CN111281832B - 一种皮肤屏障修护复合物、化妆水及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种皮肤屏障修护复合物、化妆水及其制备方法。所述皮肤屏障修护复合物包括：修复皮肤屏障的组合物、根瘤菌胶、软毛松藻提取物、银耳提取物、苦参根提取物、胀果甘草根提取物和山茶花提取物；所述修复皮肤屏障的组合物包括：海茴香愈伤组织培养物滤液、四氢甲基嘧啶羧酸和水解红藻提取物。本发明所述皮肤屏障修护复合物各组分配伍合理，具有协同增效作用，能够避免皮肤过度角质化的功效，同时能够抑制油脂分泌，抑制皮脂的分泌，持久的控油收敛，提高皮肤保湿度，调节皮肤水油平衡。由此制得的化妆水可调节皮脂分泌，补水保湿，还能够舒缓敏感肌肤，抗过敏反应，修护肌肤屏障功效。

Description

一种皮肤屏障修护复合物、化妆水及其制备方法
技术领域
本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种皮肤屏障修护复合物、化妆水及其制备方法。
背景技术
人们长期面对电子设备如电脑、手机等受到辐射，熬夜、睡眠不足等生活作息，长时间待在空调房，导致肌肤肌肤缺乏水分、皮肤油水失衡，从而使肌肤油脂分泌旺盛，影响美观。因而，人们越来越注重皮肤的保养，而“缺水”是肌肤越变越糟及老化的最主要元凶之一，补水保湿不只是敏感肌肤的专利，各种皮肤都会因为环境、年龄、营养、健康等因素而缺水，当人体皮肤的角质层水分含量低于10％时，皮肤就会失去细柔、弹性、继而变得粗糙、干燥、出现各种皮肤异常，若长期得不到纠正，皮肤容易老化、长斑变得敏感，所以抗衰的同时也要注意补水。
化妆水也称柔肤水、收敛水，女性常用的美容化妆品之一。它是一种透明液态的化妆品，涂抹于皮肤的表面，用来清洁肌肤、保持肌肤健康，主要用于肌肤二次清洁和补水。它的作用就在于再次清洁以恢复肌肤表面的酸碱值，并调理角质层，使肌肤更好地吸收，并为使用保养品作准备。所以洗完脸之后，使用化妆水，可以迅速补充水分。化妆水对肌肤的保湿是不可缺少的。我们的皮肤常常比较油腻和黄暗、干燥大都因为补水不足。而毛孔粗大的主要原因是皮脂分泌过度、水份量少，水油分量失去了均衡，加上外油内干的肌肤状况，也会使原本细致的毛孔变得粗大。所以补水、保湿对皮肤的保养非常重要。
CN109793693A公开了一种植物滋润熬夜化妆水及其制备方法，由以下组分制成：水、丁二醇、二甘油、透明质酸钠、聚丙烯酸钠、黄原胶、银耳多糖、银耳提取物、维生素C磷酸酯镁、雪莲花提取物、高山火绒草提取物、芦苇提取物、甘草根提取物、当归根提取物、丹参根提取物、山茱萸果提取物、枸杞根提取物、对羟基苯乙酮、1,2-己二醇；该化妆水对肌肤补水，抑制酪氨酸酶活性，提亮均匀肤色，促进新陈代谢，使肌肤得到保护。
CN109966218A公开了一种利于皮肤退红的化妆水，该化妆水由下述重量份配比的原料制成：冬凌草30-50份、黄芪12-16份、绿豆12-20份、马齿苋15-25份、薄荷4-6份、芦荟10-30份、金缕梅10-20份、甘草13-23份、枳实6-12份、海茴香精华素0.5-0.9份、透明质酸钠0.05-0.09份、聚谷氨酸0.03-0.07份。该化妆水能够有效缓解红血丝皮肤，滋养肌肤，修复受损组织细胞的同时有效修复红血丝。
因此，有待于研发具有更好的补水保湿、修护屏障、舒缓敏感的护肤产品，以满足市场需求。
发明内容
本发明的目的在于提供一种皮肤屏障修护复合物、化妆水及其制备方法。所述皮肤屏障修护复合物可调节皮脂分泌，补水保湿，使肌肤达到油水平衡，还能够舒缓敏感肌肤，修护肌肤屏障功效。
为达此目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供了一种皮肤屏障修护复合物，所述皮肤屏障修护复合物包括：修复皮肤屏障的组合物、根瘤菌胶、软毛松藻提取物、银耳提取物、苦参根提取物、胀果甘草根提取物和山茶花提取物；
所述修复皮肤屏障的组合物包括：海茴香愈伤组织培养物滤液、四氢甲基嘧啶羧酸和水解红藻提取物。
本发明中，所述皮肤屏障修护复合物包括：修复皮肤屏障的组合物、根瘤菌胶、软毛松藻提取物、银耳提取物、苦参根提取物、胀果甘草根提取物和山茶花提取物，各组分配伍合理，具有协同增效作用，能够避免皮肤过度角质化的功效，同时能够抑制油脂分泌，抑制皮脂的分泌，持久的控油收敛，提高皮肤保湿度，调节皮肤水油平衡，补水保湿，舒缓敏感肌肤，抗过敏反应，从而有效增强皮肤屏障功能。
本发明中，所述修复皮肤屏障的组合物中海茴香愈伤组织培养物滤液、四氢甲基嘧啶羧酸和水解红藻提取物相互配合，协同增效，从而全面修复皮肤屏障。通过修护角质屏障、修护免疫屏障及增强微生态屏障，将有害侵扰因素隔绝在皮肤之外，构筑完整健康的肌肤防御线，从根本上解决各种皮肤问题。此外，所述修复皮肤屏障的组合物还具有抗炎舒缓的功效，对于皮肤的炎症反应和不适症状进行快速有效地安抚，维持皮肤的稳态与基础健康。
其中，所述海茴香愈伤组织培养物滤液为精选珍稀盐土植物海茴香，经特殊工艺培养出干细胞活性因子，有效调节角质更新，强化肌肤角质屏障，提升肌肤抵御力。所述四氢甲基嘧啶羧酸提取自沙漠盐湖带嗜盐菌维生因子，能够有效保护皮肤免疫屏障，使肌肤免受外界伤害，长葆青春活力。所述水解红藻提取物优选纯净海域的杜尔维利藻，有效改善皮肤微生态环境，使常驻菌群数量达到有益的均衡状态，令肌肤能够维持健康的代谢，达到理想的水润、光泽、健康状态。
所述根瘤菌胶一种经发酵得到的天然多聚糖，结构与DNA相似的双螺旋形，产生粘弹性能够吸取水分并形成糖膜，这种特殊糖膜的吸附和渗透作用可减轻红血丝、抗肌肤炎症，拥有优异的锁水和水份平衡能力，可明显舒缓皮肤。所述软毛松藻提取物其提取物主要成分为L-瓜氨酰胺基-L-精氨酸和半乳糖甘油，能促进表皮细胞水通道蛋白-3的合成，软毛松藻丙二醇，能从肌肤表层、中层、深层深入渗透保湿，从而增强皮肤的水循环和皮肤屏障功能。所述银耳提取物的银耳多糖分子中富含大量羟基、羧基等极性基团，可与水分子形成氢键，从而结合大量的水分，其分子间相互交织形成网状，与水分子中的氢结合，具有极强的锁水保湿性能。所述苦参根提取物能够平衡油脂分泌，疏通并收敛毛孔，清除皮肤内毒素杂质，丰富的本草营养，促进受损血管神经细胞的生长和修复，恢复皮下毛细血管细胞活力，肌肤重现紧致细滑。所述胀果甘草根提取物含三萜类化合物甘草甜素，具有抗炎、抗过敏及保护皮肤和身体膜结构等作用。所述山茶花提取物能增能够有效收缩毛孔，抑制皮肤油脂分泌，快速平衡肌肤细胞油水分泌的状态。
优选地，所述皮肤屏障修护复合物按重量份数计包括：修复皮肤屏障的组合物1-10份、根瘤菌胶1-10份、软毛松藻提取物1-5份、银耳提取物1-5份、苦参根提取物0.1-3份、胀果甘草根提取物0.1-3份和山茶花提取物0.1-3份。
所述皮肤屏障修护复合物中，修复皮肤屏障的组合物的重量份数为1-10份，例如可以是1份、2份、3份、4份、5份、6份、7份、8份、9份、10份等。
所述皮肤屏障修护复合物中，根瘤菌胶的重量份数为1-10份，例如可以是1份、2份、3份、4份、5份、6份、7份、8份、9份、10份等。
所述皮肤屏障修护复合物中，软毛松藻提取物的重量份数为1-5份，例如可以是1份、1.5份、2份、2.5份、3份、3.5份、4份、4.5份、5份等。
所述皮肤屏障修护复合物中，银耳提取物的重量份数为1-5份，例如可以是1份、1.5份、2份、2.5份、3份、3.5份、4份、4.5份、5份等。
所述皮肤屏障修护复合物中，苦参根提取物的重量份数为0.1-3份，例如可以是0.1份、0.5份、1份、1.5份、2份、2.5份、3份等。
所述皮肤屏障修护复合物中，胀果甘草根提取物的重量份数为0.1-3份，例如可以是0.1份、0.5份、1份、1.5份、2份、2.5份、3份等。
所述皮肤屏障修护复合物中，山茶花提取物的重量份数为0.1-3份，例如可以是0.1份、0.5份、1份、1.5份、2份、2.5份、3份等。
优选地，所述海茴香愈伤组织培养物滤液、四氢甲基嘧啶羧酸和水解红藻提取物的质量比为(3-9):(2-5):(1-3)。
其中，“3～9”可以是3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9等；
其中，“2～5”可以是2、2.2、2.5、2.8、3、3.2、3.5、3.8、4、4.2、4.5、4.8、5等；
其中，“1～3”可以是1、1.2、1.4、1.5、1.6、1.8、2、2.2、2.4、2.6、2.8、3等。
第二方面，本发明提供一种化妆水，所述化妆水包括如第一方面所述的皮肤屏障修护复合物。
优选地，所述化妆水按质量百分含量计包括：1-5％如第一方面所述的皮肤屏障修护复合物、1-10％皮肤调理剂、10-20％保湿剂和0.05-0.1％增稠剂，余量为水。
以所述化妆水总质量为100％计，第一方面所述的皮肤屏障修护复合物的含量为1-5％，例如可以是1％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％、5％等。
以所述化妆水总质量为100％计，皮肤调理剂的含量为1-10％，例如可以是1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％等。
以所述化妆水总质量为100％计，保湿剂的含量为10-20％，例如可以是10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％等。
以所述化妆水总质量为100％计，增稠剂的含量为0.05-0.1％，例如可以是0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、0.1％等。
优选地，所述皮肤调理剂包括羟基积雪草甙和/或透明质酸硅烷醇。羟基积雪草甙和透明质酸硅烷醇相互配合具有协同增效的作用，能够进一步在皮肤表面形成一层透气的保护膜，阻止皮肤内部水分蒸发，并贮存并释放皮肤屏障修护复合物中活性物质，以进一步提高保湿、舒敏和修复效果。
优选地，所述所述透明质酸硅烷醇由大分子透明质酸和硅烷三醇组成。
优选地，所述大分子透明质酸和硅烷三醇的质量比为(0.5-2):1，例如可以是0.5:1、0.6:1、0.8:1、1:1、1.2:1、1.4:1、1.6:1、1.8:1、2:1等。
优选地，所述大分子透明质酸的分子量为150万-180万道尔顿，例如可以是150万道尔顿、155万道尔顿、160万道尔顿、165万道尔顿、170万道尔顿、175万道尔顿、180万道尔顿。
优选地，所述保湿剂包括丁二醇、赤藓醇、透明质酸钠、糖类同分异构体(锁水磁石)、木糖醇、脱水木糖醇、木糖醇基葡糖苷、甘油或1,2-己二醇中的任意一种或至少两种的组合。
优选地，所述透明质酸钠的分子量为80万-100万道尔顿，例如可以是80万道尔顿、82万道尔顿、84万道尔顿、86万道尔顿、88万道尔顿、90万道尔顿、92万道尔顿、94万道尔顿、96万道尔顿、98万道尔顿、100万道尔顿。
优选地，所述增稠剂包括水解小核菌胶和/或卡波姆。
优选地，以所述化妆水总质量为100％计，所述化妆水还包括0.4-0.7％的抗氧化剂，例如可以是0.4％、0.45％、0.5％、0.55％、0.6％、0.65％、0.7％等。
优选地，所述抗氧化剂为对羟基苯乙酮。
优选地，以所述化妆水总质量为100％计，所述化妆水还包括0.01-0.05％的螯合剂，例如可以是0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％等。
优选地，所述螯合剂为EDTA二钠。
优选地，以所述化妆水总质量为100％计，所述化妆水还包括0.1-0.3％的pH调节剂，例如可以是0.1％、0.15％、0.2％、0.25％、0.3％等。
优选地，所述pH调节剂为三乙醇胺。
优选地，以所述化妆水总质量为100％计，所述化妆水还包括0.003-0.03％的增溶剂，例如可以是0.003％、0.005％、0.01％、0.015％、0.02％、0.025％、0.03％等。
优选地，所述增溶剂为PEG-40氢化蓖麻油。
优选地，以所述化妆水总质量为100％计，所述化妆水还包括0.001-0.01％的芳香剂，例如可以是0.001％、0.002％、0.004％、0.006％、0.008％、0.01％等。
优选地，所述芳香剂为香精。
第三方面，本发明提供一种如第二方面所述的化妆水的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
(1)将保湿剂、增稠剂和水混合，加热搅拌，得到混合液；
(2)将步骤(1)得到的混合液、第一方面所述的皮肤屏障修护复合物和皮肤调理剂，混合搅拌，过滤，得到所述化妆水。
优选地，步骤(1)中所述加热搅拌的温度为80-85℃，例如可以是80℃、81℃、82℃、83℃、84℃、85℃等，所述加热搅拌的时间为5-10min，例如可以是5min、6min、7min、8min、9min、10min等。
优选地，步骤(2)中所述混合搅拌的温度为40-50℃，例如可以是40℃、42℃、44℃、46℃、48℃、50℃等，所述混合搅拌的时间为5-20min，例如可以是5min、6min、7min、8min、9min、10min、12min、14min、16min、18min、20min等。
优选地，步骤(2)中所述过滤采用滤布进行过滤，所述滤布的孔径为100-300目，例如可以是100目、120目、140目、160目、180目、200目、220目、240目、260目、280目、300目等，优选为200目。
优选地，所述化妆水的制备方法包括以下步骤：
(1)将保湿剂、增稠剂、螯合剂和水混合，加热至80-85℃搅拌5-10min，得到混合液；
(2)将步骤(1)得到的混合液、第一方面所述的皮肤屏障修护复合物、皮肤调理剂、抗氧化剂、pH调节剂、增溶剂和芳香剂，在40-50℃下混合搅拌5-20min，使用100-300目的滤布过滤，得到所述化妆水。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明所述皮肤屏障修护复合物各组分配伍合理，具有协同增效作用，能够避免皮肤过度角质化的功效，同时能够抑制油脂分泌，抑制皮脂的分泌，持久的控油收敛，提高皮肤保湿度，调节皮肤水油平衡，同时还具有舒缓敏感和抗过敏的功效。
(2)本发明所述化妆水可调节皮脂分泌，补水保湿，还能够舒缓敏感肌肤，抗过敏反应，有效地修护肌肤屏障。其中，所述皮肤调理剂可改善面部肌肤新陈代谢的效果，能够很好地保存所述皮肤屏障修护复合物中活性成分，使得活性物质能尽快的被皮肤吸收，促进皮肤角质层更新；所述增稠剂成分协同所述皮肤屏障修护复合物构成高度锁水保湿三维网状结构，提供活性的贮存作用，稳定提供保湿效果，形成经皮失水屏障。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述应用实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
下述应用实施例中提供的修复皮肤屏障的组合物均由下述制备方法得到：
制备例1
本制备例制备一种海茴香愈伤组织培养物，所述海茴香愈伤组织培养物滤液的制备方法包括以下步骤：
(1)愈伤组织诱导培养：将海茴香外植体接种到琼脂培养基中进行愈伤组织诱导培养，所述诱导培养的温度为20℃，所述诱导培养的时间为14天，得到愈伤组织；
(2)愈伤组织颗粒悬浮培养：将步骤(1)得到的愈伤组织接种到MS培养基中，在振荡培养箱中以100r/min转速进行震荡培养，所述震荡培养的温度为20℃，所述震荡培养的时间为14天，得到增殖愈伤组织；
(3)愈伤组织扩大培养：将步骤(2)得到的增殖愈伤组织接种至无菌细胞袋中进行扩大培养，所述扩大培养的温度为25℃，所述扩大培养的时间为24天，得到所述海茴香愈伤组织培养物；
(4)分离：将步骤(3)得到的海茴香愈伤组织培养物通过100目的纱布进行过滤，再在25℃下进行真空干燥，得到所述茴香愈伤组织培养物滤液。
制备例2
本制备例制备四氢甲基嘧啶羧酸，所述四氢甲基嘧啶羧酸的制备方法包括以下步骤：
(A)沙漠嗜盐细菌的培养：将沙漠嗜盐细菌接种于SCDLP液体培养基中，在振荡培养箱中以1000r/min的转速进行培养，所述培养的温度为20℃，所述培养的时间为48h，得到沙漠嗜盐细菌菌体；
(B)渗透压冲击：将步骤(A)得到的沙漠嗜盐细菌菌体重悬于高渗透压溶液(所述高渗透压溶液按质量百分比计包括：18％的蔗糖、0.1％的EDTA，余量为水)中浸泡1h，过滤，得到沉淀沙漠嗜盐细菌菌体；
(C)电渗析：将步骤(B)得到的沙漠嗜盐细菌菌体通过电渗析处理，得到四氢甲基嘧啶羧酸。
制备例3
本制备例制备一种水解红藻提取物，所述水解红藻提取物的制备方法包括包括以下步骤：
(a)提取：将杜尔维利藻清洗，粉碎并过100-200目筛，得到红藻粉；向红藻粉中加入水在70℃下进行一次提取，所述一次提取的时间为10h，所述水和红藻粉的质量比为20:1，得到一次提取液，将一次提取液过滤后浓缩，再加入体积比浓度为80％的乙醇水溶液进行二次提取，静置取沉淀，得红藻多糖粗料；
(b)水解：将步骤(a)得到的红藻多糖粗料加水溶解后，加入30wt％的过氧化氢水溶液，50℃下混合搅拌1h，得到水解红藻提取液；
(c)超滤：将步骤(b)得到的水解红藻提取液通过超滤膜处理浓缩脱盐，所述超滤的时间30min，所述超滤的温度30℃，得到水解红藻提取物。
制备例4
本制备例提供一种修复皮肤屏障的组合物，所述修复皮肤屏障的组合物的制备方法为：取制备例1的海茴香愈伤组织培养物滤液7份、制备例2的四氢甲基嘧啶羧酸3份和制备例3的水解红藻提取物2份，在20℃下混合搅拌20min，得到所述修复皮肤屏障的组合物。
实施例1
本应用实施例提供一种皮肤屏障修护复合物，所述皮肤屏障修护复合物按重量份数计包括：修复皮肤屏障的组合物6、根瘤菌胶4、软毛松藻提取物3、银耳提取物3、苦参根提取物2、胀果甘草根提取物1和山茶花提取物1。
实施例2
本应用实施例提供一种皮肤屏障修护复合物，所述皮肤屏障修护复合物按重量份数计包括：修复皮肤屏障的组合物5、根瘤菌胶5、软毛松藻提取物4、银耳提取物4、苦参根提取物1、胀果甘草根提取物0.5和山茶花提取物0.5。
实施例3
本应用实施例提供一种皮肤屏障修护复合物，所述皮肤屏障修护复合物按重量份数计包括：修复皮肤屏障的组合物3、根瘤菌胶7、软毛松藻提取物2、银耳提取物2、苦参根提取物2、胀果甘草根提取物2和山茶花提取物2。
实施例4
本应用实施例提供一种皮肤屏障修护复合物，所述皮肤屏障修护复合物按重量份数计包括：修复皮肤屏障的组合物10、根瘤菌胶1、软毛松藻提取物1、银耳提取物1、苦参根提取物3、胀果甘草根提取物3和山茶花提取物3。
实施例5
本应用实施例提供一种皮肤屏障修护复合物，所述皮肤屏障修护复合物按重量份数计包括：修复皮肤屏障的组合物1、根瘤菌胶10、软毛松藻提取物5、银耳提取物5、苦参根提取物0.5、胀果甘草根提取物0.2和山茶花提取物0.3。
对比例1-7
对比例1-7提供皮肤屏障修护复合物，按重量份数计各应用对比例的配方如下表1所示(如表中“5”代表该对应组分的含量为5重量份)：
表1
Figure GDA0003508884200000121
应用实施例1
本应用实施例提供一种化妆水，所述化妆水按质量百分含量计包括如下组分：
Figure GDA0003508884200000122
所述化妆水的制备方法包括以下步骤：
(1)将上述保湿剂、增稠剂、螯合剂和水混合，加热至82℃搅拌8min，得到混合液；
(2)将步骤(1)得到的混合液、上述皮肤屏障修护复合物、皮肤调理剂、抗氧化剂、pH调节剂、增溶剂和芳香剂，在45℃下混合搅拌10min，使用200目的滤布过滤，得到所述化妆水。
应用实施例2-5
本应用实施例提供一种化妆水，与应用实施例1相比区别仅在于，将实施例1制备的皮肤屏障修护复合物分别替换为实施例2-5制备的皮肤屏障修护复合物，其余组分含量及制备方法同应用实施例1。
应用实施例6
本应用实施例提供一种化妆水，与应用实施例1相比区别仅在于，皮肤调理剂中不添加羟基积雪草甙，所述透明质酸硅烷醇含量增至2.6％(60万道尔顿的大分子透明质酸含量为1.3％、硅烷三醇含量为1.3％)，其余组分含量及制备方法同应用实施例1。
应用实施例7
本应用实施例提供一种化妆水，与应用实施例1相比区别仅在于，皮肤调理剂中不添加透明质酸硅烷醇，所述羟基积雪草甙含量增至2.6％，其余组分含量及制备方法同应用实施例1。
应用实施例8
本应用实施例提供一种化妆水，与应用实施例1相比区别仅在于，增稠剂中不添加水解小核菌胶，所述卡波姆含量增至0.3％，其余组分含量及制备方法同应用实施例1。
应用实施例9
本应用实施例提供一种化妆水，与应用实施例1相比区别仅在于，增稠剂中不添加卡波姆，所述水解小核菌胶含量增至0.3％，其余组分含量及制备方法同应用实施例1。
应用对比例1
本应用对比例提供一种化妆水，与应用实施例1相比，不添加实施例1制备的皮肤屏障修护复合物，缺少部分以水补至100％，其余组分含量及制备方法同应用实施例1。
应用对比例2-8
本应用对比例提供一种化妆水，与应用实施例1相比，将实施例1制备的皮肤屏障修护复合物分别替换为对比例1-7制备的皮肤屏障修护复合物，其余组分含量及制备方法同应用实施例1。
试验例1
安全性能测试
对应用实施例1-9提供的化妆水和应用对比例1-8提供的化妆水进行安全性能测试，方法如下：
(1)红细胞溶血实验
红细胞悬液的制备：选择健康家兔，心脏取血9mL，加入2％的草酸钾溶液1mL，离心，弃去上清液，用20mmol/L的PBS溶液将沉淀物稀释至20mL，4℃保存备用。选择样品用PBS溶液稀释至不同浓度，每个样品设置5个浓度梯度。取10mL待测样品的稀释液，加入200μL上述红细胞悬液(控制样品终浓度分别为5、10、20、50、100mg/mL)，以蒸馏水作为全溶血对照，PBS溶液作为阴性对照，轻轻混匀，37℃下孵育30min，在2000r/min的转速下离心10min，取上清液，用分光光度计测试其在560nm处的吸光度(A560)，按如下公式计算溶血率；
Figure GDA0003508884200000151
绘制溶血率-样品浓度标准曲线，计算50％红细胞发生溶血时的样品浓度(HD50)。
(2)蛋白变性实验：
将样品用PBS溶液稀释至10g/L，取10mL待测样品的稀释液，加入200μL上述红细胞悬液，以蒸馏水作为空白对照，1mg/mL十二烷基硫酸钠(SDS)溶液作为阳性对照，轻轻混匀，37℃下孵育30min，在2000r/min的转速下离心10min，取上清液，用分光光度计分别测试其在540nm和575nm处的吸光度A540和A575，按照如下公式计算蛋白变性指数(DI)；
Figure GDA0003508884200000152
其中，R1＝空白对照组A575/空白对照组A540，R2＝实验组A575/实验组A540，R3＝阳性对照组A575/阳性对照组A540。
根据L/D值对待测样品的刺激性进行评价，其中L/D值为HD50/DI，红细胞溶血实验刺激性分级标准如下表2所示：
表2
Figure GDA0003508884200000153
Figure GDA0003508884200000161
上述红细胞溶血实验和蛋白变性实验的测试结果如下表3所示：
表3
测试样品 HD<sub>50</sub>(mg/L) DI(％) L/D 评价
应用实施例1 37055 0.58 >100 无刺激性
应用实施例2 37780 0.62 >100 无刺激性
应用实施例3 37400 0.59 >100 无刺激性
应用实施例4 36423 0.62 >100 无刺激性
应用实施例5 36517 0.66 >100 无刺激性
应用实施例6 35965 0.68 >100 无刺激性
应用实施例7 34085 0.67 >100 无刺激性
应用实施例8 35721 0.70 >100 无刺激性
应用实施例9 33235 0.69 >100 无刺激性
应用对比例1 4339 90.82 10<L/D≤100 微刺激性
应用对比例2 22901 2.03 >100 无刺激性
应用对比例3 25821 2.45 >100 无刺激性
应用对比例4 26328 2.82 >100 无刺激性
应用对比例5 25563 2.58 >100 无刺激性
应用对比例6 27427 1.98 >100 无刺激性
应用对比例7 24713 1.93 >100 无刺激性
应用对比例8 24713 1.85 >100 无刺激性
由安全性能测试可知，由上述试验结果可知，本发明应用实施例1-9所制备的化妆水温和无刺激；本发明所制备的化妆水的50％红细胞发生溶血时的样品浓度HD50在30000mg/L以上，大于应用对比例1-8制备的化妆水的HD50，同时蛋白质变性指数DI均在0.70％以下，亦明显小于应用对比例1-8制备的化妆水，说明本发明所述化妆水能够显著降低毒副作用和刺激性，更加安全可靠。
试验例2
对应用实施例1～9和应用对比例1～8提供的化妆水进行保湿性能测试，方法如下：
(1)体外称重法保湿性能测试
称取样品0.2g，分别均匀涂敷在贴有微孔通气胶带的5cm×5cm的玻璃板上，并将玻璃板放入恒温恒湿的干燥器中，分别称量玻璃板放置4h后的质量，计算其保湿率。保湿率计算公式为：
保湿率/％＝(M2-M0)/(M1-M0)×100％。
其中，M0为玻璃板板质量/g，M1为加样后玻璃板质量/g，M2为干燥器中放置若干小时后玻璃板质量/g。
(2)经皮失水变化率
选取85名皮肤健康的18-40岁的志愿者，男女比例各占一半，随机分成17组，每组5名，分别使用应用实施例1～9和应用对比例1～17提供的化妆水。测试仪器为德国CK公司的Tewameter TM300，测试外部环境：室温25℃，湿度60％。
在使用前皮肤组合物前，以及连续使用4天后，分别测试各位受试者的经皮失水变化率，每个数据测试三次，取平均值后，计算每组平均值，保留小数点后一位。
(3)水分保持率
选取250名皮肤健康的18-40岁的志愿者，男女比例各占一半，随机分成25组，每组5名男性、5名女性，分别应用实施例1～9和应用对比例1～8提供的化妆水。仪器为德国Courage+Khazaka electronic型号：Derma Unit SSC，测试温度25℃，湿度60％。
在使用前以及使用4h后分别测试各位受试者的皮肤水分含水量，每个数据测试三次，取平均值后，计算每组平均值，保留小数点后一位，测试结果如表4所示。
表4
Figure GDA0003508884200000181
Figure GDA0003508884200000191
由上表数据可知，本发明提供的化妆水保湿效果较好，其保湿率在75％以上，经皮失水变化率较小，维持在15％以下，使用4h后皮肤水分含水量在43％，本发明所述皮肤屏障修护复合物各组分配伍合理，具有协同增效作用，能够避免皮肤过度角质化的功效，提高皮肤保湿度，使用本发明所述化妆水后皮肤能够保持水润，有助于干性纹淡化。此外，由应用实施例1和应用对比例6-9的对比可知，缺少皮肤调理剂和增稠剂中中任一成分时，由于不能很好地在皮肤上构成高度锁水保湿三维网状结构并提供活性的贮存载体，所以保湿效果略有下降。
试验例3
对应用实施例1～9和应用对比例1～8提供的化妆水进行控油性能测试，方法如下：
(1)皮脂水平(CSL)测试：选取85名志愿者，年龄16-50岁，筛选条件为：清晨洁面三小时后皮脂水平≥180μg/cm2。随机分成17组，清洁面部后，每组分别取适量样品涂抹至前额，轻拍吸收即可，每日早晚各使用一次。采用皮脂测试分析仪，测试第4周皮脂水平(CSL)，取使用者测试结果平均值，以测试区域清洁后30min的皮脂水平为初始值。
(2)活跃毛孔数量(NAP)和皮肤表面皮脂百分比(SSP)测试：选取85名志愿者，年龄16-50岁，男女不限，筛选条件为：清晨洁面三小时后皮脂水平≥180μg/cm2。随机分成17组，清洁面部后，每组分别取样品涂抹至前额，轻拍吸收即可，每日早晚各使用一次。采用活性皮肤表面分析系统，测试第4周活跃毛孔数量(NAP)和皮肤表面皮脂百分比(SSP)，取使用者测试结果平均值，以测试区域清洁后30min的活跃毛孔数量(NAP)和皮肤表面皮脂百分比(SSP)为初始值。
具体测试结果如表5所示：
表5
Figure GDA0003508884200000201
Figure GDA0003508884200000211
由表5的测试可看出，应用实施例1-9制备的化妆水和应用对比例1-8制备的化妆水对皮脂水平均有降低效果，但应用实施例1-9制备的化妆水对皮脂水平降低程度，皮脂水平降低程度在-20～-30％之间，活跃毛孔数量降低程度在-24～-32％之间，皮肤表面皮脂百分比降低程度在-35～-45％之间，这说明本发明所述皮肤屏障修护复合物各组分配伍合理，具有协同增效作用，能够避免皮肤过度角质化的功效，同时能够抑制油脂分泌，抑制皮脂的分泌，持久的控油收敛，提高皮肤保湿度，调节皮肤水油平衡。
试验例4
透明质酸酶体外抑制试验测定抗过敏功效
1、实验原理
透明质酸是组织基质中限制水分和其他胞外物质扩散的成分，被透明质酸酶水解后，细胞间则变为非黏性，引起细胞脱颗粒和合成的新介质渗出，发挥生物效应，导致速发型过敏反应的发生。透明质酸酶是过敏反应的参与者，其与过敏有强相关性，因此常用受试物对透明质酸酶的一直成都来反映其对Ⅰ型超敏反应的缓解和改善作用。
2、试剂配制
(1)透明质酸酶：用醋酸缓冲溶液做溶剂配制浓度500μ/mL透明质酸酶，要现配现用，不能过夜。
(2)透明质酸钾：用醋酸缓冲溶液做溶剂配制浓度0.5mg/mL透明质酸钾
(3)缓冲溶液(Buffer)：溶液A(0.2mol/L醋酸，即11.55mL冰醋酸溶于1000mL蒸馏水中)4.8mL，溶液B(0.2mol/L的醋酸钠，即16.4克CH3COONa或者27.2克CH3COONa·3H2O溶于1000ml蒸馏水中)45.2mL，混合，稀释成100mL，配成pH＝5.6的醋酸缓冲液。
(4)乙酸丙酮溶液：50mL 1.0mol/L碳酸钠溶液和3.5mL乙酰丙酮溶液混合均匀。
(5)对二甲氨基苯甲醛显色剂的配制：0.8g对二甲氨基苯甲醛和15mL HCl以及无水乙醇混合均匀使用。
(6)CaCl2溶液：2.5moL/L。
(7)NaOH溶液：5moL/L。
3、实验步骤：
取0.1mL CaCl2溶液(0.25mmol/L)和0.5mL透明质酸酶液(100μ/mL)于37℃水浴反应20min；加入样品液0.5mL，保温20min；再加入0.5mL透明质酸钠溶液(0.5g/L)，反应30min后取出冷却5min；加入0.1mL氢氧化钠溶液(0.4mol/L)和0.5mL乙酰丙酮溶液(3.5mL乙酰丙酮溶于50mL的1.0mol/L碳酸钠溶液中)，沸水浴15min后立即转移至冰水浴5min；滴加1mL埃尔利希试剂(0.8g对-二甲基氨基苯甲醛溶于15mL浓盐酸和15mL无水乙醇中)，并用3mL无水乙醇稀释，室温放置20min显色，于540nm处测定其吸光度，并以质量分数为5％的甘草酸二钾溶液为阳性对照品。按照以下公式计算对透明质酸酶抑制率：
透明质酸酶抑制率＝{[(A－B)－(C－D)]/(A-B)}×100％
式中：A——对照溶液吸光度(用醋酸缓冲溶液代替样品溶液)；B——对照空白溶液吸光度(用醋酸缓冲溶液代替样品溶液及酶液)；C——样品溶液吸光度；D——样品空白溶液吸光度(用醋酸缓冲溶液代替酶液)。
4、测试样品
对应用实施例1～9和应用对比例1～8提供的化妆水进行透明质酸酶抑制率测试。
具体测试结果如表6所示。
表6
项目 透明质酸酶抑制率(％)
应用实施例1 85.02
应用实施例2 84.85
应用实施例3 85.25
应用实施例4 81.22
应用实施例5 80.59
应用实施例6 79.60
应用实施例7 79.22
应用实施例8 79.19
应用实施例9 78.42
应用对比例1 30.22
应用对比例2 44.21
应用对比例3 49.56
应用对比例4 44.46
应用对比例5 49.88
应用对比例6 47.55
应用对比例7 45.23
应用对比例8 42.11
由表6的测试数据可知，本发明所述提供的化妆水对透明质酸酶具有良好的抑制作用，其对透明质酸酶抑制率均达到78％以上，本发明所述皮肤屏障修护复合物各组分配伍合理，具有协同增效作用，对透明质酸酶抑制明显，能够大大提升肌肤的抗过敏能力，起到舒缓敏感肌肤的功效。
申请人声明，本发明通过上述应用实施例来说明本发明的皮肤屏障修护复合物、化妆水及其制备方法，但本发明并不局限于上述详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (25)

1.一种皮肤屏障修护复合物，其特征在于，所述皮肤屏障修护复合物按重量份数计包括：修复皮肤屏障的组合物1-10份、根瘤菌胶1-10份、软毛松藻提取物1-5份、银耳提取物1-5份、苦参根提取物0.1-3份、胀果甘草根提取物0.1-3份和山茶花提取物0.1-3份；
所述修复皮肤屏障的组合物包括：海茴香愈伤组织培养物滤液、四氢甲基嘧啶羧酸和水解红藻提取物；所述海茴香愈伤组织培养物滤液、四氢甲基嘧啶羧酸和水解红藻提取物的质量比为(3-9):(2-5):(1-3)；
所述水解红藻提取物的制备方法包括以下步骤：
(a)提取：将杜尔维利藻清洗，粉碎并过100-200目筛，得到红藻粉；向红藻粉中加入水在70℃下进行一次提取，所述一次提取的时间为10h，所述水和红藻粉的质量比为20:1，得到一次提取液，将一次提取液过滤后浓缩，再加入体积比浓度为80％的乙醇水溶液进行二次提取，静置取沉淀，得红藻多糖粗料；
(b)水解：将步骤(a)得到的红藻多糖粗料加水溶解后，加入30wt％的过氧化氢水溶液，50℃下混合搅拌1h，得到水解红藻提取液；
(c)超滤：将步骤(b)得到的水解红藻提取液通过超滤膜处理浓缩脱盐，所述超滤的时间30min，所述超滤的温度30℃，得到水解红藻提取物；
所述海茴香愈伤组织培养物滤液的制备方法包括以下步骤：
(1)愈伤组织诱导培养：将海茴香外植体接种到琼脂培养基中进行愈伤组织诱导培养，所述诱导培养的温度为20℃，所述诱导培养的时间为14天，得到愈伤组织；
(2)愈伤组织颗粒悬浮培养：将步骤(1)得到的愈伤组织接种到MS培养基中，在振荡培养箱中以100r/min转速进行震荡培养，所述震荡培养的温度为20℃，所述震荡培养的时间为14天，得到增殖愈伤组织；
(3)愈伤组织扩大培养：将步骤(2)得到的增殖愈伤组织接种至无菌细胞袋中进行扩大培养，所述扩大培养的温度为25℃，所述扩大培养的时间为24天，得到所述海茴香愈伤组织培养物；
(4)分离：将步骤(3)得到的海茴香愈伤组织培养物通过100目的纱布进行过滤，再在25℃下进行真空干燥，得到所述茴香愈伤组织培养物滤液。
2.一种化妆水，其特征在于，所述化妆水包括如权利要求1所述的皮肤屏障修护复合物。
3.根据权利要求2所述的化妆水，其特征在于，所述化妆水按质量百分含量计包括：
1-5％权利要求1所述的皮肤屏障修护复合物、1-10％皮肤调理剂、10-20％保湿剂和0.05-0.1％增稠剂，余量为水。
4.根据权利要求3所述的化妆水，其特征在于，所述皮肤调理剂包括羟基积雪草甙和/或透明质酸硅烷醇。
5.根据权利要求4所述的化妆水，其特征在于，所述透明质酸硅烷醇由大分子透明质酸和硅烷三醇组成，所述大分子透明质酸的分子量为150万-180万道尔顿。
6.根据权利要求5所述的化妆水，其特征在于，所述大分子透明质酸和硅烷三醇的质量比为(0.5-2):1。
7.根据权利要求3所述的化妆水，其特征在于，所述保湿剂包括丁二醇、赤藓醇、透明质酸钠、糖类同分异构体、木糖醇、脱水木糖醇、木糖醇基葡糖苷、甘油或1,2-己二醇中的任意一种或至少两种的组合。
8.根据权利要求7所述的化妆水，其特征在于，所述透明质酸钠的分子量为80万-100万道尔顿。
9.根据权利要求3所述的化妆水，其特征在于，所述增稠剂包括水解小核菌胶和/或卡波姆。
10.根据权利要求3所述的化妆水，其特征在于，以所述化妆水总质量为100％计，所述化妆水还包括0.4-0.7％的抗氧化剂。
11.根据权利要求10所述的化妆水，其特征在于，所述抗氧化剂为对羟基苯乙酮。
12.根据权利要求3所述的化妆水，其特征在于，以所述化妆水总质量为100％计，所述化妆水还包括0.01-0.05％的螯合剂。
13.根据权利要求12所述的化妆水，其特征在于，所述螯合剂为EDTA二钠。
14.根据权利要求3所述的化妆水，其特征在于，以所述化妆水总质量为100％计，所述化妆水还包括0.1-0.3％的pH调节剂。
15.根据权利要求14所述的化妆水，其特征在于，所述pH调节剂为三乙醇胺。
16.根据权利要求3所述的化妆水，其特征在于，以所述化妆水总质量为100％计，所述化妆水还包括0.003-0.03％的增溶剂。
17.根据权利要求16所述的化妆水，其特征在于，所述增溶剂为PEG-40氢化蓖麻油。
18.根据权利要求3所述的化妆水，其特征在于，以所述化妆水总质量为100％计，所述化妆水还包括0.001-0.01的芳香剂。
19.根据权利要求18所述的化妆水，其特征在于，所述芳香剂为香精。
20.根据权利要求3所述的化妆水的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
(1)将保湿剂、增稠剂和水混合，加热搅拌，得到混合液；
(2)将步骤(1)得到的混合液、权利要求1-3中任一项所述的皮肤屏障修护复合物和皮肤调理剂，混合搅拌，过滤，得到所述化妆水。
21.根据权利要求20所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述加热搅拌的温度为80-85℃，所述加热搅拌的时间为5-10min。
22.根据权利要求20所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述混合搅拌的温度为40-50℃，所述混合搅拌的时间为5-20min。
23.根据权利要求20所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述过滤采用滤布进行过滤，所述滤布的孔径为100-300目。
24.根据权利要求23所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述过滤采用滤布进行过滤，所述滤布的孔径为200目。
25.根据权利要求20所述的化妆水的制备方法，其特征在于，所述化妆水的制备方法包括以下步骤：
(1)将保湿剂、增稠剂、螯合剂和水混合，加热至80-85℃搅拌5-10min，得到混合液；
(2)将步骤(1)得到的混合液、权利要求1-3中任一项所述的皮肤屏障修护复合物、皮肤调理剂、抗氧化剂、pH调节剂、增溶剂和芳香剂，在40-50℃下混合搅拌5-20min，使用100-300目的滤布过滤，得到所述化妆水。
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