CN111249285B - 口腔用组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及口腔用组合物。[课题]提供：为了牙周病的预防和/或治疗(特别是抑制牙周病进展)而抑制牙龈蛋白酶活性的方案。[解决方案]一种抗牙周病口腔用组合物，其以质量比1：1.2～100或1.2～20：1含有叶绿素铜钠和氯化十六烷基吡啶。
Description
技术领域
本发明涉及口腔用组合物等。
背景技术
Porphyromonas gingivalis(牙龈卟啉单胞菌(P.g菌))是被认为在牙周炎的发病和进展中最重要的牙周病源菌。
作为产生P.g菌的代表性的病原性因子，已知有牙龈蛋白酶。牙龈蛋白酶为蛋白酶的1种，存在有肽切断部位特异性不同的Lys-牙龈蛋白酶(Kgp)和Arg-牙龈蛋白酶(Rgp)。它们边相互作用边引起牙龈上皮细胞间的结合的破坏性、对上皮细胞本身的伤害和/或增殖妨碍、进而上皮屏障的破坏和修复妨碍。另外，牙龈蛋白酶还具有：基于吞噬细胞的吞噬和细胞内抑制消化的效果、以及有助于补体系统的破坏、对上皮细胞内的侵入的效果等，由此，还参与了P.g菌逃避免疫系统。进而，最近，据报道基于牙龈蛋白酶的免疫系统的抑制效果导致口腔内细菌菌群的失调(Dysbiosis)，并且这些牙龈蛋白酶的作用导致牙周病的进展和难治性。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：国际公开第2016/104524号
发明内容
发明要解决的问题
基于以上的情况，为了牙周病的预防和/或治疗(特别是抑制牙周病进展)，重要的是，抑制牙龈蛋白酶活性。
用于解决问题的方案
因此，以发现抑制牙龈蛋白酶活性的手法为目的进行了研究，结果发现：叶绿素铜钠效率良好地抑制牙龈蛋白酶活性。
因此，接着为了制备抑制牙龈蛋白酶活性、且还具备P.g菌的杀菌效果的口腔用组合物，研究了将发挥杀菌效果的成分的氯化十六烷基吡啶与叶绿素铜钠组合而使用。因而，推进了研究，结果发现：如果组合叶绿素铜钠与氯化十六烷基吡啶而使用，则有时无法得到如所期待那样的牙龈蛋白酶活性抑制效果。
因此，将叶绿素铜钠和氯化十六烷基吡啶组合而使用的情况下，以发现能效率良好地抑制牙龈蛋白酶活性的手法为目的，进一步反复研究。
其结果，本发明人等发现如下的可能性：通过以特定的比例组合叶绿素铜钠与氯化十六烷基吡啶而使用，从而可以效率良好地抑制牙龈蛋白酶活性，且与单独使用叶绿素铜钠的情况相比，可以制备杀菌效果还得到改善的口腔用组合物，进一步反复改良，至此完成了本发明。
本发明包含例如以下的项中记载的主题。
项1.
一种口腔用组合物，其以质量比1：1.2～100或1.2～20：1含有叶绿素铜钠和氯化十六烷基吡啶。
项2.
根据项1所述的组合物，其为用于抗牙周病的口腔用组合物。
项3.
根据项2所述的组合物，其中，抗牙周病为抑制牙周病进展。
项4.
根据项1～3中任一项所述的组合物，其含有0.001～0.1质量％的叶绿素铜钠。
项5.
根据项1～4中任一项所述的组合物，其含有0.005～0.1质量％的氯化十六烷基吡啶。
发明的效果
可以提供能效率良好地抑制牙龈蛋白酶活性、且与单独使用叶绿素铜钠的情况相比杀菌效果也得到改善的口腔用组合物。该口腔用组合物对于抗牙周病(特别是抑制牙周病进展)是特别有用的。
附图说明
图1示出研究了基于叶绿素铜钠的牙龈蛋白酶(Kgp和Rgp)的活性的抑制效果的结果。
具体实施方式
以下，对本发明中包含的各实施方式进一步详细进行说明。本发明优选包含口腔用组合物和其用途等，但不应限定于这些，本发明包含本说明书中公开、且本领域技术人员能理解的全部。
本发明中包含的口腔用组合物含有叶绿素铜钠和氯化十六烷基吡啶。以下，将本发明中包含的该口腔用组合物有时称为“本发明的口腔用组合物”。另外，本说明书中，将叶绿素铜钠有时简记作SCC，而且将氯化十六烷基吡啶有时简记作CPC。叶绿素铜钠和氯化十六烷基吡啶均为口腔用组合物领域中使用的公知的成分。这些成分也可以购买市售品而使用。
本发明的口腔用组合物以质量比(SCC：CPC)1：1.2～100或1.2～20：1含有SCC和CPC。
需要说明的是，本次的研究中还发现了基于CPC的杀菌效果有由SCC减弱的可能性。如果与单独使用SCC的情况相比，则将SCC与CPC组合而使用时，杀菌效果提高，但有时难以发挥CPC原本的杀菌效果。从更有效地发挥杀菌效果的观点出发，CPC含量优选与SCC含量为等量或其以上。因此，本发明的口腔用组合物中，从更有效地发挥基于CPC的杀菌效果的观点出发，SCC与CPC的含有质量比(SCC：CPC)更优选1：1.2～100。
本发明的口腔用组合物中的、该SCC和CPC含有质量比(即，1：1.2～100或1.2～20：1)中，有时将SCC的含有比率小的比(即，1：1.2～100)称为质量比(i)。另外，该质量比中，有时将SCC的含有比率大的比(即，1.2～20：1)称为质量比(ii)。
质量比(i)中的CPC含有比率范围(即，1.2～100)的下限例如可以为1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、或3。另外，质量比(i)中的CPC含有比率范围的上限例如可以为95、90、85、80、75、70、65、60、50、45、40、35、30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、或2。
质量比(ii)中的SCC含有比率范围(即，1.2～20)的下限例如可以为1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、或3。另外，质量比(ii)中的SCC含有比率范围的上限例如可以为19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、或2。
本发明的口腔用组合物也可以称为以质量比(SCC：CPC)1：100～20：1含有SCC和CPC的组合物，且其中排除以1：1.2～1.2：1含有的组合物(其中，不排除优选以1：1.2和1.2：1含有的组合物)的口腔用组合物。意外地，随着SCC与CPC的含有质量接近1：1，与由SCC单独发挥的牙龈蛋白酶活性抑制效果相比，组合SCC和CPC而得到的牙龈蛋白酶抑制效果急剧降低。因此，以前述质量比范围(1：1.2～1.2：1)含有SCC和CPC的口腔用组合物从本发明的口腔用组合物中排除(其中，不排除优选以1：1.2和1.2：1含有的组合物)。
需要说明的是，如果为该“排除”的记载方法，则例如本发明的口腔用组合物更优选例如可以称为：以质量比(SCC：CPC)1：100～20：1含有SCC和CPC的组合物，且其中排除以1：1.3～1.3：1含有的组合物(其中，不排除优选以1：1.3和1.3：1含有的组合物)的口腔用组合物；以质量比(SCC：CPC)1：100～20：1含有SCC和CPC的组合物，且其中排除以1：1.4～1.4：1含有的组合物(其中，不排除优选以1：1.4和1.4：1含有的组合物)的口腔用组合物；以质量比(SCC：CPC)1：100～20：1含有SCC和CPC的组合物，且其中排除以1：1.5～1.5：1含有的组合物(其中，不排除优选以1：1.5和1.5：1含有的组合物)的口腔用组合物；以质量比(SCC：CPC)1：100～20：1含有SCC和CPC的组合物，且其中排除以1：1.6～1.6：1含有的组合物(其中，不排除优选以1：1.6和1.6：1含有的组合物)的口腔用组合物；以质量比(SCC：CPC)1：100～20：1含有SCC和CPC的组合物，且其中排除以1：1.7～1.7：1含有的组合物(其中，不排除优选以1：1.7和1.7：1含有的组合物)的口腔用组合物；以质量比(SCC：CPC)1：100～20：1含有SCC和CPC的组合物，且其中排除以1：1.8～1.8：1含有的组合物(其中，不排除优选以1：1.8和1.8：1含有的组合物)的口腔用组合物；以质量比(SCC：CPC)1：100～20：1含有SCC和CPC的组合物，且其中排除以1：1.9～1.9：1含有的组合物(其中，不排除优选以1：1.9和1.9：1含有的组合物)的口腔用组合物；或者，以质量比(SCC：CPC)1：100～20：1含有SCC和CPC的组合物，且其中排除以1：2～2：1含有的组合物(其中，不排除优选以1：2和2：1含有的组合物)的口腔用组合物。另外，关于该SCC与CPC的质量比(1：100～20：1)的“1：100”和“20：1”，分别直接相当于上述“质量比(i)中的CPC含有比率范围的上限”的记载、和“质量比(ii)中的SCC含有比率范围的上限”的记载。
本发明的口腔用组合物中的SCC的含量优选0.001～0.1质量％左右。该范围的下限可以为0.002、0.003、0.004、0.005、0.006、0.007、0.008、0.009、0.01、0.011、0.012、0.013、0.014、或0.015质量％左右。另外，该范围的上限可以为0.09、0.08、0.07、0.06、或0.05质量％左右。
另外，本发明的口腔用组合物中的CPC的含量优选0.005～0.1质量％左右。该范围的下限可以为0.01、0.015、0.02、0.025、0.03、0.035、0.04、0.045、或0.05质量％左右。另外，该范围的上限可以为0.09、0.08、0.07、0.06、或0.05质量％左右。
需要说明的是，CPC的含量如果为0.025质量％以上，则即使CPC含量与SCC含量不是等量或其以上，也可以有效地发挥基于CPC的杀菌效果。因此，从更有效地发挥基于CPC的杀菌效果的观点出发，CPC含量进一步优选0.025质量％以上。
另外，本发明的口腔用组合物特别是为液态口腔用组合物(除液体口腔用组合物之外，还包括凝胶状、膏状等能符合浓度的组合物)的情况下，本发明的口腔用组合物中的SCC的浓度优选10～1000μg/ml。该范围的下限可以为20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、或150μg/ml。另外，该范围的上限可以为900、800、700、600、或500μg/ml。
进一步另外，本发明的口腔用组合物特别是为液态口腔用组合物(除液体口腔用组合物之外，还包括凝胶状、膏状等能符合浓度的组合物)的情况下，本发明的口腔用组合物中的CPC的浓度优选50～1000μg/ml。该范围的下限可以为100、150、200、250、300、350、400、450、或500μg/ml。另外，该范围的上限可以为900、800、700、600、或500μg/ml。
需要说明的是，CPC的浓度如果为250μg/ml以上，则即使CPC含量与SCC含量不是等量或其以上也可以有效地发挥基于CPC的杀菌效果。因此，从更有效地发挥基于CPC的杀菌效果的观点出发，CPC浓度进一步优选250μg/ml以上。
需要说明的是，没有特别限制，从特别效率良好地抑制牙龈蛋白酶活性、且也特别效率良好地得到CPC的杀菌效果的观点出发，本发明的口腔用组合物中，特别优选的是，CPC的含量为0.025～0.1质量％左右、SCC含量为0.012～0.1质量％，且其含有质量比(SCC：CPC)为1：2.5～8或1.2～4：1左右。特别是，在本发明的口腔用组合物为液态组合物的情况下，从该观点出发，特别优选的是，CPC的含有浓度为250～1000μg/ml左右、SCC含有浓度为120～1000μg/ml左右，且其含有质量比(SCC：CPC)为1：2.5～8或1.2～4：1左右。
本发明的抗牙周病口腔用组合物可以为固体组合物、液体组合物。该抗牙周病口腔用组合物例如可以作为药品、准药品使用。另外，本发明的抗牙周病口腔用组合物的形态没有特别限定，可以依据常规方法制成例如软膏剂、糊剂、皮肤膏剂、凝胶剂、液剂、喷雾剂、漱口水剂、液体牙膏剂、牙膏剂、口胶剂等形态(剂形)。其中，优选漱口水剂、液体牙膏剂、牙膏剂、软膏剂、糊剂、液剂、凝胶剂。
本发明的抗牙周病口腔用组合物在不有损本发明的效果的范围内可以进一步含有单独或2种以上的能配混于口腔用组合物的任意成分。
例如，作为表面活性剂，可以配混非离子表面活性剂、阴离子表面活性剂或两性表面活性剂。具体而言，例如，作为非离子表面活性剂，可以举出蔗糖脂肪酸酯、麦芽糖脂肪酸酯、乳糖脂肪酸酯等糖脂肪酸酯；脂肪酸烷醇酰胺类；脱水山梨醇脂肪酸酯；脂肪酸单甘油酯；聚氧乙烯加成系数为8～10、烷基的碳数为13～15的聚氧乙烯烷基醚；聚氧乙烯加成系数为10～18、烷基的碳数为9的聚氧乙烯烷基苯基醚；癸二酸二乙酯；聚氧乙烯氢化蓖麻油；脂肪酸聚氧乙烯脱水山梨醇等。作为阴离子表面活性剂，可以举出月桂基硫酸钠、聚氧乙烯月桂基醚硫酸钠等硫酸酯盐；月桂基磺基琥珀酸钠、聚氧乙烯月桂基醚磺基琥珀酸钠等磺基琥珀酸盐；椰油酰肌氨酸钠、月桂酰甲基丙氨酸钠等酰基氨基酸盐；椰油基甲基牛磺酸钠等。作为两性离子表面活性剂，可以举出月桂基二甲基氨基乙酸甜菜碱、椰子油脂肪酸酰胺丙基二甲基氨基乙酸甜菜碱等乙酸甜菜碱型活性剂；N-椰油基-N-羧基甲基-N-羟基乙基乙二胺钠等咪唑啉型活性剂；N-月桂基二氨基乙基甘氨酸等氨基酸型活性剂等。这些表面活性剂可以单独配混或组合2种以上而配混。其配混量通常相对于组合物总量为0.1～5质量％。
另外，作为香味剂，例如可以使用薄荷醇、羧酸、茴香脑、丁香酚、水杨酸甲酯、柠檬烯、罗勒烯、正癸醇、香茅醇、α-松油醇、甲基乙酸酯、乙酸香茅酯、甲基丁香酚、桉树脑、芳樟醇、乙基芳樟醇、百里酚、留兰香油、薄荷油、柠檬油、橙油、鼠尾草油、迷迭香油、肉桂油、紫苏油、鹿蹄草油、丁香油、桉树油、多香果油、d-樟脑、d-冰片、茴香油、肉桂油、肉桂醛、薄荷油、香兰素等香料。它们可以单独配混或组合2种以上以相对于组合物总量例如为0.001～1.5质量％配混。
另外，作为甜味剂，例如可以使用糖精钠、乙酰磺胺酸钾、甜菊糖苷、新橙皮苷二氢查尔酮、紫苏葶、奇异果甜蛋白、天冬氨酰苯丙氨酸甲酯、对甲氧基肉桂醛等。它们可以以相对于组合物总量例如为0.01～1质量％配混。
进而，作为湿润剂，可以单独配混或组合2种以上而配混山梨醇、乙二醇、丙二醇、甘油、1,3-丁二醇、聚丙二醇、木糖醇、麦芽糖醇、乳糖醇、聚氧乙二醇等。
作为防腐剂，可以配混对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯等对羟基苯甲酸酯类、苯甲酸钠、苯氧乙醇、烷基二氨基乙基甘氨酸盐酸盐等。
作为着色剂，可以配混蓝色1号、黄色4号、红色202号、绿3号等法定色素、群青、增强群青、普鲁士蓝等矿物系色素、氧化钛等。
作为pH调节剂，可以配混柠檬酸、磷酸、苹果酸、焦磷酸、乳酸、酒石酸、甘油磷酸、乙酸、硝酸、或它们的化学上能形成的盐、氢氧化钠等。它们可以单独配混或组合2种以上而配混使得组合物的pH成为4～8、优选成为5～7的范围。pH调节剂的配混量例如可以为0.01～2重量％。
需要说明的是，本发明的口腔用组合物中，进而，作为药效成分，可以单独配混或组合2种以上而配混dl-α-生育酚乙酸酯、生育酚琥珀酸酯、或生育酚烟酸酯等维生素E类、十二烷基二氨基乙基甘氨酸等两性杀菌剂、三氯生、异丙基甲基苯酚等非离子性杀菌剂、葡聚糖酶、淀粉酶、蛋白酶、非水溶性葡聚糖酶、溶菌酶、溶解酶(Lytic enzyme)等酶、一氟磷酸钠、一氟磷酸钾等碱金属一氟磷酸盐、氟化钠、氟化亚锡等氟化物、氨甲环酸、ε-氨基己酸、铝氯羟尿囊素、二氢胆固醇、甘草次酸、甘草酸、甘油磷酸盐、叶绿素、氯化钠、海狗肽(caropeptide)、尿囊素、肾上腺色素缩氨脲(carbazochrome)、扁柏油酚(hinokitiol)、硝酸钾、异麦芽酮糖醇等。
另外，作为基剂，也可以添加醇类、硅、磷灰石、白色凡士林、石蜡、液体石蜡、微晶蜡、角鲨烷、树指基液等。
另外，本发明的口腔用组合物可以通过公知的方法或由公知的方法容易想到的方法而制备。例如，通过将SCC和CPC以及根据需要的其他成分适宜混合，从而可以制备。
需要说明的是，本说明书中“包含”还包括“本质上由……构成”、和“由……构成”(The term"comprising"includes"consisting essentially of”and"consisting of.")。另外，本发明全部包含任意组合全部本说明书中说明的技术特征。
另外，特定本发明中包含的主题时，对上述本发明的各实施方式说明的各种特性(性质、结构、功能等)可以任意组合。即，本发明中，包含全部由能组合本说明书中记载的各特性的一切组合构成的主题。
实施例
以下，对本发明更具体地进行说明，但本发明不限定于下述的例子。需要说明的是，对于以下药剂(叶绿素铜钠(SCC)、氯化十六烷基吡啶(CPC)、和其混合物)的量，以浓度(μg/mL)表示，所使用的每1ml液体的质量稍大于1g，但也可以认为大致为1ml≒1g。
基于SCC的牙龈蛋白酶活性的抑制效果的研究
将P.g菌(P.gingivalis W83)在GAM培养基中进行培养，调整为吸光度(O.D(600))＝1.0。将该菌液以10000rpm进行离心分离，将上清回收。回收后的上清中包含牙龈蛋白酶。将调整为各浓度的叶绿素铜钠(SCC)与回收后的上清混合，放置3分钟。3分钟后，与用PBS稀释了100倍的牙龈蛋白酶的基质(Z-His-Glu-Lys-MCA或Z-Phe-Arg-MCA；株式会社肽研究所)混合，进行避光并在37℃下静置1小时。需要说明的是，Z-His-Glu-Lys-MCA为苄氧羰基-L-组氨酰基-L-谷氨酰基-L-赖氨酸4-甲基香豆基-7-酰胺(Benzyloxycarbonyl-L-Histidyl-L-Glutamyl-L-Lysine 4-methylcoumaryl-7-amide(盐酸盐型))，是由Lys-牙龈蛋白酶(Kgp)活性切断并发出荧光的试剂。另外，Z-Phe-Arg-MCA为苄氧羰基-L-苯丙氨酰基-L-精氨酸4-甲基香豆基-7-酰胺(Benzyloxycarbonyl-L-phenylalanyl-L-arginine 4-methylcoumaryl-7-amide(盐酸盐型))，是由Arg-牙龈蛋白酶(Rgp)活性切断而发出荧光的试剂。1小时后，用荧光酶标仪(Gemini XPS)测定荧光强度(激发光：380nm、释放光：440nm)。进行换算使得药剂浓度为0μg/mL下的荧光强度成为100％，算出各浓度的SCC经处理时的牙龈蛋白酶活性。需要说明的是，在n＝2下研究各浓度，算出的值作为平均值。显示算出的值越小、牙龈蛋白酶活性越得到抑制。将结果示于图1。
基于SCC和CPC的P.g菌的牙龈蛋白酶活性的抑制效果的研究
与上述同样地，研究了组合SCC和CPC而使用时的P.g菌的牙龈蛋白酶活性的抑制效果。即，如此进行了研究。将P.g菌(P.gingivalis W83)在GAM培养基中进行培养，调整为吸光度(O.D(600))＝1.0。将该菌液以10000rpm进行离心分离，将上清回收。回收后的上清中包含牙龈蛋白酶。将调整为各浓度的药剂(叶绿素铜钠(SCC)、氯化十六烷基吡啶(CPC)、和其混合物)与回收后的上清混合，放置3分钟。3分钟后，与用PBS稀释了100倍的Lys-牙龈蛋白酶(Kgp)的基质(Z-Phe-Arg-MCA；株式会社肽研究所)混合，进行避光并在37℃下静置1小时。1小时后，用荧光酶标仪(Gemini XPS)测定荧光强度(激发光：380nm、释放光：440nm)。进行换算使得药剂浓度为0μg/mL下的荧光强度成为100％，算出各浓度的药剂经处理时的牙龈蛋白酶活性。需要说明的是，在n＝2下研究各浓度，算出的值作为平均值。显示算出的值越小、牙龈蛋白酶活性越得到抑制。将结果归纳于表1。
[表1]
基于SCC和CPC的P.g菌杀菌效果的研究
将P.g菌(P.gingivalis W83)在GAM培养基中进行培养，调整为吸光度(O.D(600))＝1.0。将调整为各处理浓度的倍的浓度的药剂(叶绿素铜钠(SCC)、氯化十六烷基吡啶(CPC)、和其混合物)与调整后的菌液等量混合，放置3分钟。3分钟后，在该药剂和菌液的混合液中加入1/10量的杀菌剂失活PBS(0.07％卵磷脂+0.5％Tween 80)，使杀菌效果停止。之后，在GAM培养基中加入10倍量的该混合液，在37℃厌氧条件下培养16小时。培养后，用吸光酶标仪(xMark微型酶标仪)测定培养基的吸光度(O.D(600))，测定浊度，确认杀菌效果。吸光度越小，菌越不增殖，因此，吸光度越小，杀菌效果可以越高。将结果归纳于表2。
[表2]
Claims (2)
1.叶绿素铜钠和氯化十六烷基吡啶在用于制造抑制牙龈蛋白酶口腔用组合物中的应用，其中，
叶绿素铜钠和氯化十六烷基吡啶的质量比为1：1.2～100或1.2～20：1，
抑制牙龈蛋白酶口腔用组合物为含有0.005～0.09质量％的氯化十六烷基吡啶的抑制牙龈蛋白酶口腔用组合物。
2.根据权利要求1所述的应用，其中，抑制牙龈蛋白酶口腔用组合物为含有0.001～0.1质量％的叶绿素铜钠的抑制牙龈蛋白酶口腔用组合物。
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