CN111387107A - 一种通过控制亚硝酸盐氮浓度提高合浦绒螯蟹养殖存活率和摄饵量的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种通过控制亚硝酸盐氮浓度提高合浦绒螯蟹养殖存活率和摄饵量的方法。通过亚硝酸盐氮对合浦绒螯蟹96h的急性毒性实验，确定亚硝酸盐氮对合浦绒螯蟹存活率、存活时间和摄饵量的影响。即3mg/L以下亚硝酸盐氮浓度组与对照组(无亚硝酸盐氮)96h存活率差异不显著，2mg/L以下亚硝酸盐氮浓度组与对照组(无亚硝酸盐氮)96h存活时间差异不显著；合浦绒螯蟹养殖的亚硝酸盐氮安全浓度为0.1442mg/L。本发明的目的是通过亚硝氮的急性毒性试验，了解亚硝氮对合浦绒螯蟹的生存产生的影响，从而确定合浦绒螯蟹养殖亚硝酸盐氮的安全浓度提高对合浦绒螯蟹养殖环境控制的准确性和精确度。

Description

一种通过控制亚硝酸盐氮浓度提高合浦绒螯蟹养殖存活率和 摄饵量的方法
技术领域
本发明涉及合浦绒螯蟹养殖方法，尤其是涉及一种用于亚硝酸盐氮浓度环境胁迫合浦绒螯蟹的养殖方法。
背景技术
广西河蟹原学名日本绒螯蟹合浦亚种，后经中科院动物研究所戴爱云先生改名为合浦绒螯蟹(Eriocheir hepuensis Dai)，为方蟹绒螯蟹属。合浦绒螯蟹是80年代在广西南部发现的一种食用蟹。其在广西境内分布的淡水水域包括广西南部所有与南海北部湾相同的河流，主要在玉林地区、钦州地区、北海市及防城港市所辖的县份。合浦毛蟹属杂食性，适应性强，每年秋季洄游至北部湾浅海区交配产卵，翌年2—3月份肉体上溯至江河、湖泊一带生活成长，每年在淡水里的生活期较长。合浦绒螯蟹因味道鲜美，肉质细嫩，营养丰富，个体大，适应性强，生长快、生长周期短等优点而深受消费者和生产者欢迎，成为广西特有的水产名优养殖品种。
近年来，水污染和酷鱼滥捕日益严重，合浦绒螯蟹天然资源越来越少，即使每年捕捞总产量在250t～300t左右，但还是远不能满足市场需求，造成合浦绒螯蟹货少价高，价格不断攀升，人工养殖，已成为提高合浦绒螯蟹产量的必然措施。合浦绒螯蟹产卵量为20×104-90×104粒，体重100g左右的雌蟹第一次产卵的数量可达50×104粒，产卵量大。合浦绒螯蟹产苗期为10月至次年3月。由于北部湾海域等低纬度海域，冬季及春季温度较高，适于合浦绒螯蟹生长发育的时间长，当年产的蟹苗，在自然条件下,一年就可长成成蟹。仅从这点看，合浦绒螯蟹比必须两年长成的中华绒螯蟹更值得养殖。但是，相对已能人工大规模养殖的中华绒螯蟹的完善、系统的养殖生物生态学研究，合浦绒螯蟹的研究相当少，仅有过资源调查、形态学研究、繁殖生物学、生长和生态特性、生物学特性等方面较少的报道。这可能是目前为止，合浦绒螯蟹养殖成功率低、目前尚未大规模养殖的主要原因。随着北部湾钦江水域污染严重，近年来钦州合浦绒螯蟹天然资源锐减，市场上毛蟹价格逐渐上涨，使毛蟹由野生转向大规模人工养殖就变的极为迫切。为了进行人工养殖，提高养殖成功率，提高养殖效益，必须进行系统的养殖生物生态学研究。其中，亚硝酸盐浓度的升高已成为影响水产养殖业发展的主要问题，其对克氏原螯虾(Procambarus clarkii)仔虾和成虾、锈斑蟳(Charybdis feriatus)、拟穴青蟹(Scylla paramamosain)、三疣梭子蟹(Portunustrituberculatus Miers)幼体和幼蟹、中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)幼体均有毒性，但亚硝酸盐氮对合浦绒螯蟹存活和摄饵的影响，国内外尚未见相关报道。
因此，如何提供一种用于亚硝酸盐氮浓度环境胁迫合浦绒螯蟹的养殖方法是本领域亟需解决的问题。
发明内容
为了避免亚硝酸盐氮浓度的骤变对合浦绒螯蟹养殖的存活率造成严重的影响，克服环境因素对养殖合浦绒螯蟹的影响把控不准确的缺点，本发明的目的是提供一种用于亚硝酸盐氮浓度环境胁迫合浦绒螯蟹的养殖方法，通过改变亚硝酸盐氮的浓度梯度对合浦绒螯蟹进行96h的环境胁迫实验，并且观察和记录合浦绒螯蟹在整个操作过程中的存活率、存活时间和摄饵量，以便更深入了解亚硝酸盐氮对合浦绒螯蟹的养殖产生的影响，从而降低在养殖合浦绒螯蟹过程中的亚硝酸盐氮对蟹存活率和摄饵量的干扰，提高对合浦绒螯蟹养殖环境控制的准确性和精确度。
为了实现上述目的，本发明采取的具体技术方案是：
一种通过控制亚硝酸盐氮浓度提高合浦绒螯蟹养殖存活率和摄饵量的方法，具体包括：
(1)将受试的合浦绒螯蟹置于养殖容器内，其中所述养殖容器设置有多个，并且所述养殖容器内设置有不同浓度的亚硝酸盐氮溶液；每个所述养殖容器内有受试的合浦绒螯蟹10只；
(2)所述受试的合浦绒螯蟹的养殖环境为：温度控制在20-25℃；盐度为0；pH控制在7.5-8.5；
(3)在每天晚上的20:00向所述受试的合浦绒螯蟹投递饵料，饵料量每个所述养殖容器为15g；并于次日早上8:00观察所述受试的合浦绒螯蟹存活、蜕壳以及生命活力情况；同时取出所述养殖容器内的残饵量并进行记录，试验持续96h，每12h观察一次，记录所述受试的合浦绒螯蟹的存活率、存活时间和摄饵量；
(4)所述步骤(3)操作完成后，将每个所述养殖容器内存活的所述受试的合浦绒螯蟹直接移入盛装有曝气自来水的所述养殖容器内进行恢复试验，并且在每天晚上的20:00向所述受试的合浦绒螯蟹投递饵料，饵料量为每个所述养殖容器为15g；并于次日早上8:00所述受试的合浦绒螯蟹存活、蜕壳以及生命活力情况；同时取出所述养殖容器内的残饵量并进行记录，试验持续48h，每12h观察一次，记录所述受试的合浦绒螯蟹的存活率、存活时间和摄饵量。
优选的，在上述一种用于亚硝酸盐氮浓度环境胁迫合浦绒螯蟹的实验方法中，所述受试的合浦绒螯蟹为附肢齐全、活力强，并且体重在11-13g。
优选的，在上述一种用于亚硝酸盐氮浓度环境胁迫合浦绒螯蟹的实验方法中，所述饵料为去内脏鱿鱼肉。
优选的，在上述一种用于亚硝酸盐氮浓度环境胁迫合浦绒螯蟹的实验方法中，所述养殖容器为容量50L的塑料方桶，规格为4630×29cm，所述养殖容器内的溶液深10-12cm。
优选的，在上述一种用于亚硝酸盐氮浓度环境胁迫合浦绒螯蟹的实验方法中，所述曝气自来水为经过曝气24h处理的自来水。
优选的，在上述一种用于亚硝酸盐氮浓度环境胁迫合浦绒螯蟹的实验方法中，所述不同浓度的亚硝酸盐氮溶液是由分析纯亚硝酸钠和曝气自来水配置而成，并且配置了浓度为0mg/L、1mg/L、2mg/L、3mg/L、4mg/L、5mg/L、6mg/L，共7个亚硝酸盐氮浓度梯度，同时每个亚硝酸盐氮浓度梯度设置3个平行试验。
优选的，在上述一种用于亚硝酸盐氮浓度环境胁迫合浦绒螯蟹的实验方法中，所述养殖容器设置有21个，每三个为一组，每组为平行试验。
本发明的有益效果：本发明提供的一种用于亚硝酸盐氮浓度环境胁迫合浦绒螯蟹的实验方法中，实现亚硝酸盐氮单一胁迫的实验条件，填补了传统养殖过程中亚硝酸盐氮浓度对合浦绒螯蟹影响的实验数据的空缺；增强了亚硝酸盐氮浓度环境胁迫实验的可靠性和准确性；本发明通过改变亚硝酸盐氮的浓度梯度对合浦绒螯蟹进行96h的环境胁迫实验，并且观察和记录合浦绒螯蟹在整个操作过程中的存活率、存活时间和摄饵量，可以更深入了解亚硝酸盐氮对合浦绒螯蟹的生存产生的影响，从而避免在养殖合浦绒螯蟹过程中的干扰因素，提高对合浦绒螯蟹养殖环境控制的准确性和精确度；同时本发明提供的实验研究更符合自然环境下亚硝酸盐氮的胁迫环境，真实反映了自然养殖环境下合浦绒螯蟹与亚硝酸盐氮浓度之间的相互关系，为寻找消除或缓解亚硝酸盐氮浓度胁迫影响的途径提供了研究基础。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
图1为亚硝酸盐氮对合浦绒螯蟹存活率的影响图；
图2为亚硝酸盐氮对合浦绒螯蟹的LC50浓度的影响图；
图3为亚硝酸盐氮对合浦绒螯蟹存活时间的影响图；
图4为亚硝酸盐氮对合浦绒螯蟹摄饵量的影响图；
图5为亚硝酸盐氮恢复对合浦绒螯蟹存活率的影响图；
图6为亚硝酸盐氮恢复对合浦绒螯蟹存活时间的影响图；
图7为亚硝酸盐氮恢复对合浦绒螯蟹摄饵量的影响图。
具体实施方式
以下通过具体实施例并结合附图对本发明做进一步说明。
本实施例以合浦绒螯蟹为受试对象。首先选取体重为11-13g的，并且附肢齐全、生命力强的合浦绒螯蟹于实验室暂养后备用；喂养合浦绒螯蟹的饵料为去内脏鱿鱼肉；
养殖容器为容量50L塑料方桶，规格为46×30×29cm，养殖容器内的盛装有深度为10cm的养殖合浦绒螯蟹的所用溶液；
培养用水均为经过曝气24h处理的自来水；其中本发明方法中的自来水中亚硝酸盐氮含量为0.002mg/L。
本发明设置0mg/L(对照)、1mg/L、2mg/L、3mg/L、4mg/L、5mg/L、6mg/L共7个亚硝酸盐氮浓度梯度，并且是由分析纯亚硝酸钠和曝气自来水配置而成，每一个浓度梯度设置3个平行实验，为一组；每一个浓度梯度的溶液按照培养要求置于养殖容器内，由此构成7组养殖容器，由此可知养殖容器一共有21个；每个养殖容器内放入10只受试的合浦绒螯蟹，各组除了亚硝酸盐氮的浓度不同外，其余的条件均一致，培养的条件均为温度在20-25℃、盐度为0、pH控制在7.5-8.5。
经放置在养殖容器内的受试的合浦绒螯蟹，为一次性投入到各个浓度梯度中；并且每晚20:00投喂饵料，投饵量为每次每个养殖容器15g。次日早上8:00观察受试的合浦绒螯蟹的存活状态、蜕壳以及活力情况，然后取出残余饵量并记录数据。试验持续96h，每12h观察一次。
上述试验完成之后进行亚硝酸盐氮的恢复试验，将各组存活下来的受试的合浦绒螯蟹直接移入到曝气自来水中进行恢复试验，并且在每天晚上的20:00向受试的合浦绒螯蟹投递饵料，饵料量为每个养殖容器为15g；并于次日早上8:00受试的合浦绒螯蟹存活、蜕壳以及生命活力情况；同时取出养殖容器内的残饵量并进行记录，试验持续48h，每12h观察一次，记录受试的合浦绒螯蟹的存活率、存活时间和摄饵量。
其中在试验的同时，对饵料进行了校正试验，首先设置相应的饵料溶解试验，用以检测不同亚硝酸盐氮浓度下饵料溶解值，以便修正摄饵结果，本发明的结果，为每个合浦绒螯蟹的平均摄饵量，经饵料修正，再除以每个合浦绒螯蟹的体重后，所得到相对值为饵料的校正结果。
统计分析，本发明采用SPSS17.0进行方差分析(One-wayANOVA)检验其差异显著性；用LSR法的新复极差检验(SSR检验)法(Duncan)进行组间多重比较；p<0.05为差异显著；用Probit法求出12h、24h、36h、48h、60h、72h、84h、96h的LC50值。
本发明结果分析：
(1)亚硝酸盐氮对合浦绒螯蟹存活率的影响
对合浦绒螯蟹的存活率的影响明显，结果见表1。
表1
Figure BDA0002472016170000071
对表1的数据求平均值并对其进行One-wayANOVA统计分析见图1。
(2)用Probit回归分析，对表1的数据进行处理，得出亚硝酸盐氮在不同时间段下的毒力回归方程，结果见表2。
表2
Figure BDA0002472016170000072
通过表2可以得出亚硝酸盐氮不同时间段下浓度的LC50结果见图2。
(3)亚硝酸盐氮对合浦绒螯蟹的存活时间的影响，见表3。
表3
Figure BDA0002472016170000081
对表3的数据求平均值并对其进行One-wayANOVA统计分析见图3。
(4)亚硝酸盐氮对合浦绒螯蟹摄饵的影响，如表4所示。
表4
Figure BDA0002472016170000082
Figure BDA0002472016170000091
对表4数据求平均值并对其进行统计分析，结果见图4所示。
(5)亚硝酸盐氮恢复对合浦绒螯蟹存活率的影响如表5所示。
表5
Figure BDA0002472016170000092
对表5数据求平均值并对其进行统计分析，得到图5。
(6)亚硝酸盐氮恢复对合浦绒螯蟹存活时间的影响如表6所示。
表6
Figure BDA0002472016170000093
Figure BDA0002472016170000101
对表6的数据求平均值并对其进行统计分析，得到图6。
(7)亚硝酸盐氮恢复对合浦绒螯蟹摄饵的影响如表7所示。
表7
Figure BDA0002472016170000102
将表7的数据求平均值并对其进行统计分析，得到图7。
从本发明可以看出亚硝酸盐氮对合浦绒螯蟹的存活和摄饵均有显著影响(P＜0.05)。由说明书附图图1、图3、图4可以看出，随着亚硝酸盐氮浓度的升高，合浦绒螯蟹的存活率降低，存活时间变短，摄饵率降低，说明随着亚硝酸盐氮浓度递增到一定值时，毒性作用增强，合浦绒螯蟹的耐受性达到临界点，从而引起大量死亡。在72h时，5mg/L和6mg/L浓度组的合浦绒螯蟹存活率为0，存活时间最高仅为37.2h。4mg/L以下浓度组的存活率超过80％，存活时间可以达到96h。Probit分析得出，96h时，亚硝酸盐氮LC50是1.442mg/L，则安全浓度为0.144mg/L。亚硝酸盐对动物的危害通常集中在暴露后的24-48h内，LC50即使在48h后有一定程度的降低，但是下降率很低。本实验结果与前者基本一致，亚硝酸盐对合浦绒螯蟹在72h和96h的半数致死浓度没有很大差别。中华绒螯蟹对亚硝酸盐96h-LC50为38.87mg/L，与合浦绒螯蟹的96h-LC50相差很大，合浦绒螯蟹对亚硝酸盐氮的耐受性远低于其同属的中华绒螯蟹。在本实验中，养殖用水的平均温度为23℃，pH值为7.5左右，亚硝酸盐氮的浓度用亚硝酸钠进行调节，因而水中亚硝酸盐氮的毒性可能会受水中钠离子浓度的升高影响，这有待进一步研究。
在亚硝酸盐氮恢复实验中，亚硝酸盐氮浓度恢复到0mg/L后，对合浦绒螯蟹的存活和摄饵无显著影响(P＞0.05)。说明合浦绒螯蟹在96h亚硝酸盐氮浓度暴露下，即使有毒性作用影响其存活和摄饵，但恢复到0mg/L后，其毒性作用在减少，并未累积影响到其后的存活和摄饵。但是否说明在较长的亚硝酸盐氮暴露下合浦绒螯蟹提高了不适环境的生存适应能力，还需进一步实验证明。
上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，并不能以此限制本发明的保护范围，凡根据本发明精神实质所做的等效变换或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围内。

Claims (1)

1.一种通过控制亚硝酸盐氮浓度提高合浦绒螯蟹养殖存活率和摄饵量的方法，其特征在于，具体包括：
(1)短时间合浦绒螯蟹养殖，亚硝酸盐氮必须控制在3mg/L以下，可提高养殖存活率。长时间养殖，亚硝酸盐氮浓度控制在0.1442mg/L以下，可显著提高合浦绒螯蟹养殖存活率、存活时间和摄饵量；亚硝酸盐氮在24h、36h、48h、60h、72h、84h、96h，合浦绒螯蟹的LC50分别是5.638mg/L、4.318mg/L、2.794mg/L、2.895mg/L、1.977mg/L、1.442mg/L、1.442mg/L；毒力方程分别为y＝1.166x-8.217、y＝0.634x-4.383、y＝0.752x-3.747、y＝0.9484x-4.388、y＝0.974x-3.570、y＝0.769x-2.754、y＝0.769x-2.754；
(2)所述合浦绒螯蟹养殖环境为：温度控制在20-30℃；盐度为0；pH控制在7.5-8.5。
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