CN111132701A - 基于抗-cd45的调理方法及其与基于基因编辑细胞的疗法的联合应用 - Google Patents

基于抗-cd45的调理方法及其与基于基因编辑细胞的疗法的联合应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种用于消减受试者的造血干细胞的方法，所述方法包括给所述受试者施用有效量的放射性地标记的抗‑CD45抗体，诸如131I‑BC8或225Ac‑BC8。本发明也提供了一种用于治疗罹患非癌性障碍的受试者的方法，所述非癌性障碍可经由遗传编辑的细胞疗法治疗，所述方法包括(i)给所述受试者施用有效地消减受试者的造血干细胞的量的放射性地标记的抗‑CD45抗体，和(ii)在合适的时间段以后，在所述受试者上执行所述疗法以治疗所述受试者的障碍。最后，本发明提供了用于执行主题方法的制成品。

Description

基于抗-CD45的调理方法及其与基于基因编辑细胞的疗法的 联合应用
对相关申请的交叉引用
本申请要求以下申请在美国法典第35篇第119(e)条下的权益：2017年10月25日提交的标题为“Methods for Cancer Treatment Using Anti-CD45 Immunoglobin andAdoptive Cell Therapies”的在先美国临时申请系列号62/576,879；2018年5月23日提交的标题为“Anti-CD45-Based Lymphodepletion Methods and Uses Thereof inConjunction with Act-Based Cancer Therapies”的美国临时申请系列号62/675,417；2018年7月3日提交的标题为“Anti-CD45-Based Conditioning Methods and UsesThereof in Conjunction with Gene-Edited Cell-Based Therapies”的美国临时申请系列号62/693,517；和2018年7月20日提交的标题为“Anti-CD45-Based LymphodepletionMethods and Uses Thereof in Conjunction with Act-Based Cancer Therapies”的美国临时申请系列号62/700,978，它们的内容各自通过引用在此并入本申请中。
技术领域
本发明涉及用于消减受试者的造血干细胞的、基于放射性地标记的抗-CD45抗体的方法。当这些方法先于某些基于基因编辑细胞的疗法时，它们可以安全地和有效地增强这样的疗法的性能。
背景技术
基因编辑技术随着位点特异性的编辑方法(诸如TALEN、CRISPR/cas9和锌指核酸酶(ZFN)方法)的出现已经取得实质进步。对于罹患非恶性遗传性疾病诸如血红蛋白病、先天性免疫缺陷和基于病毒的障碍如AIDS的患者，这些方法具有治疗潜力。基因编辑技术使得治疗和甚至治愈例如种系血液障碍诸如重症联合免疫缺陷疾病(SCID)、镰刀形细胞病(SCD)、β-地中海贫血和Fanconi氏贫血成为可行。
基因编辑精确地和永久地改变基因组DNA的序列，所述序列保持在内源基因调节下并控制经修饰的基因元件的适当和合适表达。目前存在四大类用于人基因组基因编辑的核酸酶：锌指核酸酶(ZFN)、转录活化剂-样效应物核酸酶(TALEN)、大范围核酸酶(MN)和簇集的规则地间隔的短回文重复(CRISPR/Cas9)。这些中的每一种可以识别和结合DNA的特定靶序列。取决于方案的性能，可以在一条或两条链上切割靶DNA。为了校正突变，将校正模板用于在靶损害位点处引入的断裂的同源性指导的修复。
通常在基因编辑的干细胞疗法之前使用高细胞毒性的化疗剂(诸如白消安、环磷酰胺、美法仑、氟达拉滨、塞替派和/或曲奥舒凡)的组合来消减患者的造血干细胞。另外，可以使用全淋巴样辐射。尽管这些试剂会降低干细胞水平，它们是高毒性的并导致免疫系统和可能其它正常组织的非特异性破坏。并非所有患者可以耐受它们。
关于在基于基因编辑细胞的疗法之前消减受试者的造血干细胞的更好方式存在未得到满足的需要。
发明内容
本发明提供了一种用于消减受试者的造血干细胞的方法，所述方法包括给所述受试者施用有效量的放射性地标记的抗-CD45抗体。
本发明也提供了一种用于治疗罹患非癌性障碍的受试者的方法，所述非癌性障碍可经由遗传编辑的细胞疗法治疗，所述方法包括(i)给所述受试者施用有效地消减受试者的造血干细胞的量的放射性地标记的抗-CD45抗体，和(ii)在合适的时间段以后，在所述受试者上执行所述疗法以治疗所述受试者的障碍。
最后，本发明提供了一种制成品，其包含(a)放射性地标记的抗-CD45抗体，和(b)标签，其指示用户给受试者施用有效地消减受试者的造血干细胞的量的抗体。
具体实施方式
本发明提供了用于消减受试者的造血干细胞的基于放射性地标记的抗-CD45抗体的方法以及有关的方法和制成品。当这些方法先于某些基于基因编辑细胞的疗法时，所述方法能够增强那些疗法的结果，同时使不良作用最小化。
贯穿本申请，引用了多篇出版物。这些出版物的公开内容特此通过引用并入本申请以更充分地描述本发明所涉及的现有技术。
定义
在本申请中，使用的某些术语将具有如下所述的含义。
单数形式“一个”、“一种”、“所述”等包括复数指示物，除非上下文另外清楚地指明。因而，例如，对“一种”抗体的提及包括单个抗体和多个不同的抗体。
当用在数字指示(例如，温度、时间、量和浓度，包括范围)前面时，术语“约”指示可以变化±10％、±5％或±1％的近似值。
关于抗体，本文中使用的“施用”意指经由适合抗体递送的任何已知方法将所述抗体递送至受试者的身体。具体施用模式包括、但不限于，静脉内、透皮、皮下、腹膜内和鞘内施用。示例性的抗体施用方法可以基本上如在国际公开号WO 2016/187514(通过引用并入本文)中所述。
另外，在本发明中，使用一种或多种常用的药学上可接受的载体可以配制抗体。这样的载体是本领域技术人员众所周知的。例如，可注射的药物递送系统包括溶液、混悬液、凝胶、微球和聚合物注射物，且可以包含赋形剂诸如溶解度改变剂(例如，乙醇、丙二醇和蔗糖)和聚合物(例如，聚己内酯和PLGA)。
本文中使用的术语“抗体”包括，但不限于，(a)包含二个重链和二个轻链且识别抗原的免疫球蛋白分子；(b)多克隆和单克隆免疫球蛋白分子；(c)其单价和二价片段(例如，二-Fab)；和(d)其双特异性形式。免疫球蛋白分子可以衍生自通常已知的类别中的任一种，包括、但不限于IgA、分泌型IgA、IgG和IgM。IgG亚类也是本领域技术人员众所周知的，且包括、但不限于人IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。抗体可以是天然存在的和非天然存在的(例如，IgG-Fc-沉默的)。此外，抗体包括嵌合抗体、完全合成抗体、单链抗体、及其片段。抗体可以是人的、人源化的或非人的。
本文中使用的“抗-CD45抗体”是结合CD45的任何可利用的表位的抗体。根据某些方面，抗-CD45抗体结合被单克隆抗体“BC8”识别的表位。BC8是已知的，制备它的方法也是已知的。同样地，用131I标记BC8的方法是已知的。这些方法描述在，例如，国际公开号WO2017/155937中。
关于受试者的造血干细胞(“HSC”，即，多潜能造血干细胞(也被称作成血细胞))，本文中使用的“消减”意指降低受试者的HSC的总数。根据某些方面，消减受试者的HSC意指使受试者的HSC总数减少至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或99％。根据某些方面，消减受试者的HSC意指使受试者的HSC总数减少100％。用于测量HSC总数的方法是常规的。它们包括，例如，应用流式细胞计量术来检测骨髓样品中的人HSC，和针对各种细胞表面标志物(诸如Lin、CD34、CD38、CD43、CD45RO、CD45RA、CD59、CD90、CD109、CD117、CD133、CD166和HLA DR)染色。也可以在外周血中检测患者的免疫细胞的减少。这可以实现，例如，通过检测CD3-、CD4-和CD8-阳性的细胞(作为免疫抑制的指示)来确定绝对淋巴细胞计数(ALC)。
如本文中使用的，当施用时，如果它降低受试者的HSC水平，放射性地标记的抗-CD45抗体的量是“有效的”。
根据其中放射性地标记的抗-CD45抗体是131I-BC8的方面，有效量是低于，例如，1,200mCi(即，当施用给受试者的131I-BC8的量递送低于1,200mCi的总体辐射剂量时)。
根据其中所述抗体是131I-BC8的方面，有效量是低于1,100mCi，低于1,000mCi，低于900mCi，低于800mCi，低于700mCi，低于600mCi，低于500mCi，低于400mCi，低于350mCi，低于300mCi，低于250mCi，低于200mCi，低于150mCi，低于100mCi，低于50mCi，低于40mCi，低于30mCi，低于20mCi或低于10mCi。
根据其中所述抗体是131I-BC8的方面，所述有效量是从1mCi至10mCi，从1mCi至200mCi，从10mCi至20mCi，从10mCi至30mCi，从10mCi至40mCi，从10mCi至50mCi，从10mCi至100mCi，从10mCi至150mCi，从10mCi至200mCi，从20mCi至30mCi，从30mCi至40mCi，从40mCi至50mCi，从50mCi至100mCi，从50mCi至150mCi，从50mCi至200mCi，从60mCi至140mCi，从70mCi至130mCi，从80mCi至120mCi，从90mCi至110mCi，从100mCi至150mCi，从150mCi至200mCi，从200mCi至250mCi，从200mCi至300mCi，从200mCi至350mCi，从200mCi至400mCi，从200mCi至500mCi，从200mCi至600mCi，从200mCi至700mCi，从200mCi至800mCi，从200mCi至900mCi，从200mCi至1,000mCi，从200mCi至1,100mCi，从200mCi至1,200mCi，从400mCi至500mCi，从400mCi至600mCi，从400mCi至700mCi，从400mCi至800mCi，从400mCi至900mCi，从400mCi至1,000mCi，从400mCi至1,100mCi，或从400mCi至1,200mCi。
根据其中所述抗体是131I-BC8的方面，所述有效量是1mCi，10mCi，20mCi，30mCi，40mCi，50mCi，60mCi，70mCi，80mCi，90mCi，100mCi，110mCi，120mCi，130mCi，140mCi，150mCi，200mCi，250mCi，300mCi，350mCi，400mCi，450mCi，500mCi，550mCi，600mCi，650mCi，700mCi，750mCi，800mCi，850mCi，900mCi，950mCi，1，000mCi，1，050mCi，1，100mCi，1，150mCi，或1，200mCi。
对于用放射性同位素标记的抗体，施用给受试者的大多数药物典型地由未标记抗体组成，少数为经标记的抗体。使用已知方法可以调节经标记的抗体与未标记的抗体之比。因而，根据本发明的某些方面，可以以多达60mg的总蛋白量，诸如5mg至45mg，或在0.1mg/kg患者重量至1.0mg/kg患者重量之间的总蛋白量，诸如0.2mg/kg患者重量至0.6mg/kg患者重量，提供抗-CD45抗体。
根据本发明的某些方面，放射性地标记的抗-CD45抗体可以包含经标记的级分和未标记的级分，其中经标记的级分与未标记的级分之比可以是约0.01∶10至1∶1，诸如0.1∶10至1∶1经标记的级分：未标记的级分。此外，可以将放射性地标记的抗-CD45抗体提供为给特定患者定制的单剂量组合物，其中组合物中经标记的和未标记的抗-CD45抗体的量可以至少取决于患者重量、年龄和/或疾病状态或健康状况。
根据其中放射性地标记的抗-CD45抗体是225Ac-BC8的方面，所述有效量是低于，例如，5.0μCi/kg(即，当施用给受试者的225Ac-BC8的量递送低于5.0μCi/千克受试者体重的辐射剂量时)。
根据其中所述抗体是225Ac-BC8的方面，所述有效量是低于4.5μCi/kg，4.0μCi/kg，3.5μCi/kg，3.0μCi/kg，2.5μCi/kg，2.0μCi/kg，1.5μCi/kg，1.0μCi/kg，0.9μCi/kg，0.8μCi/kg，0.7μCi/kg，0.6μCi/kg，0.5μCi/kg，0.4μCi/kg，0.3μCi/kg，0.2μCi/kg，0.1μCi/kg或0.05μCi/kg。
根据其中所述抗体是225Ac-BC8的方面，所述有效量是从0.05μCi/kg至0.1μCi/kg，从0.1μCi/kg至0.2μCi/kg，从0.2μCi/kg至0.3μCi/kg，从0.3μCi/kg至0.4μCi/kg，从0.4μCi/kg至0.5μCi/kg，从0.5μCi/kg至0.6μCi/kg，从0.6μCi/kg至0.7μCi/kg，从0.7μCi/kg至0.8μCi/kg，从0.8μCi/kg至0.9μCi/kg，从0.9μCi/kg至1.0μCi/kg，从1.0μCi/kg至1.5μCi/kg，从1.5μCi/kg至2.0μCi/kg，从2.0μCi/kg至2.5μCi/kg，从2.5μCi/kg至3.0μCi/kg，从3.0μCi/kg至3.5μCi/kg，从3.5μCi/kg至4.0μCi/kg，从4.0μCi/kg至4.5μCi/kg，或从4.5μCi/kg至5.0μCi/kg。
根据其中所述抗体是225Ac-BC8的方面，所述有效量是0.05μCi/kg，0.1μCi/kg，0.2μCi/kg，0.3μCi/kg，0.4μCi/kg，0.5μCi/kg，0.6μCi/kg，0.7μCi/kg，0.8μCi/kg，0.9μCi/kg，1.0μCi/kg，1.5μCi/kg，2.0μCi/kg，2.5μCi/kg，3.0μCi/kg，3.5μCi/kg，4.0μCi/kg或4.5μCi/kg。
本文中使用的“非癌性障碍”包括、但不限于，血红蛋白病(例如，SCD和β-地中海贫血)、先天性免疫缺陷(例如，SCID和Fanconi氏贫血)和病毒感染(例如，HIV感染)。非癌性障碍不包括，例如，实体癌症(例如，肿瘤)和血液学恶性肿瘤。
本文中使用的术语“受试者”包括、但不限于，哺乳动物诸如人、非人灵长类动物、狗、猫、马、绵羊、山羊、牛、兔、猪、大鼠和小鼠。在受试者是人的情况下，所述受试者可以是任何年龄。根据某些方面，所述受试者是婴儿。根据其它方面，所述受试者是一、二、三、四、五、六、七、八、九或10岁。根据再其它方面，所述受试者是10至15岁，或15至20岁。根据再其它方面，所述受试者是20岁或更大、25岁或更大、30岁或更大、35岁或更大、40岁或更大、45岁或更大、50岁或更大、55岁或更大、60岁或更大、65岁或更大、70岁或更大、75岁或更大、80岁或更大、85岁或更大、或90岁或更大。
本文中使用的给受试者施用放射性地标记的抗-CD45抗体之后和在所述受试者上执行疗法之前的“合适时间段”是足以允许施用的抗体消减受试者的HSC和/或受试者的HSC保持消减的时间段。根据某些方面，合适时间段是少于15天、少于14天、少于13天、少于12天、少于11天、少于10天、少于9天、少于8天、少于7天、少于6天、少于5天、少于4天或少于3天。根据某些方面，合适时间段是1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天或超过15天。
本文中使用的“放射性同位素”可以是发射α的同位素、发射β的同位素和/或发射γ的同位素。放射性同位素的例子包括以下的：131I、125I、123I、90Y、177Lu、186Re、188Re、89Sr、153Sm、32P、225Ac、213Bi、213Po、211At、212Bi、213Bi、223Ra、227Th、149Tb、137Cs、212Pb和103Pd。因而，在本发明中预见到的放射性地标记的抗体包括、但不限于，131I-BC8、125I-BC8、123I-BC8、90Y-BC8、177Lu-BC8、186Re-BC8、188Re-BC8、89Sr-BC8、153Sm-BC8、32P-BC8、225Ac-BC8、213Bi-BC8、213Po-BC8、211At-BC8、212Bi-BC8、213Bi-BC8、223Ra-BC8、227Th-BC8、149Tb-BC8、137Cs-BC8、212Pb-BC8和103Pd-BC8。将放射性同位素附着于抗体(即，用放射性同位素“标记”抗体)的方法是众所周知的。
本文中使用的“治疗”罹患障碍的受试者应当包括、但不限于，(i)减慢、停止或逆转障碍的进展，(ii)减慢、停止或逆转障碍的症状的进展，(iii)减小和理想地消除障碍的复发的可能性，和/或(iv)减小和理想地消除障碍的症状重现的可能性。根据某些优选的方面，治疗罹患障碍的受试者是指(i)逆转障碍的进展，理想地达到消除障碍的点，和/或(ii)逆转障碍的症状的进展，理想地达到消除症状的点，和/或(iii)减小或消除复发的可能性。理想地，治疗罹患障碍的受试者是指通过除去或以其它方式使它的遗传原因失能而治愈所述障碍。
贯穿本申请，引用了多篇出版物。这些出版物的公开内容特此通过引用并入本申请以更充分地描述本发明所涉及的现有技术。除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所属领域的普通技术人员所通常理解的相同含义。尽管与本文描述的那些类似或等同的方法和材料可以用在本文描述的实践或试验中，但是下面描述了合适的方法和材料。
本发明的方面
本发明如下解决了本领域中未得到满足的需要：提供意外优良的消减受试者的造血干细胞的方式，理想地在基于基因编辑细胞的疗法如关于SCD的遗传编辑的β-珠蛋白造血干细胞疗法之前。为此目的，本发明采用放射性地标记的抗-CD45抗体诸如131I-BC8。所述抗体可以经由靶向调理安全地和有效地消减受试者的造血干细胞。该方案避免了由低特异性试剂如化疗剂或外线束辐射造成的某些不良作用。
具体地，本发明提供了一种用于消减受试者的造血干细胞的方法，所述方法包括给所述受试者施用有效量的放射性地标记的抗-CD45抗体。优选地，所述受试者是人。
该消减方法(在本文中也被称作调理方法)可用于，例如，改善随后基于基因编辑细胞的疗法的结果，其中造血干细胞的消减是合乎需要的。根据该方法的某些优选方面，所述受试者罹患可经由遗传编辑的细胞疗法治疗的非癌性障碍并且将要接受这样的疗法以治疗所述障碍。
非癌性障碍的例子包括、但不限于，血红蛋白病(例如，SCD和β-地中海贫血)、先天性免疫缺陷(例如，SCID和Fanconi氏贫血)和病毒感染(例如，HIV感染)。根据某些方面，所述障碍是SCD且所述疗法是遗传编辑的β-珠蛋白造血干细胞疗法。所述干细胞疗法可以是例如同种异体的或自体的。根据某些方面，所述障碍是SCID且所述疗法是遗传编辑的造血干细胞疗法，其中所述编辑的基因是共有γ链(γc)基因、腺苷脱氨酶(ADA)基因和/或Janus激酶3(JAK3)基因。所述干细胞疗法可以是例如同种异体的或自体的。
根据主题方法的某些优选方面，放射性地标记的抗-CD45抗体是放射性地标记的BC8，诸如131I-BC8或225Ac-BC8。当放射性地标记的BC8是131I-BC8时，所述有效量可以是，例如，从10mCi至200mCi，从200mCi至400mCi，或从400mCi至1,200mCi。当放射性地标记的BC8是225Ac-BC8时，所述有效量可以是，例如，从0.1μCi/kg至1.0μCi/kg，从1.0μCi/kg至3.0μCi/kg，从3.0μCi/kg至5.0μCi/kg，或从0.1μCi/kg至5.0μCi/kg。
本发明也提供了一种用于治疗罹患非癌性障碍的受试者的方法，所述非癌性障碍可经由遗传编辑的细胞疗法治疗，所述方法包括(i)给所述受试者施用有效地消减受试者的造血干细胞的量的放射性地标记的抗-CD45抗体，和(ii)在合适的时间段以后，在所述受试者上执行所述疗法以治疗所述受试者的障碍。优选地，所述受试者是人。
非癌性障碍的例子包括、但不限于，血红蛋白病(例如，SCD和β-地中海贫血)、先天性免疫缺陷(例如，SCID和Fanconi氏贫血)和病毒感染(例如，HIV感染)。根据某些方面，所述障碍是SCD且所述疗法是遗传编辑的β-珠蛋白造血干细胞疗法。所述干细胞疗法可以是例如同种异体的或自体的。根据某些方面，所述障碍是SCID且所述疗法是遗传编辑的造血干细胞疗法，其中所述编辑的基因是共有γ链(γc)基因、ADA基因和/或JAK3基因。所述干细胞疗法可以是例如同种异体的或自体的。
根据主题治疗方法的某些优选方面，放射性地标记的抗-CD45抗体是放射性地标记的BC8，诸如131I-BC8或225Ac-BC8。当放射性地标记的BC8是131I-BC8时，所述有效量可以是，例如，从10mCi至200mCi，从200mCi至400mCi，或从400mCi至1,200mCi。当放射性地标记的BC8是225Ac-BC8时，所述有效量可以是，例如，从0.1μCi/kg至1.0μCi/kg，从1.0μCi/kg至3.0μCi/kg，从3.0μCi/kg至5.0μCi/kg，或从0.1μCi/kg至5.0μCi/kg。此外，该方法的步骤(i)和(ii)之间的合适时间段优选地是从六(6)至14天。
本发明尤其提供了用于治疗人受试者的主题方法的七个具体方面，所述人受试者罹患可经由遗传编辑的同种异体的或自体的细胞疗法治疗的非癌性障碍。第一个具体方面包括(i)给所述受试者施用10mCi至200mCi的131I-BC8，和(ii)在6、7或8天以后，在所述受试者上执行所述疗法以治疗所述受试者的障碍。第二个具体方面包括(i)给所述受试者施用200mCi至400mCi的131I-BC8，和(ii)在8、9、10、11或12天以后，在所述受试者上执行所述疗法以治疗所述受试者的障碍。第三个具体方面包括(i)给所述受试者施用400mCi至1,200mCi的131I-BC8，和(ii)在10、11、12、13或14天以后，在所述受试者上执行所述疗法以治疗所述受试者的障碍。第四个具体方面包括(i)给所述受试者施用0.1μCi/kg至5.0μCi/kg的225Ac-BC8，和(ii)在6、7或8天以后，在所述受试者上执行所述疗法以治疗所述受试者的障碍。第五个具体方面包括(i)给所述受试者施用0.1μCi/kg至1.0μCi/kg的225Ac-BC8，和(ii)在6、7或8天以后，在所述受试者上执行所述疗法以治疗所述受试者的障碍。第六个具体方面包括(i)给所述受试者施用1.0μCi/kg至3.0μCi/kg的225Ac-BC8，和(ii)在6、7或8天以后，在所述受试者上执行所述疗法以治疗所述受试者的障碍。第七个具体方面包括(i)给所述受试者施用3.0μCi/kg至5.0μCi/kg的225Ac-BC8，和(ii)在6、7或8天以后，在所述受试者上执行所述疗法以治疗所述受试者的障碍。
本发明进一步提供了一种制成品，其包含(a)放射性地标记的抗-CD45抗体，和(b)标签，其指示用户给受试者施用有效地消减受试者的造血干细胞的量的抗体。优选地，所述受试者是人。
根据主题制成品的某些优选方面，放射性地标记的抗-CD45抗体是放射性地标记的BC8，诸如131I-BC8或225Ac-BC8。当放射性地标记的BC8是131I-BC8时，所述有效量可以是，例如，从10mCi至200mCi，从200mCi至400mCi，或从400mCi至1,200mCi。当放射性地标记的BC8是225Ac-BC8时，所述有效量可以是，例如，从0.1μCi/kg至5.0μCi/kg。
本发明尤其提供了主题制成品的七个具体方面。第一个具体方面包含(a)131I-BC8，和(b)标签，其指示用户给人受试者施用10mCi至200mCi的131I-BC8。第二个具体方面包含(a)131I-BC8，和(b)标签，其指示用户给人受试者施用200mCi至400mCi的131I-BC8。第三个具体方面包含(a)131I-BC8，和(b)标签，其指示用户给人受试者施用400mCi至1,200mCi的131I-BC8。第四个具体方面包含(a)225Ac-BC8，和(b)标签，其指示用户给人受试者施用0.1μCi/kg至5.0μCi/kg的225Ac-BC8。第五个具体方面包含(a)225Ac-BC8，和(b)标签，其指示用户给人受试者施用0.1μCi/kg至1.0μCi/kg的225Ac-BC8。第六个具体方面包含(a)225Ac-BC8，和(b)标签，其指示用户给人受试者施用1.0μCi/kg至3.0μCi/kg的225Ac-BC8。第七个具体方面包含(a)225Ac-BC8，和(b)标签，其指示用户给人受试者施用3.0μCi/kg至5.0μCi/kg的225Ac-BC8。
通过参考下面的实施例将更好地理解本发明，但是本领域技术人员将容易地认识到，详述的具体实施例仅仅是在此后跟随的权利要求中更充分地描述的发明的示例。
在本申请中公开了下述方面：
方面1.一种用于消减受试者的造血干细胞的方法，所述方法包括给所述受试者施用有效量的放射性地标记的抗-CD45抗体。
方面2.方面1的方法，其中所述受试者罹患可经由遗传编辑的细胞疗法治疗的非癌性障碍并且将要接受这样的疗法以治疗所述障碍，并且所述有效量的放射性地标记的抗-CD45抗体作为单剂量施用。
方面3.方面2的方法，其中所述障碍选自血红蛋白病、先天性免疫缺陷和病毒感染。
方面4.方面2的方法，其中所述障碍选自镰刀形细胞病(SCD)、重症联合免疫缺陷疾病(SCID)、β-地中海贫血和Fanconi氏贫血。
方面5.方面2的方法，其中所述障碍是SCD且所述疗法是遗传编辑的β-珠蛋白造血干细胞疗法。
方面6.方面2的方法，其中所述障碍是SCID且所述疗法是遗传编辑的造血干细胞疗法，其中所述编辑的基因选自共有γ链(γc)基因、腺苷脱氨酶(ADA)基因和Janus激酶3(JAK3)基因。
方面7.根据方面1至6中的任一项的方法，其中所述放射性地标记的抗-CD45抗体是放射性地标记的BC8。
方面8.根据方面1至7中的任一项的方法，其中所述放射性地标记的抗-CD45抗体包含131I、1251、123I、90Y、177Lu、186Re、188Re、89Sr、153Sm、32P、225Ac、213Bi、213Po、211At、212Bi、213Bi、223Ra、227Th、149Tb、137Cs、212Pb和103Pd。
方面9.根据方面7或8的方法，其中所述放射性地标记的BC8是131I-BC8，且131I-BC8的有效量是从10mCi至200mCi，或从200mCi至400mCi，或从400mCi至1,200mCi。
方面10.根据方面7或8的方法，其中所述放射性地标记的BC8是225Ac-BC8，且225Ac-BC8的有效量是从0.1μCi/kg至5.0μCi/kg受试者重量，或从0.1μCi/kg至1.0μCi/kg受试者重量，或从1.0μCi/kg至3.0μCi/kg受试者重量，或从3.0μCi/kg至5.0μCi/kg受试者重量。
方面11.一种用于治疗罹患非癌性障碍的受试者的方法，所述非癌性障碍可经由遗传编辑的细胞疗法治疗，所述方法包括(i)给所述受试者施用有效地消减所述受试者的造血干细胞的量的放射性地标记的抗-CD45抗体，和(ii)在合适的时间段以后，在所述受试者上执行所述疗法以治疗所述受试者的障碍。
方面12.方面11的方法，其中所述受试者罹患可经由遗传编辑的细胞疗法治疗的非癌性障碍并且将要接受这样的疗法以治疗所述障碍，并且所述有效量的放射性地标记的抗-CD45抗体作为单剂量施用。
方面13.方面12的方法，其中所述障碍选自血红蛋白病、先天性免疫缺陷和病毒感染。
方面14.方面12的方法，其中所述障碍选自镰刀形细胞病(SCD)、重症联合免疫缺陷疾病(SCID)、β-地中海贫血和Fanconi氏贫血。
方面15.方面12的方法，其中所述障碍是SCD且所述疗法是遗传编辑的β-珠蛋白造血干细胞疗法。
方面16.方面12的方法，其中所述障碍是SCID且所述疗法是遗传编辑的造血干细胞疗法，其中所述编辑的基因选自共有γ链(γc)基因、腺苷脱氨酶(ADA)基因和Janus激酶3(JAK3)基因。
方面17.方面15或16的方法，其中所述干细胞疗法是同种异体的干细胞疗法。
方面18.方面15或16的方法，其中所述干细胞疗法是自体干细胞疗法。
方面19.根据方面11至19中的任一项的方法，其中所述放射性地标记的抗-CD45抗体是放射性地标记的BC8，包含131I、1251、123I、90Y、177Lu、186Re、188Re、89Sr、153Sm、32P、225Ac、213Bi、213Po、211At、212Bi、213Bi、223Ra、227Th、149Tb、137Cs、212Pb和103Pd。
方面20.根据方面19的方法，其中所述放射性地标记的BC8是131I-BC8，且131I-BC8的有效量是在所述受试者上执行所述疗法以治疗所述受试者的障碍以后6、7或8天施用的从10mCi至200mCi。
方面21.根据方面19的方法，其中所述放射性地标记的BC8是131I-BC8，且131I-BC8的有效量是在所述受试者上执行所述疗法以治疗所述受试者的障碍以后8、9、10、11或12天施用的从200mCi至400mCi。
方面22.根据方面19的方法，其中所述放射性地标记的BC8是131I-BC8，且131I-BC8的有效量是在所述受试者上执行所述疗法以治疗所述受试者的障碍以后10、11、12、13或14天施用的从400mCi至1,200mCi的131I-BC8。
方面23.根据方面19的方法，其中所述放射性地标记的BC8是225Ac-BC8，且225Ac-BC8的有效量是在所述受试者上执行所述疗法以治疗所述受试者的障碍以后6、7、8、9、10、11或12天施用的从0.1μCi/kg至5.0μCi/kg受试者重量。
方面24.一种制成品，其包含(a)放射性地标记的抗-CD45抗体，和(b)标签，所述标签指示用户给受试者施用有效地消减所述受试者的造血干细胞的量的抗体。
方面25.方面24的制成品，其中所述放射性地标记的BC8是131I-BC8，且131I-BC8的有效量是从10mCi至200mCi，或从200mCi至400mCi，或从400mCi至1,200mCi。
方面26.方面24的制成品，其中所述放射性地标记的BC8是225Ac-BC8，且225Ac-BC8的有效量是从0.1μCi/kg至5.0μCi/kg，或从0.1μCi/kg至1.0μCi/kg受试者重量，或从1.0μCi/kg至3.0μCi/kg受试者重量，或从3.0μCi/kg至5.0μCi/kg受试者重量。
实施例
实施例1-131I-BC8(Iomab-B)
Iomab-B药物产品是放射性碘化的抗-CD45鼠单克隆抗体(mAb)(131I-BC8)。它对造血CD45抗原是特异性的。Iomab-B药物产品作为被包含在容器闭合系统中的无菌制剂供给，所述容器闭合系统由去热原的1型50mL玻璃瓶、灭菌的灰色氯丁橡胶塞和顶开型铝封条组成。每个剂量瓶也含有在50mL瓶中的45mL药物产品填充体积。类似地，它提供为在静脉内施用过程中完成输注的单次使用剂量，且含有从1mCi至200mCi(例如，100mCi或150mCi)的131I和6.66-45mg的BC8的患者特异性放射性。根据理想体重在0.5mg/kg的水平确定BC8抗体剂量。以1∶9的药物产品与盐水溶液的比例，将药物产品与0.9％氯化钠注射USP(生理盐水溶液)一起共同施用给患者。在不同的期间施用大约430-450mL的总药物产品和盐水输注体积，因为输注速率取决于在45mL药物产品填充体积中的BC8抗体的量。
国际公开号WO 2017/155937教导了BC8的完整结构和制备131I-BC8的方法。
实施例2-225Ac-BC8
BC8与DOTA的缀合和随后用225Ac标记
使用具有50,000的分子量截止值的Centricon过滤器或具有50,000的分子量截止值的Vivaspin超滤管，通过四次超滤旋转，将抗体BC8(2mg)用缀合缓冲液(含有1mM EDTA的碳酸钠缓冲液，pH＝8.5-9.0)平衡。使用1.5ml缀合缓冲液/旋转。对于每次旋转，将抗体在53，000RPM和在4℃旋转5-20分钟至100-200μl的残余渗余物体积。在第2次和第3次旋转以后将抗体在4℃温育30分钟以允许平衡。对于DOTA缀合，通过溶解和涡旋来制备在0.15MNH4OAc中的3mg/ml的DOTA-pSCN(MW＝678)溶液。将DOTA-pSCN和BC8抗体(在＞5mg/ml)在Eppendorf试管中以7.5摩尔比(DOTA∶抗体)混合在一起并在室温温育15小时。为了纯化DOTA-抗体缀合物，通过用1.5ml 0.15M NH4OAc缓冲液(pH＝6.5)超滤七轮至大约100μl的体积，除去未反应的DOTA-pSCN。最终的洗涤以后，加入0.15M NH4OAc缓冲液以使物质达到大约1mg/ml的终浓度。测量DOTA-BC8缀合物的终浓度，并确定与抗体缀合的DOTA分子的数目为每个抗体1.2-1.5个DOTA。
用225Ac对DOTA-抗体缀合物的放射性标记
为了用225Ac标记DOTA-BC8缀合物，在Eppendorf反应试管中将15μL 0.15M NH4OAc缓冲液(pH＝6.5)与2μL(10μg)DOTA-BC8(5mg/ml)混合。随后加入在0.05M HCl中的四μL225Ac(10μCi)，将试管的内容物用移液器尖头混合，并将反应混合物在100rpm摇动下在37℃温育90分钟。在温育时段结束时，将3μL 1mM DTPA溶液加入反应混合物并在室温温育20分钟以结合未络合的225Ac。用10cm硅胶条带和10mM EDTA/生理盐水流动相执行快速薄层色谱法(ITLC)以确定225Ac-BC8的放射化学纯度，将225Ac-标记的BC8与225Ac-DTPA分离，并在配备多通道分析仪的γ计数器中计数切片。确定在几批中的放射性标记效率大于80％。
实施例3-SCD
本实施例描述了在具有SCD的患者中移植基因编辑的HSC之前的HSC消融(即，100％消减)。
SCD是世界上最常见的血红蛋白病。SCD在非洲裔美国人中的发病率是大约1/500。据估计在美国有100,000人罹患。
SCD由产生镰状血红蛋白的β-珠蛋白基因中的单核苷酸突变造成。SCD患者可能表现出贫血、脉管阻塞性危象(VOC)、溶血、慢性器官功能障碍和过早死亡。在具有SCD的儿童中的死亡率是0.5/100,000。但是，在成年人中的死亡率是超过2.5/100,000，且对于具有SCD的男性和女性而言，中位预期寿命小于50岁。
目前，SCD的唯一治愈性治疗是造血干细胞移植(HSCT)。不幸的是，针对SCD的HSCT并非没有问题。根据国际血液和骨髓移植研究中心(Center for International Bloodand Marrow Transplant Research)，仅1,089位具有SCD的患者在1991年至2017年4月接受了HSCT。与HSCT有关的风险包括由同种异体供体干细胞的应用引起的并发症(诸如移植物抗宿主病)。
随着基因编辑技术的出现，现在存在使用自体干细胞(其中造成SCD的β-珠蛋白基因中的突变已经被纠正)治愈SCD患者的机会。ZFN、TALEN、CRISPR/cas9和其它核酸酶介导的编辑方案可以用于修复或除去和替换来自SCD患者的干细胞。例如，Sun和Zhao(Biotech.and Bioeng.，2014，111(5))证实了使用TALEN对患者多能HSC中的人β-珠蛋白基因突变的成功修复。另外，Dever，等人，(Nature，2016，539：384-389)证实了使用CRISPR/cas9对患者HSC中造成SCD的Glu6Val突变的有效修复。使用针对SCD的该方案的临床试验现在正在开始。
不幸的是，使用高剂量化学疗法或全身辐照的标准的骨髓根除的调理方案(即，100％HSC-消减方案)目前被用于移植物，包括用于自体的基因编辑细胞移植物。这些患者需要更安全的且更有效的调理方法。放射性地标记的BC8(例如，131I-BC8、125I-BC8、123I-BC8、90Y-BC8、177Lu-BC8、186Re-BC8、188Re-BC8、89Sr-BC8、153Sm-BC8、32P-BC8、225Ac-BC8、213Bi-BC8、213Po-BC8、211At-BC8、212Bi-BC8、213Bi-BC8、223Ra-BC8、227Th-BC8、149Tb-BC8、137Cs-BC8、212Pb-BC8和103Pd-BC8)更能豁免患者的正常组织。值得注意的是，具有SCD的老年患者可能已经具有器官损伤作为他们的疾病的结果，并且作为骨髓根除的调理方案向非特异性辐射或化学疗法的暴露可以使得执行干细胞移植甚至更危险。放射性地标记的BC8方案为这些患者呈现了更好的选项。
此外，由于该疾病的遗传性质，在生命中尽可能早地通过移植基因编辑的HSC来纠正该疾病是优选的，因为该疾病的并发症可能是不可逆的且对患者的长期存活具有负面影响。这样，考虑使用基因编辑的HSC治疗罹患SCD的婴儿或幼儿。为此目的，放射性地标记的BC8，特别是用发射α的放射性核素诸如225Ac标记的BC8，将是理想的。由于它的非常短的高能量辐射路径长度，发射α的放射性核素诸如225Ac的应用将辐射集中于CD45-阳性的细胞并允许有效的骨髓消融，不需要分离治疗的患者(用骨髓根除的131I-BC8剂量调理所需要的)。
实施例4-SCID
本实施例描述了在具有SCID的患者中在移植基因编辑的HSC之前的HSC消融。
SCID是一种种系遗传性障碍，其中罹患的患者呈现严重的T细胞缺陷，具有或没有伴随的B细胞缺陷。SCID涉及有缺陷的适应性免疫应答，其阻止患者产生对病原体的有效抗体应答。SCID是原发性免疫缺陷的最严重形式，且存在至少九种不同的已知基因，其中突变导致SCID。因为SCID患者不能产生适应性免疫应答，他们易于感染，且过早死亡是高的。SCID也被称作“泡沫男孩”疾病，因为患者必须保持在无菌环境中以避免危及生命的感染。
在SCID中的最常见基因缺陷是在共有γ链(γc)中，这是被白介素IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21的受体共享的蛋白。可以导致SCID的其它突变基因是ADA和JAK3。与SCD一样，使用干细胞移植的唯一治疗对于SCID而言是可能治愈的。但是，延迟的免疫恢复和GVHD是这些患者的重大风险。并且，与SCD患者一样，SCID患者是年轻的且因此需要有效的且安全的治疗方法，包括在移植之前更好的调理方案。
基因编辑技术可以精确地修复在SCID患者自身的HSC中的缺陷。一旦返回至体内，这些经工程改造的HSC可以产生正常的淋巴细胞并建立工作适应性免疫应答以保护免于感染。近年来，Chang等人(Cell Reports，2015，12：1668-1677)报道了通过小鼠JAK3基因中的突变的CRISPR/cas9介导的修复来有效地恢复正常淋巴细胞发育。此外，Alzubi，等人(Nature，Scientific Reports，2017，7：12475)最近证实了使用TALEN技术来精确地修复小鼠中的IL2RG(共有γ链)的基因缺陷(造成X-SCID的基因)。
重要的是，开发了更安全的且更有效的调理人SCID患者的方法。需要α发射体CD45放射免疫疗法(诸如使用225Ac-BC8)来安全地调理这些主要年轻的患者。
实施例5-治疗概要
表I总结了使用基因编辑的干细胞施用的选定治疗方案，这之前是通过施用放射性地标记的BC8抗体(即，调理剂)进行的HSC消减。
表1
Figure BDA0002419053940000151
Figure BDA0002419053940000161

Claims (26)

1.一种用于消减受试者的造血干细胞的方法，所述方法包括给所述受试者施用有效量的放射性地标记的抗-CD45抗体。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述受试者罹患可经由遗传编辑的细胞疗法治疗的非癌性障碍并且将要接受这样的疗法以治疗所述障碍，并且所述有效量的放射性地标记的抗-CD45抗体作为单剂量施用。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述障碍选自血红蛋白病、先天性免疫缺陷和病毒感染。
4.根据权利要求2所述的方法，其中所述障碍选自镰刀形细胞病(SCD)、重症联合免疫缺陷疾病(SCID)、β-地中海贫血和Fanconi氏贫血。
5.根据权利要求4所述的方法，其中所述障碍是SCD并且所述疗法是遗传编辑的β-珠蛋白造血干细胞疗法。
6.根据权利要求4所述的方法，其中所述障碍是SCID并且所述疗法是遗传编辑的造血干细胞疗法，其中编辑的基因选自共有γ链(γc)基因、腺苷脱氨酶(ADA)基因和Janus激酶3(JAK3)基因。
7.根据权利要求1所述的方法，其中所述放射性地标记的抗-CD45抗体是放射性地标记的BC8。
8.根据权利要求1所述的方法，其中所述放射性地标记的抗-CD45抗体包含131I、125I、123I、90Y、177Lu、186Re、188Re、89Sr、153Sm、32P、225Ac、213Bi、213Po、211At、212Bi、213Bi、223Ra、227Th、149Tb、137Cs、212Pb和103Pd。
9.根据权利要求7所述的方法，其中所述放射性地标记的BC8是131I-BC8，并且131I-BC8的有效量是从10mCi至200mCi，或从200mCi至400mCi，或从400mCi至1,200mCi。
10.根据权利要求7所述的方法，其中所述放射性地标记的BC8是225Ac-BC8，并且225Ac-BC8的有效量是从0.1μCi/kg至5.0μCi/kg受试者重量，或从0.1μCi/kg至1.0μCi/kg受试者重量，或从1.0μCi/kg至3.0μCi/kg受试者重量，或从3.0μCi/kg至5.0μCi/kg受试者重量。
11.一种用于治疗罹患非癌性障碍的受试者的方法，所述非癌性障碍可经由遗传编辑的细胞疗法治疗，所述方法包括(i)给所述受试者施用有效地消减所述受试者的造血干细胞的量的放射性地标记的抗-CD45抗体，和(ii)在合适的时间段以后，在所述受试者上执行所述疗法以治疗所述受试者的障碍。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述受试者罹患可经由遗传编辑的细胞疗法治疗的非癌性障碍并且将要接受这样的疗法以治疗所述障碍，并且所述有效量的放射性地标记的抗-CD45抗体作为单剂量施用。
13.根据权利要求12所述的方法，其中所述障碍选自血红蛋白病、先天性免疫缺陷和病毒感染。
14.根据权利要求12所述的方法，其中所述障碍选自镰刀形细胞病(SCD)、重症联合免疫缺陷疾病(SCID)、β-地中海贫血和Fanconi氏贫血。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述障碍是SCD并且所述疗法是遗传编辑的β-珠蛋白造血干细胞疗法。
16.根据权利要求14所述的方法，其中所述障碍是SCID并且所述疗法是遗传编辑的造血干细胞疗法，其中编辑的基因选自共有γ链(γc)基因、腺苷脱氨酶(ADA)基因和Janus激酶3(JAK3)基因。
17.根据权利要求15或16所述的方法，其中所述干细胞疗法是同种异体干细胞疗法。
18.根据权利要求15或16所述的方法，其中所述干细胞疗法是自体干细胞疗法。
19.根据权利要求11所述的方法，其中所述放射性地标记的抗-CD45抗体是放射性地标记的BC8，包含131I、125I、123I、90Y、177Lu、186Re、188Re、89Sr、153Sm、32P、225Ac、213Bi、213Po、211At、212Bi、213Bi、223Ra、227Th、149Tb、137Cs、212Pb和103Pd。
20.根据权利要求11所述的方法，其中所述放射性地标记的BC8是131I-BC8，并且131I-BC8的有效量是在所述受试者上执行所述疗法以治疗所述受试者的障碍以后6、7或8天施用的从10mCi至200mCi。
21.根据权利要求11所述的方法，其中所述放射性地标记的BC8是131I-BC8，并且131I-BC8的有效量是在所述受试者上执行所述疗法以治疗所述受试者的障碍以后8、9、10、11或12天施用的从200mCi至400mCi。
22.根据权利要求11所述的方法，其中所述放射性地标记的BC8是131I-BC8，并且131I-BC8的有效量是在所述受试者上执行所述疗法以治疗所述受试者的障碍以后10、11、12、13或14天施用的从400mCi至1,200mCi的131I-BC8。
23.根据权利要求11所述的方法，其中所述放射性地标记的BC8是225Ac-BC8，并且225Ac-BC8的有效量是在所述受试者上执行所述疗法以治疗所述受试者的障碍以后6、7、8、9、10、11或12天施用的从0.1μCi/kg至5.0μCi/kg受试者重量。
24.一种制成品，其包含(a)放射性地标记的抗-CD45抗体，和(b)标签，所述标签指示用户给受试者施用有效地消减所述受试者的造血干细胞的量的抗体。
25.根据权利要求24所述的制成品，其中所述放射性地标记的BC8是131I-BC8，并且131I-BC8的有效量是从10mCi至200mCi，或从200mCi至400mCi，或从400mCi至1,200mCi。
26.根据权利要求24所述的制成品，其中所述放射性地标记的BC8是225Ac-BC8，并且225Ac-BC8的有效量是从0.1μCi/kg至5.0μCi/kg，或从0.1μCi/kg至1.0μCi/kg受试者重量，或从1.0μCi/kg至3.0μCi/kg受试者重量，或从3.0μCi/kg至5.0μCi/kg受试者重量。
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