CN111139205A - 一株链霉菌及其微生物菌肥、微生物菌肥的制备方法与应用 - Google Patents

一株链霉菌及其微生物菌肥、微生物菌肥的制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

一株链霉菌及其微生物菌肥、微生物菌肥的制备方法与应用，属于农业微生物技术领域。为了给农业生产提供高效的菌种资源，本发明提供了一株分离自玉米根际土壤的链霉菌(Streptomyces zeae)NEAU‑sy36，菌种保藏编号为CCTCC M2019970，还提供了由该菌种制备的微生物菌肥，所述菌株具有生长快、产孢量巨大的优点，在作物、蔬菜中应用具有显著的促生作用，此外该菌株还具有溶磷特性，且对农业生产上多种植物病原真菌具有广谱抗性。

Description

一株链霉菌及其微生物菌肥、微生物菌肥的制备方法与应用
技术领域
本发明具体涉及一株链霉菌及其微生物菌肥、微生物菌肥的制备方法与应用，属于农业微生物技术领域。
背景技术
植物根际是土壤-植物生态系统物质交换的活跃界面，植物根际存在着许多对植物有益的微生物群落，包括植物促生菌。由这些促生菌及其制备的微生物肥料因其可以有效地避免或减少化学肥料所带来的一系列问题，同时又具有显著的社会效益、生态效益和长远利益，在农业生产中得到了广泛的关注，在农业科学可持续发展的大背景下，使用微生物肥料提高农作物产量也是农业发展的必由之路。
化学农资产品的过度使用引发了严重的环境污染和食品安全问题，以有益微生物为战略性资源的农用生物制剂不仅在保护植物免受病原菌侵害和提高作物产量方面效果显著，而且对环境和人类的健康均不构成威胁。目前我国生物制剂还存在着活菌数低、种类少、专性强、不易保存等问题。放线菌是一类分布广、多样性丰富、功能性强的微生物；其中部分放线菌因能直接或间接的提高作物产量已经成功应用于农业生产。因此，放线菌凭借其得天独厚的天然优势为生物制剂研发提供高效菌种资源。
发明内容
为了给农业生产提供高效的菌种资源，本发明提供了一株分离自玉米根际土壤的链霉菌(Streptomyces zeae)NEAU-sy36，菌种保藏编号为CCTCC M2019970。
本发明提供了上述链霉菌在促进植物生长中的应用。
优选地，所述植物包括生菜、玉米和小麦。
本发明还提供了一种微生物菌肥，所述微生物菌肥含有上述链霉菌。
进一步地限定，所述微生物菌肥还含有农药学上可接受的辅料。
进一步地限定，所述微生物菌肥由上述链霉菌与动物粪便和粕类混合后发酵制备制成。
进一步地限定，所述动物粪便为蚯蚓粪；所述粕类为麦麸。
本发明还提供了上述微生物菌肥的制备方法，步骤如下：
(1)将上述的链霉菌接种在ISP3培养基，28℃培养5-7天；
(2)将上述步骤(1)得到的菌种，接种在胰蛋白胨大豆肉汤培养基中，在28℃，250rpm下震荡培养24-48小时使微生物处于指数生长期，以指数期生长的微生物作为种子菌液；
(3)将步骤(2)得到的种子菌液接种到固体培养基上，所述固体培养基由动物粪便和粕类组成，25℃培养6-10天，制得微生物菌肥。
进一步地限定，所述固体培养基由蚯蚓粪和麦麸按照蚯蚓粪：麦麸＝10:10(w:w)的比例组成，含水率为50％。
本发明还提供了上述微生物菌肥在促进植物生长中的应用。
进一步地限定，所述植物包括生菜、玉米和小麦。
有益效果
本发明至少具有如下优势之一：
1.产孢子量大，适合大规模生产。其固体发酵孢子数为4.24±2.75×1012CFU·g-1。
2.本发明研究发现该链霉菌NEAU-sy36及其制备的微生物菌肥可促进植物生长，田间试验表明，菌株孢子浓度为4.24×107CFU·mL-1时，对生菜的促生效果最为显著(P＜0.05)，叶长、叶宽、叶片数、株高和产量分别提高了9.10％、17.82％、24.10％、12.50％和35.64％。菌株孢子浓度为4.24×108CFU·mL-1时，对玉米的促生效果最为显著(P＜0.05)，穗长、穗粗、行数、行粒数、穗粒数和百粒重分别提高了20.31％、12.57％、30.79％、7.02％、25.75％和32.51％。
3.本发明研究发现该链霉菌NEAU-sy36具有较好的溶磷特性，溶磷量为21.03±1.83μg·mL-1。
4.本发明研究发现该链霉菌NEAU-sy36可抑制多种引起植物病害的病原真菌。
5.本发明研究发现链霉菌NEAU-sy36具有植物促生作用及广谱的植物抗病潜能，为研究开发环境友好型的植物促生放线菌提供优质的材料。
附图说明
图1为菌株NEAU-sy36与链霉菌属菌株的系统发育树；
图2为菌株NEAU-sy36的培养形态和扫描电镜形态；a，ISP3培养基菌株形态观察结果；b，光学显微镜观察结果；c，扫描电镜观察结果；
图3为菌株NEAU-sy36在不同培养基上的培养特征；
图4为菌株NEAU-sy36抑制植物病原真菌的体外检测；a，菌株NEAU-sy36对真菌菌丝生长的抑制作用；b，菌株NEAU-sy36对12种供试真菌的抑菌率；
图5为菌株NEAU-sy36孢子悬液对植物种子发芽作用效果；a，小麦种子；b，玉米种子；c，水稻种子；
图6为菌株NEAU-sy36孢子悬液对植物种子发芽的影响；CK1、A1、B1、C1、D1、E1和F1代表不同孢子浓度(CFU·mL-1)；不同小写字母代表差异显著性(P＜0.05)；
图7为菌株NEAU-sy36固体发酵孢子生长变化；
图8为菌株NEAU-sy36对小麦盆栽苗期生长的作用效果；CK3、A3、B3、C3和D3代表不同孢子浓度(CFU·g-1)；
图9为菌株NEAU-sy36对生菜盆栽苗期生长的作用效果；CK4、A4、B4、C4和D4代表不同孢子浓度(CFU·g-1)；
图10为菌株NEAU-sy36对玉米盆栽苗期生长的作用效果；CK5、A5、B5、C5和D5代表不同孢子浓度(CFU·g-1)；
图11为由菌株NEAU-sy36制成的微生物菌肥对田间生菜的作用效果；CK6、A6、B6、C6和D6代表不同孢子浓度(CFU·g-1)；
图12为由菌株NEAU-sy36制成的微生物菌肥对田间玉米的作用效果；CK7、A7、B7、C7和D7代表不同孢子浓度(CFU·g-1)。
具体实施方式
本发明所用的培养基NA(营养琼脂)、ISP1、ISP2、ISP3、ISP4、ISP5、ISP6和ISP7培养基均为本领域常用培养基，可通过商业化途径购买获得。
本发明筛选获得的菌株及其制备的微生物菌肥具有生长快、产孢量巨大的优点，在作物、蔬菜中应用具有显著的促生作用，此外该菌株还具有溶磷特性，且对农业生产上多种植物病原真菌具有广谱抗性。以下结合实施例详细说明本发明，但不限定本发明的实施范围。
实施例1.菌株NEAU-sy36的筛选。
1、菌株的分离和培养
玉米植株根际土壤采集于中国黑龙江省哈尔滨市东北农业大学生命科学与技术研究中心试验田。用铲子将玉米植株挖出，尽量保证根部完整。把植物样本放入标记好的袋子中，带回实验室储存于4℃冰箱备用。菌株分离时首先把取出的玉米植株样品根部大块土壤抖掉，再把根部放入盛有无菌水及玻璃珠的锥形瓶中，28℃、250rpm摇床中震荡30min，取出玉米根，获得玉米根际土壤水溶液。取以上液体稀释100倍后，吸取200μl的稀释液涂布于HV培养基(腐殖酸0.1g，MgSO4·7H2O 0.05g，KCl 0.17g，Na2HPO4·3H2O 0.05g，FeSO40.001g，CaCO3 0.002g，复合维生素0.1ml，琼脂2g，无菌水100ml)平板培养基上，置于28℃中培养7天，挑取单菌落接种到新鲜ISP3平板培养基(燕麦2g，K2HPO4·3H2O 0.05g，MgSO4·7H2O 0.02g，KNO3 0.02g，琼脂2g，无菌水100ml)，经反复转接得到纯化菌株。将纯化的菌株命名为NEAU-sy36，用20％甘油保存于-80℃超低温冰箱中。
2、菌株的鉴定：
鉴定方法：通过16S rRNA序列分析，形态学特征和生理生化实验对该菌株进行鉴定。
16S rRNA序列分析：菌株NEAU-sy36的16S rRNA序列(1517bp，登录号为MN885887)通过网站EzTaxon-e(http://eztaxon-e.ezbiocloud.net)比对分析表明该菌株属于链霉菌属。通过邻近法和最大似然法两种方法进行系统发育分析，结果表明该菌株与16S rRNA序列相似度最高的菌株S.misionensis DSM 40306T(99.79％)，S.phaeoluteichromatogenes DSM 41898T(99.65％)和Streptomyces malaysiense MUSC136T(99.45％)在一起形成了独立且稳定的分支(如图1)，进一步说明该菌株为一株链霉菌，并根据分离源将其命名为Streptomyces zeae。(注：分支处仅显示出>50％的靴值，0.005代表两个核苷的遗传距离。)
所获得的链霉菌已保藏至中国典型培养物保藏中心，保藏地址为：中国.武汉.武汉大学；邮编430072，保藏日期为2019年11月25日，保藏编号为CCTCC：M2019970，名称为Streptomyces zeae NEAU-sy36。
(1)菌体形态特征：如图2中a所示为菌株NEAU-sy36在ISP3培养基上的单菌落形态特征。菌落扁平，质地致密，表面干燥，产生大量灰棕色的气生菌丝及浅灰色的基内菌丝；图2中b所示为菌株在TSB培养基中摇床培养24小时后，光学显微镜下观察的菌丝形态。菌丝为较细的直链，未出现断裂的情况；图2中c所示为链霉菌NEAU-sy36在扫描电子显微镜下观察的菌丝及孢子形态。菌株可以产生大量表面光滑、不游动的椭圆形孢子(0.8-1.1×1.0-1.3μm)，孢子连在一起形成螺旋形的孢子链。
链霉菌NEAU-sy36在NA以及ISP1-ISP7培养基上生长7天的形态如图3所示。菌株在这8种培养基上均生长良好，特别是在ISP3、ISP5和ISP7培养基上能够产生大量的气生菌丝，所有培养基上均不产生可溶性色素。
(2)生理生化特征：
链霉菌NEAU-sy36为革兰氏阳性好氧菌，生长温度范围为10-42℃，28-37℃生长状态最佳；其pH耐受范围为pH 4-10，pH 6-8为最适生长条件；在含有9％氯化钠的培养基中仍能够生长。碳源和氮源利用试验中，链霉菌NEAU-sy36除不能利用鼠李糖和山梨醇外其余碳源均可利用，12种供试氮源均可利用。葡萄糖、乳糖以及阿拉伯糖为优势碳源，谷氨酸为优势氮源。此外菌株NEAU-sy36还具有产淀粉水解酶等活性，如表1所示。
表1菌株NEAU-sy36的生理生化特征
Figure BDA0002382561530000051
注：+，阳性；-阴性。
实施例2.链霉菌NEAU-sy36的特性测定。
(1)解磷能力测定
将培养的菌体制成孢子悬液，接种到无机磷液体培养基中培养，通过测定菌液中可溶性磷的含量，测定菌株NEAU-sy36的解磷能力。具体如下：将菌株划线接种于ISP3培养基上，于28℃恒温培养箱中培养，5-7d后用无菌水冲洗制成孢子悬液，并用血球计数板统计孢子浓度。在三个250mL锥形瓶中各加入50ml无机磷液体培养基，灭菌降温至室温后，按照1％(v/v)的接种量将上述孢子悬液(108-1011cfu/ml)接入，250rpm，28℃培养。同时以三瓶不接种的无机磷液体培养基作为空白对照，其他处理相同。7天后，吸取菌液，离心，取上清液用钼锑抗比色法测溶解性磷含量。
其中，无机磷液体培养基(1L)：葡萄糖10g，Ca2(PO)3 5g，(NH4)2SO4 0.5g，NaCl0.2g，MgSO4 0.03g，KCl 0.2g，MnSO4 0.04g，FeSO4 0.0002g，PH7.2。
结果表明，链霉菌NEAU-sy36具有良好的溶磷能力，溶磷量为21.03±1.83μg·mL-1。
(2)抗植物病原真菌的活性测定
靶标菌及供试放线菌的培养：将植物病原真菌接种在PDA上，用打孔器(直径5mm)制成菌饼备用。将纯化的链霉菌(促生菌)NEAU-sy36接种在ISP3培养基平板上，28℃下培养3-4d备用。
活性测定：在PDA平板培养基上以原点为中心画一条直线，一条线的一端接链霉菌(促生菌)NEAU-sy36，培养3d，在一条线的另一端接植物病原真菌，看是否有抑菌圈产生。
本发明使用12种常见的植物病原真菌：1.水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani)，2.玉米弯孢叶斑病菌(Curvularia lunata)，3.大豆菌核病菌(Sclerotiniasclerotiorum)，4.番茄黄萎病菌(Verticillium dahliae)，5.黄瓜炭疽病菌(Colletotrichum orbiculare)，6.番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)，7.大豆根腐病菌(Rhizoctonia solani Kuhn)，8.玉米大斑病菌(Exserohilum turcicum)，9.玉米黑穗病菌(Ustilago maydis)，10.玉米小斑病菌(Helminthosporium maydis)，11.小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum)，12.黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum)。
链霉菌NEAU-sy36对12种常见植物病原真菌拮抗试验结果表明，菌株NEAU-sy36具有广谱的抗真菌活性(如图4中a)，对水稻纹枯致病菌和玉米弯孢致病菌的抑制率高达90％，对大豆菌核致病菌和番茄黄萎致病菌的抑菌率也在50％以上，如图4中b。
实施例3.链霉菌NEAU-sy36促进种子发芽试验
接种剂的制备：将该菌株接种在ISP3培养基，28℃培养5天。将孢子刮到10ml无菌水中，震荡，得到植物促生菌NEAU-sy36的孢子菌悬液，其中活菌数达1.2×1011cfu/ml(如果培养6天，则活菌数达3.1±1.5×1011CFU·mL-1)再用无菌水进行梯度稀释。
种子表面消毒：挑选饱满的种子置于自来水中，浸泡1-2分钟剔除掉漂浮的干瘪种子，然后依次用75％的乙醇对种子消毒4分钟，无菌水清洗5次，5％的次氯酸钠溶液消毒4分钟和无菌水清洗5次。然后浸泡8小时。
培养皿内种子发芽实验：向每个垫有滤纸的培养皿内均匀摆放8个的种子(小麦、玉米和水稻)，设置6个处理组，其孢子浓度分别为106(A1)、107(B1)、108(C1)、109(D1)、1010(E1)和1011(F1)CFU·mL-1，无菌水为空白对照(CK1)，共7组，分别加入3ml各处理组的孢子悬液，对照组加3ml无菌水，25℃黑暗条件下培养，3天后(水稻培养7天)统计根长及芽长。
前期小麦种子发芽试验表明链霉菌NEAU-sy36呈现出一定的促生效果，进一步检测其六个孢子浓度处理对小麦、玉米和水稻种子发芽的影响，结果如图5和图6所示。
小麦发芽试验结果表明：相比CK1，处理组B1(链霉菌NEAU-sy36孢子浓度为2.2×107CFU·mL-1)对小麦的根长和芽长的促进作用最为显著(P＜0.05)，增长率分别为23.26％和10.88％；处理组C1和D1也在不同程度上显著的促进了小麦根和芽的生长(P＜0.05)；处理组A1与CK1相比，小麦的根长和芽长也均有所增长，但根的增长并不显著，芽长显著增加(P＜0.05)；当孢子浓度过高时，处理组E1和F1显著抑制了小麦根和芽的生长(P＜0.05)，其中处理组F1抑制效果更强，对小麦根长和芽长的抑制率分别为64.78％和47.76％。
玉米发芽试验结果表明：处理组A1、B1和C1与CK1相比均显著促进了玉米根的生长(P＜0.05)，增长率分别为13.72％、26.56％和9.80％，而对玉米芽长的促生作用并不显著，相反，处理组C1反而抑制了玉米芽的生长，处理组B1效果最好；从处理组D1开始，随着孢子浓度的增高，玉米根和芽的生长受到的抑制效果就越强，处理组D1、E1和F1对玉米根长的抑制率分别为45.56％、41.34％和66.76％，对玉米芽长的抑制率分别为46.31％、51.66％和97.84％；当链霉菌NEAU-sy36孢子浓度为2.2×1011CFU·mL-1时，玉米芽长受到了强烈的抑制作用(P＜0.05)。
链霉菌NEAU-sy36的不同孢子浓度对水稻发芽具有一定的影响。与CK1相比，处理组A1、B1、C1和D1对水稻根长和芽长的促进作用随着孢子浓度的增高逐渐增大，根长的增长率分别为10.58％、16.07％、17.86％和23.09％，芽长的增长率分别为4.33％、23.38％、24.24％和29.44％，处理组D1效果最好；当孢子浓度过高时(处理组E1和F1)对水稻种子发芽具有抑制作用，处理组F1对水稻根长和芽长的抑制效果最为显著(P＜0.05)，抑制率分别为68.75％和36.80％。
实施例4.含有链霉菌NEAU-sy36的微生物菌肥的制备。
种子液制备：
(1)将链霉菌NEAU-sy36接种在ISP3培养基，28℃培养五天；
(2)将培养后的菌种接种在胰蛋白胨大豆肉汤液体培养基中，28℃，250rpm下震荡培养24小时，使微生物处于指数生长期，得到种子培养溶液。
固体发酵培养基：在250ml的锥形瓶中加入蚯蚓粪：麦麸＝10:10(w:w)和17ml蒸馏水。121℃，灭菌30min。
(3)取步骤(2)中3ml种子液接种于上述固体发酵培养基中,每天早晚各摇匀一次，25℃培养7天，制得微生物菌肥。
链霉菌NEAU-sy36固体发酵试验以蚯蚓粪：麦麸＝10:10(w:w)为发酵基质，接种量为3mL菌液，含水率为50％，置于25℃下发酵10天。固体发酵过程中孢子量的变化情况如图7所示。结果表明，接菌后的第二天到第三天时间段固体发酵的孢子生长速度最快，第三天孢子量达到8.22±2.15×109CFU·g-1。之后随着发酵时间的增长孢子量逐渐增加，在发酵第七天时达到最大值，孢子量为4.24±2.75×1012CFU·g-1。之后孢子量不在增加且暂时保持稳定。
实施例5.含有链霉菌NEAU-sy36的微生物菌肥的盆栽促生试验。
拌土方式施用：
采用拌土的方式将上述制备的微生物菌肥应用在盆栽促生试验中。设置4个处理组，孢子浓度依次为106(A3，A4，A5)、107(B3，B4，B5)、108(C3，C4，C5)和109(D3，D4，D5)CFU·g-1，未接种链霉菌NEAU-sy36的固体发酵产物拌土作为对照组(CK3，CK4，CK5)，每个处理组三次重复，每个重复3盆。每个花盆中盛有1kg不同处理的土壤并摆放小麦种子20粒(A3，B3，C3，D3，CK3)或移栽生菜一颗(A4，B4，C4，D4，CK4)或玉米种子2粒(A5，B5，C5，D5，CK5)。分别对生菜全生长期(45天)和小麦、玉米苗期(30天)进行盆栽促生试验，并分别对其株高、根长、地上部分鲜重和干重以及地下部分鲜重和干重进行测量。
小麦盆栽试验结果如图8，链霉菌NEAU-sy36对小麦盆栽苗期生长的影响主要体现在地上部分。处理组B3(链霉菌NEAU-sy36孢子浓度为4.24×107CFU·g-1)对盆栽小麦生长的影响显著(P＜0.05)，对小麦根长、地下部分鲜重、地下部分干重、株高、地上部分鲜重以及地上部分干重这些指标均有促进作用，同对照组CK3相比分别提高了1.24％、1.73％、2.64％、10.88％、18.37％和12.90％，其他处理组小麦的地下部分指标均表现一定的抑制作用。
生菜盆栽试验结果如图9，链霉菌NEAU-sy36对生菜苗期生长具有调节作用。处理组B4对生菜苗期各指标促生效果最显著(P＜0.05)，与对照组CK4比根长、株高、地上部分鲜重和地上部分干重分别增加了3.76％、11.04％、14.23％和16.52％。处理组A4和C4对生菜苗期的各生长指标同样有不同程度的促进作用，随着浓度的升高处理组D4对生菜的生长出现抑制效果，对根长、株高、地上部分鲜重和地上部分干重的抑制率分别为2.89％、4.34％、3.84％和2.42％。
玉米盆栽试验结果如图10，与生菜和小麦盆栽试验结果相似，处理组B5对玉米各项生长指标的促生作用最为显著(P＜0.05)，玉米根长、地下部分鲜重、地下部分干重、株高、地上部分鲜重以及地上部分干重这些指标同对照组CK5相比分别提高了6.23％、9.75％、4.64％、20.79％、22.32％和19.18％；处理组D5对各项生长指标均有抑制作用，同对照组相比各指标分别降低了2.49％、2.41％、2.20％、4.15％、5.70％和3.48％。处理组A5和处理组C5对玉米苗期的各生长指标同样有不同程度的促进作用。
实施例6.含有链霉菌NEAU-sy36微生物菌肥的田间促生试验。
将拌好的菌肥以底肥的形式，施于沟中，覆土，仅控制肥料一个单一变量。
生菜田间试验：设置4个浓度梯度，分别为106(A6)、107(B6)、108(C6)和109(D6)CFU·g-1土，对照组(CK6)施加未接种链霉菌NEAU-sy36固体发酵产物。4m×6m的区域内种植生菜，每个处理种植面积为4.8m2，株距20cm，行距30cm，每个处理种植80株，每棵苗施加20g菌肥。移栽后45天进行结果统计。
玉米田间试验：设置4个浓度梯度，分别为106(A7)、107(B7)、108(C7)和109(D7)CFU·g-1土，对照组(CK7)施加未接种链霉菌NEAU-sy36固体发酵产物。6m×5m的区域内种植玉米，每个处理种植面积为6m2，株距30cm，行距60cm，每个处理种植32株。每棵苗施加20g菌肥。种植80天后进行结果统计。
产量指标的测定：
生菜：株高、叶长、叶宽、地上部分鲜重。
玉米：株高、穗位高、穗数、穗长、穗粗、穗粒数、穗行数、行粒数、百粒重。
实验结果表明，添加该促生菌制备的微生物菌肥，生菜以及玉米的各项生长指标及产量均显著优于对照组。
生菜田间试验结果如图11和表2，试验结果表明：处理组B6对生菜各项生长指标以及产量增长效果最为显著(P＜0.05)。与对照组CK6相比，其叶长、叶宽、叶片数、株高和产量分别提高了9.10％、17.82％、24.10％、12.50％和35.64％。其次是处理组C6，同样促进了生菜各项指标的增长。处理组A6和D6同样促进了生菜产量的提高，增长率分别为14.73％和4.31％。
玉米田间试验结果如图12和表3，试验结果表明：处理组C7对玉米各项生长指标增长最为显著(P＜0.05)，株高、穗长、穗粗、行数、行粒数、百粒重和穗粒数分别提高了7.13％、20.31％、12.57％、30.79％、7.02％、32.51％和25.75％。
表2不同处理对生菜各项生长指标的影响
Figure BDA0002382561530000091
注：CK6、A6、B6、C6和D6代表不同孢子浓度(CFU·g-1)；不同小写字母代表差异显著性(P＜0.05)。
表3不同处理对玉米各项生长指标的影响
Figure BDA0002382561530000092
注：CK7、A7、B7、C7和D7代表不同孢子浓度(CFU·g-1)；不同的小写字母代表差异显著性(P＜0.05)。
核苷酸序列表
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<120> 一株链霉菌及其微生物菌肥、微生物菌肥的制备方法与应用
<130>
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1517
<212> DNA
<213> 16S rRNA序列
<400> 1
agagtttgat cctggctcag gacgaacgct ggcggcgtgc ttaacacatg caagtcgaac 60
gatgaagccc ttcggggtgg attagtggcg aacgggtgag taacacgtgg gcaatctgcc 120
ctgcactctg ggacaagccc tggaaacggg gtctaatacc ggatatgacc atcttgggca 180
tccttgatgg tgtaaagctc cggcggtgca ggatgagccc gcggcctatc agcttgttgg 240
tgaggtaatg gctcaccaag gcgacgacgg gtagccggcc tgagagggcg accggccaca 300
ctgggactga gacacggccc agactcctac gggaggcagc agtggggaat attgcacaat 360
gggcgaaagc ctgatgcagc gacgccgcgt gagggatgac ggccttcggg ttgtaaacct 420
ctttcagcag ggaagaagcg aaagtgacgg tacctgcaga agaagcgccg gctaactacg 480
tgccagcagc cgcggtaata cgtagggcgc aagcgttgtc cggaattatt gggcgtaaag 540
agctcgtagg cggcttgtca cgtcggttgt gaaagcccgg ggcttaaccc cgggtctgca 600
gtcgatacgg gcaggctaga gttcggtagg ggagatcgga attcctggtg tagcggtgaa 660
atgcgcagat atcaggagga acaccggtgg cgaaggcgga tctctgggcc ggtactgacg 720
ctgaggagcg aaagcgtggg gagcgaacag gattagatac cctggtagtc cacgccgtaa 780
acggtgggca ctaggtgtgg gcaacattcc acgttgtccg tgccgcagct aacgcattaa 840
gtgccccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctaaaactca aaggaattga cgggggcccg 900
cacaagcggc ggagcatgtg gcttaattcg acgcaacgcg aagaacctta ccaaggcttg 960
acatacaccg gaaagcatta gagatagtgc cccccttgtg gtcggtgtac aggtggtgca 1020
tggctgtcgt cagcccgtgt cgtgagatgt tgggttaagt cccgcaacga gcgcaaccct 1080
tgtcccgtgt tgccagcagg cccttgtggt gctggggact cacgggagac cgccggggtc 1140
aactcggagg aaggtgggga cgacgtcaag tcatcatgcc ccttatgtct tgggctgcac 1200
acgtgctaca atggccggta caatgagctg cgataccgtg aggtggagcg aatctcaaaa 1260
agccggtctc agttcggatt ggggtctgca actcgacccc atgaagtcgg agtcgctagt 1320
aatcgcagat cagcattgct gcggtgaata cgttcccggg ccttgtacac accgcccgtc 1380
acgtcacgaa agtcggtaac acccgaagcc ggtggcccaa ccccttgtgg gagggagctg 1440
tcgaaggtgg gactggcgat tgggacgaag tcgtaacaag gtagccgtac cggaaggtgc 1500
ggctggatca cctcctt 1517

Claims (10)

1.一株分离自玉米根际土壤的链霉菌(Streptomyces zeae)NEAU-sy36，菌种保藏编号为CCTCC M2019970。
2.权利要求1所述的链霉菌在促进植物生长中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述植物包括生菜、玉米和小麦。
4.一种微生物菌肥，其特征在于，所述微生物菌肥含有权利要求1所述的链霉菌。
5.根据权利要求4所述的微生物菌肥，其特征在于，所述微生物菌肥由权利要求1所述的链霉菌与动物粪便和粕类混合后发酵制备制成。
6.根据权利要求5所述的微生物菌肥，其特征在于，所述动物粪便为蚯蚓粪；所述粕类为麦麸。
7.权利要求4-6任意一项所述的微生物菌肥的制备方法，其特征在于，步骤如下：
(1)将权利要求1所述的链霉菌接种在ISP3培养基，28℃培养5-7天；
(2)将上述步骤(1)得到的菌种，接种在胰蛋白胨大豆肉汤培养基中，在28℃，250rpm下震荡培养24-48小时使微生物处于指数生长期，以指数期生长的微生物作为种子菌液；
(3)将步骤(2)得到的种子菌液接种到固体培养基上，所述固体培养基由动物粪便和粕类组成，25℃培养6-10天，制得微生物菌肥。
8.根据权利要求7所述的微生物菌肥的制备方法，其特征在于，所述固体培养基由蚯蚓粪和麦麸按照蚯蚓粪：麦麸＝10:10(w:w)的比例组成，含水率为50％。
9.权利要求4-6任意一项所述的微生物菌肥在促进植物生长中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述植物包括生菜、玉米和小麦。
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