CN111386271A - 用于预防和治疗细菌感染的嘧啶衍生物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了任选地具有可检测同位素的式(I)的新型嘧啶衍生物、其药物组合物及制备方法。新型嘧啶衍生物用于治疗或预防需要这样的治疗或预防的宿主哺乳动物中的细菌感染，并且用作生物材料或医疗装置(特别是心血管装置如人工心脏瓣膜或起搏器)的表面上的生物膜形成的抑制剂。新型嘧啶衍生物用作诊断或预后宿主哺乳动物中的细菌感染的放射性示踪剂。
Figure DDA0002504052270000011

Description

用于预防和治疗细菌感染的嘧啶衍生物
发明领域
本发明涉及任选地具有可检测同位素的新型嘧啶衍生物、其药物组合物及其制备方法。本发明还涉及用于预防和治疗细菌感染的新型嘧啶衍生物及其用于抑制生物膜形成的用途。
最后，本发明提供了任选地具有可检测同位素的嘧啶衍生物，其用作诊断或预后细菌感染的放射性示踪剂。
简介
细菌通常牵连医疗保健相关的感染(包括医疗装置相关的感染)，导致患者发病率和死亡率增加，并且对医疗保健服务造成巨大的经济负担。这种情况变得至关重要，因为越来越多的细菌变得对属于各种类别的抗生素(诸如青霉素类(Penicillins)、碳青霉烯类(Carbapenems)、头孢菌素类(Cephalosporins)、喹诺酮类(Quinolones)、氨基糖苷类(Amino-glycosides)和糖肽类(Glycopeptides))具有耐药性，并且越来越多的感染变得难以治愈。
由于可用于这些严重感染的治疗选择有限，所以对抗生素的耐药性增加是日益严重的公众健康问题。根据世界卫生组织(World Health Organization)，《抗生素耐药性是当今对全球健康、粮食安全和发展的最大威胁之一。抗生素耐药性可以影响任何国家中的任何年龄的任何人。抗生素耐药性是自然发生的，但是在人和动物中滥用抗生素会加速这一过程。抗生素耐药性导致更长的住院期、更高的医疗费用和增长的死亡率。》
在欧洲，抗生素耐药性每年导致大约25,000人死亡以及250万额外住院日(来源：全球健康疾病控制预防中心(Center for Disease Control and prevention,GlobalHealth))。与抗微生物剂耐药性相关的临床负担估计每年花费大约15亿欧元。
例如，在15个欧洲国家中，超过10％的血流金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus，S.aureus)感染由耐甲氧西林菌株(MRSA)引起，其中在这些国家中的若干国家中耐药率接近50％(欧洲疾病预防控制中心抗微生物剂耐药性交互式数据库(European Centrefor Disease Prevention and Control Antimicrobial Resistance InteractiveDatabase，EARS-NET))。
根据疾病控制预防中心，在2011年有超过80,000例侵入性MRSA感染和11,285例相关死亡。加州大学戴维斯分校(UC Davis)的研究人员的研究发现，由于社区获得性MRSA而住院的儿童人数在2000年至2007年间翻倍(医疗保健研究与质量统计局(Agency forHealthcare Research and Quality statistics))。
MRSA在世界一些地区流行。
因此，本领域迫切需要一种新的抗菌治疗。
发明概述
我们惊奇地发现，任选地具有可检测同位素的新型嘧啶衍生物具有抗菌活性，并且可以用于治疗或预防宿主哺乳动物中的细菌感染以及治疗和/或预防细菌污染和积垢。
任选地具有可检测同位素的嘧啶衍生物还可以用作诊断或预后细菌感染的放射性示踪剂。
我们还发现，这样的嘧啶衍生物可以用于控制早期阶段(诸如步骤1或2)中生物膜形成中的细菌生长的方法，或者用于在生物膜形成的所有步骤(包括最后的步骤3，其中生物膜已经达到其基质形成的成熟阶段并且开始从表面脱附，细菌随后扩散到其他位置)中杀灭细菌。
发明详述
在第一方面，本发明提供了新型的由式(I)表示的嘧啶衍生物
Figure BDA0002504052250000021
或其异构体、外消旋混合物、药用酸加成盐、药用金属盐或烷基化铵盐或其前药；
其中：
X1和X2独立地是N、CH、CR8，其中R8是C1-6烷基、C2-6烯基或C2-6炔基；但是如果X1或X2中的一者等于N，则剩余的X1或X2选自CH、CR8；
-Y-是-O-或-S-；
R1和R2独立地是C1-6-烷基、C2-6-烯基、C2-6-炔基、C3-6-环烷基、芳基、芳基-C1-6-烷基、其中烷基或环烷基部分任选地被OH或卤素单取代或多取代，并且芳基部分任选地被卤素、-C1-6烷基、-C1-6烷氧基、-OH、-NO2、-CN、-NH2、-NHR8、-N(R8)2-COOH、-COOR8、-CONH2、-CONHR8、-CON(R8)2、-SO2NH2、-SO2NHR8或-SO2N(R8)2单取代或多取代；
R3、R4、R5、R6和R7独立地是H、卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、-OH、-NO2、-CN、-NH2、-NHR8、-N(R8)2-COOH、-COOR8、-CONH2、-CONHR8、-CON(R8)2、-SO2NH2、-SO2NHR8或-SO2N(R8)2。
在其范围内，本发明包括式(I)的嘧啶衍生物的所有旋光异构体，其中一些是旋光的，并且不仅包括它们的混合物(包括其外消旋混合物)，而且还包括它们的多晶型物。
如本文中使用的术语“C1-6-烷基”，单独或组合地，是指直链或支链的具有1至6个碳原子的饱和烃链，诸如例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、4-甲基戊基、新戊基、正己基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1,2,2-三甲基丙基等。
如本文中使用的术语“C2-6-烯基”，单独或组合地，是指直链或支链的具有2至6个碳原子的具有至少一个碳-碳双键的不饱和烃链，诸如例如乙烯基、烯丙基、1-丁烯基、2-丁烯基、异丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-甲基-1-丁烯基、1-甲基-2-丁烯基、2,3-二甲基-2-丁烯基、1-己烯基、2-己烯基、3-己烯基等。
如本文中使用的术语“C2-6-炔基”，单独或组合地，是指直链或支链的具有2至6个碳原子的具有至少一个碳-碳三键的不饱和烃链，诸如例如乙炔基、丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、3-甲基-1-丁炔基、1-己炔基、2-己炔基、3-己烯基等。
如本文中使用的术语“C3-6-环烷基”，单独或组合地，是指具有3至6个碳原子的饱和环烃基团，诸如环丙基、环丁基、环戊基或环己基。
如本文中使用的术语“芳基”，单独或组合地，是指具有6至20个碳原子的单环或多环芳族环，诸如苯基、蒽基、萘基等。
如本文中使用的术语“C1-6-烷氧基”是指直链或支链的一价取代基，该取代基包含通过醚氧连接的C1-6-烷基基团，其具有来自醚氧的自由价键并且具有1至6个碳原子，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、戊氧基。
如本文中使用的术语“-CN”是指碳-氮三键。
如本文中使用的术语卤素是指氟、氯、溴或碘。
可接受的盐包括药用酸加成盐、药用金属盐或任选烷基化的铵盐，诸如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、磷酸、硫酸、三氟乙酸、三氯乙酸、草酸、马来酸、丙酮酸、丙二酸、琥珀酸、柠檬酸、酒石酸、富马酸、扁桃酸、苯甲酸、肉桂酸、甲磺酸、乙磺酸、苦味酸等，并且包括与Journal of Pharmaceutical Science,66,2(1977)中列出的并且通过引用结合于此的药用盐有关的酸，或锂、钠、钾、镁等。
术语前药在Burger’s药物化学和药物开发(Burger’s Medicinal Chemistry andDrug discovery)(第5版，1995)中被定义为在展现其药理作用之前经历生物转化的化合物。因此，如本文中使用的术语前药是指通式(I)的化合物的类似物或衍生物，其包含在生物条件下获得的可生物水解的部分，诸如可生物水解的酯官能团、可生物水解的氨基甲酸酯官能团、可生物水解的酰脲等。前药可以使用众所周知的方法制备，诸如在Burgers药物化学和药物开发(1995)172-178,949-982(Manfred E.Wolff)中描述的那些。
在一个实施方案中，本发明涉及包含咪唑并基团并且由式(I)表示的的嘧啶衍生物，其中X1是CH或CR8并且X2是N；或其可接受的盐或前药；所述包含咪唑并基团的嘧啶衍生物也可以被称为嘌呤衍生物。
优选的包含咪唑并基团的嘧啶衍生物包含如式(IV)所示的苯基环丙基基团
Figure BDA0002504052250000051
诸如例如9-甲基-N-((1R,2S)-2-苯基环丙基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(2c)；或其异构体、外消旋混合物、药用酸加成盐、药用金属盐或烷基化铵盐或其前药。
更优选的具有咪唑并基团的嘧啶衍生物包含如式II所示的3,4-二氟苯基环丙基基团
Figure BDA0002504052250000052
最优选的具有咪唑并基团的嘧啶衍生物被如例如式(III)所示的3,4-二氟苯基环丙基氨基基团取代
Figure BDA0002504052250000053
并且是例如：
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-甲基-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(1c)；
9-甲基-N-((1R,2S)-2-苯基环丙基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(2c)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-乙基-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(3c)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-丙基-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(4c)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-异丙基-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(5c)；
9-环丙基-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(6c)；
9-丁基-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(7c)；
9-(仲丁基)-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(8c)；
9-(叔丁基)-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(9c)；
9-环丁基-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(10c)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-戊基-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(11c)；
9-环戊基-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(12c)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-己基-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(13c)；
9-环己基-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(14c)；
9-烯丙基-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(15c)；
2-(6-(((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)氨基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-9-基)乙醇(16c)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-(丙-2-炔-1-基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(17c.)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(丙硫基)-9-(2,2,2-三氟乙基)-9H-嘌呤-6-胺(18c)；
(1S,2R,3S,4R)-4-(6-(((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)氨基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-9-基)环戊烷-1,2,3-三醇(19d)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(乙硫基)-9-甲基-9H-嘌呤-6-胺(20c)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-乙基-2-(乙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(21c)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-甲基-2-(甲硫基)-9H-嘌呤-6-胺(22c)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-甲基-2-丙氧基-9H-嘌呤-6-胺盐酸盐(23t.HCl)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-乙基-2-(甲硫基)-9H-嘌呤-6-胺(24c)；
2-(丁硫基)-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-甲基-9H-嘌呤-6-胺(25c)；
2-(丁硫基)-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-乙基-9H-嘌呤-6-胺(26c)；
或其异构体、外消旋混合物、药用酸加成盐、药用金属盐或烷基化铵盐或其前药。
最优选的包含咪唑并基团的嘧啶衍生物是：
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-甲基-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(1c)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-乙基-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(3c)；
9-烯丙基-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(15c)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-(丙-2-炔-1-基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(17c)；
(1S,2R,3S,4R)-4-(6-(((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)氨基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-9-基)环戊烷-1,2,3-三醇(19d)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-甲基-2-(甲硫基)-9H-嘌呤-6-胺(22c)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-乙基-2-(甲硫基)-9H-嘌呤-6-胺(24c)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(乙硫基)-9-甲基-9H-嘌呤-6-胺(20c)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-乙基-2-(乙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(21c)；
2-(丁硫基)-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-甲基-9H-嘌呤-6-胺(25c)；
或其异构体、外消旋混合物、药用酸加成盐、药用金属盐或烷基化铵盐或其前药。
在另一个实施方案中，本发明涉及包含吡唑并基团并且由式(I)表示的的嘧啶衍生物，其中X1是N并且X2是CH或CR8；或其异构体、外消旋混合物、药用酸加成盐、药用金属盐或烷基化铵盐或其前药。
优选的包含吡唑并基团的嘧啶衍生物被3,4-二氟苯基环丙基基团取代，最优选的包含吡唑并基团的嘧啶衍生物被3,4-二氟苯基环丙基氨基基团取代，例如：
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-1-甲基-6-(甲硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(27k)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-6-(乙硫基)-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(28x.HCl)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-6-(丙硫基)-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(29x.HCl)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-1-乙基-6-(甲硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(30k)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-1-乙基-6-(乙硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(31x.HCl)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-1-乙基-6-(丙硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(32x.HCl)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-1-异丙基-6-(甲硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(33k.HCl)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-6-(甲硫基)-1-丙基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(34k.HCl)；
或其异构体、外消旋混合物、药用酸加成盐、药用金属盐或烷基化铵盐或其前药。
最优选的包含吡唑并基团的嘧啶衍生物是：
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-1-甲基-6-(甲硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(27k)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-1-乙基-6-(甲硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(30k)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-6-(乙硫基)-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(28xHCl)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-1-异丙基-6-(甲硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(33kHCl)；
或其异构体、外消旋混合物、药用酸加成盐、药用金属盐或烷基化铵盐或其前药。
在另一个实施方案中，本发明涉及包含吡咯并基团并且由式(I)表示的嘧啶衍生物，其中X1和X2是CH或CR8，或
其异构体、外消旋混合物、药用酸加成盐、药用金属盐或烷基化铵盐或其前药。
优选的包含吡咯并基团的嘧啶衍生物包含3,4-二氟苯基环丙基基团。最优选的包含吡咯并基团的嘧啶衍生物包含3,4-二氟苯基环丙基氨基基团。
最优选的包含吡咯并基团的嘧啶衍生物是
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-7-乙基-2-(甲硫基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(35p.HCl)；
或其异构体、外消旋混合物、药用酸加成盐、药用金属盐或烷基化铵盐或其前药。
在另一个方面，本发明还涉及包含至少一个可检测同位素的根据式(I)的嘧啶衍生物或其药用盐。
优选的根据式(I)的嘧啶衍生物包含选自3H、18F、19F、11C、13C、14C、75Br、76Br、120I、123I、125I、131I、15O和13N的至少一个可检测同位素。
另一种优选的根据式(I)的嘧啶衍生物包含选自3H、18F、19F、11C、14C和123I的可检测同位素。
又一种其他优选的根据式(I)的嘧啶衍生物包含选自18F和11C的可检测同位素。
最优选的根据式(I)的嘧啶衍生物或其盐包含可检测同位素18F。
优选的嘧啶衍生物或其异构体、外消旋混合物、药用酸加成盐、药用金属盐、或烷基化铵盐包含至少一个可检测同位素；其还包含苯基环丙基基团(IV)，
Figure BDA0002504052250000101
最优选的包含至少一个可检测同位素的嘧啶衍生物还包含3,4-二氟苯基环丙基基团。
在另一个方面，本发明还涉及制备由式(I)表示的嘧啶衍生物的新方法。
嘧啶衍生物及其可接受的盐根据以下化学途径制备：
在第一实施方案中，包含咪唑并基团或对应于嘌呤衍生物的根据式(I)的嘧啶衍生物或其可接受的盐根据一般常规化学途径制备，所述化学途径包括：首先：根据方案1制备起始产物即2-取代的-4,6-二卤代嘧啶-5-胺(Xh)，诸如例如2-取代的-4,6-二氯嘧啶-5-胺，并且进一步根据方案2中的以下步骤ib至iiib将起始产物与试剂反应。对于其中-Y-等于-S-或-O-的具有咪唑并的嘧啶衍生物，一般化学途径是共同的。沿着3个步骤ib至iiib依次形成3个中间体Xa、Xb、Xc，其中R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7是如式(I)所限定的。
最后，具有咪唑并基团并且-Y-＝-O-的嘧啶衍生物通过另外的化学途径进行差别化，所述化学途径允许将硫醚(其中Y是S)嘧啶衍生物转化为相应的醚(Y＝O)嘧啶衍生物(方案3)。
1根据以下化学途径制备起始产物：2-取代的4,6-二卤代嘧啶-5-胺，诸如例如2-取代的4,6-二氯嘧啶-5-胺：
Figure BDA0002504052250000111
其中R1是如上在式(I)中限定的。
2-取代的4,6-二卤代-5-硝基嘧啶Xg(诸如例如2-取代的4,6-二氯-5-硝基嘧啶)通过以下方式获得：在20℃至100℃的温度下在碱性介质水溶液(诸如KOH)中将硫代巴比妥酸与卤化物R1卤化物反应(步骤ia)，随后在另一种酸(诸如乙酸)的存在下在-20℃至室温的低温下使用硝酸进行硝化反应(步骤iia)，并且在-20℃至100℃的可变温度下使用有机碱(诸如例如二乙胺、2,6二甲基吡啶等)与磷酰卤(诸如磷酰氯)进行芳族亲核取代(步骤iiia)。
然后，在酸性介质(诸如例如乙酸)中在室温下用铁还原2-取代的4,6-二卤代-5-硝基嘧啶Xg以获得相应的2-取代的4,6-二卤代嘧啶-5-胺Xh，诸如例如2-取代的4,6-二氯嘧啶-5-胺(步骤iva)。
2°根据以下步骤ib至ivb，起始产物与试剂反应
Figure BDA0002504052250000121
在第一步骤(ib)中，N4,2-二取代的6-卤代嘧啶-4,5-二胺(Xa)诸如例如N4,2-二取代的6-氯嘧啶-4,5-二胺通过以下方式获得：将R2NH2与2-取代的4,6-二卤代嘧啶-5-胺(Xh)诸如例如2-取代的4,6-二氯嘧啶-5-胺反应并且在醇(诸如甲醇)中在例如100℃的温度下进行。
第一步骤之后是在酸(诸如例如乙酸)的存在下在例如130℃的温度下通过原甲酸三烷基酯(诸如原甲酸三乙酯)进行中间体Xa的闭环反应(步骤iib)，以获得相应的中间体2,9-二取代的6-卤代-9H-嘌呤(Xb)，诸如例如2,9-二取代的6-氯-9H-嘌呤。
在步骤iiib中，2,9-二取代的N-((R3-R7)-取代的苯基)环丙基-9H-嘌呤-6-胺(Xc)通过以下方式获得：在例如90℃的温度下通过(R3-R7)-取代的苯基环丙胺进行中间体Xb的卤素原子(优选氯原子)的亲核取代。
在戊烷-1,2,3-三醇丙酮化合物中间体的情况下，在酸性水醇条件下发生去保护以提供戊烷-1,2,3-三醇Xd(步骤ivb)。反应在室温下进行。
3°将硫醚(Y＝S)嘧啶衍生物转化为相应的醚(Y＝O)嘧啶衍生物：
Figure BDA0002504052250000131
由相应的甲硫基化合物Xc、Xk和Xp开始，可以分两步获得化合物Xt、Xu和Xv，其对应于分别包含咪唑并基团(Xt)、吡唑并基团(Xu)和吡咯并基团(Xv)的嘧啶衍生物(方案3)。
第一步反应由该硫醚官能团的硫原子的氧化组成，得到甲磺酰基基团(步骤ic)，其在室温下或在加热下进行。用醇化物取代Xq、Xr和Xs得到醚衍生物Xt、Xu和Xv(步骤iic)，其在10℃至80℃的温度下进行。
备选地，可以根据方案3bis获得化合物Xw、Xx、Xy，其对应于分别包含咪唑并基团、吡唑并基团或吡咯并基团的式(I)的嘧啶衍生物，并且其中Y等于S并且R1不同于-CH3。这相当于将甲硫基取代的嘧啶衍生物(其中Y是S并且R1是甲基)转换为其他相应烷硫基取代的嘧啶衍生物(其中Y是S并且R1不同于甲基)。转化分两步进行。如在方案3中，开始于相应的甲硫基化合物Xc、Xk、Xp的第一步骤是硫醚官能团的硫原子的氧化反应得到甲磺酰基基团(步骤ic)，其在室温下或在加热下进行。
Figure BDA0002504052250000132
Figure BDA0002504052250000141
第二步骤(方案3bis中的iiic)是Xq、Xr、Xs中的甲磺酰基基团与烷基硫醇的取代反应，得到烷硫基取代的衍生物Xw、Xx、Xy，其中R1不同于-CH3。取代反应在10℃至100℃的温度下进行。
在第二实施方案中，包含吡唑并基团并且由式(I)表示的嘧啶衍生物(其中X1是N并且X2是CH或CR8)或其可接受的盐的制备通常根据以下化学途径进行：
Figure BDA0002504052250000142
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7是在通式(I)中限定的。
硫代巴比妥酸与R1-卤化物在例如80℃的温度下进行反应(步骤id)之后，2-取代的嘧啶4,6-二醇Xe在DMF的存在下在0℃至110℃的温度下与磷酰卤(诸如例如磷酰氯)反应以获得相应的2-取代的4,6-二氯嘧啶-5-甲醛Xi(步骤iid)。
在-80℃至20℃的温度下通过取代的肼进行的Xi的闭环反应提供了相应的1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶Xj(步骤iiid)。
硫醚(Y＝S)嘧啶衍生物进一步转化为相应的醚(Y＝O)嘧啶衍生物(Xu)可以根据上述方案3进行。
备选地，包含吡唑并基团的式(I)的嘧啶衍生物可以根据方案4bis制备，其中步骤(id)和(iid)与方案4相同，但是在步骤(vd)中在-80℃至20℃的温度下通过未取代的肼进行Xi的闭环以提供非烷基化的1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶Xi’(步骤vd)，随后在步骤vid中在0℃至80℃的温度下进行N-烷基化以提供Xj。
Figure BDA0002504052250000151
在第三实施方案中，包含吡咯并基团并且由式(I)表示的嘧啶衍生物(其中X1和X2是CH或CR8)或其可接受的盐的制备通常根据以下化学途径进行：
Figure BDA0002504052250000152
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7是如式(I)所限定的。
2-取代的6-氨基-4-羟基嘧啶Xl通过以下方式获得：将6-氨基-2-巯基嘧啶-4-醇与R1-卤化物在碱性介质中在70℃至110℃的温度下反应(步骤ie)。
在60℃至100℃的温度下通过卤代乙醛(诸如氯乙醛)将Xl转化为相应的7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶Xm(步骤iie)。
然后，在0℃至110℃的温度下使用磷酰卤(诸如例如磷酰氯)进行芳族亲核取代以得到Xn(步骤iiie)，随后在0℃至100℃的温度下进行N-烷基化以得到Xo(步骤ive)。
在40℃至90℃的温度下通过适当的苯基环丙胺进行Xo的氯原子的亲核取代获得了2,7-二取代的N-((R3-R7)-取代的苯基)环丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(Xp)(步骤ve)。
备选地，可以根据方案5bis来提供包含吡咯并基团并且由式(I)表示的嘧啶衍生物(其中X1和X2是CH或CR8)，其中步骤ie至iiie与方案5相同，但是在40℃至90℃的温度下用(R3-R7)-取代的苯基环丙胺进行Xn中的卤素原子(诸如例如氯原子)的亲核取代(步骤vie)以提供Xo’，随后在0℃至100℃的温度下用R2-卤化物进行N-烷基化(步骤viie)以提供Xp。
Figure BDA0002504052250000161
硫醚(Y＝S)嘧啶衍生物进一步转化为相应的醚(Y＝O)嘧啶衍生物(Xv)可以根据上述方案3进行。
相同的反应用于制备包含至少一个可检测同位素的由式(I)表示的嘧啶衍生物或其可接受的盐，其中可检测同位素的并入作为最后的步骤。这样的可检测同位素的并入或标记步骤是本领域技术人员熟知的，并且在本领域中描述于例如
Figure BDA0002504052250000171
等人Acta.Chem.Scand 1999,53,651中。
在第二方面，本发明提供了式(I)的嘧啶衍生物或其可接受的盐或前药，其用于治疗或预防需要这样的治疗或预防的宿主哺乳动物中的细菌感染。
如本文中使用的术语“细菌感染”通常是指存在不希望的细菌，并且虽然主要涉及细菌对身体、身体组织或细胞的侵入，但是在本文中也可互换使用以意指细菌积垢(通常是指表面上的有害污染，诸如生物传感器、心血管植入物、导管、隐形眼镜和手术工具上的有害污染)或其他类型的污染(如在食品、饲料和其他流体产品中)。
细菌污染或感染的来源可以是多种多样的。
不仅在发病率和死亡率方面，而且在增加患者管理和实施感染控制措施的支出方面，革兰氏阳性细菌引起的感染都是一项重大的公共卫生负担。金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和肠球菌(enterococci)是医院环境中确定的细菌，并且其频繁的多药耐药性使得治疗复杂化。
金黄色葡萄球菌是一种重要的细菌，其负责广泛的临床表现，从相对良性的皮肤感染到危及生命的疾病如心内膜炎和骨髓炎。它也是一种共生细菌(定殖于大约30％的人群)。
自20世纪90年代以来，金黄色葡萄球菌(S.Aureus)流行病学发生了两次重大转变：社区相关皮肤和软组织感染的流行(主要由特定的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌[MRSA]菌株驱动)，以及医疗保健相关感染(尤其是感染性心内膜炎和假体装置感染)数量的增加。
在名为糖肽中等耐药性金黄色葡萄球菌(glycopeptide intermediateS.aureus，GISA)的菌株中发现的糖肽抗生素耐药性的出现是引起极大关注的另一个问题，因为尤其是在医院中，这类抗生素(特别是万古霉素)是用于对抗由耐甲氧西林金黄色葡萄球菌菌株(MRSA)引起的感染的主要资源之一。尽管GISA的患病率相对较低(大约占所测试的所有MRSA分离株的1.3％)，但是GISA感染所导致的死亡率非常高(约70％)，尤其是在高危部门(诸如重症监护室(ICU))中住院的患者中。
凝固酶阴性葡萄球菌(CoNS)是皮肤的正常菌群中最常见的细菌。这些细菌是临床标本中的常见污染物，并且被认为是临床上重要感染(包括菌血症和心内膜炎)的媒介。处于CoNS感染的特别风险中的患者包括具有假体装置、起搏器、血管内导管的患者和免疫受损的宿主。
凝固酶阴性葡萄球菌占重症监护室中血流分离株的大约三分之一，使得这些生物体成为医院血流感染的最常见病因。
肠球菌物种可以引起多种感染，包括尿路感染、菌血症、心内膜炎和脑膜炎。肠球菌对细胞壁活性剂(青霉素、氨苄青霉素和万古霉素)的杀伤作用具有相对抗性，并且对于氨基糖苷类是不可渗透的。
耐万古霉素肠球菌(VRE)是医院获得性感染的一种日益普遍且难以治疗的病因。
已经在不同的医院环境(例如，医疗和外科重症监护室，以及医疗和儿科病房)中描述了VRE感染的多种流行病，并且像耐甲氧西林金黄色葡萄球菌一样，VRE在许多大医院中是流行的。
β-溶血性无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)(B组链球菌，GBS)是另一种革兰氏阳性细菌。细菌可以引起新生儿的败血症和/或脑膜炎。它也是老年人和免疫受损成人的发病率和死亡率的重要原因。感染的并发症包括败血症、肺炎、骨髓炎、心内膜炎和尿路感染。
除了人类医学以外，伴侣动物(诸如猫、狗和马)也可以在不具有宿主适应的情况下被MRSA定殖和感染，因此可以充当人类感染的贮源。当以动物为宿主时，细菌也可以发展明显的耐药性。
在特别的实施方案中，细菌感染是革兰氏阳性细菌引起的感染。在另外的特别实施方案中，细菌感染由金黄色葡萄球菌和/或肠球菌和/或链球菌(streptococci)引起。
在特别的实施方案中，细菌感染由对传统抗菌剂具有耐药性的细菌引起。在另外的特别实施方案中，细菌感染由以下中的一种或多种引起：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant S.aureus，MRSA)、耐甲氧西林表皮葡萄球菌(methicillin-resistant S.epidermidis，MRSE)、糖肽中等耐药性金黄色葡萄球菌(glycopeptideintermediate S.aureus，GISA)、凝固酶阴性葡萄球菌(Coagulase-negativestaphylococci，CoNS)、耐万古霉素肠球菌(Vancomycin-resistant enterococci，VRE)、β-溶血性无乳链球菌(beta-hemolytic Streptococcus agalactiae)(B组链球菌，GBS)。
细菌感染尤其意指革兰氏阳性细菌感染，诸如例如肺炎，败血症，心内膜炎，骨髓炎，脑膜炎，尿路、皮肤和软组织感染。细菌感染的来源可以是多种多样的，并且可以例如通过使用生物材料植入物引起。
生物材料或生物材料植入物意指用于宿主哺乳动物中的临床用途的所有植入式外来材料，例如用于假体关节、起搏器、植入式复律除颤器、血管内导管或导尿管、支架(包括冠状动脉支架)、人工心脏瓣膜、生物假体、人工晶状体、牙科植入物、乳房植入物、气管内导管、胃造口术导管等。
宿主哺乳动物意指优选人类，但是也意指需要治疗或预防细菌治疗的动物。
预防细菌感染意指降低获得感染的风险，或者降低或抑制感染的复发。例如，可以在手术治疗之前施用所述嘧啶衍生物作为预防以预防感染。
在第一实施方案中，用于治疗或预防细菌感染的嘧啶衍生物是包含咪唑并基团的嘧啶衍生物，其中在式(I)中X1是CH或CR8并且X2是N。
我们惊奇地发现包含咪唑并基团(优选地存在二氟苯基环丙基基团)的所述嘧啶衍生物展现出抗生素活性。
用于治疗或预防细菌感染的优选的和最优选的包含咪唑并基团的嘧啶衍生物或其可接受的盐或前药是在本发明的第一方面中描述的那些。
在另一个实施方案中，用于治疗或预防细菌感染的嘧啶衍生物是包含吡唑并基团的嘧啶衍生物，其中在式(I)中X1是N并且X2是CH或CR8。
此外，包含吡唑并基团(优选地存在二氟苯基环丙基基团)的所述嘧啶衍生物也展现出惊人的抗生素活性。
用于治疗或预防细菌感染的优选的和最优选的包含吡唑并基团的嘧啶衍生物或其异构体、外消旋混合物、药用酸加成盐、药用金属盐或烷基化铵盐或其前药是在本发明的第一方面中描述的那些。
在另一个实施方案中，用于治疗或预防细菌感染的嘧啶衍生物是包含吡咯并基团的嘧啶衍生物，其中在式(I)中X1和X2是CH或CR8。
此外，包含吡咯并基团(优选地存在二氟苯基环丙基基团)的所述嘧啶衍生物也展现出惊人的抗生素活性。
用于治疗或预防细菌感染的优选的和最优选的包含吡咯并基团的嘧啶衍生物或其可接受的盐或前药是在本发明的第一方面中描述的那些。
在特别的实施方案中，根据本发明的嘧啶衍生物在数天内施用至患者(特别是在预防的情况下)。嘧啶衍生物可以以其自身或作为药物组合物施用，无毒剂量低于3g/天。
本发明的另一个优选方面是式(I)的嘧啶衍生物或其异构体、外消旋混合物、药用酸加成盐、药用金属盐、或烷基化铵盐或其前药的药物组合物；其用于预防或治疗细菌感染。
药物组合物可以是干粉或具有生理相容性的液体组合物。除嘧啶衍生物以外，组合物还包括辅助物质、防腐剂、溶剂和/或粘度调节剂。溶剂意指例如水、盐水或任何其他生理溶液、乙醇、甘油、油(诸如植物油)或其混合物。粘度调节剂意指例如羧甲基纤维素。
本发明的嘧啶衍生物通过口服、静脉内、血管内、肌内、肠胃外或局部施用显示其效果，并且可以另外用于肠胃外施用的组合物，特别是注射组合物或在用于局部施用的组合物中。它也可以装载于纳米粒子中用于纳米医学应用，或者PEG化以改善其生物利用度，特别是当用于气溶胶组合物时。气溶胶组合物是例如溶液、混悬液、微粒化粉末混合物等。通过使用喷雾器、定量吸入器或干粉吸入器或任何设计用于此种施用的装置来施用组合物。
盖伦组合物的实例包括片剂、胶囊、粉剂、丸剂、糖浆、咀嚼物、颗粒剂等。这些可以通过众所周知的技术和使用典型的添加剂如赋形剂、润滑剂和粘合剂来生产。
合适的辅助物质和药物组合物描述于Oslo等人编辑的Remington’sPharmaceutical Sciences(雷明顿药物科学)，第16版，1980年，Mack Publishing Co.。通常，在组合物中使用适量的药用盐以使组合物等渗。药用物质的实例包括盐水、林格氏溶液和葡萄糖溶液。溶液的pH优选为约5至约8，并且更优选约7至约7.5。
本发明的又一个方面是治疗或预防需要这样的治疗或预防的宿主哺乳动物中的细菌感染的方法。所述方法包括向宿主施用有效量的如式(I)所限定的嘧啶衍生物或其异构体、外消旋混合物、药用酸加成盐、药用金属盐或烷基化铵盐或其前药；优选被二氟苯基环丙基基团取代的嘧啶衍生物；诸如例如在本发明的第一方面中选择的那些；并且最优选选自下组的嘧啶衍生物：
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-甲基-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(1c)；
9-烯丙基-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(15c)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-(丙-2-炔-1-基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(17c)；
(1S,2R,3S,4R)-4-(6-(((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)氨基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-9-基)环戊烷-1,2,3-三醇(19d)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-甲基-2-(甲硫基)-9H-嘌呤-6-胺(22c)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-乙基-2-(甲硫基)-9H-嘌呤-6-胺(24c)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(乙硫基)-9-甲基-9H-嘌呤-6-胺(20c)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-乙基-2-(乙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(21c)；
2-(丁硫基)-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-甲基-9H-嘌呤-6-胺(25c)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-1-甲基-6-(甲硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(27k)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-1-乙基-6-(甲硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(30k)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-6-(乙硫基)-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(28x.HCl)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-1-异丙基-6-(甲硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(33k.HCl)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-7-乙基-2-(甲硫基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(35p.HCl)；
或其异构体、外消旋混合物、药用酸加成盐、药用金属盐或烷基化铵盐或其前药。
在又一个方面，本发明提供了式(I)的嘧啶衍生物或其异构体、外消旋混合物、药用酸加成盐、药用金属盐或烷基化铵盐或其前药作为宿主哺乳动物中的生物材料植入物的表面上的生物膜形成的抑制剂的用途。
更特别地，本发明提供了式(I)的衍生物或其异构体、外消旋混合物、药用酸加成盐、药用金属盐、或烷基化铵盐或其前药；其用于预防细菌感染，其中将所述嘧啶衍生物施用至生物材料植入物的表面。在特别的实施方案中，感染是与植入物相关的感染的感染(即，由植入物的存在引起)。类似地，本发明提供了本文所述的本发明的衍生物用于预防和治疗细菌污染或积垢(诸如在植入物中)的用途。将理解的是，在整个说明书中，设想将衍生物用于这些不同的体内、离体和体外方面。
生物材料植入物诸如例如起搏器和植入式复律除颤器[ICD]可能被感染，感染率为0.8％至5.7％。
感染可能涉及包含生物材料植入物的皮下袋或导联的皮下区段。还可能发生涉及导联的经静脉部分的更深的感染，通常伴有相关的菌血症和/或血管内感染。这意味着具有这样的植入物的患者患有与其相关的疾病。
植入物和/或袋本身可以是感染源，通常是由于植入时的污染，或者可以继发于来自不同来源的菌血症。
带有皮肤菌群的起搏器袋的围手术期污染似乎是最常见的皮下感染源。
例如，与心脏植入物相关的感染性心内膜炎(CDRIE)是一种危及生命的疾病，由于植入数量增加(欧洲每年有81,000个起搏器植入)而发病率增加。
金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌(通常为表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermidis))引起65％至75％的发电机袋感染和高达89％的装置相关心内膜炎。植入两周内出现的发作更可能是由金黄色葡萄球菌引起的。
无论涉及的组件如何，成功治疗受感染的生物材料植入物通常需要移除植入物并且施用针对致病细菌的抗生素。重要的是，单独的药物治疗与高死亡率和复发风险相关。
人工瓣膜心内膜炎(PVE)是一种严重的感染，可能导致致命的后果。
在手术后的最初几天和几周内，细菌可以通过术中直接污染或通过血源性扩散而到达瓣膜假体。由于瓣膜缝合环、心脏瓣环和锚定缝线在瓣膜植入后早期不能内皮化，因此细菌可以沿着缝线路径直接进入假体-瓣环界面和瓣周组织。瓣膜的结构涂覆有宿主蛋白质，诸如纤连蛋白和纤维蛋白原，细菌可以粘附于所述蛋白质并且引发感染。
早期PVE(植入两个月内)中最常见的细菌是金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌。
晚期PVE(瓣膜植入后两个月)中最常见的细菌是链球菌和金黄色葡萄球菌，其次是凝固酶阴性葡萄球菌和肠球菌。
在手术后第一年中引起PVE的凝固酶阴性葡萄球菌几乎完全是表皮葡萄球菌。所述细菌中的84％至87％是耐甲氧西林的，因此对所有β-内酰胺抗生素都具有耐药性。
假体周围关节感染(PJI)是另一种发病机理，其发生在1％至2％的关节置换手术中，并且是关节成形术失败的主要原因。
生物膜在PJI的发病机制中起重要作用。生物膜内的细菌对治疗产生耐药性；因此，除非通过外科清创将生物膜物理破坏或移除，否则抗菌治疗通常是不成功的。
假体关节感染具有以下特性。早发性感染通常在植入期间获得，并且通常是由于毒性细菌，诸如金黄色葡萄球菌，或混合感染。通常也在植入期间获得迟发性感染。与进展缓慢的表现一致，延迟感染通常由较低毒性的细菌引起，所述细菌诸如凝固酶阴性葡萄球菌或肠球菌。由血源性接种引起的晚发性感染通常是急性的并且通常由金黄色葡萄球菌或β溶血性链球菌引起。
本发明允许在不进行手术的情况下抑制假体周围关节感染(PJI)。在特别的实施方案中，在植入前用本发明的嘧啶衍生物处理植入物。另外地或备选地，向患者施用本发明的嘧啶衍生物以预防或治疗感染。
在本发明的另外的方面中提供了式(I)的嘧啶衍生物或其盐作为对于用作生物材料植入物易感或不易感的医疗装置的表面上的生物膜形成抑制剂的用途。
在特别的实施方案中，生物膜形成由革兰氏阳性细菌引起。
特别地，医疗装置意指涉及医学或实施人类或兽医医学或者旨在用于治愈或治疗或预防疾病的任何仪器、工具装置如例如手术装置、针、管、手套等，诸如例如氧合器、蠕动泵室、肾膜等；医疗产品诸如伤口敷料、软组织填充物、根管填充物、隐形眼镜、血袋；以及需要无菌以引入哺乳动物宿主的生物材料。
优选地，式(I)的嘧啶衍生物或其可接受的盐或前药带有二氟苯基环丙基基团；
并且最优选(N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-甲基-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(1c)；
9-烯丙基-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(15c)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-(丙-2-炔-1-基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(17c)；
(1S,2R,3S,4R)-4-(6-(((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)氨基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-9-基)环戊烷-1,2,3-三醇(19d)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-甲基-2-(甲硫基)-9H-嘌呤-6-胺(22c)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-乙基-2-(甲硫基)-9H-嘌呤-6-胺(24c)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(乙硫基)-9-甲基-9H-嘌呤-6-胺(20c)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-乙基-2-(乙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(21c)；
2-(丁硫基)-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-甲基-9H-嘌呤-6-胺(25c)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-1-甲基-6-(甲硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(27k)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-1-乙基-6-(甲硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(30k)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-6-(乙硫基)-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(28x.HCl)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-1-异丙基-6-(甲硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(33k.HCl)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-7-乙基-2-(甲硫基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(35p.HCl)；
或其异构体、外消旋混合物、药用酸加成盐、药用金属盐或烷基化铵盐或其前药。
表面上的生物膜的最优选的抑制剂是如所示出的N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-甲基-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(1c)：
Figure BDA0002504052250000251
或其异构体、外消旋混合物、药用酸加成盐、药用金属盐或烷基化铵盐或其前药。
医疗装置和生物材料植入物对细菌定殖易感，并且当它们在人体或动物体外或在人体或动物体内使用时可以分别被细菌生物膜形成感染。
为了避免不得不从宿主中移除受感染的生物材料植入物或者为了避免向宿主进一步施用高剂量的抗生素以抑制细菌感染，我们惊奇地发现将式(I)的嘧啶衍生物或其可接受的盐直接施用在医疗装置或生物材料植入物的表面上会预防细菌污染。
这样的施用可以通过本领域中熟知的各种技术进行，诸如例如用式(I)的嘧啶衍生物或其盐或者用包含式(I)的嘧啶衍生物或其异构体、外消旋混合物、药用酸加成盐、药用金属盐或其烷基化铵盐的药物组合物浸渍待涂覆的表面或喷洒表面。
表面意指任何类型的表面，诸如橡胶或塑料表面，例如由聚乙烯、聚丙烯、聚氨酯、聚氯乙烯、聚乙烯吡咯烷酮、聚四氟乙烯、硅酮等或共聚物制成的表面，但还优选金属表面诸如不锈钢、银、金、钛、金属合金、热解炭等。它还可以用于生物可吸收或生物材料表面，诸如生物假体或由生物材料制成的装置，诸如例如猪心瓣膜或牛心包。
抑制表面上的生物膜意指在细菌生物膜形成的所有阶段抑制其形成，从在步骤1中预防或抑制细菌在表面上的粘附开始，并且主要是在步骤2中抑制细菌生长、增殖和在表面上的微菌落形成。抑制生物膜还意指在成熟步骤3中抑制基质并且在定殖步骤中抑制细菌从基质中的分散。抑制生物膜还意指在生物膜形成的所有步骤中杀灭细菌。
根据本发明的另一个方面是在生物膜形成期间杀灭细菌或预防表面上的细菌生长的方法。
所述方法包括在预防步骤中在表面上施用式(I)的嘧啶衍生物或其异构体、外消旋混合物、药用酸加成盐、药用金属盐或其烷基化铵盐，减少在基底上的细菌粘附和存活或在已经存在生物膜的阶段中或者甚至在具有基质形成的成熟步骤(其中建立了更复杂的生物膜结构，作为对常规抗菌剂的屏障来保护细菌)中的细菌粘附和存活。
使细菌特别擅长在各种生物材料或医疗装置上存活的因素包括生物膜的粘附和产生。
生物膜形成的初始阶段是附着/粘附于表面，其在剪切应力条件下更强。主要负责这种粘附的蛋白质是多糖胞间粘附素(PIA)，其使得细菌彼此结合以及与表面结合，从而产生生物膜。生物膜形成的第二阶段是社区结构和生态系统的发展，从而产生成熟生物膜。最后阶段是从表面脱附，随后扩散到其他位置。在生物膜形成的所有阶段中，涉及介导细胞与细胞之间通讯的群体感应(QS)系统。
生物膜中的细菌产生细胞外聚合物物质(EPS)，其主要由多糖、核酸(细胞外DNA)和蛋白质组成，保护它们免受外部威胁(包括免疫系统组分和抗微生物剂)。此外，生物膜中的细菌具有减少的代谢，使其不易受抗生素的影响；这是因为大多数抗微生物剂需要一定程度的细胞活性才能有效。增强这种耐药性的另一个因素是抗生素在整个生物膜中的扩散受损，因为存在EPS基质屏障。
还熟知在生物膜中存在更高的质粒交换速率，增加了发展天然存在和抗微生物剂诱导的耐药性的机会。
已经开发的用于消除生物膜的策略针对生物膜形成中的3个不同步骤：抑制初始阶段，即细菌与表面的粘附；在成熟过程或步骤2期间破坏生物膜结构；抑制QS系统或步骤3。
由于这些生物膜对抗生素的高耐药性，越来越需要控制和防止步骤2中的微生物生长和生物膜形成以避免从宿主中移除生物材料植入物连同长期抗生素治疗。
杀灭细菌或预防表面上的细菌生长的方法通常应用于生物材料植入物或任何医疗装置(植入式或非植入式)。
生物材料植入物或医疗装置优选是植入式外来材料，用于宿主哺乳动物中的临床用途，诸如假体装置、起搏器、植入式复律除颤器、血管内导管、冠状动脉支架、心脏瓣膜、人工晶状体等，但是包括需要无菌的其他非植入式医疗装置，诸如例如伤口敷料、含有局部麻醉剂的软组织填充物、带有辅助药物的根管填充物等。
杀灭细菌或预防细菌生长的方法也可以应用于需要这样的抗菌处理的实验或手术装置的表面。实际上，可以实施所述方法，并且所述方法不限于涉及医学或实施人类或兽医医学或者旨在用于治愈或治疗或预防疾病的任何装置、工具、仪器。
在又一个方面，本发明提供了新型的任选地包含可检测标记物的式(I)的嘧啶衍生物或其盐，其用于诊断或预后宿主哺乳动物中的细菌感染。
如本文中使用的术语“可检测标记物”是指任何类型的标签，其是可检测的并且因此允许确定嘧啶衍生物的存在。在特别的实施方案中，标记物是允许将嘧啶衍生物用作放射性示踪剂的同位素。
本发明还提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含新型的任选地包含可检测标记物的式(I)的嘧啶衍生物或其盐，其用于诊断或预后宿主哺乳动物中的细菌感染。
我们惊奇地发现，任选地包含可检测同位素原子的式(I)的嘧啶衍生物或其组合物，可以用于检测宿主哺乳动物中的细菌感染；诸如例如用于诊断心内膜炎(在人工瓣膜手术之后发展的疾病)。实际上，包含可检测标签的根据本发明的嘧啶衍生物或其组合物可以鉴别宿主中的细菌感染，并且可以被细菌细胞吸收。因此，嘧啶衍生物或其组合物可以例如用作放射性示踪剂以用于体内成像。
通常，用于诊断的检测方法将取决于标记物的性质。例如，为了进行体内成像，嘧啶衍生物将包含放射性示踪剂，并且检测仪器的类型将取决于放射性示踪剂。例如，根据本发明的任选地包含至少一个可检测同位素的嘧啶衍生物可以使用β、γ、正电子或x-射线成像进行检测，其中例如β或γ辐照由相关同位素提供并且在适当的波长下检测。
任选地包含可检测同位素的嘧啶衍生物可以与例如X-射线成像、磁共振光谱(MRS)或成像(MRI)、超声检查、正电子发射断层扫描(PET)和单发射计算机断层扫描(SPECT)一起使用。
可检测嘧啶衍生物可以通过熟知的有机化学技术通过同位素19F或13C或其组合检测以用于MRS/MRI。
其他可检测嘧啶衍生物还可以包含选自19F、11C、75Br、76Br或120I或其组合的同位素以用于PET技术。
其他可检测嘧啶衍生物包含选自18F或11C或其组合的同位素以用于PET体内成像，如Bengt
Figure BDA0002504052250000281
于Acta Chemica Scandinavia,53:651-669(1999)或核医学杂志(thejournal of Nuclear Medicine)58(7):1094-1099(2017)A.M.J.Paans在https:// cds.cern.ch/record/1005065/files/p363.pdf中描述的。
嘧啶衍生物还可以包含123I和131I以用于SPECT，如Kulkarni,Int.J.Rad.Appl.&Inst(partB)18:647(1991)所描述的。
嘧啶衍生物还可以是用锝-99m(99mTc)可检测的。可以由本领域技术人员进行嘧啶衍生物的修饰以引入结合至这样的金属离子的配体。制备99mTc的可检测衍生物是本领域中众所周知的(Zhuang，于Nuclear Medicine&Biology 26(2):217-24(1999)。
优选的式(I)的嘧啶衍生物或其异构体、外消旋混合物、药用酸加成盐、药用金属盐或其烷基化铵盐；其用作放射性示踪剂，诸如用于诊断或预后细菌感染，其包含如式(IV)所示的苯基环丙基基团
Figure BDA0002504052250000291
最优选的式(I)的嘧啶衍生物或其异构体、外消旋混合物、药用酸加成盐、药用金属盐或其烷基化铵盐(诸如用作放射性示踪剂)包含二氟苯基环丙基基团。
最优选的式(I)的嘧啶衍生物或其异构体、外消旋混合物、药用酸加成盐、药用金属盐或其烷基化铵盐，其用作放射性示踪剂，其包含如式(II)所示的3,4二氟苯基环丙基基团。
放射性示踪剂意指这样的嘧啶衍生物，其中一个或多个原子被放射性核素或同位素替换以用作示踪剂，从而探究宿主哺乳动物的细胞、组织或流体并且鉴别宿主中的细菌感染(例如在人工瓣膜的表面处)的存在和重要性。
放射性核素或同位素意指例如3H、18F、19F、11C、13C、14C、75Br、76Br、120I、123I、125I、131I、15O、13N。
放射性示踪剂还意指与造影剂有关的嘧啶衍生物，诸如例如用于磁共振成像(MRI)的MRI造影剂或MR示踪剂；或用于造影超声成像(contrast-enhanced ultrasoundimaging)的造影剂。
用作放射性示踪剂的嘧啶衍生物或其组合物通过吸入、摄入或注射或者经由植入式储库在哺乳动物宿主中以与所选择的成像装置有关的剂量被局部地或系统地施用。施用可以是口服、肠胃外、局部、直肠、经鼻、阴道施用。
肠胃外意指皮下、静脉内、动脉内、腹膜内、鞘内、心室内等。
施用至宿主的剂量水平取决于其年龄、体重、一般健康情况、性别、施用时间、施用形式等，并且是本领域技术人员熟知的。根据所选择的成像技术，它们可以在0.001μg/kg/天和10,000mg/kg/天之间变化。
提供宿主哺乳动物的细菌感染的所得体内图像，例如人工瓣膜位置处的图像。
本发明的嘧啶衍生物的另外的应用包括监视样品(诸如生物样品)中的细菌污染。感兴趣的典型样品是水、血液、肉等。
附图简述
图1示出了相比于作为对照的单独含有赋形剂的介质(CTRL)，在以10μM的浓度含有测试分子2329(1c)、2348(3c)、2412(15c)、2452(17c)的介质中金黄色葡萄球菌(Xen29-ATCC 12600)生物膜形成(步骤2)的抑制。
图2示出了用不同浓度的分子2329(1c)进行24小时处理对表皮葡萄球菌的成熟生物膜(步骤3：24小时生物膜)的效果。用结晶紫染色的表皮葡萄球菌生物膜生物量与染料在570nm的吸光度成正比。
图3示出了相比于作为对照的单独含有赋形剂的介质(Ctrl)，在以20μM的浓度含有吡唑并分子2666(28x.HCl)和嘌呤分子2511(24c)的介质中金黄色葡萄球菌(Xen29-ATCC12600)生物膜形成(步骤2)的抑制动力学。
在下文中通过以下非限制性实施例示出本发明。
1.新型嘧啶衍生物的制备：
实施例1：N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-甲基-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(1c)的合成
6-氯-N4-甲基-2-(丙硫基)嘧啶-4,5-二胺(1a)
Figure BDA0002504052250000301
将4,6-二氯-2-(丙硫基)嘧啶-5-胺(0.5g，2.1mmol)溶解于甲醇(2mL)中，并且补充甲胺(33％w/w)在甲醇中的溶液(0.76mL，6.3mmol)。将反应混合物引入密封容器中并且在100℃加热1小时。将反应混合物在真空下浓缩至干燥后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：96％。
熔点：119-121℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.95(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.64(h,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),2.87(d,J＝4.5Hz,3H,NHCH3),2.96(t,J＝7.2Hz,2H,SCH2CH2CH3),4.71(s,2H,NH2),7.01(q,J＝4.4Hz,1H,NHCH3)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.3(SCH2CH2CH3),22.6(SCH2CH2CH3),27.8(NHCH3),32.1(SCH2CH2CH3),120.0(C-5),137.1(C-6),153.2(C-4),155.4(C-2)。
6-氯-9-甲基-2-(丙硫基)-9H-嘌呤(1b)
Figure BDA0002504052250000311
将(1a)(233.0mg，1mmol)在乙酸(2.5mL)和原甲酸三乙酯(2.5mL，15mmol)中的溶液在130℃的温度下在回流下加热1小时。将乙酸和原甲酸三乙酯在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：77％。
熔点：75-78℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.01(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.74(h,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),3.18(t,J＝7.2Hz,2H,SCH2CH2CH3),3.79(s,3H,NCH3),8.48(s,1H,8-H)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.2(SCH2CH2CH3),22.0(SCH2CH2CH3),29.9(NCH3),32.6(SCH2CH2CH3),127.9(C-5),147.0(C-8),148.7(C-6),153.2(C-4),163.9(C-2)。
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-甲基-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(1c)
Figure BDA0002504052250000312
向(1b)(122.0mg，0.5mmol)在乙腈(2.5mL)中的溶液中补充(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺(93.0mg，0.55mmol)和三乙胺(0.13mL)，然后在90℃在回流下加热1小时。将乙腈和三乙胺在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：42％。
熔点：94-96℃。
1H NMR(CDCl3)δ0.93(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.32(m,2H,NHCH(CH2)CHPh),1.65(h,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),2.09(m,1H,NHCH(CH2)CHPh),3.02(m,2H,SCH2CH2CH3),3.12(bs,1H,NHCH(CH2)CHPh),3.76(s,3H,NCH3),5.98(bs,1H,NH),6.97(m,1H,6’-H),7.07(m,2H,2’-H/5’-H),7.59(s,1H,8-H)。
13C NMR(CDCl3)δ13.4(SCH2CH2CH3),16.2(NHCH(CH2)CHPh),22.8(SCH2CH2CH3),25.2(NHCH(CH2)CHPh),29.7(NCH3),33.2(SCH2CH2CH3),33.4(NHCH(CH2)CHPh),115.5(d,J＝17Hz,C-2’),116.9(d,J＝17Hz,C-5’),117.4(C-5),122.6(C-6’),137.9(C-1’),139.5(C-8),147.9-149.9(dd,246Hz/13Hz,C-4’),149.2-151.2(dd,247Hz/13Hz,C-3’),150.8(C-4),154.5(C-6),165.6(C-2)。
实施例2：9-甲基-N-((1R,2S)-2-苯基环丙基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(2c)的合成
9-甲基-N-((1R,2S)-2-苯基环丙基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(2c)
Figure BDA0002504052250000321
向(1b)(122.0mg，0.5mmol)在乙腈(2.5mL)中的溶液中补充(1R,2S)-2-苯基环丙胺(56.0mg，1.1mmol)和三乙胺(0.13mL)，然后在90℃在回流下加热4小时。将溶剂在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：27％。
熔点：171-172.5℃。
1H NMR(CDCl3)δ0.88(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.33(m,2H,NHCH(CH2)CHPh),1.60(h,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),2.13(m,1H,NHCH(CH2)CHPh),2.92(m,1H,SCH2CH2CH3),3.06(m,1H,SCH2CH2CH3),3.22(bs,1H,NHCH(CH2)CHPh),3.75(s,3H,NCH3),5.97(bs,1H,NH),7.19(m,3H,2’-H/4’-H/6’-H),7.30(m,2H,3’-H/5’-H),7.58(s,1H,8-H)。
13C NMR(CDCl3)δ13.3(SCH2CH2CH3),16.8(NHCH(CH2)CHPh),22.8(SCH2CH2CH3),25.7(NHCH(CH2)CHPh),29.7(NCH3),33.3(SCH2CH2CH3),33.5(NHCH(CH2)CHPh),117.4(C-5),126.0(C-4’),126.2(C-2’/C-6’),128.3(C-3’/C-5’),139.5(C-8),140.9(C-1’),150.8(C-4),154.6(C-6),165.6(C-2)。
实施例3：N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-乙基-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(3c)的合成
6-氯-N4-乙基-2-(丙硫基)嘧啶-4,5-二胺(3a)
Figure BDA0002504052250000331
将4,6-二氯-2-(丙硫基)嘧啶-5-胺(0.5g，2.1mmol)溶解于乙胺(2.0M)在甲醇中的溶液(3.2mL，6.4mmol)中。将反应混合物引入密封容器中并且在100℃加热1小时。将反应混合物在真空下浓缩至干燥后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：77％。
熔点：96-98℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.95(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.16(t,J＝7.2Hz,3H,NHCH2CH3),1.63(h,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),2.94(t,J＝7.2Hz,2H,SCH2CH2CH3),3.37(m,2H,NHCH2CH3),4.75(s,2H,NH2),6.95(t,J＝4.8Hz,1H,NHCH2CH3)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.3(SCH2CH2CH3),14.3(NHCH2CH3),22.7(SCH2CH2CH3),32.1(SCH2CH2CH3),35.7(NHCH2CH3),119.8(C-5),137.3(C-6),152.5(C-4),155.3(C-2)。
6-氯-9-乙基-2-(丙硫基)-9H-嘌呤(3b)
Figure BDA0002504052250000332
将(3a)(247.0mg，1mmol)在乙酸(2.5mL)和原甲酸三乙酯(2.5mL，15mmol)中的溶液在130℃的温度下在回流下加热1小时。将乙酸和原甲酸三乙酯在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：77％。
熔点：96-97.5℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.01(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.44(t,J＝7.3Hz,3H,NCH2CH3),1.74(h,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),3.17(t,J＝7.2Hz,2H,SCH2CH2CH3),4.24(q,J＝7.3Hz,2H,NCH2CH3),8.56(s,1H,8-H)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.2(SCH2CH2CH3),14.6(NCH2CH3),22.0(SCH2CH2CH3),32.6(SCH2CH2CH3),39.9(NCH2CH3),128.1(C-5),146.0(C-8),148.8(C-6),152.7(C-4),163.8(C-2)。
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-乙基-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(3c)
Figure BDA0002504052250000341
向(3b)(129.0mg，0.5mmol)在乙腈(2.5mL)中的溶液中补充(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺(93.0mg，0.55mmol)和三乙胺(0.13mL)，然后在90℃在回流下加热1小时。将乙腈和三乙胺在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：43％。
熔点：109.5-111.5℃。
1H NMR(CDCl3)δ0.94(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.32(m,2H,NHCH(CH2)CHPh),1.50(t,J＝7.3Hz,3H,NCH2CH3),1.67(h,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),2.09(m,1H,NHCH(CH2)CHPh),3.03(m,2H,SCH2CH2CH3),3.12(bs,1H,NHCH(CH2)CHPh),4.18(q,J＝7.3Hz,2H,NCH2CH3),5.90(bs,1H,NH),6.99(m,1H,6’-H),7.08(m,2H,2’-H/5’-H),7.63(s,1H,8-H)。
13C NMR(CDCl3)δ13.4(SCH2CH2CH3),15.5(NCH2CH3),16.1(NHCH(CH2)CHPh),22.9(SCH2CH2CH3),25.2(NHCH(CH2)CHPh),33.2(SCH2CH2CH3),33.3(NHCH(CH2)CHPh),38.7(NCH2CH3),115.6(d,J＝17Hz,C-2’),116.9(d,J＝17Hz,C-5’),117.6(C-5),122.7(C-6’),137.9(C-1’),138.5(C-8),147.9-149.9(dd,246Hz/13Hz,C-4’),149.2-151.2(dd,247Hz/13Hz,C-3’),150.3(C-4),154.5(C-6),165.4(C-2)。
实施例4：N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-丙基-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(4c)的合成
6-氯-N4-丙基-2-(丙硫基)嘧啶-4,5-二胺(4a)
Figure BDA0002504052250000351
将4,6-二氯-2-(丙硫基)嘧啶-5-胺(0.5g，2.1mmol)溶解于甲醇(2mL)中，并且补充正丙胺(370.0mg，6.3mmol)。将反应混合物引入密封容器中并且在100℃加热30分钟。将反应混合物在真空下浓缩至干燥后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：91％。
熔点：100-102℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.91(t,J＝7.4Hz,3H,NHCH2CH2CH3),0.95(t,J＝7.3Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.56(h,J＝7.3Hz,2H,NHCH2CH2CH3),1.64(h,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),2.93(t,J＝7.2Hz,2H,SCH2CH2CH3),3.32(m,2H,NHCH2CH2CH3),4.76(s,2H,NH2),6.96(t,J＝4.8Hz,1H,NHCH2CH2CH3)。
13C NMR(DMSO-d6)δ11.5(NHCH2CH2CH3)13.3(SCH2CH2CH3),21.9(NHCH2CH2CH3),22.8(SCH2CH2CH3),32.1(SCH2CH2CH3),42.7(NHCH2CH2CH3),119.8(C-5),137.3(C-6),152.6(C-4),155.2(C-2)。
6-氯-9-丙基-2-(丙硫基)-9H-嘌呤(4b)
Figure BDA0002504052250000352
将(4a)(261.0mg，1mmol)在乙酸(2.5mL)和原甲酸三乙酯(2.5mL，15mmol)中的溶液在130℃的温度下在回流下加热1小时。将乙酸和原甲酸三乙酯在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：94％。
熔点：液体。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.85(t,J＝7.4Hz,3H,NCH2CH2CH3),1.01(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.74(h,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),1.86(h,J＝7.3Hz,2H,NCH2CH2CH3),3.17(t,J＝7.2Hz,2H,SCH2CH2CH3),4.18(t,J＝7.0Hz,2H,NCH2CH2CH3),8.55(s,1H,8-H)。
13C NMR(DMSO-d6)δ10.9(NCH2CH2CH3),13.2(SCH2CH2CH3),22.1(SCH2CH2CH3),22.3(NCH2CH2CH3),32.6(SCH2CH2CH3),45.3(NCH2CH2CH3),128.0(C-5),146.4(C-8),148.9(C-6),152.9(C-4),163.8(C-2)。
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-丙基-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(4c)
Figure BDA0002504052250000361
向(4b)(136.0mg，0.5mmol)在乙腈(2.5mL)中的溶液中补充(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺(93.0mg，0.55mmol)和三乙胺(0.13mL)，然后在90℃在回流下加热1小时。将乙腈和三乙胺在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：45％。
熔点：97-99℃。
1H NMR(CDCl3)δ0.94(t,J＝7.4Hz,6H,NCH2CH2CH3/SCH2CH2CH3),1.32(m,2H,NHCH(CH2)CHPh),1.67(h,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),1.90(h,J＝7.4Hz,2H,NCH2CH2CH3),2.09(m,1H,NHCH(CH2)CHPh),3.03(m,2H,SCH2CH2CH3),3.11(bs,1H,NHCH(CH2)CHPh),4.09(t,J＝7.1Hz,2H,NCH2CH2CH3),5.86(bs,1H,NH),7.00(m,1H,6’-H),7.09(m,2H,2’-H/5’-H),7.61(s,1H,8-H)。
13C NMR(CDCl3)δ11.2(NCH2CH2CH3),13.4(SCH2CH2CH3),15.7(NHCH(CH2)CHPh),22.9(SCH2CH2CH3),23.3(NCH2CH2CH3),25.2(NHCH(CH2)CHPh),33.2(SCH2CH2CH3),33.3(NHCH(CH2)CHPh),45.3(NCH2CH2CH3),115.6(d,J＝17Hz,C-2’),116.9(d,J＝17Hz,C-5’),117.6(C-5),122.7(C-6’),137.9(C-1’),139.0(C-8),147.9-149.9(dd,246Hz/13Hz,C-4’),149.2-151.2(dd,247Hz/13Hz,C-3’),150.5(C-4),154.5(C-6),165.4(C-2)。
实施例5：N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-异丙基-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(5c)的合成
6-氯-N4-异丙基-2-(丙硫基)嘧啶-4,5-二胺(5a)
Figure BDA0002504052250000371
将4,6-二氯-2-(丙硫基)嘧啶-5-胺(0.5g，2.1mmol)溶解于甲醇(2mL)中，并且补充异丙胺(370.0mg，6.3mmol)。将反应混合物引入密封容器中并且在100℃加热90分钟。将反应混合物在真空下浓缩至干燥后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：95％。
熔点：81-83℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.95(t,J＝7.3Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.19(d,J＝6.5Hz,6H,NHCH(CH3)2),1.63(h,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),2.93(t,J＝7.2Hz,2H,SCH2CH2CH3),4.16(m,1H,NHCH(CH3)2),4.81(s,2H,NH2),6.69(d,J＝6.9Hz,1H,NHCH(CH3)2)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.3(SCH2CH2CH3),22.2(NHCH(CH3)2),22.8(SCH2CH2CH3),32.1(SCH2CH2CH3),42.6(NHCH(CH3)2),119.7(C-5),137.3(C-6),151.7(C-4),155.1(C-2)。
6-氯-9-异丙基-2-(丙硫基)-9H-嘌呤(5b)
Figure BDA0002504052250000372
将(5a)(261.0mg，1mmol)在乙酸(2.5mL)和原甲酸三乙酯(2.5mL，15mmol)中的溶液在130℃的温度下在回流下加热1小时。将乙酸和原甲酸三乙酯在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：37％。
熔点：121-122.5℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.01(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.56(d,J＝6.8Hz,6H,NCH(CH3)2),1.74(h,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),3.16(t,J＝7.2Hz,2H,SCH2CH2CH3),4.80(七重峰,J＝6.8Hz,1H,NCH(CH3)2),8.62(s,1H,8-H)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.3(SCH2CH2CH3),21.7(NCH(CH3)2),22.1(SCH2CH2CH3),32.6(SCH2CH2CH3),47.9(NCH(CH3)2),128.4(C-5),144.7(C-8),148.9(C-6),152.3(C-4),163.5(C-2)。
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-异丙基-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(5c)
Figure BDA0002504052250000381
向(5b)(136.0mg，0.5mmol)在乙腈(2.5mL)中的溶液中补充(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺(93.0mg，0.55mmol)和三乙胺(0.13mL)，然后在90℃在回流下加热1小时。将乙腈和三乙胺在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：47％。
熔点：98.5-100.5℃。
1H NMR(CDCl3)δ0.95(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.31(m,2H,NHCH(CH2)CHPh),1.58(dd,J＝6.8Hz/1.6Hz,6H,NCH(CH3)2),1.68(h,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),2.08(m,1H,NHCH(CH2)CHPh),3.04(m,2H,SCH2CH2CH3),3.10(bs,1H,NHCH(CH2)CHPh),4.77(七重峰,J＝6.8Hz,1H,NCH(CH3)2),5.95(bs,1H,NH),7.00(m,1H,6’-H),7.09(m,2H,2’-H/5’-H),7.68(s,1H,8-H)。
13C NMR(CDCl3)δ13.5(SCH2CH2CH3),16.0(NHCH(CH2)CHPh),22.6(NCH(CH3)2),22.9(SCH2CH2CH3),25.2(NHCH(CH2)CHPh),33.2(SCH2CH2CH3),33.3(NHCH(CH2)CHPh),47.0(NCH(CH3)2),115.7(d,J＝17Hz,C-2’),116.9(d,J＝17Hz,C-5’),117.9(C-5),122.8(C-6’),136.7(C-8),137.9(C-1’),147.9-149.9(dd,246Hz/13Hz,C-4’),149.2-151.2(dd,247Hz/13Hz,C-3’),150.0(C-4),154.6(C-6),165.1(C-2)。
实施例6：9-环丙基-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(6c)的合成
6-氯-N4-环丙基-2-(丙硫基)嘧啶-4,5-二胺(6a)
Figure BDA0002504052250000391
将4,6-二氯-2-(丙硫基)嘧啶-5-胺(0.5g，2.1mmol)溶解于甲醇(2mL)中，并且补充环丙胺(360.0mg，6.3mmol)。将反应混合物引入密封容器中并且在100℃加热30分钟。将反应混合物在真空下浓缩至干燥后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：92％。
熔点：96-98℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.49(s,2H,NHCH(CH2)2),0.73(d,J＝5.7Hz,2H,NHCH(CH2)2),0.95(t,J＝7.1Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.66(h,J＝7.0Hz,2H,SCH2CH2CH3),2.80(m,1H,NHCH(CH2)2),2.97(t,J＝6.9Hz,2H,SCH2CH2CH3),4.74(s,2H,NH2),7.09(s,1H,NHCH(CH2)2)。
13C NMR(DMSO-d6)δ6.2(NHCH(CH2)2),13.3(SCH2CH2CH3),22.8(SCH2CH2CH3),24.1(NHCH(CH2)2),32.2(SCH2CH2CH3),120.0(C-5),137.3(C-6),153.4(C-4),155.2(C-2)。
6-氯-9-环丙基-2-(丙硫基)-9H-嘌呤(6b)
Figure BDA0002504052250000392
将(6a)(259.0mg，1mmol)在乙酸(2.5mL)和原甲酸三乙酯(2.5mL，15mmol)中的溶液在130℃的温度下在回流下加热1小时。将乙酸和原甲酸三乙酯在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：58％。
熔点：128.5-130℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.02(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.09(m,2H,NCH(CH2)2),1.16(m,2H,NCH(CH2)2),1.75(h,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),3.17(t,J＝7.2Hz,2H,SCH2CH2CH3),3.55(m,1H,NCH(CH2)2),8.52(s,1H,8-H)。
13C NMR(DMSO-d6)δ5.4(NCH(CH2)2),13.3(SCH2CH2CH3),22.1(SCH2CH2CH3),25.6(NCH(CH2)2),32.7(SCH2CH2CH3),128.2(C-5),146.7(C-8),148.8(C-6),153.9(C-4),163.9(C-2)。
9-环丙基-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(6c)
Figure BDA0002504052250000401
向(6b)(135.0mg，0.5mmol)在乙腈(2.5mL)中的溶液中补充(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺(93.0mg，0.55mmol)和三乙胺(0.13mL)，然后在90℃在回流下加热1小时。将乙腈和三乙胺在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：40％。
熔点：137-139℃。
1H NMR(CDCl3)δ0.95(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.10(m,2H,NCH(CH2)2),1.13(m,2H,NCH(CH2)2),1.31(m,2H,NHCH(CH2)CHPh),1.68(h,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),2.08(m,1H,NHCH(CH2)CHPh),3.03(m,2H,SCH2CH2CH3),3.10(bs,1H,NHCH(CH2)CHPh),3.38(tt,J＝7.1Hz/3.9Hz,1H,NCH(CH2)2),5.88(bs,1H,NH),6.99(m,1H,6’-H),7.08(m,2H,2’-H/5’-H),7.61(s,1H,8-H)。
13C NMR(CDCl3)δ5.9(NCH(CH2)2),13.5(SCH2CH2CH3),16.1(NHCH(CH2)CHPh),22.9(SCH2CH2CH3),25.2(NHCH(CH2)CHPh),25.3(NCH(CH2)2),33.2(SCH2CH2CH3),33.3(NHCH(CH2)CHPh),115.6(d,J＝17Hz,C-2’),116.9(d,J＝17Hz,C-5’),117.4(C-5),122.7(C-6’),137.9(C-1’),139.4(C-8),147.9-149.9(dd,246Hz/13Hz,C-4’),149.2-151.2(dd,247Hz/13Hz,C-3’),151.6(C-4),154.4(C-6),165.6(C-2)。
实施例7：9-丁基-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(7c)的合成
N4-丁基-6-氯-2-(丙硫基)嘧啶-4,5-二胺(7a)
Figure BDA0002504052250000411
将4,6-二氯-2-(丙硫基)嘧啶-5-胺(0.5g，2.1mmol)溶解于甲醇(2mL)中，并且补充正丁胺(460.0mg，6.3mmol)。将反应混合物引入密封容器中并且在100℃加热30分钟。将反应混合物在真空下浓缩至干燥后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：95％。
熔点：液体。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.91(t,J＝7.4Hz,3H,NHCH2CH2CH2CH3),0.95(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.35(h,J＝7.4Hz,2H,NHCH2CH2CH2CH3),1.55(p,J＝7.5Hz,2H,NHCH2CH2CH2CH3),1.64(h,J＝7.4Hz,2H,SCH2CH2CH3),2.95(t,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),3.37(m,2H,NHCH2CH2CH2CH3),4.76(s,2H,NH2),6.94(t,J＝5.2Hz,1H,NHCH2CH2CH2CH3)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.3(SCH2CH2CH3),13.7(NHCH2CH2CH2CH3),19.6(NHCH2CH2CH2CH3),22.8(SCH2CH2CH3),30.8(NHCH2CH2CH2CH3),32.1(SCH2CH2CH3),40.6(NHCH2CH2CH2CH3),119.8(C-5),137.3(C-6),152.6(C-4),155.2(C-2)。
9-丁基-6-氯-2-(丙硫基)-9H-嘌呤(7b)
Figure BDA0002504052250000421
将(7a)(275.0mg，1mmol)在乙酸(2.5mL)和原甲酸三乙酯(2.5mL，15mmol)中的溶液在130℃的温度下在回流下加热1小时。将乙酸和原甲酸三乙酯在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：72％。
熔点：液体。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.90(t,J＝7.4Hz,3H,NCH2CH2CH2CH3),1.01(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.26(h,J＝7.4Hz,2H,NCH2CH2CH2CH3),1.74(h,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),1.83(p,J＝7.2Hz,2H,NCH2CH2CH2CH3),3.16(t,J＝7.2Hz,2H,SCH2CH2CH3),4.22(t,J＝7.1Hz,2H,NCH2CH2CH2CH3),8.56(s,1H,8-H)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.2(SCH2CH2CH3),13.3(NCH2CH2CH2CH3),19.2(NCH2CH2CH2CH3),22.1(SCH2CH2CH3),30.9(NCH2CH2CH2CH3),32.6(SCH2CH2CH3),43.3(NCH2CH2CH2CH3),127.9(C-5),146.3(C-8),148.9(C-6),152.8(C-4),163.8(C-2)。
9-丁基-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(7c)
Figure BDA0002504052250000422
向(7b)(143.0mg，0.5mmol)在乙腈(2.5mL)中的溶液中补充(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺(93.0mg，0.55mmol)和三乙胺(0.13mL)，然后在90℃在回流下加热1小时。将乙腈和三乙胺在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：61％。
熔点：85-87℃。
1H NMR(CDCl3)δ0.95(m,6H,NCH2CH2CH2CH3/SCH2CH2CH3),1.33(m,4H,NCH2CH2CH2CH3/NHCH(CH2)CHPh),1.68(h,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),1.86(p,J＝7.3Hz,2H,NCH2CH2CH2CH3),2.10(m,1H,NHCH(CH2)CHPh),3.03(m,2H,SCH2CH2CH3),3.13(bs,1H,NHCH(CH2)CHPh),4.14(t,J＝7.1Hz,2H,NCH2CH2CH2CH3),6.19(bs,1H,NH),6.99(m,1H,6’-H),7.08(m,2H,2’-H/5’-H),7.64(s,1H,8-H)。
13C NMR(CDCl3)δ13.5(SCH2CH2CH3/NCH2CH2CH2CH3),16.0(NHCH(CH2)CHPh),19.8(NCH2CH2CH2CH3),22.9(SCH2CH2CH3),25.2(NHCH(CH2)CHPh),31.9(NCH2CH2CH2CH3),33.2(SCH2CH2CH3),33.4(NHCH(CH2)CHPh),43.5(NCH2CH2CH2CH3),115.7(d,J＝17Hz,C-2’),116.9(d,J＝17Hz,C-5’),117.5(C-5),122.7(C-6’),136.5(C-8),137.9(C-1’),147.9-149.9(dd,246Hz/13Hz,C-4’),149.2-151.2(dd,247Hz/13Hz,C-3’),150.4(C-4),154.3(C-6),165.8(C-2)。
实施例8：9-(仲丁基)-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(8c)的合成
N4-(仲丁基)-6-氯-2-(丙硫基)嘧啶-4,5-二胺(8a)
Figure BDA0002504052250000431
将4,6-二氯-2-(丙硫基)嘧啶-5-胺(0.5g，2.1mmol)溶解于甲醇(2mL)中，并且补充仲丁胺(460.0mg，6.3mmol)。将反应混合物引入密封容器中并且在100℃加热90分钟。将反应混合物在真空下浓缩至干燥后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：81％。
熔点：液体。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.87(t,J＝7.4Hz,3H,NHCH(CH3)CH2CH3),0.95(t,J＝7.3Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.15(d,J＝6.6Hz,3H,NHCH(CH3)CH2CH3),1.53(m,2H,NHCH(CH3)CH2CH3),1.64(h,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),2.93(t,J＝7.2Hz,2H,SCH2CH2CH3),4.01(七重峰,J＝6.6Hz,1H,NHCH(CH3)CH2CH3),4.81(s,2H,NH2),6.64(d,J＝7.5Hz,1H,NHCH(CH3)CH2CH3)。
13C NMR(DMSO-d6)δ10.5(NHCH(CH3)CH2CH3),13.3(SCH2CH2CH3),19.8(NHCH(CH3)CH2CH3),22.8(SCH2CH2CH3),28.6(NHCH(CH3)CH2CH3),32.1(SCH2CH2CH3),47.9(NHCH(CH3)CH2CH3),119.7(C-5),137.3(C-6),152.0(C-4),155.0(C-2)。
9-(仲丁基)-6-氯-2-(丙硫基)-9H-嘌呤(8b)
Figure BDA0002504052250000441
将(8a)(275.0mg，1mmol)在乙酸(2.5mL)和原甲酸三乙酯(2.5mL，15mmol)中的溶液在130℃的温度下在回流下加热4小时。将乙酸和原甲酸三乙酯在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：39％。
熔点：64-66℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.74(t,J＝7.4Hz,3H,NCH(CH3)CH2CH3),1.01(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.57(d,J＝6.9Hz,3H,NCH(CH3)CH2CH3),1.74(h,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),1.95(m,2H,NCH(CH3)CH2CH3),3.15(m,2H,SCH2CH2CH3),4.57(m,1H,NCH(CH3)CH2CH3),8.63(s,1H,8-H)。
13C NMR(DMSO-d6)δ10.5(NCH(CH3)CH2CH3),13.3(SCH2CH2CH3),19.8(NCH(CH3)CH2CH3),22.1(SCH2CH2CH3),28.3(NCH(CH3)CH2CH3),32.6(SCH2CH2CH3),53.6(NCH(CH3)CH2CH3),128.2(C-5),145.1(C-8),149.0(C-6),152.5(C-4),163.6(C-2)。
9-(仲丁基)-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(8c)
Figure BDA0002504052250000442
向(8b)(143.0mg，0.5mmol)在乙腈(2.5mL)中的溶液中补充(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺(93.0mg，0.55mmol)和三乙胺(0.13mL)，然后在90℃在回流下加热4小时。将乙腈和三乙胺在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：66％。
熔点：68-71℃。
1H NMR(CDCl3)δ0.85(td,J＝7.4Hz/1.6Hz,3H,NCH(CH3)CH2CH3),0.96(t,J＝7.3Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.33(m,2H,NHCH(CH2)CHPh),1.57(d,J＝6.9Hz,3H,NCH(CH3)CH2CH3),1.69(h,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),1.95(m,2H,NCH(CH3)CH2CH3),2.10(m,1H,NHCH(CH2)CHPh),3.03(m,2H,SCH2CH2CH3),3.11(bs,1H,NHCH(CH2)CHPh),4.52(m,1H,NCH(CH3)CH2CH3),6.12(bs,1H,NH),7.00(m,1H,6’-H),7.10(m,2H,2’-H/5’-H),7.67(s,1H,8-H)。
13C NMR(CDCl3)δ10.7(NCH(CH3)CH2CH3),13.5(SCH2CH2CH3),15.9(NHCH(CH2)CHPh),20.6(NCH(CH3)CH2CH3),22.9(SCH2CH2CH3),25.2(NHCH(CH2)CHPh),29.5(NCH(CH3)CH2CH3),33.2(SCH2CH2CH3),33.3(NHCH(CH2)CHPh),53.0(NCH(CH3)CH2CH3),115.8(d,J＝17Hz,C-2’),116.9(d,J＝17Hz,C-5’),117.3(C-5),122.8(C-6’),137.0(C-8),137.9(C-1’),147.9-149.9(dd,246Hz/13Hz,C-4’),149.2-151.2(dd,247Hz/13Hz,C-3’),150.3(C-4),154.4(C-6),165.1(C-2)。
实施例9：9-(叔丁基)-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(9c)的合成
N4-(叔丁基)-6-氯-2-(丙硫基)嘧啶-4,5-二胺(9a)
Figure BDA0002504052250000451
将4,6-二氯-2-(丙硫基)嘧啶-5-胺(0.5g，2.1mmol)溶解于甲醇(2mL)中，并且补充叔丁胺(460.0mg，6.3mmol)。将反应混合物引入密封容器中并且在100℃加热24小时。将反应混合物在真空下浓缩至干燥后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：88％。
熔点：88-89℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.95(t,J＝7.3Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.43(s,9H,NHC(CH3)3),1.62(h,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),2.95(t,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),4.91(bs,2H,NH2),6.19(s,1H,NHC(CH3)3)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.3(SCH2CH2CH3),22.9(SCH2CH2CH3),28.5(NHC(CH3)3),31.9(SCH2CH2CH3),51.9(NHC(CH3)3),120.3(C-5),137.6(C-6),152.1(C-4),154.5(C-2)。
9-(叔丁基)-6-氯-2-(丙硫基)-9H-嘌呤(9b)
Figure BDA0002504052250000461
将(9a)(275.0mg，1mmol)在乙酸(2.5mL)和原甲酸三乙酯(2.5mL，15mmol)中的溶液在130℃的温度下在回流下加热10小时。将乙酸和原甲酸三乙酯在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：41％。
熔点：116-117℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.02(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.74(m,11H,SCH2CH2CH3/NC(CH3)3),3.14(t,J＝7.2Hz,2H,SCH2CH2CH3),8.54(s,1H,8-H)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.3(SCH2CH2CH3),22.1(SCH2CH2CH3),28.3(NC(CH3)3),32.7(SCH2CH2CH3),58.0(NC(CH3)3),129.0(C-5),144.2(C-8),149.3(C-6),152.6(C-4),162.9(C-2)。
9-(叔丁基)-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(9c)
Figure BDA0002504052250000462
向(9b)(143.0mg，0.5mmol)在乙腈(2.5mL)中的溶液中补充(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺(93.0mg，0.55mmol)和三乙胺(0.13mL)，然后在90℃在回流下加热2小时。将乙腈和三乙胺在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：56％。
熔点：125-128℃。
1H NMR(CDCl3)δ1.01(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.29(m,2H,NHCH(CH2)CHPh),1.77(m,11H,SCH2CH2CH3/NC(CH3)3),2.08(m,1H,NHCH(CH2)CHPh),3.06(m,3H,SCH2CH2CH3/NHCH(CH2)CHPh),5.95(bs,1H,NH),7.08(m,2H,5’-H/6’-H),7.17(m,1H,2’-H),7.70(s,1H,8-H)。
13C NMR(CDCl3)δ13.6(SCH2CH2CH3),15.6(NHCH(CH2)CHPh),23.1(SCH2CH2CH3),25.2(NHCH(CH2)CHPh),29.0(NC(CH3)3),33.0(NHCH(CH2)CHPh),33.2(SCH2CH2CH3),57.1(NC(CH3)3),116.2(d,J＝17Hz,C-2’),116.9(d,J＝17Hz,C-5’),118.9(C-5),123.1(C-6’),136.5(C-8),137.8(C-1’),147.9-149.9(dd,246Hz/13Hz,C-4’),149.2-151.2(dd,247Hz/13Hz,C-3’),150.7(C-4),154.9(C-6),164.3(C-2)。
实施例10：9-环丁基-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(10c)的合成
6-氯-N4-环丁基-2-(丙硫基)嘧啶-4,5-二胺(10a)
Figure BDA0002504052250000471
将4,6-二氯-2-(丙硫基)嘧啶-5-胺(0.5g，2.1mmol)溶解于甲醇(2mL)中，并且补充环丁胺(440.0mg，6.3mmol)。将反应混合物引入密封容器中并且在100℃加热1小时。将反应混合物在真空下浓缩至干燥后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：96％。
熔点：73-75.5℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.96(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.63(h,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),1.72(m,2H,NHCH(CH2)3),1.95(m,2H,NHCH(CH2)3),2.29(m,2H,NHCH(CH2)3),2.94(t,J＝7.2Hz,2H,SCH2CH2CH3),4.38(h,J＝8.0Hz,1H,NHCH(CH2)3),4.80(s,2H,NH2),7.11(d,J＝6.3Hz,1H,NHCH(CH2)3)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.3(SCH2CH2CH3),14.9(NHCH(CH2)3),22.7(SCH2CH2CH3),30.2(NHCH(CH2)3),32.1(SCH2CH2CH3),46.3(NHCH(CH2)3),119.7(C-5),137.4(C-6),151.5(C-4),155.1(C-2)。
6-氯-9-环丁基-2-(丙硫基)-9H-嘌呤(10b)
Figure BDA0002504052250000481
将(10a)(273.0mg，1mmol)在乙酸(2.5mL)和原甲酸三乙酯(2.5mL，15mmol)中的溶液在130℃的温度下在回流下加热1小时。将乙酸和原甲酸三乙酯在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：62％。
熔点：89-91.5℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.02(t,J＝7.3Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.75(h,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),1.90(m,2H,NCH(CH2)3),2.47(m,2H,NCH(CH2)3),2.73(m,2H,NCH(CH2)3),3.17(t,J＝7.2Hz,2H,SCH2CH2CH3),5.03(p,J＝8.6Hz,1H,NCH(CH2)3),8.66(s,1H,8-H)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.3(SCH2CH2CH3),14.8(NCH(CH2)3),22.1(SCH2CH2CH3),29.2(NCH(CH2)3),32.7(SCH2CH2CH3),48.8(NCH(CH2)3),128.3(C-5),145.1(C-8),148.9(C-6),152.5(C-4),163.7(C-2)。
9-环丁基-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(10c)
Figure BDA0002504052250000491
向(10b)(142.0mg，0.5mmol)在乙腈(2.5mL)中的溶液中补充(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺(93.0mg，0.55mmol)和三乙胺(0.13mL)，然后在90℃在回流下加热2小时。将乙腈和三乙胺在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：76％。
熔点：143-145℃。
1H NMR(CDCl3)δ0.96(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.32(m,2H,NHCH(CH2)CHPh),1.70(h,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),1.95(m,2H,NCH(CH2)3),2.09(m,1H,NHCH(CH2)CHPh),2.56(m,2H,NCH(CH2)3),2.64(m,2H,NCH(CH2)3),3.04(m,2H,SCH2CH2CH3),3.10(bs,1H,NHCH(CH2)CHPh),4.95(p,J＝8.6Hz,1H,NCH(CH2)3),6.06(bs,1H,NH),7.00(m,1H,6’-H),7.09(m,2H,2’-H/5’-H),7.74(s,1H,8-H)。
13C NMR(CDCl3)δ13.5(SCH2CH2CH3),15.3(NCH(CH2)3),16.0(NHCH(CH2)CHPh),22.9(SCH2CH2CH3),25.2(NHCH(CH2)CHPh),30.5(NCH(CH2)3),33.2(SCH2CH2CH3),33.3(NHCH(CH2)CHPh),48.8(NCH(CH2)3),115.8(d,J＝17Hz,C-2’),116.9(d,J＝17Hz,C-5’),117.5(C-5),122.8(C-6’),137.3(C-8),137.8(C-1’),147.9-149.9(dd,246Hz/13Hz,C-4’),149.2-151.2(dd,247Hz/13Hz,C-3’),150.4(C-4),154.5(C-6),165.2(C-2)。
实施例11：N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-戊基-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(11c)的合成
6-氯-N4-戊基-2-(丙硫基)嘧啶-4,5-二胺(11a)
Figure BDA0002504052250000492
将4,6-二氯-2-(丙硫基)嘧啶-5-胺(0.5g，2.1mmol)溶解于甲醇(2mL)中，并且补充正戊胺(550.0mg，6.3mmol)。将反应混合物引入密封容器中并且在100℃加热30分钟。将反应混合物在真空下浓缩至干燥后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：96％。
熔点：68-69℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.87(t,J＝7.0Hz,3H,NHCH2CH2CH2CH2CH3),0.95(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.30(m,4H,NHCH2CH2CH2CH2CH3),1.55(p,J＝7.3Hz,2H,NHCH2CH2CH2CH2CH3),1.63(h,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),2.94(t,J＝7.2Hz,2H,SCH2CH2CH3),3.34(m,2H,NHCH2CH2CH2CH2CH3),4.75(s,2H,NH2),6.95(t,J＝5.2Hz,1H,NHCH2CH2CH2CH2CH3)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.3(SCH2CH2CH3),13.9(NHCH2CH2CH2CH2CH3),21.9(NHCH2CH2CH2CH2CH3),22.8(SCH2CH2CH3),28.3(NHCH2CH2CH2CH2CH3),28.7(NHCH2CH2CH2CH2CH3),32.1(SCH2CH2CH3),40.8(NHCH2CH2CH2CH2CH3),119.8(C-5),137.3(C-6),152.6(C-4),155.2(C-2)。
6-氯-9-戊基-2-(丙硫基)-9H-嘌呤(11b)
Figure BDA0002504052250000501
将(11a)(289.0mg，1mmol)在乙酸(2.5mL)和原甲酸三乙酯(2.5mL，15mmol)中的溶液在130℃的温度下在回流下加热1小时。将乙酸和原甲酸三乙酯在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：87％。
熔点：液体。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.85(t,J＝7.3Hz,3H,NCH2CH2CH2CH2CH3),1.02(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.23(m,2H,NCH2CH2CH2CH2CH3),1.31(m,2H,NCH2CH2CH2CH2CH3),1.75(h,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),1.86(p,J＝7.2Hz,2H,NCH2CH2CH2CH2CH3),3.17(t,J＝7.2Hz,2H,SCH2CH2CH3),4.22(t,J＝7.1Hz,2H,NCH2CH2CH2CH2CH3),8.56(s,1H,8-H)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.3(SCH2CH2CH3),13.7(NCH2CH2CH2CH2CH3),21.5(NCH2CH2CH2CH2CH3),22.1(SCH2CH2CH3),28.1(NCH2CH2CH2CH2CH3),28.5(NCH2CH2CH2CH2CH3),32.6(SCH2CH2CH3),43.6(NCH2CH2CH2CH2CH3),127.9(C-5),146.3(C-8),148.9(C-6),152.8(C-4),163.8(C-2)。
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-戊基-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(11c)
Figure BDA0002504052250000511
向(11b)(150.0mg，0.5mmol)在乙腈(2.5mL)中的溶液中补充(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺(93.0mg，0.55mmol)和三乙胺(0.13mL)，然后在90℃在回流下加热3小时。将乙腈和三乙胺在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：83％。
熔点：98-100.5℃。
1H NMR(CDCl3)δ0.89(t,J＝7.2Hz,3H,NCH2CH2CH2CH2CH3),0.95(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.32(m,6H,NCH2CH2CH2CH2CH3/NHCH(CH2)CHPh),1.68(h,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),1.87(p,J＝7.3Hz,2H,NCH2CH2CH2CH2CH3),2.09(m,1H,NHCH(CH2)CHPh),3.04(m,2H,SCH2CH2CH3),3.10(bs,1H,NHCH(CH2)CHPh),4.12(t,J＝7.2Hz,2H,NCH2CH2CH2CH2CH3),5.97(bs,1H,NH),7.00(m,1H,6’-H),7.09(m,2H,2’-H/5’-H),7.60(s,1H,8-H)。
13C NMR(CDCl3)δ13.5(SCH2CH2CH3),13.9(NCH2CH2CH2CH2CH3),16.0(NHCH(CH2)CHPh),22.2(NCH2CH2CH2CH2CH3),22.9(SCH2CH2CH3),25.2(NHCH(CH2)CHPh),28.7(NCH2CH2CH2CH2CH3),29.7(NCH2CH2CH2CH2CH3),33.2(SCH2CH2CH3),33.3(NHCH(CH2)CHPh),43.7(NCH2CH2CH2CH2CH3),115.7(d,J＝17Hz,C-2’),116.9(d,J＝17Hz,C-5’),117.5(C-5),122.7(C-6’),137.9(C-1’),139.0(C-8),147.9-149.9(dd,246Hz/13Hz,C-4’),149.2-151.2(dd,247Hz/13Hz,C-3’),150.5(C-4),154.6(C-6),165.4(C-2)。
实施例12：9-环戊基-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(12c)的合成
6-氯-N4-环戊基-2-(丙硫基)嘧啶-4,5-二胺(12a)
Figure BDA0002504052250000521
将4,6-二氯-2-(丙硫基)嘧啶-5-胺(0.5g，2.1mmol)溶解于甲醇(2mL)中，并且补充环戊胺(536.0mg，6.3mmol)。将反应混合物引入密封容器中并且在100℃加热2小时。将反应混合物在真空下浓缩至干燥后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：95％。
熔点：86-88℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.95(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.49(m,2H,NHCH(CH2)4),1.55(m,2H,NHCH(CH2)4),1.64(m,2H,SCH2CH2CH3),1.70(m,2H,NHCH(CH2)4),1.96(m,2H,NHCH(CH2)4),2.94(t,J＝7.2Hz,2H,SCH2CH2CH3),4.25(h,J＝6.7Hz,1H,NHCH(CH2)4),4.83(s,2H,NH2),6.76(d,J＝6.3Hz,1H,NHCH(CH2)4)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.3(SCH2CH2CH3),22.9(SCH2CH2CH3),23.5(NHCH(CH2)4),32.1(SCH2CH2CH3),32.2(NHCH(CH2)4),52.7(NHCH(CH2)4),119.9(C-5),137.2(C-6),152.0(C-4),155.0(C-2)。
6-氯-9-环戊基-2-(丙硫基)-9H-嘌呤(12b)
Figure BDA0002504052250000531
将(12a)(287.0mg，1mmol)在乙酸(2.5mL)和原甲酸三乙酯(2.5mL，15mmol)中的溶液在130℃的温度下在回流下加热1小时。将乙酸和原甲酸三乙酯在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：37％。
熔点：81-83℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.01(t,J＝7.3Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.74(m,4H,SCH2CH2CH3/NCH(CH2)4),1.90(m,2H,NCH(CH2)4),2.06(m,2H,NCH(CH2)4),2.19(m,2H,NCH(CH2)4),3.16(t,J＝7.2Hz,2H,SCH2CH2CH3),4.90(p,J＝7.6Hz,1H,NCH(CH2)4),8.59(s,1H,8-H)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.2(SCH2CH2CH3),22.1(SCH2CH2CH3),23.8(NCH(CH2)4),31.5(NCH(CH2)4),32.6(SCH2CH2CH3),56.4(NCH(CH2)4),128.5(C-5),145.2(C-8),148.9(C-6),152.5(C-4),163.5(C-2)。
9-环戊基-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(12c)
Figure BDA0002504052250000532
向(12b)(149.0mg，0.5mmol)在乙腈(2.5mL)中的溶液中补充(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺(93.0mg，0.55mmol)和三乙胺(0.13mL)，然后在90℃在回流下加热3小时。将乙腈和三乙胺在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：35％。
熔点：112-114℃。
1H NMR(CDCl3)δ0.95(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.31(m,2H,NHCH(CH2)CHPh),1.68(h,J＝7.4Hz,2H,SCH2CH2CH3),1.79(m,2H,NCH(CH2)4),1.94(m,2H,NCH(CH2)4),1.99(m,2H,NCH(CH2)4),2.09(m,1H,NHCH(CH2)CHPh),2.26(m,2H,NCH(CH2)4),3.04(m,2H,SCH2CH2CH3),3.10(bs,1H,NHCH(CH2)CHPh),4.84(p,J＝7.4Hz,1H,NCH(CH2)4),5.92(bs,1H,NH),7.00(m,1H,6’-H),7.09(m,2H,2’-H/5’-H),7.65(s,1H,8-H)。
13C NMR(CDCl3)δ13.5(SCH2CH2CH3),16.0(NHCH(CH2)CHPh),22.9(SCH2CH2CH3),24.1(NCH(CH2)4),25.3(NHCH(CH2)CHPh),32.6(NCH(CH2)4),33.2(SCH2CH2CH3),33.3(NHCH(CH2)CHPh),56.0(NCH(CH2)4),115.7(d,J＝17Hz,C-2’),116.9(d,J＝17Hz,C-5’),117.9(C-5),122.8(C-6’),137.4(C-8),137.9(C-1’),147.9-149.9(dd,246Hz/13Hz,C-4’),149.2-151.2(dd,247Hz/13Hz,C-3’),150.0(C-4),154.6(C-6),165.0(C-2)。
实施例13：N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-己基-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(13c)的合成
6-氯-N4-己基-2-(丙硫基)嘧啶-4,5-二胺(13a)
Figure BDA0002504052250000541
将4,6-二氯-2-(丙硫基)嘧啶-5-胺(0.5g，2.1mmol)溶解于甲醇(2mL)中，并且补充正己胺(638.0mg，6.3mmol)。将反应混合物引入密封容器中并且在100℃加热1小时。将反应混合物在真空下浓缩至干燥后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：85％。
熔点：54-57℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.87(t,J＝6.4Hz,3H,NHCH2CH2CH2CH2CH2CH3),0.95(t,J＝7.3Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.29(m,6H,NHCH2CH2CH2CH2CH2CH3),1.54(p,J＝6.9Hz,2H,NHCH2CH2CH2CH2CH2CH3),1.63(h,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),2.94(t,J＝7.2Hz,2H,SCH2CH2CH3),3.34(m,2H,NHCH2CH2CH2CH2CH2CH3),4.76(s,2H,NH2),6.95(t,J＝4.9Hz,1H,NHCH2CH2CH2CH2CH2CH3)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.3(SCH2CH2CH3),13.9(NHCH2CH2CH2CH2CH2CH3),22.1(NHCH2CH2CH2CH2CH2CH3),22.8(SCH2CH2CH3),26.1(NHCH2CH2CH2CH2CH2CH3),28.6(NHCH2CH2CH2CH2CH2CH3),31.0(NHCH2CH2CH2CH2CH2CH3),32.1(SCH2CH2CH3),40.9(NHCH2CH2CH2CH2CH2CH3),119.8(C-5),137.3(C-6),152.6(C-4),155.2(C-2)。
6-氯-9-己基-2-(丙硫基)-9H-嘌呤(13b)
Figure BDA0002504052250000551
将(13a)(303.0mg，1mmol)在乙酸(2.5mL)和原甲酸三乙酯(2.5mL，15mmol)中的溶液在130℃的温度下在回流下加热1小时。将乙酸和原甲酸三乙酯在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：90％。
熔点：液体。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.83(t,J＝6.8Hz,3H,NCH2CH2CH2CH2CH2CH3),1.01(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.25(m,6H,NCH2CH2CH2CH2CH2CH3),1.74(h,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),1.84(p,J＝7.2Hz,2H,NCH2CH2CH2CH2CH2CH3),3.16(t,J＝7.2Hz,2H,SCH2CH2CH3),4.21(t,J＝7.1Hz,2H,NCH2CH2CH2CH2CH2CH3),8.56(s,1H,8-H)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.3(SCH2CH2CH3),13.8(NCH2CH2CH2CH2CH2CH3),21.9(NCH2CH2CH2CH2CH2CH3),22.1(SCH2CH2CH3),25.5(NCH2CH2CH2CH2CH2CH3),28.8(NCH2CH2CH2CH2CH2CH3),30.5(NCH2CH2CH2CH2CH2CH3),32.6(SCH2CH2CH3),43.6(NCH2CH2CH2CH2CH2CH3),127.9(C-5),146.3(C-8),148.9(C-6),152.8(C-4),163.8(C-2)。
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-己基-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(13c)
Figure BDA0002504052250000561
向(13b)(157.0mg，0.5mmol)在乙腈(2.5mL)中的溶液中补充(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺(93.0mg，0.55mmol)和三乙胺(0.13mL)，然后在90℃在回流下加热1小时。将乙腈和三乙胺在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：60％。
熔点：84-86℃。
1H NMR(CDCl3)δ0.88(m,3H,NCH2CH2CH2CH2CH2CH3),0.95(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.30(m,8H,NCH2CH2CH2CH2CH2CH3/NHCH(CH2)CHPh),1.68(h,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),1.86(m,2H,NCH2CH2CH2CH2CH2CH3),2.09(m,1H,NHCH(CH2)CHPh),3.03(m,2H,SCH2CH2CH3),3.10(bs,1H,NHCH(CH2)CHPh),4.12(t,J＝7.2Hz,2H,NCH2CH2CH2CH2CH2CH3),5.96(bs,1H,NH),6.99(m,1H,6’-H),7.09(m,2H,2’-H/5’-H),7.60(s,1H,8-H)。
13C NMR(CDCl3)δ13.5(SCH2CH2CH3),14.0(NCH2CH2CH2CH2CH2CH3),16.0(NHCH(CH2)CHPh),22.5(NCH2CH2CH2CH2CH2CH3),22.9(SCH2CH2CH3),25.2(NHCH(CH2)CHPh),26.3(NCH2CH2CH2CH2CH2CH3),29.9(NCH2CH2CH2CH2CH2CH3),31.2(NCH2CH2CH2CH2CH2CH3),33.2(SCH2CH2CH3),33.3(NHCH(CH2)CHPh),43.7(NCH2CH2CH2CH2CH2CH3),115.7(d,J＝17Hz,C-2’),116.9(d,J＝17Hz,C-5’),117.5(C-5),122.7(C-6’),137.9(C-1’),139.0(C-8),147.9-149.9(dd,246Hz/13Hz,C-4’),149.2-151.2(dd,247Hz/13Hz,C-3’),150.5(C-4),154.6(C-6),165.4(C-2)。
实施例14：9-环己基-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(14c)的合成
6-氯-N4-环己基-2-(丙硫基)嘧啶-4,5-二胺(14a)
Figure BDA0002504052250000571
将4,6-二氯-2-(丙硫基)嘧啶-5-胺(0.5g，2.1mmol)溶解于甲醇(2mL)中，并且补充环己胺(625.0mg，6.3mmol)。将反应混合物引入密封容器中并且在100℃加热1小时。将反应混合物在真空下浓缩至干燥后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：91％。
熔点：90-93℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.96(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.22(m,5H,NHCH(CH2)5),1.64(m,3H,SCH2CH2CH3/NHCH(CH2)5),1.75(m,2H,NHCH(CH2)5),1.93(m,2H,NHCH(CH2)5),2.92(t,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),3.84(m,1H,NHCH(CH2)5),4.82(s,2H,NH2),6.68(d,J＝7.1Hz,1H,NHCH(CH2)5)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.4(SCH2CH2CH3),23.0(SCH2CH2CH3),24.8(NHCH(CH2)5),25.3(NHCH(CH2)5),32.1(SCH2CH2CH3),32.3(NHCH(CH2)5),49.9(NHCH(CH2)5),119.7(C-5),137.4(C-6),151.6(C-4),155.0(C-2)。
6-氯-9-环己基-2-(丙硫基)-9H-嘌呤(14b)
Figure BDA0002504052250000572
将(14a)(301.0mg，1mmol)在乙酸(2.5mL)和原甲酸三乙酯(2.5mL，15mmol)中的溶液在130℃的温度下在回流下加热2小时。将乙酸和原甲酸三乙酯在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：62％。
熔点：93-95℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.02(t,J＝7.3Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.25(m,1H,NCH(CH2)5),1.44(m,2H,NCH(CH2)5),1.75(m,3H,SCH2CH2CH3/NCH(CH2)5),1.87(m,2H,NCH(CH2)5),1.99(m,4H,NCH(CH2)5),3.15(t,J＝7.2Hz,2H,SCH2CH2CH3),4.41(m,1H,NCH(CH2)5),8.61(s,1H,8-H)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.3(SCH2CH2CH3),22.2(SCH2CH2CH3),24.8(NCH(CH2)5),25.0(NCH(CH2)5),31.7(NCH(CH2)5),32.7(SCH2CH2CH3),55.0(NCH(CH2)5),128.3(C-5),144.8(C-8),149.0(C-6),152.3(C-4),163.5(C-2)。
9-环己基-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(14c)
Figure BDA0002504052250000581
向(14b)(156.0mg，0.5mmol)在乙腈(2.5mL)中的溶液中补充(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺(93.0mg，0.55mmol)和三乙胺(0.13mL)，然后在90℃在回流下加热1小时。将乙腈和三乙胺在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：84％。
熔点：85-88℃。
1H NMR(CDCl3)δ0.94(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.30(m,3H,NHCH(CH2)CHPh/NCH(CH2)5),1.49(m,2H,NCH(CH2)5),1.68(h,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),1.79(m,3H,NCH(CH2)5)1.92(m,2H,NCH(CH2)5),2.08(m,1H,NHCH(CH2)CHPh),2.14(m,2H,NCH(CH2)5),3.03(m,2H,SCH2CH2CH3),3.11(bs,1H,NHCH(CH2)CHPh),4.36(m,1H,NCH(CH2)5),5.98(bs,1H,NH),6.99(m,1H,6’-H),7.08(m,2H,2’-H/5’-H),7.67(s,1H,8-H)。
13C NMR(CDCl3)δ13.5(SCH2CH2CH3),16.1(NHCH(CH2)CHPh),23.0(SCH2CH2CH3),25.2(NHCH(CH2)CHPh),25.3(NCH(CH2)5),25.6(NCH(CH2)5),33.2(SCH2CH2CH3),33.3(NHCH(CH2)CHPh),54.2(NCH(CH2)5),115.6(d,J＝17Hz,C-2’),116.9(d,J＝17Hz,C-5’),117.7(C-5),122.7(C-6’),137.0(C-8),138.0(C-1’),147.9-149.9(dd,246Hz/13Hz,C-4’),149.2-151.2(dd,247Hz/13Hz,C-3’),150.5(C-4),154.6(C-6),165.0(C-2)。
实施例15：9-烯丙基-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(15c)的合成
N4-烯丙基-6-氯-2-(丙硫基)嘧啶-4,5-二胺(15a)
Figure BDA0002504052250000591
将4,6-二氯-2-(丙硫基)嘧啶-5-胺(0.5g，2.1mmol)溶解于甲醇(2mL)中，并且补充烯丙胺(360.0mg，6.3mmol)。将反应混合物引入密封容器中并且在100℃加热30分钟。将反应混合物在真空下浓缩至干燥后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：92％。
熔点：55-57℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.94(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.62(h,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),2.93(t,J＝7.2Hz,2H,SCH2CH2CH3),4.02(tt,J＝5.4Hz/1.5Hz,2H,NHCH2CHCH2),4.80(s,2H,NH2),5.11(dq,J＝10.3Hz/1.4Hz,1H,NHCH2CHCH2),5.18(dq,J＝17.2Hz/1.5Hz,1H,NHCH2CHCH2),5.92(ddt,J＝17.1Hz/10.4Hz/5.3Hz,1H,NHCH2CHCH2),7.15(t,J＝5.4Hz,1H,NHCH2CHCH2)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.3(SCH2CH2CH3),22.7(SCH2CH2CH3),32.1(SCH2CH2CH3),43.1(NHCH2CHCH2),115.6(NHCH2CHCH2),120.0(C-5),135.0(NHCH2CHCH2),137.5(C-6),152.3(C-4),155.2(C-2)。
9-烯丙基-6-氯-2-(丙硫基)-9H-嘌呤(15b)
Figure BDA0002504052250000601
将(15a)(259.0mg，1mmol)在乙酸(2.5mL)和原甲酸三乙酯(2.5mL，15mmol)中的溶液在130℃的温度下在回流下加热2小时。将乙酸和原甲酸三乙酯在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：89％。
熔点：47.5-49.5℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.00(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.73(h,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),3.15(t,J＝7.2Hz,2H,SCH2CH2CH3),4.87(dt,J＝5.5Hz/1.3Hz,2H,NCH2CHCH2),5.13(dd,J＝17.1Hz/1.3Hz,1H,NCH2CHCH2),5.24(dd,J＝10.3Hz/1.3Hz,1H,NCH2CHCH2),6.07(m,1H,NCH2CHCH2),8.52(s,1H,8-H)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.2(SCH2CH2CH3),22.0(SCH2CH2CH3),32.6(SCH2CH2CH3),45.7(NCH2CHCH2),118.2(NCH2CHCH2),127.9(C-5),132.4(NCH2CHCH2),146.2(C-8),149.0(C-6),152.7(C-4),164.1(C-2)。
9-烯丙基-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(15c)
Figure BDA0002504052250000602
向(15b)(135.0mg，0.5mmol)在乙腈(2.5mL)中的溶液中补充(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺(93.0mg，0.55mmol)和三乙胺(0.13mL)，然后在90℃在回流下加热1小时。将乙腈和三乙胺在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：89％。
熔点：液体。
1H NMR(CDCl3)δ0.94(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.32(m,2H,NHCH(CH2)CHPh),1.66(h,J＝7.2Hz,2H,SCH2CH2CH3),2.09(m,1H,NHCH(CH2)CHPh),3.04(m,2H,SCH2CH2CH3),3.12(bs,1H,NHCH(CH2)CHPh),4.74(d,J＝5.9Hz,2H,NCH2CHCH2),5.23(dd,J＝17.1Hz/1.0Hz,1H,NCH2CHCH2),5.30(dd,J＝10.2Hz/1.0Hz,1H,NCH2CHCH2),6.01(m,2H,NCH2CHCH2/NH),6.99(m,1H,6’-H),7.08(m,2H,2’-H/5’-H),7.62(s,1H,8-H)。
13C NMR(CDCl3)δ13.4(SCH2CH2CH3),16.1(NHCH(CH2)CHPh),22.8(SCH2CH2CH3),25.2(NHCH(CH2)CHPh),33.2(SCH2CH2CH3),33.3(NHCH(CH2)CHPh),45.6(NCH2CHCH2),115.6(d,J＝17Hz,C-2’),116.9(d,J＝17Hz,C-5’),117.3(C-5),119.0(NCH2CHCH2),122.7(C-6’),132.0(NCH2CHCH2),137.9(C-1’),138.7(C-8),147.9-149.9(dd,246Hz/13Hz,C-4’),149.2-151.2(dd,247Hz/13Hz,C-3’),150.3(C-4),154.6(C-6),165.7(C-2)。
实施例16：2-(6-(((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)氨基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-9-基)乙醇(16c)的合成
2-((5-氨基-6-氯-2-(丙硫基)嘧啶-4-基)氨基)乙醇(16a)
Figure BDA0002504052250000611
将4,6-二氯-2-(丙硫基)嘧啶-5-胺(0.5g，2.1mmol)溶解于甲醇(2mL)中，并且补充2-氨基乙醇(385.0mg，6.3mmol)。将反应混合物引入密封容器中并且在100℃加热30分钟。将反应混合物在真空下浓缩至干燥后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：79％。
熔点：99-102℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.95(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.63(h,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),2.93(t,J＝7.2Hz,2H,SCH2CH2CH3),3.43(d,J＝5.7Hz,2H,NHCH2CH2OH),3.55(d,J＝5.7Hz,2H,NHCH2CH2OH),4.78(t,J＝5.5Hz,1H,NHCH2CH2OH),4.80(s,2H,NH2),7.03(t,J＝5.2Hz,1H,NHCH2CH2OH)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.3(SCH2CH2CH3),22.7(SCH2CH2CH3),32.1(SCH2CH2CH3),43.7(NHCH2CH2OH),59.2(NHCH2CH2OH),120.0(C-5),137.4(C-6),152.7(C-4),155.1(C-2)。
2-(6-氯-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-9-基)乙醇(16b)
Figure BDA0002504052250000621
将(16a)(263.0mg，1mmol)在乙酸(2.5mL)和原甲酸三乙酯(2.5mL，15mmol)中的溶液在130℃的温度下在回流下加热4小时。将乙酸和原甲酸三乙酯在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：57％。
熔点：81-83℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.01(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.73(h,J＝7.4Hz,2H,SCH2CH2CH3),3.17(t,J＝7.2Hz,2H,SCH2CH2CH3),3.78(q,J＝5.4Hz,2H,NCH2CH2OH),4.26(t,J＝5.4Hz,2H,NCH2CH2OH),4.99(t,J＝5.6Hz,1H,OH),8.48(s,1H,8-H)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.2(SCH2CH2CH3),22.0(SCH2CH2CH3),32.6(SCH2CH2CH3),46.5(NCH2CH2OH),58.7(NCH2CH2OH),128.0(C-5),146.8(C-8),148.7(C-6),153.0(C-4),163.7(C-2)。
2-(6-(((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)氨基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-9-基)乙醇(16c)
Figure BDA0002504052250000622
向(16b)(137.0mg，0.5mmol)在乙腈(2.5mL)中的溶液中补充(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺(93.0mg，0.55mmol)和三乙胺(0.13mL)，然后在90℃在回流下加热1小时。将乙腈和三乙胺在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：42％。
熔点：81-83℃。
1H NMR(CDCl3)δ0.95(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.32(m,2H,NHCH(CH2)CHPh),1.66(bh,J＝7.3Hz,3H,OH/SCH2CH2CH3),2.09(m,1H,NHCH(CH2)CHPh),3.01(m,2H,SCH2CH2CH3),3.11(bs,1H,NHCH(CH2)CHPh),4.02(m,2H,NCH2CH2OH),4.29(m,2H,NCH2CH2OH),6.05(bs,1H,NH),7.00(m,1H,6’-H),7.09(m,2H,2’-H/5’-H),7.61(s,1H,8-H)。
13C NMR(CDCl3)δ13.4(SCH2CH2CH3),15.9(NHCH(CH2)CHPh),22.6(SCH2CH2CH3),25.2(NHCH(CH2)CHPh),33.1(SCH2CH2CH3),33.2(NHCH(CH2)CHPh),48.2(NCH2CH2OH),61.6(NCH2CH2OH),115.7(d,J＝17Hz,C-2’),117.0(d,J＝17Hz,C-5’),117.7(C-5),122.7(C-6’),137.7(C-1’),139.7(C-8),147.9-149.9(dd,246Hz/13Hz,C-4’),149.2-151.2(dd,247Hz/13Hz,C-3’),150.1(C-4),154.6(C-6),165.8(C-2)。
实施例17：N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-(丙-2-炔-1-基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺盐酸盐(17c.HCl)的合成
6-氯-N4-(丙-2-炔-1-基)-2-(丙硫基)嘧啶-4,5-二胺(17a)
Figure BDA0002504052250000631
将4,6-二氯-2-(丙硫基)嘧啶-5-胺(0.5g，2.1mmol)溶解于甲醇(2mL)中，并且补充炔丙胺(347.0mg，6.3mmol)。将反应混合物引入密封容器中并且在100℃加热3小时。将反应混合物在真空下浓缩至干燥后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：78％。
熔点：90-92℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.96(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.66(h,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),2.97(t,J＝7.2Hz,2H,SCH2CH2CH3),3.15(t,J＝2.4Hz,1H,NHCH2CCH),4.16(dd,J＝4.8Hz/2.3Hz,2H,NHCH2CCH),4.83(s,2H,NH2),7.41(t,J＝4.7Hz,1H,NHCH2CCH)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.3(SCH2CH2CH3),22.7(SCH2CH2CH3),30.1(NHCH2CCH),32.2(SCH2CH2CH3),73.1(NHCH2CCH),81.1(NHCH2CCH),120.3(C-5),137.9(C-6),151.8(C-4),155.1(C-2)。
6-氯-9-(丙-2-炔-1-基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤(17b)
Figure BDA0002504052250000641
将(17a)(258.0mg，1mmol)在乙酸(2.5mL)和原甲酸三乙酯(2.5mL，15mmol)中的溶液在130℃的温度下在回流下加热2小时。将乙酸和原甲酸三乙酯在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：62％。
熔点：68-70℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.01(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.75(h,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),3.19(t,J＝7.2Hz,2H,SCH2CH2CH3),3.57(t,J＝2.5Hz,1H,NCH2CCH),5.13(d,J＝2.5Hz,2H,NCH2CCH),8.58(s,1H,8-H)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.2(SCH2CH2CH3),22.0(SCH2CH2CH3),32.7(SCH2CH2CH3),33.1(NCH2CCH),76.6(NCH2CCH),77.2(NCH2CCH),127.9(C-5),145.5(C-8),149.1(C-6),152.3(C-4),164.4(C-2)。
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-(丙-2-炔-1-基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(17c)
Figure BDA0002504052250000642
向(17b)(134.0mg，0.5mmol)在乙腈(2.5mL)中的溶液中补充(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺(93.0mg，0.55mmol)和三乙胺(0.13mL)，然后在90℃在回流下加热4小时。将乙腈和三乙胺在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：86％。
熔点：72-74℃。
1H NMR(CDCl3)δ0.94(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.33(m,2H,NHCH(CH2)CHPh),1.65(h,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),2.09(m,1H,NHCH(CH2)CHPh),2.50(t,J＝2.6Hz,1H,NCH2CCH),3.03(m,2H,SCH2CH2CH3),3.12(bs,1H,NHCH(CH2)CHPh),4.90(d,J＝2.6Hz,2H,NCH2CCH),6.00(bs,1H,NH),6.98(m,1H,6’-H),7.08(m,2H,2’-H/5’-H),7.84(s,1H,8-H)。
13C NMR(CDCl3)δ13.4(SCH2CH2CH3),16.1(NHCH(CH2)CHPh),22.8(SCH2CH2CH3),25.2(NHCH(CH2)CHPh),32.8(NCH2CCH),33.2(SCH2CH2CH3),33.3(NHCH(CH2)CHPh),74.9(NCH2CCH),76.1(NCH2CCH),115.6(d,J＝17Hz,C-2’),116.9(d,J＝17Hz,C-5’),117.3(C-5),122.6(C-6’),137.8(C-1’),138.1(C-8),147.9-149.9(dd,246Hz/13Hz,C-4’),149.2-151.2(dd,247Hz/13Hz,C-3’),149.9(C-4),154.6(C-6),166.0(C-2)。
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-(丙-2-炔-1-基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺盐酸盐(17c.HCl)
Figure BDA0002504052250000651
向(17c)(200.0mg，0.5mmol)在二乙醚(5mL)中的溶液中逐滴加入HCl在二乙醚中的饱和溶液。将所得的标题化合物的沉淀通过过滤收集，用二乙醚洗涤，并且干燥。
收率：99％。
熔点：178-180℃。
实施例18：N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(丙硫基)-9-(2,2,2-三氟乙基)-9H-嘌呤-6-胺(18c)的合成
6-氯-2-(丙硫基)-N4-(2,2,2-三氟乙基)嘧啶-4,5-二胺(18a)
Figure BDA0002504052250000661
将4,6-二氯-2-(丙硫基)嘧啶-5-胺(0.5g，2.1mmol)溶解于甲醇(2mL)中，并且补充2,2,2-三氟乙胺(625.0mg，6.3mmol)。将反应混合物引入密封容器中并且在100℃加热24小时。将反应混合物在真空下浓缩至干燥后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：76％。
熔点：107-109℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.95(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.63(h,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),2.95(t,J＝7.2Hz,2H,SCH2CH2CH3),4.29(m,2H,NHCH2CF3),4.95(s,2H,NH2),7.53(s,1H,NHCH2CF3)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.2(SCH2CH2CH3),22.6(SCH2CH2CH3),32.1(SCH2CH2CH3),41.2(q,J＝33Hz,NHCH2CF3),120.5(C-5),122.7-126.0(m,NHCH2CF3),138.8(C-6),151.9(C-4),154.8(C-2)。
6-氯-2-(丙硫基)-9-(2,2,2-三氟乙基)-9H-嘌呤(18b)
Figure BDA0002504052250000662
将(18a)(301.0mg，1mmol)在乙酸(2.5mL)和原甲酸三乙酯(2.5mL，15mmol)中的溶液在130℃的温度下在回流下加热2小时。将乙酸和原甲酸三乙酯在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：48％。
熔点：140-143℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.00(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.73(h,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),3.19(t,J＝7.2Hz,2H,SCH2CH2CH3),5.27(q,J＝9.2Hz,2H,NCH2CF3),8.60(s,1H,8-H)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.1(SCH2CH2CH3),22.0(SCH2CH2CH3),32.6(SCH2CH2CH3),43.9(q,J＝35Hz,NCH2CF3),123.4(q,J＝280Hz,NCH2CF3),127.6(C-5),146.2(C-8),149.6(C-6),152.9(C-4),165.2(C-2)。
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(丙硫基)-9-(2,2,2-三氟乙基)-9H-嘌呤-6-胺(18c)
Figure BDA0002504052250000671
向(18b)(156.0mg，0.5mmol)在乙腈(2.5mL)中的溶液中补充(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺(93.0mg，0.55mmol)和三乙胺(0.13mL)，然后在90℃在回流下加热1小时。将乙腈和三乙胺在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：89％。
熔点：102-104℃。
1H NMR(CDCl3)δ0.95(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.34(m,2H,NHCH(CH2)CHPh),1.67(h,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),2.11(m,1H,NHCH(CH2)CHPh),3.03(m,2H,SCH2CH2CH3),3.10(bs,1H,NHCH(CH2)CHPh),4.73(qd,J＝8.5Hz/3.1Hz,2H,NCH2CF3),6.06(bs,1H,NH),6.99(m,1H,6’-H),7.09(m,2H,2’-H/5’-H),7.70(s,1H,8-H)。
13C NMR(CDCl3)δ13.4(SCH2CH2CH3),15.9(NHCH(CH2)CHPh),22.7(SCH2CH2CH3),25.2(NHCH(CH2)CHPh),33.2(SCH2CH2CH3),33.3(NHCH(CH2)CHPh),44.0(q,J＝36Hz,NCH2CF3),115.7(d,J＝17Hz,C-2’),116.8(C-5),117.0(d,J＝17Hz,C-5’),122.7(C-6’),122.8(q,J＝279Hz,CF3),137.7(C-1’),138.2(C-8),148.0-150.0(dd,J＝246Hz/13Hz,C-4’),149.2-151.2(dd,J＝247Hz/13Hz,C-3’),150.6(C-4),154.7(C-6),166.8(C-2)。
实施例19：(1S,2R,3S,4R)-4-(6-(((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)氨基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-9-基)环戊烷-1,2,3-三醇(19d)的合成
(3aR,4S,6R,6aS)-6-((5-氨基-6-氯-2-(丙硫基)嘧啶-4-基)氨基)-2,2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯(dioxol)-4-醇(19a)
Figure BDA0002504052250000681
将4,6-二氯-2-(丙硫基)嘧啶-5-胺(0.5g，2.1mmol)溶解于甲醇(2mL)中，并且补充(3aR,4S,6R,6aS)-6-氨基-2,2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-4-醇(1.1g，6.3mmol)。将反应混合物引入密封容器中并且在100℃加热12小时。将反应混合物在真空下浓缩至干燥后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：90％。
熔点：ND。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.96(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.21(s,3H,C(CH3)2),1.36(s,3H,C(CH3)2),1.64(h,J＝7.4Hz,2H,SCH2CH2CH3),1.71(m,1H,5’-H),2.22(m,1H,5’-H),2.98(t,J＝7.2Hz,2H,SCH2CH2CH3),4.06(bs,1H,4’-H),4.26(bs,1H,6’-H),4.41(d,J＝5.9Hz,1H,3a’-H),4.51(d,J＝6.0Hz,1H,6a’-H),4.70(s,2H,NH2),5.27(d,J＝3.1Hz,1H,OH),6.63(d,J＝7.1Hz,1H,NH)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.3(SCH2CH2CH3),22.9(SCH2CH2CH3),24.1(C(CH3)2),26.5(C(CH3)2),32.1(SCH2CH2CH3),35.9(C-5’),57.2(C-6’),75.3(C-4’),84.5(C-6a’),85.7(3a’),109.7(C(CH3)2),119.7(C-5),136.6(C-6),152.4(C-4),155.9(C-2)。
(3aR,4S,6R,6aS)-6-(6-氯-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-4-醇(19b)
Figure BDA0002504052250000682
将(19a)(375.0mg，1mmol)在乙酸(2.5mL)和原甲酸三乙酯(2.5mL，15mmol)中的溶液在130℃的温度下在回流下加热10小时。将乙酸和原甲酸三乙酯在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：23％。
熔点：ND。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.02(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.25(s,3H,C(CH3)2),1.45(s,3H,C(CH3)2),1.75(h,J＝7.2Hz,2H,SCH2CH2CH3),2.25(m,1H,5’-H),2.51(m,1H,5’-H),3.16(t,J＝7.2Hz,2H,SCH2CH2CH3),4.18(bs,1H,4’-H),4.56(d,J＝6.2Hz,1H,3a’-H),4.86(m,1H,6’-H),5.04(dd,J＝6.1Hz/1.9Hz,1H,6a’-H),5.47(bs,1H,OH),8.59(s,1H,8-H)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.3(SCH2CH2CH3),22.2(SCH2CH2CH3),24.3(C(CH3)2),26.6(C(CH3)2),32.7(SCH2CH2CH3),36.4(C-5’),60.4(C-6’),74.6(C-4’),83.9(C-6a’),86.1(C-3a’),110.9(C(CH3)2),128.1(C-5),146.0(C-8),148.9(C-6),152.7(C-4),163.9(C-2)。
(3aR,4S,6R,6aS)-6-(6-(((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)氨基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-4-醇(19c)
Figure BDA0002504052250000691
向(19b)(193.0mg，0.5mmol)在乙腈(2.5mL)中的溶液中补充(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺(93.0mg，0.55mmol)和三乙胺(0.13mL)，然后在90℃在回流下加热1小时。将乙腈和三乙胺在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：91％。
熔点：ND。
1H NMR(CDCl3)δ0.90(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.32(s,3H,C(CH3)2),1.34(m,2H,NHCH(CH2)CHPh),1.51(s,3H,C(CH3)2),1.61(h,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),2.09(m,1H,NHCH(CH2)CHPh),2.13(m,1H,5”-H),2.96(m,3H,5”-H/SCH2CH2CH3),3.13(bs,1H,NHCH(CH2)CHPh),4.42(m,1H,4”-H),4.74(m,1H,6”-H),4.79(d,J＝5.3Hz,1H,3a”-H),4.98(d,J＝5.3Hz,1H,6a”-H),5.99(bs,1H,OH),6.03(bs,1H,NH),6.93(m,1H,6’-H),7.05(m,2H,2’-H/5’-H),7.67(s,1H,8-H)。
13C NMR(CDCl3)δ13.3(SCH2CH2CH3),16.2(NHCH(CH2)CHPh),22.6(SCH2CH2CH3),24.5(C(CH3)2),25.2(NHCH(CH2)CHPh),27.1(C(CH3)2),33.2(SCH2CH2CH3),33.3(NHCH(CH2)CHPh),38.8(C-5”),64.0(C-6”),76.0(C-4”),86.2(C-6a”),88.0(C-3a”),111.4(C(CH3)2),115.3(d,J＝17Hz,C-2’),117.0(d,J＝17Hz,C-5’),118.3(C-5),122.4(C-6’),137.7(C-1’),139.8(C-8),148.0-150.0(dd,246Hz/13Hz,C-4’),149.3-151.3(dd,247Hz/13Hz,C-3’),150.5(C-4),154.7(C-6),165.7(C-2)。
(1S,2R,3S,4R)-4-(6-(((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)氨基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-9-基)环戊烷-1,2,3-三醇(19d)
Figure BDA0002504052250000701
将(19c)(259.0mg，0.5mmol)在甲醇(2mL)和12N HCl(1mL)中的溶液在室温搅拌2小时。将溶剂在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：76％。
熔点：92-94℃。
1H NMR(CDCl3)δ0.87(t,J＝7.3Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.34(m,2H,NHCH(CH2)CHPh),1.59(h,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),2.10(m,1H,NHCH(CH2)CHPh),2.14(m,1H,5”-H),2.71(bs,1H,3”-OH),2.83(m,1H,SCH2CH2CH3),2.98(m,2H,5”-H/SCH2CH2CH3),3.12(bs,1H,NHCH(CH2)CHPh),4.14(m,1H,3”-H),4.27(m,1H,1”-H),4.47(bs,1H,2”-OH),4.56(m,1H,4”-H),4.76(m,1H,2”-H),4.98(bs,1H,1”-OH),6.16(bs,1H,NH),6.93(m,1H,6’-H),7.04(m,2H,2’-H/5’-H),7.59(s,1H,8-H)。
13C NMR(CDCl3)δ13.2(SCH2CH2CH3),16.2(NHCH(CH2)CHPh),22.5(SCH2CH2CH3),25.2(NHCH(CH2)CHPh),33.1(SCH2CH2CH3),33.3(NHCH(CH2)CHPh),35.8(C-5”),61.5(C-4”),74.8(C-1”),76.9(C-2”),78.0(C-3”),115.3(d,J＝17Hz,C-2’),117.0(d,J＝17Hz,C-5’),118.3(C-5),122.3(C-6’),137.8(C-1’),139.0(C-8),148.0-150.0(dd,246Hz/13Hz,C-4’),149.3-151.3(dd,247Hz/13Hz,C-3’),149.3(C-4),154.6(C-6),165.8(C-2)。
实施例20：N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(乙硫基)-9-甲基-9H-嘌呤-6-胺(20c)的合成
2-(乙硫基)嘧啶-4,6-二醇(20e)
Figure BDA0002504052250000711
将2-硫代巴比妥酸(2.5g，17.4mmol)溶解于KOH 10％(25mL)中，并且补充碘乙烷(1.63mL，20.0mmol)。将反应混合物引入密封容器中并且在80℃加热1小时。在冰浴上冷却至5℃后，通过加入6N盐酸将混合物酸化，并且将所得沉淀过滤掉并且用二乙醚洗涤。
收率：69％。
熔点：>300℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.28(t,J＝7.3Hz,3H,CH3),3.08(q,J＝7.3Hz,2H,SCH2),5.12(s,1H,CH),11.68(bs,2H,OH)。
13C NMR(DMSO-d6)δ14.6(SCH3),24.0(CH2),85.6(CH),158.1(C-4/C-6),162.8(C-2)。
2-(乙硫基)-5-硝基嘧啶-4,6-二醇(20f)
Figure BDA0002504052250000712
向在冰浴上于5℃冷却的6mL乙酸中加入发烟硝酸(2.5mL)和(20e)(1.8g，10.5mmol)。在室温搅拌1小时后，将混合物在冰浴上于5℃冷却，加入水(50mL)并且将所得沉淀过滤掉。
收率：69％。
熔点：210-213℃(分解)。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.31(t,J＝7.3Hz,3H,CH3),3.17(q,J＝7.3Hz,2H,SCH2)。
13C NMR(DMSO-d6)δ14.4(CH3),24.7(SCH2),117.4(C-5),158.9(C-4/C-6),164.0(C-2)。
4,6-二氯-2-(乙硫基)-5-硝基嘧啶(20g)
Figure BDA0002504052250000721
向在冰浴上于5℃冷却的(20f)(1.5g，6.9mmol)在POCl3(10mL)中的溶液中逐滴加入2,6-二甲基吡啶(2.5mL)。在80℃搅拌2小时后，将混合物倒在碎冰上并且用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将有机层用水和碳酸氢钠饱和水溶液洗涤，并且将乙酸乙酯在真空下蒸发至干燥。将所得油状残余物在不进行进一步纯化的情况下用于下一个步骤(20h)。
收率：85％。
熔点：油状物。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.35(t,J＝7.3Hz,3H,CH3),3.18(q,J＝7.3Hz,2H,SCH2)。
13C NMR(DMSO-d6)δ14.0(CH3),25.3(SCH2),149.1(C-4/C-6),154.5(C-5),165.4(C-2)。
4,6-二氯-2-(乙硫基)嘧啶-5-胺(20h)
Figure BDA0002504052250000722
向(20g)(1.0g，3.9mmol)在甲醇(10mL)和乙酸(4mL)中的溶液中加入铁粉(1.07g，19.5mmol)。在室温搅拌1小时后，加入乙酸乙酯(50mL)并且过滤悬浮液。将滤液用水和碳酸氢钠饱和水溶液洗涤，并且将有机层在真空下蒸发至干燥。将水加至残余物上，并且将所得沉淀过滤掉。
收率：86％。
熔点：48-50℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.28(t,J＝7.3Hz,3H,CH3),3.02(q,J＝7.3Hz,2H,SCH2),5.90(s,2H,NH2)。
13C NMR(DMSO-d6)δ14.3(CH3),24.9(SCH2),133.5(C-5),143.7(C-4/C-6),153.8(C-2)。
6-氯-2-(乙硫基)-N4-甲基嘧啶-4,5-二胺(20a)
Figure BDA0002504052250000731
将4,6-二氯-2-(乙硫基)嘧啶-5-胺(20h)(0.5g，2.2mmol)溶解于甲醇(2mL)中，并且补充甲胺(33％w/w)在甲醇中的溶液(0.80mL，6.6mmol)。将反应混合物引入密封容器中并且在100℃加热1小时。将反应混合物在真空下浓缩至干燥后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：87％。
熔点：112-114℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.27(t,J＝7.2Hz,3H,CH3),2.87(d,J＝3.8Hz,3H,NHCH3),2.97(q,J＝7.2Hz,2H,SCH2),4.70(s,2H,NH2),7.00(s,1H,NH)。
13C NMR(DMSO-d6)δ14.9(CH3),24.5(SCH2),27.8(NHCH3),120.1(C-5),137.2(C-6),153.3(C-4),155.4(C-2)。
6-氯-2-(乙硫基)-9-甲基-9H-嘌呤(20b)
Figure BDA0002504052250000732
将(20a)(219.0mg，1mmol)在乙酸(2.5mL)和原甲酸三乙酯(2.5mL，15mmol)中的溶液在130℃的温度下在回流下加热1小时。将乙酸和原甲酸三乙酯在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：86％。
熔点：89-100℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.37(t,J＝7.3Hz,3H,CH3),3.20(q,J＝7.3Hz,2H,SCH2),3.79(s,3H,NCH3),8.48(s,1H,CH)。
13C NMR(DMSO-d6)δ14.3(CH3),25.2(SCH2),30.0(NCH3),127.9(C-5),147.0(C-8),148.8(C-6),153.2(C-4),163.8(C-2)。
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(乙硫基)-9-甲基-9H-嘌呤-6-胺(20c)
Figure BDA0002504052250000741
向(20b)(114.0mg，0.5mmol)在乙腈(2.5mL)中的溶液中补充(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺(93.0mg，0.55mmol)和三乙胺(0.13mL)，然后在90℃在回流下加热1小时。将乙腈和三乙胺在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：89％。
熔点：116-118.5℃。
1H NMR(CDCl3)δ1.25(t,J＝7.3Hz,3H,CH3),1.32(m,2H,NHCH(CH2)CHPh),2.09(ddd,J＝9.5Hz/6.3Hz/3.2Hz,1H,NHCH(CH2)CHPh),3.02(m,2H,SCH2),3.12(bs,1H,NHCH(CH2)CHPh),3.76(s,3H,NCH3),5.96(bs,1H,NH),6.97(m,1H,6’-H),7.07(m,2H,2’-H/5’-H),7.60(s,1H,8-H)。
13C NMR(CDCl3)δ14.9(CH3),16.3(NHCH(CH2)CHPh),25.4(NHCH(CH2)CHPh),25.7(SCH2),29.8(NCH3),33.5(NHCH(CH2)CHPh),115.6(d,J＝17Hz,C-2’),117.1(d,J＝17Hz,C-5’),117.6(C-5),122.7(C-6’),138.1(C-1’),139.7(C-8),148.0-150.0(dd,J＝246Hz/13Hz,C-4’),149.3-151.3(dd,J＝247Hz/13Hz,C-3’),150.9(C-4),154.7(C-6),165.6(C-2)。
实施例21：N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-乙基-2-(乙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(21c)的合成
6-氯-N4-乙基-2-(乙硫基)嘧啶-4,5-二胺(21a)
Figure BDA0002504052250000742
将4,6-二氯-2-(乙硫基)嘧啶-5-胺(20h)(0.5g，2.2mmol)溶解于乙胺(2.0M)在甲醇中的溶液(3.3mL，6.6mmol)中。将反应混合物引入密封容器中并且在100℃加热1小时。将反应混合物在真空下浓缩至干燥后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：91％。
熔点：93-95℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.16(t,J＝7.2Hz,3H,NHCH2CH3),1.27(t,J＝7.2Hz,3H,SCH2CH3),2.96(q,J＝7.2Hz,2H,SCH2CH3),3.38(p,J＝6.1Hz,2H,NHCH2CH3),4.74(s,2H,NH2),6.93(s,1H,NH)。
13C NMR(DMSO-d6)δ14.4(NHCH2CH3),15.0(SCH2CH3),24.5(SCH2CH3),35.8(NHCH2CH3),119.9(C-5),137.3(C-6),152.6(C-4),155.2(C-2)。
6-氯-9-乙基-2-(乙硫基)-9H-嘌呤(21b)
Figure BDA0002504052250000751
将(21a)(233.0mg，1mmol)在乙酸(2.5mL)和原甲酸三乙酯(2.5mL，15mmol)中的溶液在130℃的温度下在回流下加热1小时。将乙酸和原甲酸三乙酯在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：91％。
熔点：64-66℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.37(t,J＝7.3Hz,3H,SCH2CH3),1.45(t,J＝7.3Hz,3H,NCH2CH3),3.19(q,J＝7.3Hz,2H,SCH2),4.25(q,J＝7.3Hz,2H,NCH2),8.56(s,1H,CH)。
13C NMR(DMSO-d6)δ14.3(SCH2CH3),14.7(NCH2CH3),25.2(SCH2),39.0(NCH2),128.1(C-5),146.1(C-8),148.9(C-6),152.7(C-4),163.7(C-2)。
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-乙基-2-(乙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(21c)
Figure BDA0002504052250000761
向(21b)(121.0mg，0.5mmol)在乙腈(2.5mL)中的溶液中补充(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺(93.0mg，0.55mmol)和三乙胺(0.13mL)，然后在90℃在回流下加热1小时。将乙腈和三乙胺在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：96％。
熔点：107.5-109.5℃。
1H NMR(CDCl3)δ1.26(t,J＝7.3Hz,3H,SCH2CH3),1.32(m,2H,NHCH(CH2)CHPh),1.50(t,J＝7.3Hz,3H,NCH2CH3),2.08(ddd,J＝9.5Hz/6.4Hz/3.3Hz,1H,NHCH(CH2)CHPh),3.03(m,2H,SCH2CH3),3.11(bs,1H,NHCH(CH2)CHPh),4.19(q,J＝7.3Hz,2H,NCH2CH3),5.94(bs,1H,NH),6.98(m,1H,6’-H),7.08(m,2H,2’-H/5’-H),7.63(s,1H,8-H)。
13C NMR(CDCl3)δ14.9(SCH2CH3),15.7(NCH2CH3),16.3(NHCH(CH2)CHPh),25.4(NHCH(CH2)CHPh),25.7(SCH2CH3),33.5(NHCH(CH2)CHPh),38.8(NCH2CH3),115.7(d,J＝17Hz,C-2’),117.0(d,J＝17Hz,C-5’),117.8(C-5),122.8(C-6’),138.1(C-1’),138.6(C-8),148.0-150.0(dd,J＝246Hz/13Hz,C-4’),149.3-151.3(dd,J＝247Hz/13Hz,C-3’),150.4(C-4),154.7(C-6),165.3(C-2)。
实施例22：N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-甲基-2-(甲硫基)-9H-嘌呤-6-胺(22c)的合成
2-(甲硫基)嘧啶-4,6-二醇(22e)
Figure BDA0002504052250000762
将2-硫代巴比妥酸(2,5g，17.4mmol)溶解于KOH 10％(25mL)中，并且补充碘甲烷(1.25mL，20.0mmol)。将反应混合物引入密封容器中并且在80℃加热1小时。在冰浴上冷却至5℃后，通过加入6N盐酸将混合物酸化，并且将所得沉淀过滤掉并且用二乙醚洗涤。
收率：77％。
熔点：>300℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ2.46(s,3H,SCH3),5.13(s,1H,CH),11.71(bs,2H,OH)。
13C NMR(DMSO-d6)δ12.7(SCH3),85.5(CH),158.9(C-4/C-6),163.5(C-2)。
2-(甲硫基)-5-硝基嘧啶-4,6-二醇(22f)
Figure BDA0002504052250000771
向在冰浴上于5℃冷却的6mL乙酸中加入发烟硝酸(2.5mL)和(22e)(2.0g，12.6mmol)。在室温搅拌1小时后，将混合物在冰浴上于5℃冷却，加入水(50mL)并且将所得沉淀过滤掉。
收率：67％。
熔点：220-221℃(分解)。
1H NMR(DMSO-d6)δ2.56(s,3H,SCH3)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.2(SCH3),117.4(C-5),158.7(C-4/C-6),164.6(C-2)。
4,6-二氯-2-(甲硫基)-5-硝基嘧啶(22g)
Figure BDA0002504052250000772
向在冰浴上于5℃冷却的(22f)(1.5g，7.4mmol)在POCl3(10mL)中的溶液中逐滴加入2,6-二甲基吡啶(2.5mL)。在80℃搅拌2小时后，将混合物倒在碎冰上并且将所得沉淀过滤掉。
收率：92％。
熔点：63-64℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ2.56(s,3H,SCH3)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.5(SCH3),149.0(C-4/C-6),154.5(C-5),166.1(C-2)。
4,6-二氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-胺(22h)
Figure BDA0002504052250000781
向(22g)(1.0g，4.2mmol)在甲醇(10mL)和乙酸(4mL)中的溶液中加入铁粉(1,07g，19.5mmol)。在室温搅拌1小时后，加入乙酸乙酯(50mL)并且过滤悬浮液。将滤液用水和碳酸氢钠饱和水溶液洗涤，并且将有机层在真空下蒸发至干燥。将水加至残余物上，并且将所得沉淀过滤掉。
收率：95％。
熔点：105-108℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ2.45(s,3H,SCH3),5.90(s,2H,NH2)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.8(SCH3),133.4(C-5),143.7(C-4/C-6),154.4(C-2)。
6-氯-N4-甲基-2-(甲硫基)嘧啶-4,5-二胺(22a)
Figure BDA0002504052250000782
将4,6-二氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-胺(22h)(0.5g，2.4mmol)溶解于甲醇(2mL)中，并且补充甲胺(33％w/w)在甲醇中的溶液(0.87mL，7.2mmol)。将反应混合物引入密封容器中并且在100℃加热1小时。将反应混合物在真空下浓缩至干燥后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：82％。
熔点：141-143℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ2.38(s,3H,SCH3),2.88(d,J＝3.0Hz,3H,NHCH3),4.70(s,2H,NH2),7.01(s,1H,NH)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.5(SCH3),27.8(NHCH3),120.1(C-5),137.2(C-6),153.3(C-4),155.9(C-2)。
6-氯-9-甲基-2-(甲硫基)-9H-嘌呤(22b)
Figure BDA0002504052250000791
将(22a)(205.0mg，1mmol)在乙酸(2.5mL)和原甲酸三乙酯(2.5mL，15mmol)中的溶液在130℃的温度下在回流下加热1小时。将乙酸和原甲酸三乙酯在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：92％。
熔点：140-142℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ2.61(s,3H,SCH3),3.80(s,3H,NCH3),8.49(s,1H,CH)。
13C NMR(DMSO-d6)δ14.1(SCH3),30.0(NCH3),127.9(C-5),147.0(C-8),148.8(C-6),153.2(C-4),164.4(C-2)。
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-甲基-2-(甲硫基)-9H-嘌呤-6-胺(22c)
Figure BDA0002504052250000792
向(22b)(107.0mg，0.5mmol)在乙腈(2.5mL)中的溶液中补充(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺(93.0mg，0.55mmol)和三乙胺(0.13mL)，然后在90℃在回流下加热1小时。将乙腈和三乙胺在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：80％。
熔点：156-159℃。
1H NMR(CDCl3)δ1.33(m,2H,NHCH(CH2)CHPh),2.09(m,1H,NHCH(CH2)CHPh),2.45(s,3H,SCH3),3.12(bs,1H,NHCH(CH2)CHPh),3.77(s,3H,NCH3),5.95(bs,1H,NH),7.00(m,1H,6’-H),7.09(m,2H,2’-H/5’-H),7.60(s,1H,8-H)。
13C NMR(CDCl3)δ14.5(SCH3),16.1(NHCH(CH2)CHPh),25.4(NHCH(CH2)CHPh),29.8(NCH3),33.4(NHCH(CH2)CHPh),115.9(d,J＝17Hz,C-2’),117.0(d,J＝17Hz,C-5’),117.5(C-5),122.9(C-6’),137.9(C-1’),139.7(C-8),148.0-150.0(dd,J＝246Hz/13Hz,C-4’),149.3-151.3(dd,J＝247Hz/13Hz,C-3’),151.0(C-4),154.7(C-6),166.0(C-2)。
实施例23：N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-甲基-2-丙氧基-9H-嘌呤-6-胺盐酸盐(23t.HCl)的合成
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-甲基-2-(甲磺酰基)-9H-嘌呤-6-胺(23q)
Figure BDA0002504052250000801
将(22c)(125.0mg，0.36mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液在冰浴上冷却至5℃，并且补充3-氯过苯甲酸(140.0mg，0.80mmol)。在室温搅拌4小时后，将混合物用0.1M NaOH溶液(2x 10mL)洗涤。将有机层干燥，过滤，并且将二氯甲烷在真空下蒸发至干燥。将残余物悬浮于乙酸乙酯中并且过滤掉。
收率：88％。
熔点：206-208.5℃。
1H NMR(CDCl3)δ1.38(m,2H,NHCH(CH2)CHPh),2.17(td,J＝8.0Hz/3.3Hz,1H,NHCH(CH2)CHPh),3.08(bs,1H,NHCH(CH2)CHPh),3.19(s,3H,SO2CH3),3.91(s,3H,NCH3),6.49(bs,1H,NH),7.11(m,3H,2’-H/5’-H/6’-H),7.88(s,1H,8-H)。
13C NMR(CDCl3)δ15.7(NHCH(CH2)CHPh),25.4(NHCH(CH2)CHPh),30.5(NCH3),33.1(NHCH(CH2)CHPh),39.4(SO2CH3),115.8(d,J＝16Hz,C-2’),117.3(d,J＝17Hz,C-5’),120.9(C-5),123.3(C-6’),137.3(C-1’),143.0(C-8),148.5-149.9(dd,J＝247Hz/12Hz,C-4’),149.7-151.1(dd,J＝248Hz/13Hz,C-3’),149.2(C-4),155.7(C-6)。
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-甲基-2-丙氧基-9H-嘌呤-6-胺(23t)
Figure BDA0002504052250000811
在冰浴上将钠溶解于丙-1-醇(3mL)中，并且加入(23q)(150.0mg，0.40mmol)。在室温搅拌3小时后，将混合物在水(50mL)和二氯甲烷(2x 50mL)之间分配。将合并的有机层干燥，并且在真空下蒸发至干燥。将残余物通过硅胶柱层析纯化，并且将所得油状物在不进行进一步纯化的情况下用于下一个步骤(23t.HCl)。
收率：73％。
1H NMR(CDCl3)δ0.94(t,J＝7.5Hz,3H,OCH2CH2CH3),1.30(dt,J＝7.5Hz/6.2Hz,1H,NHCH(CH2)CHPh),1.39(ddd,J＝9.7Hz/5.9Hz/4.7Hz,1H,NHCH(CH2)CHPh),1.75(h,J＝7.3Hz,2H,OCH2CH2CH3),2.10(m,1H,NHCH(CH2)CHPh),3.16(bs,1H,NHCH(CH2)CHPh),3.74(s,3H,NCH3),4.18(m,2H,OCH2CH2CH3),6.86(bs,1H,NH),6.94(m,1H,6’-H),7.07(m,2H,2’-H/5’-H),7.57(s,1H,8-H)。
13C NMR(CDCl3)δ10.5(OCH2CH2CH3),16.2(NHCH(CH2)CHPh),22.4(OCH2CH2CH3),25.1(NHCH(CH2)CHPh),29.8(NCH3),33.6(NHCH(CH2)CHPh),69.3(OCH2CH2CH3),115.4(C-5),115.7(C-2’),117.0(C-5’),122.6(C-6’),138.3(C-1’),139.1(C-8),148.0-149.9(C-4’),149.4-151.3(C-3’),151.7(C-4),156.1(C-6),162.6(C-2)。
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-甲基-2-丙氧基-9H-嘌呤-6-胺盐酸盐(23t.HCl)
Figure BDA0002504052250000812
向(23t)(90.0mg，0.25mmol)在二乙醚(5mL)中的溶液中逐滴加入HCl在二乙醚中的饱和溶液。将所得的标题化合物的沉淀通过过滤收集，用二乙醚洗涤，并且干燥。
收率：95％。
熔点：199-202℃。
实施例24：N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-乙基-2-(甲硫基)-9H-嘌呤-6-胺(24c)的合成
6-氯-N4-乙基-2-(甲硫基)嘧啶-4,5-二胺(24a)
Figure BDA0002504052250000821
将4,6-二氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-胺(22h)(0.5g，2.4mmol)溶解于乙胺(2.0M)在甲醇中的溶液(3.6mL，7.2mmol)中。将反应混合物引入密封容器中并且在100℃加热1小时。将反应混合物在真空下浓缩至干燥后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：86％。
熔点：120-122℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.16(t,J＝7.2Hz,3H,CH3),2.37(s,3H,SCH3),3.38(qd,J＝7.2Hz/5.3Hz,2H,NCH2),4.76(s,2H,NH2),6.94(t,J＝4.8Hz,1H,NH)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.5(SCH3),14.3(CH3),35.7(NCH2),119.8(C-5),137.2(C-6),152.4(C-4),155.7(C-2)。
6-氯-9-乙基-2-(甲硫基)-9H-嘌呤(24b)
Figure BDA0002504052250000822
将(24a)(219.0mg，1mmol)在乙酸(2.5mL)和原甲酸三乙酯(2.5mL，15mmol)中的溶液在130℃的温度下在回流下加热1小时。将乙酸和原甲酸三乙酯在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：77％。
熔点：99.5-101.5℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.45(t,J＝7.3Hz,3H,CH3),2.60(s,3H,SCH3),4.25(q,J＝7.3Hz,2H,NCH2),8.57(s,1H,CH)。
13C NMR(DMSO-d6)δ14.1(SCH3),14.7(CH3),39.0(NCH2),128.0(C-5),146.0(C-8),148.8(C-6),152.7(C-4),164.3(C-2)。
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-乙基-2-(甲硫基)-9H-嘌呤-6-胺(24c)
Figure BDA0002504052250000831
向(24b)(114.0mg，0.5mmol)在乙腈(2.5mL)中的溶液中补充(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺(93.0mg，0.55mmol)和三乙胺(0.13mL)，然后在90℃在回流下加热1小时。将乙腈和三乙胺在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：38％。
熔点：126-127.5℃。
1H NMR(CDCl3)δ1.31(td,J＝8.0Hz/6.9Hz/4.0Hz,2H,NHCH(CH2)CHPh),1.51(t,J＝7.3Hz,3H,CH3),2.08(td,J＝8.1Hz/6.7Hz/3.2Hz,1H,NHCH(CH2)CHPh),2.45(s,3H,SCH3),3.11(bs,1H,NHCH(CH2)CHPh),4.20(q,J＝7.3Hz,2H,NCH2),5.97(bs,1H,NH),7.01(m,1H,6’-H),7.10(m,2H,2’-H/5’-H),7.64(s,1H,8-H)。
13C NMR(CDCl3)δ14.6(SCH3),15.6(CH3),16.1(NHCH(CH2)CHPh),25.4(NHCH(CH2)CHPh),33.4(NHCH(CH2)CHPh),38.8(NCH2),115.9(d,J＝17Hz,C-2’),117.0(d,J＝17Hz,C-5’),117.7(C-5),123.0(C-6’),138.0(C-1’),138.6(C-8),148.0-150.0(dd,J＝246Hz/13Hz,C-4’),149.3-151.3(dd,J＝247Hz/13Hz,C-3’),150.4(C-4),154.7(C-6),165.8(C-2)。
实施例25：2-(丁硫基)-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-甲基-9H-嘌呤-6-胺(25c)的合成
2-(丁硫基)嘧啶-4,6-二醇(25e)
Figure BDA0002504052250000841
将2-硫代巴比妥酸(2.5g，17.4mmol)溶解于KOH 10％(25mL)中，并且补充碘丁烷(2.27mL，20.0mmol)。将反应混合物引入密封容器中并且在80℃加热1小时。在冰浴上冷却至5℃后，通过加入6N盐酸将混合物酸化，并且将所得沉淀过滤掉并且用二乙醚洗涤。
收率：72％。
熔点：>300℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.90(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH2CH3),1.38(h,J＝7.4Hz,2H,SCH2CH2CH2CH3),1.60(p,J＝7.4Hz,2H,SCH2CH2CH2CH3),3.09(t,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH2CH3),5.12(s,1H,CH),11.64(bs,2H,OH)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.5(SCH2CH2CH2CH3),21.3(SCH2CH2CH2CH3),29.2(SCH2CH2CH2CH3),30.8(SCH2CH2CH2CH3),85.6(CH),158.1(C-4/C-6),162.9(C-2)。
2-(丁硫基)-5-硝基嘧啶-4,6-二醇(25f)
Figure BDA0002504052250000842
向在冰浴上于5℃冷却的6mL乙酸中加入发烟硝酸(2.5mL)和(25e)(2.0g，10.0mmol)。在室温搅拌1小时后，将混合物在冰浴上于5℃冷却，加入水(50mL)并且将所得沉淀过滤掉。
收率：68％。
熔点：178-179.5℃(分解)。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.90(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH2CH3),1.39(h,J＝7.4Hz,2H,SCH2CH2CH2CH3),1.63(p,J＝7.4Hz,2H,SCH2CH2CH2CH3),3.18(t,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH2CH3)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.5(SCH2CH2CH2CH3),21.2(SCH2CH2CH2CH3),29.9(SCH2CH2CH2CH3),30.5(SCH2CH2CH2CH3),117.5(C-5),158.9(C-4/C-6),164.2(C-2)。
2-(丁硫基)-4,6-二氯-5-硝基嘧啶(25g)
Figure BDA0002504052250000851
向在冰浴上于5℃冷却的(25f)(1.5g，6.1mmol)在POCl3(10mL)中的溶液中逐滴加入2,6-二甲基吡啶(2.5mL)。在80℃搅拌2小时后，将混合物倒在碎冰上并且用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将有机层用水和碳酸氢钠饱和水溶液洗涤，并且将乙酸乙酯在真空下蒸发至干燥。将所得油状残余物在不进行进一步纯化的情况下用于下一个步骤(25h)。
收率：92％。
熔点：油状物。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.90(t,J＝7.3Hz,3H,SCH2CH2CH2CH3),1.39(h,J＝7.4Hz,2H,SCH2CH2CH2CH3),1.65(p,J＝7.4Hz,2H,SCH2CH2CH2CH3),3.17(t,J＝7.2Hz,2H,SCH2CH2CH2CH3)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.4(SCH2CH2CH2CH3),21.2(SCH2CH2CH2CH3),30.2(SCH2CH2CH2CH3),30.3(SCH2CH2CH2CH3),149.0(C-4/C-6),154.7(C-5),165.6(C-2)。
2-(丁硫基)-4,6-二氯嘧啶-5-胺(25h)
Figure BDA0002504052250000852
向(25g)(1g，3.5mmol)在甲醇(10mL)和乙酸(4mL)中的溶液中加入铁粉(0.78g，14.0mmol)。在室温搅拌1小时后，加入乙酸乙酯(50mL)并且过滤悬浮液。将滤液用水和碳酸氢钠饱和水溶液洗涤，并且将有机层在真空下蒸发至干燥。将所得油状残余物在不进行进一步纯化的情况下用于下一个步骤(25a)。
收率：97％。
熔点：油状物。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.90(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH2CH3),1.39(h,J＝7.4Hz,2H,SCH2CH2CH2CH3),1.61(p,J＝7.4Hz,2H,SCH2CH2CH2CH3),3.03(t,J＝7.2Hz,2H,SCH2CH2CH2CH3),5.88(s,2H,NH2)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.5(SCH2CH2CH2CH3),21.3(SCH2CH2CH2CH3),30.2(SCH2CH2CH2CH3),30.7(SCH2CH2CH2CH3),133.5(C-5),143.7(C-4/C-6),154.0(C-2)。
2-(丁硫基)-6-氯-2-N4-甲基嘧啶-4,5-二胺(25a)
Figure BDA0002504052250000861
将2-(丁硫基)-4,6-二氯嘧啶-5-胺(25h)(0.5g，2.0mmol)溶解于甲醇(2mL)中，并且补充甲胺(33％w/w)在甲醇中的溶液(0.73mL，6.0mmol)。将反应混合物引入密封容器中并且在100℃加热1小时。将反应混合物在真空下浓缩至干燥后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：87％。
熔点：油状物。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.89(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH2CH3),1.38(h,J＝7.4Hz,2H,SCH2CH2CH2CH3),1.61(p,J＝7.4Hz,2H,SCH2CH2CH2CH3),2.87(d,J＝4.5Hz,3H,NHCH3),2.98(t,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH2CH3),4.69(s,2H,NH2),6.99(q,J＝4.4Hz,1H,NHCH3)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.6(SCH2CH2CH2CH3),21.5(SCH2CH2CH2CH3),27.8(NHCH3),29.8(SCH2CH2CH2CH3),31.4(SCH2CH2CH2CH3),120.0(C-5),137.2(C-6),153.3(C-4),155.5(C-2)。
2-(丁硫基)-6-氯-9-甲基-9H-嘌呤(25b)
Figure BDA0002504052250000862
将(25a)(247.0mg，1mmol)在乙酸(2.5mL)和原甲酸三乙酯(2.5mL，15mmol)中的溶液在130℃的温度下在回流下加热1小时。将乙酸和原甲酸三乙酯在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：76％。
熔点：56-58℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.93(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH2CH3),1.44(h,J＝7.4Hz,2H,SCH2CH2CH2CH3),1.70(p,J＝7.4Hz,2H,SCH2CH2CH2CH3),3.20(t,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH2CH3),3.79(s,3H,NCH3),8.48(s,1H,CH)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.5(SCH2CH2CH2CH3),21.4(SCH2CH2CH2CH3),30.0(NCH3),30.3(SCH2CH2CH2CH3),30.8(SCH2CH2CH2CH3),127.9(C-5),147.0(C-8),148.8(C-6),153.2(C-4),163.9(C-2)。
2-(丁硫基)-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-甲基-9H-嘌呤-6-胺(25c)
Figure BDA0002504052250000871
向(25b)(128.0mg，0.5mmol)在乙腈(2.5mL)中的溶液中补充(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺(93.0mg，0.55mmol)和三乙胺(0.13mL)，然后在90℃在回流下加热1小时。将乙腈和三乙胺在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：66％。
熔点：98-100℃。
1H NMR(CDCl3)δ0.89(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH2CH3),1.33(m,4H,NHCH(CH2)CHPh/SCH2CH2CH2CH3),1.62(p,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH2CH3),2.09(ddd,J＝9.5Hz/6.4Hz/3.2Hz,1H,NHCH(CH2)CHPh),3.02(m,1H,SCH2CH2CH2CH3),3.11(m,2H,NHCH(CH2)CHPh/SCH2CH2CH2CH3),3.76(s,3H,NCH3),5.92(bs,1H,NH),6.98(m,1H,6’-H),7.07(m,2H,2’-H/5’-H),7.59(s,1H,8-H)。
13C NMR(CDCl3)δ13.9(SCH2CH2CH2CH3),16.3(NHCH(CH2)CHPh),22.1(SCH2CH2CH2CH3),25.3(NHCH(CH2)CHPh),29.8(NCH3),31.1(SCH2CH2CH2CH3),31.8(SCH2CH2CH2CH3),33.5(NHCH(CH2)CHPh),115.7(d,J＝17Hz,C-2’),117.1(d,J＝17Hz,C-5’),117.6(C-5),122.8(C-6’),138.0(C-1’),139.7(C-8),148.0-150.0(dd,J＝246Hz/13Hz,C-4’),149.4-151.4(dd,J＝247Hz/13Hz,C-3’),150.8(C-4),154.7(C-6),165.6(C-2)。
实施例26：2-(丁硫基)-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-乙基-9H-嘌呤-6-胺(26c)的合成
2-(丁硫基)-6-氯-N4-乙基嘧啶-4,5-二胺(26a)
Figure BDA0002504052250000881
将4,6-二氯-2-(乙硫基)嘧啶-5-胺(25h)(0.5g，2.0mmol)溶解于乙胺(2.0M)在甲醇中的溶液(3.0mL，6.0mmol)中。将反应混合物引入密封容器中并且在100℃加热1小时。将反应混合物在真空下浓缩至干燥后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：91％。
熔点：80-82℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.89(t,J＝7.3Hz,3H,SCH2CH2CH2CH3),1.16(t,J＝7.1Hz,3H,NHCH2CH3),1.38(h,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH2CH3),1.60(p,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH2CH3),2.96(t,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH2CH3),3.38(p,J＝7.0Hz,2H,NHCH2CH3),4.74(s,2H,NH2),6.95(t,J＝4.7Hz,1H,NHCH2CH3)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.5(SCH2CH2CH2CH3),14.4(NHCH2CH3),21.5(SCH2CH2CH2CH3),29.8(SCH2CH2CH2CH3),31.5(SCH2CH2CH2CH3),35.7(NHCH2CH3),119.8(C-5),137.3(C-6),152.5(C-4),155.4(C-2)。
2-(丁硫基)-6-氯-9-乙基-9H-嘌呤(26b)
Figure BDA0002504052250000882
将(26a)(261.0mg，1mmol)在乙酸(2.5mL)和原甲酸三乙酯(2.5mL，15mmol)中的溶液在130℃的温度下在回流下加热1小时。将乙酸和原甲酸三乙酯在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：70％。
熔点：69-71℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.93(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH2CH3),1.45(m,5H,SCH2CH2CH2CH3/NCH2CH3),1.70(p,J＝7.4Hz,2H,SCH2CH2CH2CH3),3.19(t,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH2CH3),4.25(q,J＝7.3Hz,2H,NCH2CH3),8.56(s,1H,CH)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.5(SCH2CH2CH2CH3),14.7(NCH2CH3),21.4(SCH2CH2CH2CH3),30.3(SCH2CH2CH2CH3),30.8(SCH2CH2CH2CH3),39.0(NCH2CH3),128.1(C-5),146.0(C-8),148.9(C-6),152.7(C-4),163.8(C-2)。
2-(丁硫基)-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-乙基-9H-嘌呤-6-胺(26c)
Figure BDA0002504052250000891
向(26b)(135.0mg，0.5mmol)在乙腈(2.5mL)中的溶液中补充(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺(93.0mg，0.55mmol)和三乙胺(0.13mL)，然后在90℃在回流下加热1小时。将乙腈和三乙胺在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：56％。
熔点：92-94℃。
1H NMR(CDCl3)δ0.89(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH2CH3),1.31(m,2H,NHCH(CH2)CHPh),1.36(m,2H,SCH2CH2CH2CH3),1.50(t,J＝7.3Hz,3H,NCH2CH3),1.63(p,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH2CH3),2.09(ddd,J＝9.5Hz/6.6Hz/3.2Hz,1H,NHCH(CH2)CHPh),3.02(m,1H,SCH2CH2CH2CH3),3.10(m,2H,NHCH(CH2)CHPh/SCH2CH2CH2CH3),4.18(q,J＝7.3Hz,2H,NCH2CH3),5.93(bs,1H,NH),6.99(m,1H,6’-H),7.08(m,2H,2’-H/5’-H),7.63(s,1H,8-H)。
13C NMR(CDCl3)δ13.9(SCH2CH2CH2CH3),15.6(NCH2CH3),16.2(NHCH(CH2)CHPh),22.1(SCH2CH2CH2CH3),25.4(NHCH(CH2)CHPh),31.1(SCH2CH2CH2CH3),31.8(SCH2CH2CH2CH3),33.5(NHCH(CH2)CHPh),38.8(NCH2CH3),115.8(d,J＝17Hz,C-2’),117.1(d,J＝17Hz,C-5’),117.8(C-5),122.9(C-6’),138.1(C-1’),138.6(C-8),148.2-150.1(dd,J＝246Hz/12Hz,C-4’),149.4-151.4(dd,J＝235Hz/10Hz,C-3’),150.3(C-4),154.7(C-6),165.6(C-2)。
实施例27：N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-1-甲基-6-(甲硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(27k)的合成
4,6-二氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲醛(27i)
Figure BDA0002504052250000901
将POCl3(3.2mL)在冰浴上于5℃冷却，并且逐滴补充二甲基甲酰胺(20mL，215mmol)。然后，逐份加入2-(甲硫基)嘧啶-4,6-二醇(22e)(5g，31.6mmol)，并且将混合物在100℃搅拌20小时。将混合物倒在碎冰上并且用CH2Cl2(3x 50mL)萃取。将合并的有机层干燥，并且在真空下蒸发至干燥。
收率：52％。
熔点：87-89℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ2.57(s,3H,SCH3),10.07(s,1H,COH)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.3(SCH3),112.9(C-5),159.3(C-4/C-6),168.2(C-2),186.6(COH)。
4-氯-6-(甲硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶(27i’)
Figure BDA0002504052250000902
向在冰浴上于5℃冷却的(27i)(2.5g，11.2mmol)在THF(25mL)中的悬浮液中逐滴加入一水合肼(0.65mL，13mmol)和三乙胺(1.8mL，13mmol)。在5℃搅拌1小时后，将混合物在真空下蒸发至干燥，并且将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：95％。
熔点：>300℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ2.59(s,3H,SCH3),8.32(s,1H,CH),14.25(bs,1H,NH)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.9(SCH3),109.6(C-3a),133.1(C-3),152.9-155.4(C-4/C-7a),168.7(C-6)。
4-氯-1-甲基-6-(甲硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶(27j)
Figure BDA0002504052250000911
向在冰浴上于5℃冷却的(27i’)(1.0g，5.0mmol)在乙腈(10mL)中的溶液中加入NaH(144mg，6.0mmol)和碘甲烷(0.47mL，7.5mmol)。在50℃搅拌3小时后，将乙腈在真空下蒸发至干燥，并且将残余物在水(50mL)和二氯甲烷(2x 50mL)之间分配。将合并的有机层干燥，并且在真空下蒸发至干燥。将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：82％。
熔点：85-87℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ2.63(s,3H,SCH3),4.00(s,3H,NCH3),8.34(s,1H,CH)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.9(SCH3),34.0(NCH3),110.0(C-3a),132.3(C-3),152.9(C-4),153.5(C-7a),168.8(C-6)。
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-1-甲基-6-(甲硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(27k)
Figure BDA0002504052250000912
向(27j)(107.0mg，0.5mmol)在乙腈(2.5mL)中的溶液中补充(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺(93.0mg，0.55mmol)和三乙胺(0.13mL)，然后在90℃在回流下加热1小时。将乙腈和三乙胺在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：84％。
熔点：128.5-130℃。
1H NMR(CDCl3)δ1.40(m,2H,NHCH(CH2)CHPh),2.17(s,1H,NHCH(CH2)CHPh),2.55(s,3H,SCH3),3.10(s,1H,NHCH(CH2)CHPh),3.95(s,3H,NCH3),5.87(bs,1H,NH),6.87(m,2H,2’-H/6’-H),7.12(q,J＝8.7Hz,1H,5’-H),7.59(s,1H,3-H)。
13C NMR(CDCl3)δ14.2(SCH3),18.3(NHCH(CH2)CHPh),25.6(NHCH(CH2)CHPh),33.8(NCH3),34.9(NHCH(CH2)CHPh),97.8(C-3a),114.6(C-2’),117.4(C-5’),121.7(C-6’),132.0(C-3),136.8(C-1’),149.7-150.8(C-3’/C-4’),154.8(C-7a),169.2(C-6)。
实施例28：N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-6-(乙硫基)-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(28x.HCl)的合成
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-1-甲基-6-(甲磺酰基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(28r)
Figure BDA0002504052250000921
将(27j)(125.0mg，0.36mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液在冰浴上冷却至5℃，并且补充3-氯过苯甲酸(140.0mg，0.80mmol)。在室温搅拌4小时后，将混合物用0.1M NaOH溶液(2x 10mL)洗涤。将有机层干燥，过滤，并且将二氯甲烷在真空下蒸发至干燥。将所得油状残余物在不进行进一步纯化的情况下用于下一个步骤(28x)。
收率：58％。
熔点：油状物。
1H NMR(CDCl3)δ1.50(m,2H,NHCH(CH2)CHPh),2.23(s,1H,NHCH(CH2)CHPh),3.18(s,1H,NHCH(CH2)CHPh),3.34(s,3H,SO2CH3),4.07(s,3H,NCH3),6.48(s,1H,NH),6.86(m,2H,2’-H/6’-H),7.15(s,1H,5’-H),7.75(s,1H,3-H)。
13C NMR(CDCl3)δ18.3(NHCH(CH2)CHPh),26.1(NHCH(CH2)CHPh),34.4(NCH3),35.1(NHCH(CH2)CHPh),39.1(SO2CH3),100.5(C-3a),114.5(C-2’),117.9(C-5’),121.8(C-6’),133.0(C-3),136.0(C-1’),150.1(C-3’/C-4’),153.4(C-7a),159.5(C-4),162.4(C-6)。
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-6-(乙硫基)-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(28x.HCl)
Figure BDA0002504052250000931
向(28r)(150.0mg，0.40mmol)在THF(6mL)中的溶液中补充乙硫醇(0.06mL，0.80mmol)和K2CO3(110.0mg，0.80mmol)。在室温搅拌24小时后，将THF在真空下蒸发至干燥，并且将残余物通过硅胶柱层析纯化。将所得油状物溶解于二乙醚(10mL)中，并且逐滴补充HCl在二乙醚中的饱和溶液。将标题化合物的沉淀通过过滤收集，用二乙醚洗涤，并且干燥。
收率：67％。
熔点：164-168℃。
1H NMR(CDCl3)δ1.46(t,J＝7.3Hz,3H,SCH2CH3),1.52(d,J＝6.0Hz,1H,NHCH(CH2)CHPh),1.69(m,1H,NHCH(CH2)CHPh),2.37(s,1H,NHCH(CH2)CHPh),3.09(s,1H,NHCH(CH2)CHPh),3.33(q,J＝7.2Hz,2H,SCH2CH3),4.00(s,3H,NCH3),6.84(d,J＝7.0Hz,1H,6’-H),6.89(t,J＝8.5Hz,1H,2’-H),7.15(q,J＝8.4Hz,1H,5’-H),7.73(s,1H,3-H),10.48(bs,1H,NH)。
13C NMR(CDCl3)δ14.1(SCH2CH3),17.6(NHCH(CH2)CHPh),25.5(NHCH(CH2)CHPh),25.9(SCH2CH3),34.5(NCH3),35.3(NHCH(CH2)CHPh),96.3(C-3a),114.8(C-2’),118.1(C-5’),122.1(C-6’),135.5(C-3),135.3(C-1’),148.9-150.1(C-4’),150.3-151.4(C-3’),151.7(C-4),154.2(C-7a),160.8(C-6)。
实施例29：N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-6-(丙硫基)-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(29x.HCl)的合成
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-1-甲基-6-(丙硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(29x.HCl)
Figure BDA0002504052250000941
向(28r)(150.0mg，0.40mmol)在THF(6mL)中的溶液中补充丙硫醇(0.07mL，0.80mmol)和K2CO3(110.0mg，0.80mmol)。在室温搅拌24小时后，将THF在真空下蒸发至干燥，并且将残余物通过硅胶柱层析纯化。将所得油状物溶解于二乙醚(10mL)中，并且逐滴补充HCl在二乙醚中的饱和溶液。将标题化合物的沉淀通过过滤收集，用二乙醚洗涤，并且干燥。
收率：66％。
熔点：110-115℃。
1H NMR(CDCl3)δ1.08(t,J＝7.3Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.51(m,1H,NHCH(CH2)CHPh),1.68(m,1H,NHCH(CH2)CHPh),1.82(h,J＝7.0Hz,2H,SCH2CH2CH3),2.36(s,1H,NHCH(CH2)CHPh),3.09(m,1H,NHCH(CH2)CHPh/SCH2CH2CH3),3.29(t,J＝6.8Hz,1H,SCH2CH2CH3),4.00(s,3H,NCH3),6.84(d,J＝5.9Hz,1H,6’-H),6.89(t,J＝8.5Hz,1H,2’-H),7.15(q,J＝8.5Hz,1H,5’-H),7.73(s,1H,3-H),10.37(bs,1H,NH)。
13C NMR(CDCl3)δ13.5(SCH2CH2CH3),17.6(NHCH(CH2)CHPh),22.3(SCH2CH2CH3),25.5(NHCH(CH2)CHPh),33.3(SCH2CH2CH3),34.4(NCH3),35.3(NHCH(CH2)CHPh),96.3(C-3a),114.8(C-2’),118.1(C-5’),122.1(C-6’),135.1(C-3),135.6(C-1’),148.9-150.1(C-4’),150.4-151.4(C-3’),151.8(C-4),154.3(C-7a),160.9(C-6)。
实施例30：N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-1-乙基-6-(甲硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(30k.HCl)的合成
4-氯-1-乙基-6-(甲硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶(30j)
Figure BDA0002504052250000942
向在冰浴上于5℃冷却的(27i’)(1.0g，5.0mmol)在乙腈(10mL)中的溶液中加入NaH(144mg，6.0mmol)和碘乙烷(0.60mL，7.5mmol)。在50℃搅拌3小时后，将乙腈在真空下蒸发至干燥，并且将残余物在水(50mL)和二氯甲烷(2x 50mL)之间分配。将合并的有机层干燥，并且在真空下蒸发至干燥。将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：77％。
熔点：92-93.5℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.43(t,J＝7.2Hz,3H,NCH2CH3),2.62(s,3H,SCH3),4.42(q,J＝7.2Hz,2H,NCH2CH3),8.34(s,1H,CH)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.9(SCH3),14.4(NCH2CH3),42.2(NCH2CH3),110.1(C-3a),132.3(C-3),153.0(C-4/C-7a),168.7(C-6)。
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-1-乙基-6-(甲硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(30k.HCl)
Figure BDA0002504052250000951
向(30j)(114.0mg，0.5mmol)在乙腈(2.5mL)中的溶液中补充(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺(93.0mg，0.55mmol)和三乙胺(0.13mL)，然后在90℃在回流下加热1小时。将乙腈和三乙胺在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。将所得油状物溶解于二乙醚(10mL)中，并且逐滴补充HCl在二乙醚中的饱和溶液。将标题化合物的沉淀通过过滤收集，用二乙醚洗涤，并且干燥。
收率：54％。
熔点：176-180℃。
1H NMR(CDCl3)δ1.51(t,J＝7.3Hz,4H,NHCH(CH2)CHPh/NCH2CH3),1.69(s,1H,NHCH(CH2)CHPh),2.37(s,1H,NHCH(CH2)CHPh),2.71(s,3H,SCH3),3.09(s,1H,NHCH(CH2)CHPh),4.41(m,2H,NCH2CH3),6.85(d,J＝6.8Hz,1H,6’-H),6.89(t,J＝8.6Hz,1H,2’-H),7.16(q,J＝8.4Hz,1H,5’-H),7.75(s,1H,3-H),10.55(s,1H,NH)。
13C NMR(CDCl3)δ14.0(SCH3),14.7(NCH2CH3),17.7(NHCH(CH2)CHPh),25.4(NHCH(CH2)CHPh),35.3(NHCH(CH2)CHPh),43.0(NCH2CH3),96.3(C-3a),114.8(C-2’),118.1(C-5’),122.1(C-6’),135.2(C-3),135.5(C-1’),148.9-150.1(C-4’),150.3-151.5(C-3’),151.0(C-7a),154.2(C-4),160.8(C-6)。
实施例31：N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-1-乙基-6-(乙硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(31x.HCl)的合成
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-1-乙基-6-(甲磺酰基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(31r)
Figure BDA0002504052250000961
将(30k)(125.0mg，0.35mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液在冰浴上冷却至5℃，并且补充3-氯过苯甲酸(140.0mg，0.80mmol)。在室温搅拌4小时后，将混合物用0.1M NaOH溶液(2x 10mL)洗涤。将有机层干燥并且过滤，将二氯甲烷在真空下蒸发至干燥，并且将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：87％。
熔点：95-100℃(分解)。
1H NMR(CDCl3)δ1.51(m,5H,NHCH(CH2)CHPh/NCH2CH3),2.24(s,1H,NHCH(CH2)CHPh),3.20(s,1H,NHCH(CH2)CHPh),3.33(s,3H,SO2CH3),4.53(m,2H,NCH2CH3),6.58(bs,1H,NH),6.90(m,2H,2’-H/6’-H),7.15(m,1H,5’-H),7.75(s,1H,3-H)。
13C NMR(CDCl3)δ14.9(NCH2CH3),17.9(NHCH(CH2)CHPh),25.7(NHCH(CH2)CHPh),34.5(NHCH(CH2)CHPh),39.2(SO2CH3),42.8(NCH2CH3),99.5(C-3a),114.8(C-2’),118.2(C-5’),122.1(C-6’),131.7(C-3),135.7(C-1’),148.9-150.1(C-4’),150.3-151.5(C-3’),152.8(C-7a),159.3(C-4),162.3(C-6)。
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-1-乙基-6-(乙硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(31x.HCl)
Figure BDA0002504052250000971
向(31r)(150.0mg，0.38mmol)在THF(6mL)中的溶液中补充乙硫醇(0.06mL，0.80mmol)和K2CO3(110.0mg，0.80mmol)。在室温搅拌24小时后，将THF在真空下蒸发至干燥，并且将残余物通过硅胶柱层析纯化。将所得油状物溶解于二乙醚(10mL)中，并且逐滴补充HCl在二乙醚中的饱和溶液。将标题化合物的沉淀通过过滤收集，用二乙醚洗涤，并且干燥。
收率：64％。
熔点：168-172℃。
1H NMR(CDCl3)δ1.45(t,J＝7.3Hz,3H,SCH2CH3),1.51(t,J＝7.2Hz,4H,NCH2CH3/NHCH(CH2)CHPh),1.69(s,1H,NHCH(CH2)CHPh),2.37(s,1H,NHCH(CH2)CHPh),3.09(s,1H,NHCH(CH2)CHPh),3.32(q,J＝7.1Hz,2H,SCH2CH3),4.40(七重峰,J＝6.9Hz,2H,NCH2CH3),6.85(d,J＝6.2Hz,1H,6’-H),6.89(t,J＝8.8Hz,1H,2’-H),7.15(q,J＝8.5Hz,1H,5’-H),7.74(s,1H,3-H),10.49(bs,1H,NH)。
13C NMR(CDCl3)δ14.1(SCH2CH3),14.7(NCH2CH3),17.6(NHCH(CH2)CHPh),25.4(NHCH(CH2)CHPh),25.9(SCH2CH3),35.3(NHCH(CH2)CHPh),43.0(NCH2CH3),100.1(C-3a),114.8(C-2’),118.1(C-5’),122.1(C-6’),135.2(C-3),135.6(C-1’),148.9-150.1(C-4’),150.3-151.4(C-3’),151.1(C-4),154.2(C-7a),160.4(C-6)。
实施例32：N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-1-乙基-6-(丙硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(32x.HCl)的合成
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-1-乙基-6-(丙硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(32x.HCl)
Figure BDA0002504052250000972
向(31r)(150.0mg，0.38mmol)在THF(6mL)中的溶液中补充丙硫醇(0.07mL，0.80mmol)和K2CO3(110.0mg，0.80mmol)。在室温搅拌24小时后，将THF在真空下蒸发至干燥，并且将残余物通过硅胶柱层析纯化。将所得油状物溶解于二乙醚(10mL)中，并且逐滴补充HCl在二乙醚中的饱和溶液。将标题化合物的沉淀通过过滤收集，用二乙醚洗涤，并且干燥。
收率：62％。
熔点：150-154℃。
1H NMR(CDCl3)δ1.08(t,J＝7.3Hz,3H,SCH2CH2CH3),1.51(t,J＝7.3Hz,4H,NCH2CH3/NHCH(CH2)CHPh),1.69(s,1H,NHCH(CH2)CHPh),1.82(h,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH3),2.37(s,1H,NHCH(CH2)CHPh),3.08(s,1H,NHCH(CH2)CHPh),3.28(t,J＝7.1Hz,2H,SCH2CH2CH3),4.39(七重峰,J＝6.9Hz,2H,NCH2CH3),6.85(d,J＝7.0Hz,1H,6’-H),6.89(t,J＝8.8Hz,1H,2’-H),7.15(q,J＝8.4Hz,1H,5’-H),7.73(s,1H,3-H),10.50(bs,1H,NH)。
13C NMR(CDCl3)δ13.5(SCH2CH2CH3),14.7(NCH2CH3),17.6(NHCH(CH2)CHPh),22.3(SCH2CH2CH3),25.4(NHCH(CH2)CHPh),33.3(SCH2CH2CH3),35.3(NHCH(CH2)CHPh),43.0(NCH2CH3),96.3(C-3a),114.8(C-2’),118.1(C-5’),122.1(C-6’),135.2(C-3),141.3(C-1’),149.2-150.4(C-4’),150.3-151.4(C-3’),151.1(C-4),154.2(C-7a),160.6(C-6)。
实施例33：N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-1-异丙基-6-(甲硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(33k.HCl)的合成
4-氯-1-异丙基-6-(甲硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶(33j)
Figure BDA0002504052250000981
向在冰浴上于5℃冷却的(27i’)(1.0g，5.0mmol)在乙腈(10mL)中的溶液中加入NaH(144mg，6.0mmol)和2-碘丙烷(0.75mL，7.5mmol)。在50℃搅拌3小时后，将乙腈在真空下蒸发至干燥，并且将残余物在水(50mL)和二氯甲烷(2x 50mL)之间分配。将合并的有机层干燥，并且在真空下蒸发至干燥。将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：73％。
熔点：114-115.5℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.50(d,J＝6.5Hz,6H,CH(CH3)2),2.62(s,3H,SCH3),5.07(七重峰,J＝6.6Hz,1H,CH(CH3)2),8.33(s,1H,CH)。
13C NMR(DMSO-d6)δ14.4(SCH3),22.1(CH(CH3)2),49.9(CH(CH3)2),110.7(C-3a),132.6(C-3),153.0-153.4(C-4/C-7a),169.0(C-6)。
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-1-异丙基-6-(甲硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(33k.HCl)
Figure BDA0002504052250000991
向(33j)(121.0mg，0.5mmol)在乙腈(2.5mL)中的溶液中补充(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺(93.0mg，0.55mmol)和三乙胺(0.13mL)，然后在90℃在回流下加热1小时。将乙腈和三乙胺在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。将所得油状物溶解于二乙醚(10mL)中，并且逐滴补充HCl在二乙醚中的饱和溶液。将标题化合物的沉淀通过过滤收集，用二乙醚洗涤，并且干燥。
收率：87％。
熔点：159-163℃。
1H NMR(CDCl3)δ1.50(q,J＝6.7Hz,1H,NHCH(CH2)CHPh),1.54(d,J＝6.7Hz,3H,NCH(CH3)2),1.55(d,J＝6.7Hz,3H,NCH(CH3)2),1.70(ddd,J＝10.4Hz/6.6Hz/4.5Hz,1H,NHCH(CH2)CHPh),2.37(ddd,J＝9.7Hz/6.4Hz/3.1Hz,1H,NHCH(CH2)CHPh),2.71(s,3H,SCH3),3.09(dq,J＝7.3Hz/3.2Hz,1H,NHCH(CH2)CHPh),5.08(七重峰,J＝6.7Hz,1H,NCH(CH3)2),6.84(d,J＝8.4Hz,1H,6’-H),6.89(m,1H,2’-H),7.16(dt,J＝9.6Hz/8.4Hz,1H,5’-H),7.75(s,1H,3-H),10.57(s,1H,NH)。
13C NMR(CDCl3)δ14.0(SCH3),17.7(NHCH(CH2)CHPh),21.9(CH(CH3)2),25.4(NHCH(CH2)CHPh),35.2(NHCH(CH2)CHPh),50.1(CH(CH3)2),96.3(C-3a),114.7(C-2’),118.1(C-5’),122.0(C-6’),135.0(C-3),135.6(C-1’),148.9-150.1(C-4’),150.3-151.5(C-3’),150.4(C-7a),154.1(C-4),160.4(C-6)。
实施例34：N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-6-(甲硫基)-1-丙基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(34k.HCl)的合成
4-氯-1-丙基-6-(甲硫基)-1-丙基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶(34j)
Figure BDA0002504052250001001
向在冰浴上于5℃冷却的(27i’)(1.0g，5.0mmol)在乙腈(10mL)中的溶液中加入NaH(144mg，6.0mmol)和1-碘丙烷(0.73mL，7.5mmol)。在50℃搅拌3小时后，将乙腈在真空下蒸发至干燥，并且将残余物在水(50mL)和二氯甲烷(2x 50mL)之间分配。将合并的有机层干燥，并且在真空下蒸发至干燥。将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：78％。
熔点：41-43℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.83(t,J＝6.0Hz,3H,NCH2CH2CH3),1.88(h,J＝6.1Hz,2H,NCH2CH2CH3),2.62(s,3H,SCH3),4.35(t,J＝6.2Hz,2H,NCH2CH2CH3),8.35(s,1H,CH)。
13C NMR(DMSO-d6)δ11.0(NCH2CH2CH3),13.9(SCH3),22.2(NCH2CH2CH3),48.6(NCH2CH2CH3),110.0(C-3a),132.4(C-3),153.0(C-4),153.5(C-7a),168.7(C-6)。
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-6-(甲硫基)-1-丙基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(34k.HCl)
Figure BDA0002504052250001002
向(34j)(121.0mg，0.5mmol)在乙腈(2.5mL)中的溶液中补充(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺(93.0mg，0.55mmol)和三乙胺(0.13mL)，然后在90℃在回流下加热1小时。将乙腈和三乙胺在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。将所得油状物溶解于二乙醚(10mL)中，并且逐滴补充HCl在二乙醚中的饱和溶液。将标题化合物的沉淀通过过滤收集，用二乙醚洗涤，并且干燥。
收率：76％。
熔点：155-159℃。
1H NMR(CDCl3)δ0.93(t,J＝7.4Hz,3H,NCH2CH2CH3),1.51(q,J＝6.7Hz,1H,NHCH(CH2)CHPh),1.69(m,1H,NHCH(CH2)CHPh),1.94(h,J＝7.3Hz,2H,NCH2CH2CH3),2.38(ddd,J＝9.6Hz/6.4Hz/3.0Hz,1H,NHCH(CH2)CHPh),2.71(s,3H,SCH3),3.09(dd,J＝6.7Hz/3.5Hz,1H,NHCH(CH2)CHPh),4.32(m,2H,NCH2CH2CH3),6.85(d,J＝8.3Hz,1H,6’-H),6.89(m,1H,2’-H),7.16(m,1H,5’-H),7.75(s,1H,3-H),10.57(s,1H,NH)。
13C NMR(CDCl3)δ11.3(NCH2CH2CH3),14.0(SCH3),17.6(NHCH(CH2)CHPh),22.8(NCH2CH2CH3),25.4(NHCH(CH2)CHPh),35.3(NHCH(CH2)CHPh),49.5(NCH2CH2CH3),96.1(C-3a),114.8(C-2’),118.1(C-5’),122.0(C-6’),135.2(C-3),135.5(C-1’),148.9-150.1(C-4’),150.3-151.5(C-3’),151.5(C-7a),154.2(C-4),160.8(C-6)。
实施例35：N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-7-乙基-2-(甲硫基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(35p.HCl)的合成
6-氨基-2-(甲硫基)嘧啶-4-醇(35l)
Figure BDA0002504052250001011
将6-氨基-2-巯基嘧啶-4-醇(2.5g，17.5mmol)溶解于KOH 10％(25mL)中，并且补充碘甲烷(1.25mL，20.0mmol)。将反应混合物引入密封容器中并且在80℃加热1小时。在冰浴上冷却至5℃后，通过加入6N盐酸将混合物酸化，并且将所得沉淀过滤掉并且干燥。
收率：95％。
熔点：261-264℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ2.42(s,3H,SCH3),4.90(s,1H,CH),6.44(s,2H,NH2),11.47(s,1H,OH)。
13C NMR(DMSO-d6)δ12.6(SCH3),81.2(C-5),163.6(C-2),164.3(C-6)。
2-(甲硫基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-醇(35m)
Figure BDA0002504052250001021
向35l(1.57g，10.0mmol)在水(40mL)中的悬浮液中加入乙酸钠(2.0g，24.5mmol)和50％氯乙醛水溶液(2mL，14.2mmol)。在80℃达1小时后，将反应混合物在冰浴上冷却至5℃，并且将所得沉淀过滤掉并且通过硅胶柱层析纯化。
收率：45％。
熔点：>300℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ2.52(s,3H,SCH3),6.36(m,1H,5-H),6.91(m,1H,6-H),11.75(s,1H,NH),12.03(s,1H,OH)。
13C NMR(DMSO-d6)δ12.8(SCH3),102.0(C-5),104.2(C-4a),119.3(C-6),148.3(C-7a),154.2(C-2),158.8(C-4)。
4-氯-2-(甲硫基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(35n)
Figure BDA0002504052250001022
向在冰浴上于5℃冷却的(35m)(1.0g，5.5mmol)在POCl3(10mL)中的溶液中逐滴加入二乙基苯胺(1.0mL，6.2mmol)。在80℃搅拌2小时后，将混合物倒在碎冰上，并且将所得沉淀过滤掉并且通过硅胶柱层析纯化。
收率：33％。
熔点：206-208℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ2.56(s,3H,SCH3),6.52(s,1H,5-H),7.52(s,1H,6-H),12.39(s,1H,NH)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.8(SCH3),99.0(C-5),113.2(C-4a),126.9(C-6),150.4-152.7(C-4/C-7a),162.7(C-2)。
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(甲硫基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(35o’)
Figure BDA0002504052250001031
向(35n)(200.0mg，1.0mmol)在乙腈(5mL)中的溶液中补充(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺(340.0mg，2.0mmol)和三乙胺(0.30mL)，然后在90℃在回流下加热1小时。将乙腈和三乙胺在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：15％。
熔点：208-211℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.34(m,2H,NHCH(CH2)CHPh),2.03(s,1H,NHCH(CH2)CHPh),2.30(s,3H,SCH3),3.03(s,1H,NHCH(CH2)CHPh),6.40(s,1H,5-H),6.93(s,1H,2’-H),7.08(s,1H,6’-H),7.33(m,2H,6-H/5’-H),7.84(s,1H,NHCH(CH2)CHPh),11.40(s,1H,NH)。
13C NMR(CDCl3)δ13.3(SCH3),99.5(C-5),112.1(C-4a),117.0(C-5’),119.9(C-2’),122.9(C-6’),139.6(C-1’),147.0-148.3(C-4’),148.6-150.0(C-3’),162.3(C-2)。
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-7-乙基-2-(甲硫基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(35p.HCl)
Figure BDA0002504052250001032
向在冰浴上于5℃冷却的(35o’)(166.0mg，0.5mmol)在乙腈(10mL)中的溶液中加入NaH(15mg，0.6mmol)和碘乙烷(0.060mL，0.75mmol)。在50℃搅拌1小时后，将乙腈在真空下蒸发至干燥，并且将残余物在水(50mL)和二氯甲烷(2x 50mL)之间分配。将合并的有机层干燥，并且在真空下蒸发至干燥。将残余物通过硅胶柱层析纯化。将所得油状物溶解于二乙醚(10mL)中，并且逐滴补充HCl在二乙醚中的饱和溶液。将标题化合物的沉淀通过过滤收集，用二乙醚洗涤，并且干燥。
收率：74％。
熔点：189-194℃。
1H NMR(CDCl3)δ1.46(t,J＝7.3Hz,4H,NHCH(CH2)CHPh/NCH2CH3),1.66(m,1H,NHCH(CH2)CHPh),2.30(m,1H,NHCH(CH2)CHPh),2.70(s,3H,SCH3),3.09(m,1H,NHCH(CH2)CHPh),4.22(q,J＝7.3Hz,2H,NCH2CH3),6.35(d,J＝3.4Hz,1H,5-H),6.81(d,J＝8.3Hz,1H,6’-H),6.87(m,1H,2’-H),6.90(d,J＝3.6Hz,1H,6-H),7.13(q,J＝8.5Hz,1H,5’-H),9.99(s,1H,NH)。
13C NMR(CDCl3)δ14.0(SCH3),15.5(NCH2CH3),17.9(NHCH(CH2)CHPh),25.7(NHCH(CH2)CHPh),35.2(NHCH(CH2)CHPh),40.3(NCH2CH3),98.1(C-4a),103.4(C-5),114.8(C-2’),117.8(C-5’),122.0(C-6’),125.4(C-6),136.4(C-1’),148.3(7a),149.1-151.1(C-3’/C-4’),153.4(C-4),155.9(C-2)。
2.嘧啶衍生物用于预防和治疗细菌感染的实施例
实施例1：分子2329、2348、2412、2452和2461对表皮葡萄球菌的抗菌作用：最低抑菌浓度(MIC)的测定。
分子2329、2348、2412、2452和2461分别对应于以下化学式：
Figure BDA0002504052250001041
2329是N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-甲基-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(在上文中也称为1c)
2348是N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-乙基-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(在上文中也称为3c)
Figure BDA0002504052250001051
2412是9-烯丙基-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(也称为15c)
2461是(1S,2R,3S,4R)-4-(6-(((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)氨基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-9-基)环戊烷-1,2,3-三醇(也称为19d)。
Figure BDA0002504052250001052
2452是N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-(丙-2-炔-1-基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(也称为17c)。
按照EUCAST(欧洲抗微生物药敏试验委员会)的建议，在表皮葡萄球菌(ATCC35984，也称为RP62A)上测定分子2329、2348、2412、2452和2461的最低抑菌浓度(MIC)。
简言之，将在胰酶大豆琼脂(TSA)板上生长的单个菌落重悬并且在有氧条件下(37℃，220rpm振荡)在胰酶大豆肉汤(TSB)中培养过夜(O/N)，第二天将Mueller-Hinton肉汤(MHB)中的1:50接种物在有氧条件下温育3小时，并且在1％DMSO(赋形剂)中在存在或不存在不同浓度分子的情况下温育1:100稀释(对应于3x105CFU/ml)的接种物。在O/N培养后，在分光光度计中在600nm处测量每种培养物的OD(OD600)。MIC表示不存在可见的细菌生长时，即600nm处的ΔOD等于零(空白是单独的培养基)时的浓度。
分子2329、2348和2461对表皮葡萄球菌(ATCC 35984)的MIC等于20μM，同时分子2412和2452的MIC高于50μM。
实施例2：分子2329、2348、2412、2452和2461对金黄色葡萄球菌的抗菌作用：最低抑菌浓度(MIC)的测定。
使用不同的金黄色葡萄球菌菌株(临床相关的革兰氏阳性细菌菌株：金黄色葡萄球菌ATCC 25904、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)ATCC BAA-1556、糖肽中等耐药性(GISA)金黄色葡萄球菌Mu-50(ATCC 700695))进行进一步的实验，以测定最低抑菌浓度(MIC)，其是防止细菌生长所需的最低浓度。还使用生物荧光性菌株金黄色葡萄球菌Xen29(ATCC 12600)。该菌株来源于亲本菌株金黄色葡萄球菌ATCC 12600(胸膜液分离物)，其也被称为NCTC8532。金黄色葡萄球菌Xen29在细菌染色体上的单个整合位点处具有经修饰的发光光杆状菌(Photorhabdus luminescens)luxABCDE操纵子的稳定拷贝。
将选自不同金黄色葡萄球菌菌株的单个菌落重悬并且在有氧条件下(37℃，220rpm振荡)在脑心浸液(BHI)肉汤中培养过夜(O/N)，第二天将Mueller-Hinton肉汤(MHB)中的1:100接种物在有氧条件下温育3小时(OD＝0,08-0,1)，并且在1％DMSO中在存在或不存在不同浓度测试分子的情况下温育1:300稀释(对应于3x105CFU/ml)的接种物。在O/N培养后，在分光光度计(Victor 3-Perkin Elmer)中在600nm处测量每种培养物的OD(OD600)。MIC表示不存在可见的细菌生长时，即600nm处的ΔOD等于零(空白是单独的培养基)时的浓度。2329、2348、2412、2452和2461对金黄色葡萄球菌ATCC 25904和Xen29(ATCC 12600)的MIC等于20-25μM。分子2329针对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)ATCC BAA-1556是最有效的，其中MIC等于20μM，同时分子2348和2461的MIC为25μM，并且分子2412和2452的MIC为2-25至50μM。分子2329对糖肽中等耐药性(GISA)金黄色葡萄球菌Mu-50(ATCC 700695)的MIC为25至30μM，同时分子2348、2412和2452对糖肽中等耐药性(GISA)金黄色葡萄球菌Mu-50(ATCC 700695)的MIC高于50μM。
实施例3：分子2329、2348、2412、2452和2461对粪肠球菌的抗菌作用：最低抑菌浓度(MIC)的测定。
使用耐万古霉素(VRE)粪肠球菌ATCC BAA-2365的临床相关的革兰氏阳性细菌菌株进行进一步的实验，以测定最低抑菌浓度(MIC)，其是防止细菌生长所需的最低浓度。
将选自粪肠球菌VRE的单个菌落重悬并且在有氧条件下(37℃，220rpm振荡)在脑心浸液(BHI)肉汤中培养过夜(O/N)，第二天将Mueller-Hinton肉汤(MHB)中的1:100接种物在有氧条件下温育3小时(OD＝0,08-0,1)，并且在1％DMSO中在存在或不存在不同浓度测试分子的情况下温育1:300稀释(对应于3x105CFU/ml)的接种物。在O/N培养后，在分光光度计(Victor 3-Perkin Elmer)中在600nm处测量每种培养物的OD(OD600)。MIC表示不存在可见的细菌生长时，即600nm处的ΔOD等于零(空白是单独的培养基)时的浓度。分子2329和2461对耐万古霉素粪肠球菌(VRE)ATCC BAA-2365的MIC等于25μM，同时分子2348、2412和2452的MIC高于50μM。
表1示出了所有实验的结果。
Figure BDA0002504052250001071
表1.MIC：在Mueller-Hinton肉汤(MHB)中测定的嘧啶衍生物对MRSA(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)、GISA(糖肽中等耐药性金黄色葡萄球菌)、VRE(耐万古霉素粪肠球菌)的最低抑菌浓度；MIC以μM表示。nd：未测得。
实施例4：分子2329、2348作为金黄色葡萄球菌生物膜形成的抑制剂的用途
生物荧光性金黄色葡萄球菌(Xen29,Perkin Elmer-(ATCC 12600))在TSB培养基中培养过夜，然后在新鲜TSB中稀释100倍，并且在37℃有氧温育直至细菌培养物达到OD600为0.6(相当于大约1-3x108CFU/ml)。然后将细菌培养物在新鲜TSB中稀释至1x104CFU/ml。将600μl等分试样的稀释细菌悬浮液分配在48孔板的每个孔中。使细菌在37℃在静态条件下粘附3小时。移除培养基后，用PBS冲洗孔2次以除去浮游细菌，并且用补充有0.5％葡萄糖的TSB重新填充。
然后以10μM的终浓度加入分子2329或2348。使用IVIS摄像系统(Xenogen Corp.)每60分钟对生物膜形成进行一次成像，持续13小时。然后使用Living Image软件包(Xenogen Corp.)对来自每个孔的总光子发射进行定量。
在图1中，生物膜形成表示为光子信号强度/表面单位。当以10μM的剂量使用时，分子2329和2348完全防止生物膜形成。
实施例5：分子2412和2452延迟金黄色葡萄球菌生物膜形成的用途
生物荧光性金黄色葡萄球菌(Xen29,Perkin Elmer-(ATCC 12600))在TSB培养基中培养过夜，然后在新鲜TSB中稀释100倍，并且在37℃有氧温育直至细菌培养物达到OD600为0.6(相当于大约1-3x108CFU/ml)。然后将细菌培养物在新鲜TSB中稀释至1x104CFU/ml。将600μl等分试样的稀释细菌悬浮液分配在48孔板的每个孔中。使细菌在37℃在静态条件下粘附3小时。移除培养基后，用PBS冲洗孔2次以除去浮游细菌，并且用补充有0.5％葡萄糖的TSB重新填充。
然后以10μM的终浓度加入分子2412或2452。使用IVIS摄像系统(Xenogen Corp.)每60分钟对生物膜形成进行一次成像，持续13小时。然后使用Living Image软件包(Xenogen Corp.)对来自每个孔的总光子发射进行定量。
在图1中，生物膜形成表示为光子信号强度/表面单位。与赋形剂对照(DMSO 1％)相比，当以10μM的剂量使用时，分子2412和2452能够延迟生物膜形成。
实施例6：分子2329对表皮葡萄球菌(ATCC 35984)24小时-成熟生物膜的作用
在另一个实验中，我们让0.5x108CFU/ml表皮葡萄球菌细胞粘附4小时，并且在0.25％葡萄糖的存在下让生物膜形成另外24小时，此时我们在具有0.25％葡萄糖的TSB中用不同浓度的分子2329处理生物膜24小时并且使用结晶紫染色测定生物膜生物量。
对于生物膜分析，我们首先将生物膜用NaCl 0,9％洗涤3次以除去所有浮游细菌，然后与蒸馏H2O(dH2O)中的染色结晶紫1％溶液一起温育。
将孔用dH2O洗涤3次以除去未结合的结晶紫。然后加入400μl 10％乙酸并且在室温温育10分钟。在570nm处一式三份地测量吸光度，反映生物膜的总生物量。图2示出了232980μM能够减少表皮葡萄球菌24小时成熟生物膜。
实施例7：吡唑并嘧啶分子2539、2544、2666、2676、2693、2783、2784和2782以及嘌呤分子2498、2511、2525、2527、2833和2840对表皮葡萄球菌(S.epidermidis-(ATCC35984)，也称为MRSE)的抗菌作用：最低抑菌浓度(MIC)的测定。
吡唑并嘧啶分子2539、2544、2666、2676、2693、2783、2784和2782对应于以下化学式：
Figure BDA0002504052250001091
2539是N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-1-甲基-6-(甲硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(在上文中也称为27k)；
2544是N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-1-乙基-6-(甲硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(在上文中也称为30k)。
Figure BDA0002504052250001092
2666是N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-6-(乙硫基)-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(在上文中也称为28x.HCl)；
2676是N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-1-异丙基-6-(甲硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(在上文中也称为33k.HCl)。
Figure BDA0002504052250001101
2693是N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-6-(甲硫基)-1-丙基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(在上文中也称为34k.HCl)。
Figure BDA0002504052250001102
2783是N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-6-(乙硫基)-1-乙基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(在上文中也称为31x.HCl)；
2782是N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-6-(丙硫基)-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(在上文中也称为29x.HCl)。
Figure BDA0002504052250001103
2784是N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-6-(丙硫基)-1-乙基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(在上文中也称为32x.HCl)。
嘌呤分子2498、2511、2525、2527、2833和2840对应于以下化学式：
Figure BDA0002504052250001104
2498是N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-甲基-2-(甲硫基)-9H-嘌呤-6-胺(在上文中也称为22c)；
2511是N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-乙基-2-(甲硫基)-9H-嘌呤-6-胺(在上文中也称为24c)。
Figure BDA0002504052250001111
2525是N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(乙硫基)-9-甲基-9H-嘌呤-6-胺(在上文中也称为20c)；
2527是N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-乙基-2-(乙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(在上文中也称为21c)。
Figure BDA0002504052250001112
2833是2-(丁硫基)-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-甲基-9H-嘌呤-6-胺(在上文中也称为25c)；
2840是2-(丁硫基)-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-乙基-9H-嘌呤-6-胺(在上文中也称为26c)。
按照EUCAST(欧洲抗微生物药敏试验委员会)的建议，在表皮葡萄球菌(ATCC35984，也称为RP62A或MRSE)上测定吡唑并嘧啶分子2539、2544、2666、2676、2693、2783、2784和2782以及嘌呤分子2498、2511、2525、2527、2833和2840的最低抑菌浓度(MIC)。
简言之，将在琼脂板上生长的单个菌落重悬并且在有氧条件下(37℃，220rpm振荡)在胰酶大豆肉汤(TSB)培养基中培养过夜(O/N)，第二天将Mueller-Hinton肉汤(MHB)中的1:50接种物在有氧条件下温育3小时(OD＝0.08-0.1)，并且在1％DMSO(赋形剂)中在存在或不存在不同浓度的每种分子的情况下温育1:300稀释(对应于3x105CFU/ml)的接种物。在O/N培养后，在分光光度计(Victor 3-Perkin Elmer)中在600nm处测量每种培养物的OD(OD600)。MIC表示不存在可见的细菌生长时，即600nm处的ΔOD等于零(其中ΔOD是分子的OD与空白(单独的培养基)的OD之差)时的浓度。
吡唑并嘧啶分子2539、2544、2666和2676以及嘌呤分子2498、2511、2525、2527和2833能够抑制MHB培养基中的MRSE生长。表2中报告了MIC值。在高达100μM的情况下，吡唑并嘧啶分子2693、2782、2783和2784以及嘌呤分子2511和2840对表皮葡萄球菌不具有活性。
实施例8：吡唑并嘧啶分子2539、2544、2666、2676、2693、2783、2784和2782以及嘌呤分子2498、2511、2525、2527、2833和2840对金黄色葡萄球菌(S.aureus))的抗菌作用：最低抑菌浓度(MIC)的测定。
使用不同的金黄色葡萄球菌(临床相关的革兰氏阳性细菌菌株：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)ATCC BAA-1556和金黄色葡萄球菌Xen29(Perkin Elmer ATCC 12600))进行进一步的实验。
为了测定上述分子在MRSA或在Xen29中的MIC，将MRSA或Xen29的单个菌落重悬并且在有氧条件下(37℃，220rpm振荡)在脑心浸液(BHI)肉汤中培养过夜(O/N)，第二天将Mueller-Hinton肉汤(MHB)中的1:100接种物在有氧条件下温育3小时(OD＝0,08-0,1)，并且在1％DMSO中在存在或不存在不同浓度测试分子的情况下温育1:300稀释(对应于3x105CFU/ml)的接种物。在O/N培养后，在分光光度计(Victor 3-Perkin Elmer)中在600nm处测量每种培养物的OD(OD600)。MIC表示不存在可见的细菌生长时，即600nm处的ΔOD等于零(空白是单独的培养基)时的浓度。
吡唑并嘧啶分子2539、2544、2666、2676、2693、2783、2782、2784以及嘌呤分子2498、2511、2525、2527、2833和2840对于MRSA(ATCC BAA-1556)具有活性，同时分子2539、2544、2666、2498、2511、2525和2527能够抑制Xen29(ATCC 12600)生长。表2中报告了这些分子对这些金黄色葡萄球菌菌株的MIC值。
Figure BDA0002504052250001121
Figure BDA0002504052250001131
表2.如在MHB培养基中测定的嘧啶衍生物对MRSE、MRSA和Xen29革兰氏阳性菌株的MIC值，以μM表示。(nd：未测得)。在浓度高达100μM的情况下测试所有分子。
实施例9：吡唑并嘧啶分子2666以及嘌呤分子2511作为金黄色葡萄球菌(Xen29-ATCC 12600)生物膜形成的抑制剂的用途。
生物荧光性金黄色葡萄球菌在TSB培养基中O/N培养，然后在新鲜TSB中稀释100倍，并且在37℃有氧温育直至细菌培养物达到OD600为0.6(相当于大约1-3x108CFU/ml)。然后将细菌培养物在新鲜TSB中稀释至1x104CFU/ml，并且将600μl等分试样分配在48孔板的每个孔中。使细菌在37℃在静态条件下粘附3小时。移除培养基后，用PBS冲洗孔2次以除去浮游细菌，并且用补充有0.5％葡萄糖的TSB重新填充。然后以20μM的终浓度加入分子2666和2511。使用IVIS摄像系统(Xenogen Corp.)每60分钟对生物膜形成进行一次成像，持续13小时。然后使用Living Image软件包(Xenogen Corp.)对来自每个孔的总光子发射(光子/秒：p/s)进行定量。
图3示出了与赋形剂对照(Ctrl)存在下的生物膜形成相比，吡唑并嘧啶分子2666和嘌呤分子2511在20μM下抑制金黄色葡萄球菌(Xen29-ATCC 12600)生物膜形成(步骤2)的动力学。
生物膜形成与从每个孔射出的电子信号强度/秒(辐射率)成比例。当以20μM使用时，分子2666和2511抑制生物膜生长。
实施例10：吡唑并嘧啶分子2666作为针对MRSA的杀菌剂的用途以及嘌呤分子2329和2833作为分别针对MRSA和MRSE的杀菌剂的用途。
我们已经测定了吡唑并嘧啶分子2666对MRSA菌株的最低杀菌浓度(MBC)以及嘌呤分子2329和2833分别对MRSA和MRSE菌株的MBC。
为了测定MBC，依照MIC测定在吡唑并嘧啶分子2666(用于MRSA)的存在下或在嘌呤分子2833(用于MRSE)或2329(用于MRSA)的存在下培养细菌。在24小时时，通过肉汤微量稀释法将细菌在TSB琼脂板上铺板，并且在第二天对板上形成菌落进行计数。
MBC表示在24小时内杀灭初始接种物的99.9％细菌时的最低浓度。
分子2666和2329对MRSA的MBC为40μM，同时2833对MRSE的MBC为50μM，这仅相当于其MIC的大约2倍。
3.根据本发明的嘧啶衍生物与WO2009/034386中公开的嘌呤的比较
我们已经合成了来自WO2009/034386实施例的2个分子(25、81)。在该专利申请中，描述了这2个分子抑制来自粪肠球菌、屎肠球菌(E.faecium)和金黄色葡萄球菌的MurI酶的能力。这2个分子能够抑制来自粪肠球菌和屎肠球菌的MurI同工酶的酶促活性，其中半数最大抑制浓度(IC50)分别等于2和5μM(WO2009/034386的表9)。相比之下，对于这2个分子报告了针对金黄色葡萄球菌MurI同工酶的IC50>400μM，表明无法抑制来自该细菌菌株的MurI酶。WO2009/034386并未报道证明了这些嘌呤分子的抗菌功效的任何其他测试。
我们发现这些分子对两种测试金黄色葡萄球菌菌株(耐甲氧西林菌株(MRSA，ATCCBAA-1556)和Xen29(Perkin Elmer-ATCC 12600))和对表皮葡萄球菌(MRSE ATCC 35984)都不具有抗菌活性。
根据与本发明所述类似的化学途径来合成分子，不同之处在于Xb上的氯原子的亲核取代通过另一种胺进行。
Figure BDA0002504052250001141
当R1＝CH3时，根据以下方案6由Xz开始提供相应的烷氧基取代的化合物Xz”，其中Y＝O：
Figure BDA0002504052250001151
实施例1：2-(丁硫基)-9-(3-氯-2,6-二氟苄基)-9H-嘌呤-6-胺(36z)
Figure BDA0002504052250001152
根据与本发明所述类似的化学途径来合成36z(WO2009/034386中的分子25)，不同之处在于Xb上的氯原子的亲核取代通过另一种胺R9-NH2(本实施例中的氨)进行。
2-(丁硫基)-6-氯-N4-(3-氯-2,6-二氟苄基)嘧啶-4,5-二胺(36a)
Figure BDA0002504052250001153
将2-(丁硫基)-4,6-二氯嘧啶-5-胺(25h)(0.5g，2.0mmol)溶解于甲醇(10mL)中，并且补充3-氯-2,6-二氟苄胺(0.78mL，6.0mmol)。将反应混合物引入密封容器中并且在130℃加热2小时。将反应混合物在真空下浓缩至干燥后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：77％。
熔点：148-150℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.88(t,J＝7.3Hz,3H,SCH2CH2CH2CH3),1.37(h,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH2CH3),1.58(p,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH2CH3),2.97(t,J＝7.2Hz,2H,SCH2CH2CH2CH3),4.65(d,J＝4.5Hz,2H,NHCH2),4.83(s,2H,NH2),7.20(t,J＝8.9Hz,1H,5’-H),7.34(s,1H,NH),7.62(q,J＝8.6Hz,1H,4’-H)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.5(SCH2CH2CH2CH3),21.4(SCH2CH2CH2CH3),29.7(SCH2CH2CH2CH3),31.2(SCH2CH2CH2CH3),33.4(NCH2),112.6(C-5’),115.4(C-3’),116.0(C-1’),120.2(C-5),130.0(C-4’),137.7(C-6),151.8(C-4),155.1(C-2),155.2-157.2(C-6’),158.7-160.6(C-2’)。
2-(丁硫基)-6-氯-9-(3-氯-2,6-二氟苄基)-9H-嘌呤(36b)
Figure BDA0002504052250001161
将(36a)(393.0mg，1mmol)在乙酸(3.0mL)和原甲酸三乙酯(3.0mL，18mmol)中的溶液在130℃的温度下在回流下加热4小时。将乙酸和原甲酸三乙酯在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：59％。
熔点：109-111℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.90(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH2CH3),1.40(h,J＝7.4Hz,2H,SCH2CH2CH2CH3),1.62(p,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH2CH3),3.11(t,J＝7.2Hz,2H,SCH2CH2CH2CH3),5.57(s,2H,NCH2),7.22(td,J＝9.1Hz/1.5Hz,1H,5’-H),7.69(td,J＝8.8Hz/5.8Hz,1H,4’-H),8.66(s,1H,8-H)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.5(SCH2CH2CH2CH3),21.3(SCH2CH2CH2CH3),30.2(SCH2CH2CH2CH3),30.6(SCH2CH2CH2CH3),36.1(NCH2),112.9(C-5’),113.1(C-1’),115.7(C-3’),127.7(C-5),131.3(C-4’),149.1(C-4),152.5(C-6),155.3-156.7(C-6’),158.8-160.2(C-2’),164.4(C-2)。
2-(丁硫基)-9-(3-氯-2,6-二氟苄基)-9H-嘌呤-6-胺(36z)
Figure BDA0002504052250001171
将氨在置于密封容器中的(36b)(200.0mg，0.5mmol)在乙腈(2.5mL)中的溶液中鼓泡5分钟。将混合物在110℃加热3小时。将乙腈和氨在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：29％。
熔点：133.5-135.5℃。
36z的一致性和纯度通过NMR光谱和元素分析证实，并且报告如下：
1H NMR(DMSO-d6)δ0.88(t,J＝7.4Hz,3H,SCH2CH2CH2CH3),1.38(h,J＝7.4Hz,2H,SCH2CH2CH2CH3),1.57(p,J＝7.3Hz,2H,SCH2CH2CH2CH3),3.00(t,J＝7.2Hz,2H,SCH2CH2CH2CH3),5.42(s,2H,NCH2),7.20(t,J＝8.8Hz,1H,5’-H),7.28(s,2H,NH2),7.66(m,1H,4’-H),8.11(s,1H,8-H)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.6(SCH2CH2CH2CH3),21.3(SCH2CH2CH2CH3),29.5(SCH2CH2CH2CH3),31.1(SCH2CH2CH2CH3),35.4(NCH2),112.8(C-5’),113.9(C-1’),115.6(C-3’),116.2(C-5),130.9(C-4’),149.9(C-4),155.2-156.7(C-6’),155.4(C-6),158.8-160.2(C-2’),163.8(C-2)。
分析(C16H16ClF2N5S)理论值：C,50.06；H,4.20；N,18.25；S,8.35。实测值：C,49.84；H,4.25；N,18.09；S,7.93。
通过根据EUCAST建议的方案测定分子36z的最低抑菌浓度(MIC)，已经测试了所述分子的潜在抗菌活性，以评价抗生素对细菌菌株的功效。简言之，通过将MRSA或Xen29的单个菌落在有氧条件下(37℃，220rpm振荡)在脑心浸液(BHI)肉汤中培养过夜(O/N)，测定36z(WO2009/034386中的分子25)在MRSA(ATCC BAA-1556)或Xen29(Perkin Elmer-ATCC12600)中的MIC，同时通过将MRSE在TSB中培养过夜(O/N)来测定MRSE(ATCC 35984)的MIC。第二天将Mueller-Hinton肉汤(MHB)中的1:100接种物在有氧条件下温育3小时(OD＝0.08-0.1)，并且在1％DMSO中在存在或不存在不同浓度测试分子的情况下温育1:300稀释(对应于3x105CFU/ml)的接种物。在O/N培养后，在分光光度计(Victor 3-Perkin Elmer)中在600nm处测量每种培养物的OD(OD600)。MIC表示不存在可见的细菌生长时，即600nm处的ΔOD等于零(空白是单独的培养基)时的浓度。当以高达200μM的浓度使用分子时，没有发现针对MRSA(ATCC BAA-1556)、Xen29(Perkin Elmer-ATCC 12600或MRSE(ATCC 35984)菌株的抗菌活性。
实施例2：2-丁氧基-9-(3-氯-2,6-二氟苄基)-N-(吡啶-3-基甲基)-9H-嘌呤-6-胺(37z”)。
Figure BDA0002504052250001181
根据与本发明所述类似的化学途径来合成37z”(WO2009/034386中的分子81)，不同之处在于Xb上的氯原子的亲核取代通过另一种胺R9-NH2(本实施例中的3-(氨基甲基)吡啶)进行。
6-氯-N4-(3-氯-2,6-二氟苄基)-2-(甲硫基)嘧啶-4,5-二胺(37a)
Figure BDA0002504052250001182
将4,6-二氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-胺(22h)(0.5g，2.4mmol)溶解于甲醇(10mL)中，并且补充3-氯-2,6-二氟苄胺(0.78mL，6.0mmol)。将反应混合物引入密封容器中并且在130℃加热2小时。将反应混合物在真空下浓缩至干燥后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：96％。
熔点：207-212℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ2.36(s,3H,SCH3),4.65(d,J＝5.0Hz,2H,NHCH2),4.85(s,2H,NH2),7.19(td,J＝9.0Hz/1.1Hz,1H,5’-H),7.38(t,J＝5.1Hz,1H,NH),7.62(td,J＝8.7Hz/5.7Hz,1H,4’-H)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.4(SCH3),33.4(NHCH2),112.6(C-5’),115.4(C-3’),116.1(C-1’),120.2(C-5),129.9(C-4’),137.7(C-6),151.8(C-4),155.5(C-2),155.5-156.9(C-6’),159.0-160.4(C-2’)。
6-氯-9-(3-氯-2,6-二氟苄基)-2-(甲硫基)-9H-嘌呤(37b)
Figure BDA0002504052250001191
将(37a)(351.0mg，1mmol)在乙酸(3.0mL)和原甲酸三乙酯(3.0mL，18mmol)中的溶液在130℃的温度下在回流下加热4小时。将乙酸和原甲酸三乙酯在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：68％。
熔点：167-169.5℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ2.51(s,3H,SCH3),5.57(s,2H,NCH2),7.23(td,J＝9.0Hz/1.1Hz,1H,5’-H),7.69(td,J＝8.8Hz/5.8Hz,1H,4’-H),8.67(s,1H,8-H)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.8(SCH3),36.1(NCH2),112.9(C-5’),113.0(C-1’),115.6(C-3’),127.6(C-5),131.3(C-4’),149.1(C-4),152.5(C-6),155.4-156.8(C-6’),158.8-160.2(C-2’),164.8(C-2)。
9-(3-氯-2,6-二氟苄基)-2-(甲硫基)-N-(吡啶-3-基甲基)-9H-嘌呤-6-胺(37z)
Figure BDA0002504052250001192
向(37b)(180.0mg，0.5mmol)在乙腈(3mL)中的溶液中补充3-(氨基甲基)吡啶(0.10mL，1.0mmol)和三乙胺(0.10mL)，然后在90℃在回流下加热5小时。将乙腈和三乙胺在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：92％。
熔点：149-151℃。
1H NMR(CDCl3)δ2.54(s,3H,SCH3),4.84(bs,2H,NHCH2),5.39(s,2H,NCH2),6.17(bs,1H,NHCH2),6.91(t,J＝8.8Hz,1H,5”-H),7.23(dd,J＝7.7Hz/4.8Hz,1H,5’-H),7.39(td,J＝8.6Hz/5.8Hz,1H,4”-H),7.70(m,2H,8-H/6’-H),8.51(dd,J＝4.7Hz/1.3Hz,1H,4’-H),8.62(d,J＝1.6Hz,1H,2’-H)。
13C NMR(CDCl3)δ14.5(SCH3),35.3(NCH2),42.1(NHCH2),112.4(C-5”),113.3(C-1”),117.3(C-3”/C-5),123.6(C-5’),131.3(C-4”),134.4(C-1’),135.7(C-6/C-6’),138.8(C-8),149.0(C-4’),149.5(C-2’),153.9(C-4),156.2-157.7(C-6”),159.1-160.6(C-2”),166.4(C-2)。
9-(3-氯-2,6-二氟苄基)-2-(甲磺酰基)-N-(吡啶-3-基甲基)-9H-嘌呤-6-胺(37z’)
Figure BDA0002504052250001201
将(37z)(250.0mg，0.58mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液在冰浴上冷却至5℃，并且补充3-氯过苯甲酸(225.0mg，1.30mmol)。在室温搅拌2小时后，将混合物用0.1M NaOH溶液(2x 10mL)洗涤。将有机层干燥，过滤，并且将二氯甲烷在真空下蒸发至干燥。将残余物在不进行进一步纯化的情况下用于下一个步骤(37z”)。
收率：72％。
2-丁氧基-9-(3-氯-2,6-二氟苄基)-N-(吡啶-3-基甲基)-9H-嘌呤-6-胺(37z”)
Figure BDA0002504052250001211
在冰浴上将金属钠(46.0mg，2mmol)溶解于丁-1-醇(3mL)中，并且加入(37z’)(150.0mg，0.32mmol)。在室温搅拌3小时后，将混合物在水(50mL)和二氯甲烷(2x 50mL)之间分配。将合并的有机层干燥，并且在真空下蒸发至干燥。将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：78％。
熔点：143-145℃
化合物37z”的一致性和纯度通过NMR光谱和元素分析证实，并且报告如下：
1H NMR(CDCl3)δ0.97(t,J＝7.4Hz,3H,OCH2CH2CH2CH3),1.49(h,J＝7.4Hz,2H,OCH2CH2CH2CH3),1.78(p,J＝7.3Hz,2H,OCH2CH2CH2CH3),4.34(t,J＝6.8Hz,2H,OCH2CH2CH2CH3),4.85(bs,2H,NHCH2),5.36(s,2H,NCH2),5.75(bs,1H,NHCH2),6.92(td,J＝8.9Hz/1.5Hz,1H,5”-H),7.24(dd,J＝7.8Hz/4.8Hz,1H,5’-H),7.39(td,J＝8.6Hz/5.7Hz,1H,4”-H),7.63(s,1H,8-H),7.69(d,J＝7.9Hz,1H,6’-H),8.52(dd,J＝4.8Hz/1.4Hz,1H,4’-H),8.62(d,J＝1.8Hz,1H,2’-H)。
13C NMR(CDCl3)δ14.1(OCH2CH2CH2CH3),19.4(OCH2CH2CH2CH3),31.2(OCH2CH2CH2CH3),35.1(NCH2),42.1(NHCH2),67.5(OCH2CH2CH2CH3),112.4(C-5”),113.4(C-1”),117.3(C-3”/C-5),123.6(C-5’),131.3(C-4”),134.3(C-1’),135.6(C-6/C-6’),138.4(C-8),149.1(C-4’),149.5(C-2’),151.5(C-4),155.5(C-6),156.2-157.7(C-6”),159.2-160.6(C-2”),162.5(C-2)。
分析(C22H21ClF2N6O)理论值：C,57.58；H,4.61；N,18.31。实测值：C,57.19；H,4.68；N,18.07。
通过根据EUCAST建议的方案测定分子37z”的最终最低抑菌浓度，已经测试了所述分子的潜在抗菌活性，以评价抗生素对细菌菌株的功效。简言之，通过将MRSA或Xen29的单个菌落在有氧条件下(37℃，220rpm振荡)在脑心浸液(BHI)肉汤中培养过夜(O/N)，测定37z”(WO2009/034386中的分子81)在MRSA(ATCC BAA-1556)或Xen29(Perkin Elmer-ATCC12600)中的MIC，同时通过将MRSE在TSB中培养过夜(O/N)来测定对于MRSE(ATCC 35984)的MIC。第二天将Mueller-Hinton肉汤(MHB)中的1:100接种物在有氧条件下温育3小时(OD＝0,08-0,1)，并且在1％DMSO中在存在或不存在不同浓度测试分子的情况下温育1:300稀释(对应于3x105CFU/ml)的接种物。在O/N培养后，在分光光度计(Victor 3-Perkin Elmer)中在600nm处测量每种培养物的OD(OD600)。MIC表示不存在可见的细菌生长时，即600nm处的ΔOD等于零(空白是单独的培养基)时的浓度。当以高达200μM的浓度使用分子时，没有发现针对MRSA(ATCC BAA-1556)、Xen29(Perkin Elmer-ATCC 12600)或MRSE(ATCC 35984)菌株的抗菌活性。
实施例3：2-丁氧基-N-环丙基-9-(2,6-二氟-3-甲基苄基)-9H-嘌呤-6-胺(38z”)
Figure BDA0002504052250001221
我们已经合成了38z”(WO2009/034386中的分子129)，其带有与杂环的6位处所连接的氮原子相连的环丙基环。该化合物的化学结构与本申请所述的化合物的化学结构最紧密相关。
6-氯-N4-(2,6-二氟-3-甲基苄基)-2-(甲硫基)嘧啶-4,5-二胺(38a)
Figure BDA0002504052250001222
将4,6-二氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-胺(22h)(0.5g，2.4mmol)溶解于甲醇(10mL)中，并且补充2,6-二氟-3-甲基苄胺(0.80mL，6.0mmol)。将反应混合物引入密封容器中并且在130℃加热2小时。将反应混合物在真空下浓缩至干燥后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：95％。
熔点：190-192℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ2.21(s,3H,CH3),2.38(s,3H,SCH3),4.61(d,J＝4.8Hz,2H,NHCH2),4.85(s,2H,NH2),7.01(t,J＝8.8Hz,1H,5’-H),7.27(m,2H,NHCH2/4’-H)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.4(SCH3),13.8(CH3),33.1(NHCH2),110.8(C-5’),113.4(C-1’),120.1(C-5),120.2(C-3’),130.8(C-4’),137.5(C-6),151.8(C-4),155.5(C-2),158.5-159.9(C-2’/C-6’)。
6-氯-9-(2,6-二氟-3-甲基苄基)-2-(甲硫基)-9H-嘌呤(38b)
Figure BDA0002504052250001231
将(38a)(331.0mg，1mmol)在乙酸(3.0mL)和原甲酸三乙酯(3.0mL，18mmol)中的溶液在130℃的温度下在回流下加热3小时。将乙酸和原甲酸三乙酯在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：66％。
熔点：124-126℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ2.19(s,3H,CH3),2.52(s,3H,SCH3),5.52(s,2H,NCH2),7.05(t,J＝8.9Hz,1H,5’-H),7.34(q,J＝8.4Hz,1H,4’-H),8.63(s,1H,8-H)。
13C NMR(DMSO-d6)δ13.6(CH3),13.8(SCH3),35.9(NCH2),110.6(C-1’),111.1(m,C-5’),120.6(C-3’),127.6(C-5),132.2(C-4’),149.0(C-4),152.5(C-6),158.3-159.7(C-2’/C-6’),164.7(C-2)。
N-环丙基-9-(2,6-二氟-3-甲基苄基)-2-(甲硫基)-9H-嘌呤-6-胺(38z)
Figure BDA0002504052250001241
向(38b)(170.0mg，0.5mmol)在乙腈(3mL)中的溶液中补充环丙胺(0.07mL，1.0mmol)和三乙胺(0.10mL)，然后在90℃在回流下加热5小时。将乙腈和三乙胺在真空下蒸馏后，将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：86％。
熔点：150-152℃。
1H NMR(CDCl3)δ0.60(m,2H,CH(CH2)2),0.86(m,2H,CH(CH2)2),2.23(s,3H,CH3),2.60(s,3H,SCH3),3.06(bs,1H,CH(CH2)2),5.36(s,2H,NCH2),5.77(bs,1H,NH),6.83(t,J＝8.3Hz,1H,5’-H),7.14(q,J＝8.3Hz,1H,4’-H),7.66(s,1H,8-H)。
13C NMR(CDCl3)δ7.6(CH(CH2)2),14.3(CH3),14.6(SCH3),24.4(CH(CH2)2),35.1(NCH2),111.1(C-5’),111.2(C-1’),117.1(C-5),121.1(C-3’),132.0(C-4’),138.8(C-8),155.2(C-4),159.0-160.4(C-2’/C-6’),166.0(C-2)。
N-环丙基-9-(2,6-二氟-3-甲基苄基)-2-(甲磺酰基)-9H-嘌呤-6-胺(38z’)
Figure BDA0002504052250001242
将(38z)(195.0mg，0.54mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液在冰浴上冷却至5℃，并且补充3-氯过苯甲酸(208.0mg，1.20mmol)。在室温搅拌2小时后，将混合物用0.1M NaOH溶液(2x 10mL)洗涤。将有机层干燥，过滤，并且将二氯甲烷在真空下蒸发至干燥。将残余物在不进行进一步纯化的情况下用于下一个步骤(38z”)。
收率：69％。
2-丁氧基-N-环丙基-9-(2,6-二氟-3-甲基苄基)-9H-嘌呤-6-胺(38z”)
Figure BDA0002504052250001251
在冰浴上将金属钠(46.0mg，2mmol)溶解于丁-1-醇(3mL)中，并且加入(37z’)(150.0mg，0.38mmol)。在室温搅拌3小时后，将混合物在水(50mL)和二氯甲烷(2x 50mL)之间分配。将合并的有机层干燥，并且在真空下蒸发至干燥。将残余物通过硅胶柱层析纯化。
收率：75％。
熔点：123-125℃。
化合物38z”的一致性和纯度通过NMR光谱和元素分析证实，并且报告如下：
1H NMR(CDCl3)δ0.60(m,2H,CH(CH2)2),0.86(m,2H,CH(CH2)2),0.98(t,J＝7.4Hz,3H,OCH2CH2CH2CH3),1.50(h,J＝7.4Hz,2H,OCH2CH2CH2CH3),1.81(p,J＝7.0Hz,2H,OCH2CH2CH2CH3),2.23(s,3H,CH3),3.06(bs,1H,CH(CH2)2),4.38(t,J＝6.9Hz,2H,OCH2CH2CH2CH3),5.32(s,2H,NCH2),5.75(bs,1H,NH),6.83(td,J＝8.7Hz/1.1Hz,1H,5’-H),7.14(q,J＝8.3Hz,1H,4’-H),7.59(s,1H,8-H)。
13C NMR(CDCl3)δ7.6(CH(CH2)2),14.1(OCH2CH2CH2CH3),14.3(CH3),19.4(OCH2CH2CH2CH3),24.2(CH(CH2)2),31.2(OCH2CH2CH2CH3),34.8(NCH2),67.2(OCH2CH2CH2CH3),111.0(C-5’),111.3(C-1’),115.8(C-5),121.2(C-3’),132.0(C-4’),138.4(C-8),156.8(C-4),158.7-160.6(C-2’/C-6’),160.7(C-2)。
分子(C20H23F2N5O)理论值：C,62.00；H,5.98；N,18.08。实测值：C,61.97；H,6.07；N,18.03。
通过根据EUCAST建议的方案测定分子38z”(WO2009/034386中的分子129)的最终最低抑菌浓度，已经测试了所述分子的潜在抗菌活性，以评价抗生素对细菌菌株的功效。简言之，通过将MRSA或Xen29的单个菌落在有氧条件下(37℃，220rpm振荡)在脑心浸液(BHI)肉汤中培养过夜(O/N)，测定38z”(WO2009/034386中的分子129)在MRSA(ATCC BAA-1556)或Xen29(Perkin Elmer-ATCC 12600)中的MIC，同时通过将MRSE在TSB中培养过夜(O/N)来测定对于MRSE(ATCC 35984)的MIC。第二天将Mueller-Hinton肉汤(MHB)中的1:100接种物在有氧条件下温育3小时(OD＝0,08-0,1)，并且在1％DMSO中在存在或不存在不同浓度测试分子的情况下温育1:300稀释(对应于3x105CFU/ml)的接种物。在O/N培养后，在分光光度计(Victor 3-Perkin Elmer)中在600nm处测量每种培养物的OD(OD600)。MIC表示不存在可见的细菌生长时，即600nm处的ΔOD等于零(空白是单独的培养基)时的浓度。当以高达200μM的浓度使用分子时，没有发现针对MRSA、Xen29和MRSE菌株的抗菌活性。

Claims (40)

1.由式(I)表示的嘧啶衍生物
Figure FDA0002504052240000011
或其异构体、外消旋混合物、药用酸加成盐、药用金属盐或烷基化铵盐或其前药；
其中：
X1和X2独立地是N、CH、CR8，其中R8是C1-6烷基、C2-6烯基或C2-6炔基；但是如果X1或X2中的一者等于N，则剩余的X1或X2选自CH、CR8；
-Y-是-O-或-S-；
R1和R2独立地是C1-6-烷基、C2-6-烯基、C2-6-炔基、C3-6-环烷基、芳基、芳基-C1-6-烷基，其中烷基或环烷基部分任选地被OH或卤素单取代或多取代，并且芳基部分任选地被卤素、-C1-6烷基、-C1-6烷氧基、-OH、-NO2、-CN、-NH2、-NHR8、-N(R8)2-COOH、-COOR8、-CONH2、-CONHR8、-CON(R8)2、-SO2NH2、-SO2NHR8或-SO2N(R8)2单取代或多取代；
R3、R4、R5、R6和R7独立地是H、卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、-OH、-NO2、-CN、-NH2、-NHR8、-N(R8)2-COOH、-COOR8、-CONH2、-CONHR8、-CON(R8)2、-SO2NH2、-SO2NHR8或-SO2N(R8)2。
2.根据权利要求1所述的嘧啶衍生物，其包含至少一个可检测同位素。
3.根据权利要求2所述的嘧啶衍生物，其中所述可检测同位素选自3H、18F、19F、11C、13C、14C、75Br、76Br、120I、123I、125I、131I、15O和13N。
4.根据权利要求1至4中任一项所述的嘧啶衍生物，其中R3和R7是氢，并且R4和R5独立地是卤素。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的嘧啶衍生物，其中X1是CH或CR8，并且X2是N。
6.根据权利要求5所述的嘧啶衍生物，其包含由式(V)表示的N-(2-苯基环丙基)-9H-嘌呤-6-胺
Figure FDA0002504052240000021
7.根据权利要求5或6中任一项所述的嘧啶衍生物，其选自：
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-甲基-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(1c)；
9-甲基-N-((1R,2S)-2-苯基环丙基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(2c)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-乙基-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(3c)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-丙基-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(4c)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-异丙基-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(5c)；
9-环丙基-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(6c)；
9-丁基-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(7c)；
9-(仲丁基)-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(8c)；
9-(叔丁基)-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(9c)；
9-环丁基-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(10c)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-戊基-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(11c)；
9-环戊基-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(12c)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-己基-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(13c)；
9-环己基-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(14c)；
9-烯丙基-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(15c)；
2-(6-(((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)氨基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-9-基)乙醇(16c)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-(丙-2-炔-1-基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(17c)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(丙硫基)-9-(2,2,2-三氟乙基)-9H-嘌呤-6-胺(18c)；
(1S,2R,3S,4R)-4-(6-(((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)氨基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-9-基)环戊烷-1,2,3-三醇(19d)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(乙硫基)-9-甲基-9H-嘌呤-6-胺(20c)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-乙基-2-(乙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(21c)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-甲基-2-(甲硫基)-9H-嘌呤-6-胺(22c)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-甲基-2-丙氧基-9H-嘌呤-6-胺盐酸盐(23t.HCl)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-乙基-2-(甲硫基)-9H-嘌呤-6-胺(24c)；
2-(丁硫基)-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-甲基-9H-嘌呤-6-胺(25c)；
2-(丁硫基)-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-乙基-9H-嘌呤-6-胺(26c)；
或其异构体、外消旋混合物、药用酸加成盐、药用金属盐或烷基化铵盐或其前药。
8.根据权利要求5至7中任一项所述的嘧啶衍生物，其选自：
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-甲基-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(1c)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-乙基-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(3c)；
9-烯丙基-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(15c)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-(丙-2-炔-1-基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(17c)；
(1S,2R,3S,4R)-4-(6-(((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)氨基)-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-9-基)环戊烷-1,2,3-三醇(19d)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-甲基-2-(甲硫基)-9H-嘌呤-6-胺(22c)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-乙基-2-(甲硫基)-9H-嘌呤-6-胺(24c)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-2-(乙硫基)-9-甲基-9H-嘌呤-6-胺(20c)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-乙基-2-(乙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(21c)；
2-(丁硫基)-N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-甲基-9H-嘌呤-6-胺(25c)；
或其异构体、外消旋混合物、药用酸加成盐、药用金属盐或烷基化铵盐或其前药。
9.根据权利要求5至8中任一项所述的嘧啶衍生物，其是N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-9-甲基-2-(丙硫基)-9H-嘌呤-6-胺(1c)。
10.根据权利要求1至4中任一项所述的嘧啶衍生物，其中X1是N，并且X2是CH或CR8。
11.根据权利要求10所述的嘧啶衍生物，其选自：
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-1-甲基-6-(甲硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(27k)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-6-(乙硫基)-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(28x.HCl)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-6-(丙硫基)-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(29x.HCl)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-1-乙基-6-(甲硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(30k)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-1-乙基-6-(乙硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(31x.HCl)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-1-乙基-6-(丙硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(32x.HCl)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-1-异丙基-6-(甲硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(33k.HCl)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-6-(甲硫基)-1-丙基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(34k.HCl)；
或其异构体、外消旋混合物、药用酸加成盐、药用金属盐或烷基化铵盐或其前药。
12.根据权利要求10或11中任一项所述的嘧啶衍生物，其选自：
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-1-甲基-6-(甲硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(27k)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-1-乙基-6-(甲硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(30k)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-6-(乙硫基)-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(28x.HCl)；
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-1-异丙基-6-(甲硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(33k.HCl)；
或其异构体、外消旋混合物、药用酸加成盐、药用金属盐或烷基化铵盐或其前药。
13.根据权利要求1至4中任一项所述的嘧啶衍生物，其中X1和X2是CH或CR8。
14.根据权利要求13所述的嘧啶衍生物，其是：
N-((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基)-7-乙基-2-(甲硫基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(35p.HCl)；
或其异构体、外消旋混合物、药用酸加成盐、药用金属盐或烷基化铵盐或其前药。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的嘧啶衍生物，其中R3和R7是H，并且R4、R5是氟。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的嘧啶衍生物，其用于治疗。
17.根据权利要求1至16中任一项所述的嘧啶衍生物，其用于治疗或预防需要这样的治疗或预防的宿主哺乳动物中的细菌感染。
18.一种药物组合物，所述药物组合物包含与药用稀释剂、辅剂和/或载体组合的根据权利要求1至15中任一项所述的嘧啶衍生物。
19.根据权利要求18所述的包含嘧啶衍生物的药物组合物，其用于治疗或预防需要这样的治疗或预防的宿主哺乳动物中的细菌感染，优选地用于由革兰氏阳性细菌引起的细菌感染。
20.根据权利要求1至15中任一项所述的嘧啶衍生物，其用于预防宿主哺乳动物中的细菌感染的方法，其中所述方法包括在将生物材料植入物植入所述宿主哺乳动物之前将所述嘧啶衍生物施用至所述植入物的表面上。
21.根据权利要求1至15中任一项所述的嘧啶衍生物离体作为医疗装置的表面上的生物膜形成的抑制剂的用途，优选地用于预防或治疗革兰氏阳性细菌引起的细菌污染。
22.一种用于生物膜形成中杀菌或预防细菌生长的方法，所述方法包括将有效量的根据权利要求1至15中任一项所述的嘧啶衍生物施用在医疗装置的表面上。
23.根据权利要求22所述的方法，其中所述医疗装置是心血管装置，优选人工心脏瓣膜。
24.根据权利要求22所述的方法，其中所述医疗装置是心血管装置，优选起搏器。
25.一种制备根据权利要求6至9中任一项所述的式(I)的嘧啶衍生物的方法，其中X1是CH或CR8，X2是N；所述方法包括以下步骤：
Figure FDA0002504052240000071
1)制备2-取代的4,6-二卤代嘧啶-5-胺(Xh)作为起始产物；
2)将所述2-取代的4,6-卤代嘧啶-5-胺(Xh)与R2NH2反应以获得中间体(Xa)，其中R2是如式(I)所限定的；
3)将所述中间体(Xa)与原甲酸三烷基酯在酸的存在下在加热下反应以获得中间体2,9-二取代的6-卤代-9H-嘌呤(Xb)；
4)在加热下用(R3-R7)-取代的苯基环丙胺取代中间体(Xb)的卤素原子以获得其中Y是S(Xc)的式(I)的嘧啶衍生物；
以及任选地形成其药用盐或前药。
26.根据权利要求25所述的方法，其中所述起始产物(Xh)通过以下方式获得：
Figure FDA0002504052240000072
Figure FDA0002504052240000081
1)在加热下将硫代巴比妥酸与R1-卤化物反应以获得2-取代的嘧啶-4,6-二醇(Xe)；
2)在冷却下将2-取代的嘧啶-4,6-二醇(Xe)与硝酸反应以获得中间体(Xf)，随后在有机碱的存在下进行亲核取代，以提供2-取代的4,6-二卤代-5-硝基嘧啶(Xg)；
3)将所述2-取代的4,6-二卤代-5-硝基嘧啶(Xg)还原为相应的2-取代的4,6-二卤代嘧啶-5-胺(Xh)。
27.根据权利要求25所述的方法，所述方法还包括以下反应：将Xc的硫醚基团，其中Y是S；转化为相应的醚官能团(Y＝O)，以获得其中Y是O(Xt)的式(I)的嘧啶衍生物；
Figure FDA0002504052240000082
以及任选地形成其药用盐或前药。
28.根据权利要求26所述的方法，所述方法还包括：包括以下的转化反应：
Figure FDA0002504052240000083
1)用过酸氧化(Xc)的硫醚官能团以提供中间体(Xq)中的甲磺酰基基团的第一步反应，以及
2)将所述中间体(Xq)与烷基硫醇进行亲核取代以提供其中Y是S并且R1不是甲基的式(I)的嘧啶衍生物(Xw)的进一步反应。
29.一种制备根据权利要求10至12中任一项所述的式(I)的嘧啶衍生物的方法，其中X1是N并且X2是CH或CR8；所述方法包括以下步骤：
Figure FDA0002504052240000091
1)在加热下将硫代巴比妥酸与R1-卤化物反应以获得2-取代的嘧啶-4,6-二醇(Xe)；
2)在DMF的存在下将所述2-取代的嘧啶4,6-二醇(Xe)与磷酰卤反应以获得相应的2-取代的4,6-二卤代嘧啶-5-甲醛(Xi)；
3)在冷却下将所述2-取代的4,6-二卤代嘧啶-5-甲醛(Xi)与未取代的肼反应以提供非烷基化的1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶(Xi’)，随后用R2-卤化物烷基化以提供中间体(Xj)，并且与R3-R7-取代的苯基环丙胺进行亲核取代以提供(Xk)；
以及任选地形成其药用盐或前药。
30.根据权利要求29所述的方法，所述方法还包括以下反应：
将Xk的硫醚基团(Y＝S)转化为相应的醚官能团(Y＝O)以获得其中Y是O(Xu)的式(I)的嘧啶衍生物；
Figure FDA0002504052240000092
以及任选地形成其药用盐或前药。
31.根据权利要求29所述的制备方法，所述方法还包括：包括以下的转化反应：
Figure FDA0002504052240000101
用过酸氧化(Xk)的硫醚官能团以提供中间体(Xr)中的甲磺酰基基团的第一步反应，以及与烷基硫醇进行亲核取代以提供其中Y是S并且R1不是甲基的式(I)的嘧啶衍生物(Xx)的进一步反应；
以及任选地形成其药用盐或前药。
32.一种制备根据权利要求13或14所述的式(I)的嘧啶衍生物的方法，其中X1和X2是CH或CR8；所述方法包括以下步骤：
Figure FDA0002504052240000102
1)在加热下在碱性介质中将6-氨基-4-羟基嘧啶-2-硫醇与R1-卤化物反应以提供2-取代的6-氨基嘧啶-4-醇(Xl)；
2)在加热下用卤代乙醛转化所述2-取代的6-氨基嘧啶-4-醇(Xl)以提供2-取代的7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-醇(Xm)；
3)在加热下将(Xm)与磷酰卤反应以提供2-取代的4-卤代-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(Xn)
4)用(R3-R7)-取代的苯基环丙胺取代(Xn)的卤素原子以提供Xo’，随后在碱性介质中与R2-卤化物进行烷基化以提供(Xp)；
以及任选地形成其药用盐或前药。
33.根据权利要求32所述的方法，所述方法还包括以下反应：
将(Xp)的硫醚基团，其中Y是S；转化为相应的醚官能团(Y＝O)，以获得其中Y是O的式(I)的嘧啶衍生物(Xv)；
Figure FDA0002504052240000111
以及任选地形成其药用盐或前药。
34.根据权利要求32所述的方法，所述方法还包括：包括以下的转化反应：
Figure FDA0002504052240000112
用过酸氧化(Xp)的硫醚官能团以提供中间体(Xs)中的甲磺酰基基团的第一步反应，以及与烷基硫醇进行亲核取代以提供其中Y是S并且R1不是甲基的式(I)的嘧啶衍生物(Xy)的进一步反应；
以及任选地形成其药用盐或前药。
35.根据权利要求1至15中任一项所述的嘧啶衍生物，其包含用于诊断或预后细菌感染的标记物。
36.根据权利要求35所述的嘧啶衍生物，其包含选自3H、18F、19F、11C、13C、14C和123I的至少一个可检测同位素。
37.根据权利要求35所述的嘧啶衍生物，其包含选自18F和11C的至少一个可检测同位素。
38.根据权利要求35所述的嘧啶衍生物，其包含一个可检测同位素18F。
39.根据权利要求17、20、35至38中任一项所述的嘧啶衍生物，其中所述细菌感染或污染由革兰氏阳性细菌引起。
40.根据权利要求39所述的嘧啶衍生物，其中所述细菌感染或污染由以下中的一种或多种引起：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant S.aureus，MRSA)、耐甲氧西林表皮葡萄球菌(methicillin-resistant S.epidermidis，MRSE)、糖肽中等耐药性金黄色葡萄球菌(glycopeptide intermediate S.aureus，GISA)、凝固酶阴性葡萄球菌(Coagulase-negative staphylococci，CoNS)、耐万古霉素肠球菌(Vancomycin-resistantenterococci，VRE)、β-溶血性无乳链球菌(beta-hemolytic Streptococcus agalactiae)(B组链球菌，GBS)。
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