CN111393490B - 一种提取密蒙花中蒙花苷的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种提取密蒙花中蒙花苷的方法，在密蒙花加入由柠檬酸、纤维素酶、果胶酶组成的浸泡液，浸泡，取出密蒙花；浸泡后的密蒙花加入破碎机，再加入水、D‑异抗坏血酸钠、氯化钠、L‑半胱氨酸打成浆液，得密蒙花浆液；向密蒙花浆液加入水，再加入发酵菌种、红糖、尿素、硫酸铵、磷酸二氢钾，搅拌均匀，发酵，得密蒙花提取液；所述发酵菌种由海洋芽孢杆菌、黑曲霉、产朊假丝酵母组成；加热回流提取，抽滤，减压浓缩，得浓缩提取物；将浓缩提取物经大孔吸附树脂柱提纯，减压浓缩回收洗脱剂，干燥，得蒙花苷。本方法采用柠檬酸、纤维素酶、果胶酶浸泡密蒙花酶解后打浆，用混合菌种发酵再提取蒙花苷，利于蒙花苷有效成分的浸出，提取率大大提高。
Description
技术领域
本发明涉及植物有效成分提取技术领域，具体是一种提取密蒙花中蒙花苷的方法。
背景技术
密蒙花(Buddleja officinalis Maxim)为马钱科醉鱼草属植物密蒙花的干燥花蕾及花序。其味甘，性微寒，归肝、胆经，具有疏风清热，养肝明目，退翳的功效，用于目赤肿痛，多泪羞明，眼生翳膜，肝虚目暗，视物昏花等症。临床上主要用于干眼症、糖尿病视网膜病变、结膜炎等眼部疾病，疗效显著。
密蒙花主要的药效成分之一为蒙花苷，由刺槐素和一个苷元组成，以两种异构体形式的化合物α体和β体同时存在，是众多黄酮类化合物中活性较高的化合物之一。蒙花苷及其衍生物在植物界分布广泛，存在于许多植物的花、叶、果实中，多以苷的形式存在。近年来国内外研究表明，蒙花苷具有非常广泛的生理和药理活性，对预防糖尿病和改善糖尿病有显著的作用，还具有抑制磷酸二酯酶、醛糖还原酶、金黄色葡萄球菌、乙型溶血链球菌、抗菌等作用，能保护肝脏，并对慢性气管炎有一定疗效。
中国专利201610254587 .8公开了一种ASE方法提取密蒙花中蒙花苷的方法，包括以下步骤：步骤1：将密蒙花粉碎后，过筛；步骤2：称取0 .5重量份密蒙花粉，与0 .5重量份硅藻土混合均匀待用；步骤3：在预先放好过滤膜的萃取池中，加入适量的硅藻土至达到萃取池的池口；盖上萃取池的盖子；步骤4：对萃取池内的混合物进行去酯；步骤5：步骤4结束后，对萃取池内的混合物进行提取；提取结束后得到萃取液。本发明提供了一种ASE方法提取密蒙花中蒙花苷的方法，该方法操作简单，检测精度高。中国专利201810527675 .X公开了一种从密蒙花中提取蒙花苷的制备方法，其特征在于以下步骤：1）取干燥的
密蒙花原料粉碎，过20~60目筛，收集粗粉备用；2）酶解：称取一定量的粗粉，加入料液比为1：3~5、50~70%的乙醇浸泡，并加入粗粉重量0 .1%~0 .3%的生物酶在pH值5，温度为40~50℃的条件下浸泡酶解1~2h；3）将上述酶解液放入温度为70℃的恒温水浴锅内浸提90-120min，浓缩；4）将所得浓缩液上大孔吸附树脂柱，先用2~5倍柱体积的蒸馏水洗脱，再用60~80%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；5）回收试剂，真空干燥即得蒙花苷。本发明制备的蒙花苷，产品纯度高，品质好。当前方法是将蒙花苷粉碎后再用水或乙醇提取，提取后经过大孔吸附树脂纯化，即得蒙花苷。存在提取率较低，且产品的纯度低，且由于蒙花苷结构中存在酚羟基，稳定性较差，直接粉碎后提取很容易发生氧化。
以上背景技术内容的公开仅用于辅助理解本发明的发明构思及技术方案，其并不必然属于本专利申请的现有技术，在没有明确的证据表明上述内容在本专利申请的申请日已经公开的情况下，上述背景技术不应当用于评价本申请的新颖性和创造性。
发明内容
本发明针对当前蒙花苷提取存在的问题，提供一种提取密蒙花中蒙花苷的方法。本方法采用柠檬酸、纤维素酶、果胶酶浸泡密蒙花酶解后再打浆，再用混合菌种发酵后再提取蒙花苷，利于蒙花苷有效成分的浸出，提取率大大提高；打浆过程中加入D-异抗坏血酸钠、氯化钠、L-半胱氨酸，使得药材不易发生氧化，提高蒙花苷的稳定性。
为了实现以上目的，本发明采用的技术方案如下：
一种提取密蒙花中蒙花苷的方法，包括如下步骤：
(1)将密蒙花采摘后经冷冻24-48h，取出用温水解冻，在密蒙花加入由柠檬酸、纤维素酶、果胶酶组成的浸泡液，浸泡2-6h，取出密蒙花；
(2)将浸泡后的密蒙花加入破碎机，再加入水、D-异抗坏血酸钠、氯化钠、L-半胱氨酸打成浆液，得密蒙花浆液；
(3)向密蒙花浆液加入6-8倍水，再加入发酵菌种、红糖、尿素、硫酸铵、磷酸二氢钾，搅拌均匀，发酵，得密蒙花提取液；所述发酵菌种由海洋芽孢杆菌、黑曲霉、产朊假丝酵母组成；
(4)将密蒙花提取液加热回流提取，抽滤，减压浓缩，得浓缩提取物；
(5)将浓缩提取物溶于3-5倍蒸馏水，离心，取上清液以2.0-3.0BV/h的上样流速上样于大孔吸附树脂柱上；按2.0-3.0BV/h的洗脱速度洗脱，先用水洗脱至无色透明，再用乙醇和乙醇乙酯洗脱剂洗脱，收集洗脱液，减压浓缩回收洗脱剂，再经干燥，即得蒙花苷。
进一步地，所述密蒙花与柠檬酸、纤维素酶、果胶酶的质量比为100:1-3:0.5-1.5:0.3-0.8。
进一步地，所述水、D-异抗坏血酸钠、氯化钠、L-半胱氨酸与密蒙花的质量比为300-500:0.5-1.5:1-3:0.4-0.6:100。
进一步地，所述发酵菌种、红糖、尿素、硫酸铵、磷酸二氢钾与密蒙花的质量比为1-3:4-8:0.5-1.0:0.3-0.5:0.1-0.3:100。
进一步地，所述发酵菌种由质量比为3-5:0.5-2:1-3的海洋芽孢杆菌、黑曲霉、产朊假丝酵母组成。
进一步地，所述加热回流提取是在温度为70-80℃下回流提取3次，每次提取1.5-2.5h。
进一步地，步骤（5）所述干燥是在温度为-25~-45℃下干燥3-5h，再用60-80℃热风干燥至含水率为4.0-5.5%。
进一步地，所述大孔吸附树脂柱为HPD-100型、AB-8型或X-5型大孔吸附树脂柱。
进一步地，所述洗脱剂由体积比为1-3:1的乙醇和乙醇乙酯组成。
进一步地，步骤（3）所述发酵在温度为25-32℃下发酵24-36h。
与现有技术相比，本发明的优点及有益效果为：
1、本方法采用柠檬酸、纤维素酶、果胶酶浸泡密蒙花酶解后再打浆，再用混合菌种发酵后再提取蒙花苷，利于蒙花苷有效成分的浸出，提取率大大提高；打浆过程中加入D-异抗坏血酸钠、氯化钠、L-半胱氨酸，使得药材不易发生氧化，提高蒙花苷的稳定性。
2、本方法采用海洋芽孢杆菌、黑曲霉、产朊假丝酵母组成的混合菌种对密蒙花浆液发酵后再提取，海洋芽孢杆菌充分利用微生物间的协同作用，利于蒙花苷的溶出，其中具有较强的产淀粉酶、蛋白酶等能力，可以将大分子淀粉、蛋白物质降解；黑曲霉能分泌纤维素酶等分解纤维素，利于蒙花苷的提取；产朊假丝酵母能分解蛋白质、果胶酶等，分解的蛋白质能为其他微生物提供营养物质。
3、本方法得到的提取液经过大孔吸附树脂柱吸附，再用乙醇和乙酸乙酯洗脱，能够提高蒙花苷纯度，该方法简单，成本较低。
4、本方法提取蒙花苷后先经过冷冻干燥再用热风干燥，能够使得蒙花苷等有效成分不被破坏，干燥彻底，操作简单，成本低。
5、本发明方法密蒙花先冷冻后再用温水解冻，利用两者不同的温差，有利于蒙花苷的提取。
6、本方法蒙花苷的提取量达到17mg/g（以密蒙花鲜重计）以上，蒙花苷的纯度达到98%以上，提取的蒙花苷可广泛应用于食品保鲜、保健品、医药等领域。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细说明。应该强调的是，下述说明仅仅是示例性的，而不是为了限制本发明的范围及其应用。
实施例1
一种提取密蒙花中蒙花苷的方法，包括如下步骤：
（1）将密蒙花采摘后，清洗干净，取100g密蒙花在温度为-45℃下冷冻36h，取出用70℃温水解冻，用2公斤水溶解柠檬酸2.5g、纤维素酶0.8g、果胶酶0.5g，浸泡3h，取出密蒙花；
（2）将浸泡后的密蒙花加入破碎机，再加入1斤水、D-异抗坏血酸钠1.0g、氯化钠2g、L-半胱氨酸0.5g打成浆液，得密蒙花浆液；
（3）向密蒙花浆液加入8斤水，再加入发酵菌种2g、红糖6g、尿素0.8g、硫酸铵0.5g、磷酸二氢钾0.2g，搅拌均匀，发酵，得密蒙花提取液；所述发酵菌种由质量比为4:1:3的海洋芽孢杆菌、黑曲霉、产朊假丝酵母组成；
（4）将密蒙花提取液在温度为75℃下加热回流提取3次，每次提取2h，抽滤，减压浓缩至固含量为40%，得浓缩提取物；
（5）将浓缩提取物溶于4倍蒸馏水，离心，取上清液以2.0BV/h的上样流速上样于AB-8型大孔吸附树脂柱上；按2.0BV/h的洗脱速度洗脱，先用水洗脱至无色透明，再用体积比为2:1的乙醇和乙醇乙酯洗脱剂洗脱，收集洗脱液，减压浓缩回收洗脱剂，在温度为-30℃下干燥5h，再用65℃热风干燥至含水率为4.2%，即得1.927g蒙花苷。利用HPLC检测蒙花苷的纯度达到98.61%。
实施例2
一种提取密蒙花中蒙花苷的方法，包括如下步骤：
（1）将密蒙花采摘后，清洗干净，取100g密蒙花在温度为-45℃下冷冻24h，取出用70℃温水解冻，用2公斤水溶解柠檬酸1.5g、纤维素酶1.2g、果胶酶0.7g，浸泡5h，取出密蒙花；
（2）将浸泡后的密蒙花加入破碎机，再加入400g水、D-异抗坏血酸钠0.8g、氯化钠1.5g、L-半胱氨酸0.6g打成浆液，得密蒙花浆液；
（3）向密蒙花浆液加入7斤水，再加入发酵菌种1.5g、红糖5g、尿素0.5g、硫酸铵0.4g、磷酸二氢钾0.3g，搅拌均匀，发酵，得密蒙花提取液；所述发酵菌种由质量比为3:1:1的海洋芽孢杆菌、黑曲霉、产朊假丝酵母组成；
（4）将密蒙花提取液在温度为70℃下加热回流提取3次，每次提取2.5h，抽滤，减压浓缩至固含量为40%，得浓缩提取物；
（5）将浓缩提取物溶于4倍蒸馏水，离心，取上清液以3.0BV/h的上样流速上样于AB-8型大孔吸附树脂柱上；按3.0BV/h的洗脱速度洗脱，先用水洗脱至无色透明，再用体积比为1:1的乙醇和乙醇乙酯洗脱剂洗脱，收集洗脱液，减压浓缩回收洗脱剂，在温度为-35℃下干燥4h，再用70℃热风干燥至含水率为4.8%，即得1.904g蒙花苷。利用HPLC检测蒙花苷的纯度达到98.14%。
实施例3
一种提取密蒙花中蒙花苷的方法，包括如下步骤：
(1)将密蒙花采摘后，清洗干净，取100g密蒙花在温度为-35℃下冷冻48h，取出用80℃温水解冻，用2公斤水溶解柠檬酸1.0g、纤维素酶1.0g、果胶酶0.5g，浸泡3h，取出密蒙花；
(2)将浸泡后的密蒙花加入破碎机，再加入500g水、D-异抗坏血酸钠0.6g、氯化钠3g、L-半胱氨酸0.4g打成浆液，得密蒙花浆液；
(3)向密蒙花浆液加入8斤水，再加入发酵菌种3g、红糖8g、尿素0.6g、硫酸铵0.5g、磷酸二氢钾0.2g，搅拌均匀，发酵，得密蒙花提取液；所述发酵菌种由质量比为5:1:2的海洋芽孢杆菌、黑曲霉、产朊假丝酵母组成；
(4)将密蒙花提取液在温度为80℃下加热回流提取3次，每次提取2h，抽滤，减压浓缩至固含量为55%，得浓缩提取物；
(5)将浓缩提取物溶于5倍蒸馏水，离心，取上清液以2.5BV/h的上样流速上样于HPD-100型大孔吸附树脂柱上；按2.5BV/h的洗脱速度洗脱，先用水洗脱至无色透明，再用体积比为1:1的乙醇和乙醇乙酯洗脱剂洗脱，收集洗脱液，减压浓缩回收洗脱剂，在温度为-40℃下干燥5h，再用65℃热风干燥至含水率为5.2%，即得2.014g蒙花苷。利用HPLC检测蒙花苷的纯度达到97.06%。
实施例4
一种提取密蒙花中蒙花苷的方法，包括如下步骤：
（1）将密蒙花采摘后，清洗干净，取100g密蒙花在温度为-40℃下冷冻36h，取出用75℃温水解冻，用2公斤水溶解柠檬酸2.5g、纤维素酶1.0g、果胶酶0.8g，浸泡5h，取出密蒙花；
（2）将浸泡后的密蒙花加入破碎机，再加入500g水、D-异抗坏血酸钠1.2g、氯化钠2g、L-半胱氨酸0.5g打成浆液，得密蒙花浆液；
(3)向密蒙花浆液加入7斤水，再加入发酵菌种1.5g、红糖6g、尿素0.8g、硫酸铵0.4g、磷酸二氢钾0.3g，搅拌均匀，发酵，得密蒙花提取液；所述发酵菌种由质量比为4:1:1的海洋芽孢杆菌、黑曲霉、产朊假丝酵母组成；
(4)将密蒙花提取液在温度为70℃下加热回流提取3次，每次提取2.5h，抽滤，减压浓缩至固含量为55%，得浓缩提取物；
(5)将浓缩提取物溶于4倍蒸馏水，离心，取上清液以3.0BV/h的上样流速上样于HPD-100型大孔吸附树脂柱上；按3.0BV/h的洗脱速度洗脱，先用水洗脱至无色透明，再用体积比为3:1的乙醇和乙醇乙酯洗脱剂洗脱，收集洗脱液，减压浓缩回收洗脱剂，在温度为-45℃下干燥4h，再用65℃热风干燥至含水率为4.8%，即得1.816g蒙花苷。利用HPLC检测蒙花苷的纯度达到98.13%。
以上内容是结合具体的/优选的实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，其还可以对这些已描述的实施例做出若干替代或变型，而这些替代或变型方式都应视为属于本发明的保护范围。
Claims (1)
1.一种提取密蒙花中蒙花苷的方法，其特征在于：包括如下步骤：
（1）将密蒙花采摘后经冷冻24-48h，取出用温水解冻，在密蒙花加入由柠檬酸、纤维素酶、果胶酶组成的浸泡液，浸泡2-6h，取出密蒙花；
（2）将浸泡后的密蒙花加入破碎机，再加入水、D-异抗坏血酸钠、氯化钠、L-半胱氨酸打成浆液，得密蒙花浆液；
（3）向密蒙花浆液加入6-8倍水，再加入发酵菌种、红糖、尿素、硫酸铵、磷酸二氢钾，搅拌均匀，发酵，得密蒙花提取液；所述发酵菌种由海洋芽孢杆菌、黑曲霉、产朊假丝酵母组成；
（4）将密蒙花提取液加热回流提取，抽滤，减压浓缩，得浓缩提取物；
（5）将浓缩提取物溶于3-5倍蒸馏水，离心，取上清液以2.0-3.0BV/h的上样流速上样于大孔吸附树脂柱上；按2.0-3.0BV/h的洗脱速度洗脱，先用水洗脱至无色透明，再用乙醇和乙醇乙酯洗脱剂洗脱，收集洗脱液，减压浓缩回收洗脱剂，再经干燥，即得蒙花苷；
所述密蒙花与柠檬酸、纤维素酶、果胶酶的质量比为100:1-3:0.5-1.5:0.3-0.8；
所述水、D-异抗坏血酸钠、氯化钠、L-半胱氨酸与密蒙花的质量比为300-500:0.5-1.5:1-3:0.4-0.6:100；
所述发酵菌种、红糖、尿素、硫酸铵、磷酸二氢钾与密蒙花的质量比为1-3:4-8:0.5-1.0:0.3-0.5:0.1-0.3:100；
所述发酵菌种由质量比为3-5:0.5-2:1-3的海洋芽孢杆菌、黑曲霉、产朊假丝酵母组成；
所述加热回流提取是在温度为70-80℃下回流提取3次，每次提取1.5-2.5h；
步骤（5）所述干燥是在温度为-25~-45℃下干燥3-5h，再用60-80℃热风干燥至含水率为4.0-5.5%；
所述大孔吸附树脂柱为HPD-100型、AB-8型或X-5型大孔吸附树脂柱；
所述洗脱剂由体积比为1-3:1的乙醇和乙醇乙酯组成；
步骤（3）所述发酵在温度为25-32℃下发酵24-36h。
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| GR01 | Patent grant | ||
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