CN111388501B - 埃米银抗病毒溶液在制备抗covid-19病毒药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种埃米银抗病毒溶液在制备抗COVID‑19病毒药物中的应用，埃米银抗病毒溶液包括埃米银单质、无水果糖和蒸馏水，埃米银单质的浓度为0.5～1.0g/L；果糖的浓度为5.0～10.0g/L。本发明的埃米银抗病毒溶液对COVID‑19病毒有抑制作用，可应用于制备抗COVID‑19病毒的药物。

Description

埃米银抗病毒溶液在制备抗COVID-19病毒药物中的应用

技术领域

本发明涉及一种医药技术领域，具体涉及一种埃米银抗病毒溶液在制备抗COVID-19病毒药物中的应用。

背景技术

COVID-19病毒属于β属的冠状病毒，有包膜，颗粒呈圆形或椭圆形，一般 为多形性，直径约60至140纳米。体外分离培养时，96个小时左右即可在人呼吸 道上皮细胞内发现COVID-19病毒。

目前所见传染源主要是COVID-19感染的患者，无症状感染者也可能具有传 染性。经呼吸道飞沫和密切接触传播是主要的传播途径。其潜伏期为1-14天。以 发热、干咳。乏力为主要表现。少数患者伴有鼻塞、流涕、咽痛、肌痛和腹泻 等症状。重症患者多在发病一周后出现呼吸困难和(或)低氧血症，严重者可 快速进展为急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克、难以纠正的代谢性酸中毒和出 凝血功能障碍及多器官功能衰竭等。对于疑似及确诊病例建议隔离收治，一般 使用普通的抗病毒和抗菌药物治疗，建议酌情短期内使用糖皮质激素治疗，对 于重症患者及时给与有效的氧疗措施。但目前尚无有效的抗病毒药物，大剂量的激素治疗具有诱发严重的股骨头坏死等后遗症的风险，一些新型的抗病毒药 物和疫苗也需要较长时间的研发和临床试验。因此，我们急需更有效的防治措 施，以遏制病毒进一步蔓延。

发明内容

为解决上述问题，本发明的目的在于提供一种埃米银抗病毒溶液在制备抗COVID-19病毒药物中的应用。

为了实现上述目的，本发明提供了一种埃米银抗病毒溶液在制备抗 COVID-19病毒药物中的应用，所述埃米银抗病毒溶液包括埃米银单质、无水 果糖和蒸馏水，所述埃米银单质的浓度为0.5～1.0g/L；所述果糖的浓度为5.0～10.0g/L。

上述的应用，进一步的，所述埃米银单质中银颗粒的粒径为1～30埃米， 银颗粒形状为球形或椭圆形，银颗粒的纯度≥99.99％。

上述的应用，进一步的，所述埃米银单质浓度为0.5g/L，所述的果糖浓度 为5.0g/L，所述的双蒸水浓度为994.5g/L。

上述的应用，进一步的，所述埃米银抗病毒溶液的制备方法包括以下步 骤：

S1、将埃米级单质银粉末添加到无菌蒸馏水中，得到埃米银溶液；

S2、对所述埃米银溶液进行第一次超声分散处理得到埃米银水溶液；

S3、加入无水果糖，进行第二次超声分散处理得到果糖包裹的埃米银分散 液；

S4、加热灭菌得到埃米银抗病毒溶液。

上述的应用，进一步的，所述第一次超声分散处理过程中，超声波功率为 5～15KW，频率为30～60KHz，分散时间为50～70s。

上述的应用，进一步的，所述第二次超声分散处理过程中，超声波功率为 10～20KW，频率为110～150KHz，分散时间为10～20s。

上述的应用，进一步的，所述S4中所述加热灭菌的温度为100～130℃， 时间为15～60min。

上述的应用，进一步的，所述抗COVID-19病毒药物为抗COVID-19病毒 注射液。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

(1)本发明提供了一种埃米银抗病毒溶液，由埃米银、果糖和蒸馏水组成， 在确保疗效的前提下，尽可能的减少埃米银抗病毒溶液组合物的成份品种，即 提高了用药安全性，又保留了强效的抗病毒能力，同时果糖的加入使银颗粒能 够均匀单质的分布在溶液中，克服了单纯银微粒团聚的缺点。本申请采用了埃 米级别的银颗粒，埃米银具有高强度、高效应、高稳定的综合作用，使得在同 等浓度下，埃米银的抗病毒效能更强，只需较低浓度即可达到疗效。

(2)本发明提供了一种埃米银抗病毒溶液的制备方法，采取的药品原料和 溶剂均无毒无害，制备工艺简单，可全程使用全自动化生产线进行批量生产， 而且生产过程中所产生的废液只含有微量银离子，只需去除有机化合物及采取 沉淀法回收废银即可，过程简单绿色环保。

(3)本发明提供了一种埃米银抗病毒溶液在抗COVID-19病毒中的应用。 埃米银抗病毒溶液的制备方法过程中，在埃米银中加入蔗糖，为了使蔗糖分子 包裹住埃米银粉末，使埃米银能够在该溶液中具有良好的悬浮稳定性。在本发 明制备方法的控制下，溶液中的埃米银颗粒能够均匀且单个颗粒的被蔗糖所包 裹。

(4)本发明提供了一种埃米银抗病毒溶液在抗COVID-19病毒中的应用， 其中埃米银的抗病毒机制与如下机制相关：1、对病毒进行机械性吸附和固定后， 使病毒失去生存条件而死亡；2、抑制病毒与细胞受体的结合，阻止病毒进入并 感染宿主细胞；3、与病毒核酸结合，使病毒DNA或RNA结构改变，抑制病毒 复制；4、埃米银释放出来银离子对病毒有直接杀灭作用。同时，埃米银副作用 小，可以克服长期服药带来的不便和病毒耐药带来的风险。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施 例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是 本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的 前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明实施例2中不同干预浓度的SARS-CoV-2病毒抑制率的柱状 图。

图2为本发明实施例2中不同干预浓度的细胞抑制率的柱状图。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。在不背离本发 明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属 于本发明的范围。

若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规 手段；若未特别指明，实施例中所用试剂均为市售。

本发明涉及到的百分号“％”，若未特别说明，是指质量百分比；但溶液的 百分比，除另有规定外，是指100mL溶液中含有溶质的克数。

本发明所述重量份可以是μg、mg、g、kg等本领域公知的重量单位，也可 以是其倍数，如1/10、1/100、10倍、100倍等。

无水果糖为药用无水果糖，埃米银材料是将单质金属银和其他含银化合物 利用物理或化学的方法制成埃米级别的金属粉末，粒径大多为100埃米以下， 故称为埃米银。获取流程大致如下：本发明的埃米银，其制备方法包括以下步 骤：

(1)在爆炸室中充入惰性气体氩气使爆炸室中气压保持在1×10⁶Pa，并使 其中的工作温度稳定在8～12℃。

(2)将直径为0.5mm长度为8～12cm的银线持续推入爆炸室中，当银线 与正极电板接触时产生的25kV高压，使银线发生爆炸，将银线瞬间蒸发成银 蒸气等离子体。

(3)将伴有氩气的银蒸汽抽吸至温度设定为0～4℃的急冷室，银蒸汽遇冷 迅速凝固并形成银颗粒。

(4)将银颗粒通过高强度超声波(超声波功率为15KW，频率为15KHz，) 将获得的银颗粒进行分散，将分散后的银颗粒抽吸至去磁装置(相关参数设置 为36V，23Hz和1000mA)中消磁。

(5)通过粒子收集系统将消磁后银颗粒收集起来，根据不同粒径的粒子有 不同的沉降速度，我们根据不同的沉降速度取粒径为0～30埃米，收集至保存 罐，在保存罐中加入惰性气体进行钝化获得成品。

采用上述方法制备得到的埃米级单质银粉末中银颗粒的纯度≥99.99％，银 颗粒粒径为0～30埃米，银颗粒形状为球形或椭圆形，椭圆形的粒径指其长直 径。

实施例1：

一种本发明的埃米银抗病毒溶液，包括：0.5g/L埃米级单质银粉末；5g/L 药用无水果糖；994.5g/L高纯度蒸馏水。其制备方法包括以下步骤：

(1)将粒径为1～30Ang埃米级单质银粉末添加到高纯度蒸馏水中，得到 浓度为0.5g/L的埃米银溶液。

(2)将步骤(1)获得的埃米银溶液使用超声波震荡仪进行超声波分散， 超声波功率为5KW，频率为60KHz，分散时间为60s得到埃米银分散液。

(3)在埃米银分散液中添加果糖，使得果糖浓度为5g/L，使用超声波震荡 仪进行超声波分散，超声波功率为15KW，频率为150KHz，时间为20s；得 到果糖包裹的埃米银分散液。

(4)将步骤(3)获得的果糖包裹的埃米银分散液在115℃在加热灭菌60 min，自然冷却得到埃米银抗病毒溶液。

实施例2：

一种实施例1的埃米银抗病毒溶液在抗COVID-19病毒中的应用，其应用 方法是：

(1)分组：

对照组：蒸馏水；

埃米银抗病毒溶液组一：1ng/μL埃米银抗病毒溶液；

埃米银抗病毒溶液组二：5ng/μL埃米银抗病毒溶液；

埃米银抗病毒溶液组三：10ng/μL埃米银抗病毒溶液。

(2)稳定培养Vero细胞后，将SARS-CoV-2病毒感染该细胞。将感染后的 细胞分成四组，并在各组中分别更换蒸馏水、含有1ng/μL、5ng/μL和10ng/μL 的埃米银抗病毒溶液的培养基，持续培养48h后，用RT-qPCR法检测收集样品 中SARS-CoV-2病毒的复制率；用CCK-8试剂盒检测细胞毒性。

(3)结果：

采用SARS-CoV-2病毒感染Vero细胞模型来验证埃米银抗COVID-19的作 用时，应考虑埃米银诱导Vero细胞毒性导致的病毒复制率降低。一方面我们通 过RT-qPCR方法检测并对比了对照组和经不同浓度埃米银抗病毒溶液处理的 Vero细胞中SARS-CoV-2病毒的复制率。另一方面我们通过CCK-8法检测并对 比了对照组和经不同浓度埃米银抗病毒溶液处理的Vero细胞的存活率。

图1为不同干预浓度的SARS-CoV-2病毒抑制率的柱状图；图中Mock为对 照组。

图2为不同干预浓度的细胞抑制率的曲线图。

如图1和图2所示，当埃米银抗病毒溶液浓度为1ng/μL和5ng/μL时，埃 米银抗病毒溶液对SARS-CoV-2病毒的抑制作用不明显；而当埃米银浓度达到 10ng/μL时，埃米银抗病毒溶液对SARS-CoV-2病毒有显著抑制作用，抑制率达 90％以上。埃米银对Vero细胞的CC₅₀为12.41ng/μL，当埃米银浓度为10ng/μL 时，对Vero细胞的抑制率约30％。扣除其对Vero细胞的抑制作用，10ng/μL埃 米银抗病毒溶液对SARS-CoV-2病毒有显著抑制作用。

实施例3：

一种实施例1的埃米银抗病毒溶液在抗COVID-19病毒中的应用，其应用 方法是：

(1)分组：

对照组：蒸馏水；

埃米银抗病毒溶液组一：1ng/μL埃米银抗病毒溶液；

埃米银抗病毒溶液组二：5ng/μL埃米银抗病毒溶液；

埃米银抗病毒溶液组三：10ng/μL埃米银抗病毒溶液。

将蒸馏水和浓度为1ng/μL、5ng/μL和10ng/μL的埃米银抗病毒溶液持续 干预Vero细胞48h后，通过细胞病变效应(CPE)试验检测在埃米银抗病毒溶 液是否对SARS-CoV-2造成的细胞损伤有抑制作用。

表1：实施例3的CPE试验检测结果表

从表1的结果可知：5ng/μL和10ng/μL对SARS-CoV-2造成的细胞损伤有 抑制作用。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的 限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其 它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由 此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (8)

1.一种埃米银抗病毒溶液在制备抗COVID-19病毒药物中的应用，所述埃米银抗病毒溶液包括埃米银单质、无水果糖和蒸馏水，所述埃米银单质的浓度为0.5～1.0g/L；所述果糖的浓度为5.0～10.0g/L。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述埃米银单质中银颗粒的粒径为1～30埃米，银颗粒形状为球形或椭圆形，银颗粒的纯度≥99.99％。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述埃米银单质浓度为0.5g/L，所述的果糖浓度为5.0g/L，所述的蒸馏水浓度为994.5g/L。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的应用，其特征在于，所述埃米银抗病毒溶液的制备方法包括以下步骤：

S1、将埃米级单质银粉末添加到无菌蒸馏水中，得到埃米银溶液；

S2、对所述埃米银溶液进行第一次超声分散处理得到埃米银水溶液；

S3、加入无水果糖，进行第二次超声分散处理得到果糖包裹的埃米银分散液；

S4、加热灭菌得到埃米银抗病毒溶液。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述第一次超声分散处理过程中，超声波功率为5～15KW，频率为30～60KHz，分散时间为50～70s。

6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述第二次超声分散处理过程中，超声波功率为10～20KW，频率为110～150KHz，分散时间为10～20s。

7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述S4中所述加热灭菌的温度为100～130℃，时间为15～60min。

8.根据权利要求1至3中任一项所述的应用，其特征在于，所述抗COVID-19病毒药物为抗COVID-19病毒注射液。

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