CN111116521A - 茄尼醇修饰的紫杉醇前药及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种茄尼醇修饰的紫杉醇前药及其制备方法及其应用，在此基础上制备了前药自组装纳米药物传递系统，其粒径均一（100nm左右），能够高效负载紫杉醇，制备方法简单，可重复性高；通过维生素E聚乙二醇琥珀酸酯（TPGS）对纳米制剂表面修饰长链的PEG，能够有效延长药物体内循环以及提高纳米制剂的稳定性；此外，以二硫键连接的茄尼醇‑紫杉醇前药能够在还原环境中特异性释药，有望实现紫杉醇在肿瘤部位的靶向蓄积，提高抗肿瘤效果，并降低对正常组织的毒副作用；茄尼醇为天然活性药物，具有抑制肿瘤细胞以及增加癌细胞对抗癌药物的敏感性等作用，有望增强紫杉醇的抗癌作用。

Description

茄尼醇修饰的紫杉醇前药及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于药物化学技术领域，具体涉及到茄尼醇修饰的紫杉醇前药及其制备方法和应用。

背景技术

紫杉醇是广泛用于多种癌症治疗的一线药物，主要包括乳腺癌、卵巢癌和非小细胞肺癌等，具有良好的抗肿瘤效应，其抗肿瘤作用机制主要是通过抑制微管蛋白的活性，抑制细胞有丝分裂从而发挥细胞毒性，目前已经广泛应用于临床，但是由于其难溶于水，口服利用度差，以及多药耐药等限制了其临床治疗效果。

目前，临床上所使用的紫杉醇注射液大多数是将紫杉醇增溶于聚氧乙烯蓖麻油和乙醇（1：1）中，但是聚氧乙烯蓖麻油可能会导致严重的过敏反应，这也直接导致了这种制剂会产生严重的毒副作用，因此，改善紫杉醇的水溶性是目前临床上所要解决的重要问题。

如今，纳米药物载体系统已经广泛应用于癌症的治疗，与其他纳米载体储库中的物理包封药物相比，前药作为一种新兴的药物载体，其与抗癌药物共价结合，大大减少了载体的使用量，提高了药物的负载效率，明显改善抗癌药物的水溶性，提高生物利用度。而传统的结合或物理包封的药物递送系统主要基于聚合物载体。聚合物的毒性或不可生物降解性以及药物与聚合物载体的比率都是重要的考虑因素，因为载体需要迅速降解成小分子并经肾脏排出，否则会在体内正常组织中产生蓄积毒性。肾脏消除的速率与聚合物的分子量成反比。但是，如果药物和载体在肿瘤组织中都具有细胞毒性，那么这个问题就可以迎刃而解了。所以，利用本身具有药理学活性的小分子药物作为载体的一部分是解决纳米药物载体应用于体内主要缺陷的一种有效的方法。

茄尼醇是一种全E-式不饱和九异戊二烯醇，存在于多种植物中，其中烟叶中含量最高，是一种天然产物。目前已经有大量的研究表明，茄尼醇具有抗肿瘤、抗氧化、抑制炎症的发生和转移等多种药理学活性，并且是合成心血管疾病、抗癌、抗溃疡等新型药物的中间体，以茄尼醇为原料合成的辅酶Q10常用于心血管疾病的治疗。因此基于茄尼醇多样的药理学活性以及良好的生物相容性，本申请通过酯键以及还原敏感性二硫键将茄尼醇与紫杉醇共价连接形成紫杉醇前药体系，其在水溶液中可以自组装形成粒径均一的纳米粒，但因其表面强大的疏水作用力，会因盐析作用而破坏胶体的稳定。维生素E聚乙二醇琥珀酸酯是天然维生素E和PEG₁₀₀₀的水溶性衍生物，已被FDA批准为安全的药物佐剂，并用作增溶剂，吸收促进剂和药物载体输送系统。通过加入少量的TPGS作为PEG修饰剂包裹在纳米颗粒的外层，可以明显提高纳米制剂的稳定性。其中，含有二硫键的紫杉醇前药可在还原条件下，特异性释放出紫杉醇，有望实现在肿瘤部位高浓度谷胱甘肽作用下特异性释药，提高紫杉醇的抗肿瘤效果并降低对其他正常组织的毒副作用。

发明内容

本发明的目的是提供一种茄尼醇修饰的紫杉醇前药及其制备方法及其应用。

基于上述目的，本发明采取如下技术方案：

一种茄尼醇修饰的紫杉醇前药包括：（1）茄尼醇与紫杉醇通过酯键相连；（2）茄尼醇与紫杉醇通过还原敏感的二硫键相连，其结构式为：所述化合物其结构如下：

（1）

（2）。

所述化合物（1）的合成路线如下：

具体制备过程如下：

（1）茄尼醇和DMAP（4－二甲氨基吡啶）溶于二氯甲烷中，在N₂保护下，将丁二酸酐和三乙胺的DMF混合溶液加入到前述的二氯甲烷溶液中，室温搅拌反应完全，反应结束后，经后处理得化合物MSS，其中以摩尔比计：茄尼醇：丁二酸酐：DMAP=1:1.5:0.5。

（2）将化合物MSS与紫杉醇(PTX)溶于二氯甲烷中，在DCC（N,N'－二环己基碳二亚胺）、DMAP的催化下，室温搅拌反应完全，反应结束后，经后处理即得目标化合物SOL-PTX，其中以摩尔比计：紫杉醇：MSS：DCC:DMAP=1:1.5:1:1.5。

所述化合物（2）的合成路线如下：

具体过程如下：

（1）3，3'－二硫代二丙酸在DCC、DMAP的催化下，与茄尼醇在N₂保护下反应，室温搅拌反应完全，反应结束后，经后处理得化合物MDPA，其中以摩尔比计：茄尼醇：3，3'－二硫代二丙酸：DCC：DMAP=1:2:2:0.5；

（2）化合物MDPA在DCC、DMAP的催化下，与紫杉醇在N₂保护下反应，室温搅拌反应完全，反应结束后，经后处理即得目标化合物SOL-SS-PTX，其中以摩尔比计：紫杉醇：MDPA：DCC：DMAP=1:1.5:1:1.5。

上述具有抗肿瘤作用的紫杉醇前药以酯键或者还原敏感的二硫键与茄尼醇相连。

上述具有抗肿瘤作用的紫杉醇前药中茄尼醇具有多种药理活性，是一种天然药物。

上述具有抗肿瘤作用的紫杉醇前药可在水溶液中自组装形成纳米粒，其制备过程如下：

将一定量的茄尼醇修饰的紫杉醇前药溶于适量的乙醇中，磁力搅拌下滴入去离子水中，自组装完成后经透析、过滤制得茄尼醇修饰的紫杉醇前药前药自组装形成纳米粒，其中，每15mg茄尼醇修饰的紫杉醇前药需要溶于2mL乙醇，并加入10mL去离子水。

TPGS修饰的茄尼醇-紫杉醇前药自组装纳米粒，其制备过程如下：

将一定量的TPGS以及茄尼醇修饰的紫杉醇前药溶于适量的乙醇中，磁力搅拌下滴入去离子水中，自组装完成后经透析、过滤制得TPGS修饰的茄尼醇-紫杉醇前药自组装纳米粒，茄尼醇修饰的紫杉醇前药和TPGS的质量比为5:1，其中，每15mg茄尼醇修饰的紫杉醇前药需要溶于2mL乙醇，并加入10mL去离子水。

本发明提供的前药纳米粒，其特征为：外观澄清，有淡蓝色乳光，粒径在100nm左右，粒径分布在0.1左右，载药量可达到37%-45%。

上述茄尼醇修饰的紫杉醇前药、茄尼醇-紫杉醇前药自组装纳米粒、TPGS修饰的茄尼醇-紫杉醇前药自组装纳米粒在制备抗肿瘤药物中的应用。

本发明的有益效果在于：（1）设计合成了含有酯键以及还原敏感键相连的茄尼醇-紫杉醇前药，合成方法简单易行；（2）茄尼醇-紫杉醇缀合物在水溶液中可自组装形成纳米粒，通过加入TPGS可以提高纳米制剂的稳定性，制备方法简单易行，可重复性高，可实现紫杉醇的高效负载；（3）具有还原敏感键的紫杉醇前药，在肿瘤细胞内高浓度的谷胱甘肽还原环境下，可使二硫键断裂，释放出母药，实施例6表明本发明模拟肿瘤细胞内的还原性条件下，以二硫键连接的紫杉醇前药中紫杉醇释放明显迅速。表明该前药可使药物靶向至肿瘤部位，提高治疗效果，并降低药物对正常组织的毒副作用；（4）本发明所述的前药纳米粒可用于静脉途径给药，向患者提供有效剂量的紫杉醇。

附图说明

图1为本发明实施例1的以酯键连接的茄尼醇-紫杉醇前药（SOL-PTX）的¹HNMR谱图和质谱图；

图2为本发明实施例2的以还原敏感性二硫键连接的茄尼醇-紫杉醇前药（SOL-SS-PTX）的¹HNMR谱图和质谱图；

图3为本发明实施例3 茄尼醇-紫杉醇自组装前药纳米粒的DLS剂及透射电镜图；

图4为本发明实施例4 TPGS修饰的茄尼醇-紫杉醇自组装前药纳米粒的DLS图；

图5为本发明实施例4 TPGS修饰的茄尼醇-紫杉醇自组装前药纳米粒的透射电子显微镜图；

图6为本发明实施例5 TPGS修饰的茄尼醇-紫杉醇自组装前药纳米粒的粒径-储存时间图；

图7为本发明实施例6 TPGS修饰的茄尼醇-紫杉醇自组装前药纳米粒的粒径-稀释稳定性图；

图8为本发明实施例7 TPGS修饰的茄尼醇-紫杉醇自组装前药纳米粒的体外释放曲线；

图9为本发明实施例8 TPGS修饰的茄尼醇-紫杉醇自组装前药纳米粒的体外细胞毒性实验结果图。

具体实施方式

下面通过实施例的方式对本发明的技术方案做进一步详细说明，但并不因此将发明限制在所述的实例范围之中。

实施例1：酯键连接的茄尼醇－紫杉醇前药（SOL-PTX）的合成

（1）称取0.96g（9.59mmol）的丁二酸酐于15mL的DMF中，加入1mL三乙胺，N₂保护下，将茄尼醇(4.0g，6.34mmol)和DMAP（0.39g，3.19mmol）溶于20mL无水二氯甲烷，然后将该溶液用恒压滴液漏斗以2mL/min的速度滴入到上述DMF溶液中，室温搅拌48h，反应结束后，将反应液转入到分液漏斗中，用30mL的蒸馏水萃取两次，旋蒸除去溶剂。用石油醚：乙酸乙酯=1:1（v:v）为流动相过硅胶柱，TLC监测产物流出，旋干流动相，真空干燥，得到中间产物MSS。

（2）称取MSS（0.63g，0.88mmol）、DCC（121mg，0.59mmol）、DMAP（108mg，0.88mmol）溶于10mL二氯甲烷中，N₂保护下加入紫杉醇（0.5g，0.59mmol），室温搅拌48h，反应结束后，旋干溶剂。用二氯甲烷：甲醇=100:1.5（v:v）为流动相过硅胶柱，TLC监测产物流出，旋干流动相，真空干燥，得到目标产物SOL-PTX。

采用质谱法和核磁共振氢谱法来确定实施例1中前药的结构，结构如图1所示。核磁共振采用的溶剂为CDCl₃,波谱解析结果如下：

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)：δ 8.14 （d, 2H, Ar-H, J=8.0Hz），7.81（d, 2H, Ar-H, J=8.0Hz），7.61（t,1H，Ar-H, J=7.4Hz）, 7.54 – 7.29 (m, 10H, Ar-H), 7.08 (d, 1H, J =9.2 Hz,-NH₂-), 6.29 (s, 1H, 10-H), 6.24 (d, 1H, J = 9.4 Hz,13-H), 5.99 (dd,1H, J = 9.2, 3.0 Hz, 3^，-H), 5.69 (d, 1H, J = 7.1 Hz, 2-H), 5.50 (d, 1H , J =3.1 Hz, 2^，-H), 5.27 (t, 1H, J = 7.2 Hz,-CH₂C=C-H), 5.11 (t, 8H, J = 7.1 Hz,-CH₂-(CH₃)C=C-H), 4.97 (dd, 1H, J = 9.5, 2.2 Hz, 5-H), 4.50 (d, 2H, J = 7.1Hz,-COOCH₂ -), 4.45 (s, 1H, 7-H), 4.32 (d, 1H, J = 8.4 Hz, 20α-H), 4.21 (d,1H, J = 8.5 Hz, 20β-H), 3.81 (d, 1H, J = 7.0 Hz, 3-H), 2.78 – 2.72 (m, 2H,-OOCCH₂ CH₂COO-), 2.61 (t, 2H, J = 6.7 Hz, -OOCCH₂CH₂ COO-), 2.49 (d, 1H, J = 4.0Hz, 6α-H), 2.45 (s, 3H, 4-COCH₃ ), 2.23 2.23 (s, 3H, 10-COCH₃ ), 2.02 (m , 34H,-C=CCH₂CH₂ C=C-), 1.68 (d, 6H, J = 2.2 Hz, CH₃CH₃ C=C-), 1.60 (s, 24H, CH₃ -C=C-),1.23 (s, 3H, 17-CH₃), 1.14 (s, 3H, 16-CH₃).

MS(ESI)m/z for C₉₆H₁₂₇NO₁₇K[M+K]⁺:1606.00

实施例2：二硫键连接的茄尼醇-紫杉醇前药（SOL-SS-PTX）的合成

（1）称取3,3-二硫代二丙酸1.31g(6.23mmol)、1.28g（6.2mmol） DCC及0.2g（1.64mmol）DMAP于10mL的DMF中，N₂保护下，将茄尼醇（2.0g，3.17mmoL）溶于20mL无水二氯甲烷中，然后将该溶液用恒压滴液漏斗以2mL/min的速度滴入到上述溶液中，室温搅拌48h，反应结束后，将反应液转入到分液漏斗中，用30mL的蒸馏水萃取两次，旋蒸除去溶剂。用石油醚：乙酸乙酯=1:1（v:v）为流动相过硅胶柱，TLC监测产物流出，旋干流动相，真空干燥，得到中间产物MDPA。

（2）称取MDPA（0.72g，0.88mmoL）、DCC（121mg，0.59mmoL）、DMAP（108mg，0.88mmoL）溶于10mL二氯甲烷中，N₂保护下加入紫杉醇（0.5g，0.59mmoL），室温搅拌48h，反应结束后，旋干溶剂。用二氯甲烷：甲醇=100:1.5（v:v）为流动相过硅胶柱，TLC监测产物流出，旋干流动相，真空干燥，得到目标产物SOL-SS-PTX。

采用质谱法和核磁共振氢谱法来确定实施例2中前药的结构，结构如图2所示。核磁共振采用的溶剂为CDCl₃,波谱解析结果如下：

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)：8.14（d, 2H, Ar-H, J=7.3Hz），7.75（d, 2H, Ar-H, J=7.4Hz），7.61（t,1H，Ar-H, J=7.3Hz），7.56 – 7.34 (m, 10H, Ar-H)，7.069（s, 1H, -NH-），6.29 (s, 1H, 10-H)，6.24 (d, 1H, J = 9.4 Hz,13-H)，5.99 (dd, 1H, J = 9.2,3.2 Hz, 3^，-H)，5.69 (d, 1H, J = 7.2 Hz, 2-H)，5.52 (d, 1H , J = 3.2 Hz, 2^，-H)，5.31 (t, 1H, J = 7.7 Hz, -CH₂C=C-H)，5.10 (q, 8H, J = 6.2 Hz,CH₃CH₃C=C-H)，4.98(d, 1H, J = 8.6 Hz, 5-H), 4.59 (d, 2H, J = 7.2 Hz, -COOCH₂ -)，4.45 (dd, 1H, J= 10.9, 6.6 Hz, 7-H)，4.32 (d, 1H, J = 8.4 Hz, 20α-H)，4.19 (d, 1H, J = 8.4 Hz,20β-H)，3.81 (d, 1H, J = 7.0 Hz, 3-H)，2.87 (t, 4H, J = 5.4 Hz, CH₂ CH₂ SSCH₂ CH₂)，2.67 (t, 2H, J = 7.1 Hz, CH₂ CH₂SSCH₂CH₂)，2.62 – 2.51 (m, 2H, CH₂CH₂SSCH₂ CH₂ )，2.49(m, 1H, 6α-H)，2.46 (s, 3H, 4-COCH₃ )，2.23 (s, 3H, 10-COCH₃ )，2.10 – 1.94 (m,34H, -C=CCH₂CH₂C=C-)，1.68（d, 6H, CH₃CH₃ C=C-），1.60 (s, 24H, CH₃ -C=C-), 1.23 (s,3H,17-CH₃), 1.14 (s, 3H,16-CH₃).

MS (ESI)m/z for C₉₈H₁₃₁NO₁₇S₂Na[M+Na]+:1681.88。

实施例3：茄尼醇-紫杉醇自组装前药纳米粒的制备

精密称取前药15mg，用2mL的无水乙醇将其溶解，磁力搅拌下，将该乙醇溶液缓慢滴加到10mL的去离子水中，室温下使其自组装形成均匀的纳米粒（SOL-PTX纳米粒、SOL-SS-PTX纳米粒）。室温搅拌12h后，装于截留分子量为3500kDA的透析袋中，用去离子水透析2天，每6h更换一次去离子水除去有机溶剂，经0.22µm 水系膜过滤即得乳蓝色的前药纳米粒溶液。采用动态光散射法测定其粒径及粒径分布，结果如图3所示。由图3可知，纳米粒的粒径都在100nm左右，外观为乳蓝色的澄明溶液，粒径分布均匀。通过透射电镜看到其外貌均为类球形结构。

实施例4：TPGS修饰的茄尼醇-紫杉醇自组装前药纳米粒的制备

精密称取前药15mg，TPGS（维生素E聚乙二醇琥珀酸酯，CAS：9002-96-4） 3mg，用2mL的无水乙醇将其溶解，磁力搅拌下，将该乙醇溶液缓慢滴加到10mL的去离子水中，室温下使其自组装形成均匀的纳米粒（SOL-PTX/TPGS纳米粒、SOL-SS-PTX/TPGS纳米粒）。室温搅拌12h后，装于截留分子量为3500kDA的透析袋中，用去离子水透析2天，每6h更换一次去离子水除去有机溶剂，经0.22µm 水系膜过滤即得乳蓝色的前药纳米粒溶液。采用动态光散射法测定其粒径及粒径分布，结果如图4所示。由图4可知，纳米粒的粒径都在100nm左右，外观为乳蓝色的澄明溶液，粒径分布均匀。

通过透射电子显微镜观察实例4中自组装纳米粒的形态，结果如图5。通过图5透射电镜图表明SOL-PTX/TPGS纳米粒、SOL-SS-PTX/TPGS纳米粒均为类球型，粒径在90nm纳米左右。

实施例5：TPGS修饰的茄尼醇-紫杉醇自组装前药纳米粒的血浆稳定性实验

将实施例4中制备的前药纳米粒取出1mL，加入到4mL含有10%胎牛血清的1640培养基中，于37℃恒温振荡箱中孵育48h，并在预定时间点（0h、2h、6h、12h、24h、48h）取样，采用动态光散射法测定其粒径变化。结果如图6所示，由图6可知，纳米粒均为显示明显的粒径变化，显示出良好的胶体稳定性。

实施例6：TPGS修饰的茄尼醇-紫杉醇自组装前药纳米粒的稀释稳定性考察

将实施例4中制备的前药纳米制剂SOL-PTX/TPGS纳米粒、SOL-SS-PTX/TPGS纳米粒用去离子水分别将纳米制剂的浓度稀释至0、50、200、500、1000体积倍数，经激光粒度仪测定粒径及其分布变化，考察纳米制剂的稀释稳定性，结果如图7所示。由图7可知，即使稀释倍数达到1000倍时，各纳米制剂的粒径及分布均未有明显变化，具有良好的抗稀释性能，为其体内应用提供了一定的可能性。

实施例7：TPGS修饰的茄尼醇-紫杉醇自组装前药纳米粒的体外释放实验

以含30%乙醇的pH7.4磷酸盐缓冲液为释放介质，分别考察SOL-PTX/TPGS纳米粒、SOL-SS-PTX/TPGS纳米粒的体外释放情况。分别取实施例4中制备的前药纳米粒SOL-PTX/TPGS纳米粒、SOL-SS-PTX/TPGS纳米粒2mL加入到30mL释放介质中，于37℃、120rpm恒温振荡箱中孵育48h，分别于设定的时间点取样，通过高效液相色谱测定紫杉醇的浓度。向释放介质中加入0或10mM的二硫苏糖醇（DTT），以分别考察纳米粒在还原条件下的释放情况，结果如图8所示。

由图8可知，以酯键相连的茄尼醇-紫杉醇前药（SOL-PTX）具有极高的稳定性，无论在有无DTT的条件，SOL-PTX/TPGS纳米粒几乎不发生裂解，紫杉醇很难从前药中释放出来。相比之下，SOL-SS-PTX/TPGS纳米粒具有还原敏感释药的特性。在加入10mM DTT释放介质中，SOL-SS-PTX/TPGS纳米粒在48h内紫杉醇的释放量达到80%左右。实验结果表明以二硫键连接的茄尼醇-紫杉醇前药具有还原敏感释药的特性，能够对肿瘤部位特异的还原环境做出响应，使药物靶向蓄积至肿瘤部位，有望减轻药物对机体的毒副作用。

实施例8：TPGS修饰的茄尼醇-紫杉醇自组装前药纳米粒的体外细胞毒性实验

采用MTT法考察前药纳米制剂对人肺癌细胞（A549）以及人肝癌细胞（HepG-2）的细胞毒性。分别取对数生长期的A549细胞以及HepG-2细胞，接种到96孔板上，使每孔细胞数量为5×10³个，培养24h（37℃，24h）使其贴壁后，分别加入不同浓度梯度的紫杉醇以及实施例4制备的SOL-PTX/TPGS纳米制剂和SOL-SS-PTX/TPGS纳米制剂100µL，每个浓度均设置三个复孔，同时用加入空白1640培养基的处理的细胞作为对照，加入样品后继续培养48h（37℃，24h）后，将96孔板取出，弃去旧的培养基，每孔加入100µL MTT溶液（5mg/mL)，继续培养4h后，弃去MTT溶液，每孔加入100µL DMSO，于震荡器上震荡5min，使甲臜结晶物充分溶解，使用酶标仪于570nm处测定各孔的OD值，MTT结果如图9所示。

由图9可知 ，前药纳米制剂对这两种细胞均具有较强的细胞抑制作用，含有还原敏感二硫键的紫杉醇前药纳米制剂对肿瘤细胞的抑制效果明显高于酯键连接的紫杉醇前药纳米制剂，说明含有二硫键的前药能够对肿瘤部位特异的还原环境做出响应，具有更好的肿瘤抑制效果。

Claims (8)

1.茄尼醇修饰的紫杉醇前药，其特征在于，其结构式为：

（1）

（2）。

2.权利要求1所述的茄尼醇修饰的紫杉醇前药的制备方法，其特征在于，化合物（1）的合成路线如下：

化合物（1）的具体制备过程如下：

（1）茄尼醇和DMAP溶于二氯甲烷中，保护气氛下，将丁二酸酐和三乙胺的DMF混合溶液加入到前述的二氯甲烷溶液中，室温搅拌反应完全，反应结束后，经后处理得化合物MSS，茄尼醇、丁二酸酐和DMAP摩尔比为1:1.5:0.5；

（2）将化合物MSS与紫杉醇溶于二氯甲烷中，在DCC、DMAP催化下，室温搅拌反应完全，反应结束后，经后处理既得目标化合物SOL-PTX，紫杉醇、MS、DCC和DMAP摩尔比为1:1.5:1:1.5。

3.权利要求1所述的茄尼醇修饰的紫杉醇前药的制备方法，其特征在于，

化合物（2）的合成路线如下：

；

并采用如下步骤制备：

（1）3，3'－二硫代二丙酸、DCC、DMAP溶于DMF中，与茄尼醇的二氯甲烷溶液混合，在保护气氛下室温搅拌反应，反应结束后，经后处理得化合物MDPA，茄尼醇、3，3'－二硫代二丙酸、DCC和DMAP摩尔比为1:2:2:0.5；

（2）化合物MDPA在DCC、DMAP的催化下，以二氯甲烷为溶剂，与紫杉醇在保护气氛下反应，室温搅拌反应完全反应结束后，经后处理即得目标化合物SOL-SS-PTX，紫杉醇、MDPA、DCC和DMAP摩尔比为1:1.5:1:1.5。

4.利用权利要求1所述的茄尼醇修饰的紫杉醇前药制得的茄尼醇-紫杉醇前药自组装纳米粒，其特征在于，茄尼醇-紫杉醇前药自组装纳米粒通过下述方法获得：

将一定量的茄尼醇修饰的紫杉醇前药溶于适量的乙醇中，磁力搅拌下滴入去离子水中，自组装完成后经透析、过滤制得茄尼醇修饰的紫杉醇前药前药自组装形成纳米粒，其中，每15mg茄尼醇修饰的紫杉醇前药需要溶于2mL乙醇，并加入10mL去离子水。

5.利用权利要求1所述的茄尼醇修饰的紫杉醇前药制得的TPGS修饰的茄尼醇-紫杉醇前药自组装纳米粒，其特征在于，通过下述方法获得：

将一定量的TPGS以及茄尼醇修饰的紫杉醇前药溶于适量的乙醇中，磁力搅拌下滴入去离子水中，自组装完成后经透析、过滤制得TPGS修饰的茄尼醇-紫杉醇前药自组装纳米粒，茄尼醇修饰的紫杉醇前药和TPGS的质量比为5:1，其中，每15mg茄尼醇修饰的紫杉醇前药需要溶于2mL乙醇，并加入10mL去离子水。

6.权利要求1所述的茄尼醇修饰的紫杉醇前药在制备抗肿瘤药物中的应用。

7.权利要求4所述的茄尼醇-紫杉醇前药自组装纳米粒在制备抗肿瘤药物中的应用。

8.权利要求5所述的TPGS修饰的茄尼醇-紫杉醇前药自组装纳米粒在制备抗肿瘤药物中的应用。

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