CN111265509A - 没食子酸衍生物防治动脉粥样硬化疾病的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供没食子酸衍生物在防治动脉粥样硬化疾病中的应用，属于生物医药技术领域。具体的，本发明通过研究发现，没食子酸衍生物特别是没食子酸乙酯可通过抑制脂质沉积氧化、巨噬细胞泡沫化转变、巨噬细胞脂质外排、巨噬细胞及血管内皮细胞活化和凋亡，从而起到防治动脉粥样硬化症的作用。本发明为没食子酸衍生物特别是没食子酸乙酯开辟了新的药物用途，也为开发高效的防治动脉粥样硬化症相关药物奠定实验基础并提供新的视野。

Description

没食子酸衍生物防治动脉粥样硬化疾病的应用
技术领域
本发明属于生药医药技术领域，具体涉及没食子酸衍生物防治动脉粥样硬化疾病的应用。
背景技术
公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
随着社会的快速发展，生活水平的提高和饮食习惯的改变，近年来心脑血管疾病已经成危害人类身体健康的重大威胁，成为造成死亡率最高的疾病，其主要病理基础动脉粥样硬化已成为我国人口死亡的主要原因。动脉粥样硬化导致血管内壁空腔变窄，出现脑组织供血不足，同时会伴有斑块脱落，堵塞血管引起部分组织缺血坏死。
氧化应激对血管壁细胞具有直接损伤，造成血管内皮损伤。血管的内皮、内皮细胞一旦损伤和过度凋亡，血管的通透性就会增强，低密度脂蛋白就会渗透并积累到皮下，被脂氧合酶及反应性氧集团氧化成大量的氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL),ox-LDL会诱导内皮细胞分泌细胞间粘附因子以及巨噬细胞趋化因子，促进单核细胞穿过血管内膜分化为巨噬细胞，通过清道夫受体和CD36，巨噬细胞吞噬掉大量的ox-LDL，在溶酶体作用下分解为游离的脂质颗粒存在于细胞体内，使巨噬细胞变为重且圆润的泡沫细胞。动脉粥样硬化的病变发展方向主要受内皮细胞、平滑肌细胞、巨噬细胞以及T淋巴细胞所构成的网络关系影响。巨噬细胞泡沫化转变的同时，分泌出许多生长因子，进而使血管平滑肌细胞的表型发生改变大量增殖，向内膜迁移。在氧化应激和自噬基因调控作用下，泡沫细胞易于凋亡沉积于内膜血管壁。大量死亡的泡沫细胞聚集成为脂质块粘附于内膜血管壁产生胶原和弹力纤维包裹脂质。另外，大量血管平滑肌细胞穿插于泡沫细胞之间产生胶原、弹力纤维和脂多糖，导致细胞外基质增多，初步形成局部斑块。斑块组织内部坏死，吸引大量淋巴细胞再次迁移至内膜，使局部巨噬细胞和T淋巴细胞激活易化,释放大量生长因子及促炎症细胞因子，内皮细胞表面黏附分子表达增加,促进局部炎症反应，使斑块由稳定状态变为不稳定状态导致斑块破裂，最终形成血栓引发临床急性心脑血管事件发作，威胁人体生命健康。
在卵磷脂胆固醇酰基转移酶的作用下，游离的胆固醇变为胆固醇脂，而肝脏合成的高密度脂蛋白(HDL)主要将外周组织聚集的游离胆固醇经SR-BI受体作用与血液循环中的脂蛋白或与某些大分子结合而转运至肝脏进行集体再循环或通过胆汁排出体外。HDL介导的细胞内胆固醇外流主要有三个途径：一胆固醇由血管壁细胞被动的扩散至巨噬细胞内并且促进成熟的HDL颗粒形成。二通过清道夫受体促进胆固醇外流，三通过ABCG1的胆固醇主动外流。
动脉粥样硬化的产生由多途径致病，治疗机制较为复杂，目前主要以调控细胞内的胆固醇作为主要治疗途径，控制细胞内胆固醇的含量正常化，可以有效地抑制泡沫细胞的形成，能够从根源上阻断动脉粥样硬化的形成。细胞膜载脂蛋白ABCA1、ABCG1及SR-BI控制细胞内胆固醇的外排。通过药物致力于上调以上蛋白含量，促进细胞内胆固醇的外流经HDL等转运至肝脏，可以有效防治动脉粥样硬化的发生发展。然而，发明人发现，目前针对上述机制用于防治动脉粥样硬化的药物仍然较少。
发明内容
针对现有技术存在的不足，本发明提供没食子酸衍生物防治动脉粥样硬化疾病的应用，本发明通过研究发现，没食子酸衍生物(如没食子酸乙酯等)可通过通过抑制脂质沉积氧化、巨噬细胞泡沫化转变、巨噬细胞脂质外排、巨噬细胞及血管内皮细胞活化和凋亡，从而用于预防、治疗动脉粥样硬化症，因此可以被认为是防治动脉粥样硬化的有效候选药物，具有重要的临床应用价值。
具体的，本发明涉及以下技术方案：
本发明的第一个方面，提供没食子酸衍生物在制备预防和/或治疗动脉粥样硬化药物中的应用。
其中，所述没食子酸衍生物具体为没食子酸酯，进一步包括但不限于没食子酸乙酯、没食子酸丙酯、没食子酸丁酯和没食子酸庚酯；最优选为没食子酸乙酯。
根据本发明，“预防和/或治疗”的概念表示任一适用于治疗动脉粥样硬化相关疾病的措施，或者对于这种表现的疾病或所表现出来的症状进行预防性治疗，或者避免这种疾病的复发，例如在结束了治疗时间段之后的复发或对已经发作的疾病的症状进行治疗，或者预先介入性的防止或抑制或减少该类疾病或症状的发生。
具体的，所述预防和/或治疗动脉粥样硬化至少表现在具有如下任意一种或多种用途：
a)抑制脂质沉积氧化；
b)延缓氧化性低密度脂蛋白(ox-LDL)对细胞的损害作用；
c)抑制巨噬细胞泡沫化转变；
d)促进巨噬细胞脂质外排；
e)上调巨噬细胞脂质代谢相关蛋白的表达；
f)抑制粥样硬化斑块生长。
有鉴于此，本发明的第二个方面，提供一种防治动脉粥样硬化的药物组合物，所述药物组合物由没食子酸衍生物与至少一种其它药物活性成分和/或至少一种其它非药物活性成分构成。
在本发明的意义上，本发明所述的药物组合物表示一种物质，其所含有的没食子酸衍生物对新生儿动脉粥样硬化具有明显防治作用。
本发明的第三个方面，提供没食子酸衍生物在制备如下任意一种或多种产品中的应用：
1)脂质沉积氧化抑制剂；
2)巨噬细胞泡沫化转变抑制剂；
3)巨噬细胞脂质外排促进剂；
4)ABCA1转运蛋白促进剂；
5)ABCG1转运蛋白促进剂；
6)SR-BI蛋白促进剂。
以上一个或多个技术方案的有益技术效果：
首次发现没食子酸衍生物在防治动脉粥样硬化疾病中的作用，具体的，通过研究发现，没食子酸乙酯可通过抑制脂质沉积氧化、巨噬细胞泡沫化转变、巨噬细胞脂质外排、巨噬细胞及血管内皮细胞活化和凋亡，从而起到防治动脉粥样硬化症的作用。
上述技术方案为没食子酸衍生物特别是没食子酸乙酯开辟了新的药物用途，也为开发高效的防治动脉粥样硬化症相关药物奠定实验基础并提供新的视野。
附图说明
构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。
图1为本发明实施例1中自由基清除实验结果图。
图2为本发明实施例2中抑制ox-LDL氧化实验结果图。
图3为本发明实施例3中MTT结果图。
图4为本发明实施例3中流式细胞术FACS结果图。
图5A为本发明实施例4中氧化型低密度脂蛋白ox-LDL单独处理油红O着色的泡沫细胞形成情况图。
图5B为本发明实施例4中ox-LDL处理的同时加入没食子酸乙酯，油红O着色的泡沫细胞形成情况图。
图5C为本发明实施例4中518nm处细胞溶解物吸光度(即每组油红o相对含量)统计图。
图6为本发明实施例5中巨噬细胞脂质外排结果图。
图7为本发明实施例6中RAW264.7细胞ABCA1,ABCG1,SR-BI,Tubulin蛋白表达条带图。
图8A为本发明实施例7中不同治疗的模型动物动脉粥样硬化斑块代表性照片。
图8B为本发明实施例7中动脉粥样硬化斑块统计图。
图8C为本发明实施例7中生理盐水组(Saline)心脏切片粥样硬化斑块代表性照片。
图8D为本发明实施例7中EG10mg/kg体重注射组(EG-L)心脏切片粥样硬化斑块代表性照片。
图8E为本发明实施例7中EG 20mg/kg体重注射组(EG)心脏切片粥样硬化斑块代表性照片。
图8F为本发明实施例7中心脏粥样硬化斑块统计图。
图9A为本发明实施例8中小鼠体重变化图。
图9B为本发明实施例8中小鼠血清指标图。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
结合具体实例对本发明作进一步的说明，以下实例仅是为了解释本发明，并不对其内容进行限定。如果实施例中未注明的实验具体条件，通常按照常规条件，或按照销售公司所推荐的条件；实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可通过商业途径购买得到。
正如背景技术所介绍的，动脉粥样硬化的产生由多途径致病，治疗机制较为复杂，因此，筛选更为安全有效的用于防治动脉粥样硬化的药物成为目前研究的热点。
有鉴于此，本发明的一个具体实施方式中，提供没食子酸衍生物在制备预防和/或治疗动脉粥样硬化药物中的应用。
本发明的又一具体实施方式中，所述没食子酸衍生物具体为没食子酸酯，进一步包括但不限于没食子酸乙酯、没食子酸丙酯、没食子酸丁酯和没食子酸庚酯；最优选为没食子酸乙酯。
根据本发明，“预防和/或治疗”的概念表示任一适用于治疗动脉粥样硬化相关疾病的措施，或者对于这种表现的疾病或所表现出来的症状进行预防性治疗，或者避免这种疾病的复发，例如在结束了治疗时间段之后的复发或对已经发作的疾病的症状进行治疗，或者预先介入性的防止或抑制或减少该类疾病或症状的发生。
本发明的又一具体实施方式中，所述预防和/或治疗动脉粥样硬化至少表现在具有如下任意一种或多种用途：
a)抑制脂质沉积氧化；
b)延缓氧化性低密度脂蛋白(ox-LDL)对细胞的损害作用；
c)抑制巨噬细胞泡沫化转变；
d)促进巨噬细胞脂质外排；
e)上调巨噬细胞脂质代谢相关蛋白的表达；
f)抑制粥样硬化斑块生长。
本发明的又一具体实施方式中，所述b)中，细胞包括但不限于巨噬细胞；
本发明的又一具体实施方式中，所述e)中，巨噬细胞脂质代谢相关蛋白包括但不限于ABCA1转运蛋白，ABCG1转运蛋白和SR-BI蛋白。
根据本发明，不仅公开了没食子酸衍生物在制备防治动脉粥样硬化药物中的应用，而且还公开了，施用没食子酸衍生物与其它至少一种药物活性成分的组合时，可以增强这种作用。作为其它药物活性成分的替代或补充，没食子酸衍生物还可以与其它非药物活性成分组合使用。
本发明的又一具体实施方式中，提供一种防治动脉粥样硬化的药物组合物，所述药物组合物由没食子酸衍生物与至少一种其它药物活性成分和/或至少一种其它药物非活性成分构成。
所述药物非活性成分可以是药学上通常使用的载体、赋形剂及稀释剂等。而且，根据通常的方法，可以制作成粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、混悬剂、乳剂、糖浆剂、喷雾剂等的口服剂、外用剂、栓剂及无菌注射溶液形式的剂型使用。
所述可以包含的载体、赋形剂及稀释剂等非药物活性成分在领域内是熟知的，本领域普通技术人员能够确定其符合临床标准。
本发明的又一具体实施方式中，所述载体、赋形剂及稀释剂包括但不限于有乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯胶、藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石粉、硬脂酸镁和矿物油等。
本发明的又一具体实施方式中，本发明的药物可通过已知的方式施用至体内。例如通过静脉全身递送或者局部注射递送到感兴趣组织中。可选地经由静脉内、经皮、鼻内、粘膜或其他递送方法进行施用。这样的施用可以经由单剂量或多剂量来进行。本领域技术人员理解的是，本发明中有待施用的实际剂量可以在很大程度上取决于多种因素而变化，如靶细胞、生物类型或其组织、待治疗受试者的一般状况、给药途径、给药方式等等。
本发明的又一具体实施方式中，所述药物组合物施用对象可以是人和非人哺乳动物，如小鼠、大鼠、豚鼠、兔、狗、猴、猩猩等。
在本发明的意义上，本发明所述的药物组合物表示一种物质，其所含有的没食子酸衍生物对新生儿动脉粥样硬化具有明显防治作用。
本发明的又一具体实施方式中，所述没食子酸衍生物具体为没食子酸酯，进一步包括但不限于没食子酸乙酯、没食子酸丙酯、没食子酸丁酯和没食子酸庚酯；最优选为没食子酸乙酯。
本发明的又一具体实施方式中，提供没食子酸衍生物在制备如下任意一种或多种产品中的应用：
1)脂质沉积氧化抑制剂；
2)巨噬细胞泡沫化转变抑制剂；
3)巨噬细胞脂质外排促进剂；
4)ABCA1转运蛋白促进剂；
5)ABCG1转运蛋白促进剂；
6)SR-BI蛋白促进剂。
本发明的又一具体实施方式中，所述没食子酸衍生物具体为没食子酸酯，进一步包括但不限于没食子酸乙酯、没食子酸丙酯、没食子酸丁酯和没食子酸庚酯；最优选为没食子酸乙酯。
以下通过实施例对本发明做进一步解释说明，但不构成对本发明的限制。应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
实施例1.自由基清除实验
1实验方法
一.DPPH测定自由基消除：配制200μM DPPH溶液,样品浓度为2μM，10μM,20μM
Figure BDA0002387216650000071
Figure BDA0002387216650000081
试剂加入完毕后，室温下反应10min，无水乙醇调零，测517nm处的吸光度，样品吸光度为Ax，样品组吸光度为A0，背景组吸光度为Ax0，
清除率＝A0-(Ax-Ax0)/A0*100％
2.实验结果
Figure BDA0002387216650000082
附图1
3.结论
没食子酸乙酯对自由基具有很强的清除作用。没食子酸乙酯在2μM时对DPPH自由基的清除率高于75％，随浓度的增加到10μM，清除率高于80％，20μM清除率接近100％，具有剂量依赖性。
实施例2.低密度脂蛋白(LDL)氧化抑制实验(TBARS)
1.实验方法
Figure BDA0002387216650000083
没食子酸乙酯浓度：2μM，10μM，20μM，分别在LDL与二价铜离子和没食子酸乙酯共同反应的4h，8h，12h，24h，加入EDTA终止反应,测定LDL中TBARS的含量，用以确定LDL的氧化程度。
2.实验结果
Figure BDA0002387216650000091
附图2
通过实验结果可以得到，在DMSO对照组中LDL的氧化程度无论是在4h，8h，12h，24h都明显高于没食子酸乙酯处理组，随着时间的增加，DMSO组的氧化程度增加趋势更大，在4h到24h两个时间点增加了45nM，而没食子酸乙酯2μM增加了35nM，没食子酸乙酯10μM增加了20nM，没食子酸乙酯20μM增加了11nM。无论是在各个时间点还是LDL的氧化趋势都能明显体现没食子酸具有抑制LDL氧化的作用。
3.结论
没食子酸乙酯对铜离子(模拟体内自由基等因素)引起的低密度脂蛋白氧化有显著抑制作用，且具有剂量依赖性。
实施例3.巨噬细胞增殖、凋亡实验
1.实验方法
方法一，MTT法测定细胞活力(viability)：细胞培养，巨噬细胞RAW264.7,培养基RPMI1640+10％FBS。种植细胞密度为10000每孔于96孔板中，将接种好的96孔板放入培养箱中，至细胞单层铺满孔底，加入待测样品(ox-LDL刺激组加入ox-LDL至终浓度100μg/mL)，每组设3个复孔。5％二氧化碳.37℃培养48h，显微镜下观察细胞形态变化。每孔加入100μL含0.5％MTT的RPMI1640培养基培养4h，弃掉培养基，每孔加入100μLDMSO溶解细胞，避光摇床上摇匀10min，酶标仪检测490nm吸光度。
细胞活力＝(样品吸光度-对照组吸光度)/对照组吸光度*100％
方法二，流式细胞术FACS荧光双染测定细胞凋亡：细胞培养，巨噬细胞RAW264.7，培养基RPMI1640+10％FBS，种植细胞密度为100000-500000每孔于12孔板置于培养箱中，至细胞完全贴壁，细胞状态较好之后，加入不同浓度没食子酸乙酯孵育24h，空白对照用相同浓度的DMSO。24h之后每孔加入终浓度为100μg的氧化性低密度脂蛋白(ox-LDL)，刺激24h。将细胞消化重悬，300g离心5min，弃上清。用细胞染色液洗涤细胞一次，离心后弃上清，加入500μL稀释的Annexin V Binding Buffer工作液重悬细胞。在细胞重悬液中加入5μL的Annexin V-FITC和5μL的碘化吡啶(PI)染色液。混匀后避光15-20min。反应完成后样品置于冰上，在1h内用于流式细胞仪检测。
2.实验结果
MTT
Figure BDA0002387216650000101
MTT结果见附图3
FACS
Figure BDA0002387216650000102
FACS结果见附图4A-4C
MTT结果显示没食子酸乙酯(EG)在10μM、20μM、40μM浓度下，本身对于细胞没有毒副作用。氧化型低密度脂蛋白ox-LDL作用，对细胞的生长有显著的抑制作用。而在ox-LDL处理时加入不同浓度的没食子酸乙酯EG，细胞的抑制作用减弱，说明EG能够降低ox-LDL对细胞的损伤作用。
流式细胞术FACS结果显示：Q1即死细胞区域，
Figure BDA0002387216650000103
空白组比例为0.05％，ox-LDL作用组0.2％，OX-LDL+EG共同作用组0.16％。Q2即细胞晚期凋亡区域，
Figure BDA0002387216650000111
空白组比例为3.75％，ox-LDL作用组5.01％，EG+ox-LDL共同作用组2.57％，说明EG明显缓解了ox-LDL引起的细胞严重损伤。Q3即细胞早中期凋亡区域，
Figure BDA0002387216650000112
空白组比例为6.32％。ox-LDL作用组20.3％，EG+ox-LDL共同作用组15.4％，亦有较明显缓解。Q4为正常细胞区域，
Figure BDA0002387216650000113
空白组89.9％，ox-LDL作用组75.4％，EG+ox-LDL共同作用组81.8％。综上数据可以看出，与空白组相比，细胞在ox-LDL作用下早期和晚期凋亡的比例为25.31％，比空白组高出11.24％，而加入EG共同作用后，比例降低7.34％，说明EG有效地延缓了ox-LDL对细胞的损害作用。
3.结论
没食子酸乙酯(EG)在10μM、20μM、40μM浓度下，本身对于细胞没有毒副作用。氧化型低密度脂蛋白ox-LDL引起巨噬细胞损伤，发生凋亡，影响细胞的正常生长，而没食子酸乙酯处理能够明显提高细胞活性，抑制ox-LDL引起的细胞凋亡，从而缓解及防治动脉粥样硬化。
实施例4.抑制巨噬细胞泡沫化转变
1.实验方法:油红O染色(Oil Red OStaining)
油红O是一种非极性染料，可以使油脂呈现红色。细胞培养RAW264.7，RPMI1640+10％FBS，种植细胞密度为100000-500000于6孔板中，培养至细胞稳定生长。换无血清RPMI1640培养，同时加入待测物刺激细胞，空白对照为DMSO+ox-LDL,实验组为EG+OX-LDL，刺激24h。每孔加入终浓度为30μg/ml的ox-LDL，作用24h。弃掉培养基，PBS清洗3遍，10％中性甲醛固定10min，PBS清洗3遍，加入孵育液10min，油红O染色15min，脱色液A清洗2遍，脱色液B清洗2遍。显微镜下观察。观察拍照完成后，每孔加入1ml异丙醇溶解细胞，使细胞内的油红O溶解于上清液异丙醇中，在518nm处测吸光度。
2.实验结果
见附图5A-5C。
通过油红O染色的情况可以看出，在ox-LDL作用下，细胞摄入油脂，油滴数量及着色深度明显增强，泡沫化转变较为严重。而EG处理的细胞着色情况减弱，说明EG有效地抑制了巨噬细胞的泡沫化发展。异丙醇溶解之后，在518nm处油红O有吸收波长，可以定量得到油红O在细胞内的情况。结果表示，在OX-LDL作用组细胞体内的油红O要明显高于EG共同作用组。
3.结论
巨噬细胞吞噬脂质后泡沫化转变是动脉粥样硬化的关键因素。没食子酸乙酯(EG)处理显著抑制了巨噬细胞在ox-LDL刺激下的泡沫化转变，从而可以防治动脉粥样硬化的发生发展。
实施例5.巨噬细胞脂质外排实验
1.实验方法
细胞培养RAW264.7，RPMI1640+10％FBS种植细胞于24孔板中，细胞铺满于24孔板底面，加入Bodipy-cholesterol每孔1ml作用1.5h，加入待测物作用18h(换培养基SFRPMI1640+0.2％BSA),弃掉培养基，每孔加入50μg/ml的高密度脂蛋白(HDL)，作用18h，同时time＝0的24孔板弃掉培养基，每孔加入500μL的胆酸钠溶液，充分溶解细胞4h，酶标仪测激发波长482nm，吸收波长515nm处，荧光强度。样品板作用18h之后，收集细胞上清，细胞胆酸钠溶解4h，测荧光强度。
％Efflux＝细胞上清荧光强度/(细胞上清荧光强度+time＝0细胞溶解强度)*100％
2.实验结果
见附图6
胆固醇外流实验通过测试细胞培养上清中荧光标记的胆固醇含量与细胞及上清中总胆固醇荧光强度的比例，从而确定没食子酸乙酯促进胆固醇外流的能力。没食子酸乙酯在5μM，20μM作用下都明显高于空白处理组，而且随浓度的增加具有剂量依赖性。
3.结论
巨噬细胞胆固醇外排到HDL等血液中载体从而运输回肝脏处理是抑制动脉粥样硬化的关键机制。通过以上结果可以看出，EG处理剂量依赖性地促进了巨噬细胞的脂质外排，抑制其泡沫化转变，从而防治动脉粥样硬化的发生发展。
实施例6.巨噬细胞脂质代谢相关蛋白的变化
1.实验方法
细胞培养RAW264.7,RPMI1640+10％FBS，种植细胞于6孔板中，培养至细胞铺满6孔板底面，加入待测物刺激36h。RIPA+1％PMSF裂解细胞15min，置于冰上30min，10000rpm 5℃，10min提取蛋白。
8％凝胶，80V浓缩胶，120V分离胶。
转膜60V,120min，抗体ABCA1,ABCG1,SR-BI，内参为α-Tubulin。
2.实验结果
见图7。
在EG20uM处理细胞提取蛋白做westernblot蛋白印记分析后，发现与脂质转运、外排相关的ABCA1，ABCG1，SR-BI蛋白均有明显上调。
3.结论
通过实验结果可以看出，没食子酸乙酯EG处理能够显著上调巨噬细胞与脂质转运、外排相关的ABCA1，ABCG1及SR-BI蛋白表达量，从而促进脂质外排，抑制巨噬细胞泡沫化，防治动脉粥样硬化。
实施例7.小鼠模型
1.实验方法
AopE敲除小鼠一般在20周龄之后开始患动脉粥样硬化疾病，作为本实验的动物模型。
ApoE敲除小鼠，20周龄，注射0.9％生理盐水，EG 10mg/kg小鼠体重(标记为EG-L),EG 20mg/kg小鼠体重(标记为EG)，每天腹腔注射0.1ml，连续注射30天。
腹腔注射完成后，取小鼠的完整动脉，解剖分析斑块情况；心脏10μM切片观察组织斑块情况。
2.实验结果
见图8A-8F。
在ApoE敲除动脉粥样硬化模型小鼠的动脉中，未治疗组(生理盐水注射，Saline组)中斑块的面积在10％左右，而不同EG浓度治疗组斑块面积普遍小于5％，且呈现剂量依赖的趋势，效果显著。在心脏切片中也可以看出心脏内斑块，空白组的斑块面积对比不同浓度EG治疗组显著较高。从而得出EG能够有效的减少AopE敲除小鼠的斑块生长，EG对于延缓动脉粥样硬化的进程具有一定作用。
3.结论
通过结果可以看出，没食子酸乙酯EG治疗剂量依赖性地显著抑制动脉粥样硬化疾病模型小鼠的粥样硬化斑块发生情况，提示EG对防治动脉粥样硬化具有非常好的前景。
实施例8.安全性实验
1.实验方法
通过小鼠腹腔注射本发明涉及抑制剂，以生理盐水同体积注射组相比，通过死亡率、体重变化、解剖观察脏器及测定血清中反映肝脏损伤的不同指标，反映其毒性大小。
2.实验结果
见附图9A-B.
本发明药物没食子酸乙酯10mg/kg及20mg/kg小鼠体重剂量腹腔注射给药，动物在给药后即刻以及给药后1～90天未见动物出现死亡。给药后第14天、第28天、第42天及第56天动物体重与对照组相比亦无明显变化。给药后第64天对动物进行解剖，各脏器未见与药物相关病理变化。测定动物血清中反映肝脏损伤的天门冬氨酸氨基转移酶(AST)，丙氨酸氨基转移酶(ALT)及乳酸脱氢酶(LDH)含量，不同剂量的药物处理组均与生理盐水注射对照组无显著差异。
3.结论
试验结果提示本发明药物10mg/kg及20mg/kg腹腔注射给药，对小鼠无明显毒性作用。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.食子酸衍生物在制备预防和/或治疗动脉粥样硬化药物中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述没食子酸衍生物为没食子酸酯，包括没食子酸乙酯、没食子酸丙酯、没食子酸丁酯和没食子酸庚酯；优选为没食子酸乙酯。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述预防和/或治疗动脉粥样硬化至少表现在具有如下任意一种或多种用途：
a)抑制脂质沉积氧化；
b)延缓氧化性低密度脂蛋白对细胞的损害作用；
c)抑制巨噬细胞泡沫化转变；
d)促进巨噬细胞脂质外排；
e)上调巨噬细胞脂质代谢相关蛋白的表达；
f)抑制粥样硬化斑块生长。
4.如权利要求3所述应用，其特征在于，所述b)中，细胞为巨噬细胞。
5.如权利要求3所述应用，其特征在于，所述e)中，巨噬细胞脂质代谢相关蛋白包括ABCA1转运蛋白、ABCG1转运蛋白和SR-BI蛋白。
6.一种防治动脉粥样硬化的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物由没食子酸衍生物与至少一种其它药物活性成分和/或至少一种其它药物非活性成分构成。
7.如权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，所述药物非活性成分是药学上使用的载体、赋形剂和稀释剂。
8.如权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，所述没食子酸衍生物为没食子酸酯，包括没食子酸乙酯、没食子酸丙酯、没食子酸丁酯和没食子酸庚酯；优选为没食子酸乙酯。
9.没食子酸衍生物在制备如下任意一种或多种产品中的应用：
1)脂质沉积氧化抑制剂；
2)巨噬细胞泡沫化转变抑制剂；
3)巨噬细胞脂质外排促进剂；
4)ABCA1转运蛋白促进剂；
5)ABCG1转运蛋白促进剂；
6)SR-BI蛋白促进剂。
10.如权利要求9所述应用，其特征在于，所述没食子酸衍生物为没食子酸酯，包括没食子酸乙酯、没食子酸丙酯、没食子酸丁酯和没食子酸庚酯；优选为没食子酸乙酯。
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