CN111337664A - 一种中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白检测试剂盒及用法 - Google Patents

一种中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白检测试剂盒及用法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了医疗器械生物类免疫体外诊断相关技术领域的一种中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白检测试剂盒及用法，包括相互独立包装的校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物和清洗液；便于规模化生产；各试剂组分包括校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物等稳定性良好，效期可至一年以上，优效降低成本；检测灵敏度高，特异性能好、变异小；用户仅需按照操作说明进行规范操作，就可得到可靠的结果，操作简便，便于推广；在临床研究中与国外进口试剂的符合相关性高达95％以上，且费用仅为其1/5。

Description

一种中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白检测试剂盒及用法
技术领域
本发明涉及医疗器械生物类免疫体外诊断相关技术领域，特别涉及一种中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白检测试剂盒及用法，根据方法学来讲，是一种基于磁微粒分离化学发光法定量检测中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白(NGAL)的试剂盒，以及应用该试剂盒定量检测中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白(NGAL)的方法。
背景技术
中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白(NGAL)为分泌型蛋白，蛋白相对分子量为25KD，含有198aa，N端为20aa的信号肽序列，等电点8.40健康人尿液中NGAL含量：0.7～9.6ng/ml，平均值为5.3ng/ml；血浆中：37～106ng/ml，平均值为63ng/ml。
中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白(NGAL)是肾功能损伤早期的生物标志物。NGAL不仅仅存在于嗜中性粒细胞中，也会出现在特定的上皮细胞内，例如发生缺血性和毒性肾损伤过程中，肾小管上皮细胞中的NGAL将显著增加，在开始的两个小时内，尿液和血液中NGAL水平将显著增加，临床研究证明NGAL确诊急性肾损伤病人在时间上远远早于血清肌酐。因此NGAL是早期急性肾损伤的敏感标志物。
在国内，中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白(NGAL)检测临床上主要以国外进口试剂和免疫组化试剂应用为主，国外进口试剂价格非常昂贵，给患者带来很大的经济负担，不利于在基层普及。具有自主知识产权的国产中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白(NGAL)免疫化学发光检测试剂盒目前还较少，也仅停留在96孔微孔板式技术或者免疫增强比浊法水平上。该技术灵敏度较低、线性窄、特异性较差，也不利于高通量的全自动检测。
因此，有待开发对中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白(NGAL)检测灵敏度高与可靠性并能降低检测成本的检测技术。
发明内容
针对现有技术存在的需要一种对中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白(NGAL)检测灵敏度高与可靠性并能降低检测成本的技术问题，本发明提供一种中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白检测试剂盒及用法。
为实现上述目的，本发明的技术方案为：
一种中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白检测试剂盒，包括相互独立包装的校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物和清洗液；
所述校准品和所述质控品的成分相同，并且均通过用含蛋白的缓冲液溶解NGAL抗原，并稀释至含Tris的缓冲液中制备而成；
所述抗试剂通过包括以下步骤的操作制备而成：
A：异硫氰酸荧光素与NGAL抗体偶联物的制备：
Sa1：用抗试剂缓冲液将异硫氰酸荧光素配制为1.0～5.0mg/mL浓度，并在遮光条件下加入NGAL抗体，室温下搅拌1～2h；
Sa2：用pH为8～9的碳酸氢盐缓冲液对Sa1所得产物进行平衡；然后再用pH为8～9的碳酸氢盐缓冲液进行洗脱，分部收集洗脱液，制得纯化的异硫氰酸荧光素与NGAL抗体偶联物；
B：碱性磷酸酶与NGAL抗体偶联物的制备：
Sb1：用抗试剂缓冲液将碱性磷酸酶用缓冲液配制为1.0～5.0mg/mL浓度，并在遮光条件下，按所述NGAL抗体与所述碱性磷酸酶摩尔比为1:2～1:10的比例加入所述NGAL抗体，室温下搅拌4～5h；
Sb2：用pH为8～9的碳酸氢盐缓冲液对Sb1所得产物进行平衡；然后再用pH为8～9的碳酸氢盐缓冲液进行洗脱，分部收集洗脱液，制得纯化的碱性磷酸酶与NGAL抗体偶联物，
C：将所述异硫氰酸荧光素与NGAL抗体偶联物与所述碱性磷酸酶与NGAL抗体偶联物加入到含表面活性剂的Tris盐缓冲液中制得所述抗试剂；
所述磁微粒试剂通过包括以下步骤的操作制备而成：
Sd1：将充分混匀后的羧基磁珠浓缩液在磁场内放置15～20min，待羧基磁珠全部沉降后吸去上清，向所述羧基磁珠中加入所述羧基磁珠体积2～5倍的磷酸缓冲液，混匀20～30min后在磁场内放置15～20min再吸去上清；重复清洗羧基磁珠1～3遍；最后将羧基磁珠混合液定容到10～50mg/mL，制得羧基磁珠溶液；
Sd2：向所述羧基磁珠溶液中加入所述羧基磁珠溶液质量0.8～1.2％的抗异硫氰酸荧光素抗体，在2～8℃内保持混匀状态反应16～20h；
Sd3：将Sc2制得的溶液在磁场中放置12～18min，待所述羧基磁珠沉降后用磁微粒缓冲液洗1～3遍，随后定容至1.8～2.2mg/mL，2～8℃保存待用；
所述发光底物通过包括用ALPS发光底物体积4～10倍的发光底物缓冲液将ALPS发光底物稀释的操作制备而成。
进一步的，所述含蛋白的缓冲液包括按体积百分比计的以下组分：BSA6％、防腐剂四环素0.01～0.05％和硫酸新霉素0.1～0.5％；所述含蛋白的缓冲液经过0.22μm滤膜过滤处理。
进一步的，所述含Tris的缓冲液中包括按体积百分比计的四环素0.01～0.05％和硫酸新霉素0.1～0.5％，所述含Tris的缓冲液经过0.22μm滤膜过滤处理。
进一步的，所述抗试剂缓冲液为pH值为5～6的PBS体系；所述抗试剂缓冲液包括纯化水1L、Na2PO3H·12H2O10～20g、NaPO3H2·12H2O1～2g、绵羊血清1～5g、新生牛血清3～10g和马血清1～5g。
进一步的，所述表面活性剂选自Tween20、TritonX-100、Bronidox中的一种或多种，所述表面活性剂在所述Tris盐缓冲液中体积百分比为0.01～0.5％。
进一步的，所述Tris盐缓冲液中包括Tris盐0.1～0.5mM，还包括按体积百分比计的：四环素0.01～0.05％、绵羊血清1～5％、新生牛血清3～10％和马血清1～5％。
进一步的，所述发光底物缓冲液中包括按体积百分比计的以下组分：Tris0.1～1M、亚硫酸钠0.1％、SDS1％、光泽精0.3％、牛血清白蛋白0.15％；所述发光底物缓冲液的pH为9.5。
进一步的，所述清洗液通过将150～170gNaCl、3～5gKCl、24～24.4g三羟甲基氨基甲烷、0.8～1.2mL吐温20溶于900ml双蒸水中，再用HCl调整至pH7.2～7.6，最后用双蒸水定容至1000ml制备而成。
上述任一项所述的中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白检测试剂盒的用法，包括以下步骤：
Se1：取三支试管分别加15μL所述校准品、15μL所述质控品、15μL待测样本；
Se2：向每支试管中加入60μL抗试剂，用塑料薄膜覆盖试管，轻轻振荡试管30s，置于37℃下水浴5min；
Se3：再向每支试管中加入30μL磁微粒试剂，用塑料薄膜覆盖试管，轻轻振荡试管30s，置37℃下水浴5min；
Se4：将所有试管在磁分离器上沉淀3min，缓慢地倒转所述试管和所述磁分离器，倒出上清液；把倒转的所述试管连同所述磁分离器一起，放在滤纸上，拍击所述磁分离器底部除去粘在管壁上的所有液滴；
Se5：向每支试管中加入300μL所述清洗液，用塑料薄膜覆盖试管，轻轻振荡试管30s，混匀后缓慢的倒转试管和磁分离器，倒出上清液，把倒转的所述试管连同所述磁分离器一起，放在滤纸上，用力拍击分离器底部以除去粘在管壁上的所有液滴；
Se6：重复Se5的操作0～3次；
Se7：向每支试管中加入200μL所述发光底物，振荡混匀3s，用化学发光仪检测发光强度。
本发明的关键包括：
首先，以碱性磷酸酶(AP)为标记酶，通过化学反应标记抗体，并使用凝胶层析分离未反应的酶、抗体或抗原，提高反应的灵敏度；
其次，以免疫磁微粒为固相，以羊抗异硫氰酸荧光素抗体偶联磁性微球，作为通用的分离试剂，不仅使免疫反应更容易混匀和分离，而且大大提高了反应速度；
再有，以新型化学发光底物ALPS为底物，该底物是辉光性底物，而且快速达到平台期，有利于信号的检测，提高了最终试剂盒的灵敏度和特异性性能；并进一步优化了化学发光增强体系，保证了终产品的信号灵敏度高和稳定性好、变异小；
此外，ALPS底物的优点在于灵敏度高和平台稳定期长。
本发明具有如下优点：
1.本发明的中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白(NGAL)检测试剂盒(磁微粒化学发光法)经过大量实验的工艺优化，得到完善统一工艺，便于规模化生产；各试剂组分包括校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物等稳定性良好，效期可至一年以上，优效降低成本；
2.检测灵敏度高，特异性能好、变异小；
3.用户仅需按照操作说明进行规范操作，就可得到可靠的结果，操作简便，便于推广；
4.目前该试剂盒已获得江苏省食品药品监督管理局诊断试剂二类注册证，在临床研究中与国外进口试剂的符合相关性高达95％以上，且费用仅为其1/5。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白(NGAL)检测试剂盒(磁微粒化学发光法)标准曲线图；
图2为中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白(NGAL)检测试剂盒(磁微粒化学发光法)与进口试剂的性能对比。
具体实施方式
下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步说明。在此需要说明的是，对于这些实施方式的说明用于帮助理解本发明，但并不构成对本发明的限定。此外，在以下说明中，省略了对公知结构、技术及操作的描述，以避免不必要地混淆本发明的概念。另外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
本发明的试剂盒中未详细提及的试剂组分(例如清洗液、一些必要的缓冲液等)、试剂盒的外包装以及各试剂组分的独立包装容器等均可以按照所属领域的常规操作进行，符合相关行业规定即可。本发明的方法中未详细提及的操作步骤也可参照所属领域的常规操作进行，例如，在检测前，可将各试剂放至室温(18～25℃)，加样前充分混匀；所用检测仪器设备例如化学发光类测定仪的使用按照说明书操作进行；
本发明中，未特别注明单位的比例与含量，固体组分为质量比例与含量，液体组分为体积比例与含量。
一种中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白检测试剂盒，包括相互独立包装的校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物和清洗液；其中，校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物和清洗液的具体制备方法如下列实施例所示：
实施例1
校准品和质控品的成分相同，并且均通过用含蛋白的缓冲液溶解NGAL抗原，并稀释至含Tris的缓冲液中制备而成；其中，含蛋白的缓冲液包括按体积百分比计的以下组分：BSA6％、防腐剂四环素0.01％和硫酸新霉素0.1％；含Tris的缓冲液中包括按体积百分比计的四环素0.01％和硫酸新霉素0.1％；并且含蛋白的缓冲液和含Tris的缓冲液均经过0.22μm滤膜过滤处理；
抗试剂通过包括以下步骤的操作制备而成：
A：异硫氰酸荧光素与NGAL抗体偶联物的制备：
Sa1：用抗试剂缓冲液将异硫氰酸荧光素配制为1.0mg/mL浓度，并在遮光条件下加入NGAL抗体，室温下搅拌1h；其中，抗试剂缓冲液为pH值为5～6的PBS体系；抗试剂缓冲液包括纯化水1L、Na2PO3H·12H2O10g、NaPO3H2·12H2O1g、绵羊血清1g、新生牛血清3g和马血清1g；
Sa2：用pH为8的碳酸氢盐缓冲液对Sa1所得产物进行平衡；然后再用pH为8的碳酸氢盐缓冲液进行洗脱，分部收集洗脱液，制得纯化的异硫氰酸荧光素与NGAL抗体偶联物；
B：碱性磷酸酶与NGAL抗体偶联物的制备：
Sb1：用抗试剂缓冲液将碱性磷酸酶用缓冲液配制为1.0mg/mL浓度，并在遮光条件下，按NGAL抗体与碱性磷酸酶摩尔比为1:2的比例加入NGAL抗体，室温下搅拌4h；
Sb2：用pH为8的碳酸氢盐缓冲液对Sb1所得产物进行平衡；然后再用pH为8的碳酸氢盐缓冲液进行洗脱，分部收集洗脱液，制得纯化的碱性磷酸酶与NGAL抗体偶联物，
C：将异硫氰酸荧光素与NGAL抗体偶联物与碱性磷酸酶与NGAL抗体偶联物加入到含表面活性剂的Tris盐缓冲液中制得抗试剂；其中，表面活性剂选自Tween20，表面活性剂在Tris盐缓冲液中体积百分比为0.01％；Tris盐缓冲液中包括Tris盐0.1mM，还包括按体积百分比计的：四环素0.01％、绵羊血清1％、新生牛血清3％和马血清1％；
磁微粒试剂通过包括以下步骤的操作制备而成：
Sd1：将充分混匀后的羧基磁珠浓缩液在磁场内放置15min，待羧基磁珠全部沉降后吸去上清，向羧基磁珠中加入羧基磁珠体积2倍的磷酸缓冲液，混匀20min后在磁场内放置15min再吸去上清；重复清洗羧基磁珠1遍；最后将羧基磁珠混合液定容到10mg/mL，制得羧基磁珠溶液；
Sd2：向羧基磁珠溶液中加入羧基磁珠溶液质量0.8％的抗异硫氰酸荧光素抗体，在2℃内保持混匀状态反应16h；
Sd3：将Sc2制得的溶液在磁场中放置12min，待羧基磁珠沉降后用磁微粒缓冲液洗1遍，随后定容至1.8mg/mL，2℃保存待用；
发光底物通过包括用ALPS发光底物体积4倍的发光底物缓冲液将ALPS发光底物稀释的操作制备而成；其中，发光底物缓冲液中包括按体积百分比计的以下组分：Tris0.1M、亚硫酸钠0.1％、SDS1％、光泽精0.3％、牛血清白蛋白0.15％；发光底物缓冲液的pH为9.5；
清洗液通过将150gNaCl、3gKCl、24g三羟甲基氨基甲烷、0.8mL吐温20溶于900ml双蒸水中，再用HCl调整至pH7.2，最后用双蒸水定容至1000ml制备而成。
实施例2
校准品和质控品的成分相同，并且均通过用含蛋白的缓冲液溶解NGAL抗原，并稀释至含Tris的缓冲液中制备而成；其中，含蛋白的缓冲液包括按体积百分比计的以下组分：BSA6％、防腐剂四环素0.03％和硫酸新霉素0.3％；含Tris的缓冲液中包括按体积百分比计的四环素0.03％和硫酸新霉素0.3％；并且含蛋白的缓冲液和含Tris的缓冲液均经过0.22μm滤膜过滤处理；
抗试剂通过包括以下步骤的操作制备而成：
A：异硫氰酸荧光素与NGAL抗体偶联物的制备：
Sa1：用抗试剂缓冲液将异硫氰酸荧光素配制为3.0mg/mL浓度，并在遮光条件下加入NGAL抗体，室温下搅拌1.5h；其中，抗试剂缓冲液为pH值为5～6的PBS体系；抗试剂缓冲液包括纯化水1L、Na2PO3H·12H2O15g、NaPO3H2·12H2O1.5g、绵羊血清3g、新生牛血清6g和马血清3g；
Sa2：用pH为8.5的碳酸氢盐缓冲液对Sa1所得产物进行平衡；然后再用pH为8.5的碳酸氢盐缓冲液进行洗脱，分部收集洗脱液，制得纯化的异硫氰酸荧光素与NGAL抗体偶联物；
B：碱性磷酸酶与NGAL抗体偶联物的制备：
Sb1：用抗试剂缓冲液将碱性磷酸酶用缓冲液配制为3.0mg/mL浓度，并在遮光条件下，按NGAL抗体与碱性磷酸酶摩尔比为1:6的比例加入NGAL抗体，室温下搅拌4.5h；
Sb2：用pH为8.5的碳酸氢盐缓冲液对Sb1所得产物进行平衡；然后再用pH为8.5的碳酸氢盐缓冲液进行洗脱，分部收集洗脱液，制得纯化的碱性磷酸酶与NGAL抗体偶联物，
C：将异硫氰酸荧光素与NGAL抗体偶联物与碱性磷酸酶与NGAL抗体偶联物加入到含表面活性剂的Tris盐缓冲液中制得抗试剂；其中，表面活性剂选自TritonX-100，表面活性剂在Tris盐缓冲液中体积百分比为0.25％；Tris盐缓冲液中包括Tris盐0.3mM，还包括按体积百分比计的：四环素0.03％、绵羊血清3％、新生牛血清6％和马血清3％；
磁微粒试剂通过包括以下步骤的操作制备而成：
Sd1：将充分混匀后的羧基磁珠浓缩液在磁场内放置18min，待羧基磁珠全部沉降后吸去上清，向羧基磁珠中加入羧基磁珠体积4倍的磷酸缓冲液，混匀25min后在磁场内放置18min再吸去上清；重复清洗羧基磁珠2遍；最后将羧基磁珠混合液定容到30mg/mL，制得羧基磁珠溶液；
Sd2：向羧基磁珠溶液中加入羧基磁珠溶液质量1％的抗异硫氰酸荧光素抗体，在4℃内保持混匀状态反应18h；
Sd3：将Sc2制得的溶液在磁场中放置15min，待羧基磁珠沉降后用磁微粒缓冲液洗2遍，随后定容至2mg/mL，4℃保存待用；
发光底物通过包括用ALPS发光底物体积7倍的发光底物缓冲液将ALPS发光底物稀释的操作制备而成；其中，发光底物缓冲液中包括按体积百分比计的以下组分：Tris0.5M、亚硫酸钠0.1％、SDS1％、光泽精0.3％、牛血清白蛋白0.15％；发光底物缓冲液的pH为9.5；
清洗液通过将160gNaCl、4gKCl、24.2g三羟甲基氨基甲烷、1mL吐温20溶于900ml双蒸水中，再用HCl调整至pH7.4，最后用双蒸水定容至1000ml制备而成。
实施例3
校准品和质控品的成分相同，并且均通过用含蛋白的缓冲液溶解NGAL抗原，并稀释至含Tris的缓冲液中制备而成；其中，含蛋白的缓冲液包括按体积百分比计的以下组分：BSA6％、防腐剂四环素0.05％和硫酸新霉素0.5％；含Tris的缓冲液中包括按体积百分比计的四环素0.05％和硫酸新霉素0.5％；并且含蛋白的缓冲液和含Tris的缓冲液均经过0.22μm滤膜过滤处理；
抗试剂通过包括以下步骤的操作制备而成：
A：异硫氰酸荧光素与NGAL抗体偶联物的制备：
Sa1：用抗试剂缓冲液将异硫氰酸荧光素配制为5.0mg/mL浓度，并在遮光条件下加入NGAL抗体，室温下搅拌2h；其中，抗试剂缓冲液为pH值为6的PBS体系；抗试剂缓冲液包括纯化水1L、Na2PO3H·12H2O20g、NaPO3H2·12H2O2g、绵羊血清5g、新生牛血清10g和马血清5g；
Sa2：用pH为9的碳酸氢盐缓冲液对Sa1所得产物进行平衡；然后再用pH为9的碳酸氢盐缓冲液进行洗脱，分部收集洗脱液，制得纯化的异硫氰酸荧光素与NGAL抗体偶联物；
B：碱性磷酸酶与NGAL抗体偶联物的制备：
Sb1：用抗试剂缓冲液将碱性磷酸酶用缓冲液配制为5.0mg/mL浓度，并在遮光条件下，按NGAL抗体与碱性磷酸酶摩尔比为1:10的比例加入NGAL抗体，室温下搅拌5h；
Sb2：用pH为9的碳酸氢盐缓冲液对Sb1所得产物进行平衡；然后再用pH为9的碳酸氢盐缓冲液进行洗脱，分部收集洗脱液，制得纯化的碱性磷酸酶与NGAL抗体偶联物，
C：将异硫氰酸荧光素与NGAL抗体偶联物与碱性磷酸酶与NGAL抗体偶联物加入到含表面活性剂的Tris盐缓冲液中制得抗试剂；其中，表面活性剂选自Bronidox，表面活性剂在Tris盐缓冲液中体积百分比为0.5％；Tris盐缓冲液中包括Tris盐0.5mM，还包括按体积百分比计的：四环素0.05％、绵羊血清5％、新生牛血清10％和马血清5％；
磁微粒试剂通过包括以下步骤的操作制备而成：
Sd1：将充分混匀后的羧基磁珠浓缩液在磁场内放置20min，待羧基磁珠全部沉降后吸去上清，向羧基磁珠中加入羧基磁珠体积5倍的磷酸缓冲液，混匀30min后在磁场内放置20min再吸去上3遍；最后将羧基磁珠混合液定容到50mg/mL，制得羧基磁珠溶液；
Sd2：向羧基磁珠溶液中加入羧基磁珠溶液质量1.2％的抗异硫氰酸荧光素抗体，在8℃内保持混匀状态反应20h；
Sd3：将Sc2制得的溶液在磁场中放置18min，待羧基磁珠沉降后用磁微粒缓冲液洗3遍，随后定容至2.2mg/mL，8℃保存待用；
发光底物通过包括用ALPS发光底物体积4～10倍的发光底物缓冲液将ALPS发光底物稀释的操作制备而成；其中，发光底物缓冲液中包括按体积百分比计的以下组分：Tris1M、亚硫酸钠0.1％、SDS1％、光泽精0.3％、牛血清白蛋白0.15％；发光底物缓冲液的pH为9.5；
清洗液通过将170gNaCl、5gKCl、24.4g三羟甲基氨基甲烷、1.2mL吐温20溶于900ml双蒸水中，再用HCl调整至pH7.6，最后用双蒸水定容至1000ml制备而成。
实施例4
为演示上述任一项的中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白检测试剂盒的用法，以下进一步补充相关试剂的配置：
1、本发明中的包被抗体为能与人体内中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白(NGAL)抗原特异结合的单克隆抗体，标记抗体为能与中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白(NGAL)抗原特异结合的单克隆抗体。包被抗体和标记抗体除能与中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白(NGAL)抗原特异性结合外，配对使用时可与抗原形成“三明治”夹心结构。
本实施例所用的中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白(NGAL)抗原采购自国内外知名厂家北京安百盛生物技术有限公司，本实施例所用的中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白(NGAL)包被抗体和标记抗体采购自国内外知名厂家北京安百盛生物技术有限公司。本实施例中的各种缓冲液的配方如下：
【Tris盐pH8.0缓冲液】
Figure BDA0002394309900000071
Figure BDA0002394309900000081
【校准品缓冲液】
试剂名称 生产商 浓度 1L缓冲液用量
Tris Sigma 0.1M 12.12
BSA Sigma 1％ 10g
四环素 Sigma 0.01％ 10mg
硫酸新霉素 Sigma 0.01％ 10mg
【抗试剂剂缓冲液】
试剂名称 生产商 浓度 1L缓冲液用量
Tris Sigma 0.1M 12.12
氯化钠 Sigma 0.9％ 5.82
绵羊血清 广州蕊特 10％ 100mL
新生牛血清 广州蕊特 10％ 100mL
【磁微粒缓冲液】
试剂名称 生产商 浓度 1L缓冲液用量
Tris Sigma 0.1M 12.12
氯化钠 Sigma 0.9％ 5.82
甲基纤维醚 Sigma 5％ 50g
【发光底物缓冲液】
试剂名称 生产商 浓度 1L缓冲液用量
Tris Sigma 0.1M 12.12
氯化钠 Sigma 0.9％ 5.82
光泽精 Sigma 0.3％ 30mg
2、本实施例的中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白(NGAL)检测试剂盒(磁微粒化学发光法)的主要试剂组分包括：
1)用校准品缓冲液稀释中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白(NGAL)抗原的校准品(A，B，...，F)。
2)用校准品缓冲液稀释中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白(NGAL)抗原的质控品(Q1，Q2)。质控品浓度范围每批标定。
3)用抗试剂缓冲液稀释异硫氰酸荧光素(FITC)标记的NGAL包被抗体与碱性磷酸酶(AP)标记的NGAL标记抗体。
4)用磁微粒缓冲液稀释抗异硫氰酸荧光素抗体磁微粒。
5)浓缩洗液，适当稀释后使用。
6)用发光缓冲液稀释的ALPS发光底物。
3、本实施例的中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白(NGAL)检测试剂盒(磁微粒化学发光法)的各试剂组分的制备过程为：
1)校准品和质控品的制备
将中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白(NGAL)抗原溶解于含蛋白的缓冲液中至0.5mg/mL溶液处理30min。
将上述反应物，按不同浓度用【校准品缓冲液】稀释成不同浓度点，并定标。
校准品和质控品的目标浓度为
试剂名称 目标浓度(ng/mL)
校准品A 0.00
校准品B 10.00
校准品C 50.00
校准品D 200.00
校准品E 500.00
校准品F 1500.00
质控品Q1 10
质控品Q2 500
清洗浓缩液的配制，按以下配方配制。
试剂名称 生产商 规格 1L缓冲液用量
Tris Sigma 0.1M 12.12
氯化钠 Sigma 0.9％ 5.82
Tween-20 Sigma 5％ 50mL
曲拉通-100 Sigma 5％ 50mL
上述校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物、浓缩清洗液各试剂组分配制好后，独立地置于一个包装容器内，以组成本实施例的中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白(NGAL)检测试剂盒(磁微粒化学发光法)套组。
利用本实施例的磁微粒化学发光检测试剂盒检测中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白(NGAL)时的具体操作方法见试剂盒说明书。
使用中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白检测试剂盒去检测中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白检测的操作过程包括以下步骤：
Se1：取三支试管分别加15μL校准品、15μL质控品、15μL待测样本；
Se2：向每支试管中加入60μL抗试剂，用塑料薄膜覆盖试管，轻轻振荡试管30s，置于37℃下水浴5min；
Se3：再向每支试管中加入30μL磁微粒试剂，用塑料薄膜覆盖试管，轻轻振荡试管30s，置37℃下水浴5min；
Se4：将所有试管在磁分离器上沉淀3min，缓慢地倒转试管和磁分离器，倒出上清液；把倒转的试管连同磁分离器一起，放在滤纸上，拍击磁分离器底部除去粘在管壁上的所有液滴；
Se5：向每支试管中加入300μL清洗液，用塑料薄膜覆盖试管，轻轻振荡试管30s，混匀后缓慢的倒转试管和磁分离器，倒出上清液，把倒转的试管连同磁分离器一起，放在滤纸上，用力拍击分离器底部以除去粘在管壁上的所有液滴；
Se6：重复Se5的操作0～3次；
Se7：向每支试管中加入200μL发光底物，振荡混匀3s，用化学发光仪检测发光强度。
进一步细化操作为：
1)每次测定前准备下列试管，做好标记并放置在试管架上；
2)各浓度校准品用试管各2支；
3)待测样本(样本的采集参照常规操作：将采集的静脉血加入至试管或肝素抗凝管中，离心，取上清部分进行实验)、质控品用试管各1支；
4)测定前将各试剂放至室温(18～25℃)，加样前充分混匀；
5)设定好37℃水浴锅；
6)准备好化学发光类测定仪；
7)分别加15μL中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白(NGAL)校准品、质控品、待测样本至对应试管底部；
8)加60μL抗试剂至每一试管中；
9)用塑料薄膜覆盖试管，多管混匀器轻轻振荡试管架30s后，置37℃水浴5min；
10)加30μL磁微粒试剂至每一试管中；
11)用塑料薄膜覆盖试管，多管混匀器轻轻振荡试管架30s后，置37℃水浴5min；
12)试管连架放至磁分离器上，确保每支试管都与分离器表面接触，沉淀3min；缓慢的倒转分离器倒出上清液，把倒转的试管连同分离器一起放在滤纸上，用力拍击分离器底部以除去粘在管壁上的所有液滴；
13)加300μL清洗液至每一试管中，用塑料薄膜覆盖试管，多管混匀器轻轻振荡试管架30s，至彻底混匀，重复上一步操作1次；
14)重复上一步操作1次；
15)把试管从磁分离器上去下，加200μL发光底物溶液至每一试管中，振荡混匀3s，用化学发光仪检测发光强度。结果计算参阅仪器的相关说明；
16)如使用全自动检测仪器，则上述手动操作步骤将由仪器自动操作所代替，严格按照仪器使用说明书进行检测。
临床参考值范围，详见附表3
数据的处理：通过校准品的浓度值和检测到的发光值，通过四参数非线性拟合获得标准曲线，将样本的发光值代入上述标准曲线获得相应的浓度值。
图1显示了按照本实施例的方法所制作的中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白(NGAL)检测试剂盒(磁微粒化学发光法)标准曲线。
表1是本实施例的中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白(NGAL)检测试剂盒(磁微粒化学发光法)分析性能和稳定性表。
表2是本实施例的中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白(NGAL)检测试剂盒(磁微粒化学发光法)对600份正常人样本进行检验；用SPSS19.0forwindows软件对正常人样本的测定结果进行正态性检验，数据整体分布基本属于非正态分布。
表3是本实施例的中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白(NGAL)检测试剂盒(磁微粒化学发光法)临床参考值范围；以正常人样本检测值的双侧95百分位数作为参考值。
图2显示了利用本实施例的中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白(NGAL)检测试剂盒(磁微粒化学发光法)与利用进口检测试剂的检测性能对比。216份标本，将低中高值样本分离后，对低中高值样本进行单独的线性回归分析，将结果进行分析，线性回归方程y＝0.934x+7.765，R2＝0.986。
可以看出，本发明的试剂盒性能可靠，灵敏度高，线性范围宽，可配合全自动仪器使用。
表1：中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白(NGAL)检测试剂盒(磁微粒化学发光法)分析性能和稳定性表。
Figure BDA0002394309900000111
表2中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白(NGAL)检测试剂盒(磁微粒化学发光法)正态性检验表。
区间 自由度 p值
正常 120 0.015
表3中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白(NGAL)检测试剂盒(磁微粒化学发光法)临床参考值范围表。
Figure BDA0002394309900000112
以上结合附图对本发明的实施方式作了详细说明，但本发明不限于所描述的实施方式。对于本领域的技术人员而言，在不脱离本发明原理和精神的情况下，在没有做出创造性劳动前提下，对这些实施方式进行多种变化、修改、替换和变型，仍落入本发明的保护范围内。

Claims (9)

1.一种中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白检测试剂盒，其特征在于：包括相互独立包装的校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物和清洗液；
所述校准品和所述质控品的成分相同，并且均通过用含蛋白的缓冲液溶解NGAL抗原，并稀释至含Tris的缓冲液中制备而成；
所述抗试剂通过包括以下步骤的操作制备而成：
A：异硫氰酸荧光素与NGAL抗体偶联物的制备：
Sa1：用抗试剂缓冲液将异硫氰酸荧光素配制为1.0～5.0mg/mL浓度，并在遮光条件下加入NGAL抗体，室温下搅拌1～2h；
Sa2：用pH为8～9的碳酸氢盐缓冲液对Sa1所得产物进行平衡；然后再用pH为8～9的碳酸氢盐缓冲液进行洗脱，分部收集洗脱液，制得纯化的异硫氰酸荧光素与NGAL抗体偶联物；
B：碱性磷酸酶与NGAL抗体偶联物的制备：
Sb1：用抗试剂缓冲液将碱性磷酸酶用缓冲液配制为1.0～5.0mg/mL浓度，并在遮光条件下，按所述NGAL抗体与所述碱性磷酸酶摩尔比为1:2～1:10的比例加入所述NGAL抗体，室温下搅拌4～5h；
Sb2：用pH为8～9的碳酸氢盐缓冲液对Sb1所得产物进行平衡；然后再用pH为8～9的碳酸氢盐缓冲液进行洗脱，分部收集洗脱液，制得纯化的碱性磷酸酶与NGAL抗体偶联物，
C：将所述异硫氰酸荧光素与NGAL抗体偶联物与所述碱性磷酸酶与NGAL抗体偶联物加入到含表面活性剂的Tris盐缓冲液中制得所述抗试剂；
所述磁微粒试剂通过包括以下步骤的操作制备而成：
Sd1：将充分混匀后的羧基磁珠浓缩液在磁场内放置15～20min，待羧基磁珠全部沉降后吸去上清，向所述羧基磁珠中加入所述羧基磁珠体积2～5倍的磷酸缓冲液，混匀20～30min后在磁场内放置15～20min再吸去上清；重复清洗羧基磁珠1～3遍；最后将羧基磁珠混合液定容到10～50mg/mL，制得羧基磁珠溶液；
Sd2：向所述羧基磁珠溶液中加入所述羧基磁珠溶液质量0.8～1.2％的抗异硫氰酸荧光素抗体，在2～8℃内保持混匀状态反应16～20h；
Sd3：将Sc2制得的溶液在磁场中放置12～18min，待所述羧基磁珠沉降后用磁微粒缓冲液洗1～3遍，随后定容至1.8～2.2mg/mL，2～8℃保存待用；
所述发光底物通过包括用ALPS发光底物体积4～10倍的发光底物缓冲液将ALPS发光底物稀释的操作制备而成。
2.根据权利要求1所述的中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述含蛋白的缓冲液包括按体积百分比计的以下组分：BSA6％、防腐剂四环素0.01～0.05％和硫酸新霉素0.1～0.5％；所述含蛋白的缓冲液经过0.22μm滤膜过滤处理。
3.根据权利要求1所述的中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述含Tris的缓冲液中包括按体积百分比计的四环素0.01～0.05％和硫酸新霉素0.1～0.5％，所述含Tris的缓冲液经过0.22μm滤膜过滤处理。
4.根据权利要求1所述的中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述抗试剂缓冲液为pH值为5～6的PBS体系；所述抗试剂缓冲液包括纯化水1L、Na2PO3H·12H2O10～20g、NaPO3H2·12H2O1～2g、绵羊血清1～5g、新生牛血清3～10g和马血清1～5g。
5.根据权利要求1所述的中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述表面活性剂选自Tween20、TritonX-100、Bronidox中的一种或多种，所述表面活性剂在所述Tris盐缓冲液中体积百分比为0.01～0.5％。
6.根据权利要求1所述的中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述Tris盐缓冲液中包括Tris盐0.1～0.5mM，还包括按体积百分比计的：四环素0.01～0.05％、绵羊血清1～5％、新生牛血清3～10％和马血清1～5％。
7.根据权利要求1所述的中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述发光底物缓冲液中包括按体积百分比计的以下组分：Tris0.1～1M、亚硫酸钠0.1％、SDS1％、光泽精0.3％、牛血清白蛋白0.15％；所述发光底物缓冲液的pH为9.5。
8.根据权利要求1所述的中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述清洗液通过将150～170gNaCl、3～5gKCl、24～24.4g三羟甲基氨基甲烷、0.8～1.2mL吐温20溶于900ml双蒸水中，再用HCl调整至pH7.2～7.6，最后用双蒸水定容至1000ml制备而成。
9.如权利要求1～8任一项所述的中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白检测试剂盒的用法，其特征在于：包括以下步骤：
Se1：取三支试管分别加15μL所述校准品、15μL所述质控品、15μL待测样本；
Se2：向每支试管中加入60μL抗试剂，用塑料薄膜覆盖试管，轻轻振荡试管30s，置于37℃下水浴5min；
Se3：再向每支试管中加入30μL磁微粒试剂，用塑料薄膜覆盖试管，轻轻振荡试管30s，置37℃下水浴5min；
Se4：将所有试管在磁分离器上沉淀3min，缓慢地倒转所述试管和所述磁分离器，倒出上清液；把倒转的所述试管连同所述磁分离器一起，放在滤纸上，拍击所述磁分离器底部除去粘在管壁上的所有液滴；
Se5：向每支试管中加入300μL所述清洗液，用塑料薄膜覆盖试管，轻轻振荡试管30s，混匀后缓慢的倒转试管和磁分离器，倒出上清液，把倒转的所述试管连同所述磁分离器一起，放在滤纸上，用力拍击分离器底部以除去粘在管壁上的所有液滴；
Se6：重复Se5的操作0～3次；
Se7：向每支试管中加入200μL所述发光底物，振荡混匀3s，用化学发光仪检测发光强度。
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20170305983A1 (en) * 2015-02-10 2017-10-26 Shenzhen New Industries Biomedical Engineering Co., Ltd Cardiac troponin i ultra-sensitive detection reagent kit, and ultra-sensitive detection method therefor
CN107966432A (zh) * 2017-11-28 2018-04-27 泰州泽成生物技术有限公司 一种测定可溶性生长刺激表达基因2蛋白含量的试剂盒及其测试方法
CN108205059A (zh) * 2017-11-28 2018-06-26 泰州泽成生物技术有限公司 一种测定降钙素含量的试剂盒及其测试方法
CN109212181A (zh) * 2018-08-17 2019-01-15 泰州泽成生物技术有限公司 一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒及其制备方法和使用方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20170305983A1 (en) * 2015-02-10 2017-10-26 Shenzhen New Industries Biomedical Engineering Co., Ltd Cardiac troponin i ultra-sensitive detection reagent kit, and ultra-sensitive detection method therefor
CN107966432A (zh) * 2017-11-28 2018-04-27 泰州泽成生物技术有限公司 一种测定可溶性生长刺激表达基因2蛋白含量的试剂盒及其测试方法
CN108205059A (zh) * 2017-11-28 2018-06-26 泰州泽成生物技术有限公司 一种测定降钙素含量的试剂盒及其测试方法
CN109212181A (zh) * 2018-08-17 2019-01-15 泰州泽成生物技术有限公司 一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒及其制备方法和使用方法

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