CN111358702B - 一种长效抗皱皮肤营养液及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生物化工及化妆品领域，公开了一种长效抗皱皮肤营养液及其制备方法。本发明提供的制备方法包括：制备虫草多糖/六胜肽/唾液酸复合脂质体；制备维生素E脂质体；制备熊果苷脂质体；制备由益母草、藏红花、白芍和紫草得到的中药提取物；将虫草多糖/六胜肽/唾液酸复合脂质体、维生素E脂质体、熊果苷脂质体和中药提取物混合，搅拌均匀后依次加入透明质酸、尿囊素、甘油和卡波姆941，持续搅拌，调节pH值至7.2‑7.4，加入水制得半成品；将半成品进行消毒、灌装、封口，制得长效抗皱皮肤营养液。本发明制备方法得到的长效抗皱皮肤营养液具有长效抗皱祛皱并给予皮肤营养的优点。
Description
技术领域
本发明涉及生物化工及化妆品领域，具体涉及一种长效抗皱皮肤营养液及其制备方法。
背景技术
皮肤是人体最大的器官，是人体抵御外界侵害的第一道防线，具有许多重要的作用。与身体其他器官不同，皮肤直接与外界环境接触，因此，皮肤的衰老同时受到自身和紫外线、雾霾等环境因素的影响。随着生活条件的提高和科学技术的进步，人们对于可以延缓皮肤衰老的护肤品的需求也越来越高。目前，市场上的护肤品多数从补水保湿、抗氧化和阻隔紫外线等方面保护皮肤，达到保湿、防皱、抗衰老和抗紫外的目的。当各种损伤不能修复时，人的皮肤就会出现光老化的表现，如干燥、弹性下降、皱纹、色素沉着斑和毛细血管扩张。研究发现皮肤老化的状况受人种、地域、气候环境、生活习惯及护理方式的影响有很大不同，正确的皮肤护理可以最大程度地减少皮肤的损伤，延缓皮肤的衰老，减少皱纹的产生。因此，开发一种能够长效抗皱的皮肤营养液用于皮肤护理，具有很高的市场价值。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种长效抗皱皮肤营养液及其制备方法，该制备方法利用脂质体包埋技术和蛋白酶抑制技术，获得了具有显著长期抗皱作用的皮肤营养液。
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种长效抗皱皮肤营养液的制备方法，包括如下步骤：
S1.虫草多糖/六胜肽/唾液酸复合脂质体的制备：取蛋黄卵磷脂、胆固醇溶于氯仿，减压旋蒸形成薄膜，加入含有虫草多糖、六胜肽、唾液酸、亮肽素的水溶液，50-55℃旋转水化1h后，采用100nm粒径脂质体挤出器挤出制得虫草多糖/六胜肽/唾液酸复合脂质体；
S2.维生素E脂质体的制备：取蛋黄卵磷脂、胆固醇和维生素E，用无水乙醇溶解，以0.5-1mL/min速率注射到50-55℃水中，同时以30-50r/min的速度进行磁力搅拌，注射结束后继续搅拌1h，再减压室温旋蒸除去乙醇，采用100nm粒径脂质体挤出器挤出制得维生素E脂质体；
S3.熊果苷脂质体的制备：取蛋黄卵磷脂、胆固醇溶于氯仿，减压旋蒸形成薄膜，加入浓度为10-15g/L的熊果苷水溶液，50-55℃旋转水化1h后，采用100nm粒径脂质体挤出器挤出制得熊果苷脂质体；
S4. 中药提取物的制备：将益母草、藏红花、白芍和紫草分别经过筛选、清洗、干燥后混合，得到中药混合物，将所述中药混合物粉碎后加水浸提24-36h，抽提2次后合并，得到抽提液，将所述抽提液减压浓缩至所述抽提液体积的1/8-1/5，得到中药提取物；
S5.将所述虫草多糖/六胜肽/唾液酸复合脂质体、所述维生素E脂质体、所述熊果苷脂质体和所述中药提取物混合，搅拌均匀后依次加入透明质酸、尿囊素、甘油和卡波姆941，持续搅拌，用三乙醇胺调节pH值至7.2-7.4，加入水制得半成品；
S6.将所述半成品进行消毒、灌装、封口，制得长效抗皱皮肤营养液。
优选的，步骤S1中，所述蛋黄卵磷脂、胆固醇和氯仿的用量比为750-1200mg:250-400mg:100mL。
优选的，步骤S1中，所述水溶液中，虫草多糖的浓度为5-12g/L，六胜肽的浓度为120-360mg/L、唾液酸的浓度为10-20g/L、亮肽素的浓度为50-90mg/L。
优选的，步骤S2中，所述蛋黄卵磷脂、胆固醇、维生素E、无水乙醇和水的用量比为1.5-3g:0.5-1g:8-10mL:50mL:200-400mL。
优选的，步骤S3中，所述蛋黄卵磷脂、胆固醇和氯仿的用量比为750-1200mg:250-400mg:100mL。
优选的，步骤S4中，所述益母草、藏红花、白芍、紫草和水的用量比为50-100g:5-10g:50-100g:50-100g:1000mL。
优选的，步骤S5中，所述虫草多糖/六胜肽/唾液酸复合脂质体、维生素E脂质体、熊果苷脂质体、植物水提取物、透明质酸、尿囊素、甘油、卡波姆941和水的用量比例为50-100mL:50-100mL:50-100mL:30-60mL:0.5-5g:3-6g:30-100mL:0.5-2g:1000mL。
本发明还提供了一种上述制备方法制备得到的长效抗皱皮肤营养液。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明利用脂质体技术分别将极性化合物唾液酸、六胜肽、亮肽素和熊果苷以及大分子化合物虫草多糖、疏水化合物维生素E包载在类脂囊泡中，能够大大增加皮肤的摄入量，达到更好抗皱祛皱和营养皮肤的效果。其中添加的虫草多糖主要是通过活化免疫因子和细胞，促进细胞因子生成等途径对免疫系统发挥双向调节作用，能够调节皮肤的免疫力；添加的六胜肽能够抑制肌肤的儿茶酚胺和乙酰胆碱过度释放，局部阻断神经传递肌肉收缩讯息，影响皮囊神经传导，使脸部肌肉放松，达到平抚动态纹、静态纹以及细纹的目的，最终防止皮肤产生皱纹，它不同于A型肉毒素的麻醉机理，允许肌肉自然的运动和表达，因此不产生其它副作用。另外，亮肽素可抑制丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、组织蛋酶B、血纤维蛋白溶酶、激肽释放酶等蛋白酶的活性，进而能够有效抑制蛋白酶对六胜肽的水解，实现六胜肽的长效作用。通过不同成分之间的协同作用，制备得到的皮肤营养液具有长效显著的抗皱效果。
具体实施方式
根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
本发明所有原料，对其来源没有特别限制，在市场上购买的或按照本领域技术人员熟知的常规方法制备的即可。
实施例1
（1）取1000mg蛋黄卵磷脂、320mg胆固醇溶于100mL氯仿，减压旋蒸形成薄膜，加入100mL含有0.8g虫草多糖、24mg六胜肽、1.5g唾液酸、7mg亮肽素的水溶液，52℃旋转水化1h后，采用100nm粒径脂质体挤出器挤出制得虫草多糖/六胜肽/唾液酸复合脂质体；
（2）取2.2g蛋黄卵磷脂、0.7g胆固醇和9mL维生素E溶于50mL无水乙醇，以0.8mL/min速率注入到300mL 53℃水中，同时以40r/min的速度进行磁力搅拌，注射结束后继续搅拌1h，再减压室温旋蒸除去乙醇，采用100nm粒径脂质体挤出器挤出制得维生素E脂质体；
（3）取1000mg蛋黄卵磷脂、300mg胆固醇溶于100mL氯仿，减压旋蒸形成薄膜，加入100mL浓度为12g/L的熊果苷水溶液，52℃旋转水化1h后，采用100nm粒径脂质体挤出器挤出制得熊果苷脂质体；
（4）将中药75g益母草、7g藏红花、75g白芍和75g紫草分别经过筛选、清洗、干燥后混合，得到中药混合物，将所述中药混合物粉碎后加1000mL水浸提30h，抽提2次，合并抽提液并减压浓缩至原液体积的1/6，得到中药提取物；
（5）将75mL步骤1制得的虫草多糖/六胜肽/唾液酸复合脂质体、75mL步骤2制得的维生素E脂质体、75mL步骤3制得的熊果苷脂质体、45mL步骤4制得的中药提取物混合，搅拌均匀后依次加入3g透明质酸、4.5g尿囊素、65mL甘油和1.2g卡波姆941，持续搅拌，用三乙醇胺调节pH值至7.3，加入1000mL的水制得半成品；
（6）将步骤5制得的半成品进行消毒、灌装、封口，制得长效抗皱皮肤营养液A。
实施例2
（1）取1200mg蛋黄卵磷脂、400mg胆固醇溶于100mL氯仿，减压旋蒸形成薄膜，加入100mL含有1.2g虫草多糖、36mg六胜肽、2g唾液酸、9mg亮肽素的水溶液，50℃旋转水化1h后，采用100nm粒径脂质体挤出器挤出制得虫草多糖/六胜肽/唾液酸复合脂质体；
（2）取3g蛋黄卵磷脂、1g胆固醇和10mL维生素E溶于50mL无水乙醇，以1mL/min速率注入到200mL 50℃水中，同时以50r/min的速度进行磁力搅拌，注射结束后继续搅拌1h，再减压室温旋蒸除去乙醇，采用100nm粒径脂质体挤出器挤出制得维生素E脂质体；
（3）取1200mg蛋黄卵磷脂、400mg胆固醇溶于100mL氯仿，减压旋蒸形成薄膜，加入100mL 浓度为15g/L的熊果苷水溶液，55℃旋转水化1h后，采用100nm粒径脂质体挤出器挤出制得熊果苷脂质体；
（4）将中药100g益母草、10g藏红花、100g白芍和100g紫草分别经过筛选、清洗、干燥后混合，得到中药混合物，将所述中药混合物粉碎后加1000mL水浸提36h，抽提2次，合并抽提液并减压浓缩至原液体积的1/5，得到中药提取物；
（5）将100mL步骤1制得的虫草多糖/六胜肽/唾液酸复合脂质体、100mL步骤2制得的维生素E脂质体、100mL步骤3制得的熊果苷脂质体、60mL步骤4制得的中药提取物混合，搅拌均匀后依次加入5g透明质酸、6g尿囊素、100mL甘油和2g卡波姆941，持续搅拌，用三乙醇胺调节pH值至7.2，加入1000mL的水制得半成品；
（6）将步骤5制得的半成品进行消毒、灌装、封口，制得长效抗皱皮肤营养液B。
实施例3
（1）取750mg蛋黄卵磷脂、250mg胆固醇溶于100mL氯仿，减压旋蒸形成薄膜，加入100mL含有0.5g虫草多糖、12mg六胜肽、1g唾液酸、5mg亮肽素的水溶液，55℃旋转水化1h后，采用100nm粒径脂质体挤出器挤出制得虫草多糖/六胜肽/唾液酸复合脂质体；
（2）取1.5g蛋黄卵磷脂、0.5g胆固醇和8mL维生素E溶于50mL无水乙醇，以0.5mL/min速率注入到400mL 55℃水中，同时以30r/min的速度进行磁力搅拌，注射结束后继续搅拌1h，再减压室温旋蒸除去乙醇，采用100nm粒径脂质体挤出器挤出制得维生素E脂质体；
（3）取750mg蛋黄卵磷脂、250mg胆固醇溶于100mL氯仿，减压旋蒸形成薄膜，加入100mL浓度为10g/L的熊果苷水溶液，50℃旋转水化1h后，采用100nm粒径脂质体挤出器挤出制得熊果苷脂质体；
（4）将中药50g益母草、5g藏红花、50g白芍、50g紫草分别经过筛选、清洗、干燥后混合，得到中药混合物，将中药混合物粉碎后加1000mL水浸提24h，抽提2次，合并抽提液液并减压浓缩至原液体积的1/8，得到中药提取物；
（5）将50mL步骤1制得的虫草多糖/六胜肽/唾液酸复合脂质体、50mL步骤2制得的维生素E脂质体、50mL步骤3制得的熊果苷脂质体、30mL步骤4制得的中药提取物混合，搅拌均匀后依次加入0.5g透明质酸、3g尿囊素、30mL甘油和0.5g卡波姆941，持续搅拌，用三乙醇胺调节pH值至7.4，加入1000mL的水制得半成品；
（6）将步骤5制得的半成品进行消毒、灌装、封口，制得长效抗皱皮肤营养液C。
对比例1（不加入亮肽素）
（1）取1000mg蛋黄卵磷脂、320mg胆固醇溶于100mL氯仿，减压旋蒸形成薄膜，加入100mL含有0.8g虫草多糖、24mg六胜肽、1.5g唾液酸的水溶液，52℃旋转水化1h后，采用100nm粒径脂质体挤出器挤出制得虫草多糖/六胜肽/唾液酸复合脂质体；
（2）取2.2g蛋黄卵磷脂、0.7g胆固醇和9mL维生素E溶于50mL无水乙醇，以0.8mL/min速率注入到300mL 53℃水中，同时以40r/min的速度进行磁力搅拌，注射结束后继续搅拌1h，再减压室温旋蒸除去乙醇，采用100nm粒径脂质体挤出器挤出制得维生素E脂质体；
（3）取1000mg蛋黄卵磷脂、300mg胆固醇溶于100mL氯仿，减压旋蒸形成薄膜，加入100mL 浓度为12g/L的熊果苷水溶液，52℃旋转水化1h后，采用100nm粒径脂质体挤出器挤出制得熊果苷脂质体；
（4）取中药75g益母草、7g藏红花、75g白芍、75g紫草分别经过筛选、清洗、干燥后混合，得到中药混合物，将中药混合物粉碎后加1000mL水浸提30h，抽提2次，合并抽提液并减压浓缩至原液的体积1/6，得到中药提取物；
（5）将75mL步骤1制得的虫草多糖/六胜肽/唾液酸复合脂质体、75mL步骤2制得的维生素E脂质体、75mL步骤3制得的熊果苷脂质体、45mL步骤4制得的中药提取物混合，搅拌均匀后依次加入3g透明质酸、4.5g尿囊素、65mL甘油和1.2g卡波姆941，持续搅拌，用三乙醇胺调节pH值至7.3，加入1000mL的水制得半成品；
（6）将步骤5制得的半成品进行消毒、灌装、封口，制得皮肤营养液D。
对比例2（不加入虫草多糖）
（1）取1000mg蛋黄卵磷脂、320mg胆固醇溶于100mL氯仿，减压旋蒸形成薄膜，加入100mL含有24mg六胜肽、1.5g唾液酸、7mg亮肽素的水溶液，52℃旋转水化1h后，采用100nm粒径脂质体挤出器挤出制得六胜肽/唾液酸复合脂质体；
（2）取2.2g蛋黄卵磷脂、0.7g胆固醇和9mL维生素E溶于50mL无水乙醇，以0.8mL/min速率注入到300mL 53℃水中，同时以40r/min的速度进行磁力搅拌，注射结束后继续搅拌1h，再减压室温旋蒸除去乙醇，采用100nm粒径脂质体挤出器挤出制得维生素E脂质体；
（3）取1000mg蛋黄卵磷脂、300mg胆固醇溶于100mL氯仿，减压旋蒸形成薄膜，加入100mL 浓度为12g/L的熊果苷水溶液，52℃旋转水化1h后，采用100nm粒径脂质体挤出器挤出制得熊果苷脂质体；
（4）取中药75g益母草、7g藏红花、75g白芍、75g紫草分别经过筛选、清洗、干燥后混合，得到中药混合物，将中药混合物粉碎后加1000mL水浸提30h，抽提2次，合并抽提液并减压浓缩至原液体积的1/6，得到中药提取物；
（5）将75mL步骤1制得的六胜肽/唾液酸复合脂质体、75mL步骤2制得的维生素E脂质体、75mL步骤3制得的熊果苷脂质体、45mL步骤4制得的中药提取物混合，搅拌均匀后依次加入3g透明质酸、4.5g尿囊素、65mL甘油和1.2g卡波姆941，持续搅拌，用三乙醇胺调节pH值至7.3，加入1000mL的水制得半成品；
（6）将步骤5制得的半成品进行消毒、灌装、封口，制得皮肤营养液E。
对比例3（不加透明质酸）
（1）取1000mg蛋黄卵磷脂、320mg胆固醇溶于100mL氯仿，减压旋蒸形成薄膜，加入100mL含有0.8g虫草多糖、24mg六胜肽、1.5g唾液酸、7mg亮肽素的水溶液，52℃旋转水化1h后，采用100nm粒径脂质体挤出器挤出制得虫草多糖/六胜肽/唾液酸复合脂质体；
（2）取2.2g蛋黄卵磷脂、0.7g胆固醇和9mL维生素E溶于50mL无水乙醇，以0.8mL/min速率注入到300mL 53℃水中，同时以40r/min的速度进行磁力搅拌，注射结束后继续搅拌1h，再减压室温旋蒸除去乙醇，采用100nm粒径脂质体挤出器挤出制得维生素E脂质体；
（3）取1000mg蛋黄卵磷脂、300mg胆固醇溶于100mL氯仿，减压旋蒸形成薄膜，加入100mL 浓度为12g/L的熊果苷水溶液，52℃旋转水化1h后，采用100nm粒径脂质体挤出器挤出制得熊果苷脂质体；
（4）取中药75g益母草、7g藏红花、75g白芍、75g紫草分别经过筛选、清洗、干燥后混合，得到中药混合物，将中药混合物粉碎后加1000mL水浸提30h，抽提2次，合并抽提液并减压浓缩至原液的体积1/6，得到中药提取物；
（5）将75mL步骤1制得的虫草多糖/六胜肽/唾液酸复合脂质体、75mL步骤2制得的维生素E脂质体、75mL步骤3制得的熊果苷脂质体、45mL步骤4制得的中药提取物混合，搅拌均匀后依次加入4.5g尿囊素、65mL甘油和1.2g卡波姆941，持续搅拌，用三乙醇胺调节pH值至7.3，加入1000mL的水制得半成品；
（6）将步骤5制得的半成品进行消毒、灌装、封口，制得皮肤营养液F。
抗皱作用评价
建立培养模型：将小鼠成肌细胞C2C12细胞接种至经过明胶包被的平板中，置于含2/3MEM和1/3M199、2mmol/L L-谷氨酰胺、100IU/mL青霉素、100μg/mL链霉素、5%胎牛血清培养基中，在37℃、5%二氧化碳培养箱中培养，直到形成单层肌原纤维。然后将具有背根神经节出生10d的小鼠胚胎的脊髓外植体置于形成单层肌原纤维的肌细胞单层肌原纤维上，共培养48h后，观察到从外植体生长出的神经突与肌细胞接触，100h后开始发生收缩。共培养4周，神经和肌肉已经充分连接，形成具有完全成熟的神经肌肉接头（相当于具有运动终板）充分分化的横纹肌纤维模型，在这一阶段，肌原纤维可以进行规律的收缩，说明建成了培养模型。
测试方法：先用显微镜观察培养模型肌肉收缩频率30s，观察5次，计数，取平均值。接着将本发明实施例1-3和对比例1-3的皮肤营养液以及玉兰油高保湿美白营养水和瑞倪维儿康婷营养水用培养基以1:100比例稀释后，分别以5%（v/v）的比例加入培养模型中。另外再设空白对照组。在1min、2h和48h时观察肌肉收缩频率各30s，并计数，记录结果。每组测试重复5次，并进行均值t检验分析，*表示p<0.05，**表示p<0.01，结果见表1。
表1 各种皮肤营养水在不同时间诱导肌肉收缩的次数
从表1可知，空白对照组的肌肉收缩次数较高。用本发明实施例制备的长效抗皱皮肤营养液处理后，肌肉收缩次数显著下降，且随着时间延长能持续减少肌肉收缩次数，至48h降至10次以下，说明本发明实施例制备的长效抗皱皮肤营养液能够达到长效抗皱祛皱的功效。而对比例制备的皮肤营养液和市售的两种皮肤营养水化合物处理能够稍微减少肌肉收缩次数，但效果欠佳。
本发明提供了一种长效抗皱皮肤营养液的制备方法的思路及方法，具体实现该技术方案的方法和途径很多，以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。本实施例中未明确的各组成部分均可用现有技术加以实现。
Claims (5)
1.一种长效抗皱皮肤营养液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1.虫草多糖/六胜肽/唾液酸复合脂质体的制备：取蛋黄卵磷脂、胆固醇溶于氯仿，减压旋蒸形成薄膜，加入含有虫草多糖、六胜肽、唾液酸、亮肽素的水溶液，50-55℃旋转水化1h后，采用100nm粒径脂质体挤出器挤出制得虫草多糖/六胜肽/唾液酸复合脂质体；所述水溶液中，虫草多糖的浓度为5-12g/L，六胜肽的浓度为120-360mg/L、唾液酸的浓度为10-20g/L、亮肽素的浓度为50-90mg/L；
S2.维生素E脂质体的制备：取蛋黄卵磷脂、胆固醇和维生素E，用无水乙醇溶解，以0.5-1mL/min速率注射到50-55℃水中，同时以30-50r/min的速度进行磁力搅拌，注射结束后继续搅拌1h，再减压室温旋蒸除去乙醇，采用100nm粒径脂质体挤出器挤出制得维生素E脂质体；
S3.熊果苷脂质体的制备：取蛋黄卵磷脂、胆固醇溶于氯仿，减压旋蒸形成薄膜，加入浓度为10-15g/L的熊果苷水溶液，50-55℃旋转水化1h后，采用100nm粒径脂质体挤出器挤出制得熊果苷脂质体；
S4.中药提取物的制备：将益母草、藏红花、白芍和紫草分别经过筛选、清洗、干燥后混合，得到中药混合物，将所述中药混合物粉碎后加水浸提24-36h，抽提2次后合并，得到抽提液，将所述抽提液减压浓缩至所述抽提液体积的1/8-1/5，得到中药提取物；所述益母草、藏红花、白芍、紫草和水的用量比为50-100g:5-10g:50-100g:50-100g:1000mL；
S5.将所述虫草多糖/六胜肽/唾液酸复合脂质体、所述维生素E脂质体、所述熊果苷脂质体和所述中药提取物混合，搅拌均匀后依次加入透明质酸、尿囊素、甘油和卡波姆941，持续搅拌，用三乙醇胺调节pH值至7.2-7.4，加入水制得半成品；所述虫草多糖/六胜肽/唾液酸复合脂质体、维生素E脂质体、熊果苷脂质体、中药提取物、透明质酸、尿囊素、甘油、卡波姆941和水的用量比例为50-100mL:50-100mL:50-100mL:30-60mL:0.5-5g:3-6g:30-100mL:0.5-2g:1000mL；
S6.将所述半成品进行消毒、灌装、封口，制得长效抗皱皮肤营养液。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S1中，所述蛋黄卵磷脂、胆固醇和氯仿的用量比为750-1200mg:250-400mg:100mL。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S2中，所述蛋黄卵磷脂、胆固醇、维生素E、无水乙醇和水的用量比为1.5-3g:0.5-1g:8-10mL:50mL:200-400mL。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S3中，所述蛋黄卵磷脂、胆固醇和氯仿的用量比为750-1200mg:250-400mg:100mL。
5.根据权利要求1~4任一项所述的制备方法制备得到的长效抗皱皮肤营养液。
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