803的背面通过连接轴转动连接在槽体1背面，所述传动轮1803表面的一侧与驱动齿轮16表面相互啮合，所述传动轮1803的正面固定连接有连接杆1804，所述连接杆1804远离传动轮1803圆心的端部固定连接有驱动销1805，所述驱动销1805滑动连接在槽口1802内壁上；工作时，如果驱动齿轮直接驱动第一转轴11转动时，第一转轴11会不断带动翻动叶12进行转动，会将螺旋电阻丝6周围水进行较猛烈地翻动，导致水还没有得到充分加热就被翻动走，影响加热，通过设置槽轮1801和传动轮1803，可以将第二转轴13的转动力间歇式传递到第一转轴11，使得第一转轴11带动翻动叶12缓慢翻动一段距离离后间歇一下再进行翻动，避免翻动叶12翻转太频繁、太迅速而造成螺旋电阻丝6周围水无法进行充分加热的问题，有利于对水的充分加热。
本发明所述的一种用于测定艾考糊精中肽聚糖的方法的实施例如下：
分别量取葡萄糖标准溶液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9mL置于容积为20mL的试管中(见表1),补加蒸馏水至1mL,再分别加入5%的苯酚(重蒸馏)溶液1.0mL,加入5mL浓硫酸,立即摇匀,置沸水浴中水浴30min,取出快速冷却至室温,以空白作对照,于490nm处测定各管吸光值,以葡萄糖含量(μg·mL-1)为横坐标,以光密度为纵坐标绘制标准曲线如图8；取16支大试管,1支作空白,3支留作未知样品,其余试管分成两组,分别加入0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL标准蛋白质溶液(浓度为250μg·mL-1,见表2)，用水补足至1.0mL,向各管中加入5mLFolin-酚试剂甲,在旋涡混合器上迅速混匀,于室温(20～25℃)放置10min。再逐管加入0.5mLFolin-酚试剂乙,同样立即混匀(这一步混合速度要快,否则会使显色程度减弱)。然后在室温下放置30min,以未加蛋白质溶液的第7支试管作为空白对照,于650nm处测定各管中溶液的吸光度值,以白蛋白浓度(μg·mL-1)为横坐标,以光密度为纵坐标绘制标准曲线如图9。
Figure 95669DEST_PATH_IMAGE002
Figure 403022DEST_PATH_IMAGE004
通过表1和表2 的数据可以得出： 以葡萄糖含量( μg·mL-1) 为横坐标, 以光密度为纵坐标绘制葡萄糖标准曲线 ( 见 图 8) , 并 得 到 回 归 方 程 : Y=10.028X- 0.049( R2=0.9993)；由表 2可知, 以蛋白质浓度( μg·mL- 1) 为横坐标, 以光密度为纵坐标绘制得到了蛋白质标准曲线(见图9) , 同时得到回归方程 Y=0.0012X- 0.0106( R2=0.9995)。
对三个总糖浓度为0.081、0.108、0.162mg·mL- 1的三只样品通过回归方程进行计算，得出肽聚糖总糖的百分含量分别为33.35、34.49、35.23, 即可求出制备的肽聚糖总糖百分含量的平均为34.36%。
试验中将质量为 3.1 mg 的样品溶于 1 mL 去离子水中, 然后又将其稀释 10倍后测得OD值为0.1704, 根据回归方程计算得出该溶液中蛋白质含量为150.8333 μg·mL-1, 并且对蛋白质标准也进行凯氏定氮, 得出蛋白质标准的纯度为96.95%, 由此得出样品中蛋白质含量为47.15%，从而得出肽聚糖内蛋白质的含量为 47.15%。
然后通过使用无法对水浴进行均匀受热的电热恒温水槽对艾考糊精进行受热处理，另外制作出三只肽聚糖中总糖的样品和三只肽聚糖中蛋白质的样品，进行重复实验，得出结果肽聚糖总糖百分含量的平均为25.3%，蛋白质含量为 30.5%，明显低于可以通过均匀受热的电热恒温水槽后得出的数据，因此可以得出均匀受热的电热恒温水槽，可以对艾考糊精进行充分热处理，并且对肽聚糖后期分离出蛋白质和多糖起到促进作用，缩小了实验误差，提高了对肽聚糖测定的准确性。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (9)

1.一种用于测定艾考糊精中肽聚糖的方法，其特征在于，该测定艾考糊精中肽聚糖的方法包括以下步骤：
S1.取15g艾考糊精置电热恒温水槽内进行水浴中，处于65℃水浴40min，并且持续对水浴进行加热均匀处理，使得艾考糊精失去活性，然后加入0.5%TritonX-100溶液50mL，80～85℃水浴1h，同时不断连续搅拌溶液；取出溶液置冰浴中，使之立即冷却，20000g离心10min后弃上清，沉淀再用双蒸水充分洗涤2次，每次20000×g离心10min弃上清；再依次用甲醇:水(2:lV/V)、甲醇、丙酮同前连续洗涤，去除沉淀中的去垢剂；
S2.上述沉淀加入40mL酶溶液Ⅰ，37℃水浴消化14h，4℃20000×g离心40min弃上清；沉淀再用40mL酶溶液同前处理，接着用20mL酶溶液处理20min，同前离心弃上清；沉淀用20mL酶溶液再消化14h，然后4℃20000×g离心40min弃上清，得到沉淀物；
S3.所得沉淀再依次经甲醇、甲醇:氯仿(1:1V/V)及氯仿各40mL洗涤脱脂，离心方法同前；脱脂后的提取物用20mL酶溶液在37℃水浴14h消化，重复3次，消化后的提取物用去离子水在4℃条件下连续透析3d；最后，提取物经0.01mol·L-1H2SO410mL85～95℃处理5min；冰水浴中立即冷却，4℃15000×g离心30min后弃上清，沉淀用去离子水在4℃条件下连续透析7d，冷冻干燥后置4℃保存备用，得到肽聚糖；
S4.取出适量，将肽聚糖用适量生理盐水充分溶解后，投入超声波破碎器内进行充分破碎，破碎后收集出的样品作为检测总糖含量和蛋白质含量的样品；
S5.采用酚-硫酸法，制作出葡萄糖标准曲线的，并同步对肽聚糖中总糖含量进行测定采用Lowry法对蛋白含量测定，制作出蛋白标准曲线，并同步对肽聚糖中蛋白质含量进行测定；
其中，方法S1中所述电热恒温水槽包括槽体(1)，槽体(1)包括保温内层(101)和外壳层(102)；所述槽体(1)的顶部铰接有密封盖(2)；所述槽体(1)背面靠顶部拐角的位置连通有进水管(3)；所述槽体(1)内壁的两侧均固定连接有U形电阻丝安装架(4)；所述U形电阻丝安装架(4)的表面上开设有线性排列的通水槽(5)；所述U形电阻丝安装架(4)的内壁上固定连接有线性排列的螺旋电阻丝(6)；所述槽体(1)内壁底部的中间位置固定连接有U形安装架(7)；所述U形安装架(7)的背面固定安装有温感器(8)；所述U形安装架(7)的顶部通过升降机构(9)连接有搁置盘(10)；所述槽体(1)内壁靠近底部的位置转动连接有两个相互平行且对称设置的第一转轴(11)；所述第一转轴(11)的表面上固定连接有翻动叶(12)；所述槽体(1)的内壁上且位于翻动叶(12)上方的位置转动连接有两个相互平行且对称设置的第二转轴(13)；所述第二转轴(13)的表面固定连接有线性排列的搅拌叶(14)；所述搅拌叶(14)分布在U形安装架(7)的一旁；其中一个所述第二转轴(13)的前端穿过槽体(1)并连接有电机(15)；所述第二转轴(13)的后端穿过槽体(1)并连接有驱动齿轮(16)；两个所述驱动齿轮(16)之间共同啮合有传动齿轮(17)；所述传动齿轮(17)通过支撑轴转动连接在槽体(1)背面；所述驱动齿轮(16)的表面通过棘轮机构(18)与第一转轴(11)传动连接。
2.根据权利要求1所述的一种用于测定艾考糊精中肽聚糖的方法，其特征在于：所述超声波破碎器在160W的功率下对肽聚糖进行20～30min的破碎。
3.根据权利要求1所述的一种用于测定艾考糊精中肽聚糖的方法，其特征在于：所述酶溶液Ⅰ:MgCl20.1017g，蛋白酶，溶解于50mLTris-HCl(pH7.2)溶液中，使之成为内含MgCl(21mg·mL-1)、蛋白酶(1mg·mL-1)的酶溶液，4℃保存。
4.根据权利要求1所述的一种用于测定艾考糊精中肽聚糖的方法，其特征在于：根据所述S5步骤所述葡萄糖标准曲线的制作方法：分别量取葡萄糖标准溶液分组测定吸光值，以葡萄糖含量为横坐标，以光密度为纵坐标绘制标准曲线；所述蛋白标准曲线精密称取标准蛋白质溶液，对不同容量的蛋白质溶液分组进行测定吸光度值，蛋白浓度(μg·mL-1)为横坐标，以光密度为纵坐标绘制标准曲线。
5.根据权利要求1所述的一种用于测定艾考糊精中肽聚糖的方法，其特征在于：所述升降机构(9)包括螺纹杆(901)；所述螺纹杆(901)转动连接有U形安装架(7)的顶部；所述螺纹杆(901)滑动连接在搁置盘(10)中间的连接孔内壁上；所述螺纹杆(901)的顶部固定连接有连接销(902)；所述螺纹杆(901)的底部穿过U形安装架(7)并转动连接有在槽体(1)的底部；所述螺纹杆(901)的表面上螺纹连接有驱动板(903)；所述驱动板(903)位于U形安装架(7)的内侧；所述驱动板(903)顶部的两端均固定连接有支撑杆(904)；所述支撑杆(904)的顶部穿出U形安装架(7)；两个所述支撑杆(904)的顶部共同固定连接在搁置盘(10)底部。
6.根据权利要求1所述的一种用于测定艾考糊精中肽聚糖的方法，其特征在于：所述搁置盘(10)等距离环绕设置有四个管状搁置篮(19)；所述管状搁置篮(19)由不锈钢制成；所述管状搁置篮(19)内壁的两侧均通过弹性机构(20)连接有弧形夹持板(21)。
7.根据权利要求6所述的一种用于测定艾考糊精中肽聚糖的方法，其特征在于：所述弹性机构(20)包括两个连接杆(2001)；两个所述连接杆(2001)固定连接在弧形夹持板(21)的侧面；所述连接杆(2001)端部穿过管状搁置篮(19)并连接有限位端(2002)；所述连接杆(2001)的表面套接有支撑弹簧(2003)；所述支撑弹簧(2003)的两端分别固定连接在管状搁置篮(19)表面和限位端(2002)内侧。
8.根据权利要求6所述的一种用于测定艾考糊精中肽聚糖的方法，其特征在于：所述弧形夹持板(21)的顶部固定连接有向外侧偏移的弧面引入板(22)。
9.根据权利要求1所述的一种用于测定艾考糊精中肽聚糖的方法，其特征在于：所述棘轮机构(18)包括槽轮(1801)，所述槽轮(1801)的表面等距离环绕开设有四个圆弧槽，并且所述槽轮(1801)正面的四个拐角均开设有槽口(1802)，所述槽轮(1801)固定连接在第一转轴(11)延伸出槽体(1)背面的端部，所述槽轮(1801)顶部的圆弧槽内壁上滑动连接有传动轮(1803)，所述传动轮(1803)的背面通过连接轴转动连接在槽体(1)背面，所述传动轮(1803)表面的一侧与驱动齿轮(16)表面相互啮合，所述传动轮(1803)的正面固定连接有连接杆(1804)，所述连接杆(1804)远离传动轮(1803)圆心的端部固定连接有驱动销(1805)，所述驱动销(1805)滑动连接在槽口(1802)内壁上。
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Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101514956A (zh) * 2008-08-18 2009-08-26 北京九州泰康生物科技有限责任公司 一类分子检测系统
CN103396496A (zh) * 2013-07-16 2013-11-20 宁波大学 一种改性嗜酸乳杆菌肽聚糖的制备方法
CN104474531A (zh) * 2011-06-19 2015-04-01 纽约大学 治疗和预防金黄色葡萄球菌感染及相关病状的方法
WO2016100383A1 (en) * 2014-12-15 2016-06-23 BugCo, Inc. Compositions and methods for detecting pathogens
CN206803601U (zh) * 2017-05-12 2017-12-26 上海华茂药业有限公司 一种用于乳糖生产的干燥装置
CN207435451U (zh) * 2017-11-10 2018-06-01 河海大学 一种具有搅拌功能的恒温生物反应器
CN208449355U (zh) * 2018-07-16 2019-02-01 光山县博正树脂有限公司 树脂用恒温水浴装置
CN109374884A (zh) * 2018-12-24 2019-02-22 四川沃文特生物技术有限公司 一种pct浓度检测试剂盒及其制备方法
CN209128146U (zh) * 2018-12-04 2019-07-19 上海华茂药业有限公司 一种右旋糖酐生产中废水处理的半自动化装置
WO2019191328A1 (en) * 2018-03-27 2019-10-03 SeLux Diagnostics, Inc. System, method and interface for parallel processing of antimicrobial susceptibility tests using different samples

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101514956A (zh) * 2008-08-18 2009-08-26 北京九州泰康生物科技有限责任公司 一类分子检测系统
CN104474531A (zh) * 2011-06-19 2015-04-01 纽约大学 治疗和预防金黄色葡萄球菌感染及相关病状的方法
CN103396496A (zh) * 2013-07-16 2013-11-20 宁波大学 一种改性嗜酸乳杆菌肽聚糖的制备方法
WO2016100383A1 (en) * 2014-12-15 2016-06-23 BugCo, Inc. Compositions and methods for detecting pathogens
CN206803601U (zh) * 2017-05-12 2017-12-26 上海华茂药业有限公司 一种用于乳糖生产的干燥装置
CN207435451U (zh) * 2017-11-10 2018-06-01 河海大学 一种具有搅拌功能的恒温生物反应器
WO2019191328A1 (en) * 2018-03-27 2019-10-03 SeLux Diagnostics, Inc. System, method and interface for parallel processing of antimicrobial susceptibility tests using different samples
CN208449355U (zh) * 2018-07-16 2019-02-01 光山县博正树脂有限公司 树脂用恒温水浴装置
CN209128146U (zh) * 2018-12-04 2019-07-19 上海华茂药业有限公司 一种右旋糖酐生产中废水处理的半自动化装置
CN109374884A (zh) * 2018-12-24 2019-02-22 四川沃文特生物技术有限公司 一种pct浓度检测试剂盒及其制备方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SEKINE K等: "Significance of bacterial structure of WPG related to antitumoral activity", 《BIOTHERAPY》 *
李莹: "完整肽聚糖提取过程中酶解工艺的研究", 《食品工业》 *

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