CN111253246A

CN111253246A - 酰基酸类衍生物及其制备方法和医药用途

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Publication number: CN111253246A
Application number: CN202010184419.2A
Authority: CN
Inventors: 朱大海; 张勇; 李常银; 韩婉虹; 李虎; 黄艳
Original assignee: Institute of Basic Medical Sciences of CAMS
Current assignee: Institute of Basic Medical Sciences of CAMS
Priority date: 2020-03-16
Filing date: 2020-03-16
Publication date: 2020-06-09
Anticipated expiration: 2040-03-16
Also published as: CN111253246B

Abstract

本发明涉及酰基酸类衍生物及其制备方法和医药用途。具体地，本发明涉及通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐或含有其的药物组合物，以及其作为有效成分在预防和/或治疗肌肉萎缩相关疾病包括肌源性肌肉萎缩、废用性肌肉萎缩、老年性肌肉萎缩、神经源性肌肉萎缩中的用途，以及在预防和/或治疗肥胖症、脂肪肝、心脑血管疾病、代谢性疾病，以及抗衰老中的用途。其中，通式(I)中各基团的定义与说明书中的定义相同。

Description

酰基酸类衍生物及其制备方法和医药用途

技术领域

本发明涉及一种新型的酰基酸类化合物、其制备方法及含有其的药物组合物，以及其作为活性成分在预防或治疗肌肉萎缩相关疾病、肥胖症、脂肪肝、心脑血管疾病、代谢性疾病、和抗衰老中的用途。本发明还涉及含有该化合物的保健品。

背景技术

肌肉萎缩(Muscle atrophy and wasting)^[1,2]是指因各种原因引起的横纹肌肌肉体积较正常缩小，肌纤维变细甚至消失，临床表现主要为肌无力、肌张力低下或强直、肌萎缩或肥大、腱反射减低或消失，不伴有感觉障碍和肌束震颤。与肌肉萎缩相关的疾病包括肌源性肌萎缩、废用性肌萎缩、老年性肌萎缩、神经源性肌萎缩。

肌源性肌萎缩主要指肌肉本身病变而导致的肌肉萎缩，包括进行性肌营养不良、多发性肌炎，萎缩性强直，分泌性肌病。以进行性肌营养不良较常见。进行性肌营养不良(Muscular Dystrophy，MD)，是一组原发于肌肉组织的遗传病，多有家族史；临床特点是缓慢起病，进行性加重的肌肉萎缩与无力；主要累及肢体近端肌肉，极少数为远端；腱反射消失，肌肉假性肥大^[3]。MD患者血清肌酸磷酸激酶(CK)水平显著升高。MD患者肌电图表现为肌源性损害：插入电位出现自发电位和纤颤电位，正锐波增多，或有肌强直样电位；轻度肌收缩时运动单位电位平均时限缩短，多相电位增多，波幅降低；重度肌收缩时呈干扰型放电，但波幅低。MD的肌肉组织活检可观察到：肌纤维横纹消失、粗细不等、由多角形变为圆形、萎缩的小纤维混杂在正常体积或肥大的肌纤维中呈镶嵌式分布；肌膜核增多、致密深染、链状排列、胞核内移；肌纤维间质胶原增多；有脂肪细胞浸润；少见炎细胞浸润^[4]。根据患者肌肉累及部位可分为很多类型^[5]：杜氏(Duchenne)型肌营养不良(DMD)、贝克(Becker)型肌营养不良(BMD)、Emery-Dreifuss型肌营养不良(EDMD)、肢-带型肌营养不良(LGMD)、面-肩-肱型肌营养不良(FSHD)、远端肌营养不良(DM)、眼咽肌型肌营养不良(OPMD)等。另外，先天性肌营养不良(CMD)是出生后即发病的一类严重型肌营养不良；强直性肌营养不良(MMD)是肌强直性疾病伴有进行性肌无力和肌肉耗竭、远端肢体和面肌无力是主要临床表现，为一种多系统损害的肌病，伴有性腺萎缩、秃发、心脏和精神障碍。尽管已经克隆了各种类型肌营养不良的候选基因，但其发病机制尚不清楚。根据致病基因编码蛋白的功能特征，人们推测MD发生机制可能有以下几个方面^[6]：肌膜完整性破坏、细胞外基质与细胞骨架联系丢失、细胞骨架组织缺陷、肌纤维运动收缩障碍、结构蛋白糖基化受阻、蛋白降解异常、肌纤维再生能力减弱、肌细胞异常凋亡、细胞内特定信息传导通路中断等。面对这样一个发病机制复杂高度遗传异质性的肌病群，增加了寻找有效治疗靶点的难度。

老年性肌萎缩，也称为肌少症(Sarcopenia)，是指伴随衰老进程出现的进行性的骨骼肌质量减少、肌肉力量和运动功能减弱。骨骼肌质量和力量在年轻的成年个体达到高峰。随着年龄增长，约40岁左右出现逐渐下降，骨骼肌质量和力量在50岁以后出现显著性降低，80岁以后骨骼肌质量和力量几乎降低到年轻时的50％以下^[7,8]。老年性肌萎缩的病因与激素水平变化、蛋白质合成与分解失衡、神经-肌肉功能衰退及运动单位重组、线粒体染色体损伤、自由基氧化损伤及骨骼肌的修复机理受损、细胞凋亡、钙稳态失衡、热量和蛋白质摄入改变等相关。最近的研究表明，老年性肌肉萎缩与骨骼肌干细胞数量减少和功能改变密切相关。老年骨骼肌再生缺陷与骨骼肌干细胞功能障碍相关^[9]。在骨骼肌衰老过程中，骨骼肌干细胞由静息状态进入到衰老前期，在再生与增殖的压力下，加速其老化过程^[10]。老年小鼠体内2/3的骨骼肌干细胞都有缺陷，修复肌纤维和再生能力较低。这种缺陷与p38α和p38βMAPK通路活性升高有关。对其中的p38α和p38β进行抑制，仍有功能的干细胞发生了快速的扩增，恢复了再生和修复受损骨骼肌的能力^[11]。还有研究发现，随着骨骼肌干细胞的老化，JAK/STAT信号通路的活性会逐渐增加，最终导致干细胞发生功能衰退。老年小鼠中的JAK-STAT信号明显高于年轻小鼠。降低Jak2或Stat3的活性，能够在体外和体内显著刺激肌肉干细胞增殖，提高肌肉的再生能力^[12]。因此，通过调控骨骼肌干细胞的功能为干预和治疗老年性肌肉萎缩带来希望。

废用性肌萎缩主要是由于骨折或上运动神经元系统病变或其他慢性病导致患者长期卧床，肌肉长时间不运动或很少运动，导致肌肉退化而出现萎缩。

神经源性肌萎缩是由于运动神经元和支配肌肉的周围神经病变引起的一组肌肉萎缩，主要指脊髓前角细胞及其发出的神经轴突等下运动神经元病变而导致的肌肉萎缩。临床主要表现为肌无力和肌萎缩症状，血清肌酸磷酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)均正常。针极肌电图检查表现为异常自发单位可有可无，运动单位电位时限增宽、波幅增高、位相增多、募集减少)^[13]。神经源性肌萎缩主要包括：肌萎缩侧索硬化症(ALS)、平山病(受累前臂及手掌肌肉萎缩)、脊肌萎缩症(双侧下肢肌肉萎缩)、腓骨肌萎缩症(双侧小腿萎缩)、重症肌无力(MG)。肌萎缩侧索硬化是一种运动神经元病，可能与基因突变有关，临床以非对称起病的肢体或发音及吞咽肌肉的肌肉萎缩和无力为特征，肌电图检查提示广泛的脊髓前角细胞病变。青少年单侧上肢远端肌萎缩症，也称“平山病”，病因不明，可能与颈段脊髓病变有关，临床上主要表现为一侧或双侧上肢远端肌萎缩，以手部小肌肉萎缩(骨间肌、鱼际肌)明显。腓骨肌萎缩症和脊肌萎缩症也是一种运动神经元病，均与遗传因素有关，在下肢均表现为肌肉萎缩，病变肌纤维为脂肪组织替代。重症肌无力是一种主要累及神经肌肉接头突触后膜上乙酰胆碱受体的自身免疫性疾病。

肌萎缩患者由于肌肉萎缩、肌无力而造成生活自理能力缺失^[14]，肢体运动进行性加重，一些患者出现延髓麻痹症状，一些患者出现呼吸衰竭和心脏功能障碍，严重威胁患者的生命，也给社会带来严重的经济损失。这类疾病仍缺乏有效的药物治疗，存在着强烈的未满足的临床需求。

代谢性疾病是人体的蛋白质、脂肪、碳水化合物等物质发生代谢紊乱的病理状态，是导致糖尿病和心脑血管疾病的危险因素。其包括肥胖症、高血糖、高血压、血脂异常、高血黏、脂肪肝、高胰岛素血症等。代谢性疾病可能导致高血压、冠心病、脑卒中、甚至某些癌症，包括与性激素有关的乳腺癌、子宫内膜癌、前列腺癌，以及消化系统的胰腺癌、肝胆癌、结肠癌等。代谢性疾病发病广泛，是人体各系统尤其是心脑血管系统的重要健康威胁，病程常持续多年，造成生活质量的下降。代谢性疾病的治疗选择较多，但是服药时间长，难以从根本上纠正异常状态。

心脑血管疾病(cardiovascular diseases，CVD)是包括心血管疾病、肺循环疾病和脑血管疾病的一组循环系统疾病。心血管疾病包括动脉硬化、冠心病、周围末梢动脉血管疾病、深静脉血栓、肺栓塞等。脑血管疾病包括短暂性脑缺血发作(TIA)、脑梗塞、脑出血、高血压脑病、脑动脉炎、脑血管性痴呆、静脉窦和脑静脉血栓形成及各种原因引起的脑血管疾病。这些疾病的共同特点是由于血脂太高导致血栓，进而堵塞血管引起的。

心脑血管疾病对人类健康的危害严重，是当今社会危害人类健康和生命最主要的疾病。近年来冠心病和脑卒中的发病率大幅度上升，发病和死亡均出现年轻化的趋势，死亡人数持续增加，在死因构成中的比例呈上升趋势，是威胁人类健康和生命的“头号杀手”。全世界每死亡3个人，差不多就有1个人是死于心血管疾病，给家庭带来了巨大的痛苦，给社会造成巨大的损失。心血管疾病有不同的治疗选择，但是疾病和后遗症较为严重，现有治疗难以完全纠正。

肥胖症是指体内脂肪堆积过多和/或分布异常、体重增加，是包括遗传和环境因素在内的多种因素相互作用所引起的慢性代谢性疾病。据报道，2008年全世界共有2亿成年男性、3亿成年女性患有肥胖症^[15]。估计到2030年，全球肥胖人数将会高达10亿^[16]。正常男性成人脂肪组织重量约占体重的15％～18％，女性约占20％～25％。随年龄增长，体脂所占比例相应增加。体重指数[BMI＝体重(Kg)/(身高)²(m²)]大于28者则为肥胖症^[17]。肥胖症会使高血压、糖尿病和心脑血管疾病等的发病率及死亡率显著增加^[17]，其已成为危害全球人类健康的重要问题之一，是社会广泛关注的焦点。肥胖症的预防和治疗已成为现代医学面临的一项挑战。2008年，仅美国用于肥胖症的医疗费用就高达1470亿美元^[18]。据博思数据统计，2012年全球减肥药市场规模为15.6亿美元，我国减肥药零售市场规模30.5亿元，其中减肥药(处方药)市场规模为16.8亿元^[19]。按现在的市场预测未来可能全球将达到700亿，其中中国将近100亿元。

脂肪肝(fatty liver disease FLD)是指各种原因引起的肝细胞弥漫性脂肪变性为主的病理综合征。当肝内脂肪含量超过肝湿重的5％，或肝活检30％以上肝细胞有脂肪变且弥漫分布于全肝，称为脂肪性肝病，简称脂肪肝。目前，脂肪肝已经成为发达/发展中国家排名第一位/第二位的常见肝病，并已经成为中国排名第一的肝病。随着肥胖症和代谢性疾病在全球的流行，脂肪肝增长迅速且呈低龄化发病趋势，尽管酒精滥用和丙肝(HCV)感染与肝脂肪变关系密切，但是全球脂肪肝的流行与肥胖症患病率迅速增长密切相关。脂肪肝对于人体的危害不可忽视，它可以使50岁以下患者寿命缩短4年，50岁以上者寿命缩短10年。

衰老是指机体各器官功能普遍的逐渐降低的过程，表现为结构和机能衰退，适应性和抵抗力减退^[20]。骨骼系统骨组织随年龄衰老而钙质渐减，骨质变脆，易骨折，创伤愈合也比年轻时缓慢。老年人皮肤真皮乳头变低，表皮变薄，真皮网状纤维减少，弹性纤维渐失弹性，皮肤松弛，真皮含水量降低，皮下脂肪减少，汗腺、皮脂腺萎缩，由于局部黑素细胞增生而出现老年斑。老年人肌肉的肌重与体重之比下降，整个肌肉萎缩等^[21]。各系统功能衰退，并造成自主生活能力的丧失，给老人带来不便，也给家庭带来了沉重的负担。2014年我国60岁以上老年人已超过2亿，占总人口的14.9％，且比例逐年增大，抗衰老需求庞大。

发明内容

本发明人通过一系列实验发现并证明由酰基羧酸衍生得到的小分子化合物可以改善正常小鼠的骨骼肌的生理功能并且促进骨骼肌的损伤修复，同时还具有改善mdx小鼠的肌营养不良的功能。而这一系列的功能可能是通过激活Ras-raf-mek-erk-cyclinD1这条信号通路从而促进骨骼肌干细胞的增殖来实现的。

本发明人还通过一系列实验发现并证明由酰基羧酸衍生得到的小分子化合物能够有效预防和/或治疗肥胖症，葡萄糖耐量异常、胰岛素耐量异常、高脂血症等代谢综合症，脂肪肝，心脑血管疾病如动脉粥样硬化等。分子机制研究发现酰基羧酸衍生物可能是通过抑制脂肪细胞中脂滴形成，抑制脂合成，促进脂分解实现其预防和/或治疗相关疾病的生物学功能。

因此，本发明的目的提供一种通式(I)所示的化合物，

或其药学上可接受的盐，

其中，

X₁选自O、S或N-OR^a；

X₂选自-C(O)-、-S(O)-、或-S(O)₂-；

X₃和X₄各自独立地选自O、-C(O)-或-C(O)O-；

Y₁、Y₂、Y₃、Y₄各自独立地选自亚烷基或亚烯基；

或者通过Y₄与Y₁相连，Y₄、Y₂、X₃、Y₁与它们相连的原子一起形成环烷基；

R¹选自氢、OR^b、卤素、氨基、烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，所述烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被选自卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、氧代、硝基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基的一种或多种基团取代；

R²选自氢、卤素、羟基、烷基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基，所述烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被选自卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、氧代、硝基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基的一种或多种基团取代；

R^a选自氢或烷基；

R^b选自氢、烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，，所述烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被选自卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、氧代、硝基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基的一种或多种基团取代；

m、n、t、p、q、r、s各自独立地为0或1。

在本发明一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)所示的化合物，其中，

X₁选自O；

X₂选自-C(O)-；

r为1。

在本发明另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)所示的化合物，

其中，R¹、R²、Y₁、Y₄和t如通式(I)所定义。

在本发明另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(II)所示的化合物，

其中，Y₁选自C₁-C₁₀亚烷基或C₂-C₁₀亚烯基，优选C₁-C₈亚烷基或C₂-C₈亚烯基，更优选C₁-C₆亚烷基或C₂-C₆亚烯基。

其中，

Y₁选自C₁-C₆亚烷基；

s为1；

m、n、p、q各自独立地为0。

其中，

Y₁选自C₂-C₆亚烯基；

s为1；

m、n、p、q各自独立地为0。

其中，R¹选自OR^b，且R^b为氢、C₁-C₆烷基、C₃-C₇环烷基或C₆-C₁₀芳基；所述烷基、环烷基或芳基任选进一步被选自卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、氧代、硝基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基的一种或多种基团取代。

其中，

Y₄选自C₁-C₆亚烷基或C₂-C₆亚烯基；

R²选自氢、卤素、C₃-C₇环烷基、4至7元杂环基、C₆-C₁₀芳基或5至10元杂芳基；所述环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被选自卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、氧代、硝基、烷基、烷氧基的一种或多种基团取代；

o为1。

其中，

X₁选自O；

X₂选自-C(O)-；

X₃和X₄各自独立地选自C(O)-或-C(O)O-；

r为1；

p和q各自独立地为0或1。

其中，

m为1；

n为1；

s为0或1。

在本发明另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)所示的化合物，其为通式(III)或通式(IV)或通式(V)或通式(VI)所示的化合物，

其中，R¹、R²、Y₁、Y₂、Y₃、Y₄和t如通式(I)中所定义。

在本发明另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(III)或通式(IV)或通式(V)或通式(VI)所示的化合物，

其中，

t为0；

R²选自卤素、羟基、或C₁-C₆烷基；所述烷基任选进一步被选自卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、氧代、硝基、烷氧基的一种或多种基团取代。

其中，

R¹选自氢、OR^b、卤素、或烷基；

R^b选自氢或C₁-C₆烷基。

其中，

X₁选自O；

X₂选自-C(O)-；

通过Y₄与Y₁相连，Y₄、Y₂、X₃、Y₁与它们相连的原子一起形成环烷基；；

m、n、t、p、q、r、s各自独立地为0或1。

在本发明另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)所示的化合物，其为通式(VII)所示的化合物，

其中，

y和z各自独立地为1至3的整数；

R¹、R²、Y₃、X₄、m、q、r如通式(I)所定义。

在本发明另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(VII)所示的化合物，

其中，

q为0；

m为1；

Y₃为C₁-C₆亚烷基或C₂-C₆亚烯基。

其中，

q为0；

m为0。

其中，

q为0；

m为0；

r为0。

其中，

R¹选自氢、OR^b、卤素、或烷基；

R^b选自氢或C₁-C₆烷基。

其中，

X₁选自S或N-OR^a；

X₂选自-C(O)-；

R^a选自氢或C₁-C₆烷基；

r为1。

其中，

X₁选自O、S或N-OR^a；

X₂选自-S(O)-或-S(O)₂-；

R^a选自氢或C₁-C₆烷基；

R¹选自卤素、氨基或C₁-C₆烷基；

r为1。

其中，

X₁选自O；

R¹选自OR^b；

R^b选自氢；

r为0。

其中，

Y₁选自C₁-C₆亚烷基；

s为1；

m、n、p、q各自独立地为0。

其中，

Y₄选自C₁-C₆亚烷基或C₂-C₆亚烯基；

o为1。

本发明的典型化合物包括但不限于以下化合物：

或其药学上可接受的盐。

本发明进一步提供一种药物组合物，其包含根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。

本发明进一步提供一种根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐或含有其的药物组合物，在制备预防和/或治疗肌肉萎缩相关疾病的药物中的用途，其中所述肌肉萎缩相关疾病可以为肌源性肌肉萎缩、废用性肌肉萎缩、老年性肌肉萎缩、神经源性肌肉萎缩，优选为肌源性肌肉萎缩和老年性肌肉萎缩。

本发明另一方面提供一种根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐或含有其的药物组合物，在制备预防和/或治疗肥胖症、脂肪肝、心脑血管疾病、代谢性疾病，以及抗衰老药物中的用途；其中所述心脑血管疾病例如高血压、冠心病、脑卒中、动脉硬化、周围末梢动脉血管疾病、深静脉血栓、肺栓塞、短暂性脑缺血发作(TIA)、脑梗塞、脑出血、高血压脑病、脑动脉炎、脑血管性痴呆、静脉窦和脑静脉血栓形成；所述代谢性疾病例如高血糖、高血压、血脂异常、高血黏、脂肪肝、高胰岛素血症、葡萄糖耐量异常、胰岛素耐量异常。

本发明进一步提供一种用于增加肌肉和/或减肥和/或抗衰老的保健品，其包含根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或保健品用赋形剂。

按照本发明所属领域的常规方法，本发明通式(I)所示的化合物可以与碱生成药学上可接受的碱式加成盐。所述碱包括无机碱和有机碱，可接受的有机碱包括二乙醇胺、乙醇胺、N-甲基葡糖胺、三乙醇胺、氨丁三醇等，可接受的无机碱包括氢氧化铝、氢氧化钙、氢氧化钾、碳酸钠和氢氧化钠等。

本发明中，肌肉萎缩包括肌源性肌肉萎缩、废用性肌肉萎缩、老年性肌肉萎缩、神经源性肌肉萎缩等，优选肌源性和老年性肌肉萎缩。

肌源性肌肉萎缩是指肌肉本身病变而导致的肌肉萎缩。包括各种类型的肌营养不良：Duchenne/Becker型肌营养不良(DMD/BMD)、Emery-Dreifuss型肌营养不良(EDMD)、肢-带型肌营养不良(LGMD)、面-肩-肱型肌营养不良(FSHD)、肢端肌营养不良(DM)、眼咽肌型肌营养不良(OPMD)、先天性肌营养不良(CMD)、强直性肌营养不良。

废用性肌肉萎缩是指由于骨折或上运动神经元系统病变或其他慢性病导致患者长期卧床，肌肉长时间不运动或很少运动，导致肌肉退化而出现萎缩。

老年性肌肉萎缩是指伴随衰老进程出现的进行性的骨骼肌质量减少、肌肉力量和运动功能减弱。骨骼肌质量和力量在年轻的成年个体达到高峰。随着年龄增长，约40岁左右出现逐渐下降，骨骼肌质量和力量在50岁以后出现显著性降低，80岁以后骨骼肌质量和力量几乎降低到年轻时的50％以下。

神经源性肌肉萎缩是指由于运动神经元和支配肌肉的周围神经病变引起的一组肌肉萎缩。主要包括：肌萎缩侧索硬化症(ALS)、平山病(受累前臂及手掌肌肉萎缩)、脊肌萎缩症(双侧下肢肌肉萎缩)、腓骨肌萎缩症(双侧小腿萎缩)等。

本文中，肥胖症是指体内脂肪堆积过多和/或分布异常、体重增加，是包括遗传和环境因素在内的多种因素相互作用所引起的慢性代谢性疾病。

本文中，脂肪肝(fatty liver disease FLD)是指各种原因引起的肝细胞弥漫性脂肪变性为主的病理综合征。

本文中，心脑血管疾病(cardiovascular diseases，CVD)是包括心血管疾病、肺循环疾病和脑血管疾病的一组循环系统疾病。

本文中，代谢性疾病是人体的蛋白质、脂肪、碳水化合物等物质发生代谢紊乱的病理状态。

本文中，衰老指机体各器官功能普遍的逐渐降低的过程，表现为结构和机能衰退，适应性和抵抗力减退。

本发明所述的通式(I)所示的化合物可以与药学上或生理学上可接受的载体或赋形剂一起被制备成药物组合物或保健品组合物。

“药物组合物”表示含有本文所述的通式(I)所示的化合物与其它化学组分的混合物，以及其它组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。

“保健品”是具有特定保健功能的食品，即适用于特定人群使用，具有调节机体功能，不以治疗为目的的一类食品。

本发明所述的药物组合物或保健品可以是适用于口服的形式，例如片剂、糖锭剂、锭剂、水或油混悬液、粉末剂或颗粒剂、乳液、硬或软胶囊剂，或糖浆剂或酏剂。此类组合物可含有一种或多种选自以下的成分：甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂，以提供悦目和可口的制剂。片剂含有活性成分和用于混合的适宜制备片剂的无毒的可药用的赋形剂。这些赋形剂可以是惰性赋形剂、造粒剂、崩解剂、粘合剂、和润滑剂。这些片剂可以不包衣，或可通过掩盖药物的味道或在胃肠道中延迟崩解和吸收因而在较长时间内提供缓释作用的已知技术将其包衣。

本发明所述的药物组合物或保健品也可以是无菌注射水溶液形式。可以使用的可接受的溶媒或溶剂有水、林格氏液和等渗氯化钠溶液。无菌注射制剂可以是其中活性成分溶解于油相的无菌注射水包油微乳，可通过局部大量注射将注射液或微乳注入患者的血流中。或者，按可保持本发明化合物恒定循环浓度的方式给予溶液和微乳。

本发明所述的药物组合物或保健品还可以是用于肌内和皮下给药的无菌注射水或油混悬液的形式。无菌注射制剂也可以是在肠胃外可接受的无毒稀释剂或溶剂中制备的无菌注射溶液或混悬液。此外，可方便地用无菌固定油作为溶剂或悬浮介质。为此目的，可使用任何调和固定油。此外，脂肪酸也可以制备注射剂。

本发明所述的药物组合物或者保健品，根据需要可以加入其它的药效成分、营养剂、载体等其它的任意成分。作为任意成分，可以添加结晶性纤维素、明胶、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、滑石、植物性和动物性脂肪、油脂、树胶、聚烷撑二醇等可药用的载体、粘合剂、稳定剂、溶剂、分散介质、增亮剂、赋型剂、稀释剂、PH缓冲剂、崩解剂、增溶剂、溶解辅助剂、等渗剂等各种制剂用配合成分。

如本领域技术人员所熟知的，药物的给药剂量依赖于多种因素，包括但并非限定于以下因素：所用具体化合物的活性、患者的年龄、患者的体重、患者的健康状况、患者的行为、患者的饮食、给药时间、给药方式、排泄的速率、药物的组合等；另外，最佳的治疗方式如治疗的模式、本发明化合物的日用量或可药用的盐的种类可以根据传统的治疗方案来验证。

本发明可以含有通式(I)的化合物及其药学上可接受的盐，与药学上可接受的载体或赋型剂混合制备成组合物，并制备成临床上可接受的剂型。本发明的衍生物可以与其他活性成分组合使用，只要它们不产生其他不利的作用，例如过敏反应等。本发明化合物可作为唯一的活性成分，也可以与其它治疗与肌肉萎缩相关的疾病的药物或抗衰老的药物联合使用。联合治疗通过将各个治疗组分同时、分开或相继给药来实现。

发明的详细说明

在本说明书中，除非另有规定，本文使用的所有技术和科学术语具有与本领域技术人员的通常理解相同含义。倘若对于本文使用的术语有多个定义，除非另有说明，以本说明书中的为准。

术语“烷基”指饱和脂肪族烃基团，其为包含1至20个碳原子的直链或支链基团，优选含有1至12个碳原子的烷基，更优选含有1至6个碳原子的烷基。非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,2-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2,3-二甲基己基、2,4-二甲基己基、2,5-二甲基己基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基己基、4,4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、正壬基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、2,2-二乙基戊基、正癸基、3,3-二乙基己基、2,2-二乙基己基，及其各种支链异构体等。更优选的是含有1至6个碳原子的低级烷基，非限制性实施例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、羧基或羧酸酯基。

术语“烯基”指由至少由两个碳原子和至少一个碳-碳双键组成的如上定义的烷基，例如乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-、2-或3-丁烯基等。烯基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基。

术语“烷氧基”指-O-(烷基)，其中烷基的定义如上所述。非限制性实施例包含甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基等。烷氧基可以是任选取代的或未取代的，当被取代时，取代基，优选为一个或多个以下基团，独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基。

术语“亚烷基”指如上定义的烷基的一个氢原子进一步被取代，例如：“亚甲基”指-CH₂-、“亚乙基”指-(CH₂)₂-、“亚丙基”指-(CH₂)₃-、“亚丁基”指-(CH₂)₄-等。本文定义的亚烷基优选C₁-C₆亚烷基。

术语“亚烯基”指如上定义的烯基的一个氢原子进一步被取代，例如：“亚乙烯基”指-CH＝CH-。本文定义的亚烯基优选C₂-C₆亚烯基。

术语“环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，环烷基环包含3至20个碳原子，优选包含3至12个碳原子，更优选包含3至6个碳原子。单环环烷基的非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等；多环环烷基包括螺环、稠环和桥环的环烷基。

术语“螺环烷基”指5至20元的单环之间共用一个碳原子(称螺原子)的多环基团，其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺环烷基、双螺环烷基或多螺环烷基，优选为单螺环烷基和双螺环烷基。更优选为4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺环烷基。螺环烷基的非限制性实例包括：

术语“稠环烷基”指5至20元，系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对碳原子的全碳多环基团，其中一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠环烷基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环烷基。稠环烷基的非限制性实例包括：

术语“桥环烷基”指5至20元，任意两个环共用两个不直接连接的碳原子的全碳多环基团，其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥环烷基，优选为双环、三环或四环，更有选为双环或三环。桥环烷基的非限制性实例包括：

所述环烷基环可以稠合于芳基、杂芳基或杂环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为环烷基，非限制性实例包括茚满基、四氢萘基、苯并环庚烷基等。环烷基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、羧基或羧酸酯基。

术语“杂环基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其包含3至20个环原子，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)_m(其中m是整数0至2)的杂原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的环部分，其余环原子为碳。优选包含3至12个环原子，其中1～4个是杂原子；最优选包含3至8个环原子，其中1～3个是杂原子；最优选包含5至6个环原子，其中1～2或1～3个是杂原子。单环杂环基的非限制性实例包括吡咯烷基、咪唑烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、二氢咪唑基、二氢呋喃基、二氢吡唑基、二氢吡咯基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基、吡喃基等，优选1、2、5-噁二唑基、吡喃基或吗啉基。多环杂环基包括螺环、稠环和桥环的杂环基。

术语“螺杂环基”指5至20元的单环之间共用一个原子(称螺原子)的多环杂环基团，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)_m(其中m是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺杂环基分为单螺杂环基、双螺杂环基或多螺杂环基，优选为单螺杂环基和双螺杂环基。更优选为4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺杂环基。螺杂环基的非限制性实例包括：

术语“稠杂环基”指5至20元，系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对原子的多环杂环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)_m(其中m是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠杂环基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环稠杂环基。稠杂环基的非限制性实例包括：

术语“桥杂环基”指5至14元，任意两个环共用两个不直接连接的原子的多环杂环基团，其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)_m(其中m是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥杂环基，优选为双环、三环或四环，更有选为双环或三环。桥杂环基的非限制性实例包括：

所述杂环基环可以稠合于芳基、杂芳基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂环基，其非限制性实例包括：

等。

杂环基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、羧基或羧酸酯基。

术语“芳基”指具有共轭的π电子体系的6至14元全碳单环或稠合多环(也就是共享毗邻碳原子对的环)基团，优选为6至10元，例如苯基和萘基。更优选苯基。所述芳基环可以稠合于杂芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环，其非限制性实例包括：

芳基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基或羧酸酯基。

术语“杂芳基”指包含1至4个杂原子、5至14个环原子的杂芳族体系，其中杂原子选自氧、硫和氮。杂芳基优选为5至10元，含1至3个杂原子；更优选为5元或6元，含1至2个杂原子；优选例如咪唑基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡唑基、噁唑基、吡咯基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、噻二唑、吡嗪基等，优选为咪唑基、噻唑基、吡唑基或嘧啶基、噻唑基；更有选吡唑基或噻唑基。所述杂芳基环可以稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环，其非限制性实例包括：

杂芳基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基或羧酸酯基。

术语“酰基”是指至少由两个碳原子和至少一个羰基组成的如上定义的烷基，例如乙酰基、丙酰基、丁酰基、异丁酰基、甲酰丙酰基等。酰基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基。

术语“羟基”指-OH基团。

术语“巯基”指-SH基团。

术语“卤素”指氟、氯、溴或碘。

术语“氨基”指-NH₂。

术语“氰基”指-CN。

术语“硝基”指-NO₂。

术语“氧代”指＝O。

“任选”或“任选地”意味着随后所描述的事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生的场合。例如，“任选被烷基取代的杂环基团”意味着烷基可以但不必须存在，该说明包括杂环基团被烷基取代的情形和杂环基团不被烷基取代的情形。

“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为最多5个，更优选为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。

“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。

“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐，这类盐用于哺乳动物体内时具有安全性和有效性，且具有应有的生物活性。

附图说明

图1的A为不同剂量本发明化合物1(2、5、10mM)处理C2C12细胞24小时，流式细胞技术分析得到的细胞周期图。“-”为对照组。*代表P<0.05，表示有统计学差异，**代表P<0.01，表示有显著统计学差异。

图1的B为10mM本发明化合物1处理C2C12细胞不同时间(24、36、48h)，流式细胞技术分析得到的细胞周期图。“-”为对照组，“+”为处理组。**代表P<0.01，表示有显著统计学差异。

图2的A为分离培养的原代脂肪细胞诱导分化过程中用不同剂量本发明化合物1(0.5mM、1mM)处理不同时间点(2，3，4天)以后的Bodipy荧光染色成像图。

图2的B为原代脂肪细胞诱导分化过程中用不同剂量本发明化合物1(0.5mM、1mM)处理4天脂滴面积统计图。横坐标是脂滴面积，单位平方微米(μm²)。纵坐标是具有横坐标指示的面积的脂滴数量占所统计的全部脂滴数量的百分比，纵坐标单位是百分数(％)。*代表P<0.05，表示有统计学差异，**代表P<0.01，表示有显著统计学差异，***代表P<0.001，表示有极显著统计学差异。

图2的C为原代脂肪细胞诱导分化过程中用不同剂量本发明化合物1(0.5mM、1mM)处理不同时间(1、2、3天)检测甘油三酯含量的统计图。*代表P<0.05，表示有统计学差异，**代表P<0.01，表示有显著统计学差异。

图3的A为分离培养的原代脂肪细胞诱导分化过程中用不同剂量本发明化合物100(1、5、20mM)处理3天以后的细胞成像图。

图3的B为原代脂肪细胞诱导分化过程中用不同剂量本发明化合物100(1、5、20mM)处理3天后检测甘油三酯含量的统计图。*代表P<0.05，表示有统计学差异，**代表P<0.01，表示有显著统计学差异。

图4的A为分离培养的原代脂肪细胞诱导分化过程中用不同剂量本发明化合物65(1、5、20mM)处理3天以后的细胞成像图。

图4的B为原代脂肪细胞诱导分化过程中用不同剂量本发明化合物65(1、5、20mM)处理3天后检测甘油三酯含量的统计图。**代表P<0.01，表示有显著统计学差异。

图5的A为分离培养的原代脂肪细胞诱导分化过程中用不同剂量本发明化合物3(1、5、20mM)处理3天以后的细胞成像图。

图5的B为原代脂肪细胞诱导分化过程中用不同剂量本发明化合物3(1、5、20mM)处理3天后检测甘油三酯含量的统计图。*代表P<0.05，表示有统计学差异，**代表P<0.01，表示有显著统计学差异。

图6的A为分离培养的原代脂肪细胞诱导分化过程中用不同剂量本发明化合物26(0.02、0.05、0.1mM)处理12小时后Cidec的基因表达统计图。“-”为对照组。

图6的B为分离培养的原代脂肪细胞诱导分化过程中用不同剂量本发明化合物26(0.5、1、2mM)处理24小时后细胞中甘油三酯含量的统计图。**代表P<0.01，表示有显著统计学差异。“-”为对照组。

图6的C为人脂肪细胞系分化过程中用不同剂量本发明化合物26(0.02、0.05、0.1mM)处理12小时后Cidec的基因表达统计图。“-”为对照组。

图6的D为人脂肪细胞系分化过程中用不同剂量本发明化合物26(0.02、0.05、0.1mM)处理24小时后细胞中甘油三酯含量的统计图。“-”为对照组。

图7的A为分离培养的原代脂肪细胞诱导分化过程中用不同剂量本发明化合物6(1、5、10mM)处理12小时后Cidec的基因表达统计图。“-”为对照组。

图7的B为分离培养的原代脂肪细胞诱导分化过程中用不同剂量本发明化合物6(1、5、10mM)处理24小时后细胞中甘油三酯含量的统计图。“-”为对照组。

图7的C为人脂肪细胞系分化过程中用不同剂量本发明化合物6(1、5、10mM)处理12小时后Cidec的基因表达统计图。“-”为对照组。

图7的D为人脂肪细胞系分化过程中用不同剂量本发明化合物6(1、5、10mM)mM)处理24小时后细胞中甘油三酯含量的统计图。“-”为对照组。

图8的A为分离培养的原代脂肪细胞诱导分化过程中用不同剂量本发明化合物7(0.5、1、2mM)处理12小时后Cidec的基因表达统计图。“-”为对照组。

图8的B为分离培养的原代脂肪细胞诱导分化过程中用不同剂量本发明化合物7(0.5、1、2mM)处理24小时后细胞中甘油三酯含量的统计图。“-”为对照组。

图8的C为人脂肪细胞系分化过程中用不同剂量本发明化合物7(0.5、1、2mM)处理12小时后Cidec的基因表达统计图。“-”为对照组。

图8的D为人脂肪细胞系分化过程中用不同剂量本发明化合物7(0.5、1、2mM)mM)处理24小时后细胞中甘油三酯含量的统计图。“-”为对照组。

图9的A为分离培养的原代脂肪细胞诱导分化过程中用不同剂量本发明化合物11(0.5、1、2mM)处理12小时后Cidec的基因表达统计图。“-”为对照组。

图9的B为分离培养的原代脂肪细胞诱导分化过程中用不同剂量本发明化合物11(0.5、1、2mM)处理24小时后细胞中甘油三酯含量的统计图。“-”为对照组。

图9的C为人脂肪细胞系分化过程中用不同剂量本发明化合物11(0.5、1、2mM)处理12小时后Cidec的基因表达统计图。“-”为对照组。

图9的D为人脂肪细胞系分化过程中用不同剂量本发明化合物11(0.5、1、2mM)mM)处理24小时后细胞中甘油三酯含量的统计图。“-”为对照组。

图10的A为分离培养的原代脂肪细胞诱导分化过程中用不同剂量本发明化合物20(0.5、1、2mM)处理12小时后Cidec的基因表达统计图。“-”为对照组。

图10的B为分离培养的原代脂肪细胞诱导分化过程中用不同剂量本发明化合物20(0.5、1、2mM)处理24小时后细胞中甘油三酯含量的统计图。“-”为对照组。

图10的C为人脂肪细胞系分化过程中用不同剂量本发明化合物20(0.5、1、2mM)处理12小时后Cidec的基因表达统计图。“-”为对照组。

图10的D为人脂肪细胞系分化过程中用不同剂量本发明化合物20(0.5、1、2mM)处理24小时后细胞中甘油三酯含量的统计图。“-”为对照组。

图11的A为分离培养的原代脂肪细胞诱导分化过程中用不同剂量本发明化合物38(0.1、0.2、0.5mM)处理12小时后Cidec的基因表达统计图。“-”为对照组。

图11的B为分离培养的原代脂肪细胞诱导分化过程中用不同剂量本发明化合物38(0.1、0.2、0.5mM)处理24小时后细胞中甘油三酯含量的统计图。“-”为对照组。**代表P<0.01，表示有显著统计学差异。

图11的C为人脂肪细胞系分化过程中用不同剂量本发明化合物38(0.1、0.2、0.5mM)处理12小时后Cidec的基因表达统计图。“-”为对照组。

图11的D为人脂肪细胞系分化过程中用不同剂量本发明化合物38(0.1、0.2、0.5mM)mM)处理24小时后细胞中甘油三酯含量的统计图。“-”为对照组。

图12的A为分离培养的原代脂肪细胞诱导分化过程中用不同剂量本发明化合物39(0.05、0.1、0.2mM)处理12小时后Cidec的基因表达统计图。“-”为对照组。

图12的B为分离培养的原代脂肪细胞诱导分化过程中用不同剂量本发明化合物39(0.1、0.2、0.5mM)处理24小时后细胞中甘油三酯含量的统计图。“-”为对照组。**代表P<0.01，表示有显著统计学差异。

图12的C为人脂肪细胞系分化过程中用不同剂量本发明化合物39(0.05、0.1、0.2mM)处理12小时后Cidec的基因表达统计图。“-”为对照组。

图12的D为人脂肪细胞系分化过程中用不同剂量本发明化合物39(0.05、0.1、0.2mM)处理24小时后细胞中甘油三酯含量的统计图。“-”为对照组。

图13的A为分离培养的原代脂肪细胞诱导分化过程中用不同剂量本发明化合物40(0.5、1、2mM)处理12小时后Cidec的基因表达统计图。“-”为对照组。

图13的B为分离培养的原代脂肪细胞诱导分化过程中用不同剂量本发明化合物40(0.5、1、2mM)处理24小时后细胞中甘油三酯含量的统计图。“-”为对照组。

图13的C为人脂肪细胞系分化过程中用不同剂量本发明化合物40(0.5、1、2mM)处理12小时后Cidec的基因表达统计图。“-”为对照组。

图13的D为人脂肪细胞系分化过程中用不同剂量本发明化合物40(0.5、1、2mM)处理24小时后细胞中甘油三酯含量的统计图。“-”为对照组。

图14的A为分离培养的原代脂肪细胞诱导分化过程中用不同剂量本发明化合物47(0.5、1、2mM)处理12小时后Cidec的基因表达统计图。“-”为对照组。

图14的B为分离培养的原代脂肪细胞诱导分化过程中用不同剂量本发明化合物47(0.5、1、2mM)处理24小时后细胞中甘油三酯含量的统计图。“-”为对照组。

图14的C为人脂肪细胞系分化过程中用不同剂量本发明化合物47(0.5、1、2mM)处理12小时后Cidec的基因表达统计图。“-”为对照组。

图14的D为人脂肪细胞系分化过程中用不同剂量本发明化合物47(0.5、1、2mM)处理24小时后细胞中甘油三酯含量的统计图。“-”为对照组。

图15的A为分离培养的原代脂肪细胞诱导分化过程中用不同剂量本发明化合物48(0.5、1、2mM)处理12小时后Cidec的基因表达统计图。“-”为对照组。

图15的B为分离培养的原代脂肪细胞诱导分化过程中用不同剂量本发明化合物48(0.5、1、2mM)处理24小时后细胞中甘油三酯含量的统计图。“-”为对照组。**代表P<0.01，表示有显著统计学差异。

图15的C为人脂肪细胞系分化过程中用不同剂量本发明化合物48(0.5、1、2mM)处理12小时后Cidec的基因表达统计图。“-”为对照组。

图15的D为人脂肪细胞系分化过程中用不同剂量本发明化合物48(0.5、1、2mM)处理24小时后细胞中甘油三酯含量的统计图。

图16的A为分离培养的原代脂肪细胞诱导分化过程中用不同剂量本发明化合物71(1、5、10mM)处理12小时后Cidec的基因表达统计图。“-”为对照组。

图16的B为分离培养的原代脂肪细胞诱导分化过程中用不同剂量本发明化合物71(1、5、10mM)处理24小时后细胞中甘油三酯含量的统计图。“-”为对照组。

图16的C为人脂肪细胞系分化过程中用不同剂量本发明化合物71(1、5、10mM)处理12小时后Cidec的基因表达统计图。“-”为对照组。

图16的D为人脂肪细胞系分化过程中用不同剂量本发明化合物71(1、5、10mM)处理24小时后细胞中甘油三酯含量的统计图。“-”为对照组。

图17的A为分离培养的原代脂肪细胞诱导分化过程中用不同剂量本发明化合物102(0.5、1、2mM)处理12小时后Cidec的基因表达统计图。“-”为对照组。

图17的B为分离培养的原代脂肪细胞诱导分化过程中用不同剂量本发明化合物102(0.5、1、2mM)处理24小时后细胞中甘油三酯含量的统计图。“-”为对照组。

图17的C为人脂肪细胞系分化过程中用不同剂量本发明化合物102(0.5、1、2mM)处理12小时后Cidec的基因表达统计图。“-”为对照组。

图17的D为人脂肪细胞系分化过程中用不同剂量本发明化合物102(0.5、1、2mM)处理24小时后细胞中甘油三酯含量的统计图。“-”为对照组。

图18的A为C2C12细胞系在增殖过程中使用不同剂量本发明化合物5(1、2、5mM)处理24小时后细胞密度的统计图。“-”为对照组。

图18的B为人骨骼肌干细胞系在增殖过程中使用不同剂量本发明化合物5(1、2、5mM)处理12小时后CyclinE1基因表达的统计图。“-”为对照组。

图18的C为人骨骼肌干细胞系在增殖过程中使用不同剂量本发明化合物5(1、2、5mM)处理24小时后细胞密度的统计图。“-”为对照组。

图19的A为C2C12细胞系在增殖过程中使用不同剂量本发明化合物6(1、2、5mM)处理12小时后CyclinE1基因表达的统计图。“-”为对照组。

图19的B为C2C12细胞系在增殖过程中使用不同剂量本发明化合物6(1、2、5mM)处理24小时后细胞密度的统计图。“-”为对照组。*代表P<0.05，表示有统计学差异。

图19的C为人骨骼肌干细胞系在增殖过程中使用不同剂量本发明化合物6(1、2、5mM)处理12小时后CyclinE1基因表达的统计图。“-”为对照组。

图19的D为人骨骼肌干细胞系在增殖过程中使用不同剂量本发明化合物6(1、2、5mM)处理24小时后细胞密度的统计图。“-”为对照组。*代表P<0.05，表示有统计学差异。

图20的A为C2C12细胞系在增殖过程中使用不同剂量本发明化合物38(1、5、10mM)处理12小时后CyclinE1基因表达的统计图。“-”为对照组。

图20的B为C2C12细胞系在增殖过程中使用不同剂量本发明化合物38(1、5、10mM)处理24小时后细胞密度的统计图。“-”为对照组。

图20的C为人骨骼肌干细胞系在增殖过程中使用不同剂量本发明化合物38(1、5、10mM)处理12小时后CyclinE1基因表达的统计图。“-”为对照组。

图20的D为人骨骼肌干细胞系在增殖过程中使用不同剂量本发明化合物38(1、5、10mM)处理24小时后细胞密度的统计图。“-”为对照组。*代表P<0.05，表示有统计学差异。

图21的A为C2C12细胞系在增殖过程中使用不同剂量本发明化合物39(0.5mM)处理12小时后CyclinE1基因表达的统计图。“-”为对照组。

图21的B为C2C12细胞系在增殖过程中使用不同剂量本发明化合物39(0.1、0.2、0.5mM)处理24小时后细胞密度的统计图。“-”为对照组。

图21的C为人骨骼肌干细胞系在增殖过程中使用不同剂量本发明化合物39(0.1、0.2、0.5mM)处理12小时后CyclinE1基因表达的统计图。“-”为对照组。

图21的D为人骨骼肌干细胞系在增殖过程中使用不同剂量本发明化合物39(0.1、0.2、0.5mM)处理24小时后细胞密度的统计图。“-”为对照组。

图22的A为C2C12细胞系在增殖过程中使用不同剂量本发明化合物40(1、5、10mM)处理12小时后CyclinE1基因表达的统计图。“-”为对照组。

图22的B为C2C12细胞系在增殖过程中使用不同剂量本发明化合物40(1、5、10mM)处理24小时后细胞密度的统计图。“-”为对照组。

图22的C为人骨骼肌干细胞系在增殖过程中使用不同剂量本发明化合物40(1、5、10mM)处理12小时后CyclinE1基因表达的统计图。“-”为对照组。

图22的D为人骨骼肌干细胞系在增殖过程中使用不同剂量本发明化合物40(1、5、10mM)处理24小时后细胞密度的统计图。“-”为对照组。

图23的A为C2C12细胞系在增殖过程中使用不同剂量本发明化合物47(1、5、10mM)处理12小时后CyclinE1基因表达的统计图。“-”为对照组。

图23的B为C2C12细胞系在增殖过程中使用不同剂量本发明化合物47(1、5、10mM)处理24小时后细胞密度的统计图。“-”为对照组。

图23的C为人骨骼肌干细胞系在增殖过程中使用不同剂量本发明化合物47(1、5、10mM)处理12小时后CyclinE1基因表达的统计图。“-”为对照组。*代表P<0.05，表示有统计学差异。

图23的D为人骨骼肌干细胞系在增殖过程中使用不同剂量本发明化合物47(1、5、10mM)处理24小时后细胞密度的统计图。“-”为对照组。

图24的A为C2C12细胞系在增殖过程中使用不同剂量本发明化合物48(1、5、10mM)处理12小时后CyclinE1基因表达的统计图。“-”为对照组。

图24的B为C2C12细胞系在增殖过程中使用不同剂量本发明化合物48(1、5、10mM)处理24小时后细胞密度的统计图。“-”为对照组。

图24的C为人骨骼肌干细胞系在增殖过程中使用不同剂量本发明化合物48(1、5、10mM)处理12小时后CyclinE1基因表达的统计图。“-”为对照组。*代表P<0.05，表示有统计学差异。

图24的D为人骨骼肌干细胞系在增殖过程中使用不同剂量本发明化合物48(1、5、10mM)处理24小时后细胞密度的统计图。“-”为对照组。*代表P<0.05，表示有统计学差异。

图25的A为C2C12细胞系在增殖过程中使用不同剂量本发明化合物49(1、5、10mM)处理12小时后CyclinE1基因表达的统计图。“-”为对照组。

图25的B为C2C12细胞系在增殖过程中使用不同剂量本发明化合物49(1、5、10mM)处理24小时后细胞密度的统计图。“-”为对照组。

图25的C为人骨骼肌干细胞系在增殖过程中使用不同剂量本发明化合物49(1、5、10mM)处理12小时后CyclinE1基因表达的统计图。“-”为对照组。*代表P<0.05，表示有统计学差异。

图25的D为人骨骼肌干细胞系在增殖过程中使用不同剂量本发明化合物49(1、5、10mM)处理24小时后细胞密度的统计图。“-”为对照组。*代表P<0.05，表示有统计学差异。

图26的A为C2C12细胞系在增殖过程中使用不同剂量本发明化合物51(1、5、10mM)处理12小时后CyclinE1基因表达的统计图。“-”为对照组。

图26的B为C2C12细胞系在增殖过程中使用不同剂量本发明化合物51(1、2、5mM)处理24小时后细胞密度的统计图。“-”为对照组。

图26的C为人骨骼肌干细胞系在增殖过程中使用不同剂量本发明化合物51(1、5、10mM)处理12小时后CyclinE1基因表达的统计图。“-”为对照组。*代表P<0.05，表示有统计学差异。

图26的D为人骨骼肌干细胞系在增殖过程中使用不同剂量本发明化合物51(1、2、5mM)处理24小时后细胞密度的统计图。“-”为对照组。

图27的A为CTX损伤7天后本发明化合物1处理组和对照组胫骨前肌重量图。“-”为对照组，“+”为处理组。*代表P<0.05，表示有统计学差异。

图27的B为CTX损伤7天后本发明化合物1处理组和对照组胫骨前肌HE染色照片。

图27的C为CTX损伤7天后本发明化合物1处理组和对照组胫骨前肌中央核纤维面积统计结果图。“-”为对照组，“+”为处理组。*代表P<0.05，表示有统计学差异。

图27的D为CTX损伤3天后本发明化合物1处理组和对照组胫骨前肌中Pax7和MyoD蛋白表达水平电泳结果图。GAPDH作为蛋白电泳时上样量一致的对照。

图27的E为CTX损伤3天后本发明化合物1处理组和对照组胫骨前肌BrdU、MyoD免疫荧光染色照片。

图27的F为CTX损伤3天后本发明化合物1处理组和对照组胫骨前肌BrdU、MyoD双阳性细胞比例统计结果图。“-”为对照组，“+”号代表BrdU阳性、MyoD阳性的细胞。*代表P<0.05，表示有统计学差异。

图28的A为不同剂量本发明化合物1(50mg/kg，100mg/kg)腹腔注射Mdx小鼠2个月后，本发明化合物1处理组和对照组胫骨前肌EBD荧光图片。“-”为对照组。

图28的B为不同剂量本发明化合物1(50mg/kg，100mg/kg)腹腔注射Mdx小鼠2个月后，本发明化合物1处理组和对照组胫骨前肌中EBD渗入的面积统计结果图。“-”为对照组。*代表P<0.05，表示有统计学差异。

图28的C为不同剂量本发明化合物1(50mg/kg，100mg/kg)腹腔注射Mdx小鼠2个月后，本发明化合物1处理组和对照组血清中肌酸激酶水平检测结果图。*代表P<0.05，表示有统计学差异。WT代表野生型小鼠，mdx代表肌萎缩蛋白(Dystrophin)基因突变的肌营养不良小鼠。“-”为对照组。

图28的D为本发明化合物1处理组和对照组前肢抓力统计图。*代表P<0.05，表示有统计学差异。WT代表野生型小鼠，mdx代表肌萎缩蛋白(Dystrophin)基因突变的肌营养不良小鼠。“-”为对照组。

图28的E为本发明化合物1处理组和对照组小鼠跑步实验运动时间记录结果图。*代表P<0.05，表示有统计学差异。WT代表野生型小鼠，mdx代表肌萎缩蛋白(Dystrophin)基因突变的肌营养不良小鼠。“-”为对照组。

图28的F为本发明化合物1处理组和对照组小鼠的趾长伸肌(EDL)强直收缩肌肉张力统计图。*代表P<0.05，表示有统计学差异。WT代表野生型小鼠，mdx代表肌萎缩蛋白(Dystrophin)基因突变的肌营养不良小鼠。“-”为对照组。

图28的G为本发明化合物1处理组和对照组小鼠的趾长伸肌(EDL)单收缩肌肉张力统计图。*代表P<0.05，表示有统计学差异。WT代表野生型小鼠，mdx代表肌萎缩蛋白(Dystrophin)基因突变的肌营养不良小鼠。“-”为对照组。

图29的A为14个月老年小鼠经过腹腔注射100mg/kg本发明化合物14个月后，处理组和对照组小鼠体重图。

图29的B为14个月老年小鼠经过腹腔注射100mg/kg本发明化合物14个月后，处理组和对照组小鼠胫骨前肌(TA)、比目鱼肌(SOL)、腓肠肌(GAS)肌肉重量图。

图29的C为14个月老年小鼠经过腹腔注射100mg/kg本发明化合物14个月后，处理组和对照组小鼠跑步运动时间记录结果图。

图29的D为14个月老年小鼠经过腹腔注射100mg/kg本发明化合物14个月后，处理组和对照组小鼠前肢抓力结果统计图。*代表P<0.05，表示有统计学差异。

图29的E为14个月老年小鼠经过腹腔注射100mg/kg本发明化合物14个月后，处理组和对照组小鼠趾长伸肌(EDL)单收缩肌肉张力统计图。

图29的F为14个月老年小鼠经过腹腔注射100mg/kg本发明化合物14个月后，处理组和对照组小鼠趾长伸肌(EDL)强直收缩肌肉张力统计图。

图30的A为本发明化合物1(100mg/kg)干预8周小鼠的体重生长曲线，其中，SD代表正常饮食组，HFD代表高脂饮食并给予与本发明化合物1相同体积的PBS的对照组，HFD+1代表高脂饮食并隔天一次腹腔注射本发明化合物1的干预组。

图30的B为本发明化合物1(100mg/kg)干预后的小鼠食物摄取量结果图，其中，SD代表正常饮食组，HFD代表高脂饮食并给予与本发明化合物1相同体积的PBS的对照组，HFD+1代表高脂饮食并隔天一次腹腔注射本发明化合物1的干预组，NS表示无统计学差异。

图30的C为本发明化合物1(100mg/kg)干预后的小鼠皮下和腹部的白色脂肪积累量对比图，其中iWAT：皮下白色脂肪，gWAT：腹腔白色脂肪，BAT：棕色脂肪，SD代表正常饮食组，HFD代表高脂饮食并给予与本发明化合物1相同体积的PBS的对照组，HFD+1代表高脂饮食并隔天一次腹腔注射本发明化合物1的干预组。*代表P<0.05，表示有统计学差异。

图30的D为本发明化合物1(100mg/kg)干预后白色脂肪和棕色脂肪细胞的脂滴HE染色成像图，其中WAT：白色脂肪，BAT：棕色脂肪，SD代表正常饮食组，HFD代表高脂饮食并给予与本发明化合物1相同体积的PBS的对照组，HFD+1代表高脂饮食并隔天一次腹腔注射本发明化合物1的干预组。

图30的E为本发明化合物1(100mg/kg)干预后的小鼠脂肪细胞面积对比图，其中，SD代表正常饮食组，HFD代表高脂饮食并给予与本发明化合物1相同体积的PBS的对照组，HFD+1代表高脂饮食并隔天一次腹腔注射本发明化合物1的干预组。*代表P<0.05，表示有统计学差异。

图30的F为本发明化合物1(100mg/kg)干预后的小鼠肛温测定结果，其中，HFD代表高脂饮食并给予与本发明化合物1相同体积的PBS的对照组，HFD+1代表高脂饮食并隔天一次腹腔注射本发明化合物1的干预组。*代表P<0.05，表示有统计学差异，**代表P<0.01，表示有显著统计学差异。

图30的G为本发明化合物1(100mg/kg)干预后的小鼠葡萄糖耐量(GTT)测定结果，其中，SD代表正常饮食组，HFD代表高脂饮食并给予与本发明化合物1相同体积的PBS的对照组，HFD+1代表高脂饮食并隔天一次腹腔注射本发明化合物1的干预组。*代表P<0.05，表示有统计学差异。

图30的H为本发明化合物1(100mg/kg)干预后的小鼠胰岛素耐量(ITT)测定结果，其中，SD代表正常饮食组，HFD代表高脂饮食并给予与本发明化合物1相同体积的PBS的对照组，HFD+1代表高脂饮食并隔天一次腹腔注射本发明化合物1的干预组。*代表P<0.05，表示有统计学差异。

图30的I为本发明化合物1(100mg/kg)干预后小鼠血清中游离脂肪酸(FFA)的测定结果，其中，SD代表正常饮食组，HFD代表高脂饮食并给予与本发明化合物1相同体积的PBS的对照组，HFD+1代表高脂饮食并隔天一次腹腔注射本发明化合物1的干预组。*代表P<0.05，表示有统计学差异。

图30的J为本发明化合物1(100mg/kg)干预后小鼠血清中甘油三酯(TG)的测定结果，其中，SD代表正常饮食组，HFD代表高脂饮食并给予与本发明化合物1相同体积的PBS的对照组，HFD+1代表高脂饮食并隔天一次腹腔注射本发明化合物1的干预组。*代表P<0.05，表示有统计学差异。

图30的K为本发明化合物1(100mg/kg)干预后小鼠肝脏油红染色图。HFD代表高脂饮食并给予与本发明化合物1相同体积的PBS的对照组，HFD+1代表高脂饮食并隔天一次腹腔注射本发明化合物1的干预组。

图31的A为本发明化合物1(100mg/kg)治疗7周小鼠的体重生长曲线，其中，SD代表正常饮食组，HFD代表高脂饮食并给予与本发明化合物1相同体积的PBS的对照组，HFD+1代表高脂饮食并腹腔注射本发明化合物1(100mg/kg)的治疗组。

图31的B为本发明化合物1(100mg/kg)治疗后的小鼠食物摄取量结果图，其中，SD代表正常饮食组，HFD代表高脂饮食并给予与本发明化合物1相同体积的PBS的对照组，HFD+1代表高脂饮食并腹腔注射本发明化合物1(100mg/kg)的治疗组。

图31的C为本发明化合物1(100mg/kg)治疗后的小鼠皮下和腹部的白色脂肪积累量对比图，其中iWAT：皮下白色脂肪，gWAT：腹腔白色脂肪，BAT：褐色脂肪，SD代表正常饮食组，HFD代表高脂饮食并给予与本发明化合物1相同体积的PBS的对照组，HFD+1代表高脂饮食并腹腔注射本发明化合物1(100mg/kg)的治疗组，*代表P<0.05，表示有统计学差异，**代表P<0.01，表示有显著统计学差异。

图31的D为本发明化合物1(100mg/kg)治疗后小鼠白色脂肪组织大小对比图，其中，iWAT：皮下白色脂肪，gWAT：腹腔白色脂肪，SD代表正常饮食组，HFD代表高脂饮食并给予与本发明化合物1相同体积的PBS的对照组，HFD+1代表高脂饮食并腹腔注射本发明化合物1的治疗组。

图31的E为本发明化合物1(100mg/kg)治疗后白色脂肪和棕色脂肪细胞的脂滴HE染色成像图，其中WAT：白色脂肪，BAT：褐色脂肪，SD代表正常饮食组，HFD代表高脂饮食并给予与本发明化合物1相同体积的PBS的对照组，HFD+1代表高脂饮食并腹腔注射本发明化合物1的治疗组。

图31的F为本发明化合物1(100mg/kg)治疗后的小鼠肛温测定结果，其中，SD代表正常饮食组，HFD代表高脂饮食并给予与本发明化合物1相同体积的PBS的对照组，HFD+1代表高脂饮食并腹腔注射本发明化合物1的治疗组。*代表P<0.05，表示有统计学差异。

图31的G为本发明化合物1(100mg/kg)治疗后的小鼠葡萄糖耐量(GTT)测定结果，其中，SD代表正常饮食组，HFD代表高脂饮食并给予与本发明化合物1相同体积的PBS的对照组，HFD+1代表高脂饮食并腹腔注射本发明化合物1的治疗组。*代表P<0.05，表示有统计学差异。

图31的H为本发明化合物1(100mg/kg)治疗后的小鼠胰岛素耐量(ITT)测定结果，其中，SD代表正常饮食组，HFD代表高脂饮食并给予与本发明化合物1相同体积的PBS的对照组，HFD+1代表高脂饮食并腹腔注射本发明化合物1的治疗组。*代表P<0.05，表示有统计学差异。

图31的I为本发明化合物1(100mg/kg)治疗后小鼠血清中游离脂肪酸(FFA)的测定结果，其中，SD代表正常饮食组，HFD代表高脂饮食并给予与本发明化合物1相同体积的PBS的对照组，HFD+1代表高脂饮食并腹腔注射本发明化合物1的治疗组。*代表P<0.05，表示有统计学差异。

图31的J为本发明化合物1(100mg/kg)治疗后小鼠血清中甘油三酯(TG)的测定结果，其中，SD代表正常饮食组，HFD代表高脂饮食并给予与本发明化合物1相同体积的PBS的对照组，HFD+1代表高脂饮食并腹腔注射本发明化合物1的治疗组。*代表P<0.05，表示有统计学差异。

图32的A为不同剂量的本发明化合物26(5、10mg/kg)治疗8周小鼠的体重生长曲线，其中，HFD代表高脂饮食并给予与本发明化合物26相同体积的PBS的对照组，26-5代表高脂饮食并腹腔注射本发明化合物26(5mg/kg)的治疗组，26-10代表高脂饮食并腹腔注射本发明化合物26(10mg/kg)的治疗组。

图32的B为不同剂量的本发明化合物26(5、10mg/kg)治疗8周小鼠的皮下脂肪的重量，其中SD代表正常饮食组，HFD代表高脂饮食并给予与本发明化合物26相同体积的PBS的对照组，26-5代表高脂饮食并腹腔注射本发明化合物26(5mg/kg)的治疗组，26-10代表高脂饮食并腹腔注射本发明化合物26(10mg/kg)的治疗组。*代表P<0.05，表示有统计学差异。

图32的C为不同剂量的本发明化合物26(5、10mg/kg)治疗8周小鼠的腹腔脂肪的重量，其中SD代表正常饮食组，HFD代表高脂饮食并给予与本发明化合物26相同体积的PBS的对照组，26-5代表高脂饮食并腹腔注射本发明化合物26(5mg/kg)的治疗组，26-10代表高脂饮食并腹腔注射本发明化合物26(10mg/kg)的治疗组。*代表P<0.05，表示有统计学差异。

图32的D为不同剂量的本发明化合物26(5、10mg/kg)治疗8周小鼠葡萄糖耐量(GTT)测定结果，其中，SD代表正常饮食组，HFD代表高脂饮食并给予与本发明化合物26相同体积的PBS的对照组，26-5代表高脂饮食并腹腔注射本发明化合物26(5mg/kg)的治疗组，26-10代表高脂饮食并腹腔注射本发明化合物26(10mg/kg)的治疗组。纵坐标是血糖浓度，横坐标的单位：分钟。

图32的E为不同剂量的本发明化合物26(5、10mg/kg)治疗后的小鼠胰岛素耐量(ITT)测定结果，其中，SD代表正常饮食组，HFD代表高脂饮食并给予与本发明化合物26相同体积的PBS的对照组，26-5代表高脂饮食并腹腔注射本发明化合物26(5mg/kg)的治疗组，26-10代表高脂饮食并腹腔注射本发明化合物26(10mg/kg)的治疗组。纵坐标是血糖浓度，横坐标的单位：分钟。

图33的A为不同剂量的本发明化合物38(5、10mg/kg)治疗8周小鼠的体重生长曲线，其中，HFD代表高脂饮食并给予与本发明化合物38相同体积的PBS的对照组，38-5代表高脂饮食并腹腔注射本发明化合物38(5mg/kg)的治疗组，38-10代表高脂饮食并腹腔注射本发明化合物38(10mg/kg)的治疗组。

图33的B为不同剂量的本发明化合物38(5、10mg/kg)治疗8周小鼠的皮下脂肪的重量，其中，SD代表正常饮食组，HFD代表高脂饮食并给予与本发明化合物38相同体积的PBS的对照组，38-5代表高脂饮食并腹腔注射本发明化合物38(5mg/kg)的治疗组，38-10代表高脂饮食并腹腔注射本发明化合物38(10mg/kg)的治疗组。

图33的C为不同剂量的本发明化合物38(5、10mg/kg)治疗8周小鼠的腹腔脂肪的重量，其中，SD代表正常饮食组，HFD代表高脂饮食并给予与本发明化合物38相同体积的PBS的对照组，38-5代表高脂饮食并腹腔注射本发明化合物38(5mg/kg)的治疗组，38-10代表高脂饮食并腹腔注射本发明化合物38(10mg/kg)的治疗组。

图33的D为不同剂量的本发明化合物38(5、10mg/kg)治疗8周小鼠葡萄糖耐量(GTT)测定结果，其中，SD代表正常饮食组，HFD代表高脂饮食并给予与本发明化合物38相同体积的PBS的对照组，38-5代表高脂饮食并腹腔注射本发明化合物38(5mg/kg)的治疗组，38-10代表高脂饮食并腹腔注射本发明化合物38(10mg/kg)的治疗组。

图33的E为不同剂量的本发明化合物38(5、10mg/kg)治疗8周小鼠胰岛素耐量(ITT)测定结果，其中，SD代表正常饮食组，HFD代表高脂饮食并给予与本发明化合物38相同体积的PBS的对照组，38-5代表高脂饮食并腹腔注射本发明化合物38(5mg/kg)的治疗组，38-10代表高脂饮食并腹腔注射本发明化合物38(10mg/kg)的治疗组。

图34的A为本发明化合物1(100mg/kg)干预2个月后载脂蛋白E基因敲除小鼠的体重对比图，其中，SD代表正常饮食组，HFD代表高脂饮食并给予与本发明化合物1相同体积的PBS的对照组，HFD+1代表高脂饮食并腹腔注射本发明化合物1的干预组。*代表P<0.05，表示有统计学差异。

图34的B为本发明化合物1(100mg/kg)干预2个月后载脂蛋白E基因敲除小鼠的皮下和腹部的白色脂肪积累量对比图，其中iWAT：皮下白色脂肪，gWAT：腹腔白色脂肪，BAT：棕色脂肪，其中，SD代表正常饮食组，HFD代表高脂饮食并给予与本发明化合物1相同体积的PBS的对照组，HFD+1代表高脂饮食并腹腔注射本发明化合物1的干预组。*代表P<0.05，表示有统计学差异。

图34的C为本发明化合物1(100mg/kg)干预2个月后载脂蛋白E基因敲除小鼠的血清中甘油三酯(TG)水平对比图，其中，SD代表正常饮食组，HFD代表高脂饮食并给予与本发明化合物1相同体积的PBS的对照组，HFD+1代表高脂饮食并腹腔注射本发明化合物1的干预组。*代表P<0.05，表示有统计学差异。

图34的D为本发明化合物1(100mg/kg)干预2个月后载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉的动脉粥样硬化斑块油红染色照片，其中，SD代表正常饮食组，HFD代表高脂饮食并给予与本发明化合物1相同体积的PBS的对照组，HFD+1代表高脂饮食并腹腔注射本发明化合物1的干预组。

图34的E为本发明化合物1(100mg/kg)干预2个月后载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块统计结果，其中，SD代表正常饮食组，HFD代表高脂饮食并给予与本发明化合物1相同体积的PBS的对照组，HFD+1代表高脂饮食并腹腔注射本发明化合物1的干预组，纵坐标的单位：平方微米μm²。

具体实施方式

进一步通过实施例来理解本发明的化合物及其制备，这些实施例说明了一些制备或使用所述化合物的方法。然而，要理解的是，这些实施例不限制本发明的范围。现在已知的或进一步开发的本发明的变化被认为落入本文中描述的和要求保护的本发明范围之内。

本发明化合物是利用便利的起始原料和通用的制备步骤来完成制备的。本发明给出了典型的或倾向性的反应条件，诸如反应温度、时间、溶剂、压力、反应物的摩尔比。但是除非特殊说明，其他反应条件也能采纳。优化条件可能随着具体的反应物或溶剂的使用而改变，但在通常情况下，反应优化步骤和条件都能得到确定。

此外，本发明未提供制备方法的化合物可以便利地通过商购获得，或者可以根据本领域技术人员公知的逆合成方法根据常规技术手段获得。例如，本发明的化合物1(乙酰丙酸)购自Sigma公司(货号L2009)，化合物3购自Sigma公司(货号A13204)，化合物65购自Sigma公司(货号V900552)，化合物100购自百灵威公司(货号H0511)。

化合物和中间体的分离和纯化依据具体的需求采取适当的方法和步骤，例如过滤、萃取、蒸馏、结晶、柱层析色谱法、制备薄层色谱法、制备高效液相色谱法或上述方法的混合使用。其具体使用方法可参阅本发明描述的实例。当然，其他类似的分离和纯化手段也是可以采用的。可以使用常规方法(包括物理常数和波谱数据)对其进行表征。

化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或/和质谱(MS)来确定的。NMR位移以10^-6(ppm)的单位给出。NMR的测定是用Brukerdps 300型核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d₆)、氘代氯仿(CDCl₃)、氘代甲醇(CD₃OD)，内标为四甲基硅烷(TMS)。

质谱的测定用LC(Waters 2695)/MS(Quattro Premier xE)质谱仪(生产商：沃特世)(Photodiode Array Detector)。

制备液相色谱法使用lc6000高效液相色谱仪(生产商：创新通恒)。

薄层层析硅胶板使用青岛海洋化工GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.20mm～0.25mm，制备薄层色谱法(Prep-TLC)分离纯化产品采用的规格是0.5mm。

柱层析色谱法一般使用青岛海洋硅胶100～200目、200～300目和300～400目硅胶为载体。

反相色谱法：C18色谱柱，安捷伦。

本发明的已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买自网化商城、北京偶合、Sigma、百灵威、易世明、上海书亚、上海伊诺凯、安耐吉化学、上海毕得等公司。

实施例中无特殊说明，反应能够均在氮气氛下进行。

氩气氛或氮气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氩气或氮气气球。

反应溶剂、有机溶剂或惰性溶剂各自表述为使用的该溶剂在所描述的反应条件下不参与反应，包括，如苯、甲苯、乙腈、四氢呋喃(THF)、二甲基甲酰胺(DMF)、氯仿、二氯甲烷、乙醚、甲醇、氮-甲基吡咯烷酮(NMP)、吡啶等。实施例中无特殊说明，溶液是指水溶液。

本发明中所描述的化学反应一般在常压下进行。实施例中无特殊说明，反应的温度为室温，为20℃～30℃。

实施例中的反应进程的监测采用薄层色谱法(TLC)，反应所使用的展开剂的体系有：A：二氯甲烷和甲醇体系，B：石油醚和乙酸乙酯体系，C：丙酮，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节。

纯化化合物采用的柱层析色谱法的洗脱剂的体系和薄层色谱法的展开剂体系包括：A：二氯甲烷和甲醇体系，B：石油醚和乙酸乙酯体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，也可以加入少量的三乙胺和三氟乙酸等碱性或酸性试剂进行调节。

除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域技术人员所熟知的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。

实施例1：4-氧代庚酸(5)的制备

将二氢呋喃-2,5-二酮(10g，0.1mol，1eq)溶于THF(100mL)中，加入CuI(2.85g，0.015mol，0.15eq)。在氮气氛下将温度降至-20℃，然后缓慢滴加丙基溴化镁(1M在THF中，180mL，1.8eq)。滴毕，将反应液缓慢升至室温，搅拌过夜。加入HCl(1N)淬灭，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。残余物通过柱层析色谱法纯化(洗脱剂：DCM/MeOH＝10/1)，再用反相闪式色谱法纯化(甲醇洗脱)，得到标题化合物。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ2.70–2.41(m,4H),1.60(m,4H),0.90(t,J＝8.0Hz,3H)。

实施例2：5-氧代庚酸(6)的制备

将2-甲基环己烷-1,3-二酮(12.6g，0.1mol，1eq)溶解于THF(50ml)中，然后加入氢氧化钠水溶液20ml(5M)。在回流下搅拌反应5小时，然后加入稀盐酸(-1M)调节pH至弱酸性(PH＝4-5)，然后用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。残余物通过柱层析色谱法纯化(乙酸乙酯：石油醚4:1)，再用反相闪式色谱法纯化(甲醇洗脱)，得到标题化合物。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ2.50(t,J＝7.1Hz,2H),2.42(q,J＝7.1Hz,2H),2.24(t,J＝8.0Hz,2H),1.88(q,J＝7.1Hz,2H),1.03(t,J＝8.0Hz,3H)。

实施例3：5-氧代辛酸(7)的制备

将6-丙基四氢-2H-吡喃-2-酮(14.2g，0.1mol，1eq)溶于THF(60ml)中，然后加入氢氧化钠乙醇溶液50ml，室温搅拌2小时后，再加入磷酸氢钠缓冲溶液(0.2M)40ml，于室温继续搅拌20小时。反应液用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。残余物通过柱层析色谱法纯化(洗脱剂：乙酸乙酯：石油醚(3:1))，再用反相闪式色谱法纯化(甲醇洗脱)，得到标题化合物。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ12.0(s,1H),2.32-2.40(m,2H),2.15(t,J＝7.1Hz,2H),1.61(t,J＝8.0Hz,2H),1.43(q,J＝7.1Hz,2H),0.80(t,J＝8.0Hz,3H)。

实施例4：4-氧代庚烯-6-酸(11)的制备

将二氢呋喃-2,5-二酮(10g，0.1mol，1eq)溶于THF(100mL)中，加入CuI(2.85g，0.015mol，0.15eq)。在氮气氛下将温度降至-20℃，然后缓慢滴加乙烯基溴化镁(1M在THF中，150mL，1.5eq)。滴毕，将反应液缓慢升至室温，搅拌过夜。加入HCl(1N)淬灭，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。残余物通过柱层析色谱法纯化(洗脱剂：DCM/MeOH＝10/1)，再用反相闪式色谱法纯化(甲醇洗脱)，得到标题化合物。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ5.71(m,1H),5.12-5.15(m,2H),2.72-2.80(m,2H),2.45-2.70(m,2H),2.20-2.2.37(m,2H)。

实施例5：4-氧代-6-苯基己酸(17)的制备

将二氢呋喃-2,5-二酮(10g，0.1mol，1eq)溶于THF(100mL)中，加入CuI(2.85g，0.015mol，0.15eq)。在氮气氛下将温度降至-20℃，然后缓慢滴加苯乙基溴化镁(0.5M在THF中，240mL，1.2eq)。滴毕，将反应液缓慢升至室温，搅拌过夜。加入HCl(1N)淬灭，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。残余物通过柱层析色谱法纯化(洗脱剂：DCM/MeOH＝10/1)，再用反相闪式色谱法纯化(甲醇洗脱)，得到标题化合物。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ7.31-7.17(m,5H),2.92(m,2H),2.82(m,2H),2.78(m,4H)。

实施例6：2,3-二氢-1H-茚-5-基4-氧代戊酸酯(26)的制备

在冰水浴中，将2,3-二氢-1H-茚-5-醇(800mg,5.97mmol,1eq)、4-氧代戊酸(831mg,7.16mmol,1.2eq.)、EDC.HCl(1.482g,7.76mmol,1.3eq)、DMAP(146mg,1.19mmol,0.2eq)、三乙胺(1.808g,17.91mmol,3eq)和DMF(20mL)依次加入到100毫升圆底单口烧瓶内，于室温搅拌过夜。向反应液中加入乙酸乙酯(300mL)，用饱和食盐水洗涤6次，经无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物通过柱层析色谱法纯化(乙酸乙酯/石油醚)，得浅黄色油状物1.05g，产率：76％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.20(d,J＝8.1Hz,1H),7.00–6.92(m,1H),6.83(dd,J＝8.1,2.2Hz,1H),3.01–2.77(m,8H),2.25(s,3H),2.11(p,J＝7.4Hz,2H)。

LC-MS：m/z(ES+)296(M+Na⁺CH₃CN)⁺；255(M+Na)⁺；纯度：95.9％。

实施例7：丙烷-1,3-二基双(4-氧代戊酸酯)(38)的制备

在冰水浴中，将丙二醇(0.5g,6.58mmol,1eq)、4-氧代戊酸(1.832g,15.79mmol,2.4eq)、EDC.HCl(3.267g,17.11mmol,2.6eq)、DMAP(321mg,2.63mmol,0.4eq)、三乙胺(3.986g,39.47mmol,6eq)和DMF(30mL)依次加入到100毫升圆底单口烧瓶中，于室温搅拌过夜。向反应液中加入乙酸乙酯(300mL)，用饱和食盐水洗涤6次，经无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。残余物通过柱层析色谱法纯化(乙酸乙酯/石油醚)，得浅黄色油状物1.3g，产率：73％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.18(t,J＝6.3Hz,4H),2.78(t,J＝6.5Hz,4H),2.59(t,J＝6.5Hz,4H),2.21(s,6H),1.98(p,J＝6.3Hz,2H)。

LC-MS：m/z(ES+)295(M+Na)⁺；纯度：100％。

实施例8：乙烷-1,2-二基双(4-氧代戊酸酯)(39)的制备

在冰水浴中，将乙二醇(408mg,6.58mmol,1eq)、4-氧代戊酸(1.832g,15.79mmol,2.4eq)、EDC.HCl(3.267g,17.11mmol,2.6eq)、DMAP(321mg，2.63mmol,0.4eq)、三乙胺(3.986g,39.47mmol,6eq)和DMF(30mL)加入到100毫升圆底单口烧瓶中，于室温搅拌过夜。向反应液中加入乙酸乙酯(300mL)，用饱和食盐水洗涤6次，经无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。残余物通过柱层析色谱法纯化(乙酸乙酯/石油醚)，得浅黄色油状物1.2g，产率：71％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.27(s,4H),2.76(t,J＝6.5Hz,4H),2.60(t,J＝6.5Hz,4H),2.19(s,6H)。

LC-MS：m/z(ES+)281(M+Na)⁺；纯度：99.7％。

实施例9：4-氧代戊基4-氧代戊酸酯(40)的制备

将4-氧代戊酸(10g，0.086mol，1eq)溶于DCM(200mL)中，在氮气氛下，于室温加入EDC(18.2g，0.095mol，1.1eq)和DMAP(31.6g，0.259mol，3eq)，然后加入5-羟基戊-2-酮(8.8g，0.086mol，1eq)，室温搅拌过夜。加入饱和NH₄Cl水溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。残余物通过柱层析色谱法纯化(洗脱剂：PE/EA＝5/1)，再用反相闪式色谱法纯化(甲醇洗脱)，得到标题化合物。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.10(t,J＝8.0Hz,2H),2.76(m,2H),2.51-2.58(m,4H),2.20-2.05(m,2H),1.99(m,2H)。

实施例10：3-(2-氧代环戊基)丙酸(47)的制备

步骤1：3-(2-氧代环戊基)丙酸乙酯(47a)的制备

将1-(环戊-1-烯-1-基)吡咯烷(3g，21.90mmol，1eq.)和丙烯酸乙酯(4.480g，43.80mmol，2eq.)加入到二氧六环(50mL)中，于100℃搅拌5h。然后加入水(10mL)，继续于100℃搅拌2h。将反应液冷却至室温，加入乙酸乙酯(100mL)，用1M稀盐酸(30mL)、饱和碳酸氢钠(30mL)溶液、食盐水(600mL)各洗涤一次，有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。残余物通过柱层析色谱法纯化(乙酸乙酯/石油醚)，得到淡黄色油状物标题化合物2.3g，产率：57％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.14(q,J＝7.1Hz,2H),2.46-2.41(m,2H),2.37-2.28(m,1H),2.28-2.20(m,1H),2.18-2.16(m,1H),2.13-2.00(m,3H),1.84-1.76(m,1H),1.69-1.66(m,1H),1.65-1.46(m,1H),1.27(t,J＝7.1Hz,3H)。

步骤2：3-(2-氧代环戊基)丙酸(47)的制备

将3-(2-氧代环戊基)丙酸乙酯(47a)(1.5g,8.15mmol,1eq.)和LiOH(587mg,24.46mmol,3eq)加入至THF/水/EtOH(30mL/10mL/10mL)的混合溶剂中，于室温搅拌过夜。TLC监测反应完全，将反应液减压除去溶剂，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(1×30mL)萃取。用1M稀盐酸调水相至pH＝3～4，然后用乙酸乙酯萃取水相(3×30mL)，合并有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。残余物通过柱层析色谱法纯化(乙酸乙酯/石油醚)，得到淡黄色油状物标题化合物1.1g，产率：86％。

¹HNMR(400MHz,CD₃OD)δ2.43-2.39(m,2H),2.34-1.98(m,6H),1.86-1.81(m,1H),1.62-1.53(m,2H)。

LC-MS：m/z(ES⁺)157(M+H)⁺。

实施例11：2-(2-氧代环戊基)乙酸(48)的制备

将2-(2-氧代环戊基)乙酸乙酯(1.7g，1mmol)和LiOH(0.24g，1mmol)加入到THF/水/EtOH(40ml，2:1:1)的混合溶剂中，于室温搅拌3h。TLC监测反应完全，减压除去溶剂，加入水(20mL)，用乙酸乙酯(1×20mL)萃取。用1M稀盐酸调水相至pH＝3～4，然后用乙酸乙酯萃取水相(3×30mL)，合并有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到淡黄色油状物1g，产率：85％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ2.87–2.76(m,1H),2.55–2.30(m,4H),2.21(m,1H),2.14–2.04(m,1H),1.93–1.76(m,1H),1.71-1.59(m,1H),少一个活泼质子。

LC-MS：m/z(ES⁺)143.15(M+H)⁺。

实施例12：3-氧代环戊烷-1-羧酸(49)的制备

将3-氧代环戊烷-1-羧酸乙酯(1.5g,9.6mmol，1eq)、NaOH(387mg,9.6mmol,21eq)和EtOH(30mL)置于100毫升圆底单口烧瓶中，于室温搅拌3h。TLC监测反应完全，减压除去溶剂，加入水(20mL)，用乙酸乙酯(1×20mL)萃取。用1M稀盐酸调水相至pH＝3～4，然后用乙酸乙酯萃取水相(3×30mL)，合并有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到标题化合物0.5g，产率：30％。

¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ2.20-2.35(m,4H),2.37-2.48(m,2H)。

LC-MS：m/z(ES⁺)255(2M+H)。

实施例13：2-(2-氧代环己基)乙酸(51)的制备

将2-(2-氧代环己基)乙酸乙酯(1.3g,7.07mmol，1eq)和LiOH(339mg,14.13mmol,2eq)加入至THF/水/EtOH(20mL/5mL/5mL)的混合溶剂中，于室温搅拌3h。TLC监测反应完全，减压除去溶剂，加入水(20mL)，用乙酸乙酯(1×20mL)萃取。用1M稀盐酸调水相至pH＝3～4，然后用乙酸乙酯萃取水相(3×30mL)，合并有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到浅黄色油状物1g，产率：91％。

¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.32-2.80(m,2H),2.51–2.32(m,2H),2.28–2.08(m,3H),1.96–1.86(m,1H),1.83–1.58(m,2H),1.52–1.37(m,1H),少一个活泼质子。

LC-MS：m/z(ES⁺)174(M+NH₄)⁺。

实施例14：4-(羟基亚氨基)戊酸(71)的制备

在冰水浴中，将4-氧代戊酸(6g,51.72mmol，1eq)和乙醇(60mL)加入至250毫升圆底单口烧瓶中，然后滴加羟胺溶液(3.42g,51.72mmol,1eq，50％水溶液)。滴毕，于室温搅拌过夜。将反应液减压浓缩，向残余物中加入正己烷/二氯甲烷混合溶剂(30ml，2:1)，将得到的固体过滤，干燥，得到标题化合物。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ2.50–2.40(m,4H),1.79(s,3H)。

实施例15：4-(甲氧基亚氨基)戊酸(76)的制备

冰水浴中，将4-氧代戊酸(6g，51.72mmol，1eq)、三乙胺(5.76g，56.89mmol，1.1eq)和DCM(80mL)加入至250毫升圆底单口烧瓶中，然后分批加入甲氧基胺盐酸盐(4.29g，51.72mmol，1eq)。加毕，于室温搅拌过夜。将反应液减压浓缩，向残余物中加入正己烷(30ml)，将得到的固体过滤，干燥，得到浅黄色油状物产品。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ3.84(s,3H),2.67-2.63(m,5H),2.61-2.53(t,J＝7.1,2H)。

生物学测试

试验例1本发明化合物对骨骼肌干细胞增殖的作用

C2C12细胞是小鼠骨骼肌干细胞来源的成肌细胞株，在体外培养条件下可以增殖或诱导分化。本试验例采用的C2C12细胞购自ATCC，编号：CRL-1772^TM。

在含有10％胎牛血清(Ausbian)、1％青霉素(biotopped)和1％链霉素(amresco)的DMEM培养基(Gibico)培养传代。将C2C12细胞以8×10⁴/cm²的密度接种到24孔板中，12小时后将培养基用饥饿培养基(不含血清，DMEM加入1％青霉素(biotopped)和1％链霉素(amresco)替换；饥饿12小时后再更换正常培养基(DMEM，10％胎牛血清，1％青霉素和1％链霉素，同时分别用不同浓度的本发明化合物处理。PBS处理作为对照组。本发明化合物配制方法：采用磷酸盐缓冲液(PBS)(8g NaCl，0.2g KCl，0.24g KH₂PO₄，3.58g Na₂HPO₄.12H2O，溶于1L去离子水中，调节pH值至7.4)将化合物原液(将化合物溶解于PBS中制得原液)稀释成500mM，调节pH值为7.4，0.22μm的滤膜过滤除菌后分装4℃保存。用不同浓度的化合物处理24小时，采用流式细胞仪(BD Accuri C6)分析细胞周期，统计处于S期细胞比例，分析化合物对C2C12细胞增殖调控的剂量依赖效应。或同一有效浓度化合物处理不同时间点(24小时、36小时、48小时)以后，采用流式细胞仪(BD Accuri C6)分析细胞周期，统计处于S期细胞比例，观察化合物调控C2C12细胞增殖的时间依赖效应。

结论：如图1的A和B所示，本发明化合物1以剂量依赖和时间依赖的方式显著增加C2C12细胞S期比例，说明本发明化合物1以剂量和时间依赖的方式促进C2C12细胞增殖。本发明化合物1促进C2C12细胞增殖的有效剂量范围2mM～10mM(图1的A)。

本发明采用上述同样的试验方法测试了化合物100、化合物65、化合物3对肌细胞增殖的作用，其结果显示化合物100促进C2C12细胞增殖的有效剂量范围为0.2mM～5mM，化合物65促进C2C12细胞增殖的有效剂量范围为0.1mM～5mM，化合物3促进C2C12细胞增殖的有效剂量范围为0.1mM～20mM。

综合上述实验数据，表明本发明化合物能够显著促进骨骼肌干细胞增殖。

试验例2本发明化合物对脂肪细胞脂合成、脂滴形成的作用

本发明采用皮下脂肪组织分离培养的原代脂肪细胞检测本发明化合物对脂合成和脂滴形成的影响。

出生2-3周的C57BL/6小鼠(购自维通利华公司)，断颈处死，剥离腹股沟处皮下脂肪组织，磷酸盐缓冲液(PBS)(8g NaCl，0.2g KCl，0.24g KH₂PO₄，2.94g Na₂HPO₄.12H₂O，溶于1L去离子水中，调节pH值至7.4)冲洗两次，剪碎，加入新鲜配置的消化液(DMEM/F-12(1:1)(Gibico)培养基含有1mg/mL胶原酶I(Gibico)，置于培养箱(37℃)消化60分钟，期间轻轻混匀1-2次，消化至没有大块组织存在，加入PBS缓冲液稀释已经消化的组织，40μm细胞过滤器(Falcon)过滤，1500rpm离心10分钟，细胞沉淀重悬于增殖培养基(DMEM/F-12(1:1)，10％小牛血清(Ausbian)，1％青霉素和1％链霉素)，置于培养箱(37℃，5％CO₂)培养，12小时后更换新鲜培养基；待细胞生长到90％密度时传代培养。

在进行化合物处理时，将细胞接种在12孔板，每隔一天换液；待细胞生长到60-70％密度后，更换分化培养基I(DMEM/F-12(1:1)，5％胎牛血清(Ausbian)，1％青霉素(biotopped)和1％链霉素(amresco))；两天以后，再更换分化培养基II诱导分化(DMEM/F-12(1:1)，5％胎牛血清，1％青霉素和1％链霉素，1μM地塞米松(Sigma)，0.25mM 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(Sigma)，0.5μg/mL胰岛素(biosharp)，60μM吲哚美辛(Sigma))；两天以后，更换分化培养基III(DMEM/F-12(1:1)，5％胎牛血清，1％青霉素和1％链霉素，0.5μg/mL胰岛素)。在开始诱导分化时(即，更换分化培养基II的时候)，同时加入不同浓度的待测化合物(使用PBS稀释待测化合物至所需浓度)处理，PBS缓冲液处理做对照。

分别在处理1天、2天、3天、4天时，终止培养，采用Bodipy(Life technology，D3922)荧光染色的方法或者明视野显微镜下观察细胞中脂滴大小的放大显示脂滴大小和数目。Bodipy为绿色荧光标记的脂溶性染料，细胞培养完成后，按照1：1000比例加入培养基中，20分钟后使用荧光显微镜观察已经被Bodipy(Life technology，D3922)染色的脂滴。使用激光共聚焦显微镜ZEISS LSM780，60倍的目镜进行成像观察。显微镜(olympus，OlympusIX71)20倍明视野目镜观察脂肪细胞中脂滴形态。并利用甘油三酯检测试剂盒(北京普利莱基因技术有限公司E1013-105)检测甘油三酯(TG)的含量。

结论：如图2的A-C所示，本发明化合物1处理后，脂肪细胞中脂滴面积显著减少(图2的A和B)，甘油三酯的水平显著减低(图2的C)，说明本发明化合物1显著抑制原代脂肪细胞分化过程中的脂合成和脂滴形成。本发明化合物1抑制脂合成和脂滴形成的有效剂量为0.5mM～2mM。

如图3的A和B所示，化合物100处理后，脂肪细胞中脂滴数量显著减少(图3的A)，化合物100处理后脂肪细胞中甘油三酯的水平显著减低(图3的B)，说明化合物100显著抑制原代脂肪细胞分化过程中的脂滴形成和甘油三酯合成。化合物100抑制脂滴形成和甘油三脂合成的有效剂量为5mM。

如图4的A和B所示，化合物65处理后，脂肪细胞中脂滴数量显著减少(图4的A)，化合物65处理后脂肪细胞中甘油三酯的水平显著减低(图4的B)，说明化合物65显著抑制原代脂肪细胞分化过程中的脂滴形成和甘油三酯合成。化合物65抑制脂滴形成和甘油三脂合成的有效剂量为1mM～5mM。

如图5的A和B所示，化合物3处理后，脂肪细胞中脂滴数量显著减少(图5的A)，化合物3处理后脂肪细胞中甘油三酯的水平显著减低(图5的B)，说明化合物3显著抑制原代脂肪细胞分化过程中的脂滴形成和甘油三酯合成。化合物3抑制脂滴形成和甘油三脂合成的有效剂量为1mM～5mM。

综合上述实验数据，表明本发明化合物能够显著抑制脂肪细胞中甘油三酯合成和脂滴形成。

试验例3本发明化合物对脂肪细胞Cidec基因表达和甘油三酯含量的影响

本发明采用皮下脂肪组织分离培养的原代脂肪细胞检测本发明化合物对脂肪细胞Cidec基因表达和甘油三酯含量的影响。

出生2-3周的C57BL/6小鼠(购自维通利华公司)，断颈处死，剥离腹股沟处皮下脂肪组织，PBS缓冲液(8g NaCl，0.2g KCl，0.24g KH₂PO₄，3.58g Na₂HPO₄.12H₂O，溶于1L去离子水中，调节pH值至7.4)冲洗两次，剪碎，加入新鲜配置的消化液(DMEM/F-12(1:1)(Gibico)培养基含有1mg/mL胶原酶I(Gibico))，置于培养箱(26℃)消化60分钟，期间轻轻混匀1-2次，消化至没有大块组织存在，加入PBS缓冲液稀释已经消化的组织，40μm细胞过滤器(Falcon)过滤，1500rpm离心10分钟，细胞沉淀重悬于增殖培养基(DMEM/F-12(1:1)，10％小牛血清(Ausbian)，1％青霉素和1％链霉素)，置于培养箱(26℃，5％CO₂)培养，12小时后更换新鲜培养基；待细胞生长到90％密度时传代培养。

在进行化合物处理时，将细胞接种在12孔板，每隔一天换液；待细胞生长到60-70％密度后，更换分化培养基I(DMEM/F12(1:1)，5％胎牛血清(Ausbian)，青霉素(biotopped)和1％链霉素(amresco))；两天以后，再更换分化培养基II诱导分化(DMEM/F12(1:1)，5％胎牛血清，1％青霉素和1％链霉素，1μM地塞米松(Sigma)，0.25mM 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(Sigma)，0.5μg/mL胰岛素(biosharp)，60μM吲哚美辛(Sigma))。在开始诱导分化时(即，更换分化培养基II的时候)，同时加入不同浓度的待测化合物(使用PBS稀释待测化合物至所需浓度)处理，PBS缓冲液处理做对照。处理24小时，终止培养，利用甘油三酯检测试剂盒(北京普利莱基因技术有限公司E1013-105)检测甘油三酯(TG)的含量。

在开始诱导分化时(即，更换分化培养基II的时候)，同时加入不同浓度的待测化合物，PBS缓冲液处理做对照，处理12小时，终止培养，检测Cidec基因表达。

提取已使用待测化合物处理12小时的细胞中的RNA：培养板中加1mL TriZol试剂(ambion)，于室温放置5分钟，在此期间打开离心机预冷至4℃。吹匀后吸取至1.5ml EP管中，加氯仿(沪试)200微升，剧烈翻转混匀，于室温放置10分钟至分层。在4℃，以12000×g离心15分钟，分成3层；将上清转入新管，并加入1mL异丙醇(沪试)，混合均匀。于室温静置10分钟后，在4℃，以12000×g离心10分钟。倒掉上清，用75％乙醇洗。在4℃，以7500×g离心5分钟后，倒掉上清，于室温干燥5分钟。加入20μL DEPC-H₂O溶解RNA(DEPC-H₂O为灭活了RNA酶的去离子水，配制方法为将DEPC(sigma)以1:1000的比例加入去离子水中，搅拌过夜，高压灭菌即可，转入EP管，放在冰上。用thermo scientific的NanoDrop 2000c仪器测OD值，取1μL样品用ddH₂O作对照，测出OD₂₆₀、OD₂₈₀及其比率。一般OD₂₆₀/OD₂₈₀的比值大于1.7则RNA可用。逆转录成为cDNA，逆转录所使用的dNTP,RRI,Reverse transcriptase均购自thermoscientific，Oligo dT是由北京生工生物技术有限公司合成。已经逆转录完成的cDNA进行实时定量PCR分析。使用BIO-red CFX connect定量PCR仪进行基因表达检测。

另外，利用人源脂肪细胞株(购自北纳生物)，采用与如上相同的试验方法检测了本发明化合物减少人源脂肪细胞中的TG含量并抑制人源脂肪细胞中的Cidec基因表达的作用。

结论：如图6的A～D所示，本发明化合物26显著抑制小鼠原代脂肪细胞Cidec基因的表达(A)并降低甘油三酯的水平(B)。此外，化合物26能够抑制人源脂肪细胞中Cidec基因的表达(C)，并降低甘油三酯的水平(D)，其有效剂量为0.05mM～1mM。

本发明采用上述同样的试验方法测试了化合物6、化合物7、化合物11、化合物20、化合物38、化合物39、化合物71、化合物102对脂肪细胞TG含量以及Cidec基因的表达的作用。其结果显示这些化合物能够减少脂肪细胞中TG含量，抑制Cidec基因的表达。其中，化合物6的有效剂量范围为1～10mM(图7)，化合物7的有效剂量范围为1～2Mm(图8)，化合物11的有效剂量范围为0.5～2Mm(图9)，化合物20的有效剂量范围为0.5～2Mm(图10)，化合物38的有效剂量范围为0.1～0.5Mm(图11)，化合物39的有效剂量范围为0.1～0.2Mm(图12)，化合物40的有效剂量范围为1～2Mm(图13)，化合物47的有效剂量范围为1～2Mm(图14)，化合物48的有效剂量范围为1～2Mm(图15)，化合物71的有效剂量范围为1～10Mm(图16)，化合物102的有效剂量范围为1～2Mm(图17)。

试验例4本发明化合物对鼠源和人源骨骼肌干细胞增殖的作用

C2C12细胞是小鼠骨骼肌干细胞来源的成肌细胞株，在体外培养条件下可以增殖或诱导分化。本试验采用的C2C12细胞购自ATCC，编号：CRL-1772^TM。

在含有10％胎牛血清(Ausbian)、1％青霉素(biotopped)和1％链霉素(amresco)的DMEM培养基(Gibico)培养传代。将C2C12细胞以8×10⁴/cm²的密度接种到24孔板中，12小时后将培养基用饥饿培养基(不含血清，DMEM加入1％青霉素和1％链霉素)替换；饥饿12小时后再更换正常培养基(DMEM，10％胎牛血清，1％青霉素和1％链霉素)，同时分别用不同浓度的本发明化合物(使用PBS稀释待测化合物至所需浓度)，处理24小时后，用CCK试剂盒(日本DOJINDO公司)测量细胞密度。处理12小时后，使用real-time PCR(BIO-red)测量CyclinE1的基因表达。PBS缓冲液处理做对照。基因表达的测量同试验例3中检测Cidec的基因表达的方法。

另外，利用人源骨骼肌干细胞株(购自北纳生物)，采用与如上相同的试验方法检测了本发明化合物增加人源骨骼肌干细胞的细胞密度并促进CyclinE1的基因表达的作用。

结论：如图19的A～D所示，5mM的本发明化合物6显著促进C2C12细胞系中CyclinE1的基因表达(A)，2、5mM的本发明化合物6显著增加C2C12细胞系的细胞密度(B)。此外，2、5mM的本发明化合物6促进人肌肉细胞系中CyclinE1的基因表达(C)，2mM的本发明化合物6显著增加人肌肉细胞系的细胞密度(D)。

本发明采用上述试验方法测试了化合物5、化合物38、化合物39、化合物40、化合物47、化合物48、化合物49、化合物51对骨骼肌干细胞增殖的作用。其结果显示这些化合物能够增加骨骼肌细胞的细胞密度并促进CyclinE1的基因表达。其中，化合物5的有效剂量范围为1mM～5mM(图18)，化合物38的有效剂量范围为0.2mM～0.5mM(图20)，化合物39的有效剂量范围为1mM～5mM(图21)，化合物40的有效剂量范围为5mM～10mM(图22)，化合物47的有效剂量范围为5mM～10mM(图23)，化合物48的有效剂量范围为5mM～10mM(图24)，化合物49的有效剂量范围为1mM～10mM(图25)，化合物51的有效剂量范围为5mM～10mM(图26)。

试验例5本发明化合物通过促进骨骼肌干细胞增殖显著加快小鼠的骨骼肌损伤再生的作用

为了进一步探讨本发明化合物1促进肌肉损伤再生是否通过调控骨骼肌干细胞功能实现的。本发明人进一步分析了肌肉损伤3天时骨骼肌干细胞的增殖。Pax7和MyoD是骨骼肌干细胞增殖相关的分子。用Western Blot技术检测了Pax7和MyoD的表达水平。Pax7抗体购自杂交瘤公司(DSHB)，做Western的稀释比例是1:500。MyoD抗体购自Santa Cruz公司(SC-760)，做Western的稀释比例是1:300。在细胞增殖过程中，BrdU(胸腺嘧啶类似物)可以掺入到新合成的DNA链中，通过BrdU免疫荧光染色可以说明细胞增殖情况。

骨骼肌损伤再生动物模型：10周龄左右的雄性C57BL/6小鼠(购自维通利华公司)，后肢左腿和右腿胫骨前肌注射50微升蛇毒细胞毒素(CTX，cardiotoxin，Sigma；溶于PBS缓冲液(8g NaCl，0.2g KCl，0.24g KH₂PO₄，3.58g Na₂HPO₄.12H₂O，溶于1L去离子水中，调节pH值至7.4)，浓度为50μM，造成肌肉急性损伤-再生修复模型。

为了探讨本发明化合物对骨骼肌损伤再生修复的影响，注射CTX的同时向右腿胫骨前肌注射20微升本发明化合物1(50mM，溶于PBS；Sigma)，左腿注射PBS作为对照组。在肌肉损伤7天后，断颈处死小鼠，剥离整块胫骨前肌，4％福尔马林(甲醛溶液1:10溶于PBS)中固定24-48小时；经70％、80％、95％、100％乙醇各浸泡1小时至完全脱水，二甲苯透明两次，在50-60℃温度透蜡和包埋(Leica EG1150全自动包埋机)，切片3-4微米(Leica RM2255全自动轮转切片机)，脱蜡水化，苏木素(HE)和伊红(上海华舜生物工程有限公司)染色，用显微镜(Olypums BX 53)20倍目镜下明视野照相。统计损伤区域单位面积上新形成的核在中央的肌纤维数目和肌纤维面积。

结论：如图27的A所示，本发明化合物1处理7天，损伤的胫骨前肌重量显著大于PBS对照组；如图27的B所示，本发明化合物1处理7天，新形成的核在中央的肌纤维显著增多；如图27的C所示，本发明化合物1处理7天，新形成的核在中央的肌纤维的面积显著增大。这些结果说明本发明化合物1显著促进肌肉损伤再生进程。

为了探讨本发明化合物对骨骼肌损伤再生修复过程中的骨骼肌干细胞的影响，注射CTX的同时向右腿胫骨前肌注射20微升本发明化合物1(50mM，溶于PBS中)，左腿注射PBS作为对照组。在肌肉损伤3天后，断颈处死小鼠，处死小鼠前两个小时前每只小鼠腹腔注射200微克BrdU(sigma，B5002)，剥离整块胫骨前肌，将其放入盛有包埋剂(樱花，4583)的模具中，模具浸入液氮使其凝固，用全自动切片机(Leica CM3050)将包埋块切片至10微米厚，将薄的切片贴至载玻片上，制作成冰冻切片。进行BrdU、MyoD双免疫荧光染色。BrdU染色过程一抗使用BrdU抗体(abcam)以1:500溶于4％BSA(4％BSA为将0.4克BSA(经科宏达)溶于10毫升PBS中)中二抗(山羊抗大鼠IgG，西雅金桥，FZ-4104)以1:250溶于4％BSA中。MyoD染色过程中一抗使用MyoD抗体(Santa Cruz)以1:50溶于4％BSA(4％BSA为将0.4克BSA(经科宏达)溶于10毫升PBS中)中，二抗(山羊抗兔IgG，中杉金桥，ZF-0311)以1:250溶于4％BSA中。细胞核染色使用DAPI(Roche，236276)以1:2000溶于PBS中。染色完成后，荧光显微镜(OLYMPUS,Olypums BX 53)20倍目镜拍照成像。照相后利用photoshop软件统计BrdU阳性的细胞的比例。

Western Blot检测Pax7、MyoD蛋白表达：使用如上肌肉损伤的方法，损伤3.5天后的胫骨前肌取下后液氮快速冷冻，保存于-70℃冰箱。提取蛋白时，将冻存的胫骨前肌肌肉组织从-70℃冰箱取出置于匀浆缓冲液(H₂O 917μl，1MTris(PH7.4)50μl，1M DTT 0.5μL，5MNaCl 30μl PMSF(20mg/ml)2.5μl)中，使用匀浆器(IKA，T10 basic)匀浆提取组织中的蛋白质。使用一抗孵育：将特定的一抗抗体(Pax7，DSHB公司，1:15稀释，MyoD Santa Cruz公司，1:50稀释，GAPDH，Sigma公司，1:1000稀释)稀释于5％牛奶(0.5g脱脂奶粉(伊利脱脂牛奶)溶于10ml的PBS中)中，4℃孵育过夜。使用二抗孵育：二抗(Pax7和GAPDH用二抗山羊抗小鼠IgG，MyoD用二抗山羊抗兔，均为1:250倍稀释，购自中杉金桥)使用5％牛奶稀释后室温摇晃孵育1h。显影液使用ECL试剂(GE Healthcare，RPN 2106)A液、B液混合，显色1分钟。观察条带。

结论：如图27的D所示，骨骼肌损伤3天，本发明化合物1处理组Pax7和MyoD表达量显著增多，如图27的E和图27的F所示，本发明化合物1处理组BrdU和MyoD双阳性细胞在MyoD阳性细胞库中的比例明显增加。说明本发明化合物1处理显著促进骨骼肌干细胞增殖。

试验例6本发明化合物显著改善肌营养不良Mdx小鼠病理表型的作用

DMD肌营养不良是一种很严重的具有X连锁隐性遗传性质的肌肉疾病，临床上缓慢起病，表现为进行性加重的骨骼肌萎缩与无力。预后差，一般在20-30岁时伴随心肌功能衰竭或呼吸困难等致死。

Mdx小鼠是一种常用的DMD肌营养不良疾病模型。Mdx小鼠发病相对人类发病温和，其肌营养不良蛋白(dystrophin)基因突变，在出生三周后出现比较严重的肌肉损伤，然后出现周期性的肌肉损伤修复。

Mdx小鼠母鼠购自南京模式动物研究所，进行繁殖取得同笼的Mdx和野生型(WT)子代小鼠。4月龄时开始每日腹腔注射50mg/kg或100mg/kg剂量的本发明化合物1(PBS稀释至500mM，调节pH＝7.4)，PBS(8g NaCl，0.2g KCl，0.24g KH₂PO₄，3.58g Na₂HPO₄·12H₂O，溶于1升去离子水中，调节pH值至7.4)作为对照组，每组8-10只Mdx小鼠，注射维持2个月。收取小鼠肌肉组织，包括胫骨前肌(TA)、比目鱼肌(Soleus)和趾长伸肌(EDL)，然后检测小鼠肌肉的形态学和功能。

用Evans Blue Dye(EBD)浸染实验检测损伤的肌肉面积。处死小鼠前12小时腹腔注射0.2mg/kg EBD染料(Sigma)，EBD染料随血液循环进入各组织器官中损伤的部位，再激发光照射下自发红色荧光。收取小鼠肌肉组织包括胫骨前肌(TA)、比目鱼肌(Soleus)和趾长伸肌(EDL)，包埋剂(樱花，4583)包埋液氮速冻行冰冻切片。进行Laminin免疫荧光染色显示肌纤维轮廓，一抗使用Laminin抗体(Sigma)以1:500溶于4％BSA(0.4克BSA(经科宏达)溶于10毫升PBS)中，4℃孵育过夜二抗使用(山羊抗小鼠，购自中杉金桥，ZF-0312)以1:200溶于4％BSA(0.4克BSA(经科宏达)溶于10毫升PBS)中，室温孵育1小时。染色后使用荧光显微镜(Olypums BX 53)20倍目镜拍照。照相，然后利用Image-Pro Plus 5.1软件统计EBD(红色)占肌纤维横切面积的比例。

结论：Mdx小鼠腹腔注射本发明化合物1后各肌群EBD浸染面积显著减少，作为代表仅显示了胫骨前肌中EBD浸染损伤肌肉的图片(图28的A)。用Image-Pro Plus 5.1软件统计了在胫骨前肌(TA)中EBD浸染的面积(图28的B)。结果表明本发明化合物1处理显著减少了EBD侵染的面积。

肌酸激酶的测量：Mdx小鼠跑步运动4小时后，尾静脉取血。全血4℃静置1小时，4000rpm离心5分钟，用移液器取出上清转移到新的管中，即为血清。使用CK试剂盒(Abnova)测量血清中肌酸激酶含量。

图28的C显示本发明化合物1处理组血清中肌酸激酶水平较对照组显著降低。因此，Mdx小鼠每日腹腔注射本发明化合物1持续2月后肌肉组织的损伤情况明显改善。

另外，检测小鼠四肢肌肉力量，并且测定Mdx小鼠跑步时间来衡量其肌肉功能。

前肢抓力测定：将网格配件安装到抓力传感器(BioSEB GS3)上，将抓力仪放在平稳的位置，按住开始键，仪器自检至屏幕上显示0.0时开始实验；将小鼠前肢搭在网格上，抓住小鼠尾部匀速平稳的顺着网格方向向后拉小鼠至四肢脱离网格，记录数值后按ZERO键清零；每只小鼠每天测力十次，测量三天，取最大值记为该小鼠的抓力数值，进行组间比较。

小鼠跑步实验：将小鼠跑步仪器(Columbus Exer-3/6)连接好电脑接通电源，将小鼠放到跑步舱单通道中；打开电脑上的连接软件，设置传送带转动即小鼠跑步速度程序：以10m/min速度平衡3分钟，然后以1m/min加速至20m/min，最后以20m/min匀速运动；程序设好后打开跑步舱单通道一端的电刺激开关，开始记录小鼠跑步的时间，以小鼠在电刺激条件下仍不跳到传送带上作为小鼠疲劳的标准。

小鼠骨骼肌张力测量：提前准备好电解液(NaCl 6.925g，KCl 0.35g，CaCl₂0.266g，MgCl₂ 0.63g，NaHCO₃ 2.1g，NaH₂PO₄ 0.312g，D-葡萄糖0.991g，溶于1L去离子水中，调节pH值等于7.4，以上试剂均购自sigma)；将电解液加入37℃恒温浴槽(成都仪器厂)中，通入氧气；断椎处死小鼠，取出保留完整肌腱的趾长伸肌，手术线固定住两端肌腱，将趾长伸肌固定于恒温浴槽中，悬挂于S88X双通道方波刺激仪(GRASS)的电击圈中间；电脑控制电刺激调整参数：单收缩肌肉力量：电压：20伏特，刺激时间0.3毫秒，重复三次；强直收缩肌肉力量：电压：20伏特，刺激时间：0.2毫秒，刺激频率：200，并记录测量得到的张力值；刺激完成后，游标卡尺测量肌肉长度，将手术线剪断，肌肉取下，精密天平测量趾长伸肌重量。

根据以下公式计算骨骼肌力量：

CSA(mm²)＝mass(mg)/[(L0mm)*(L/L0)*(1.06mg/mm³)]N/cm²＝(0.98*测量值)/CSA

公式中CSA是肌肉横截面积，mass是称量的肌肉的重量，L0是测量的长度，L/L0是EDL的长度矫正系数，L/L0在EDL中是0.45。

结论：如图28的D所示，本发明化合物1处理后小鼠前肢抓力显著提高，图28的E显示本发明化合物1处理组小鼠跑步成绩显著高于对照组。图28的F和图28的G表明本发明化合物1处理显著增加小鼠的强直收缩力和单次收缩力。

这些结果表明本发明化合物1能显著改善Mdx小鼠肌肉的形态结构和功能，说明本发明化合物1具有治疗人类肌营养不良疾病的潜能。

试验例7本发明化合物显著提高老年小鼠肌肉功能的作用

C57BL/6小鼠(购自维通利华公司)生长到14个月龄开始试验，腹腔注射本发明化合物1(100mg/kg)，隔天注射一次，持续注射4个月。检测小鼠的体重，肌肉重量以及骨骼肌生理功能。小鼠体重检测：每月一次用电子天平称量小鼠体重，统计本发明化合物1对小鼠体重的影响。骨骼肌重量检测：断椎处死小鼠，用剪刀将后肢左右两腿皮毛剪开，找到小腿胫骨，用钝镊子撕开胫骨外侧胫骨前肌表面的肌膜，从肌腱处剪断取下整块胫骨前肌。同样的方法，撕开腓肠肌表面的肌膜，取下腓肠肌，比目鱼肌粘附于腓肠肌内侧，取下比目鱼肌，精密电子天平称量肌肉的重量。按试验例6所述测量小鼠骨骼肌张力。

结论：如图29所示，本发明化合物1处理老年小鼠4个月，小鼠体重(图29的A)和肌肉重量(图29的B)没有明显影响。本发明化合物1处理显著提高小鼠的跑步成绩(图29的C)和前肢抓力(图29的D)、肌纤维的单次收缩力(图29的E)和强直收缩力(图29的F)。

这些实验结果说明本发明化合物1处理后显著改善老年小鼠的肌肉生理功能。

试验例8本发明化合物对高脂饮食诱导的肥胖的预防作用

高脂饮食诱导小鼠肥胖是常用的肥胖症研究模型。本研究中，将6周龄的雄性C57BL/6小鼠(购自维通利华公司)随机分为3组，每组15只。一组正常饮食饲养(SD组)，一组高脂饮食饲养并腹腔注射PBS(8g NaCl，0.2g KCl，0.24g KH₂PO₄，3.58g Na₂HPO₄·12H₂O，溶于1升去离子水中，调节pH值至7.4)作对照(HFD组)，一组高脂饮食饲养并腹腔注射本发明化合物1药物干预(HFD+1组)。高脂饮食饲养使用高脂饲料D12451(北京华阜康公司)(45％脂肪)，正常饮食饲养使用对照饲料D12450B(北京华阜康公司)(10％脂肪)。给药剂量和方式：本发明化合物1用PBS(8g NaCl，0.2g KCl，0.24g KH₂PO₄，3.58g Na₂HPO₄·12H₂O，溶于1升去离子水中，调节pH值至7.4)稀释((20mg/mL))，给药剂量每千克体重100毫克(100mg/kg)，腹腔注射，隔天注射一次，持续干预8周。

在实验过程中，每周记录小鼠体重。生长曲线绘制方法：每周给小鼠称重一次并计算每组小鼠体重的平均值，利用干预8周获得的小鼠体重数据绘制每组小鼠的生长曲线。小鼠采食量测定方法：小鼠置于洁净笼中，给予饲料50克，每天称剩余饲料重量，计算当天每只小鼠食物摄取量，统计各组小鼠采食量平均值；连续测量3天，取平均值并采用Excel表格绘图。药物干预实验结束前一周检测一系列指标：测量各组小鼠的葡萄糖耐量(GTT)、胰岛素耐量(ITT)、测定各组小鼠的肛温。

葡萄糖耐量(GTT)测定：小鼠禁食不禁水16h后，每只小鼠腹腔注射剂量为2g/kg体重的葡萄糖溶液(sigma)。葡糖糖溶液的浓度为400mg/mL(4g葡萄糖粉末溶于10ml去离子水中，0.22μm滤器(Millipore)过滤除菌)，体重20g的小鼠注射剂量为0.1mL。注射葡萄糖后0、15、30、60、90分钟时，采用尾静脉取血的方式测定小鼠血糖值(强生血糖仪)。分别计算每个时间点各组小鼠的血糖平均值，用excel绘制葡萄糖耐量曲线。

胰岛素耐量(ITT)测定：小鼠禁食不禁水4h后，每只小鼠腹腔注射剂量为1U/kg体重的胰岛素溶液。胰岛素用的是诺和灵R(Novonordisk，规格300U/3mL)，用生理盐水稀释胰岛素为200mU/mL，体重20g的小鼠注射剂量为0.1mL。注射胰岛素后分别在0、15、30、60、90、120分钟时，采用尾静脉取血的方式测定小鼠血糖值(强生血糖仪)。分别计算每个时间点各组小鼠的血糖平均值，用excel绘制胰岛素耐量曲线。

小鼠肛温测定：各组小鼠置于4℃冷室，分别在0、1、2、3、4小时测试小鼠的肛温(Physitemp公司小鼠体温计)。分别计算每个时间点各组小鼠的肛温平均值，用excel绘制小鼠4℃冷刺激不同时间点的肛温曲线。

药物持续干预8周以后，断颈处死小鼠，眼球采血，离心收集血清，检测血清中游离脂肪酸和甘油三酯含量。血清采集方法：眼球采血收集在离心管中，静置2小时进行凝固。1800g，4℃离心15分钟，取上清分装到冻存管中，立即-80℃冻存。游离脂肪酸含量测定：采用南京森贝伽生物科技有限公司生产的小鼠游离脂肪酸(FFA)ELISA试剂盒测定小鼠血清中游离脂肪含量。甘油三酯含量测定：采用浙江东瓯诊断产品有限公司生产的TG测定试剂盒测定小鼠血清中甘油三酯含量。

解剖小鼠，称量脂肪重量。皮下白色脂肪积累统计方法：解剖小鼠，剪取整块腹部皮下脂肪垫，称重，计算每组小鼠的皮下白色脂肪平均值，用excel统计平均值及标准误差。腹部白色脂肪积累统计方法：解剖小鼠，剪取腹腔中的整块附睾脂肪垫，称重，计算每组小鼠的附睾脂肪垫平均值，用excel统计平均值及标准误差。棕色脂肪积累统计方法：解剖小鼠，剪取背部肩胛骨中间的整块棕色脂肪垫，称重，计算每组小鼠的棕色脂肪垫平均值，用excel统计平均值及标准误差。

脂肪组织HE染色照片：脂肪组织采用1％福尔马林固定，制备石蜡切片，苏木素伊红染色(HE染色)，采用显微镜明视野(Olypums BX 53)20倍目镜照相。统计各组小鼠脂肪细胞面积：采用Image-Pro Plus 5.1图像分析软件，测量20倍视野中所有脂肪细胞面积，用excel统计平均值及标准误差，绘制脂肪细胞面积的柱状图。

检测化合物1对脂肪肝是否有干预作用：剥离脂肪组织称重；肝脏组织采用包埋剂(樱花，4583)包埋速冻，用全自动切片机(Leica CM3050)将包埋块切片至10微米厚冰冻切片，油红染色展示脂肪肝中的脂肪阳性区域。油红染色使用的是Oil Red O(Sigma o-0625)试剂。使用显微镜(Olypums BX 53)20倍目镜明视野拍照。

结果：

小鼠体重生长曲线表明，本发明化合物1干预7周可明显降低高脂饮食诱导的肥胖小鼠体重增长(图30的A)。

小鼠食物摄取的统计表明，本发明化合物1干预不影响小鼠的采食量(图30的B)。

对小鼠的解剖结果显示，本发明化合物1可以预防小鼠白色脂肪积累(图30的C和图30的D)。小鼠脂肪组织的HE染色结果显示，本发明化合物1干预后，预防小鼠白色脂肪细胞体积增加。(图30的E)。

本发明化合物1干预小鼠的肛温显著高于对照组(图30的F)。

本发明化合物1干预可以预防高脂饮食诱导的葡萄糖耐量异常(图30的G)和胰岛素抵抗(图30的H)。本发明化合物1干预显著降低小鼠血清中的游离脂肪酸(图30的I)和甘油三酯水平(图30的J)。

本发明化合物1干预可以预防高脂饮食诱导的脂肪肝。(图30的K)

结论：本发明化合物1可以有效预防高脂饮食诱导的小鼠肥胖，有效改善高脂饮食诱导的糖耐量异常和胰岛素耐量异常，有效降低高脂饮食诱导高脂血症的风险。

试验例9本发明化合物对高脂饮食诱导的肥胖小鼠的治疗作用

为了进一步确定本发明化合物是否对高脂饮食诱导的肥胖小鼠具有治疗效果。

高脂饮食诱导小鼠肥胖是常用的肥胖症研究模型。本研究中，将6周龄的雄性C57BL/6小鼠(购自维通利华公司)随机分为2组，一组正常饮食饲养(SD组)，一组高脂饮食饲养(饮食诱导肥胖小鼠)。高脂饲养八周后的小鼠作为饮食诱导的肥胖模型小鼠。将已经肥胖的小鼠按照体重分成两组，一组高脂饮食饲养并腹腔注射PBS(8g NaCl，0.2g KCl，0.24g KH₂PO₄，3.58g Na₂HPO₄·12H₂O，溶于1升去离子水中，调节pH值至7.4)作对照(HFD组)，一组高脂饮食饲养并腹腔注射本发明化合物1药物干预(HFD+1组)。正常饮食饲养组(SD组)继续保持正常饮食饲养。高脂饮食饲养使用高脂饲料D12451(北京华阜康公司)(45％脂肪)，正常饮食饲养使用对照饲料D12450B(北京华阜康公司)(10％脂肪)。给药剂量和方式：本发明化合物1用PBS(8g NaCl，0.2g KCl，0.24g KH₂PO₄，3.58g Na₂HPO₄·12H₂O，溶于1升去离子水中，调节pH值至7.4)稀释(20mg/mL)，给药剂量每千克体重100毫克(100mg/kg)，腹腔注射，隔天注射一次，持续干预7周。

与试验例8的操作和测定方法相同，在实验过程中，每周记录小鼠体重，测量小鼠采食量。药物治疗实验结束前一周检测一系列指标：测量各组小鼠的葡萄糖耐量(GTT)和胰岛素耐量(ITT)；测定各组小鼠的肛温。药物持续治疗7周以后，断颈处死小鼠，眼球采血，离心收集血清，检测血清中游离脂肪酸和甘油三酯含量；解剖小鼠，称量脂肪等各个组织器官重量；脂肪组织采用1％福尔马林固定，制备石蜡切片和HE染色，统计各组小鼠脂肪细胞面积。

结果：

小鼠体重生长曲线表明，本发明化合物1治疗7周后明显降低高脂饮食诱导的肥胖小鼠体重(图31的A)。

小鼠食物摄取的统计表明，本发明化合物1治疗不影响小鼠的采食量(图31的B)。

对小鼠的解剖结果显示，本发明化合物1治疗后小鼠白色脂肪积累显著少于对照小鼠(图31的C和图31的D)。小鼠脂肪组织的HE染色结果显示，本发明化合物1治疗后，小鼠白色脂肪细胞体积显著减小(图31的E)。

本发明化合物1治疗小鼠的肛温显著高于对照组(图31的F)。

本发明化合物1治疗显著改善高脂饮食诱导的葡萄糖耐量异常(图31的G)和胰岛素抵抗(图31的H)。本发明化合物1治疗显著降低小鼠血清中的游离脂肪酸(图31的I)和甘油三酯水平(图31的J)。

结论：本发明化合物1对高脂饮食诱导的肥胖小鼠具有显著的治疗效果：有效减少肥胖小鼠的脂肪重量；改善肥胖小鼠的糖耐量异常和胰岛素耐量异常；有效治疗肥胖小鼠的高脂血症。

使用如上所述的方法，本发明人检测了化合物26和化合物38对高脂饮食诱导的肥胖小鼠的治疗作用，其结果如下。

小鼠体重的生长曲线结果表明：高脂饮食成功诱导小鼠肥胖，化合物26治疗明显降低高脂饮食诱导的肥胖小鼠体重(图32的A)，化合物26治疗后小鼠皮下和腹部的白色脂肪积累均显著减少(图32的B和C)，化合物26治疗显著改善高脂饮食诱导的糖耐量异常(图32的D)和胰岛素抵抗(图32的E)。化合物38治疗明显降低高脂饮食诱导的肥胖小鼠体重(图33的A)，化合物38治疗后小鼠皮下和腹部的白色脂肪积累均显著减少(图33的B和C)，化合物38治疗显著改善高脂饮食诱导的糖耐量异常(图33的D)和胰岛素抵抗(图33的E)。

结论：化合物26和化合物38可以对高脂饮食诱导的小鼠肥胖有显著的治疗作用，有效改善高脂饮食诱导的糖耐量异常和胰岛素耐量异常。

试验例10本发明化合物对高脂饮食诱导的小鼠动脉粥样硬化和脂肪肝的预防作用

由于本发明化合物1有效预防和治疗高脂饮食诱导的小鼠肥胖，有效预防和治疗小鼠的高脂血症。本发明人推测本发明化合物1可能预防高脂饮食诱导的动脉粥样硬化和脂肪肝。

载脂蛋白E(ApoE)基因敲除小鼠是研究动脉粥样硬化的良好动物模型。6周龄的ApoE基因敲除小鼠(南京模式动物研究所)随机分为3组，每组10只：一组正常饮食饲养(SD)，一组高脂饮食饲养同时腹腔注射PBS(8g NaCl，0.2g KCl，0.24g KH₂PO₄，3.58gNa₂HPO₄·12H₂O，溶于1升去离子水中，调节pH值至7.4)作为对照(HFD组)，一组高脂饮食饲养同时腹腔注射本发明化合物1药物干预(HFD+1组)。给药方式采用腹腔注射，隔天注射一次，本发明化合物1用PBS稀释(20mg/mL)，给药剂量每千克体重100mg本发明化合物1。高脂饮食饲养使用高脂饲料H10141(北京华阜康公司)(21％脂肪，0.15％胆固醇)，正常饮食饲养使用对照饲料1025(北京华阜康公司)(大于4％脂肪)。

在实验过程中，每周记录小鼠体重。药物持续干预8周以后，断颈处死小鼠：眼球采血，离心收集血清。血清采集方法：眼球采血收集在离心管中，静置2小时进行凝固。然后1800g，4℃离心15分钟，取上清分装到冻存管中，立即-80℃冻存。

检测血清中甘油三酯水平：采用浙江东瓯诊断产品有限公司生产的TG测定试剂盒测定小鼠血清中甘油三酯含量。解剖小鼠，剥离主动脉，油红染色显示动脉粥样硬化斑块，索尼相机照相，采用Image-Pro Plus 5.1图像分析软件，测量动脉粥样硬化斑块面积，用excel统计平均值及标准误差，绘制动脉粥样硬化斑块面积的柱状图。

实验结果显示，本发明化合物1干预显著降低高脂饮食诱导的ApoE基因敲除小鼠体重(图34的A)。本发明化合物1治疗后小鼠白色脂肪积累显著少于对照小鼠(图34的B)。本发明化合物1治疗显著降低小鼠血清中的甘油三酯水平。(图34的C)。本发明化合物1治疗降低粥样动脉硬化的斑块的面积(图34的D和E)。

结论：本发明化合物1有效预防高脂饮食诱导的小鼠动脉粥样硬化。

通过以上体外和体内的实验研究结果可知，本发明的酰基酸衍生物具有多种功效：显著促进小鼠的肌肉损伤再生，显著改善肌营养不良Mdx小鼠病理表型，显著提高老年小鼠肌肉功能；显著预防和治疗高脂饮食诱导的肥胖，显著预防和治疗高脂饮食诱导的高血脂症，显著预防和治疗高脂饮食诱导的胰岛素抵抗，显著预防和治疗高脂饮食诱导的糖耐量异常，显著改善高脂饮食诱导的脂肪肝，显著改善高脂饮食诱导的动脉粥样硬化。这些结果表明，本发明小分子化合物在生物发育进程中具有普遍性的调节作用，可以为人类疾病提供临床治疗作用。

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Claims

1.一种通式(I)所示的化合物，

或其药学上可接受的盐，

其中，

X₁选自O、S或N-OR^a；

X₂选自-C(O)-、-S(O)-、或-S(O)₂-；

X₃和X₄各自独立地选自O、-C(O)-或-C(O)O-；

Y₁、Y₂、Y₃、Y₄各自独立地选自亚烷基或亚烯基；

R^a选自氢或烷基；

R^b选自氢、烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，所述烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被选自卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、氧代、硝基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基的一种或多种基团取代；

m、n、t、p、q、r、s各自独立地为0或1。

2.根据权利要求1所述的通式(I)所示的化合物，

其中，

X₁选自O；

X₂选自-C(O)-；

r为1。

3.根据权利要求1或2所述的通式(I)所示的化合物，其为通式(II)所示的化合物，

其中，R¹、R²、Y₁、Y₄和t如权利要求1所定义。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的通式(I)所示的化合物，

5.根据权利要求1至4中任一项所述的通式(I)所示的化合物，

6.根据权利要求1至5中任一项所述的通式(I)所示的化合物，

其中，

Y₄选自C₁-C₆亚烷基或C₂-C₆亚烯基；

t为0或1。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的通式(I)所示的化合物，其选自：

8.根据权利要求1所述的通式(I)所示的化合物，

其中，

X₁选自O；

X₂选自-C(O)-；

X₃和X₄各自独立地选自-C(O)-或-C(O)O-；

r为1；

p和q各自独立地为0或1。

9.根据权利要求8所述的通式(I)所示的化合物，

其中，

m为1；

n为1；

s为0或1。

10.根据权利要求8或9所述的通式(I)所示的化合物，其为通式(III)或通式(IV)或通式(V)或通式(VI)所示的化合物，

其中，R¹、R²、Y₁、Y₂、Y₃、Y₄和t如权利要求1所定义。

11.根据权利要求8至10中任一项所述的通式(I)所示的化合物，

其中，

Y₁、Y₂、Y₃、Y₄各自独立地选自C₁-C₆亚烷基或C₂-C₆亚烯基。

12.根据权利要求8至11中任一项所述的通式(I)所示的化合物，

其中，

t为0；

13.根据权利要求8至12中任一项所述的通式(I)所示的化合物，

其中，

R¹选自氢、OR^b、卤素、或烷基；

R^b选自氢或C₁-C₆烷基。

14.根据权利要求8至13中任一项所述的通式(I)所示的化合物，其选自：

15.根据权利要求1所述的通式(I)所示的化合物，

其中，

X₁选自O；

X₂选自-C(O)-；

通过Y₄与Y₁相连，Y₄、Y₂、X₃、Y₁与它们相连的原子一起形成环烷基；

m、n、t、p、q、r、s各自独立地为0或1。

16.根据权利要求15所述的通式(I)所示的化合物，其为通式(VII)所示的化合物，

其中，

y和z各自独立地为1至3的整数；

R¹、R²、Y₃、X₄、m、q、r如权利要求1所定义。

17.根据权利要求15或16所述的通式(I)所示的化合物，

其中，

q为0；

m为1；

Y₃为C₁-C₆亚烷基或C₂-C₆亚烯基。

18.根据权利要求15或16所述的通式(I)所示的化合物，

其中，

q为0；

m为0。

19.根据权利要求15或16所述的通式(I)所示的化合物，

其中，

q为0；

m为0；

r为0。

20.根据权利要求15至19中任一项所述的通式(I)所示的化合物，

其中，

R¹选自氢、OR^b、卤素、或烷基；

R^b选自氢或C₁-C₆烷基。

21.根据权利要求15至20中任一项所述的通式(I)所示的化合物，

其中，

22.根据权利要求15至21中任一项所述的通式(I)所示的化合物，其选自：

23.根据权利要求1所述的通式(I)所示的化合物，

其中，

X₁选自S或N-OR^a；

X₂选自-C(O)-；

R^a选自氢或C₁-C₆烷基；

r为1。

24.根据权利要求1所述的通式(I)所示的化合物，

其中，

X₁选自O、S或N-OR^a；

X₂选自-S(O)-或-S(O)₂-；

R^a选自氢或C₁-C₆烷基；

R¹选自卤素、氨基或C₁-C₆烷基；

r为1。

25.根据权利要求1所述的通式(I)所示的化合物，

其中，

X₁选自O；

R¹选自OR^b；

R^b选自氢；

r为0。

26.根据权利要求23至25中任一项所述的通式(I)所示的化合物，

其中，

Y₁选自C₁-C₆亚烷基；

s为1；

m、n、p、q各自独立地为0。

27.根据权利要求23至26中任一项所述的通式(I)所示的化合物，

其中，

Y₄选自C₁-C₆亚烷基或C₂-C₆亚烯基；

t为1。

28.根据权利要求23至27中任一项所述的通式(I)所示的化合物，其选自：

29.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至28中任一项所述的通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。

30.根据权利要求1至28中任一项所述的通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐或根据权利要求29所述的药物组合物，在制备预防和/或治疗肌肉萎缩相关疾病的药物中的用途，其中所述肌肉萎缩相关疾病优选为肌源性肌肉萎缩、废用性肌肉萎缩、老年性肌肉萎缩、神经源性肌肉萎缩，更优选为肌源性肌肉萎缩和老年性肌肉萎缩。

31.根据权利要求1至28中任一项所述的通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐或根据权利要求29所述的药物组合物，在制备预防和/或治疗肥胖症、脂肪肝、心脑血管疾病、代谢性疾病，以及抗衰老药物中的用途；其中所述心脑血管疾病例如高血压、冠心病、脑卒中、动脉硬化、周围末梢动脉血管疾病、深静脉血栓、肺栓塞、短暂性脑缺血发作(TIA)、脑梗塞、脑出血、高血压脑病、脑动脉炎、脑血管性痴呆、静脉窦和脑静脉血栓形成；所述代谢性疾病例如高血糖、高血压、血脂异常、高血黏、脂肪肝、高胰岛素血症、葡萄糖耐量异常、胰岛素耐量异常。

32.一种用于增加肌肉、减少脂肪或抗衰老的保健品，其包含根据权利要求1至28中任一项所述的通式(I)所示的化合物和保健品用赋形剂。