CN111278969A - 保护性酶 - Google Patents

Abstract

本发明涉及对于保护聚合物免于由脂类(特别是来自分泌的生物学流体(如皮脂或汗液)的脂肪酸)造成的损害有用的包含酶和/或结合多肽的方法和组合物。

Description

保护性酶

相关申请的交叉引用

本申请要求于2017年9月12日提交的美国临时申请号62/557,544(其内容通过引用被整体并入本文)的优先权。

序列表

本说明书参考序列表(以命名为“Sequence_Listing_0174”的txt文件的形式通过电子方式递交)。txt文件于2018年9月12日生成，并且大小为73728字节。序列表的全部内容通过引用并入本文。

背景

聚合物材料可能容易受到污染物的降解的影响。

概述

本公开包含以下认识：某些酶和多肽可能对于中和(例如，防止或减轻)由脂类造成的对聚合物组合物的损害是有用的。暴露于某些含有脂类的分泌的生物学流体(例如，人汗液和皮肤油类)可以造成一些聚合物溶胀且降解。在一些实施方案中，本公开的酶便利脂类的降解，并且从而防止对聚合物结构的损害。在一些实施方案中，在本公开的上下文中有用的酶便利有害脂类(如脂肪酸)的降解。

本公开提供保护组合物的组分(例如，聚合物)免于脂类(例如，脂肪酸)和/或可能造成损害的其他化合物的损害的方法和组合物。在一些实施方案中，脂类和/或可能造成损害的其他化合物存在于生物学流体中。在一些实施方案中，提供方法和组合物，方法和组合物包含对于生物学流体中可能对聚合物造成损害的组分的分解有用的保护性酶。在一些实施方案中，提供方法和组合物，其中一种或更多种保护性酶包埋在组合物内。在一些实施方案中，提供方法和组合物，其中一种或更多种保护性酶被施加到组合物的表面(例如，作为覆层)。

在一些实施方案中，提供用于促进生物学流体中一种或更多种脂类(例如，脂肪酸)的分解的方法，方法包括使生物学流体与酶接触。在一些实施方案中，用于促进生物学流体中一种或更多种脂类的分解的方法包括使生物学流体与多种酶接触。

在一些实施方案中，提供用于抑制由暴露于脂肪酸造成的聚合物的溶胀的方法，方法包括使聚合物与酶接触。在一些实施方案中，方法包括使聚合物与多种酶接触。在一些实施方案中，方法包括将多种酶包埋在聚合物内。在一些实施方案中，方法包括用多种酶涂覆聚合物组合物。

在一些实施方案中，提供用于抑制由暴露于脂肪酸造成的聚合物的溶胀的方法。方法包括使聚合物与结合脂肪酸的多肽接触。在一些实施方案中，多肽与脂肪酸形成复合物。在一些实施方案中，与脂肪酸结合的多肽抑制脂肪酸的反应性。在一些实施方案中，多肽与脂肪酸结合，并且从而防止脂肪酸损害聚合物。在一些实施方案中，多肽抑制脂肪酸的扩散。

在一些实施方案中，提供包括包埋在聚合物中的酶的组合物。在一些实施方案中，组合物包括两种或更多种包埋在聚合物中的酶。在一些实施方案中，组合物包括聚合物和两种或更多种促进脂肪酸的分解的酶。

在一些实施方案中，提供组合物，组合物包括聚合物和一种或更多种促进脂肪酸的分解的酶和一种或更多种与脂肪酸形成复合物的多肽。在一些实施方案中，与脂肪酸结合的多肽抑制脂肪酸的反应性。在一些实施方案中，多肽与脂肪酸结合，并且从而防止脂肪酸损害聚合物。在一些实施方案中，多肽抑制脂肪酸的扩散。

在一些实施方案中，提供局部制剂，局部制剂包括一种或更多种促进脂肪酸的分解的酶。在一些实施方案中，提供局部制剂，局部制剂包括一种或更多种与脂肪酸形成复合物的多肽。

在一些实施方案中，提供组合物，组合物包括一种或更多种促进脂肪酸的分解的酶和一种或更多种与脂肪酸形成复合物的多肽。在一些实施方案中，与脂肪酸结合的多肽抑制脂肪酸的反应性。在一些实施方案中，多肽与脂肪酸结合，从而防止脂肪酸损害聚合物。在一些实施方案中，多肽抑制脂肪酸的扩散。

在一些实施方案中，生物学流体是由人分泌的。在一些实施方案中，生物学流体是人汗液，或者生物学流体包括人汗液。在一些实施方案中，生物学流体是皮脂，或者生物学流体包括皮脂。在一些实施方案中，生物学流体中的脂类是不饱和脂肪酸。在一些实施方案中，不饱和脂肪酸包含棕榈油酸、油酸、肉豆蔻脑酸、亚油酸、和/或花生四烯酸。在一些实施方案中，脂肪酸是油酸。在一些实施方案中，脂肪酸是亚油酸。在一些实施方案中，生物学流体包括多种待中和的脂肪酸。

在一些实施方案中，用于在本公开的方法或组合物中使用的酶包含双加氧酶、单加氧酶、血红素过氧化物酶、P450、及其组合和/或变体。在一些实施方案中，酶是双加氧酶。在一些实施方案中，酶是单加氧酶。在一些实施方案中，方法包括使体液与多种酶接触。

在一些实施方案中，酶是动物来源的。在一些实施方案中，酶是植物来源的。在一些实施方案中，酶是真菌来源的。在一些实施方案中，酶是细菌来源的。在一些实施方案中，酶是蓝细菌酶(cyanobacterial enzyme)。在一些实施方案中，酶来自古细菌(archaea)。

在一些实施方案中，酶催化β氧化或ω氧化。在一些实施方案中，酶在脂肪酸(例如，油酸)的10S-碳和/或12S-碳处催化氢过氧化。在一些实施方案中，用于在本公开的上下文中使用的酶不需要三磷酸腺苷(ATP)的催化活性。

在一些实施方案中，酶是脂加氧酶和/或具有脂加氧酶活性(例如，10S-LOX活性)。在一些实施方案中，用于在本公开的上下文中使用的酶是具有LOX活性(例如，10S-LOX活性)的蓝细菌酶或其变体。在一些实施方案中，蓝细菌前列腺素-内过氧化物合酶或其变体具有LOX活性(例如，10S-LOX活性)。在一些实施方案中，蓝细菌血红素过氧化物合酶或其变体具有LOX活性(例如，10S-LOX活性)。在一些实施方案中，具有LOX(例如，10S-LOX活性)催化活性的酶包括SEQ.ID NO:13-15中任一者的氨基酸序列。在一些实施方案中，具有LOX(例如，10S-LOX活性)催化活性的酶包括与SEQ ID NO:13-15中任一者至少约50％(例如，至少约55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％)一致的氨基酸序列。

在一些实施方案中，酶是脂加氧酶。在一些实施方案中，脂加氧酶具有10S-LOX活性。在一些实施方案中，10S-LOX包括SEQ ID NO:1-12中任一者的氨基酸序列。在一些实施方案中，10S-LOX酶具有与SEQ ID NO:1-12中任一者至少约50％(例如，至少约55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％)一致的氨基酸序列。在一些实施方案中，10S-LOX包括SEQ ID NO:13的氨基酸序列。在一些实施方案中，10S-LOX包括SEQ ID NO:14的氨基酸序列。在一些实施方案中，10S-LOX包括SEQ ID NO:15的氨基酸序列。在一些实施方案中，10S-LOX酶包括与SEQ ID NO:13-15中任一者至少约50％(例如，至少约55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％)一致的氨基酸序列。在一些实施方案中，酶是在脂肪酸的9位和/或13位处催化氢过氧化的脂加氧酶。在一些实施方案中，酶是在脂肪酸的9S位和/或13S位处催化氢过氧化的脂加氧酶。在一些实施方案中，酶是在脂肪酸的9R位和/或13R位处催化氢过氧化的脂加氧酶。

在一些实施方案中，酶被包埋在聚合物中。在一些实施方案中，酶被施加到聚合物的表面。在一些实施方案中，聚合物是装置的组分。在一些实施方案中，装置是电子装置。

附图的简要说明

由下列图片组成的本文所包含的附图仅用于说明目的，而非用于限制。

图1描绘了由LOX酶催化的化学反应和用于生成在酶测定期间检测到的产物的还原反应。

图2描绘了通过测定各种LOX酶对油酸的活性并且检测图1中所示的10-HOME产物而生成的酶活性数据。

图3描绘了代表性粘合剂在暴露于示例性脂肪酸油酸时的溶胀。X轴表示暴露后的小时数；Y轴表示粘合剂盘的相对面积。

图4描绘了在使用第二测定的情况下代表性粘合剂在暴露于示例性脂肪酸油酸时的溶胀。X轴表示暴露后的小时数；Y轴表示粘合剂盘的相对面积。

图5是说明某些酶与10S-LOX活性的相关性的示意图。

某些定义

为了可以更容易地理解本发明，下文首先定义某些术语。在整个说明书中阐明下列术语的附加定义和其他术语。

约：当在本文中用于对值的提及时，术语“约”指在上下文中与所提及的值类似的值。通常，熟悉上下文的本领域技术人员将理解在该上下文中“约”所包含的相关变化程度。例如，在一些实施方案中，术语“约”可以包含在所提及的值的25％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、或更小以内的一系列值。

可比较的：如本文所使用的，术语“可比较的”指两种或更多种剂、实体、状况、条件组等可以彼此不相同但充分相似以容许在其之间进行比较，使得本领域技术人员将理解：可以基于所观察到的差异或相似性合理地得出结论。在一些实施方案中，可比较的条件组、情况、个体、或群体的特征在于多个基本上相同的特征和一个或少量的不同的特征。本领域普通技术人员在上下文中将理解：在任何给定的情况下，两种或更多种这样的剂、实体、状况、条件组等需要多大程度的一致性来被认为是可比较的。例如，本领域普通技术人员将理解：当情况组、个体、或群体的特征在于足够数量和类型的基本上相同的特征以保证合理的结论(即，在不同情况组、个体、或群体下或者用不同情况组、个体、或群体所获得的结果差异或所观察到的现象差异是由那些不同特征中的变化造成的或者表明那些不同特征中的变化)时，情况组、个体、或群体彼此是可比较的。

设计的：如本文所使用的，术语“设计的”指(i)结构是经人工选择的；(ii)通过需要人工的过程产生的；和/或(iii)与天然物质和其他已知剂不同的剂。

工程化的：通常，术语“工程化的”指已经经人工操作的方面。例如，当在自然界中没有按该顺序连接在一起的两个或更多个序列经人工操作以在工程化的多核苷酸中彼此直接连接时，则认为多核苷酸是“工程化的”。相似地，如果细胞或生物体已经经操作使得其遗传信息改变(例如，已经通过例如转化、交配、体细胞杂交、转染、转导、或其他机制引入原先不存在的新遗传物质，或者通过例如置换或缺失突变、或通过交配方案而改变或移除原先存在的遗传物质)，则认为细胞或生物体是“工程化的”。正如本领域技术人员的习惯作法和所理解的，工程化的多核苷酸或细胞的后代通常仍被称为是“工程化的”，即使实际操作是在先前的实体上进行的。

酶：如本文所使用的，“酶”是催化一个或更多个生物化学反应的分子。在一些实施方案中，酶是多肽和/或RNA，或者酶包括多肽和/或RNA。在一些实施方案中，酶是多肽。在一些实施方案中，酶是多肽，并且多肽从约50个氨基酸残基至2500个氨基酸残基变化。酶可以根据其催化的反应进行分类。在一些实施方案中，酶包含氧化还原酶(例如，催化氧化/还原反应)、转移酶(例如，转移官能团(如，例如甲基或磷酸基团))、水解酶(例如，催化各种键的水解)、裂解酶(例如，通过除水解和氧化以外的手段切割各种键)、异构酶(例如，在单个分子内催化异构化变化)和连接酶(例如，用共价键将两个分子连接)。在一些实施方案中，酶类别或家族的成员显示出与该类别的参考酶(在一些实施方案中，与该类别内的全部酶)显著的序列同源性或序列一致性、与该类别的参考酶(在一些实施方案中，与该类别内的全部酶)共有共同的序列基序(例如，特征序列元件)、和/或与该类别的参考酶(在一些实施方案中，与该类别内的全部酶)共有共同的活性(在一些实施方案中，处于可比较的水平或者在指定范围内)。例如，在一些实施方案中，成员酶显示出与参考酶的序列同源性或序列一致性的总体程度(总体程度为至少约30-40％，并且通常大于约50％、60％、70％、80％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多)，和/或包含至少一个区(例如，保守区，在一些实施方案中，该保守区可以是特征序列元件，或者该保守区可以包括特征序列元件)，至少一个区显示出非常高的序列一致性(通常大于90％或甚至95％、96％、97％、98％、或99％)。这样的保守区通常包含至少3-4个氨基酸且通常多达20个或更多个氨基酸；在一些实施方案中，保守区包含至少2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15或更多个邻接的氨基酸的至少一个延伸。在一些实施方案中，适合于在本公开的上下文中使用的酶是动物来源的。在一些实施方案中，适合于在本公开的上下文中使用的酶是植物来源的。在一些实施方案中，适合于在本公开的上下文中使用的酶是真菌来源的。在一些实施方案中，适合于在本公开的上下文中使用的酶是细菌来源的。

功能性：如本文所使用的，“功能性”生物分子是形式为展现出表征其的性质和/或活性的生物分子。

同源性：如本文所使用的，术语“同源性”指聚合物分子之间(例如，核酸分子(例如，DNA分子和/或RNA分子)之间和/或多肽分子之间)的整体相关性。在一些实施方案中，如果聚合物分子的序列为至少25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、或99％一致的，则认为聚合物分子彼此“同源”。在一些实施方案中，如果聚合物分子的序列为至少25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、或99％相似的(例如，在相应位置处含有具有相关化学性质的残基)，则认为聚合物分子彼此“同源”。

人：在一些实施方案中，人是胚胎、胎儿、婴儿、儿童、青少年、成年人、或老年人。

一致性：如本文所使用的，术语“一致性”指聚合物分子之间(例如，核酸分子(例如，DNA分子和/或RNA分子)之间和/或多肽分子之间)的整体相关性。在一些实施方案中，如果聚合物分子的序列为至少25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、或99％一致的，则认为聚合物分子彼此“基本上一致”。例如，可以通过比对两个序列以用于最优比较目的(例如，可以在第一序列和第二序列中的一者或两者中引入空位以用于最优比对，并且可以忽略非一致序列以用于比较目的)来进行两个核酸或多肽序列的百分比一致性的计算。在某些实施方案中，被比对以用于比较目的的序列的长度是参考序列的长度的至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、或基本上100％。然后，比较相应位置处的核苷酸。当第一序列中的位置被与第二序列中的相应位置相同的残基(例如，核苷酸或氨基酸)占据时，则分子在该位置处是一致的。考虑到空位的数量和每个空位的长度(其需要被引入以用于两个序列的最优比对)，两个序列之间的百分比一致性是序列共有的一致位置的数量的函数。可以使用数学算法完成序列的比较和两个序列之间百分比一致性的确定。

多肽：如本文所使用的，指氨基酸的任何聚合链。在一些实施方案中，多肽具有天然存在的氨基酸序列。在一些实施方案中，多肽具有非天然存在的氨基酸序列。在一些实施方案中，多肽具有工程化的氨基酸序列，因为其通过人工作用而被设计和/或产生。在一些实施方案中，多肽可以包括天然氨基酸、非天然氨基酸、或天然氨基酸和非天然氨基酸两者，或者多肽可以由天然氨基酸、非天然氨基酸、或天然氨基酸和非天然氨基酸两者组成。在一些实施方案中，多肽可以包括D-氨基酸、L-氨基酸、或D-氨基酸和L-氨基酸两者。在一些实施方案中，多肽可以在多肽的N端处、在多肽的C端处、或其任何组合处包含例如修饰一个或更多个氨基酸侧链或者与一个或更多个氨基酸侧链连接的一个或更多个侧基或其他修饰。在一些实施方案中，这样的侧基或修饰可以选自由乙酰化、酰胺化、脂化、甲基化、聚乙二醇化等(包括其组合)组成的组。在一些实施方案中，有用的多肽可以包括亲本多肽的片段，或者有用的多肽可以由亲本多肽的片段组成。术语“肽”通常用于指具有小于约100个氨基酸、小于约50个氨基酸、小于20个氨基酸、或小于10个氨基酸的长度的多肽。

重组体：如本文所使用的，其旨在指通过重组手段设计、工程化、制备、表达、创建、制造、和/或分离的多肽，如使用转染到宿主细胞中的重组表达载体表达的多肽；从重组的组合人多肽库中分离的多肽；从动物(例如，小鼠、兔、羊、鱼等)中分离的多肽，所述动物是转基因的或者以其他方式已经被操纵来表达一个或多个基因、或基因组分，所述一个或多个基因、或基因组分编码和/或指导多肽或多肽的一个或更多个组分、一个或更多个部分、一个或更多个元件或一个或更多个域的表达；和/或通过任何其他手段制备、表达、创建或分离的多肽，所述任何其他手段涉及将所选择的核酸序列元件彼此剪接或连接、以化学方式合成所选择的序列元件、和/或以其他方式生成编码和/或指导多肽或多肽的一个或更多个组分、一个或更多个部分、一个或更多个元件或一个或更多个域的表达的核酸。在一些实施方案中，在自然中发现这样的经选择的序列元件中的一种或更多种。在一些实施方案中，经由电脑模拟设计这样的经选择的序列元件中的一种或更多种。在一些实施方案中，由例如来自天然来源或合成来源的已知序列元件的诱变(例如，体内或体外)产生这样的经选择的序列元件中的一种或更多种。

详细说明

本公开提供方法和组合物，方法和组合物保护组合物的组分(例如，聚合物)免于脂类(例如，脂肪酸)和/或可能造成损害的其他化合物的损害。本文还提供组合物、方法、系统和试剂盒，组合物、方法、系统和试剂盒包含催化、降解、修饰和/或螯合脂类的多肽和/或酶。

酶

在一些实施方案中，本文提供对于可能对组合物的组分(例如，聚合物)造成损害的化合物(例如，脂肪酸)的分解有用的酶。在一些实施方案中，用于在本公开的上下文中使用的酶包含双加氧酶、单加氧酶、血红素过氧化物酶、P450、及其组合和/或变体。在一些实施方案中，酶中的每种都可以降解不饱和脂肪酸。在一些实施方案中，酶特异性地降解一种或更多种不饱和脂肪酸。

在一些实施方案中，本公开的组合物和方法包括两种或更多种促进造成损害的化合物的分解的酶。在一些实施方案中，两种或更多种酶各自促进不饱和脂肪酸的分解。

在一些实施方案中，本公开的组合物和方法包括多种酶。在一些实施方案中，酶中的每种都可以降解不饱和脂肪酸。在一些实施方案中，多种酶中的每种都对一种或更多种不饱和脂肪酸展现出不同的底物特异性。

在一些实施方案中，酶是动物来源的。在一些实施方案中，酶是植物来源的。在一些实施方案中，酶是真菌来源的。在一些实施方案中，酶是细菌来源的。在一些实施方案中，酶是蓝细菌酶。在一些实施方案中，酶来自古细菌。

在一些实施方案中，酶催化β氧化或ω氧化。在一些实施方案中，酶催化脂肪酸的β氧化或ω氧化。在一些实施方案中，酶在脂肪酸的5-碳、8-碳、9-碳、10-碳、11-碳、12-碳、13-碳或15-碳处具有活性。在一些实施方案中，酶在脂肪酸的5R位、5S位、8R位、8S位、9R位、9S位、10S位、11R位、11S位、12R位、12S位、13R位、13S位、和/或15S位处具有活性。在一些实施方案中，酶在脂肪酸(例如，油酸)的10S-碳和/或12S-碳处具有活性。在一些实施方案中，用于在本公开的上下文中使用的酶不需要三磷酸腺苷(ATP)的催化活性。

在一些实施方案中，聚合物组合物包括按重量百分数计在从约0.0001％至约20％的范围内的酶。在一些实施方案中，聚合物组合物包括在由下限和上限(上限大于下限)限定的范围内的酶。在一些实施方案中，下限可以为约0.0001％、0.0002％、0.0005％、0.001％、0.002％、0.005％、0.01％、0.02％、0.05％、0.1％、0.2％、0.5％、1％、2％、5％、或10％。在一些实施方案中，上限可以为约0.0005％、0.001％、0.002％、0.005％、0.01％、0.02％、0.05％、0.1％、0.2％、0.5％、1％、2％、5％、10％、或20％。

脂加氧酶

在一些实施方案中，用于在本公开的上下文中使用的酶是脂加氧酶。脂加氧酶(LOX)酶催化脂肪酸底物(例如，亚油酸和花生四烯酸)的氧依赖性氧化，以形成氢过氧化-脂肪酸产物。LOX酶被分类为双加氧酶。已经从多种生物体中纯化出某些LOX酶，所述LOX酶表现出广泛的底物特异性和产物特异性(例如，脂肪酸内的氧化位点)。LOX酶在动物、植物和真菌以及蓝细菌中广泛表达。

本公开包含以下认识：脂加氧酶是适合用于不饱和脂肪酸(UFA)(如，例如油酸)的降解的一类酶。不希望受到理论的束缚，LOX酶可以将不饱和脂肪酸转化成氢过氧化物，如果氢过氧化物不稳定，则氢过氧化物可以在双键的位点处自发降解。在一些实施方案中，脂加氧酶可以在其活性位点处利用铁或锰。

在一些实施方案中，LOX不需要ATP或其他辅助因子的催化活性。本公开包含以下认识：对于某些应用，独立于ATP或其他辅因子的活性是期望的特性。

在一些实施方案中，适合于在本公开的上下文中使用的脂加氧酶是动物来源的。在一些实施方案中，适合于在本公开的上下文中使用的脂加氧酶是植物来源的。在一些实施方案中，适合于在本公开的上下文中使用的脂加氧酶是真菌来源的。在一些实施方案中，适合于在本公开的上下文中使用的脂加氧酶是细菌来源的。在一些实施方案中，适合于在本公开的上下文中使用的脂加氧酶是蓝细菌来源的。在一些实施方案中，适合于在本公开的上下文中使用的脂加氧酶来自古细菌。

在一些实施方案中，LOX可以催化脂肪酸底物的氢过氧化。在一些实施方案中，脂肪酸底物是不饱和脂肪酸。在一些实施方案中，LOX便利棕榈油酸、油酸、肉豆蔻脑酸、亚油酸和/或花生四烯酸的催化。

在一些实施方案中，LOX便利一种或更多种不饱和脂肪酸的部分降解或完全降解。在一些实施方案中，LOX便利棕榈油酸、油酸、肉豆蔻脑酸、亚油酸和/或花生四烯酸的部分降解或完全降解。

在一些实施方案中，LOX在脂肪酸的5-碳、8-碳、9-碳、10-碳、11-碳、12-碳、13-碳或15-碳处具有活性(即，可以催化氢过氧化)。在一些实施方案中，LOX在脂肪酸的5R位、5S位、8R位、8S位、9R位、9S位、10S位、11R位、11S位、12R位、12S位、13R位、13S位、和/或15S位处具有活性(即，可以催化氢过氧化)。

生物勘探鉴别以10-碳或12-碳LOX优先作用于油酸的LOX酶。在一些实施方案中，脂加氧酶在脂肪酸的10-碳位置处催化氢过氧化。在一些实施方案中，脂加氧酶在脂肪酸的12-碳位置处催化氢过氧化。在一些实施方案中，LOX在脂肪酸的10S-碳和/或12S-碳处催化氢过氧化(即，具有10S-LOX活性或12S-LOX活性)。

在一些实施方案中，脂加氧酶具有10S-LOX活性。在一些实施方案中，脂加氧酶是来自植物、真菌、细菌或古细菌的10S-LOX。在一些实施方案中，10S-LOX便利油酸的催化。在一些实施方案中，10S-LOX来自蓝细菌。在一些实施方案中，10S-LOX来自蓝细菌，并且便利油酸的催化。

LOX的常见来源是来自对LOX活性发生在9-碳或13-碳处的不饱和脂肪酸具有特异性的植物(例如，大豆)。在一些实施方案中，脂加氧酶是9/13-LOX，例如来自植物、细菌、古细菌、或真菌的9/13-LOX。

下列序列代表特征在于具有10S-LOX活性的LOX酶。

在一些实施方案中，10S-LOX是SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:12中任一者的序列，或者10S-LOX包括SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:12中任一者的序列。在一些实施方案中，10S-LOX酶具有与SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:12中任一者至少约50％(例如，至少约55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％)一致的序列。

(SEQ ID NO:1)

(SEQ ID NO：2)

(SEQ ID NO：3)

(SEQ ID NO：4)

(SEQ ID NO：5)

(SEQ ID NO：6)

(SEQ ID NO：7)

(SEQ ID NO：8)

(SEQ ID NO：9)

(SEQ ID NO：10)

(SEQ ID NO：11)

(SEQ ID NO：12)

本文还提供本文所描述的任何酶或多肽的环状变换的变体。在环状变换方法中，通过基因工程重新限定突变蛋白的N端和C端。本领域中已经描述了环状变换方法。例如，Graf和Schachmann，(Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1996)93，11591-11596)提供了已经进行环状变换方法的酶和其他蛋白质的概述。用于工程化环状变换的多肽(例如，酶)变体的方法是本领域已知的(参见，例如，美国专利公布号2010/0196991)。在一些实施方案中，环状变换的变体包含连接肽(linker)。

在一些实施方案中，用于本公开的上下文中使用的酶是具有LOX活性(例如，10S-LOX活性)的蓝细菌酶或其变体。在一些实施方案中，蓝细菌前列腺素-内过氧化物合酶或其变体具有LOX活性(例如，10S-LOX活性)。在一些实施方案中，具有LOX催化活性(例如，10S-LOX活性)的酶包括SEQ ID NO：13的氨基酸序列和/或其环状变换。

(SEQ ID NO：13)

其中X是任何氨基酸。

在一些实施方案中，蓝细菌血红素过氧化物合酶或其变体具有LOX活性(例如，10S-LOX活性)。在一些实施方案中，具有LOX(例如，10S-LOX活性)催化活性的酶包括SEQ IDNO：14的氨基酸序列和/或其环状变换。在一些实施方案中，具有LOX(例如，10S-LOX活性)催化活性的酶包括SEQ ID NO：15的氨基酸序列和/或其环状变换。

(SEQ ID NO：14)

其中X是任何氨基酸。

(SEQ ID NO：15)

其中X是任何氨基酸。

测试LOX酶的序列相似性网络对油酸的活性，并且描绘于图5中。灰色节点表示10S-LOX活性。这些序列不同于来自植物、细菌、和真菌的9/13-LOX，并且有时被标注为血红素过氧化物酶。特别地，主要含有蓝细菌酶的簇含有对油酸具有活性的10S-LOX。

在一些实施方案中，待降解的脂肪酸是油酸，并且本公开的组合物或方法中采用对作用于油酸的10S-碳或12S-碳具有特异性的LOX酶。

双加氧酶和单加氧酶

在一些实施方案中，双加氧酶(除LOX以外)以及单加氧酶适合于在本公开的上下文中使用。在一些实施方案中，酶是双加氧酶。在一些实施方案中，酶是单加氧酶。

在一些实施方案中，双加氧酶催化脂肪酸底物的氧化。在一些实施方案中，脂肪酸底物是不饱和脂肪酸。在一些实施方案中，双加氧酶催化棕榈油酸、油酸、肉豆蔻脑酸、亚油酸、和/或花生四烯酸的氧化。

在一些实施方案中，双加氧酶催化一种或更多种不饱和脂肪酸的部分降解或完全降解。在一些实施方案中，双加氧酶便利棕榈油酸、油酸、肉豆蔻脑酸、亚油酸、和/或花生四烯酸的部分降解或完全降解。

在一些实施方案中，单加氧酶催化脂肪酸底物的氧化。在一些实施方案中，脂肪酸底物是不饱和脂肪酸。在一些实施方案中，单加氧酶催化棕榈油酸、油酸、肉豆蔻脑酸、亚油酸、和/或花生四烯酸的氧化。

在一些实施方案中，单加氧酶催化一种或更多种不饱和脂肪酸的部分降解或完全降解。在一些实施方案中，单加氧酶便利棕榈油酸、油酸、肉豆蔻脑酸、亚油酸、和/或花生四烯酸的部分降解或完全降解。

在一些实施方案中，双加氧酶和/或单加氧酶来自植物、细菌、古细菌、或真菌。在一些实施方案中，双加氧酶和/或单加氧酶便利油酸的催化。在一些实施方案中，双加氧酶和/或单加氧酶来自蓝细菌。在一些实施方案中，双加氧酶和/或单加氧酶来自蓝细菌，并且便利油酸的催化。

在一些实施方案中，酶催化β氧化或ω氧化。在一些实施方案中，酶在脂肪酸的5-碳、8-碳、9-碳、10-碳、11-碳、12-碳、13-碳或15-碳处催化氧化或氢过氧化。在一些实施方案中，酶在脂肪酸的5R位、5S位、8R位、8S位、9R位、9S位、10S位、11R位、11S位、12R位、12S位、13R位、13S位、和/或15S位处催化氧化或氢过氧化。在一些实施方案中，酶催化脂肪酸(例如，油酸)的10S-碳和/或12S-碳的氧化或氢过氧化。在一些实施方案中，用于在本公开的上下文中使用的酶不需要三磷酸腺苷(ATP)的催化活性。

在一些实施方案中，本公开的上下文中的单加氧酶和/或双加氧酶可以催化脂肪酸(例如，不饱和脂肪酸)的部分降解或完全降解。在一些实施方案中，单加氧酶和/或双加氧酶的活性可以独立于辅因子(例如，ATP)。在一些实施方案中，单加氧酶和/或双加氧酶的活性可能需要辅因子(例如，ATP)。

在一些实施方案中，本公开的组合物和方法包括LOX和促进对聚合物造成损害的化合物的分解的一种或更多种其他双加氧酶。在一些实施方案中，本公开的组合物和方法包括LOX和促进对聚合物造成损害的化合物的分解的一种或更多种单加氧酶。在一些实施方案中，本公开的组合物和方法包括多种酶。在一些实施方案中，酶中的每种都可以降解不饱和脂肪酸。在一些实施方案中，多种酶中的每种都对一种或更多种不饱和脂肪酸展现出不同的底物特异性。

P450

在一些实施方案中，适合于在本公开的上下文中使用的酶是P450。细胞色素P450酶形成细菌、古细菌和真核生物中发现的血红素蛋白超家族。在常见的活性中，通过将分子氧的一个氧原子插入底物分子而将另一个氧原子还原成水，细胞色素P450作为单加氧酶。P450催化反应可能需要两个电子用于分子氧的激活。来自真核生物的P450使用NADPH作为外部还原剂和电子源。每个电子可以一次转移到细胞色素P450活性位点。在一些实施方案中，可以由电子供体蛋白(例如，细胞色素P450还原酶(CPR))提供电子转移。CPR可以是来自相同生物体或来自不同生物体的几种不同P450的电子供体蛋白。在一些情况下，P450还可以与细胞色素b5蛋白偶联，细胞色素b5蛋白可以充当电子供体蛋白或者可以提高从CPR到P450的电子转移的效率。在真核细胞(特别是植物)中，P450和CPR通常是膜结合蛋白，并且与内质网相关。这些蛋白质可以通过N端跨膜螺旋锚定到膜。

许多P450具有低的底物特异性，并且因此能够催化许多不同结构的氧化。许多P450对于给定底物具有特定的区和立体选择性；然而，P450从特定底物产生几种产物的混合物。在一些实施方案中，P450参与分子(例如，异生物素(xenobiotics))的分解和解毒作用。在一些实施方案中，P450参与生物合成途径。参与生物合成途径的P450可以展现出对某些类型的底物的特异性、区和立体选择性。在一些实施方案中，P450来自植物、细菌或真菌。

可以在自然界(特别是植物)中发现大量的P450。一个植物基因组可以含有数百个编码P450的基因。

在一些实施方案中，P450对一种或更多种不饱和脂肪酸具有活性。在一些实施方案中，P450便利棕榈油酸、油酸、肉豆蔻脑酸、亚油酸、和/或花生四烯酸的催化。在一些实施方案中，P450便利油酸的催化。

在一些实施方案中，本公开的组合物和方法包括P450和促进造成损害的化合物的分解的另外的酶(例如，双加氧酶、单加氧酶、血红素过氧化物酶)。在一些实施方案中，本公开的组合物和方法包括多种酶。在一些实施方案中，酶中的每种都可以作用于不饱和脂肪酸。在一些实施方案中，酶中的每种都可以降解不饱和脂肪酸。在一些实施方案中，多种酶中的每种都对一种或更多种不饱和脂肪酸展现出不同的底物特异性。

血红素过氧化物酶

在一些实施方案中，用于在本公开的上下文中使用的酶是血红素过氧化物酶。在一些实施方案中，血红素过氧化物酶具有位于活性位点处的高铁原卟啉IX辅基。植物酶辣根过氧化物酶(HRP)和植物大豆过氧化物酶(SBP)是植物血红素过氧化物酶的实例。

在一些实施方案中，血红素过氧化物酶便利一种或更多种不饱和脂肪酸的催化。在一些实施方案中，血红素过氧化物酶便利棕榈油酸、油酸、肉豆蔻脑酸、亚油酸、和/或花生四烯酸的催化。在一些实施方案中，血红素过氧化物酶便利油酸的催化。

在一些实施方案中，本公开的组合物和方法包括血红素过氧化物酶和促进对聚合物造成损害的化合物的分解的另外的酶(例如，双加氧酶、单加氧酶、P450)。在一些实施方案中，本公开的组合物和方法包括多种酶。在一些实施方案中，酶中的每种都便利不饱和脂肪酸的催化。在一些实施方案中，酶中的每种都可以降解不饱和脂肪酸。在一些实施方案中，多种酶中的每种都对一种或更多种不饱和脂肪酸展现出不同的底物特异性。

多肽

在一些实施方案中，附加地或可替代地，经由蛋白质与脂类的非催化性结合来进行使材料免于脂类(例如，脂肪酸，如油酸和其他不饱和脂肪酸)损害的保护。在一些实施方案中，与脂类(例如，不饱和脂肪酸)的结合导致蛋白质-脂类复合物的形成，蛋白质-脂类复合物将不太能够扩散到被保护的材料中。脂类(例如，不饱和脂肪酸)的结合还可以限制或防止其与其他材料(如聚合物材料或其他待保护的材料)反应。

在一些实施方案中，提供组合物，组合物包括一种或更多种促进脂肪酸的分解的酶和一种或更多种与脂肪酸形成复合物的多肽。

核酸构建与表达

可以使用本领域已知的分子生物学方法由核酸分子产生如本文所描述的酶和多肽。将核酸分子插入载体中，当引入适当的宿主细胞时，载体能够表达多肽。适当的宿主细胞包含(但不限于)细菌、酵母菌、昆虫、和哺乳动物细胞。本领域技术人员已知的用于将DNA片段插入载体中的方法中的任何一种都可以用于在转录/翻译控制信号的控制下构建编码本公开的酶的表达载体。这些方法可以包含体外重组DNA和合成技术以及体内重组(参见Sambrook et al.,Molecular Cloning,A Laboratory Manual,Cold Spring HarborLaboratory；Current Protocols in Molecular Biology,Eds.Ausubel,et al,GreenePubl.Assoc.,Wiley-Interscience,NY)。

可以通过第二核酸序列调节根据本公开的核酸分子的表达，使得在用重组DNA分子转化的宿主中表达分子。例如，可以通过本领域已知的启动子和/或增强子元件控制本公开的核酸分子的表达。

可以通过本领域已知的方法将本公开的核酸构建体插入表达载体或病毒载体中，并且核酸分子可操作地与表达控制序列连接。

在适当的情况下，可以将编码如本文所描述的酶的核酸序列修饰成包含被优化以在特定细胞类型或生物体中表达的密码子。经密码子优化的序列是合成序列，并且优选地编码由未经密码子优化的亲本多核苷酸编码的相同多肽(或全长多肽的生物学活性片段，其具有与全长多肽基本上相同的活性)。在一些实施方案中，编码抗体组分的遗传物质的编码区可以全部地或部分地包含改变的序列，以优化特定细胞类型(例如，真核细胞或原核细胞)的密码子使用。例如，如本文所描述的酶的编码序列可以被优化，以在细菌细胞、真菌细胞、植物细胞、哺乳动物细胞等中表达。可以将这样的序列描述为经密码子优化的序列。

将含有核酸分子的表达载体转化到适合的宿主细胞中，以允许产生由核酸构建体编码的蛋白质。示例性宿主细胞包含原核生物(例如，大肠杆菌)和真核生物(例如，酵母细胞或哺乳动物细胞)。用表达载体转化的宿主细胞在容许产生本公开的酶且然后回收酶或多肽的条件下生长。

可以通过任何技术纯化本公开的酶和多肽，其允许稳定的酶的随后形成。例如，不希望受到理论的束缚，酶可以作为可溶性多肽或作为包含体从细胞中回收，可以通过8M盐酸胍和透析从可溶性多肽或包含体中定量地提取酶。为了进一步纯化本公开的酶，可以使用常规的离子交换色谱、疏水作用色谱、反相色谱或凝胶过滤。也可以在从真核细胞或原核细胞分泌后从条件培养基中回收本发明的酶。

聚合物

生物学流体可以包含可能损害聚合物的组分。例如，脂肪酸(例如，不饱和脂肪酸或其他脂肪酸)可以包含可能损害聚合物的反应性化合物(如过氧化物)。本发明包含以下认识：可以将保护性酶并入聚合物中以防止、减轻或减少对聚合物和/或含有聚合物的装置的损害。保护性酶可以包含本文所描述的适合于防范可能降解或以其他方式损害聚合材料的生物物质(例如，脂肪酸)的任何酶。

在一些实施方案中，适合于在本公开的上下文中使用的聚合物可以包含聚酰胺、聚酯、聚芳基醚酮、聚酰亚胺、聚醚酰亚胺、聚酰胺酰亚胺、液晶聚合物、聚碳酸酯、聚烯烃、聚苯醚、聚砜、聚丙烯酸酯、丙烯腈丁二烯苯乙烯聚合物、聚甲醛、聚苯乙烯、聚亚芳基硫醚、聚偏二氟乙烯、聚四氟乙烯、聚偏二氯乙烯、聚氯乙烯和任何其他适合的聚合物。在一些实施方案中，聚合物是硅树脂、环氧树脂、聚乙烯醇缩丁醛树脂、乙酸纤维素、乙烯-乙酸乙烯酯共聚物(EVA)或离聚物，或者聚合物包括硅树脂、环氧树脂、聚乙烯醇缩丁醛树脂、乙酸纤维素、乙烯-乙酸乙烯酯共聚物(EVA)或离聚物。在一些实施方案中，聚合物是丙烯酸基聚合物，或者聚合物包括丙烯酸基聚合物。在一些实施方案中，聚合物是硅基聚合物，或者聚合物包括硅基聚合物。

在一些实施方案中，保护性酶或多肽被包埋在聚合物组合物中。在一些实施方案中，聚合物组合物包括按重量百分数计在从约0.0001％至约20％的范围内的保护性酶或多肽。在一些实施方案中，聚合物组合物包括两种或更多种保护性酶，各自按重量百分数计在从约0.0001％至约20％的范围内存在。在一些实施方案中，聚合物组合物包括在由下限和上限(上限大于下限)限定的范围内的保护性酶或多肽。在一些实施方案中，下限可以为约0.0001％、0.0002％、0.0005％、0.001％、0.002％、0.005％、0.01％、0.02％、0.05％、0.1％、0.2％、0.5％、1％、2％、5％、或10％。在一些实施方案中，上限可以为约0.0005％、0.001％、0.002％、0.005％、0.01％、0.02％、0.05％、0.1％、0.2％、0.5％、1％、2％、5％、10％、或20％。

在一些实施方案中，保护性酶被施加到聚合物组合物的表面。在一些实施方案中，聚合物组合物涂覆有保护性酶。

电子装置的组件

电子装置可以暴露于使用者的体液(如汗液和皮脂)。这些体液可能含有使电子装置中的聚合物降解的脂肪酸。为了防止降解，可以将保护性酶并入电子装置的一个或更多个组件中。例如，保护性酶可以包含来自脂加氧酶(LOX)酶家族的一种或更多种酶、或者使有害物质(如脂肪酸)降解的其他适合的酶。保护性酶(如脂加氧酶)可以降解这些反应性化合物(例如，过氧化物)，并且从而降低脂肪酸(例如，油酸等)降解聚合物且损害电子装置的能力。保护性酶可以中和脂肪酸的破坏性活性，并且从而有助于增强电子装置的聚合物结构的坚固性(robustness)。

在一些实施方案中，具有保护性酶的聚合物可以是下列的一部分：粘合剂、衬垫、胶带、按钮、或可能容易受到由于暴露于生物学脂类(例如，脂肪酸)的损害的影响的其他结构。可以将保护性酶并入电子装置中的覆层、粘合剂、衬垫、或其他结构中。当脂肪酸与覆层、粘合剂、衬垫、或其他结构中的保护性酶接触时，结构中的脂肪酸被中和。

通常，电子装置中任何适合的组件都可以包含一种或更多种保护性酶(例如，双加氧酶、单加氧酶、血红素过氧化物酶、P450、和/或脂加氧酶)。例如，可以将保护性酶并入电子装置中的外壳的塑料部分、衬垫、粘合剂层、胶带层、覆层、空隙充填性密封剂和其他密封剂、被分配为覆层的液体聚合物、室温粘合剂、含氟聚合物覆层和/或其他疏水性覆层、在不充当结构性粘合剂的情况下充当用于酶分配的载流体的液体聚合物材料、和/或其他材料(例如，聚合物)。

局部制剂

在一些实施方案中，保护性酶和/或多肽可以用作用于向哺乳动物(例如，人)的皮肤施加的局部制剂的一部分。在一些实施方案中，保护性酶和/或多肽可以用作用于向聚合物施加的局部制剂的一部分。在一些实施方案中，聚合物是装置的组分。在一些实施方案中，保护性酶和/或多肽可以用作用于向包括聚合物的装置施加的局部制剂的一部分。不希望受到理论的束缚，预期的是保护性酶和/或多肽的包含可以防止局部制剂的其他组分的降解。在一些实施方案中，两种或更多种保护性酶可以用作用于向哺乳动物(例如，人)的皮肤施加的局部制剂的一部分。在一些实施方案中，酶的混合物可以用作局部制剂的一部分。例如，可以期望的是组合对多种不饱和脂肪酸(例如对皮脂和汗液中存在的油酸和亚油酸两者)具有特异性的酶。类似地，可以将单一的酶或混合物用于靶向施加到皮肤的产品中的油酸或多种不饱和脂肪酸。

在一些实施方案中，包括保护性酶和/或多肽的局部制剂是乳剂、凝胶剂、软膏剂、或洗剂。可以使用本领域已知的方法(例如，如参考文本(如REMINGTON:THE SCIENCE ANDPRACTICE OF PHARMACY 1577-1591,1672-1673,866-885；(Alfonso R.Gennaro ed.19thed.1995)；Ghosh,T.K.；et al.TRANSDERMAL AND TOPICAL DRUG DELIVERY SYSTEMS(1997)，两者都特此通过引用并入本文)所提供的)制备局部制剂。

在一些实施方案中，保护性酶和/或多肽对于包括用于局部制剂的药物的组合物可以是有用的。在一些实施方案中，保护性酶和/或多肽是局部遮光剂制剂的组分。

在一些实施方案中，局部制剂包括按重量百分数计在从约0.0001％至约20％的范围内的保护性酶或多肽。在一些实施方案中，聚合物组合物包括两种或更多种保护性酶，各自按重量百分数计在从约0.0001％至约20％的范围内存在。在一些实施方案中，局部制剂包括在由下限和上限(上限大于下限)限定的范围内的保护性酶或多肽。在一些实施方案中，下限可以为约0.0001％、0.0002％、0.0005％、0.001％、0.002％、0.005％、0.01％、0.02％、0.05％、0.1％、0.2％、0.5％、1％、2％、5％、或10％。在一些实施方案中，上限可以为约0.0005％、0.001％、0.002％、0.005％、0.01％、0.02％、0.05％、0.1％、0.2％、0.5％、1％、2％、5％、10％、或20％。

前述仅是说明性的，并且可以对所描述的实施方案进行各种修改。可以单独地或者以任何组合来实施前述实施方案。

实施例

实施例1-示例性保护性酶防止脂肪酸诱导的聚合物溶胀

本实施例示出被测定对于油酸的活性的一系列LOX酶的酶促活性。图1中示出所测量的酶的化学活性。测定检测10-HOME产物，10-HOME产物来源于用还原剂DTT对LOX酶产生的不稳定过氧化物的处理。在大肠杆菌细胞裂解物的情况下测试酶。诱导过度表达LOX酶的大肠杆菌，然后使用溶菌酶使细胞酶促裂解。将裂解物添加到含有油酸、十二烷基麦芽糖苷(作为表面活性剂)和Tris缓冲液(pH7.6)的反应中，并且使反应在室温进行15分钟。使用DTT还原反应产物，并且在甲醇/乙腈混合物中淬灭。使用LC-MS对10-HOME产物进行定量。图2中示出所得到的活性。

实施例2-示例性保护性酶防止脂肪酸诱导的聚合物溶胀

本实施例证明了示例性保护性酶(例如，脂加氧酶)的功效。具体地，本实施例证明了包括示例性保护性酶(例如，脂加氧酶)的聚合物组合物能够防止由脂肪酸处理诱导的聚合物溶胀。使用丙烯酸泡沫压敏胶粘带(3M^TMVHB^TM胶带4914-015)作为代表性组合物，以评估保护性酶防止聚合物溶胀的功效。该代表性粘合剂暴露于示例性不饱和脂肪酸(油酸)，并且评估经脂加氧酶处理的(经处理的)样品和未经处理的样品两者随时间的聚合物溶胀(图3)。Y轴表示按面积计的溶胀量，X轴表示暴露后的小时数。从图3中可以看出，从大约40小时开始，未经处理的样品显示出比经处理的样品的溶胀增加更大的溶胀增加。因此，用脂加氧酶处理保护代表性粘合剂免于脂肪酸随时间诱导的损害。

实施例3-证明保护性酶功效的可替代测定的示例

本实施例提供保护性酶对脂肪酸在粘合剂中诱导的溶胀的保护作用的附加的证据。使用丙烯酸泡沫压敏胶粘带(3M^TMVHB^TM胶带4914-015)作为代表性组合物，以评估保护性酶防止聚合物溶胀的功效。首先，该代表性粘合剂用脂加氧酶进行处理或者不进行处理，然后暴露于示例性不饱和脂肪酸(油酸)。评估经脂加氧酶处理的(经处理的)样品和未经处理的样品两者随时间的聚合物溶胀(图4)。Y轴表示按面积计的溶胀量，X轴表示暴露后的小时数。从图4中可以看出，未经处理的样品显示出比经处理的样品的溶胀增加更大的溶胀增加。因此，用脂加氧酶预处理保护代表性粘合剂免于脂肪酸随时间诱导的损害。

实施例4-LOX家族酶的活性分析

本实施例描述了LOX酶网络对示例性脂肪酸底物(例如，油酸)的催化活性的评估。基于序列和结构相似性，经由生物信息学方法鉴别现存脂加氧酶的同系物。每个节点都代表候选LOX酶，其中每种酶都通过与文库中其他酶的成对相似性成簇。灰色节点被证明对油酸具有10S-LOX活性。这些10S-LOX酶与针对植物和细菌描述的更为详尽的9S/13S-LOX酶稍有联系。上述实施例证明了脂加氧酶是一类可以降解示例性脂肪酸油酸的酶。此外，确定的是其他酶(如双加氧酶、单加氧酶、血红素过氧化物酶、P450以及其他)也可以催化脂类(如脂肪酸)的降解。

图5中描绘了酶家族网络，其中灰色节点表示具有10S-LOX活性。因此，几种不同的血红素过氧化物酶具有10S-LOX活性。这些序列不同于来自植物、细菌、和真菌的9/13-LOX。值得注意的是，主要含有蓝细菌酶的簇被发现含有对特定示例性脂肪酸(油酸)具有活性的10S-LOX。本文所描述的测定可以用于表征酶保护免于脂类(例如，特定脂肪酸和/或脂肪酸的组合)诱导的损害的能力。

示例性实施方案

1.一种用于促进由人分泌的体液中的一种或更多种脂肪酸的分解的方法，所述方法包括使体液与酶接触。

2.一种用于抑制由暴露于脂肪酸造成的聚合物的溶胀的方法，方法包括使聚合物与酶接触。

3.一种用于抑制由暴露于脂肪酸造成的聚合物的溶胀的方法，方法包括使聚合物与结合脂肪酸的多肽接触。

4.根据实施方案1-3中任一项所述的方法，其中脂肪酸是不饱和的。

5.根据实施方案1-3中任一项所述的方法，其中脂肪酸是油酸。

6.根据实施方案1-3中任一项所述的方法，其中脂肪酸是亚油酸。

7.根据实施方案1-6中任一项所述的方法，其中酶或多肽被包埋在聚合物中。

8.根据实施方案1或4-7中任一项所述的方法，其中体液包括汗液。

9.根据实施方案1或4-7中任一项所述的方法，其中体液包括皮脂。

10.根据实施方案1-2或4-9中任一项所述的方法，其中酶是双加氧酶。

11.根据实施方案1-2或4-9中任一项所述的方法，其中酶是脂加氧酶。

12.根据实施方案1-2或4-9中任一项所述的方法，其中酶是单加氧酶。

13.根据实施方案1-2或4-9中任一项所述的方法，其中酶不需要三磷酸腺苷(ATP)的催化活性。

14.根据实施方案1-2或4-13中任一项所述的方法，方法包括使体液或聚合物与多种酶接触。

15.根据实施方案14所述的方法，其中多种酶包括双加氧酶、单加氧酶、血红素过氧化物酶、和/或P450。

16.根据实施方案1-2或4-15中任一项所述的方法，其中酶是蓝细菌酶。

17.根据实施方案1-2或14-16中任一项所述的方法，其中酶催化β氧化或ω氧化。

18.根据实施方案1-2或14-17中任一项所述的方法，其中酶在油酸的10S-碳和/或12S-碳处具有活性。

19.根据实施方案3所述的方法，其中多肽与脂肪酸形成复合物。

20.根据实施方案3所述的方法，其中多肽抑制脂肪酸的反应性。

21.根据实施方案3所述的方法，其中多肽抑制脂肪酸的扩散。

22.一种组合物，组合物包括聚合物和促进脂肪酸的分解的一种或更多种酶。

23.一种组合物，组合物包括聚合物和与脂肪酸结合的一种或更多种多肽。

24.根据实施方案22或23所述的组合物，其中一种或更多种酶或多肽被包埋在聚合物中。

25.根据实施方案22-24中任一项所述的组合物，其中脂肪酸是不饱和的。

26.根据实施方案22-24中任一项所述的组合物，其中脂肪酸是油酸。

27.根据实施方案24-24中任一项所述的组合物，其中脂肪酸是亚油酸。

28.根据实施方案22或24-27中任一项所述的组合物，其中酶是双加氧酶。

29.根据实施方案22或24-27中任一项所述的组合物，其中酶是脂加氧酶。

30.根据实施方案22或24-27中任一项所述的组合物，其中酶是单加氧酶。

31.根据实施方案22或24-30中任一项所述的组合物，其中酶不需要三磷酸腺苷(ATP)的催化活性。

32.根据实施方案22或24-31中任一项所述的组合物，组合物包括多种酶。

33.根据实施方案32所述的组合物，其中多种酶包括双加氧酶、单加氧酶、血红素过氧化物酶、和/或P450。

34.根据实施方案22或25-33中任一项所述的组合物，其中酶是蓝细菌酶。

35.根据实施方案22或25-33中任一项所述的组合物，其中酶催化β氧化或ω氧化。

36.根据实施方案22或25-33中任一项所述的组合物，其中酶在油酸的10S-碳和/或12S-碳处具有活性。

37.根据实施方案23所述的组合物，其中多肽与脂肪酸形成复合物。

38.根据实施方案23所述的组合物，其中多肽抑制脂肪酸的反应性。

39.根据实施方案23所述的组合物，其中多肽抑制脂肪酸的扩散。

40.一种组合物，组合物包括一种或更多种根据实施方案22或25-33中任一项所述的酶和一种或更多种根据实施方案23或37-39中任一项所述的多肽。

41.根据实施方案1-2或22中任一项所述的方法或组合物，其中酶包括SEQ ID NO:1的氨基酸序列或其环状变换的变体。

42.根据实施方案1-2或22中任一项所述的方法或组合物，其中酶包括SEQ ID NO:2的氨基酸序列或其环状变换的变体。

43.根据实施方案1-2或22中任一项所述的方法或组合物，其中酶包括SEQ ID NO:3的氨基酸序列或其环状变换的变体。

44.根据实施方案1-2或22中任一项所述的方法或组合物，其中酶包括SEQ ID NO:4的氨基酸序列或其环状变换的变体。

45.根据实施方案1-2或22中任一项所述的方法或组合物，其中酶包括SEQ ID NO:5的氨基酸序列或其环状变换的变体。

46.根据实施方案1-2或22中任一项所述的方法或组合物，其中酶包括SEQ ID NO:6的氨基酸序列或其环状变换的变体。

47.根据实施方案1-2或22中任一项所述的方法或组合物，其中酶包括SEQ ID NO:7的氨基酸序列或其环状变换的变体。

48.根据实施方案1-2或22中任一项所述的方法或组合物，其中酶包括SEQ ID NO:8的氨基酸序列或其环状变换的变体。

48.根据实施方案1-2或22中任一项所述的方法或组合物，其中酶包括SEQ ID NO:9的氨基酸序列或其环状变换的变体。

49.根据实施方案1-2或22中任一项所述的方法或组合物，其中酶包括SEQ ID NO:10的氨基酸序列或其环状变换的变体。

50.根据实施方案1-2或22中任一项所述的方法或组合物，其中酶包括SEQ ID NO:11的氨基酸序列或其环状变换的变体。

51.根据实施方案1-2或22中任一项所述的方法或组合物，其中酶包括SEQ ID NO:12的氨基酸序列或其环状变换的变体。

52.根据实施方案1-2或22中任一项所述的方法或组合物，其中酶包括SEQ ID NO:13-15中任何一者的氨基酸序列或其环状变换的变体。

至此已经描述了本发明的至少几个方面和实施方案，应当理解的是各种改变、修改和改进对于本领域技术人员将是显而易见的。这样的改变、修改和改进旨在成为本公开的一部分，并且旨在在本发明的精神和范围内。因此，以上说明和附图仅作为示例，并且通过所附权利要求书更详细地说明本发明。

等同物

除非明确说明相反，否则如在本文中在说明书和在权利要求书中使用的冠词“一(a)”和“一(an)”应当理解为包含复数的指称对象。除非说明相反或者以其他方式从上下文中是显而易见的，否则如果组成员中的一者、多于一者、或全部都存在于给定产品或过程中、在给定产品或过程中采用、或者以其他方式与给定产品或过程有关，则认为在组的一个或更多个成员之间包含“或”的权利要求或说明是确信的。本发明包含实施方案，其中组中只有一个成员存在于给定产品或过程中、在给定产品或过程中采用、或者以其他方式与给定产品或过程有关。本发明还包含实施方案，其中多于一个组成员或者全部组成员都存在于给定产品或过程中、在给定产品或过程中采用、或者以其他方式与给定产品或过程有关。此外，应当理解的是，除非另有说明或者除非对于本领域的普通技术人员而言显而易见的是会出现矛盾或不一致，否则本发明包含全部变型、组合和变换，其中将来自所列权利要求中的一项或更多项的一个或更多个限制、要素、条款、描述性术语等引入从属于相同基础权利要求的另一权利要求(或相关的任何其他权利要求)中。在要素以列表(例如，以马库什组或类似格式)的形式存在的情况下，应当理解的是，也公开了要素的每个亚组，并且可以从该组中去除任何一个或多个要素。应当理解的是，通常，在本发明或本发明的方面被称为包括特定元素、特征等的情况下，本发明或本发明的方面的某些实施方案由这样的要素、特征等组成或者基本上由这样的要素、特征等组成。为了简单起见，并非在每种情况下都以本文中如此多的词汇具体地阐述那些实施方案。还应当理解的是，本发明的任何实施方案或方面可以从权利要求书中明确地排除，而与说明书中是否陈述特定的排除无关。

序列表

<110> 银杏生物制品公司

<120> 保护性酶

<130> 2011832-0174

<150> US 62/557,544

<151> 2017-09-12

<160> 15

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 547

<212> PRT

<213> 墨绿颤藻

<400> 1

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<213> 集胞藻PCC7509

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<211> 547

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<223> 工程化的前列腺素-内过氧化物合酶

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<210> 11

<211> 540

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 工程化的血红素过氧化物酶

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<211> 543

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<213> 人工序列

<220>

<223> 工程化的血红素过氧化物酶

<400> 12

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Tyr Glu Pro Ile Asn Asp Glu Lys Arg Leu Pro Ala Asp Lys Lys Gln

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Tyr Leu Phe Ala Met Gly Val Glu Arg Ala Asn Val Gln Ile Gly Tyr

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<223> 共有的前列腺素-内过氧化物合酶序列

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<211> 540

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 共有的血红素过氧化物酶序列

<220>

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<222> (540)..(540)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

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115 120 125

Thr Leu Ile Phe Pro Tyr Phe Val Gln Trp Phe Thr Asp Ser Phe Leu

130 135 140

Arg Thr Asp Arg His Asn His Arg Lys Asn Thr Ser Asn His Gln Ile

145 150 155 160

Asp Leu Cys Thr Val Tyr Gly Leu Asn Ala Lys Ile Thr His Leu Leu

165 170 175

Arg Ser Tyr Gln Gly Gly Lys Leu Lys Ser Gln Ile Ile Asn Gly Glu

180 185 190

Glu Tyr Pro Pro Phe Tyr Tyr Asp Glu Lys Gly Glu Ala Lys Lys Glu

195 200 205

Phe Ile Gly Leu Pro His Gln Leu Asp Asn Asp Gly Asn Pro Lys Ala

210 215 220

Asp Thr Phe Pro Leu Asp Lys Lys Gln Lys Leu Phe Ala Met Gly Val

225 230 235 240

Glu Val Glu Arg Ser Asn Val Gln Ile Gly Tyr Val Met Leu Asn Val

245 250 255

Leu Ala Leu Arg Glu His Asn Arg Leu Cys Glu Leu Leu Ala Lys Thr

260 265 270

Tyr Pro Ser Trp Asp Asp Glu Arg Leu Phe Gln Thr Ala Arg Asn Ile

275 280 285

Leu Ile Val Glu Val Leu Arg Ile Val Val Glu Asp Tyr Val Asn His

290 295 300

Ile Thr Pro Tyr His Phe Gln Phe Ile Thr Asp Pro Leu Thr Phe Ser

305 310 315 320

Asn Glu Lys Trp Tyr Arg Gln Asn Trp Met Thr Val Glu Phe Thr Leu

325 330 335

Val Tyr Arg Trp His Ser Met Leu Pro Asp Thr Leu Ile Tyr Asn Gly

340 345 350

Gln Lys Ile Pro Thr Tyr Glu Thr Gln Trp Asn Asn Glu Met Ile Ile

355 360 365

Lys Gln Gly Leu Gly Ala Leu Phe Glu Glu Ser Cys Ser Gln Pro Cys

370 375 380

Ala Gln Leu Ser Leu Phe Asn Thr Pro Glu Phe Leu Ile Pro Val Glu

385 390 395 400

Leu Ala Ser Val Arg Phe Gly Arg Glu Val Lys Leu Arg Ser Tyr Asn

405 410 415

Asp Tyr Arg Gln Leu Cys Lys Tyr Pro Arg Val Thr Asp Phe Asp Gln

420 425 430

Ile Ser Ser Asp Lys Asn Ile Gln Lys Glu Leu Gln Arg Leu Tyr Gly

435 440 445

His Val Asp Asn Ile Glu Leu Tyr Val Gly Ile Tyr Ala Glu Asp Leu

450 455 460

Arg Glu Asn Ser Ala Leu Pro Ser Leu Val Gly Arg Leu Ile Gly Ile

465 470 475 480

Asp Ala Phe Ser Gln Val Leu Thr Asn Pro Leu Leu Ala Glu Ser Val

485 490 495

Phe His Pro Glu Thr Phe Ser Pro Val Gly Trp Glu Glu Ile Gln Asn

500 505 510

Thr Lys Thr Leu Ser Gln Leu Leu His Arg Asn Leu Pro Pro Ser Asp

515 520 525

Lys Lys Tyr Arg Val Ser Phe Asp Arg Ala Ser Xaa

530 535 540

<210> 15

<211> 544

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 共有的血红素过氧化物酶序列

<220>

<221> misc_特征

<222> (544)..(544)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<400> 15

Ala Gly Lys Arg Asp Thr Ser Lys Asp Gly Phe Asp Asn Lys Val Gln

1 5 10 15

Thr Phe Leu Leu Thr Asn Phe Lys Gly Ile Trp Glu Ile Val Gln Ser

20 25 30

Asn Glu Phe Leu Lys Arg Lys Val Asn Lys Thr Leu Ile Asn Ser Leu

35 40 45

Ile Tyr Lys Ile Pro Thr Arg Pro Asn Pro Tyr Ser Met Met Thr Leu

50 55 60

Asp Glu Tyr Ile Pro Asp Thr Lys Ile Pro Lys Lys Thr Asp Thr Tyr

65 70 75 80

Thr Ser Trp Glu Leu Leu Asn Asp Arg Thr Tyr Ile Gly Arg His Leu

85 90 95

Pro Pro Asp Pro Lys Phe Asn Ser Glu Gly Asn Leu Pro Lys Val Glu

100 105 110

Asp Leu Ala Val Leu Phe Arg Lys Arg Asp Gly Lys Thr Ile Tyr Ser

115 120 125

Pro Lys Ser Thr Met Leu Phe Pro Tyr Trp Val Gln Trp Phe Thr Asp

130 135 140

Ser Phe Leu Arg Ile Asp His Thr Lys Glu Lys Lys Leu Lys Asn Thr

145 150 155 160

Ser Asn His Glu Ile Asp Leu Cys Asn Val Tyr Gly Leu Asn Arg Lys

165 170 175

Arg Thr His Leu Leu Arg Thr Phe Lys Gly Gly Lys Phe Lys Thr Gln

180 185 190

Lys Leu Lys Arg Gln Asp Gly Ile Glu Glu Glu Tyr Pro Leu Phe Tyr

195 200 205

Tyr Ala Asp Pro Ala Gln Gly Ile Val Asp Pro Gln Phe Asp Gly Leu

210 215 220

Tyr Glu Pro Ile Asn Asp Glu Lys Arg Leu Pro Ala Asp Lys Lys Gln

225 230 235 240

Tyr Leu Phe Ala Met Gly Val Glu Arg Ala Asn Val Gln Ile Gly Tyr

245 250 255

Val Met Leu Asn Thr Leu Cys Ile Arg Glu His Asn Arg Leu Cys Asp

260 265 270

Glu Leu Ala Ser Asn Tyr Pro Asp Trp Asp Asp Glu Arg Leu Phe Gln

275 280 285

Thr Ser Arg Asn Ile Leu Met Ala Ile Ile Leu Asn Ile Ile Met Glu

290 295 300

Glu Tyr Ile Asn His Ile Thr Pro Tyr His Phe Lys Leu Phe Ala Asp

305 310 315 320

Pro Ala Ala Phe Val Lys Glu Ser Trp Tyr Arg Pro Asn Trp Met Thr

325 330 335

Ile Glu Phe Asp Phe Val Tyr Arg Trp His Ser Ala Ile Pro Glu Thr

340 345 350

Phe Ile Tyr Asp Gly Gln Pro Thr Asp Ile Ala Ala Ser Leu Trp Asn

355 360 365

Asn Lys Met Phe Ile Asp Lys Gly Leu Gly Ala Leu Met Glu Glu Thr

370 375 380

Cys Ser Gln Pro Gly Thr Arg Ile Gly Leu Phe Asn Thr Pro Asp Ile

385 390 395 400

Leu Val Glu Leu Thr Glu Leu Pro Ser Ile Arg Leu Gly Arg Gln Leu

405 410 415

Gln Leu Ala Ser Tyr Asn Asp Tyr Arg Glu Met Cys Gly Phe Pro Arg

420 425 430

Val Thr Lys Phe Glu Gln Ile Thr Gly Asp Glu Phe Ala Gln Glu Lys

435 440 445

Leu Lys Glu Leu Tyr Gly His Val Asp Asn Ile Glu Phe Tyr Val Gly

450 455 460

Leu Tyr Ala Glu Glu Val Arg Lys Asn Ser Thr Ile Pro Pro Leu Val

465 470 475 480

Ala Arg Leu Ile Gly Ile Asp Ala Phe Ser Glu Ala Leu Asn Asn Pro

485 490 495

Leu Leu Ser Pro Thr Ile Phe Asn Lys Asp Thr Phe Ser Pro Val Gly

500 505 510

Trp Glu Ile Ile Gln Asn Thr Lys Thr Val Ser Asp Leu Ile Asn Arg

515 520 525

Asn Val Pro Pro Ser Asp Lys Lys Tyr Lys Val Thr Phe Asp Leu Xaa

530 535 540

Claims (34)

1.一种用于促进由人分泌的体液中的一种或更多种脂肪酸的分解的方法，所述方法包括使所述体液与酶接触。

2.一种用于抑制由暴露于脂肪酸造成的聚合物的溶胀的方法，所述方法包括使所述聚合物与酶接触。

3.一种用于抑制由暴露于脂肪酸造成的聚合物的溶胀的方法，所述方法包括使所述聚合物与结合脂肪酸的多肽接触。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述脂肪酸是不饱和的。

5.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述脂肪酸是油酸。

6.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述脂肪酸是亚油酸。

7.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述酶或多肽被包埋在聚合物中。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述体液包括汗液。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述体液包括皮脂。

10.根据权利要求1-2中任一项所述的方法，其中所述酶是双加氧酶。

11.根据权利要求1-2中任一项所述的方法，其中所述酶是脂加氧酶。

12.根据权利要求1-2中任一项所述的方法，其中所述酶是单加氧酶。

13.根据权利要求1-2中任一项所述的方法，其中所述酶不需要三磷酸腺苷(ATP)的催化活性。

14.根据权利要求1-2中任一项所述的方法，所述方法包括使所述体液或聚合物与多种酶接触。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述多种酶包括双加氧酶、单加氧酶、血红素过氧化物酶、和/或P450。

16.根据权利要求1-2中任一项所述的方法，其中所述酶是蓝细菌酶。

17.根据权利要求1-2中任一项所述的方法，其中所述酶催化β氧化或ω氧化。

18.根据权利要求1-2中任一项所述的方法，其中所述酶在油酸的10S-碳和/或12S-碳处具有活性。

19.根据权利要求3所述的方法，其中所述多肽与所述脂肪酸形成复合物。

20.根据权利要求3所述的方法，其中所述多肽抑制所述脂肪酸的反应性。

21.根据权利要求3所述的方法，其中所述多肽抑制所述脂肪酸的扩散。

22.一种组合物，所述组合物包括聚合物和促进脂肪酸的分解的一种或更多种酶。

23.一种组合物，所述组合物包括聚合物和与脂肪酸结合的一种或更多种多肽。

24.根据权利要求22-23所述的组合物，其中所述一种或更多种酶或所述一种或更多种多肽被包埋在所述聚合物中。

25.根据权利要求22或24中任一项所述的组合物，其中所述酶是脂加氧酶。

26.根据权利要求22或24-25中任一项所述的组合物，其中所述酶不需要三磷酸腺苷(ATP)的催化活性。

27.根据权利要求22或24-26中任一项所述的组合物，所述组合物包括多种酶。

28.根据权利要求27所述的组合物，其中所述多种酶包括双加氧酶、单加氧酶、血红素过氧化物酶、和/或P450。

29.根据权利要求22或24-28中任一项所述的组合物，其中所述酶是蓝细菌酶。

30.根据权利要求22或24-29中任一项所述的组合物，其中所述酶催化β氧化或ω氧化。

31.根据权利要求22或24-30中任一项所述的组合物，其中所述酶在油酸的10S-碳和/或12S-碳处具有活性。

32.根据权利要求23所述的组合物，其中所述多肽与所述脂肪酸形成复合物。

33.根据权利要求23所述的组合物，其中所述多肽抑制所述脂肪酸的反应性。

34.根据权利要求23所述的组合物，其中所述多肽抑制所述脂肪酸的扩散。

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