CN111172075A - 一种黑水虻复合微生物制剂及其制备方法与在转化豆渣中的应用 - Google Patents

一种黑水虻复合微生物制剂及其制备方法与在转化豆渣中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种黑水虻复合微生物制剂及其制备方法与在转化豆渣中的应用，所述的制备方法是将从黑水虻肠道中分离的菌株接种到营养肉汤培养基中进行培养，得到菌悬液，即为复合微生物制剂。所述的从黑水虻肠道中分离的菌株为粪肠球菌、奇异变形杆菌和弗氏柠檬酸杆菌中的任意一种或几种组合。与现有技术相比，本发明具有如下优势：本发明所使用的菌株皆为黑水虻幼虫肠道筛选出来的原籍菌，因为是原籍菌，所以能更好地重新富集定植入黑水虻肠道中，从源头改变黑水虻幼虫肠道菌群，使其能更好地进行转化，生物转化率高达17.33％。

Description

一种黑水虻复合微生物制剂及其制备方法与在转化豆渣中的 应用
技术领域
本发明涉及环境保护及资源化利用领域，具体涉及一种黑水虻复合微生物制剂及其制备方法与在转化豆渣中的应用。
背景技术
豆渣是豆腐加工过程中大豆经浸泡、脱皮、磨浆、渣浆分离后得到的一种副产物。自豆腐发明至今，豆腐始终扮演着人们餐桌上不可替代的角色。每吨大豆加工约会产生1.2吨湿豆渣，据不完全统计，我国年均湿豆渣生产量高于2千万吨，巨大的年产量给其处理造成了严峻的问题。据统计，目前全球生物质资源有1700亿吨，中国正在以不到世界7％的土地，承载着全球近三分之一的中低品位生物质排放，同时，人类社会废弃的生物质作为环境污染的最大源头，已经造成严重的排放问题。因此，如何高效利用以农业废弃物为主的中低品位生物质，面临着破解天然生物质抗降解屏障和突破生物质转化过程效率底下的双重技术瓶颈。
虽然豆渣是大豆制品加工过程中的废弃物，但它仍然含有丰富的营养成分。研究表明，豆渣具有蛋白质，脂肪，钙，磷，铁等多种营养物质，同时其膳食纤维含量较高。豆渣由于所含热能低且口感粗糙，一直以来未引起人们的重视。豆渣传统的处理方式是作为家畜饲料或废弃物倾倒，造成了资源浪费和环境污染。目前豆渣主要的利用方式包括：发酵制酱油、食品添加剂、提取膳食纤维、提取水解蛋白等
黑水虻幼虫作为腐生性昆虫的代表，取食范围非常广泛，能够迅速将餐厨垃圾、禽畜粪便、变质蔬果、陈粮、食品加工下脚料等有机废弃物转化为自身的生物量，是一种重要的资源性环境昆虫。研究表明，黑水虻对餐厨垃圾、陈粮等废弃物的处理效果极佳，但在处理豆渣、秸秆、畜禽粪便等农业废弃物时存在干物质转化率低、料虫比高等问题，特别是针对干物质含量低、C/N失衡或木质纤维素含量较高的农业废弃物，黑水虻难以实现对其的有效转化。
而黑水虻肠道中栖息着大量的微生物，长期进化过程中肠道微生物与昆虫发展出紧密的共生关系，发挥着包括提供营养、定殖抗力、参与多重营养关系、引起昆虫免疫反应等重要作用，对寄主的生长发育及生命活动产生重要的影响。将黑水虻肠道中微生物提取出来后扩大培养，再将其定植到黑水虻幼虫肠道中，能够有效的定向改造黑水虻的肠道微生物成分，有望实现对豆渣的高效转化利用。因此，制备出联合黑水虻转化豆渣的复合微生物制剂具有十分重要的意义。通过黑水虻肠道菌群的改造，有望实现对食用菌菌渣的高效转化利用。
发明内容
发明目的：本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，对豆渣资源化利用率低的问题，提供一种黑水虻复合微生物制剂。
本发明还要解决的技术问题是提供上述复合微生物制剂的其制备方法。
本发明最后要解决的技术问题是提供上述复合微生物制剂在转化豆渣中的应用。
为了解决上述技术问题，本发明公开了一种黑水虻复合微生物制剂的制备方法，将从黑水虻肠道中分离提取的原籍菌株接种到营养肉汤培养基中进行扩大培养，得到菌悬液，即为复合微生物制剂。
其中，所述的从黑水虻肠道中分离的菌株为粪肠球菌、奇异变形杆菌和弗氏柠檬酸杆菌中的任意一种或几种组合。
优选地，所述的从黑水虻肠道中分离的菌株优选为粪肠球菌、奇异变形杆菌和弗氏柠檬酸杆菌中三种组合。
更优选地，将粪肠球菌、奇异变形杆菌和弗氏柠檬酸杆菌分别接种到营养肉汤培养基中进行培养，得到三种菌悬液，再按照1:1:1的体积比混合，得到混合菌悬液，即为复合微生物制剂。
其中，所述的粪肠球菌为粪肠球菌(Enterococcus faecalis)Protease：001，保藏编号为CCTCC NO：M 2019612，已于2019年8月7日保藏于中国典型培养物保藏中心(中国武汉武汉大学邮编：430072)。
其中，所述的奇异变形杆菌为奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)Protease：002，保藏编号为CCTCC NO：M 2019613，已于2019年8月7日保藏于中国典型培养物保藏中心(中国武汉武汉大学邮编：430072)。
其中，所述的弗氏柠檬酸杆菌为弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)Protease：003，保藏编号为CCTCC NO：M 2019614，已于2019年8月7日保藏于中国典型培养物保藏中心(中国武汉武汉大学邮编：430072)。
其中，所述的营养肉汤培养基中各组分的浓度为牛肉膏3g/L、蛋白胨10g/L，氯化钠5g/L；营养肉汤培养基的pH为7.0～7.4；所述的培养基中各组分在搅拌均匀后，在121℃下灭菌20min；所述的培养为100～200r/min，35～40℃培养20～30h，优选与150r/min，37℃培养24h。
上述方法制备得到的黑水虻复合微生物制剂也在本发明的保护范围之内。
上述黑水虻复合微生物制剂在转化豆渣为生物质中的应用也在本发明的保护范围之内。
其中，所述的应用为将复合微生物制剂中的微生物定植于黑水虻幼虫肠道中使其高效转化菌渣。
包括如下步骤：
(1)菌株定植：将上述菌悬液接种到灭菌后的饲料中，混匀，得到混合物料，置于饲料盒中；混合物料，即饲料盒的顶端覆盖纱网，将黑水虻未孵化的虫卵放置在纱网上，虫卵孵化后掉落在混合物料中，饲养，生长成黑水虻幼虫，同时使得混合菌株在黑水虻幼虫的肠道中定植；
(2)豆渣的转化：将步骤(1)饲养后的黑水虻幼虫接种到含有水分的豆渣中(将黑水虻幼虫撒在物料的表面)，培养转化，待幼虫变为浅褐色，即到预蛹之前停止转化，分离幼虫和生物质。所述的转化即在培养过程中幼虫将饲料转化成其自身的生物量，如图1所示。
步骤(1)中，灭菌后的饲料为在121℃下灭菌15min。
步骤(1)中，菌悬液按照40％～60％mL/g(优选50％mL/g)的接种量接种到饲料中；虫卵与混合物料的比为0.8～1.5g/kg(优选1:1g/kg)；所述的孵化为在25～30℃孵化4～5日；所述的饲养为在25～30℃(优选28℃)，相对湿度为60～80％(优选70％)，混合物料中水分的质量百分比为60～80％(优选70％)的条件下饲养4～6日(优选5日)；
步骤(2)中，豆渣的含水量为60％～80％(优选70％)，其中，所述的含水量为质量分；黑水虻幼虫的用量为0.5～1.5g/240g干重的豆渣(优选1g/240g干重的豆渣)，所述的培养为在27～35℃(优选30℃)，相对湿度为60％～80％(优选70％)的条件下培养10～15日。
步骤(2)中，将分离后的黑水虻幼虫经过65℃，48h烘干进行深加工，如提取壳聚糖、抗菌肽等高价值物质；将分离后的物料按自然堆肥方式集中堆置1～2周后可作为优质有机肥料。
上述黑水虻为亮斑扁角水虻武汉品系。
有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下优势：
(1)黑水虻协同微生物共同转化豆渣，能够有效将豆渣转化为生物质，提高豆渣的利用率。
(2)由于黑水虻自身拥有较强的免疫功能，基本不受病虫害影响，同时还可以在转化过程中抑制病原菌的生长，实现转化过程的无害化，且处理过程周期短。
(3)处理完成后留有的黑水虻虫粪，可作为优质的有机肥料。
(4)完成处理后，黑水虻幼虫可作为优质蛋白、油脂等的重要来源进行资源最大化利用，具有非常可观的经济效益、开发价值和很好的应用前景。
(5)处理工艺简单、对操作设备要求不高、管理便捷、生产过程中污染少、对环境友好。
(6)本发明所使用的菌株皆为黑水虻幼虫肠道筛选出来的原籍菌，因为是原籍菌，所以能更好地重新富集定植入黑水虻肠道中，从源头改变黑水虻幼虫肠道菌群，使其能更好地进行转化，生物转化率高达17.33％。
附图说明
图1为黑水虻幼虫转化豆渣的过程图片，其中：1-1.转化初期(幼虫4～5日龄)；1-2.转化中期(幼虫11～13日龄)；1-3.分离的后期阶段幼虫；1-4.虫粪和残渣。
图2为菌株筛选时产生透明圈的固体培养基平板，其中：2-1.粪肠球菌CCTCC NO：M2019612；2-2.奇异变形杆菌CCTCC NO：M 2019613；2-3.弗氏柠檬酸杆菌CCTCC NO：M2019614。
具体实施方式
根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
除非特别说明，本发明才用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。实施例中：所述豆渣购自江苏省南京市珠泉农贸市场，为榨取豆浆以后剩下的固体废物，饲养前调节水分为70％；所述精饲料为亿隆552小猪饲料，购自山东省枣庄市三汇饲料原料销售店；实验在恒温恒湿培养箱内进行，控制温度为30℃，相对湿度为70％。
功能菌株的筛选：利用选择性培养基，即牛肉膏蛋白胨牛奶平板对黑水虻幼虫肠道内菌株进行筛选。
(1)将经过体表灭菌的黑水虻幼虫置于0.9％的生理盐水中，去除头尾，将其肠道拉出放进事先装有0.9％生理盐水的1.5mL离心管中，捣碎匀浆，通过差速离心法分离出含肠道微生物的上清液；
(2)将上述上清液用0.9％生理盐水稀释为10-1～10-6六个梯度，然后各取200μL分别涂布于牛奶平板上，于37℃培养24h后，挑取有透明圈的菌落(图2)在营养肉汤平板上进行划线分离培养，分离得到的单菌株再于牛奶平板上鉴定其确为产蛋白酶菌株。
实施例1：一种联合黑水虻幼虫转化豆渣的方法，包括以下步骤:
(1)将从黑水虻肠道中分离的3种菌：粪肠球菌CCTCC NO：M 2019612；奇异变形杆菌CCTCC NO：M 2019613；弗氏柠檬酸杆菌CCTCC NO：M 2019614分别用营养肉汤培养基(牛肉膏3g/L、蛋白胨10g/L，氯化钠5g/L；营养肉汤培养基的pH为7.0～7.4)摇床扩大培养，150r/min，37℃培养24h；
(2)将精饲料于高压灭菌锅121℃15min灭菌。
(3)将3种菌液按1:1:1的体积比混合，在精饲料中接种50％(mL/g)的混合菌液，将3种菌液和灭菌后的精饲料均匀混合后置于饲料盒内，将未孵化的虫卵放置于饲料盒上方的纱网上(虫卵与混合物料的比1g/kg)，于25～30℃孵化4～5日，待虫卵孵化后掉入精饲料中，在28℃、相对湿度为70％、混合物料中水分的质量百分为70％的条件下继续饲养5日，使混合菌株在黑水虻幼虫的肠道中定植；
(4)向调节好水分含量的豆渣中接种5日龄的黑水虻幼虫，每克虫接种240克物料(干重计)，将黑水虻幼虫均匀的撒在物料表面。
(5)实验在恒温恒湿培养箱内进行，控制温度为30℃，相对湿度为70％，培养10～15日。
(6)待步骤(5)转化结束后(待幼虫变为浅褐色，即到预蛹之前停止转化)，把转化后的幼虫全部挑选出来，剩下的就是物料和粪便剩余物了，分离物料和幼虫，烘干称重计算转化参数。
实施例2：一种联合黑水虻幼虫转化豆渣的方法，包括以下步骤:
(1)将从黑水虻肠道中分离的粪肠球菌NO：CCTCC M 2019612用营养肉汤培养基摇床扩大培养，150r/min，37℃培养24h；
(2)将精饲料于高压灭菌锅121℃15min灭菌。
(3)在精饲料中接种50％(mL/g)的混合菌液，将菌液和灭菌后的精饲料均匀混合后置于饲料盒内，将未孵化的虫卵(虫卵与混合物料的比1g/kg)放置于饲料盒上方的纱网上，于25～30℃孵化4～5日，待虫卵孵化后掉入精饲料中，在28℃、相对湿度为70％、混合物料中水分的质量百分为70％的条件下继续饲养5日，使混合菌株在黑水虻幼虫的肠道中定植；
(4)向调节好水分含量的豆渣中接种5日龄的黑水虻幼虫，每克虫接种240克物料(干重计)，将黑水虻幼虫均匀的撒在物料表面。
(5)实验在恒温恒湿培养箱内进行，控制温度为30℃，相对湿度为70％，培养10～15日。
(6)转化结束后，分离物料和幼虫，烘干称重计算转化参数。
实施例3：一种联合黑水虻幼虫转化豆渣的方法，包括以下步骤：
同实施例2，仅将粪肠球菌NO：CCTCC M 2019612改为奇异变形杆菌CCTCC NO：M2019613。
实施例4：一种联合黑水虻幼虫转化豆渣的方法，包括以下步骤：
同实施例2，仅将粪肠球菌NO：CCTCC M 2019612改为弗氏柠檬酸杆菌NO：CCTCC M2019614。
实施例5：一种联合黑水虻幼虫转化豆渣的方法，包括以下步骤:
(1)将从黑水虻肠道中分离的2种菌：粪肠球菌CCTCC NO：M 2019612；奇异变形杆菌CCTCC NO：M 2019613；分别用营养肉汤培养基(牛肉膏3g/L、蛋白胨10g/L，氯化钠5g/L；营养肉汤培养基的pH为7.0～7.4)摇床扩大培养，150r/min，37℃培养24h；
(2)将精饲料于高压灭菌锅121℃15min灭菌。
(3)将2种菌液按1:1的体积比混合，在精饲料中接种50％(mL/g)的混合菌液，将2种菌液和灭菌后的精饲料均匀混合后置于饲料盒内，将未孵化的虫卵放置于饲料盒上方的纱网上(虫卵与混合物料的比1g/kg)，于25～30℃孵化4～5日，待虫卵孵化后掉入精饲料中，在28℃、相对湿度为70％、混合物料中水分的质量百分为70％的条件下继续饲养5日，使混合菌株在黑水虻幼虫的肠道中定植；
(4)向调节好水分含量的豆渣中接种5日龄的黑水虻幼虫，每克虫接种240克物料(干重计)，将黑水虻幼虫均匀的撒在物料表面。
(5)实验在恒温恒湿培养箱内进行，控制温度为30℃，相对湿度为70％，培养10～15日。
(6)待步骤(5)转化结束后(待幼虫变为浅褐色，即到预蛹之前停止转化)，把转化后的幼虫全部挑选出来，剩下的就是物料和粪便剩余物了，分离物料和幼虫，烘干称重计算转化参数。
实施例6
同实施例5，仅将粪肠球菌NO：CCTCC M 2019612改为弗氏柠檬酸杆菌NO：CCTCC M2019614。
实施例7
同实施例5，仅将奇异变形杆菌NO：CCTCC M 2019613改为弗氏柠檬酸杆菌NO：CCTCC M 2019614。
对比例：仅黑水虻幼虫单独转化豆渣，包括下述步骤：
(1)将精饲料于高压灭菌锅121℃15min灭菌。
(3)将灭菌后的精饲料均匀平铺于饲料盒内，将未孵化的虫卵(虫卵和物料比为1g/kg)放置于饲料盒上方的纱网上，待虫卵孵化后掉入精饲料中，在28℃、相对湿度为70％、混合物料中水分的质量百分为70％的条件下继续饲养5日，使混合菌株在黑水虻幼虫的肠道中定植；
(4)向调节好水分含量的豆渣中接种5日龄的黑水虻幼虫，每克虫接种240克物料(干重计)，将黑水虻幼虫均匀的撒在物料表面。
(5)实验在恒温恒湿培养箱内进行，控制温度为30℃，相对湿度为70％，培养10～15日。
(6)转化结束后，分离物料和幼虫，烘干称重计算转化参数。
与实施例1～4相比，该对比例采用未经菌种定植的黑水虻幼虫单独转化豆渣。为确保实验数据有效，该对比例与其他实施例均在同一环境条件下进行操作。
由以上实验可知，相比空白对照组，添加菌株在黑水虻肠道的定植富集，均可以在一定程度上提高物料的减少率、幼虫生物转化率与幼虫体重。但显而易见，混合菌株的作用均大于各单菌株的转化。因此，复合微生物制剂对于豆渣转化率的提高更为明显。
表1饲养后物料减少率、生物转化率和虫体增重
Figure BDA0002379674960000081
注：生物转化率的计算方法参照公式：生物转化率＝(W2-W1)/(m0-m1)×100％，式中W1为饲养结束后幼虫的总干重，W2为饲养前加入的5日龄幼虫的干重，m0为初始饲料总干重，m1为饲养结束后剩余饲料总干重。
物料减少率＝(M0-M1)/M0×100％，式中M0为加入物料总干重，M1为饲养后所剩物料总干重。
表2饲养后幼虫营养成分
组别 蛋白质含量(％) 脂肪含量(％)
实施例1 45.38±0.32 32.52±0.28
实施例2 37.64±0.51 24.83±0.67
实施例3 41.25±0.61 30.65±0.34
实施例4 39.67±0.38 27.21±0.63
实施例5 41.87±0.23 30.51±0.53
实施例6 42.72±0.47 31.58±0.32
实施例7 41.98±0.52 30.89±0.35
对比例 34.82±0.73 21.34±1.01
本发明提供了一种联合黑水虻转化豆渣的复合微生物制剂的思路及方法，具体实现该技术方案的方法和途径很多，以上所述仅是本发明的优选实施方式。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。本实施例中未明确的各组成部分均可用现有技术加以实现。
序列表
<110> 南京工业大学
<120> 一种黑水虻复合微生物制剂及其制备方法与在转化豆渣中的应用
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 908
<212> DNA
<213> 粪肠球菌(Enterococcus faecalis)
<400> 1
acatgcagtc gaacgcttct ttcctcccga gtgcttgcac tcaattggaa agaggagtgg 60
cggacgggtg agtaacacgt gggtaaccta cccatcagag ggggataaca cttggaaaca 120
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<210> 2
<211> 922
<212> DNA
<213> 奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)
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gtcttgtaga ggggggtaga attccatgtg tagcggtgaa atgcgtagag atgtggagga 660
ataccggtgg cgaaggcggc cccctggaca aagactgacg ctcaggtgcg aaagcgtggg 720
gagcaaacag gattagatac cctggtagtc cacgctgtaa acgatgtcga tttagaggtt 780
gtggtcttga accgtggctt ctggagctaa cgcgttaaat cgaccgcctg gggagtacgg 840
gccgcaaggg ttaaaactca aatgaattga cgggggcccg cacaagcggt ggagcatgtg 900
gtttaattcg atgcaacgcg aa 922
<210> 3
<211> 881
<212> DNA
<213> 弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)
<400> 3
acatgcagtc gaacggtagc acagagagct tgctctcggg tgacgagtgg cggacgggtg 60
agtaatgtct gggaaactgc ccgatggagg gggataacta ctggaaacgg tagctaatac 120
cgcataatgt cgcaagacca aagaggggga ccttcgggcc tcttgccatc ggatgtgccc 180
agatgggatt agctagtagg tggggtaacg gctcacctag gcgacgatcc ctagctggtc 240
tgagaggatg accagccaca ctggaactga gacacggtcc agactcctac gggaggcagc 300
agtggggaat attgcacaat gggcgcaagc ctgatgcagc catgccgcgt gtatgaagaa 360
ggccttcggg ttgtaaagta ctttcagcga ggaggaaggc gttgtggtta ataaccacag 420
cgattgacgt tactcgcaga agaagcaccg gctaactccg tgccagcagc cgcggtaata 480
cggagggtgc aagcgttaat cggaattact gggcgtaaag cgcacgcagg cggtctgtca 540
agtcggatgt gaaatccccg ggctcaacct gggaactgca tccgaaactg gcaggctaga 600
gtcttgtaga ggggggtaga attccaggtg tagcggtgaa atgcgtagag atctggagga 660
ataccggtgg cgaaggcggc cccctggaca aagactgacg ctcaggtgcg aaagcgtggg 720
ggagcaaaca ggattagata ccctggtagt ccacgccgta aacgatgtcg acttggaggt 780
tgtgcccttg aggcgtggct tccggagcta acgcgttaag tcgaccgcct ggggagtacg 840
gccgcaaggt taaaactcaa atgaattgac gggggctcgc a 881

Claims (10)

1.一种黑水虻复合微生物制剂的制备方法，其特征在于，将从黑水虻肠道中分离的菌株接种到营养肉汤培养基中进行培养，得到菌悬液，即为复合微生物制剂。
2.根据权利要求1所述的黑水虻复合微生物制剂的制备方法，其特征在于，所述的从黑水虻肠道中分离的菌株为粪肠球菌、奇异变形杆菌和弗氏柠檬酸杆菌中的任意一种或几种组合。
3.根据权利要求2所述的黑水虻复合微生物制剂的制备方法，其特征在于，所述的粪肠球菌为粪肠球菌(Enterococcus faecalis)Protease：001，保藏编号为CCTCC NO：M2019612，已于2019年8月7日保藏于中国典型培养物保藏中心。
4.根据权利要求2所述的黑水虻复合微生物制剂的制备方法，其特征在于，所述的奇异变形杆菌为奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)Protease：002，保藏编号为CCTCC NO：M2019613，已于2019年8月7日保藏于中国典型培养物保藏中心。
5.根据权利要求2所述的黑水虻复合微生物制剂的制备方法，其特征在于，所述的弗氏柠檬酸杆菌为弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)Protease：003，保藏编号为CCTCCNO：M 2019614，已于2019年8月7日保藏于中国典型培养物保藏中心。
6.根据权利要求1所述的黑水虻复合微生物制剂的制备方法，其特征在于，所述的营养肉汤培养基中各组分的浓度为牛肉膏3g/L、蛋白胨10g/L，氯化钠5g/L；营养肉汤培养基的pH为7.0～7.4；所述的培养为100～200r/min，35～40℃培养20～30h。
7.权利要求1～6中任意一项所述的方法制备得到的黑水虻复合微生物制剂。
8.权利要求7所述的黑水虻复合微生物制剂在转化豆渣为生物质中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将权利要求1制备得到的菌悬液接种到饲料中，混匀，得到混合物料；混合物料的顶端覆盖纱网，将黑水虻虫卵放置在纱网上，虫卵孵化后掉落在混合物料中，饲养，生长成黑水虻幼虫；
(2)将步骤(1)饲养后的黑水虻幼虫接种到含有水分的豆渣中，培养转化，待幼虫变为浅褐色，即到预蛹之前停止转化，分离幼虫和生物质。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，步骤(1)中，菌悬液按照40％～60％mL/g的接种量接种到饲料中；虫卵与混合物料的比为0.8～1.5g/kg；所述的孵化在25～30℃孵化4～5日；所述的饲养为在25～30℃，相对湿度为60～80％，混合物料中水分的质量百分比为60～80％的条件下饲养4～6日；
步骤(2)中，豆渣的含水量为60％～80％；黑水虻幼虫的用量为0.5～1.5g/240g干重的豆渣；所述的培养为在27～35℃，相对湿度为60％～80％的条件下培养10～15日。
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