CN111094987B - 作为异常血小板水平的标志物的肾上腺髓质素原 - Google Patents

作为异常血小板水平的标志物的肾上腺髓质素原 Download PDF

Info

Publication number
CN111094987B
CN111094987B CN201880059382.1A CN201880059382A CN111094987B CN 111094987 B CN111094987 B CN 111094987B CN 201880059382 A CN201880059382 A CN 201880059382A CN 111094987 B CN111094987 B CN 111094987B
Authority
CN
China
Prior art keywords
level
patient
proadm
fragment
sample
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201880059382.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111094987A (zh
Inventor
A·佩拉
S·克尔施
D·威尔逊
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
BRAHMS GmbH
Original Assignee
BRAHMS GmbH
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by BRAHMS GmbH filed Critical BRAHMS GmbH
Publication of CN111094987A publication Critical patent/CN111094987A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111094987B publication Critical patent/CN111094987B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/86—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood coagulating time or factors, or their receptors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/22—Haematology
    • G01N2800/222—Platelet disorders
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/50—Determining the risk of developing a disease
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明涉及一种对具有异常血小板水平的患者进行测定、诊断、预后、治疗指导、治疗监测、风险评估和/或风险分层的方法，所述方法包括提供所述患者的样本，测定所述样本中的肾上腺髓质素原(proADM)或其片段的水平，其中所述pro ADM或其片段的水平与所述患者中的异常血小板水平相关。在本发明的实施方案中，高严重程度的pro ADM或其片段的水平表明受试者中的低血小板水平，并且随后开始或改变患者的治疗以改善所述状况。在本发明的一些实施方案中，所述方法包括测定从患者分离的样本中的一种或多种额外标志物的水平，例如血小板的水平，PCT或其片段、一种或多种血小板减少标志物和/或一种或多种炎性反应标志物的水平。

Description

作为异常血小板水平的标志物的肾上腺髓质素原
技术领域
本发明涉及一种对具有异常血小板水平的患者进行测定、诊断、预后、治疗指导、治疗监测、风险评估和/或风险分层的方法，所述方法包括提供所述患者的样本，测定所述样本中的肾上腺髓质素原(proADM)或其片段的水平，其中所述proADM或其片段的水平与所述患者中的异常血小板水平相关。在本发明的实施方案中，proADM或其片段的高严重水平表明受试者中的低血小板水平，并且随后开始或改变患者的治疗以改善所述状况。在本发明的一些实施方案中，所述方法包括测定从患者分离的样本中的一种或多种额外标志物的水平，例如血小板的水平，PCT或其片段、一种或多种血小板减少标志物和/或一种或多种炎性反应标志物的水平。
背景技术
尽管诊断和预防措施有了显著改善，但住院患者的败血症发生率仍持续迅速上升(1)，死亡率在10％至54％之间，这取决于疾病严重程度的水平、使用的器官功能障碍的定义，和国家特定发病率(2、3)。因此，就总体病理生理宿主反应而言，在败血症的早期阶段尽早且准确地评估感染载量和疾病严重程度至关重要，以便关于诊断测试和治疗策略做出迅速且可靠的决定，以及在稍后阶段可靠地指导患者管理、治疗监测，在临床痊愈的情况下作出出院决定。
因此令人惊讶的是，目前尚无针对败血症的金标准诊断测试(4)。降钙素原(PCT)的使用已通过抗生素指导领域的观察和干预数据部分地满足了在感染载量评估方面的这种尚未满足的需求(5-7)。但是，尚未显示出对疾病严重程度的准确度量。
因而，因此提出了许多生物标志物和临床评分，包括使用严重程度评分，例如序贯器官衰竭评估(SOFA)、急性生理和慢性健康评估(APACHE)II以及简化急性生理(SAPS)II评分，然而，由于与每个评分相关的相对较高的复杂度和时间资源要求，这些评分很少以常规方式每天计算。新型生物标志物的使用可以满足这一尚未满足的临床需求，但是很少有(如果有的话)成功地将其纳入广泛的临床常规(8)。
在这些生物标志物中，中区肾上腺髓质素原(MR-proADM)是一种由多个组织生成以稳定微循环并防止内皮通透性和随之而来的器官衰竭的肽(9-16)，其已显示出可观的前景，尤其是在以下领域：败血症(17)，下呼吸道感染(18-21)，肺移植(22)，胸外科(23)和血容量过多(WO2017/89474)。实际上，内皮和微循环被广泛认为在败血症的病理生理宿主反应中起着重要作用(24、25)，其中每个器官内的血流调节和分布都非常重要(25)，因此可以提供与单个器官功能障碍的评分相比，关于一般宿主反应严重程度的替代指征。
了解宿主对败血症的反应对于启动适当的治疗策略至关重要。一个基本因素是了解器官功能障碍发展的潜在过程。每个器官系统都由毛细管、小动脉和小静脉的复杂而庞大的网络构成，其被称为微血管系统。特别是在炎症反应期间，血小板可能会对血管完整性产生有害影响，例如可能导致血管屏障通透性增加(59)。然而，特定器官具有不同程度的微血管密度和复杂性，取决于具体器官，微循环起着不同的作用。
血小板对败血症病理生理学和器官衰竭的作用已成为重新关注的主题。使用普通血小板计数阈值，血小板减少(血液中血小板的水平异常低)占ICU患者的20-50％，并且与不良结果相关(38-47)。血小板是众所周知的凝血参与者并且可能有助于弥散性血管内凝血(DIC)，以及是免疫反应的重要因素，从而对感染和破坏组织完整性有反应并且有助于炎症、病原体杀伤和组织修复(48-53)。此外，血小板和血小板减少在现有和发展中的严重疾患(例如败血症和器官衰竭)的情形下的作用是一个深入研究的主题(54-57)。
在健康的血管条件下，血小板遇到由内皮细胞产生的抑制信号，从而阻止其激活。它们在靠近血管壁的地方循环，并且内皮细胞衬里的破坏克服了这些抑制信号并驱动血小板粘附、激活和聚集，从而暂时堵塞了受损的血管。
激活的血小板分泌大量促炎物质以及靶向内皮细胞和白细胞的细胞因子。在正常情况下，内皮是非粘附性表面，但是当被血小板激活时，它会发生深刻变化，包括细胞粘附分子和组织因子的表达。血小板在聚糖起关键作用的多步骤过程后粘附至激活的内皮细胞。血小板激活可进一步改变血管张力并导致结构变化，从而增加血管通透性。血液中血小板聚集物的形成是败血症进展的早期现象。
因此，如序贯器官衰竭评估评分所示，了解发展中的器官功能障碍对于帮助开发个性化败血症治疗至关重要。在败血症诊断后的最早时刻，SOFA评分提高或降低的预警至关重要。但是，到目前为止，尚无可用的可靠诊断和/或预后标志物预期指示SOFA评分提高或降低和/或异常血小板水平、弥散性血管内凝血(DIC)和/或相关器官衰竭、特别是特定器官衰竭的存在或发展。
尤其是对于重症患者，血小板减少的管理可能具有挑战性，因为不同的机制可能导致血小板数量明显减少：血液稀释(输液)，血小板消耗增加(例如，由于DIC、吞噬血细胞作用、血栓形成)，血小板破坏增加(例如由于血小板自身抗体、肝素、药物)，血小板产生减少(例如由于细菌毒素、药物、慢性肝病)或血小板隔离增加(例如由于脾功能亢进、体温过低)。此外，由于季节和个体差异，血小板计数低可能是微不足道并且非病理性的(58)。另外，不同的情况会导致血小板减少的表型，而与病理学无关(假性血小板减少)。血液样本中的凝结或EDTA诱导的离体血小板结块可能是假性血小板减少的原因，并且可能误导诸如血小板输注的治疗措施。
因此，迫切需要开发指示血小板水平异常发展以及异常血小板水平的相关严重程度的诊断和预后工具和方法。
发明内容
鉴于现有技术中的困难，本发明的潜在技术问题是提供用于测定受试者中异常血小板水平的手段。本发明的一个目的可以认为是提供对患者中与异常血小板水平相关的当前或后续不良事件(例如器官衰竭、特定器官衰竭和/或死亡)进行诊断、预后、治疗指导、治疗监测、风险评估和/或风险分层的手段。因此，本发明的一个目的是提供一种或多种生物标志物或生物标志物的组合，以鉴定具有这种不良事件的高风险的患者。
在独立权利要求中提供了对本发明的技术问题的解决方案。在从属权利要求中提供了本发明的优选实施方案。
因此，所述方法涉及一种用于对患者中的异常血小板水平进行测定、诊断、预后、治疗指导、治疗监测、风险评估和/或风险分层的方法，所述方法包括：
a.提供所述患者的样本，
b.测定所述样本中肾上腺髓质素原(proADM)或其片段的水平，
c.其中所述proADM或其片段的水平与所述患者中的异常血小板水平相关。
本发明还涉及一种基于所述样本中肾上腺髓质素原(proADM)或其片段的水平对血小板减少和/或相关医学病状例如弥散性血管内凝血(DIC)或器官失调或器官衰竭进行诊断、预后、治疗指导、治疗监测、风险评估和/或风险分层的方法。因此，本发明涉及一种基于所述样本中肾上腺髓质素原(proADM)或其片段的水平对血小板减少和/或弥散性血管内凝血(DIC)进行诊断、预后、风险评估和/或风险分层的方法。
本发明是基于以下令人惊讶的发现：患者样本中的proADM且特别是MR-proADM的水平与样本分离时所述患者的血小板计数相关。甚至更令人惊讶的是，发现proADM水平的增加与凝血细胞数目的减少相关。这些相关性随时间持续存在，以致于基线测量后第1天和第4天增加的proADM值与降低的血小板水平和最终死亡率相关。
在一些实施方案中，将样本中proADM或其片段的水平相比于参考水平(例如阈值或临界值和/或群体平均值)进行比较，可以评估后续不良事件发生的可能性，所述不良事件例如凝血系统衰竭、血小板水平异常、DIC和/或血小板减少，如果适用的话，其中参考水平可能对应于健康患者中或已被诊断为重症患者中的proADM或其片段。
然而，在本领域中需要开发基于不同器官制定的个性化治疗策略。因此，本发明方法的一个很大的优点是，基于在时间点0(第0天)测定的proADM水平，有可能以很高的可能性预测在不久的将来可能发生的特定器官衰竭，特别是对于肾脏、肝脏和凝血系统。本文提供的实施例表明，MR-proADM可以显著更好地预测关于不良事件的改善或恶化，例如优选在凝血、肾病和肝脏器官系统中的改善或恶化。
因此，本发明的方法可以帮助预测患者健康方面的后续不良事件的可能性，例如凝血系统衰竭、异常血小板水平、DIC和/或血小板减少。这意味着，本发明的方法可以将更可能遭受并发症或其状况在未来将变得更严重的高风险患者与健康状况稳定或甚至改善的低风险患者区分开来，以使得预期他们不会遭受例如凝血系统衰竭、血小板水平异常、死亡、DIC和/或血小板减少的不良事件的困扰，这可能需要采取某些治疗措施和/或对患者进行更严密的监测。
所述方法还涉及一种用于评估低血小板水平或相关状况例如血小板减少和/或弥散性血管内凝血(DIC)的严重程度的方法。ProADM可以定量或半定量方式用于评估严重程度的可能性或现有疾患的严重程度。
因此，本发明涉及一种对患者健康方面的当前或后续的不良事件进行测定、诊断、预后、治疗指导、治疗监测、风险评估和/或风险分层的方法，所述方法包括提供所述患者的样本，测定所述样本中肾上腺髓质素(ADM)或其片段的水平，其中所述proADM或其片段的水平与所述患者健康方面的后续不良事件的可能性相关。
在本发明的实施方案中，后续不良事件是器官衰竭，特定器官衰竭，死亡，从分离样本的时间点开始的28-90天内死亡，血小板水平异常，血小板减少，弥散性血管内凝血(DIC)和/或肝衰竭或感染。
在优选的实施方案中，本发明涉及一种对患者中的特定器官衰竭进行测定、诊断、预后、治疗指导、治疗监测、风险评估和/或风险分层的方法，所述方法包括提供所述患者的样本，测定所述样本中肾上腺髓质素原(proADM)或其片段的水平，其中所述proADM或其片段的水平与所述患者中的特定器官衰竭相关。
在优选的实施方案中，本发明涉及一种对患者中的肝衰竭进行测定、诊断、预后、治疗指导、治疗监测、风险评估和/或风险分层的方法，所述方法包括提供所述患者的样本，测定所述样本中肾上腺髓质素原(proADM)或其片段的水平，其中所述proADM或其片段的水平与所述患者中的肝衰竭相关。
在一些实施方案中，用于对患者中的特定器官衰竭进行测定、诊断、预后、治疗指导、治疗监测、风险评估和/或风险分层的方法是在具有或怀疑具有低血小板水平或相关状况的患者中进行的。
术语“特定器官衰竭”是指特定器官的衰竭。例如，在预后方法的情况下，本发明的方法不仅可以用于预测任何器官的衰竭，而且可以用于预测特定器官的衰竭。例如，所述方法可以用于特异性地预测肾脏、肝脏和/或凝血系统的衰竭。
本文中，器官或系统(例如肝脏或凝血系统)的衰竭可能涉及以下两者：系统的总体崩溃，在不存在或几乎不存在器官或系统的任何生理功能的意义上；以及失调，其是指器官或系统体内稳态的失衡。轻度失调可能会在没有初始临床症状的情况下发生，而进行性失调可能导致系统功能部分丧失，从而导致临床症状，并且严重失调可能等同于崩溃。
因此，本发明涉及一种对患者中的低血小板水平和/或血小板减少和/或弥散性血管内凝血(DIC)进行预后、风险评估和/或风险分层的方法，其中proADM或其片段的水平等于或高于高严重水平(或临界值)指示在获得样本后12小时至120小时内，优选24小时至72小时内出现低血小板水平和/或血小板减少和/或DIC的可能性。
本发明的方法的一个特别的优点是，通过本发明的方法已经被鉴定为低风险患者的患者可以更快地出院，例如从ICU、急诊室、私人执业诊所或医院出院。此外，对于低风险患者，可以降低对患者健康状况进行观测的强度和/或频率。因此，负责患者的医院或其他医疗机构可以更有效地决定哪些患者需要严密的医疗护理和观测。因此，相应的医院或机构可以例如更有效地让高风险患者占用ICU病床。这将导致对高风险患者的医疗护理改善，因为医务人员可以专注于此类患者，而低风险患者可以出院。这也将因避免不必要措施的费用而获得显著的益处，这些不必要的措施原本将应用于低风险患者。
完全令人惊讶的是，患者样本中的proADM或其片段的水平可以提供关于例如与DIC和/或血小板减少或败血症继发性血小板减少相关的异常血小板水平的发生或存在的可能性和严重程度的关键信息。
在本发明的实施方案中，使用proADM或其片段作为单个参数优于使用其它单个参数，例如生物标志物或临床评分，因为与其它标志物和临床参数例如血小板计数、乳酸盐或临床评分如SOFA、qSOFA、SAPS II或APACHE II相比，proADM可以更精确地预测凝血系统衰竭、异常血小板水平、DIC和/或血小板减少。
在本发明的实施方案中，可以在任何医学环境下检查表现出任何生理病症的症状或没有任何生理病症的症状的患者。根据一个优选的实施方案，在医学检查期间从患者中分离样本。
在本发明的实施方案中，患者正在或已经诊断为重症。根据另一个实施方案，在诊断时间点之时或之后从患者中分离样本。此外，在本发明方法的实施方案中，已经在诊断时间点之时或之前开始医学治疗。在实施方案中，患者已经诊断为重症并且已经开始医学治疗。可以在诊断和治疗开始之前、之时或之后从患者中分离样本。
在一个实施方案中，患者是重症或已经被诊断为重症。
在一个实施方案中，在诊断为重症的时间点之时或之后，从患者中分离样本。
在一个实施方案中，患者被诊断出具有感染性疾病。
在一个实施方案中，患者被诊断出具有败血症、重度败血症或败血性休克。
在一个实施方案中，患者被诊断出具有一种或多种现有器官衰竭，和/或是创伤后或外科手术后患者。
在一个实施方案中，患者被诊断出具有凝血系统失调，例如弥散性血管内凝血(DIC)或血小板减少，和/或具有与凝血系统相关的器官例如血管、脾脏、骨髓和/或免疫系统的功能障碍。
根据另一个实施方案，患者正患有或已经诊断为患有弥散性血管内凝血(DIC)。
DIC可以被视为一种综合征，其可发生在例如以下不同类型疾病的情形下：实体瘤，血液癌，淋巴瘤，白血病，产科并发症(例如(先兆)子痫、胎盘早破、羊水栓塞、流产)，大规模伤害(例如严重的外伤、烧伤、体温过高、大范围手术)，败血症，重度败血症，败血性休克，重度感染(例如细菌、病毒、真菌、原生动物、超级感染/合并感染)，输血反应(例如AOB血型不合溶血反应)，药物不良反应(例如由抗感染药、抗肿瘤药、抗血栓药诱发)，严重的过敏或中毒反应或巨大血管瘤。
技术人员知道可能与DIC相关的其它疾患和疾病。DIC会导致(多)器官功能障碍/损伤(如果问题是由于出血或凝血引起则是独立的(取决于“DIC阶段”))。组织血流大量流失和同时出血的结合导致死亡风险增加。因此，DIC是一种可能引起严重并发症的医疗急症。对DIC的预测或诊断越早，患者的预后就越好。
已经提出了DIC的几种治疗方法，例如因子V，因子XIII-AP，鞘氨醇-1-磷酸(S1P)，血栓调节蛋白，针对组织因子或组织因子前mRNA剪接的抗体，活性氮抑制肽(RNIP)片段，TAFIa(i)，促凝磷脂以及凝血酶抑制剂。
在本发明的实施方案中，DIC可导致(多)器官功能障碍/损伤(如果问题来自出血或凝血则是独立的(取决于“DIC阶段”))。组织血流大量流失和同时出血的结合导致死亡风险增加。
在本发明的实施方案中，患者接受DIC的治疗，例如，因子V，因子XIII-AP，鞘氨醇-1-磷酸(S1P)，血栓调节蛋白，针对组织因子或组织因子前mRNA剪接的抗体，活性氮抑制肽(RNIP)片段，TAFIa(i)，促凝磷脂和/或凝血酶抑制剂。
在其它实施方案中，患者所接受的治疗包括以下中的一种或多种：抗生素治疗，有创机械通气，无创机械通气，肾替代疗法，使用血管加压药，液体疗法，皮质类固醇，血液或血小板输注，脾切除术，直接凝血酶抑制剂(例如重组水蛭素(lepirudin)或阿加曲班(argatroban))，血液稀释剂(例如比伐卢定(bivalirudin)和磺达肝素(fondaparinux))，在肝素诱发的血小板减少的情况下停用肝素，碳酸锂，叶酸盐，体外血液净化和/或器官保护。
在本发明的优选实施方案中，所述proADM水平与血小板水平成负相关。
优选地，样本可以是体液。更优选地，样本选自由血液样本、血清样本、血浆样本和/或尿液样本组成的组。
优选地，在一些实施方案中，通过测定proADM或其片段的水平来实施所述方法，其中所述proADM的测定包括测定样本中MR-proADM的水平。对于本文描述的任何给定实施方案，优选采用测定MR-proADM，并且因此可以在每个实施方案的上下文中加以考虑。在优选的实施方案中，“ADM片段”可以被认为是MR-proADM。在一些实施方案中，可以使用ADM的任何片段或前体，例如pre-pro-ADM，proADM，被称为ADM本身的肽或其片段，例如MR-proADM。
根据本发明的另一个实施方案，测定proADM或其片段的水平包括测定样本中的MR-proADM的水平。
在本发明方法的一个优选实施方案中，
-低于高严重水平(临界值)的proADM或其片段的水平指示正常或高血小板水平，或
-等于或高于高严重水平(或临界值)的proADM或其片段的水平指示低血小板水平和/或血小板减少和/或弥散性血管内凝血(DIC)的存在或其出现可能性，
-其中proADM或其片段的高严重水平(或临界值)是高于6.5nmol/l、6.95nmol/l或优选10.9nmol/l的水平。
根据本发明，在“指示后续不良事件”和“指示不存在后续不良事件”的上下文中的术语“指示”旨在作为风险和/或可能性的量度。优选地，不良事件的存在或不存在的“指示”旨在作为风险评估，并且通常不应以限制性的方式解释为明确地指出所述事件的绝对存在或不存在。
因此，术语“指示不存在后续不良事件”或“指示后续不良事件”可以分别理解为指示发生不良事件的低或高风险。在一些实施方案中，低风险涉及与高于指示值检测到的proADM水平相比的较低风险。在一些实施方案中，高风险涉及与低于指示值检测到的proADM水平相比的较高风险。
牢记上述内容，但是，在使用本文公开的临界值时，测定proADM的高和/或低严重水平对于确定是否存在后续不良事件非常可靠，从而估计风险促使医疗专业人员采取适当的行动。
在一些实施方案中，proADM的低或中或高严重水平指示患者身体状况关于不良事件方面的严重程度。
在一些实施方案中，proADM的低或中或高严重水平指示具有血小板减少或血小板减少症状的患者的身体状况的严重程度。
在一些实施方案中，proADM的低或中或高严重水平指示具有血小板减少或败血症继发性血小板减少症状的患者的身体状况的严重程度。
完全令人惊讶的是，proADM或其片段的水平可能与后续不良事件存在或不存在的可能性相关，所述不良事件例如是凝血系统衰竭、血小板水平异常、DIC和/或血小板减少，也是在这些时间点接受治疗的重症患者的情形下。
样本中的ProADM水平可以优选指定为proADM的3种不同严重水平。高水平的proADM指示高严重水平，中水平指示中严重水平，且低水平指示低严重水平。测定相应严重水平的临界值的相应浓度取决于多个参数，例如样本分离的时间点，例如在患者的预后、诊断和治疗开始后，以及用于测定所述样本中的proADM或其片段的水平的方法。
本文公开的临界值优选是指通过BRAHMS MR proADM KRYPTOR测定法测量从患者获得的血浆样本中proADM或其片段的蛋白质水平。因此，本文所公开的值可以根据所用的检测/测量方法而在一定程度上有所变化，并且本文所公开的特定值还旨在读取由其它方法测定的相应值。
在本发明的一个实施方案中，proADM或其片段的低和/或中严重水平指示不存在(后续)不良事件，例如凝血系统衰竭、血小板水平异常、DIC和/或血小板减少，其中低严重水平低于在1.5nmol/l至4nmol/l范围内的临界值。对于proADM或其片段的低严重水平，在这些范围内的任何值都可以被认为是适当的临界值。例如，1.5、1.55、1.6、1.65、1.7、1.75、1.8、1.85、1.9、1.95、2.0、2.05、2.1、2.15、2.2、2.25、2.3、2.35、2.4、2.45、2.5、2.55、2.6、2.65、2.7、2.75、2.8、2.85、2.9、2.95、3.0、3.05、3.1、3.15、3.2、3.25、3.3、3.35、3.4、3.45、3.5、3.55、3.6、3.65、3.7、3.75、3.8、3.85、3.9、3.95、4.0nmol/l。
在本发明的一个实施方案中，proADM或其片段的高严重水平指示(后续)不良事件，例如凝血系统衰竭、血小板水平异常、DIC和/或血小板减少，其中高严重水平高于在6.5nmol/l至12nmol/l范围内的临界值。对于proADM或其片段的高严重水平，在这些范围内的任何值都可以被认为是适当的临界值。例如，6.5、6.55、6.6、6.65、6.7、6.75、6.8、6.85、6.9、6.95、7.0、7.05、7.1、7.15、7.2、7.25、7.3、7.35、7.4、7.45、7.5、7.55、7.6、7.65、7.7、7.75、7.8、7.85、7.9、7.95、8.0、8.05、8.1、8.15、8.2、8.25、8.3、8.35、8.4、8.45、8.5、8.55、8.6、8.65、8.7、8.75、8.8、8.85、8.9、8.95、9.0、9.05、9.1、9.15、9.2、9.25、9.3、9.35、9.4、9.45、9.5、9.55、9.6、9.65、9.7、9.75、9.8、9.85、9.9、9.95、10.0、10.05、10.1、10.15、10.2、10.25、10.3、10.35、10.4、10.45、10.5、10.55、10.6、10.65、10.7、10.75、10.8、10.85、10.9、10.95、11.0、11.05、11.1、11.15、11.2、11.25、11.3、11.35、11.4、11.45、11.5、11.55、11.6、11.65、11.7、11.75、11.8、11.85、11.9、11.95、12.0nmol/l。
本文公开的与标志物或生物标志物例如proADM或PCT的水平有关的所有临界值应理解为“等于或高于”特定临界值或“等于或低于”特定临界值。例如，关于proADM或其片段水平低于4nmol/l，，优选低于3nmol/l，更优选低于2.7nmol/l的实施方案应理解为关于proADM或其片段水平等于或低于4nmol/l，优选等于或低于3nmol/l，更优选等于或低于2.7nmol/l。相反，关于proADM或其片段水平高于6.5nmol/l，优选高于6.95nmol/l，更优选高于10.9nmol/l的实施方案应理解为关于proADM或其片段水平等于或高于6.5nmol/l，优选等于或高于6.95nmol/l，更优选等于或高于10.9nmol/l。
在本文所述的其它实施方案中，严重水平优选地由临界值限定，所述临界值代表低、中或高严重水平之间的边界。因此，呈现临界值的任何实施方案都可以使用单个临界值作为两个严重水平之间的边界或者针对每个严重水平使用单个临界值的格式。
在一些实施方案中，介于低和中严重水平之间的proADM临界值为：
2.75nmol/l±20％，或2.75nmol/l±15％、或±12％、±10％、±8％或±5％，
以及介于中和高严重水平之间的proADM临界值为：
10.9nmol/l±20％，或10.9nmol/l±15％、或±12％、±10％、±8％或±5％。
这些临界值优选地与基线时，换句话说在诊断和/或治疗开始和/或住院时的proADM严重水平的评估有关。通过例如在最初的单个时间点进行的单个测量或多个测量得到的基线水平本身能够指示液体疗法处方。
在一些实施方案中，介于低和中严重水平之间的proADM临界值为：
2.80nmol/l±20％，或2.80nmol/l±15％、或±12％、±10％、±8％或±5％，
并且介于中和高严重水平之间的proADM临界值为：
9.5nmol/l±20％，或9.5nmol/l±15％、或±12％、±10％、±8％或±5％。
这些临界值优选地与1天后，换句话说在基线后约24小时，换句话说在诊断和/或治疗开始和/或住院后约1天的proADM严重水平的评估有关。例如，在治疗开始后第一天测量proADM的实施方案中，可以采用第1天的临界值。从上面可以明显看出，介于中和高之间的临界值略低于基线时，即随着时间的流逝，甚至略低(但仍然相对较高)的水平也与高风险相关并且被归类为高严重水平。
在一些实施方案中，介于低和中严重水平之间的proADM临界值为：
2.80nmol/l±20％或2.80nmol/l±15％、或±12％、±10％、±8％或±5％，
并且介于中和高严重水平之间的proADM临界值为：
7.7nmol/l±20％或7.7nmol/l±15％、或±12％、±10％、±8％或±5％。
这些临界值优选地与4天后，换句话说在基线后约4天，换句话说在诊断和/或治疗开始和/或住院后约4天的proADM严重水平的评估有关。例如，在治疗开始后第4天测量proADM的实施方案中，可以采用第4天的临界值。从上面可以明显看出，介于中和高之间的临界值略低于基线或第1天时，即随着时间的流逝，甚至略低(但仍然相对较高)的水平也与高风险相关并且被归类为高严重水平。
在一些实施方案中，可以根据取决于进行测量的日期的适当水平来调整在上述实施方案中采用的临界水平。每个临界值由于技术人员可能预期的共同方差而经受一些变化。如下文所呈现，相关的临界水平是基于大量数据确定的，但是在所有可能的实施方案中均不希望其为最终或精确值。通过使用如可以由技术人员确定的与所述相似的临界值，即在±20％、±15％、±12％、±10％、±8％或±5％内，可以预期相似的结果。
列举给定临界值的±20％的任何实施方案可以被认为也公开±15％、±12％、±10％、±8％或±5％。
列举基线、第1天或第4天的特定临界值的任何实施方案都可以被认为也公开了其它几天的相应临界值，例如，列举基线临界值的实施方案可以被认为也涉及列举第1天或第4天临界值的相同实施方案。
临界值在优选实施方案中适用于血液样本或源自血液的样本，但不限于此。
在本发明的实施方案中，等于或高于高严重水平(临界值)的proADM或其片段的水平指示开始或改变患者的治疗，例如提供皮质类固醇，血液或血小板输注，血液成分如血清、血浆或特定细胞或其组合的输注，促进凝血细胞形成的药物，病因治疗或进行脾切除术。优选地，可以鉴定凝血系统失调的原因并治疗(病因治疗)。
根据另一个实施方案，患者是重症监护病房(ICU)患者，其中
-低于低严重水平(临界值)的proADM或其片段的水平指示所述患者从ICU出院，或
-等于或高于高严重水平(临界值)的proADM或其片段的水平指示改变患者在ICU中的治疗。
本发明的一个特别的优点是，基于所测定的proADM或其片段的水平的分类，有可能评估患者健康方面的未来不良事件发生的可能性。基于此评估，可以调整下一个治疗方案和决策。
在本发明的意义上，治疗修改将包括但不限于调整进行中的药物治疗的剂量或施用方案，将进行中的治疗改变为不同的治疗，在进行中的治疗中增加其它治疗方案或停止进行中的治疗或鉴定和治疗功能障碍的原因。在本专利申请的详细描述中已经公开了可以在本发明的上下文中应用于患者的不同治疗。
在本发明的优选实施方案中，所述方法另外包括测定从患者分离的样本中一种或多种额外标志物的水平。
可以在与所述患者相同或不同的样本中测定一种或多种额外标志物。在不同样本的情况下，可以在分离样本的同时、之前或之后分离样本以测定proADM或其片段。不论在相同或不同样本中是否测定一种或多种额外标志物，都可以与proADM测量并行地、同时地、在其之前和/或之后进行测量。
在一个优选的实施方案中，一种或多种额外标志物包括血液样本中的血小板水平。
在一个实施方案中，一种或多种额外标志物包括PCT或其片段。
将proADM或其片段的测定与样本中血小板水平的测定相结合是特别有利的，其中用于测定proADM的样本可以与用于进行血小板计数的样本相同或不同。
根据本发明的另一个优选的实施方案，本文描述的方法另外包括：
-测定从患者分离的样本中的血小板水平，或
-测定从患者分离的第一样本中的血小板水平，其中所述第一样本是在诊断和治疗开始的时间点之前、之时或之后分离的，
-测定从所述患者分离的第二样本中的血小板水平，其中所述第二样本已在所述第一样本后，优选在分离所述第一样本后的30分钟内，或在分离所述第一样本后的30分钟、1小时、2小时、6小时、12小时、24小时、4天、7天或10天分离，以及
-测定所述第二样本中的血小板水平与所述第一样本中的血小板水平相比的差异。
在其它实施方案中，一种或多种额外标志物包括凝血系统失调(例如弥散性血管内凝血(DIC)或血小板减少)的一种或多种标志物，其包括膜微粒，血小板计数，平均血小板体积(MPV)sCD14-ST，凝血酶原酶、抗凝血酶和/抗凝血酶活性，阳离子蛋白18(CAP18)，vonWillebrand因子(vWF)裂解蛋白酶，脂蛋白与CRP的组合，血纤维蛋白原，血纤维蛋白，B2GP1，GPIIb-IIIa，血纤维蛋白的非变性D-二聚体，血小板因子4，组蛋白和PT测定。在实施方案中，额外的一种或多种标志物包括一种或多种组蛋白。
在本发明的实施方案中，在具有肝素施用的患者中进行治疗指导方法的情形下测定proADM以预测血小板减少，例如调整/改变药物治疗直到患者显示正常的血小板计数和/或proADM水平低于本文公开的临界值为止。
在本发明的实施方案中，在具有抗微生物治疗的患者中进行治疗指导方法的情形下测定proADM以预测白细胞减少，例如调整/改变药物治疗直到患者显示正常的血小板计数和/或proADM水平低于本文公开的临界值为止。
在其它实施方案中，PCT包括在监测中，例如为了抗生素管理和/或防止滥用抗生素和/或防止副作用，例如降低获得血小板减少或DIC的风险。在这种情形下，可以测定血小板计数作为额外标志物。
在本发明的实施方案中，在血小板输注的情形下测定proADM。在其它实施方案中，PCT包括在监测中，例如用于检测细菌感染，用于抗生素管理和/或防止滥用抗生素和/或防止副作用，例如降低获得血小板减少或DIC的风险。在这种情形下，可以测定血小板计数作为额外标志物。
在本发明的实施方案中，在用于预测和/或诊断患者(例如休克患者或败血性休克患者)中的凝血系统失调、DIC和/或血小板减少的方法的情形下测定proADM，其中优选测定PCT作为额外标志物。
在本发明的实施方案中，可确定绝对未成熟血小板计数(AIPC)作为额外标志物。
在本发明的实施方案中，proADM是比血小板计数更好的用于预测获得DIC或血小板减少的标志物。在实施方案中，治疗可以是液体管理。
在实施方案中，通常具有较高proADM的急性肾损伤(AKT)+/-连续肾脏替代疗法(CRRT)、社区获得性肺炎(CAP)、败血症患者和ICU患者的死亡率风险较高。
在一个实施方案中，本发明另外包括将本文所述方法的结果告知患者。
在一个实施方案中，所述方法能够对具有异常血小板水平的患者中的不良事件进行预后、风险评估或风险分层，所述方法包括：
a.提供所述患者的样本，
b.测定所述样本中肾上腺髓质素原(proADM)或其片段的水平，
c.其中所述proADM或其片段的水平与所述异常血小板水平以及在所述患者中发生不良事件的可能性相关。
在一个实施方案中，不良事件是死亡、败血症相关死亡、器官衰竭和/或器官功能障碍中的一种或多种。
在一个实施方案中，器官衰竭或器官功能障碍与血小板减少相关。
在一个实施方案中，测量至少一种额外标志物或临床参数，所述额外标志物或临床参数优选选自由以下组成的组：降钙素原，组蛋白3，组蛋白2A，组蛋白2B，组蛋白4或其片段，血小板计数，平均血小板体积和/或一种或多种凝血系统失调标志物。
在一个实施方案中，患者显示出感染性疾病或败血症的症状，或者被诊断出具有感染性疾病和/或一种或多种现有器官衰竭，或者已被诊断为患有败血症、重度败血症或败血性休克。
在另一个实施方案中，所述方法能够对患者中的败血性血小板减少进行测定、诊断、预后、治疗指导、治疗监测、风险评估和/或风险分层，所述方法包括：
a.提供所述患者的样本，
b.测定所述样本中肾上腺髓质素原(proADM)或其片段的水平，以及
c.测定所述样本中降钙素原(PCT)或其片段的水平，
d.其中当降钙素原(PCT)或其片段的水平≥0.5ng/ml时，表明存在败血症或获得败血症的风险增加，并且其中当proADM水平或其片段≥2.75nmol/L时，表明存在血小板减少或获得血小板减少的风险增加。
该实施方案能够实现先前无法从本领域获得的有益功能的组合，其使得专业人员不仅能够鉴定败血病的存在，而且能够启动针对改善血小板水平的定向治疗。使用本领域公认的已知值，PCT或其片段的水平升高表明存在感染性疾病，特别是败血症。与指示血小板水平的ADM测量相结合，优选接着采取适当的血小板或凝血细胞改善措施，可为专业人员带来败血症潜在病理过程的飞跃，从而可以进行改善的更快治疗。
本发明还涉及一种用于实施本文所述方法的试剂盒，其包括：
a.检测试剂，其用于测定来自受试者的样本中proADM或其片段的水平，以及任选地另外用于测定PCT或其片段和/或如本文所述的一种或多种额外标志物的水平，和
b.参考数据，例如对应于proADM的高严重水平的参考水平，其中所述高严重水平高于6.5nmol/l，优选高于6.95nmol/l，更优选高于10.9nmol/l，以及任选地PCT水平和/或如本文所述的一种或多种额外标志物的水平，其中所述参考数据存储在计算机可读介质上和/或以计算机可执行代码的形式使用，所述计算机可执行代码被配置用于比较所测定的proADM或其片段的水平和任选地另外所测定的PCT或其片段和/或如本文所述的额外标志物的水平与所述参考数据。
在一些实施方案中，所述试剂盒另外包括用于改善血小板水平的治疗剂，如本文更详细描述的。
用于测定proADM或其片段的水平以及任选地用于测定PCT或其片段和/或本发明的额外标志物的水平的检测试剂优选选自执行所述方法所必需的那些，例如，针对proADM的抗体，合适的标记，例如荧光标记，优选适用于BRAHMS KRYPTOR测定法、样本收集管的两个单独的荧光标记。
在本文所述方法的一个实施方案中，使用选自由以下组成的组的方法测定proADM或其片段以及任选地另外其它生物标志物例如PCT或其片段的水平：质谱法(MS)，发光免疫测定法(LIA)，放射免疫测定法(RIA)，化学发光和荧光免疫测定法，酶免疫测定法(EIA)，酶联免疫测定法(ELISA)，基于发光的珠粒阵列，基于磁珠的阵列，蛋白质微阵列测定法，快速测试格式例如免疫色谱带测试，稀有穴状化合物测定法和自动化系统/分析仪。
根据本发明的方法还可以作为均相方法实现，其中由待检测的一种或多种抗体和标志物例如proADM或其片段形成的夹心复合物保持悬浮在液相中。在这种情况下，优选的是，当使用两种抗体时，两种抗体都用检测系统的一部分标记，如果两种抗体都整合到单一夹心中，则会导致信号的产生或信号的触发。
这样的技术将具体作为荧光增强或荧光猝灭检测方法实现。一个特别优选的方面涉及成对使用的检测试剂的使用，例如US 4 882 733 A、EP-B1 0 180 492 或EP-B1 0 539477和其中引用的现有技术中所述者。以这种方式，在反应混合物中仅检测在单个免疫复合物中直接包含两种标记组分的反应产物的测量成为可能。
例如，这些技术以商标名(时间分辨扩增穴状化合物发射)或/>口提供，实现了上述应用的教导。因此，在特定的优选方面，使用诊断设备来执行本文提供的方法。例如，测定了本文提供的方法的proADM蛋白或其片段的水平，和/或任何其它标志物的水平。在特别优选的方面，诊断设备是/>
在本文描述的方法的一个实施方案中，所述方法是免疫测定法并且其中所述测定法以均相或异相进行。
在本文描述的方法的其它实施方案中，所述方法另外包括对来自所述患者的样本进行分子分析以检测感染。用于分子分析以检测感染的样本优选是血液样本或其片段，例如血清、血浆或全血。在一个优选的实施方案中，分子分析是旨在检测一种或多种源自病原体的生物分子的方法。所述一种或多种生物分子可以是核酸、蛋白质、糖、碳水化合物、脂质和或其组合，例如糖基化蛋白质，优选是核酸。所述生物分子优选对一种或多种病原体具有特异性。根据优选的实施方案，通过一种或多种用于分析生物分子的方法来检测这样的生物分子，所述方法选自包括以下的组：核酸扩增方法，例如PCR、qPCR、RT-PCR、qRT-PCR，高通量测序(例如NGS)或等温扩增，质谱法，酶活性检测和基于免疫测定的检测方法。分子分析的其它方法是本领域技术人员已知的，并且包括在本发明的方法中。
在本文所述方法的一个实施方案中，第一抗体和第二抗体分散存在于液体反应混合物中，并且其中作为基于荧光或化学发光消光或扩增的标记系统的一部分的第一标记组分与第一抗体结合，而所述标记系统的第二标记组分与第二抗体结合，以便在两种抗体均与待检测的所述proADM或其片段结合后，产生可测量的信号，其允许检测在测量溶液中所产生的夹心复合物。
在本文描述的方法的一个实施方案中，标记系统包括稀土穴状化合物或螯合物与荧光或化学发光染料、特别是花青型染料的组合。
在本文所述方法的一个实施方案中，所述方法另外包括将已诊断为重症并且正在接受医学治疗或处于获得或具有凝血系统失调风险中的患者中的已测定的proADM或其片段的水平与对应于proADM或其片段的参考水平、阈值和/或群体平均值进行比较，其中所述比较是在计算机处理器中使用计算机可执行代码进行的。
本发明的方法可以部分地由计算机实现。例如，比较标志物(例如proADM或其片段)的检测水平与参考水平的步骤可以在计算机系统中执行。在计算机系统中，可以将所测定的一种或多种标志物水平与受试者的其它标志物水平和/或参数组合以计算评分，所述评分指示诊断、预后、风险评估和/或风险分层、治疗指导和患者管理。例如，所测定的值可以被输入(由医疗专业人员手动输入或者从已经测定相应标志物水平的设备自动输入)到计算机系统中。所述计算机系统可以直接位于护理点(例如，初级护理、ICU或ED)，或者其可以位于经由计算机网络(例如经由互联网或专业化医疗云系统，任选地可与其它IT系统或平台如医院信息系统(HIS)组合)连接的远程位置。通常，计算机系统将在计算机可读介质上存储值(例如标志物水平或参数，例如年龄、血压、体重、性别等，或临床评分系统，例如SOFA、qSOFA、BMI、PCT、血小板计数等)，并基于预定义和/或预存储的参考水平或参考值计算评分。所得评分将为用户(通常是医疗专业人员，例如医师)显示和/或打印。可选地或另外地，相关的预后、诊断、评估、治疗指南、患者管理指南或分层将被显示和/或打印给用户(通常是医疗专业人员，例如医师或护士)。
在本发明的一个实施方案中，可以使用一种软件系统，其中机器学习算法是显而易见的，优选地使用来自电子健康记录(EHR)的数据来鉴定有败血症、重度败血症和败血性休克风险的住院患者。可以使用来自患者的EHR数据(例如实验室、生物标志物表达、生命力和人口统计学)在随机森林分类器上训练机器学习方法。机器学习是一种人工智能，它使计算机能够学习数据中的复杂模式而无需进行显式编程，这与基于简单规则的系统不同。早期的研究使用电子健康记录数据来触发警报，以检测总体临床恶化。在本发明的一个实施方案中，可以将proADM水平的处理结合到适当的软件中以与现有数据集进行比较，例如还可以在机器学习软件中对proADM水平进行处理，以帮助诊断或预测不良事件、凝血失调例如血小板减少或DIC的发生。
proADM或其片段与另一种生物标志物如PCT或CRP的组合使用可以在单个多重测定法中或在对患者样本进行的两个单独测定法中实现。所述样本可以涉及相同样本或不同样本。用于检测和测定proADM和例如PCT的测定法也可以相同或不同，例如可以使用免疫测定法来测定上述标志物之一。合适的测定法的更详细描述在下面提供。
可以通过先前描述的方法测定已经被诊断为重症并且正在接受治疗或处于获得或具有凝血系统失调的风险中的患者中的proADM或其片段的临界值和其它参考水平。例如，技术人员已知使用变异系数来评估定量测定法的变异性以确定参考值和/或临界值的方法(George F.Reed等，Clin Diagn Lab lmmunol.2002；9(6)：1235-1239)。
另外，可以确定功能测定敏感性，以便根据公认技术指示用作参考水平或临界值的统计学显著值。实验室能够根据临床相关方案独立确定测定法的功能敏感性。“功能敏感性”可以被认为是导致变异系数(CV)为20％(或一些其它预定CV％)的浓度，因此是测定法在低分析物水平下的精确性的量度。因此，CV是标准偏差(SD)的标准化，其允许比较变异性估计值，而与分析物浓度的大小无关，至少在整个大部分测定工作范围内都是如此。
此外，基于ROC分析的方法可用于确定两个临床患者组之间的统计学显著差异。接受者操作特征(ROC)曲线测量模型对响应水平进行分类的拟合概率的分类效率。ROC曲线还可以帮助设置诊断测试中的标准点。对角线的曲线越高，拟合越好。如果逻辑拟合具有两个以上的响应水平，则会生成广义的ROC曲线。在这样的图中，每个响应水平都有一条曲线，即该水平相对于所有其它水平的ROC曲线。可以使用能够进行这种分析以确定合适的参考水平和临界值的软件，例如来自SAS的统计软件R(版本3.1.2)、JMP 12、JMP 13、StatisticsDiscovery。
可以类似地对PCT确定临界值。技术人员可以使用文献来确定适当的临界值，例如Philipp Schuetz等(BMC Medicine.2011；9：107)描述，在0.1ng/mL的临界值下，PCT具有非常高的敏感性来排除感染。Terence Chan等(Expert Rev.Mol.Diagn.2011；11(5)，487.496)描述了基于敏感性和特异性计算的指标，例如正似然比和负似然比，也可用于评估诊断测试的强度。通常将多个临界值(CV)的值绘制成曲线，作为接受者操作特征曲线。曲线值下方的面积用于确定最佳诊断相关CV。该文献描述了CV的变化(临界值，取决于测定法和研究设计)，以及确定临界值的合适方法。
proADM或其片段的群体平均水平也可以用作参考值，例如平均proADM群体值，从而可以将诊断为重症的患者(例如凝血系统失调的患者)与对照群体进行比较，其中对照组优选包含多于10、20、30、40、50个或更多个受试者。
在本发明的一个实施方案中，当使用例如Luminex MAC Pix E-Bioscience测定法或BRAHMS PCT Kryptor测定法时，血清样本中PCT的临界水平可以是在0.01至100.00ng/mL范围内的值。
在一个优选的实施方案中，PCT的临界水平可以在0.01至100、0.05至50、0.1至20、或0.1至2ng/mL的范围内，并且最优选＞0.05至10ng/mL。在这些范围内的任何值都可以被认为是适当的临界值。例如，可以使用0.01、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100ng/mL。在一些实施方案中，健康受试者的PCT水平为约0.05ng/mL。
举例来说，从下面的一项研究得出的数据表明，血小板水平异常低的败血症患者的PCT值＞7ng/ml。
本文公开的本发明的各种方法和试剂盒中的每一种的优点和实施方案也对于相应的其它方法和试剂盒适用和解释。
涉及确定用于治疗监测(包括对患者健康方面的后续不良事件进行预后、风险评 估和/或风险分层)的方法的本发明实施方案
如上所述，在一些实施方案中，后续不良事件是血小板减少、DIC、感染、器官衰竭、器官功能障碍和/或死亡中的一种或多种。
本发明涉及一种用于治疗监测的方法，所述方法包括对患者健康方面的后续不良事件进行预后、风险评估和/或风险分层，所述方法包括：
-提供所述患者的样本，其中所述患者已经诊断为重症和/或已经开始医学治疗，其中在诊断和治疗开始后从所述患者中分离样本，
-测定所述样本中proADM或其片段的水平，
-其中所述proADM或其片段的水平与所述患者健康方面的后续不良事件的可能性相关。
在一个实施方案中，本发明方法的患者已经被诊断为重症并且已经接受治疗。因此，本发明的方法可以用于在确定后续不良事件的可能性的基础上监测已经开始的治疗或疗法的成功。治疗监测优选涉及不良事件的预后和/或患者关于未来不良事件的风险分层或风险评估，其中该风险评估和所述风险的确定应被视为监测开始治疗的手段。
正在治疗被诊断为重症的患者的医师或医务人员可以在不同的临床环境(例如初级护理环境)中或优选在医院环境中(例如在急诊室中或在重症监护病房(ICU)中)采用本发明的方法。所述方法对于监测已开始对重症患者进行治疗的效果非常有用，并且可用于判断接受治疗的患者是否为高风险患者，所述高风险患者应接受严密的医学观察并应可能接受额外治疗措施，或者所述患者是否为健康状况改善的低风险患者，其可能不需要采取严密的观察和进一步的治疗措施，这可能是因为开始的治疗成功改善了患者的状况。重症患者的初始治疗可能直接影响患者健康方面的不良事件的可能性。因此，对未来不良事件的风险/预后的评估提供了对所研究的疗法的反馈或监测。
可以通过比较样本中proADM或其片段的水平与参考水平(例如阈值或临界值和/或群体平均值)的比较来评估发生后续不良事件的可能性，其中参考水平可能对应于健康患者中或已被诊断为重症患者中的proADM或其片段。
因此，本发明的方法可以帮助预测患者健康方面的后续不良事件的可能性。这意味着，本发明的方法可以将更可能遭受并发症困扰或者状态在未来将变得更加严重的高风险患者与健康状况稳定或甚至改善的低风险患者区分开来，因此预计他们不会遭受不良事件例如患者死亡或患者临床症状或体征恶化，这可能需要采取某些治疗措施。
本发明的方法的一个特别的优点是，通过本发明的方法被鉴定为低风险患者的患者可以更快地从ICU、一般医院出院，或者可能不需要那么频繁监测。同样，对于低风险患者，可以降低观测患者健康状况的强度和/或频率。因此，负责患者的医院或其它医疗机构可以更有效地决定哪些患者需要严密的医学护理和观察。因此，相应的医院或机构可以例如更有效地让高风险患者占用ICU病床。这将导致对高风险患者的医学护理改善，因为医务人员可以专注于此类患者，而低风险患者可以从ICU出院。这也将因避免不必要措施的费用而获得显著的益处，而这些不必要的措施原本将应用于低风险患者。
已经将患者被诊断为重症并且开始第一治疗措施的时间点定义为“时间点0”，其可以作为用于测定proADM或其片段的样本的分离时间点的参考。如果不能同时进行患者诊断和治疗启动，则时间点0是诊断和开始医学治疗两个事件中的较晚时间点。通常，在重症病人的诊断之后，立即或伴随着开始治疗或医学干预，例如手术和/或源控制(例如消除坏死组织)。在凝血功能障碍的情况下，干预的起点可能会根据疾患的严重程度或其它并发症而随时变化。
完全令人惊讶的是，来自患者的样本中的proADM或其片段的水平可以提供关于在所述重症患者的健康方面发生后续不良事件的可能性的重要信息。没有迹象表明在重症患者的诊断和治疗开始后对proADM或其片段的单次测量可以提供关于正在进行的治疗成功和患者健康状况的预后的此类重要信息。
在本发明的实施方案中，将proADM或其片段用作单个参数优于使用其它单个参数，例如生物标志物或临床评分，因为proADM相比于其它标志物在预测不良事件时更准确，所述其它标志物例如血小板计数，PCT，CRP，乳酸盐或临床评分如SOFA、SAPS II或APACHEII，和凝血系统失调标志物，例如膜微粒、血小板计数、平均血小板体积(MPV)、sCD14-ST、凝血酶原酶、抗凝血酶和/抗凝血酶活性、阳离子蛋白18(CAP18)、von Willebrand因子(vWF)裂解蛋白酶、脂蛋白与CRP的组合、血纤维蛋白原、血纤维蛋白、B2GP1、GPIIb-IIIa、血纤维蛋白的非变性D-二聚体、血小板因子4、组蛋白和PT测定。
根据一个优选的实施方案，在医学检查期间从患者中分离样本。
根据一个优选的实施方案，在所述诊断和治疗开始后30分钟内，或在所述诊断和治疗开始后至少30分钟、1小时、2小时、6小时、12小时、24小时、4天、7天或10天内从所述患者中分离样本。在其它实施方案中，在治疗开始后12-36小时和/或3-5天从所述患者中分离样本。
在诊断和治疗开始后短至约30分钟的某个时间点，proADM或其片段的水平可提供此类信息的事实是完全出乎意料的。
在本发明方法的优选实施方案中，在所述诊断和治疗开始后约30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、11小时、12小时、14小时、16小时、18小时、20小时、22小时、24小时、30小时、36小时、42小时、48小时、60小时、72小时、84小时、4天、5天、6天、7天、8天、9天或10天，从所述患者中分离所述样本。
在其它实施方案中，在所述诊断并开始抗生素治疗后30分钟至12小时、12-36小时、3-5天、7-14天、8-12天或9-11天的时间点分离样本。
任何给定上述值之间的范围可以用于限定获得样本的时间点。
在本发明的另一个优选的实施方案中，已经使用至少一种额外的生物标志物或临床评分来诊断患者。如果在时间点0对患者的严重疾患的初始诊断是至少部分地基于至少一种生物标志物的水平或所测定的临床评分，则在本发明的上下文中是特别有利的。
在某些实施方案中，本发明包括测定其它参数，例如标志物、生物标志物、临床评分等。
在本发明的另一个优选的实施方案中，已经使用以下来诊断患者：至少一种生物标志物或临床评分降钙素原(PCT)、乳酸盐和C反应蛋白和/或至少一种临床评分SOFA、APACHE II、SAPS II，和凝血系统失调标志物，例如膜微粒、血小板计数、平均血小板体积(MPV)、sCD14-ST、凝血酶原酶、抗凝血酶和/抗凝血酶活性、阳离子蛋白18(CAP18)、vonWillebrand因子(vWF)裂解蛋白酶、脂蛋白与CRP的组合、血纤维蛋白原、血纤维蛋白、B2GP1、GPIIb-IIIa、血纤维蛋白的非变性D-二聚体、血小板因子4、组蛋白和PT测定。在实施方案中，额外的一种或多种标志物包括一种或多种组蛋白。如果已根据这些标志物对患者进行诊断，则对已经诊断为重症且正在治疗的患者样本中的proADM或其片段进行测定被证明对治疗监测特别有用，因为与已经通过其它方式诊断的重症患者相比，此类患者群体中的患者的不良事件预后可能更为精确。
在本发明的一个实施方案中，重症患者是被诊断出具有凝血系统失调、感染性疾病或者有出现凝血系统失调、感染性疾病的风险的患者，被诊断出具有感染性疾病和一种或多种现有器官衰竭的患者，被诊断出具有败血症、重度败血症或败血性休克的患者和/或创伤后或手术后患者。根据本文提供的数据，proADM在这些患者群体的样本中的预后价值在预测这些患者发生不良事件的可能性方面特别准确。
在本发明的优选实施方案中，所述患者健康方面的不良事件是死亡，优选在诊断和治疗开始后28-90天内死亡，新的感染，器官衰竭和/或需要病灶清除术的临床症状恶化，输注血液制品，输注胶体，急诊手术，有创机械通气，药物不良反应和/或肾脏或肝脏替代。
在本发明的优选实施方案中，所述proADM或其片段的水平与在诊断和治疗开始后28天内所述患者健康方面的后续不良事件的可能性相关。在本发明的其它优选的实施方案中，所述proADM或其片段的水平与在诊断和治疗开始后90天内所述患者健康方面的后续不良事件的可能性相关。
在本发明的某些实施方案中，患者接受的治疗包括以下一种或多种：抗生素或抗感染治疗，有创机械通气，无创机械通气，肾脏替代疗法，使用血管加压药，液体疗法，血小板输注，血液输注，体外血液净化，源控制和/或器官保护。
在本发明的优选实施方案中，样本选自由以下组成的组：血液样本或其部分、血清样本、血浆样本和/或尿液样本。
在本发明的其它实施方案中，proADM或其片段的水平与所述患者健康方面的后续不良事件的可能性相关。在一个优选的实施方案中，proADM或其片段的水平与所述患者健康方面的后续不良事件的可能性正相关。换句话说，所测定的proADM水平越高，后续不良事件的可能性越大。
根据本发明的一个优选的实施方案，
-proADM或其片段的低严重水平指示不存在后续不良事件，或者指示后续不良事件的低风险，其中所述低严重水平低于4nmol/l，优选低于3nmol/l，更优选低于2.7nmol/l，或
-proADM或其片段的高严重水平指示后续不良事件，或者指示后续不良事件的高风险，其中所述高严重水平高于6.5nmol/l，优选高于6.95nmol/l，更优选高于10.9nmol/l。
根据本发明的一个优选的实施方案，
-proADM或其片段的水平低于4nmol/l，优选低于3nmol/l，更优选低于2.7nmol/l，指示不存在后续不良事件，或者指示后续不良事件的低风险，或
-proADM或其片段的水平高于6.5nmol/l，优选高于6.95nmol/l，更优选高于10.9nmol/l，指示后续不良事件，或指示后续不良事件的高风险。
根据本发明的一个优选的实施方案，
-proADM或其片段的低严重水平指示不存在后续不良事件，其中所述低严重水平低于2.7nmol/l，或
-proADM或其片段的高严重水平指示后续不良事件，其中所述高严重水平高于10.9nmol/l。
当在患者的诊断和治疗开始当天，特别是在诊断和治疗开始之后约30分钟分离的样本中测定proADM或其片段的水平时，本发明的该实施方案是特别有利的。
根据本发明的一个优选的实施方案，
-proADM或其片段的低严重水平指示不存在后续不良事件，其中所述低严重水平低于2.7nmol/l，或
-proADM或其片段的高严重水平指示后续不良事件，其中所述高严重水平高于10.9nmol/l，
-其中优选在诊断和治疗开始当天分离的样本中测定proADM或其片段的水平。
根据本发明的一个优选的实施方案，
-proADM或其片段的低严重水平指示不存在后续不良事件，其中所述低严重水平低于2.8nmol/l，或
-proADM或其片段的高严重水平指示后续不良事件，其中所述高严重水平高于9.5nmol/l。
当在所述诊断和治疗开始后第1天分离的样本中测定proADM或其片段的水平时，本发明的该实施方案是特别有利的。
根据本发明的一个优选的实施方案，
-proADM或其片段的低严重水平指示不存在后续不良事件，其中所述低严重水平低于2.8nmol/l，或
-proADM或其片段的高严重水平指示后续不良事件，其中所述高严重水平高于9.5nmol/l，
-其中优选在诊断和治疗开始后第1天分离的样本中测定proADM或其片段的水平。
举例来说，如果proADM或其片段的水平属于proADM的低严重水平的类别，则主治医师可以更有信心地决定让所述患者从ICU出院，因为优选在接下来的28天内，更优选在接下来的90天内，在所述患者的健康方面不太可能发生不良事件。因此，可能没有必要将该患者留在ICU。如通过对不良事件的风险进行测量所评估，此外还可能得出结论，进行中的治疗正在成功改善患者的健康状况。
相反，如果对所述ICU患者的proADM或其片段水平的测定表明proADM或其片段的严重水平高，则治疗医师应将患者留在ICU。另外，应该考虑调整患者的治疗，因为当前的治疗可能无法改善患者的健康状况，这就是患者将来更可能遭受不良事件的原因。
根据本发明的一个特别优选的实施方案，低严重水平低于2.75nmol/l，在所述诊断和治疗开始后1天或更长时间从ICU患者中分离出所述样本，并且proADM或其片段的低严重水平指示所述患者从ICU出院。
本发明进一步涉及一种用于治疗监测的方法，其包括对患者健康方面的后续不良事件进行预后、风险评估和/或风险分层，所述方法包括：
-提供所述患者的样本，其中所述患者是重症监护病房(ICU)患者并且已经开始医学治疗，其中在进入ICU并开始治疗后从所述患者中分离样本，
-测定所述样本中肾上腺髓质素原(proADM)或其片段的水平，
-其中所述proADM或其片段的水平与所述患者健康方面的后续不良事件的可能性相关。
在涉及ICU患者的本发明方法的上下文中，用于测定proADM或其片段的样本的分离时间点的参考是患者入住ICU并且开始第一治疗措施的时间点(时间点0)。该时间点对应于本发明方法中与已经被诊断为重症的患者有关的诊断和治疗开始的时间点。
与已经被诊断为重症的患者有关的本发明方法的所有实施方案在此也被认为对应于与ICU患者有关的本发明方法的实施方案。
涉及另外测定第一样本和第二样本中(或在第一样本和第二样本的分离时间点) 的PCT和/或其它生物标志物的水平或临床评分的本发明实施方案
本发明的一个优选实施方案包括另外测定从患者分离的样本中的PCT或其片段的水平。在一个优选的实施方案中，在诊断和治疗开始的时间点之前、之时或之后分离用于测定PCT或其片段水平的样本。
将样本中proADM或其片段的测定与PCT或其片段的测定相结合是特别有利的，其中用于测定proADM的样本可以与用于检测PCT的样本相同或不同。
无论是在同一样本中还是在不同时间点获得的样本中，proADM或其片段的测定与PCT或其片段的测定相结合，在确定后续不良事件风险的准确性和可靠性方面提供协同作用。对于proADM或其片段与其它标志物或临床评分(例如血小板计数、平均血小板体积(MPV)、乳酸盐、CRP、qSOFA、SOFA、SAPS II、APACHE II或其它临床评估)的组合评估，也存在这些协同作用。
根据本发明的另一个优选的实施方案，本文描述的方法另外包括：
-测定从所述患者分离的第一样本中的PCT或其片段的水平，其中所述第一样本在诊断和治疗开始的时间点之前、之时或之后分离，
-测定从所述患者分离的第二样本中的PCT或其片段的水平，其中所述第二样本已在所述第一样本之后，优选在所述第一样本分离后30分钟内或在所述第一样本分离后30分钟、1小时、2小时、6小时、12小时、24小时、4天、7天或10天后分离，以及
-确定第二样本中的PCT或其片段的水平与第一样本中的PCT或其片段的水平相比的差异。
将从患者分离的样本中的proADM或其片段的测定与第一样本中的PCT或其片段的测定以及在第一样本后分离的第二样本中测定PCT或其片段的水平相结合是特别有利的，其中用于测定proADM或其片段的样本可以与用于测定PCT或其片段的第一样本或第二样本相同或不同。
在本文描述方法的一个优选的实施方案中，所述方法另外包括：
-测定从患者分离的第一样本中的PCT或其片段的水平，其中所述第一样本在诊断和治疗开始的时间点(时间点0)之时或之前分离，
-测定在诊断和治疗开始后，优选在所述诊断和治疗开始后的30分钟内或者在所述诊断和治疗开始后的30分钟、1小时、2小时、6小时、12小时、24小时、4天、7天或10天从所述患者分离的第二样本(权利要求1的样本)中的PCT或其片段的水平，以及
-确定第二样本中的PCT或其片段的水平与第一样本中的PCT或其片段的水平相比的差异。
将proADM或其片段(在第二样本中)的测定与在时间点0从所述患者分离并且可用于将所述患者诊断为重症的较早样本(第一样本)中的PCT或其片段的测定以及在诊断和治疗开始后的特定时间点(其此外优选是与测定proADM或其片段的相同时间点)分离的第二样本中测定PCT或其片段的水平相结合是特别有利的。如以下数据所示，测定第二样本与第一样本相比的PCT或其片段水平的差异对于从第二样本中proADM或其片段水平获得的信息增添额外信息。与仅基于关于第二样本中proADM或其片段的水平的信息来预测不良事件的可能性相比，基于该组合信息，可能更有可能预测所述患者的健康方面是否会发生不良事件的可能性更高。这代表了令人惊讶的发现，因为败血症的生物标志物通常不具有协同性或互补性，而仅代表替代性诊断标志物。
在本文描述方法的一个优选的实施方案中，所述方法另外包括：
-测定从患者分离的第一样本中的血小板计数，其中所述第一样本是在诊断和治疗开始的时间点(时间点0)之时或之前分离，
-测定在所述诊断和治疗开始后的30分钟内或者在所述诊断和治疗开始后的至少30分钟、优选1小时、2小时、6小时、12小时、24小时、4天、7天或10天从所述患者分离的第二样本(权利要求1的样本)中的血小板计数，以及
-确定第二样本中的血小板计数与第一样本中的血小板计数相比的差异。
将样本中proADM或其片段的测定与血小板计数的测定相结合是特别有利的，其中用于测定proADM的样本可以与用于检测血小板计数的样本相同或不同。
本发明的一个优选的实施方案另外包括测定SOFA或qSOFA。在一个优选的实施方案中，在诊断和治疗开始的时间点之前、之时或之后测定qSOFA或SOFA。
将proADM或其片段的测定与SOFA测定相结合是特别有利的，其中用于测定proADM的样本分离的时间点可以与测定SOFA的时间点相同或不同。
根据本发明的另一个优选的实施方案，本文描述的方法另外包括：
-在诊断和治疗开始之前、之时或之后测定第一SOFA，
-在测定第一SOFA后的30分钟内或者在测定第一SOFA后的30分钟、1小时、2小时、6小时、12小时、24小时、4天、7天或10天测定第二SOFA，以及
-确定两个所测定SOFA的差异。
在本文描述方法的一个优选的实施方案中，所述方法另外包括：
-在诊断和治疗开始的时间点(时间点0)之时或之前测定SOFA，
-在所述诊断和治疗开始后30分钟内或者在所述诊断和治疗开始后至少30分钟、优选1小时、2小时、6小时、12小时、24小时、4天、7天或10天测定SOFA，以及
-确定在所述诊断和治疗开始后测定的SOFA与在时间点0时测定的SOFA之间的差异。
本发明的一个优选的实施方案包括另外测定SAPS II。在一个优选的实施方案中，在诊断和治疗开始的时间点之前、之时或之后测定SAPS II。
将proADM或其片段的测定与SAPS II的测定相结合是特别有利的，其中用于测定proADM的样本分离的时间点可以与测定SAPS II的时间点相同或不同。
根据本发明的另一个优选的实施方案，本文描述的方法另外包括：
-在诊断和治疗开始之前、之时或之后测定第一SAPS II，
-在测定第一SOFA后的30分钟内或在测定第一SAPS II后的30分钟、1小时、2小时、6小时、12小时、24小时、4天、7天或10天测定第二SAPS II，以及
-确定两个所测定的SAPS II的差异。
在本文描述方法的一个优选的实施方案中，所述方法另外包括：
-在诊断和治疗开始的时间点(时间点0)之时或之前测定SAPS II，
-在所述诊断和治疗开始后30分钟内或在所述诊断和治疗开始后至少30分钟、优选1小时、2小时、6小时、12小时、24小时、4天、7天或10天测定SAPS II，以及
-确定在所述诊断和治疗开始之后测定的SAPS II与在时间点0测定的SAPS II之间的差异。
本发明的一个优选的实施方案另外包括测定APACHE II。在一个优选的实施方案中，在诊断和治疗开始的时间点之前、之时或之后测定APACHE II。
将proADM或其片段的测定与APACHE II测定相结合是特别有利的，其中用于测定proADM的样本分离的时间点可以与测定APACHE II的时间点相同或不同。
根据本发明的另一个优选的实施方案，本文描述的方法另外包括：
-在诊断和治疗开始之前、之时或之后测定第一APACHE II，
-在测定第一APACHE II后30分钟内或在测定第一APACHE II后的30分钟、1小时、2小时、6小时、12小时、24小时、4天、7天或10天测定第二APACHE II，以及
-确定两个所测定的APACHE II的差异。
在本文描述方法的一个优选的实施方案中，所述方法另外包括：
-在诊断和治疗开始的时间点(时间点0)之时或之前测定APACHE II，
-在所述诊断和治疗开始后30分钟内或在所述诊断和治疗开始后至少30分钟、优选1小时、2小时、6小时、12小时、24小时、4天、7天或10天测定APACHE II，以及
-确定在所述诊断和治疗开始后测定的APACHE II与在时间点0测定的APACHE II的差异。
在一个优选的实施方案中，有可能鉴定出PCT水平升高和proADM或其片段的高严重水平的高风险患者，这代表了对未来很可能遭受不良事件的这类患者的更准确鉴定。因此，可以在最小化该患者可能是低风险患者的风险的同时调整这些患者的治疗。
涉及测定第一样本和第二样本中proADM或其片段的水平的本发明实施方案
本发明方法的一个优选的实施方案另外包括：
-测定从患者分离的第一样本中的proADM或其片段的水平，其中所述第一样本在诊断和治疗开始的时间点之前、之时或之后分离，以及
-测定从所述患者分离的第二样本中的proADM或其片段的水平，其中所述第二样本已经在第一样本之后以及在诊断和治疗开始的时间点之后分离，优选在分离第一样本后的30分钟内或在分离第一样本后的30分钟、1小时、2小时、6小时、12小时、24小时、4天、7天或10天分离，以及
-确定第二样本中proADM或其片段的水平相比于第一样本中proADM或其片段的水平的差异是否明显。
用于测定proADM或其片段的水平的第一和第二样本可以与用于测定PCT或其片段的水平的第一和第二样本相同或不同。
本发明方法的一个优选的实施方案另外包括：
-测定从患者分离的第一样本中proADM或其片段的水平，其中所述第一样本在诊断和治疗开始的时间点(时间点0)之时或之前分离，以及
-测定在诊断和治疗开始后，优选在所述诊断和治疗开始后的30分钟内或在30分钟、1小时、2小时、6小时、12小时、24小时、4天、7天或10天后分离的第二样本中的proADM或其片段的水平，以及
-确定第二样本中的proADM或其片段的水平相比于第一样本中的proADM或其片段的水平的差异是否明显。
本发明方法的一个优选的实施方案另外包括：
-测定从患者分离的第一样本中的proADM或其片段的水平，其中所述第一样本用于将所述患者诊断为重症(时间点0)，以及
-测定在诊断和治疗开始后，优选在所述诊断和治疗开始后的30分钟内或在30分钟、1小时、2小时、6小时、12小时、24小时、4天、7天或10天后分离的第二样本中的proADM或其片段的水平，以及
-确定第二样本中的proADM或其片段的水平相比于第一样本中的proADM或其片段的水平的差异是否明显。
本发明方法的另一个优选的实施方案另外包括：
-测定从患者分离的第一样本中的proADM或其片段以及任选地PCT或其片段的水平，其中所述第一样本在诊断和开始治疗的时间点(时间点0)之时或之前分离，以及
-测定在所述诊断和治疗开始后，优选在诊断和治疗开始后的30分钟内或至少30分钟，优选在所述诊断和治疗开始后1小时、2小时、6小时、12小时、24小时、4天、7天或10天从所述患者分离的第二样本中的proADM或其片段以及任选地PCT或其片段的水平，以及
-确定第二样本中的proADM或其片段的水平相比于第一样本中的proADM或其片段的水平差异和/或PCT或其片段的水平差异。
本发明方法的另一个优选的实施方案另外包括
-测定从患者分离的第一样本中的proADM或其片段以及任选地PCT或其片段的水平，其中所述第一样本用于将所述患者诊断为重症(时间点0)，以及
-测定在所述诊断和治疗开始后，优选在所述诊断和治疗开始后30分钟内或至少30分钟，优选在所述诊断和治疗开始后1小时、2小时、6小时、12小时、24小时、4天、7天或10天从所述患者分离的第二样本中的proADM或其片段以及任选地PCT或其片段的水平，以及
-确定第二样本中的proADM或其片段的水平相比于第一样本中的proADM或其片段的水平差异和/或PCT或其片段的水平差异。
令人惊讶的是，测定从诊断和治疗开始的时间点到稍后时间点的proADM或其片段的水平变化可以提供关于已被诊断为重症的患者(例如该患者已被诊断出具有血小板减少)的健康方面的未来不良事件发生的额外信息。本发明的该实施方案的一个很大的优点是，在时间点0用于测定诊断标志物的同一样本也可以用于测定proADM或其片段的基线水平，可以将其与诊断和治疗开始后的稍后时间点的proADM或其片段的水平进行比较。通过测定患者治疗过程中proADM或其片段水平的变化，可以进一步提高预测患者健康方面的不良事件发生的准确性。
在本文所述方法的一个实施方案中，第二样本相比于第一样本的proADM或其片段的水平升高指示后续不良事件。
令人惊讶的是，基于proADM或其片段的水平的变化，有可能可靠地预测患者健康方面的不良事件发生的可能性而无需测定其它标志物。从诊断和治疗开始的时间点开始，proADM或其片段的水平或严重水平增加指示可能会发生不良事件。因此，基于proADM或其片段在治疗过程中的变化，医师可以决定是改变或修改患者的治疗还是坚持初始治疗。
在本发明方法的一个优选的实施方案中
-与第一样本相比，第二样本中proADM或其片段的水平升高和PCT或其片段的水平升高指示后续不良事件，和/或
在本发明的一些实施方案中，与第一样本相比，第二样本中proADM或其片段的水平升高涉及proADM或其片段的严重水平升高。相反，在本发明的一些实施方案中，第二样本与第一样本相比的proADM或其片段的水平较低是指第二样本与第一样本相比的proADM或其片段的严重水平较低。
一个很大的优点是，基于在重症病人治疗过程中proADM或其片段水平的变化以及所测定的PCT或其片段的变化，可以评估患者健康方面的不良事件的可能性。因此，可以基于这两种标志物的变化来可靠地鉴定高风险患者和低风险患者。
有利的是，通过在ICU患者中分离第二样本的时间点(较晚的时间点)对PCT或其片段的水平变化和proADM或其片段的严重水平的组合分析，可以决定患者是否是可以维持进行中治疗的同时从ICU出院的低风险患者，或者患者是否是需要修改或调整ICU的现有疗法以预防由PCT水平变化和proADM当前严重水平的相应组合表示的不良事件发生的高风险患者。
在另一个实施方案中，本发明涉及一种用于实施本发明方法的试剂盒，其中所述试剂盒包括：
-检测试剂，其用于测定proADM或其片段的水平以及任选地另外用于测定PCT的水平，以及
-参考数据，例如对应于proADM的高和/或低严重水平以及任选地PCT的参考水平，其中所述低严重水平低于4nmol/l，优选低于3nmol/l，更优选低于2.7nmol/l，并且所述高严重水平高于6.5nmol/l，优选高于6.95nmol/l，更优选高于10.9nmol/l，其中所述参考数据优选存储在计算机可读介质上和/或以计算机可执行代码形式使用，所述计算机可执行代码被配置用于比较所测定的proADM或其片段的水平以及任选地另外所测定的PCT、乳酸盐和/或C反应蛋白或其片段的水平与所述参考数据。
在另一个实施方案中，本发明涉及一种用于实施本发明方法的试剂盒，其中所述试剂盒包括：
-检测试剂，其用于测定来自受试者的样本中proADM或其片段的水平，以及任选地另外用于测定PCT和/或一种或多种凝血系统失调标志物的水平，所述标志物例如膜微粒、血小板计数、平均血小板体积(MPV)、sCD14-ST、凝血酶原酶、抗凝血酶和/抗凝血酶活性、阳离子蛋白18(CAP18)、von Willebrand因子(vWF)裂解蛋白酶、脂蛋白与CRP的组合、血纤维蛋白原、血纤维蛋白、B2GP1、GPIIb-IIIa、血纤维蛋白的非变性D-二聚体、血小板因子4、组蛋白和PT检定，以及
-参考数据，例如对应于proADM的高和/或低严重水平的参考水平，其中所述低严重水平低于4nmol/l，优选低于3nmol/l，更优选低于2.7nmol/l，并且所述高严重水平高于6.5nmol/l，优选高于6.95nmol/l，更优选高于10.9nmol/l，以及对应于任选地PCT和/或一种或多种凝血系统失调标志物的参考水平，所述凝血系统失调标志物例如膜微粒、血小板计数、平均血小板体积、sCD14-ST、凝血酶原酶、抗凝血酶和/抗凝血酶活性、阳离子蛋白18(CAP18)、von Willebrand因子(vWF)裂解蛋白酶、脂蛋白与CRP的组合、血纤维蛋白原、血纤维蛋白、B2GP1、GPIIb-IIIa、血纤维蛋白的非变性D-二聚体、血小板因子4、组蛋白和PT测定，其中所述参考数据优选存储在计算机可读介质上和/或以计算机可执行代码的形式使用，所述计算机可执行代码被配置用于比较所测定的proADM或其片段的水平以及任选地另外所测定的PCT和/或一种或多种凝血系统失调标志物的水平与所述参考数据，所述凝血系统失调标志物例如膜微粒、血小板计数、平均血小板体积(MPV)、sCD14-ST、凝血酶原酶、抗凝血酶和/抗凝血酶活性、阳离子蛋白18(CAP18)、von Willebrand因子(vWF)裂解蛋白酶、脂蛋白与CRP的组合、血纤维蛋白原、血纤维蛋白、B2GP1、GPIIb-IIIa、血纤维蛋白的非变性D-二聚体、血小板因子4、组蛋白和PT测定。
在另一个实施方案中，本发明涉及一种用于实施本发明方法的试剂盒，其中所述试剂盒包括：
-检测试剂，其用于测定来自受试者的样本中的proADM或其片段的水平，以及任选地另外用于测定PCT或其片段的水平，和
-参考数据，例如对应于proADM的高和/或低严重水平以及任选地PCT水平的参考水平，其中所述低严重水平低于4nmol/l，优选低于3nmol/l，更优选低于2.7nmol/l，并且所述高严重水平高于6.5nmol/l，优选高于6.95nmol/l，更优选高于10.9nmol/l，其中所述参考数据优选存储在计算机可读介质上和/或以计算机可执行代码的形式使用，所述计算机可执行代码被配置用于比较所测定的proADM或其片段的水平以及任选地另外所测定的PCT或其片段的水平与所述参考数据。
在一个实施方案中，本发明涉及一种用于实施本文所述方法的试剂盒，所述试剂盒包括：
-检测试剂，其用于测定来自受试者的样本中proADM或其片段的水平，以及任选地另外用于测定PCT或其片段的水平，和
-参考数据，例如对应于权利要求6和/或9的proADM严重水平以及任选地PCT水平的参考水平，其中所述参考数据优选存储在计算机可读介质上和/或以计算机可执行代码的形式使用，所述计算机可执行代码被配置用于比较所测定的proADM或其片段的水平以及任选地另外所测定的PCT或其片段的水平与所述参考数据。
具体实施方式
本发明是基于鉴定proADM水平与血小板计数之间的相关性的发现。本方法使得能够对患者中的异常血小板水平进行测定、诊断、预后、治疗指导、治疗监测、风险评估和/或风险分层，其中所述proADM或其片段的水平与所述患者中的异常血小板水平相关。
与常规方法相比，本发明具有以下优点：本发明的方法和试剂盒快速，客观，易于使用并且精确地用于重症患者的治疗监测。本发明的方法和试剂盒涉及在医院的常规方法中可容易测量的标志物和临床评分，因为在常规获得的血液样本或从受试者获得的其它生物液体或样本中可以测定以下物质的水平：proADM，PCT，乳酸盐，c反应蛋白，SOFA，APACHEII，SAPS II和/或凝血系统失调标志物，例如膜微粒、血小板计数、平均血小板体积(MPV)、sCD14-ST、凝血酶原酶、抗凝血酶和/抗凝血酶活性、阳离子蛋白18(CAP18)、vonWillebrand因子(vWF)裂解蛋白酶、脂蛋白与CRP的组合、血纤维蛋白原、血纤维蛋白、B2GP1、GPIIb-IIIa、血纤维蛋白的非变性D-二聚体、血小板因子4、组蛋白和PT测定。
如本文所用，“患者”或“受试者”可以是脊椎动物。在本发明的上下文中，术语“受试者”包括人类和动物，特别是哺乳动物和其它生物体。
在本发明的上下文中，“患者健康方面的不良事件”涉及指示患者健康状况的并发症或恶化的事件。此类不良事件包括但不限于患者死亡，诊断和治疗开始后28-90天内患者死亡，感染或新感染的发生，器官衰竭和患者一般临床体征或症状的恶化，例如低血压或高血压，心动过速或心动过缓，凝血系统失调，弥散性血管内凝血，血小板水平异常，血小板减少以及与血小板减少相关的器官功能失调或器官衰竭。此外，不良事件的实例包括临床症状恶化表明需要采取治疗措施的情况，所述治疗措施例如病灶清除术、输注血液制品、输注胶体、有创机械通气、血小板输注、无创机械通气、急诊手术、器官替代疗法如肾脏或肝脏替代和血管加压药疗法。此外，不良事件可包括提供皮质类固醇，血液或血小板输注，血液成分如血清、血浆或特定细胞或其组合的输注，促进凝血细胞形成的药物，病因治疗或进行脾切除术。
可以将本文描述的被诊断为“重症”的患者诊断为重症监护病房(ICU)患者，需要持续和/或严密观测其健康状况的患者，诊断出具有败血症、重度败血症或败血性休克的患者，诊断出具有感染性疾病和一种或多种现有器官衰竭的患者，术前或术后患者，术中患者，创伤后患者，外伤患者(例如事故患者)，烧伤患者，具有一个或多个开放性病变的患者。本文所述的受试者可以在急诊室或重症监护病房，或在其它护理设置点，例如在急救运输车(例如救护车)中或在面对具有所述症状的患者的全科医生处。此外，在本发明的上下文中，重症可以指处于获得或具有凝血系统失调的风险的患者。因此，在本发明的上下文中，重症优选是指处于获得或具有低血小板数(血小板减少)风险的患者。更优选地，在本发明的上下文中，重症是指处于获得或具有全身性感染、败血症、重度败血症或败血性休克继发的低血小板数(血小板减少)的风险的患者。疑似患有SIRS的患者不一定被认为是重症。
术语“ICU患者”患者涉及但不限于已经被送入重症监护病房的患者。重症监护病房也可以称为重症治疗病房或重症处理病房(ITU)或重症护理病房(CCU)，是提供重症治疗医学的医院或医疗机构的特殊部门。ICU患者通常会遭受严重且危及生命的疾患和损伤，这些疾患和损伤需要专业设备和药物治疗的持续、密切监测和支持，以确保身体正常运转。在ICU中治疗的常见疾患包括但不限于急性或成人呼吸窘迫综合征(ARDS)、外伤、器官衰竭和败血症。
如本文所用，术语“凝血系统”是指血液中能够凝结的组分。凝血(也称为凝结)是血液从液体变为凝胶而形成血凝块的过程。它有可能导致止血，停止因血管受损而失血，接着进行修复。凝血机制涉及血小板的活化、粘附和聚集，以及血纤维蛋白的沉积和成熟。凝血障碍是可能导致流血(出血或瘀伤)或阻塞性凝血(血栓形成)的疾病状态。血管损伤已损坏血管衬里的内皮后，凝血几乎立即开始。血液通过内皮的泄漏会引发两个过程：血小板的变化，以及内皮下组织因子暴露于血浆因子VII，最终导致血纤维蛋白形成。血小板立即在损伤部位形成堵塞物；这称为原发性止血。继发性止血同时发生：因子VII以外的其它凝血因子或凝结因子以复杂的级联反应形成血纤维蛋白链，从而增强血小板栓塞。凝血因子的实例包括但不限于血小板，因子I(血纤维蛋白原)，因子II(凝血酶原)，因子III(组织因子或组织凝血活酶)，因子IV钙，因子V(促凝血球蛋白原，不稳定因子)，因子VI，因子VII(稳定因子，促转化素)，因子VIII(抗血友病因子A)，因子IX(抗血友病因子B或克雷司马斯因子(Christmas factor))，因子X(Stuart-Prower因子)，因子XI(血浆凝血活酶前体)，因子XII(Hageman因子)，因子XIII(血纤维蛋白稳定因子)，von Willebrand因子，前激肽释放酶(Fletcher因子)，高分子量激肽原(HMWK)(Fitzgerald因子)，纤连蛋白，抗凝血酶III，肝素辅因子II，蛋白C，蛋白S，蛋白Z，蛋白Z相关蛋白酶抑制剂(ZPI)，纤溶酶原，α2抗纤溶酶，组织纤溶酶原激活物(tPA)，尿激酶，纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI1)，纤溶酶原激活物抑制剂-2(PAI2)，癌症促凝剂。
如本文所用，术语“异常血小板水平”是指患者血液中血小板的数量或浓度出乎意料地高或低。期望值取决于患者的状况。在健康个体或没有已知基础疾病、易感性或诊断的个体中，正常或预期的血小板计数在每L约1500-4500亿个血小板或每μl 150,000至450,000个血小板的范围内。例如，如果已知患者患有影响血小板数目的疾患，则该范围可以变化。
血小板减少是一种以血液中异常低水平的凝血细胞(也称为血小板)为特征的病状。正常的人类血小板计数范围是每微升血液150,000至450,000个血小板。这些限制是由第2.5个百分点的下限和上限确定的，因此超出此范围的值不一定表示疾病。血小板减少可能需要紧急治疗，尤其是在测定血小板计数低于每微升50,000个时。
在本发明的上下文中，术语血小板减少包括导致异常低水平的凝血细胞的所有形式和/或原因，例如异常低的血小板产生可能由以下造成：脱水，维生素B12或叶酸缺乏，白血病或骨髓增生异常综合征或再生障碍性贫血，肝衰竭时肝脏血小板生成素产生减少，败血症，全身性病毒或细菌感染，钩端螺旋体病，遗传综合征如先天性巨核细胞性血小板减少、血小板减少-桡骨缺失综合征，范可尼贫血(Fanconi anemia)，伯纳德-苏里尔综合征(Bernard-Soulier syndrome)，(与大的血小板相关)，May-Hegglin异常，灰色血小板综合征，Alport综合征，Wiskott-Aldrich综合征；异常高的血小板破坏率可能是由于免疫或非免疫状况引起的，包括免疫血小板减少性紫癜，血栓性血小板减少性紫癜，溶血性尿毒综合征，弥散性血管内凝血，阵发性夜间血红蛋白尿，抗磷脂综合征，系统性红斑狼疮，输血后紫癜，新生儿同种免疫血小板减少，脾功能亢进，登革热，高雪氏病(Gaucher′s disease)，寨卡病毒；药物诱发的血小板减少，例如由丙戊酸、甲氨蝶呤、卡铂、干扰素、异维A酸、泛比司他(panobinostat)、肝素、H2受体阻滞剂和质子泵抑制剂诱发的血小板减少；以及其它原因，例如蛇咬、烟酸毒性、莱姆病(Lyme disease)和凝血细胞单采术(也称为血小板单采术)。
测量血小板/凝血细胞的金标准是通过例如流式细胞术测定(绝对)未成熟的血小板计数((A)IPC)。但是，这种方法的缺点是有时很难对血小板计数进行技术验证。混杂因素使结果不可靠，导致需要进行额外的验证，这会耗费宝贵的时间和人员。分析干扰可能会导致假性血小板减少(例如巨大凝血细胞、网状凝血细胞、凝血细胞聚集或EDTA不相容性)。
术语“败血性血小板减少”涉及败血症和低血小板水平的相关存在。
如本文所用，在本发明的上下文中，“诊断”涉及识别和(早期)检测与感染性疾病有关的受试者的临床状况。术语“诊断”也可以涵盖对感染性疾病严重程度的评估。
“预后”涉及基于感染性疾病对受试者的结果或特定风险的预测。这还可以包括对所述受试者的痊愈概率或不利结果概率的估计。
本发明的方法也可以用于监测。“监测”涉及跟踪已经诊断的感染性疾病、病症、并发症或风险，例如分析疾病的进展或者特定治疗或疗法对重症患者的疾病或患者中的感染性疾病的疾病进展的影响。
在本发明的上下文中，术语“治疗监测”或“治疗控制”是指例如通过获得有关治疗功效的反馈来监测和/或调整所述受试者的治疗性处理。
在本发明中，术语“风险评估”和“风险分层”涉及根据受试者的进一步预后将受试者分为不同的风险组。风险评估还涉及分层以应用预防性和/或治疗性措施。风险分层的实例是本文公开的低、中和高风险水平。
如本文所用，术语“治疗指导”是指基于一种或多种生物标志物和/或临床参数和/或临床评分的值的某些疗法或医学干预的应用。
应当理解，在本发明的上下文中，“测定proADM或其片段的水平”等是指测定proADM或其片段的任何手段。片段可以具有任何长度，例如至少约5、10、20、30、40、50或100个氨基酸，只要所述片段允许明确测定proADM或其片段的水平即可。在本发明的特别优选的方面，“测定proADM的水平”是指测定中区肾上腺髓质素原(MR-proADM)的水平。MR-proADM是proADM的片段和/或区域。
肽肾上腺髓质素(ADM)被发现是一种包含52个氨基酸的降压肽，其已从人嗜铬细胞瘤中分离出来(Kitamura等，1993)。肾上腺髓质素(ADM)被编码为包含185个氨基酸的前体肽(“肾上腺髓质素原前体”或“pre proADM”)。proADM的示例性氨基酸序列以SEQ ID NO：1给出。
SEQ ID NO：1：pre-pro-ADM的氨基酸序列：
ADM包含pre-proADM氨基酸序列的95-146位，并且是其剪接产物。“肾上腺髓质素原”(“proADM”)是指不具有信号序列(氨基酸1至21)的pre-proADM，即pre-proADM的氨基酸残基22至185。“中区肾上腺髓质素原”(“MR-proADM”)是指pre-proADM的氨基酸42至95。MR-proADM的示例性氨基酸序列以SEQ ID NO：2给出。
SEQ ID NO：2：MR-pro-ADM的氨基酸序列(pre-pro-ADM的AS 45-92)：
ELRMSSSYPT GLADVKAGPA QTLIRPQDMK GASRSPEDSS PDAARIRV
本文还设想pre-proADM或MR-proADM的肽及其片段可用于本文描述的方法。例如，所述肽或其片段可以包含pre-proADM的氨基酸22-41(PAMP肽)或pre-proADM的氨基酸95-146(成熟的肾上腺髓质素，包括生物活性形式，也称为bio-ADM)。proADM的C端片段(preproADM的氨基酸153至185)称为肾上腺素。proADM肽的片段或MR-proADM的片段可包含例如至少约5、10、20、30或更多个氨基酸。因此，proADM的片段可以例如选自由MR-proADM、PAMP、肾上腺素和成熟肾上腺髓质素组成的组，优选地本文中的片段是MR-proADM。
对这些各种形式的ADM或proADM及其片段的测定还涵盖测量和/或检测这些分子的特定子区域，例如通过使用针对分子特定部分的抗体或其它亲和试剂，或通过使用质谱法测量蛋白质的一部分来测定分子的存在和/或数量。
本文所述的任何一种或多种“ADM肽或片段”可用于本发明。
除了proADM之外，本发明的方法和试剂盒还可包括测定至少一种其它生物标志物、标志物、临床评分和/或参数。
如本文所用，参数是可以帮助限定特定系统的特性、特征或可测量因素。参数是与健康和生理相关的评估的重要元素，例如疾病/病症/临床病状风险，优选器官功能障碍。此外，参数被定义为客观测量和评估的特征，作为正常生物学过程、致病过程或对治疗干预的药理反应的指标。示例性参数可以选自由以下组成的组：急性生理和慢性健康评估II(APACHE II)、简化急性生理评分(SAPSII评分)、序贯器官衰竭评估评分(SOFA评分)、快速序贯器官衰竭评估评分(qSOFA)、体重指数、体重、年龄、性别、IGS II、液体摄入量、白细胞计数、钠、血小板计数、平均血小板体积(MPV)、钾、温度、血压、多巴胺、胆红素、呼吸频率、氧分压、世界神经外科学会联合会(World Federation of Neurosurgical Societies/WFNS)分级和格拉斯哥昏迷量表(Glasgow Coma Scale/GCS)。
如本文所用，诸如“标志物”、“替代物”、“预后标志物”、“因子”或“生物标志物”或“生物学标志物”的术语可互换使用，并且涉及可测量和可量化的生物标志物(例如，特定蛋白质或酶浓度或其片段，特定激素浓度或其片段，或生物物质或其片段的存在)，其可作为与健康和生理相关的评估，例如疾病/病症/临床病状风险，优选不良事件的指标。标志物或生物标志物定义为可以客观测量和评估的特征，以作为正常生物学过程、致病过程或对治疗干预的药理反应的指标。可以在样本中测量生物标志物(如血液、血清、血浆、尿液或组织测试)。
所述受试者的至少一种其它标志物和/或参数可以选自由以下组成的组：所述样本中的乳酸盐水平，所述样本中的降钙素原(PCT)水平，所述受试者的序贯器官衰竭评估评分(SOFA评分)，所述受试者的简化急性生理评分(SAPSII)，所述受试者的急性生理和慢性健康评估II(APACHE II)评分，以及以下物质的水平：可溶性fms样酪氨酸激酶1(sFlt-1)、组蛋白H2A、组蛋白H2B、组蛋白H3、组蛋白H4、降钙素、内皮素-1(ET-1)、精氨酸加压素(AVP)、心钠肽(ANP)、中性粒细胞明胶酶相关的脂质运载蛋白(NGAL)、肌钙蛋白、脑钠肽(BNP)、C反应蛋白(CRP)、胰石蛋白(PSP)、在髓样细胞上表达的触发受体1(TREM1)、白介素-6(IL-6)、白介素-1、白介素-24(IL-24)、白介素-22(IL-22)、白介素(IL-20)、其它IL、Presepsin(sCD14-ST)、脂多糖结合蛋白(LBP)、α1-抗胰蛋白酶、基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶2(MMP8)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、基质金属蛋白酶7(MMP7)、胎盘生长因子(PIGF)、嗜铬粒蛋白A、S100A蛋白、S100B蛋白和肿瘤坏死因子α(TNFα)、新蝶呤、α-1-抗胰蛋白酶、精氨酸加压素原(AVP、proAVP或Copeptin)、降钙素原、心钠肽(ANP、pro-ANP)、内皮素-1、CCL1/TCA3、CCL11、CCL12/MCP-5、CCL13/MCP-4、CCL14、CCL15、CCL16、CCL17/TARC、CCL18、CCL19、CCL2/MCP-1、CCL20、CCL21、CCL22/MDC、CCL23、CCL24、CCL25、CCL26、CCL27、CCL28、CCL3、CCL3L3、CCL4、CCL4L1/LAG-1、CCL5、CCL6、CCL7、CCL8、CCL9、CX3CL1、CXCL1、CXCL10、CXCL11、CXCL12、CXCL13、CXCL14、CXCL15、CXCL16、CXCL17、CXCL2/MIP-2、CXCL3、CXCL4、CXCL5、CXCL6、CXCL7/Ppbp、CXCL9、IL8/CXCL8、XCL1、XCL2、FAM19A1、FAM19A2、FAM19A3、FAM19A4、FAM19A5、CLCF1、CNTF、IL11、IL31、IL6、瘦素、LIF、OSM、IFNA1、IFNA10、IFNA13、IFNA14、IFNA2、IFNA4、IFNA7、IFNB1、IFNE、IFNG、IFNZ、IFNA8、IFNA5/IFNaG、IFNω/IFNW1、BAFF、4-1BBL、TNFSF8、CD40LG、CD70、CD95L/CD178、EDA-A1、TNFSF14、LTA/TNFB、LTB、TNFa、TNFSF10、TNFSF11、TNFSF12、TNFSF13、TNFSF15、TNFSF4、IL18、IL18BP、IL1A、IL1B、IL1F10、IL1F3/IL1RA、IL1F5、IL1F6、IL1F7、IL1F8、IL1RL2、IL1F9、IL33或其片段。其它标志物包括膜微粒、血小板计数、平均血小板体积(MPV)、sCD14-ST、凝血酶原酶、抗凝血酶和/抗凝血酶活性、阳离子蛋白18(CAP18)、von Willebrand因子(vWF)裂解蛋白酶、脂蛋白与CRP的组合、血纤维蛋白原、血纤维蛋白、B2GP1、GPIIb-IIIa、血纤维蛋白的非变性D-二聚体、血小板因子4、组蛋白和PT测定。
凝血系统的组分也可以被认为是在本发明的意义上的生物标志物的标志物，并且包括但不限于血小板，因子I(血纤维蛋白原)，因子II(凝血酶原)，因子III(组织因子或组织凝血活酶)，因子IV钙，因子V(促凝血球蛋白原，不稳定因子)，因子VI，因子VII(稳定因子，促转化素)，因子VIII(抗血友病因子A)，因子IX(抗血友病因子B或克雷司马斯因子)，因子X(Stuart-Prower因子)，因子XI(血浆凝血活酶前体)，因子XII(Hageman因子)，因子XIII(血纤维蛋白稳定因子)，von Willebrand因子，前激肽释放酶(Fletcher因子)，高分子量激肽原(HMWK)(Fitzgerald因子)，纤连蛋白，抗凝血酶III，肝素辅因子II，蛋白C，蛋白S，蛋白Z，蛋白Z相关蛋白酶抑制剂(ZPI)，纤溶酶原，α2抗纤溶酶，组织纤溶酶原激活物(tPA)，尿激酶，纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI1)，纤溶酶原激活物抑制剂-2(PAI2)，癌症促凝剂。
如本文所用，“降钙素原”或“PCT”涉及跨越降钙素原肽的氨基酸残基1-116、2-116、3-116的肽或其片段。PCT是降钙素激素的肽前体。因此，降钙素原片段的长度为至少12个氨基酸，优选大于50个氨基酸，更优选大于110个氨基酸。PCT可能包含翻译后修饰，例如糖基化、脂质化或衍生化。降钙素原是降钙素和抗钙素的前体。因此，在正常条件下，循环中的PCT水平非常低(＜约0.05ng/m1)。
受试者样本中的PCT水平可以通过如本文所述的免疫测定法来测定。如本文所用，还可以测定编码“降钙素原”或“PCT”的核糖核酸或脱氧核糖核酸的水平。用于测定PCT的方法是技术人员已知的，例如通过使用获自Thermo Fisher Scientific/B R A H M S GmbH的产品。
应当理解，“测定至少一种组蛋白的水平”等是指测定样本中至少一种组蛋白的水平或至少一种组蛋白的片段的水平。特别地，测定样本中组蛋白H2B、H3、H2A和/或H4的水平。因此，样本中测定的至少一种组蛋白可以是游离组蛋白，或者样本中测定的至少一种组蛋白可以存在并可以组装成大分子复合物，例如八聚体、核小体和/或NET。
所述至少一个组蛋白的片段可以具有任何长度，例如至少约5、10、20、30、40、50或100个氨基酸，只要所述片段允许明确测定特定组蛋白的水平即可。下文公开了适合于测定受试者样本中组蛋白水平的组蛋白的各种示例性片段。在本文中还应理解，可以通过测定跨越组蛋白的N末端或C末端尾巴的片段来测定组蛋白的水平。另外，在本发明的上下文中待测定的组蛋白或其片段也可以被修饰，例如通过翻译后修饰。示例性的翻译后修饰可以是乙酰化、瓜氨酸化、脱乙酰化、甲基化、脱甲基化、脱氨化、异构化、磷酸化和泛素化。优选地，组蛋白或其片段循环。
在本发明的特定方面，可以在未组装成大分子复合物的样本中测定组蛋白或其片段的水平，所述大分子复合物例如核小体、八聚体或嗜中性白细胞胞外捕获物(NET)。这样的组蛋白在本文中被称为“游离组蛋白”。因此，至少一种组蛋白的水平可以特别是至少一种游离组蛋白的水平。
这样的游离组蛋白的水平可以通过检测在组装的化学计量的大分子复合物(如单核小体或八聚体)中无法接近的组蛋白的氨基酸序列或结构表位来测定。在这样的结构中，组蛋白的特定区域被覆盖，因此如嗜中性粒细胞胞外捕获物(“NET”)所示在空间上不可接近。另外，在八聚体或核小体中，组蛋白的区域也参与分子内相互作用，例如各个组蛋白之间的相互作用。因此，在本发明的上下文中确定的组蛋白的区域/肽/表位可以确定组蛋白是游离组蛋白还是组装在大分子复合物中的组蛋白。例如，在基于免疫测定法的方法中，所利用的抗体可能无法检测组蛋白，例如H4，当它们是核小体的八聚体核心的一部分时，因为表位在结构上不可接近。在下文中，举例说明可用于确定游离组蛋白的组蛋白的区域/肽/表位。例如，根据本发明，组蛋白的N末端或C末端尾巴的区域/肽/表位可用于确定组蛋白，而与它们是组装在大分子复合物中还是游离组蛋白无关。
在上下文中，“化学计量的”涉及完整的复合物，例如单核小体或八聚体。“游离组蛋白”也可以包含非染色质结合的组蛋白。例如，“游离组蛋白”也可以包含单个组蛋白或非八聚体组蛋白复合物。游离的组蛋白可以(例如瞬时地)结合到各个组蛋白上，例如，组蛋白可以形成同型或异型二聚体。游离组蛋白也可以形成同型或异型四聚体。同型或异型四聚体可以由四个组蛋白分子组成，例如H2A、H2B、H3和/或H4。典型的异型四聚体由两个异型二聚体形成，其中每个异型二聚体由H3和H4组成。本文还应理解，异型四聚体可以由H2A和H2B形成。在本文中还设想了异型四聚体可以由一种由H3和H4组成的异型二聚体，以及一种由H2A和H2B组成的异型二聚体形成。因此，游离组蛋白在本文中被称为并且可以是单体、异型二聚体或四聚体组蛋白，其不组装在由与核酸(例如核小体)结合的组蛋白八聚体组成的(“化学计量”)大分子复合物中。另外，游离组蛋白也可以与核酸结合，并且其中所述游离组蛋白不组装在(“化学计量”)大分子复合物，例如完整核小体中。优选地，游离组蛋白不含/基本上不含核酸。
乳酸盐或乳酸是一种具有式CH3CH(OH)COOH的有机化合物，其存在于包括血液在内的体液中。进行血液乳酸盐测试以确定体内酸碱稳态的状态。乳酸是细胞代谢的产物，当细胞缺乏足够的氧气(缺氧)并且必须转化为效率较低的能量产生手段时，或者当某种情况导致乳酸盐的过量产生或清除受损时，乳酸就会积聚。乳酸性酸中毒可能是由于细胞和组织中的氧气量不足(缺氧)引起的，例如，如果某人具有可能导致输送到细胞和组织的氧气量减少的状况，例如休克、败血性休克或充血性心脏衰竭，则可以使用乳酸盐测试来帮助检测和评估缺氧和乳酸性酸中毒的严重程度。
C反应蛋白(CRP)是一种五聚体蛋白，其可以存在于体液(例如血浆)中。CRP水平可以响应于炎症而升高。测量和绘制CRP值可以证明对确定疾病进展或治疗效果很有用。
如本文所用，“序贯器官衰竭评估评分”或“SOFA评分”是一种用于追踪在重症监护病房(ICU)住院期间患者状态的评分。SOFA评分是一种用于确定一个人的器官功能或衰竭率的程度的评分系统。所述评分是基于六个不同的评分，每个评分各自针对呼吸、心血管、肝脏、凝血、肾脏和神经系统。平均和最高SOFA评分都是结果的预测指标。在ICU的最初24至48小时内，SOFA评分的增加可预测死亡率为至少50％至95％。评分小于9可预测的死亡率为33％，而高于14时的死亡率可接近或高于95％。
如本文所用，快速SOFA评分(qSOFA)是指示患者器官功能障碍或死亡风险的评分系统。该评分是基于以下三个标准：1)精神状态改变；2)收缩压降低小于100mm Hg；3)呼吸频率大于每分钟22次呼吸。具有上述两种或两种以上这些状况的患者具有器官功能障碍或死亡的风险更高。
如本文所用，“APACHE II”或“急性生理和慢性健康评估II”是一种疾病严重程度分类评分系统(Knaus等，1985)。它可以在患者入住重症监护病房(ICU)的24小时内应用，并且可以根据以下12种不同的生理参数来确定：AaDO2或PaO2(取决于FiO2)，温度(直肠)，平均动脉压，pH动脉，心率，呼吸频率，钠(血清)，钾(血清)，肌酐，血细胞比容，白细胞计数和格拉斯哥昏迷量表。
如本文所用，“SAPS II”或“简化急性生理评分II”涉及用于对疾病或病症的严重程度进行分类的系统(参见Le Gall JR等，A new Simplified Acute Physiology Score(SAPS II)based on a European/North American multicenter study.JAMA.1993；270(24)：2957-63)。SAPS II评分由12个生理变量和3个疾病相关变量构成。从12例常规生理测量、关于先前健康状况的信息以及入住ICU时获得的一些信息计算出评分。可以在任何时间，优选在第2天确定SAPS II评分。“最差”测量结果定义为与最高分数相关的度量。SAPSII评分范围为0至163分。分类系统包括以下参数：年龄，心率，收缩压，温度，格拉斯哥昏迷量表，机械通气或CPAP，PaO2，FiO2，尿量，血尿素氮，钠，钾，碳酸氢盐，胆红素，白细胞，慢性病和入院类型。死亡率和SAPS II总评分之间存在S型关系。SAPSII评分为29分时，受试者的死亡率为10％，SAPSII评分为40分时，死亡率为25％，SAPSII评分为52分时，死亡率为50％，SAPSII评分为64分时，死亡率为75％，SAPSII评分为77分时，死亡率为90％(Le Gallloc.cit.)。
如本文所用，术语“样本”是从患者或受试者获得或分离的生物样本。如本文所用的“样本”可以例如是指出于诊断、预后或评估相关受试者例如患者的目的而获得的体液或组织的样本。在本文中优选地，样本是体液的样本，例如血液、血清、血浆、脑脊液、尿液、唾液、痰液、胸腔积液、细胞、细胞提取物、组织样本、组织活检、粪便样本等。特别地，样本是血液、血浆、血清或尿液。
本发明的实施方案涉及第一样本的分离和第二样本的分离。在本发明方法的上下文中，术语“第一样本”和“第二样本”涉及在本发明方法中使用的样本的分离顺序的相对确定。当使用术语第一样本和第二样本指定本发明方法时，这些样本不应视为对所取样本数量的绝对确定。因此，可以在分离第一样本和/或第二样本之前、期间或之后，或在第一样本或第二样本之间，从患者中分离出另外的样本，其中这些另外的样本可以用于或可以不用于本发明的方法中。因此，第一样本可以被认为是任何先前获得的样本。第二样本可以被认为是任何其它样本或后续样本。
在本发明的上下文中，“血浆”是离心后获得的含有抗凝剂的血液的实际上不含细胞的上清液。示例性的抗凝剂包括钙离子结合化合物，例如EDTA或柠檬酸盐，以及凝血酶抑制剂，例如肝素盐或水蛭素。无细胞血浆可以通过将抗凝血液(例如柠檬酸、EDTA或肝素化血液)在2000至3000g下离心例如至少15分钟获得。
在本发明的上下文中，“血清”是在使血液凝结之后收集的全血的液体部分。当将凝结的血液(凝血)离心时，可获得血清作为上清液。
如本文所用，“尿液”是肾脏通过称为排尿(或泌尿)的过程而分泌并通过尿道排泄的身体的液体产物。
在本发明的优选实施方案中，已经将患者诊断为患有败血症。更特别地，患者可能已经被诊断为患有重度败血症和/或败血性休克。
在本发明的上下文中，“败血症”是指对感染的全身反应。或者，败血症可被视为SIRS与确诊的感染过程或感染的组合。败血症可被表征为由感染和全身性炎症反应共同存在定义的临床综合征(Levy MM等，2001 SCCM/ESICM/ACCP/ATS/SIS InternationalSepsis Definitions Conference.Crit Care Med.2003年4月；31(4)：1250-6)。本文使用的术语“败血症”包括但不限于败血症、重度败血症、败血性休克。
本文使用的术语“败血症”包括但不限于败血症、重度败血症、败血性休克。重度败血症是指与器官功能障碍、灌注不足异常或败血症引起的低血压相关的败血症。灌注不足异常包括乳酸性酸中毒、少尿和精神状态的急性改变。败血症诱发的低血压定义为在没有其它低血压原因(例如心源性休克)的情况下，存在收缩压低于约90mm Hg或其相比于基线降低约40mm Hg以上。败血性休克定义为重度败血症，尽管有足够的液体复苏，但败血症诱发的低血压持续存在，同时存在灌注不足异常或器官功能障碍(Bone等，CHEST 101(6)：1644-55，1992)。
术语败血症可以替代地定义为由宿主对感染的反应失调引起的危及生命的器官功能障碍。对于临床手术，器官功能障碍可优选通过序贯器官衰竭评估(SOFA)评分增加2分以上来表示，这与医院内死亡率大于10％相关。败血性休克可定义为败血症的一个子集，其中与单独的败血症相比，特别严重的循环、细胞和代谢异常导致更高的死亡风险。在不存在血容量不足的情况下，可以通过血管加压药的需求在临床上鉴定感染性休克的患者，以维持平均动脉压为65mm Hg以上并且血清乳酸盐水平大于2mmol/L(＞18mg/dL)。
本文使用的术语“败血症”涉及败血症发展中的所有可能阶段。
术语“败血症”还包括基于SEPSIS-2定义的重度败血症或败血性休克(Bone等，2009)。术语“败血症”还包括属于SEPSIS-3定义的受试者(Singer等，2016)。本文使用的术语“败血症”涉及败血症发展中的所有可能阶段。
如本文所用，在本发明范围内的“感染”是指由病原性或潜在病原性剂/病原体、生物体和/或微生物侵入正常无菌组织或体液而引起的病理过程，并且优选地涉及被细菌、病毒、真菌和/或寄生虫感染。因此，感染可以是细菌感染、病毒感染和/或真菌感染。感染可以是局部感染或全身感染。为了本发明的目的，病毒感染可被认为是微生物感染。
此外，遭受感染的受试者可同时遭受一种以上的感染源。例如，遭受感染的受试者可遭受细菌感染和病毒感染；病毒感染和真菌感染；细菌感染和真菌感染，以及细菌感染、真菌感染和病毒感染，或遭受混合感染，其包括本文列出的一种或多种感染，包括潜在的超级感染，例如除一种或多种病毒感染和/或一种或多种真菌感染之外的一种或多种细菌感染。
如本文所用，“感染性疾病”包括与细菌和/或病毒和/或真菌感染相关的所有疾病或病症。
根据本发明，重症患者，例如败血病患者，在生命功能和/或器官保护的监测方面可能需要非常严格的控制，并且可能正在接受医学治疗。
在本发明的上下文中，术语“医学治疗”或“治疗”包括各种处理和治疗策略，包括但不限于抗炎策略，施用proADM拮抗剂例如治疗性抗体、si-RNA或DNA，进行体外血液净化或经由单采术(apheresis)、透析、吸附剂去除有害物质以防止细胞因子风暴，去除炎性介质，血浆单采术，施用维生素如维生素C，通气如机械通气和非机械通气，以使身体具有足够的氧气，例如，病灶清除术，输注血液制品，输注胶体，肾脏或肝脏替代，抗生素治疗，有创机械通气，无创机械通气，肾脏替代疗法，使用血管加压药，液体疗法，单采术和器官保护措施，提供皮质类固醇，血液或血小板输注，输注血液成分如血清、血浆或特定细胞或其组合，促进凝血细胞形成的药物，源控制，手术，病因治疗或进行脾切除术。
本发明的进一步治疗包括施用细胞或细胞产物如干细胞、血液或血浆，以及稳定患者循环和保护内皮多糖包被，例如经由最佳的液体管理策略，例如达到血容量正常和预防或治疗血容量过多或血容量不足。此外，血管加压药或例如儿茶酚胺以及经由未分级分离的肝素或N-脱硫的再N-乙酰化的肝素对白蛋白或乙酰肝素酶的抑制作用是支持循环和内皮层的有用治疗方法。
另外，本发明的医学治疗包括但不限于血液凝固的稳定化，iNOS抑制剂，抗炎剂如氢化可的松，镇静剂和镇痛药以及胰岛素。
“肾脏替代疗法”(RRT)涉及用于替代肾脏的正常血液过滤功能的疗法。肾脏替代疗法可指透析(例如血液透析或腹膜透析)，血液滤过和血液透析滤过。这些技术是将血液转移到机器中，进行清洁然后再将其送回体内的各种方法。肾脏替代疗法也可以指肾脏移植，这是替代的最终形式，即旧肾脏被供体肾脏替代。血液透析、血液滤过和血液透析滤过可以是连续的或间歇的，并且可以使用动静脉途径(其中血液从动脉离开并经由静脉返回)或静脉-静脉途径(其中血液从静脉离开并经由静脉返回)。这导致各种类型的RRT。例如，肾脏替代疗法可以选自但不限于连续性肾脏替代治疗(CRRT)、连续性血液透析(CHD)、连续性动-静脉血液透析(CAVHD)、连续性静-静脉血液透析(CVVHD)、连续性血液滤过(CHF)、连续性动-静脉血液滤过(CAVH或CAVHF)、连续性静脉血液滤过(CVVH或CVVHF)、连续性血液透析滤过(CHDF)、连续性动-静脉血液透析滤过(CAVHDF)、连续性静-静脉血液透析滤过(CVVHDF)、间歇性肾脏替代治疗(IRRT)、间歇性血液透析(IHD)、间歇性静-静脉血液透析(IVVHD)、间歇性血液滤过(IHF)、间歇性静-静脉血液滤过(IVVH或IVVHF)、间歇性血液透析滤过(IHDF)和间歇性静-静脉血液透析滤过(IVVHDF)。
人工和机械通气是增强适当气体交换和通气的有效方法，并且旨在在严重低氧血症期间挽救生命。人工通气涉及辅助或刺激受试者的呼吸。人工通气可以选自由机械通气、手动通气、体外膜肺氧合(ECMO)和无创通气(NIV)组成的组。机械通气涉及一种机械辅助或替代自主呼吸的方法。这可能涉及被称为通气机的机器。机械通气可以是高频振荡通气或部分液体通气。
“液体管理”是指监测和控制受试者的液体状态以及通过例如口服、肠内或静脉输液来施用液体以稳定循环或器官活力。它包括稳定液体和电解质的平衡，或者预防或纠正血容量过高或过低以及血液制品的供应。
如果受试者具有医学急症，则可能需要外科急诊/急诊手术，并且可能需要立即进行外科手术干预以保持生存或健康状况。需要急诊手术的受试者可以选自由以下组成的组：遭受急性创伤、主动不受控制的感染、器官移植、器官预防或器官稳定手术或癌症的受试者。
清洁程序是预防受试者感染，尤其是医院感染的卫生方法，包括对所有可能与患者接触的有机和无机表面，例如皮肤、患者房间内的物体、医疗设备、诊断设备或室内空气进行消毒。清洁程序包括使用防护服和装置，例如护口器、长袍、手套或卫生锁，以及如限制患者就诊之类的行为。此外，清洁程序包括对患者本身以及衣物或患者的清洁。
在重症如败血症或重度感染的情况下，对患者的结果进行早期诊断以及预后和风险评估非常重要，以找到最佳的疗法和管理。治疗方法必须非常个体化，并因情况而异。最佳实践疗法需要进行治疗监测，并受治疗时间、组合疗法的使用和药物给药优化的影响。错误或遗漏的疗法或管理将增加每小时死亡率。
本发明的医学治疗可以是抗生素治疗，其中如果已经诊断出感染或已经确定了感染性疾病的症状，则可以施用一种或多种“抗生素”或“抗感染剂”。
此外，抗生素剂包括用于治疗细菌感染的噬菌体，合成的抗微生物肽或铁拮抗剂/铁螯合剂。同样，针对病原体结构的治疗性抗体或拮抗剂(如抗VAP抗体，抗耐药性克隆疫苗接种，免疫细胞的施用，例如体外初免或调节的T效应细胞)也是代表重症患者如败血症患者治疗方案的抗生素剂。针对感染或用于预防新感染的其它抗生素剂/治疗或治疗策略包括使用防腐剂、去污产品、抗毒剂如脂质体、卫生设施、伤口护理、手术。
也可以将几种上述抗生素剂或治疗策略与液体疗法、血小板输注或血液制品输注结合起来。
根据本发明，proADM和任选地PCT和/或其它标志物或临床评分被用作用于治疗监测的标志物，包括已诊断为重症的患者健康方面的后续不良事件的预后、预后、风险评估和风险分层。
技术人员能够获得或开发用于鉴定、测量、确定和/或量化上述proADM分子或其片段或变体中的任何一种以及根据标准分子生物实践的本发明的其它标志物的手段。
proADM或其片段的水平以及本发明的其它标志物的水平可以通过可靠地测定标志物浓度的任何测定法来测定。特别地，如所附实施例中所举例说明的，可以采用质谱法(MS)和/或免疫测定法。如本文所用，免疫测定法是一种生物化学测试，其通过使用抗体或抗体结合片段或免疫球蛋白来测量溶液中大分子/多肽的存在或浓度。
用于本发明的上下文中的测定proADM或其它标志物如PCT的方法旨在本发明中。举例来说，可以采用选自由以下组成的组的方法：质谱法(MS)，发光免疫测定法(LIA)，放射免疫测定法(RIA)，化学发光和荧光免疫测定法，酶免疫测定法(EIA)，酶联免疫测定法(ELISA)，基于发光的珠粒阵列，基于磁珠的阵列，蛋白质微阵列测定法，快速测试格式例如免疫色谱带测试、稀有穴状化合物测定法和自动化系统/分析仪。
基于抗体识别的proADM和任选地其它标志物的测定是本发明的一个优选的实施方案。如本文所用，术语“抗体”是指免疫球蛋白分子和免疫球蛋白(Ig)分子的免疫学活性部分，即，包含与抗原特异性结合(免疫反应)的抗原结合位点的分子。根据本发明，抗体可以是单克隆抗体以及多克隆抗体。特别地，使用至少与proADM或其片段特异性结合的抗体。
如果抗体对相关分子例如proADM或其片段的亲和力为其对含有相关分子的样本中包含的其它分子的至少50倍，优选100倍，最优选至少1000倍，则认为该抗体是特异性的。在本领域中众所周知如何开发和选择具有给定特异性的抗体。在本发明的上下文中，单克隆抗体是优选的。抗体或抗体结合片段与本文定义的标志物或其片段特异性结合。特别地，抗体或抗体结合片段与本文定义的proADM肽结合。因此，本文定义的肽也可以是抗体特异性结合的表位。此外，在本发明的方法和试剂盒中使用与proADM或proADM，特别是与MR-proADM特异性结合的抗体或抗体结合片段。
此外，在本发明的方法和试剂盒中使用与proADM或其片段以及任选地与本发明的其它标志物如PCT特异性结合的抗体或抗体结合片段。示例性的免疫测定法可以是发光免疫测定法(LIA)、放射免疫测定法(RIA)、化学发光和荧光免疫测定法、酶免疫测定法(EIA)、酶联免疫测定法(ELISA)、基于发光的珠粒阵列、基于磁珠的阵列、蛋白质微阵列测定法、快速测试格式、稀有穴状化合物测定法。此外，可以采用适用于护理点检验和快速检验形式的测定法，例如免疫色谱带测试。还打算进行自动免疫测定法，例如KRYPTOR测定法。
或者，代替抗体，可以特异性地和/或选择性地识别proADM的其它捕获分子或分子骨架也可涵盖在本发明的范围内。本文中，术语“捕获分子”或“分子骨架”包括可用于结合样本中的目标分子或相关分子的分子，即分析物(例如proADM、proADM、MR-proADM和PCT)。因此，捕获分子必须在空间上和就表面特征而言适当地成形，例如表面电荷、疏水性、亲水性、存在或不存在路易斯供体和/或受体，以特异性结合目标分子或相关分子。因此，结合可以例如通过离子、范德华、π-π、σ-π、疏水或氢键相互作用或者前述相互作用中的两种或更多种的组合或者捕获分子或分子骨架与目标分子或相关分子之间的共价相互作用来介导。在本发明的上下文中，捕获分子或分子骨架可以例如选自由核酸分子、碳水化合物分子、PNA分子、蛋白质、肽和糖蛋白组成的组。捕获分子或分子骨架包括例如适体、DARpin(设计的锚蛋白重复蛋白)。包括Affimer等。
在本发明的某些方面，所述方法是免疫测定法，其包括以下步骤：
a)使样本与以下接触：
i.对所述proADM的第一表位具有特异性的第一抗体或其抗原结合片段或衍生物，和
ii.对所述proADM的第二表位具有特异性的第二抗体或其抗原结合片段或衍生物；以及
b)检测两种抗体或其抗原结合片段或衍生物与所述proADM的结合。
优选地，一种抗体可以被标记，而另一种抗体可以与固相结合或者可以选择性地与固相结合。在所述测定法的一个特别优选的方面，一种抗体被标记，而另一种抗体被结合到固相或者可以被选择性地结合到固相。第一抗体和第二抗体可以分散存在于液体反应混合物中，并且其中作为基于荧光或化学发光消光或扩增的标记系统的一部分的第一标记组分与第一抗体结合，以及所述标记系统的第二标记组分与第二抗体结合，从而在两种抗体与待检测的所述proADM或其片段结合后，产生可测量的信号，其允许在测量溶液中检测所得的夹心复合物。标记系统可包含稀土穴状化合物或螯合物，以及荧光或化学发光染料，特别是花青型染料。
在一个优选的实施方案中，所述方法作为异相夹心免疫测定法执行，其中一种抗体被固定在任意选择的固相上，例如，包被的试管(例如聚苯乙烯试管；包被管；CT)的壁或例如由聚苯乙烯构成的微量滴定板，或固定至例如磁性颗粒的颗粒，从而另一种抗体具有类似于可检测标记的基团或能够选择性附着于标记的基团，并且其用于检测形成的夹心结构。使用合适固相的暂时延迟或后续固定也是可能的。
根据本发明的方法还可以实施为均相方法，其中由待检测的一种或多种抗体和标志物、proADM或其片段形成的夹心复合物保持悬浮在液相中。在这种情况下，优选的是，当使用两种抗体时，两种抗体都用检测系统的一部分标记，如果两种抗体都整合到单个夹心中，则会导致信号的产生或信号的触发。这样的技术将具体体现为荧光增强或荧光猝灭检测方法。特别优选的方面涉及成对使用的检测试剂的使用，例如在US4882733、EP0180492或EP0539477及其中引用的现有技术中描述的试剂。以这种方式，仅在反应混合物中检测在单个免疫复合物中直接包含两种标记组分的反应产物的测量成为可能。例如，这样的技术以商标名(时间分辨扩增穴状化合物发射)或/>提供，实现了上述应用的教导。因此，在特别优选的方面，诊断设备用于执行本文提供的方法。例如，测定proADM或其片段的水平和/或本文提供方法的任何其它标志物例如PCT的水平。在特别优选的方面，诊断设备是/>
本发明标志物例如proADM或其片段、PCT或其片段或其它标志物的水平，也可以通过基于质谱(MS)的方法来测定。这样的方法可以包括检测例如所述生物样本中的proADM或PCT或所述样本中的蛋白质消化物(例如胰蛋白酶消化物)的一种或多种修饰或未修饰的片段肽的存在、量或浓度，以及任选地利用色谱方法分离样本，以及对所制备且任选分离的样本进行MS分析。例如，在MS分析中可以使用选择反应监测(SRM)、多反应监测(MRM)或平行反应监测(PRM)质谱法，特别是测定proADM或其片段的量。
在本文中，术语“质谱法”或“MS”是指根据化合物的质量鉴定化合物的分析技术。为了增强质谱法的质量解析和质量测定能力，可以在MS分析之前对样本进行处理。因此，本发明涉及可以与免疫富集技术、与样本制备和/或色谱方法有关的方法相结合，优选与液相色谱法(LC)相结合，更优选与高效液相色谱法(HPLC)或超高效液相色谱法(UHPLC)相结合的MS检测方法。样本制备方法包括用于将样本裂解、分级分离、消化成肽，消耗，富集，透析，脱盐，烷基化和/或肽还原的技术。但是，这些步骤是任选的。分析物离子的选择性检测可以通过串联质谱法(MS/MS)进行。串联质谱法的特征在于质量选择步骤(如本文所用，术语“质量选择”表示具有指定m/z或m/z的窄范围的离子的分离)，接着将所选离子破碎并进行所得产物(片段)离子的质量分析。
技术人员知道如何通过质谱法定量样本中标志物的水平。例如，如上所述，可以采用相对定量“rSRM”或绝对定量。
此外，水平(包括参考水平)可以通过基于质谱的方法来测定，例如测定相关蛋白质或其片段的相对定量或测定其绝对定量的方法。
相对定量“rSRM”可以通过以下方法实现：
1.通过比较样本中检测到的给定目标片段肽的SRM(选择反应监测)特征峰面积与至少第二、第三、第四或更多个生物样本中目标片段肽的相同SRM特征峰面积，来确定目标蛋白的存在增加或减少。
2.通过比较样本中检测到的给定目标肽的SRM特征峰面积与源自不同和单独生物源的其它样本中的其它蛋白质的片段肽产生的SRM特征峰面积，来确定目标蛋白存在的增加或减少，其中肽片段的两个样本之间的SRM特征峰面积比较针对例如每个样本中分析的蛋白质量进行了归一化。
3.通过比较给定目标肽的SRM特征峰面积与源自相同生物学样本中不同蛋白质的其它片段肽的SRM特征峰面积，来确定目标蛋白存在的增加或减少，以归一化组蛋白水平相比于在各种细胞条件下不会改变表达水平的其它蛋白质的水平的变化。
4.这些测定法可应用于目标蛋白的未修饰片段肽和修饰片段肽，其中修饰包括但不限于磷酸化和/或糖基化、乙酰化、甲基化(单甲基化、二甲基化、三甲基化)、瓜氨酸化、泛素化并且其中以与测定未修饰肽的相对量相同的方式测定修饰肽的相对水平。
给定肽的绝对定量可通过以下方法实现：
1.将来自单个生物样本中的目标蛋白的给定片段肽的SRM/MRM特征峰面积与掺入来自生物样本的蛋白质裂解物中的内部片段肽标准物的SRM/MRM特征峰面积进行比较。内标可以是来自被询问的目标蛋白或被标记的重组蛋白的片段肽的标记的合成形式。在消化之前(重组蛋白必需)或消化后，将该标准物以已知量掺入样本中，并且可以分别测定生物样本中的内部片段肽标准物和天然片段肽的SRM/MRM特征峰面积，接着比较两个峰面积。这可以应用于未修饰的片段肽和修饰的片段肽，其中修饰包括但不限于磷酸化和/或糖基化、乙酰化、甲基化(例如单甲基化、二甲基化或三甲基化)、瓜氨酸化、泛素化，并且其中以与测定未修饰肽的绝对水平相同的方式测定修饰肽的绝对水平。
2.也可以使用外部校准曲线对肽进行定量。正常曲线法使用恒定量的重肽作为内标，并将不同量的轻质合成肽掺入样本中。需要使用与测试样本相似的代表性基质来构建标准曲线以考虑基质效应。此外，反向曲线法可避免基质中内源性分析物的问题，其中将恒定量的轻肽掺入到内源性分析物上面以产生内标，并掺入不同量的重肽以产生一组浓度标准。将要与正常曲线或反向曲线进行比较的测试样本中掺入与掺入用于产生校准曲线的基质中的内标相同量的标准肽。
本发明进一步涉及试剂盒，所述试剂盒的用途和使用所述试剂盒的方法。本发明涉及用于执行上文和下文提供的方法的试剂盒。本文提供的定义(例如关于方法所提供)也适用于本发明的试剂盒。特别地，本发明涉及用于对患者健康方面的后续不良事件进行治疗监测(包括预后、风险评估或风险分层)的试剂盒，其中所述试剂盒包括：
-用于测定受试者样本中proADM或其片段的水平，以及任选地另外用于测定PCT、乳酸盐和/或C反应蛋白或其片段的水平的检测试剂，和-用于测定所述受试者的所述样本中的所述proADM水平的检测试剂，和
-参考数据，例如对应于proADM的高和/或低严重水平的参考水平，其中所述低严重水平低于4nmol/l，优选低于3nmol/l，更优选低于2.7nmol/l，并且所述高严重水平高于6.5nmol/l，优选高于6.95nmol/l，更优选高于10.9nmol/l，以及对应于任选地PCT、乳酸盐和/或C反应蛋白水平的参考水平，其中所述参考数据优选存储在计算机可读介质上和/或以计算机可执行代码的形式使用，所述计算机可执行代码被配置用于比较所测定的proADM或其片段的水平以及任选地另外所测定的PCT、乳酸盐和/或C反应蛋白或其片段的水平与所述参考数据。
如本文所用，“参考数据”包括proADM和任选地PCT、乳酸盐和/或C反应蛋白的参考水平。可以将受试者样本中proADM以及任选地PCT、乳酸盐和/或C反应蛋白的水平与试剂盒参考数据中包含的参考水平进行比较。参考水平在上文中进行了描述，并且在所附实施例中也举例说明。参考数据还可以包括与proADM以及任选地PCT、乳酸盐和/或C反应蛋白的水平进行比较的参考样本。参考数据还可以包括如何使用本发明试剂盒的说明手册。
所述试剂盒可以另外包括可用于获得样本的物品，例如血液样本，例如所述试剂盒可以包括容器，其中所述容器包括用于将所述容器附接到套管或注射器的装置，是适合于血液分离并表现出小于大气压的内部压力的注射器，例如适于将预定体积的样本吸入到所述容器中，和/或另外包含去污剂、离液盐、核糖核酸酶抑制剂、螯合剂，例如异硫氰酸胍、盐酸胍、十二烷基硫酸钠、聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯、RNA酶抑制剂蛋白及其混合物，和/或包含硝化纤维素、二氧化硅基质、铁磁球、溢出回流杯(cup retrieve spillover)、海藻糖、果糖、乳糖、甘露糖、聚乙二醇、甘油、EDTA、TRIS、柠檬烯、二甲苯、苯甲酰基、苯酚、矿物油、苯胺、吡咯、柠檬酸盐及其混合物的过滤系统。
如本文所用，“检测试剂”等是适合于测定本文所述的标志物(例如proADM、PCT、乳酸盐和/或C反应蛋白)的试剂。这样的示例性检测试剂是例如配体，例如抗体或其片段，其特异性结合本文所述标志物的肽或表位。这样的配体可用于如上所述的免疫测定法中。免疫测定法中用于测定标志物水平的其它试剂也可以包含在试剂盒中并且在本文中被视为检测试剂。检测试剂还可以涉及用于通过基于MS的方法来检测标志物或其片段的试剂。因此，这样的检测试剂也可以是用于制备供MS分析的样本的试剂，例如酶、化学品、缓冲液等。质谱仪也可以视为检测试剂。根据本发明的检测试剂也可以是校准溶液，例如其可以用于测定和比较标志物的水平。
诊断和/或预后测试的敏感性和特异性不仅取决于测试的分析“质量”，它们还取决于构成异常结果的定义。实际上，接受者操作特征曲线(ROC曲线)通常是通过在“正常”(即没有感染的明显健康的个体)和“疾病”群体(例如患有感染的受试者)中绘制变量值相对于其相对频率的曲线来计算。对于任何特定的标志物(如proADM)，具有和不具有疾病/疾患的受试者的标志物水平分布可能会重叠。在这样的情况下，测试不能以100％的准确度绝对区分正常与疾病，并且重叠面积可能表明测试无法区分正常与疾病。选择一个阈值，低于该阈值则认为测试异常，高于该阈值则认为测试正常，或者低于或高于该阈值则测试指示特定状况，例如感染。ROC曲线下的面积是对感知到的测量结果可以正确鉴定疾患的概率的量度。即使测试结果不一定提供准确的数字，也可以使用ROC曲线。只要可以对结果进行排序，就可以创建ROC曲线。例如，可以根据程度对“疾病”样本的测试结果进行排序(例如1＝低，2＝正常，和3＝高)。可以将该排序与“正常”群体中的结果相关联，并创建ROC曲线。这些方法是本领域众所周知的；参见例如Hanley等，1982.Radiology 143：29-36。优选地，选择阈值以提供大于约0.5，更优选地大于约0.7，还更优选地大于约0.8，甚至更优选地大于约0.85，并且最优选地大于约0.9的ROC曲线面积。在本文中，术语“约”是指给定测量结果的+/-5％。
ROC曲线的水平轴代表(1-特异性)，其随着假阳性率的增加而增加。曲线的垂直轴表示敏感性，敏感性随着真阳性率的增加而增加。因此，对于选择的特定临界值，可以确定(1-特异性)的值，并且可以获得相应的敏感性。ROC曲线下的面积是对所测得的标志物水平允许正确鉴定疾病或疾患的概率的量度。因此，ROC曲线下面积可用于确定测试的有效性。
因此，本发明包括基于通过本文描述的方法获得的信息施用适合于治疗的抗生素。
如本文所用，术语“包含”和“包括”或其语法变体将被视为指定所陈述的特征、整数、步骤或组分，但不排除添加一个或多个另外的特征、整数、步骤、组分或其群组。该术语涵盖术语“由……组成”和“基本上由……组成”。
因此，术语“包含”/“包括”/“具有”表示可以/可能存在任何其它组分(或同样地特征、整数、步骤等)。术语“由……组成”表示不存在其它组分(或同样地特征、整数、步骤等)。
当在本文中使用时，术语“基本上由……组成”或其语法变体应被视为指定所述的特征、整数、步骤或组分，但不排除添加一个或多个另外的特征、整数、步骤、组分或其群组，但仅当附加特征、整数、步骤、组分或其群组没有实质性改变所要求保护的组合物、装置或方法的基本和新颖特征时。
因此，术语“基本上由……组成”是指可以存在那些具体的其它组分(或同样地特征、整数、步骤等)，即那些不会实质性地影响组合物、装置或方法的基本特征的组分。换句话说，术语“基本上由……组成”(其在本文中可以与术语“基本上包含”可互换地使用)允许组合物、装置或方法中除强制组分(或同样地特征、整数、步骤等)之外还存在其它组分，前提条件是所述设备或方法的基本特征不受其它组分存在的实质性影响。
术语“方法”是指用于实现给定任务的方式、手段、技术和程序，包括但不限于从化学、生物和生物物理领域的专业人员已知的方式、手段、技术和程序已知或容易开发的那些方式、手段、技术和程序。
通过参考以下非限制性实施例进一步描述本发明。
实施例
实施例的方法：
研究设计和患者：
这项研究是对2009年11月至2013年2月在德国各地的33个多学科重症监护病房(ICU)进行的重度败血症(SISPCT)中安慰剂对照的亚硒酸钠和降钙素原导向的抗微生物疗法试验的二次分析(26)。根据ACCP/SCCM共识会议委员会的SEPSIS-1定义，资格标准包括年龄≥18岁且出现新发作重度败血症或败血性休克(≤24小时)的成年患者，并根据2016年的定义进一步分类(败血症-3和败血性休克-3)(4)。研究设计、数据收集和管理的细节已在前面描述(26)。耶拿大学医院和所有其它中心的伦理委员会批准了该研究，并在必要时获得了书面知情同意。
生物标志物测量：
患者在诊断出重度败血症或败血性休克后至多24小时入选，此后立即测量PCT、CRP和乳酸盐。在测量范围为0.02-5000ng/ml并且功能测定敏感性和最低检测限分别为至少0.06ng/ml和0.02ng/ml的设备上测量PCT。收集了所有患者的其它血液样本，并将其在-80℃下储存在耶拿中央研究实验室中。回顾性测量MR-proADM血浆浓度(ThermoFisher Scientific，德国)，检出限为0.05nmol/L。在研究入选时，进行了临床严重程度评分，包括序贯器官衰竭评估(SOFA)、急性生理和慢性健康评估(APACHE)II和简化急性生理(SAPS)II评分。
统计分析：
根据分布正态性，对于分类变量使用X2检验，以及对于连续变量使用Student t检验或Mann-Whitney U检验，评估与28天死亡率有关的人口统计学和临床特征差异。正态分布和非正态分布变量分别表示为平均值(标准差)和中位值[第一四分位数-第三四分位数]。使用接受者操作特征曲线下的面积(AUROC)和Cox回归分析评估了所有时间点的死亡率与每种生物标志物和临床评分之间的关联，并针对年龄以及合并症和败血性休克的存在进行了多变量分析校正。根据对每个生物标志物的总群体中两个AUROC临界值的计算以及每个时间点的临床评分，将患者进一步分为三个严重程度亚组(低、中和高)，其中预定义的敏感性和特异性接近90％。随后鉴定不存在任何ICU相关程序或并发症(包括病灶清除术、急诊手术、新感染的出现、血液制品输注、胶体输注、有创机械通气、肾脏/肝脏替代或血管加压药治疗以及患者一般临床体征和症状恶化)的临床稳定患者亚组，并且另外一组患者鉴定具有相应低的MR-proADM浓度，自上次测量以来未显示任何升高。计算两组的死亡率和平均住院时长，并与在每个特定时间点出院的患者组进行比较。
最后，构建了两个将PCT变化分别为20％(基线至第1天，基于这个时间段观测到的平均PCT降低)和50％(基线至第4天，基于先前构建的模型(26))的患者进行分层的模型。随后根据MR-proADM严重水平鉴定患者亚组，并计算各自的死亡率。通过Cox回归分析计算每个亚组内的死亡风险，并通过Kaplan-Meier曲线示出。随后在基线至第4天模型中研究了在第4天至第7天内发生新感染的预计风险以及对病灶清除术和紧急手术的需求。使用统计软件R(版本3.1.2)分析所有数据。
实施例1：患者特征
表1总结了研究入选时的患者特征。
总共分析了1089名具有重度败血症(13.0％)或败血性休克(87.0％)的患者，其中445名(41.3％)和633名(58.7％)的患者也分别符合败血症-3和败血性休克-3的标准。入选患者的平均年龄为65.7(13.7)岁并且平均SOFA评分为10.0(3.3)分。28天全因死亡率(N＝1076)为26.9％(败血症-3：20.0％；败血性休克-3：32.1％)，医院死亡率为33.4％(败血症-3：24.4％；败血性休克-3：40.4％)。836名患者(77.7％)中发现源自单一病灶的感染，其中肺病(N＝324；30.1％)、腹内(N＝252；23.4％)、泌尿生殖道(N＝57；5.3％)和骨骼/软组织(N＝50；4.6％)起源最普遍。相应的死亡率分别为26.5％、24.6％、22.8％和28.0％。在240名(22.3％)患者中发现了多种感染源。最常见的死亡原因包括败血症引起的多器官衰竭(N＝132；45.7％)、难治性败血性休克(N＝54；18.7％)、因现有疾患导致的死亡(N＝35；12.1％)和急性呼吸功能不全(N＝17；5.9％)。其它原因如心源性和出血性休克、肺栓塞、脑水肿、心肌梗塞和心律不齐，占总死亡率的8.6％。3.4％的患者应用治疗限制。
实施例2：基线生物标志物和临床评分与死亡率的关联
单变量和多变量Cox回归分析发现MR-proADM与总患者群体以及败血症-3和败血性休克-3亚组中28天死亡率之间的关联最强(表2)。相应的AUROC分析发现，除了APACHE II(败血症-3患者亚组)以外，所有生物标志物和临床评分与MR-proADM相比均存在显著差异。
对于7天、90天、ICU和医院死亡率预测也发现了相似的结果(表3)，在所有可能的生物标志物和临床评分组合中添加MR-proADM(N＝63)显著提高了预后能力(表4)。
实施例3：鉴定高风险患者
根据现有的SOFA严重水平以及在预测每个亚组中评估的28天死亡率的生物标志物和临床评分表现，将总患者群体进一步分层。MR-proADM在低(SOFA≤7)和中(8≤SOFA≤13)严重程度SOFA亚组中显示了所有参数的最高准确性(表5；表6)。
随后计算两个相应的MR-proADM临界值，以鉴定基线时的低(≤2.7nmol/L)和高(＞10.9nmol/L)严重程度亚组。与SOFA相比，可以对低(MR-proADM对SOFA：N＝265对232；9.8％对13.8％死亡率)和高(MR-proADM对SOFA：N＝161对155；55.9％对41.3％)严重程度临界值进行更准确的重新分类(表7)。
具有高MR-proADM浓度和相应的低或中SOFA的94名患者(9.3％)的亚组分别具有57.4％和68.9％的28天和90天死亡率，相比之下具有低和中SOFA值的其余患者群体的28天和90天死亡率分别为19.8％和30.8％。对于SAPS II、APACHE II和乳酸盐，可以分别发现类似的模式(表8-10)。
实施例4：在整个ICU住院期间鉴定低风险患者
该研究组包括未面临ICU相关程序或并发症(例如病灶清除术、急诊手术、新感染、血液制品输注、胶体输注、有创机械通气、肾脏/肝脏替代、患者的一般临床体征和症状恶化)的临床稳定患者的子集。这组临床稳定的患者被分类为低风险患者。
MR-proADM在所有后续时间点与28天死亡率之间显示出最强的关联(表11)，并且在鉴定低风险患者群体时可以提供≤2.25nmol/L的稳定临界值，从而与其它生物标志物和临床评分相比，导致具有较低死亡率的更大患者数目的分类(表12)。因此，在第4天可鉴定出290名低MR-proADM严重程度的患者，其中79名(27.2％)临床稳定且与最后测量相比MR-proADM浓度没有增加(表13)。在51名(64.6％)患者中，可发现持续低的MR-proADM浓度，而在28名(35.4％)患者中可观测到严重水平从中降至低水平。ICU平均住院时长为8[7-10]天，28天和90天的死亡率分别为0.0％和1.4％。相比之下，在第4天实际上只有43名患者从ICU出院，28天和90天的死亡率分别为2.3％和10.0％。对这组患者中MR-proADM浓度的分析显示了一系列数值，分别有20名(52.6％)、6名(42.1％)和2名(5.3％)患者具有低、中和高严重程度浓度。对于在第7天和第10天仍留在ICU的患者，存在类似的结果。
与其它生物标志物和临床评分相比，MR-proADM的稳定临界值≤2.25nmol/L可以鉴定出更大数量的低风险患者，其死亡率较低。基于这一发现，与不使用ADM的分类相比，更多的患者可以从ICU出院。通过使更多患者出院，医院可以更有效地占用ICU病床并从避免的费用中受益。
实施例5：MR-proADM对降钙素原指导疗法的额外影响
时间依赖性Cox回归分析表明，在第1天可以观测到预后信息相比于MR-proADM基线值的最早显著额外增加，后续的单个或累积测量结果导致与28天死亡率之间的关联显著增强(表14)。因此，构建了两个PCT指导算法模型，其研究从基线至第1天或第4天的PCT变化，并基于MR-proADM严重程度分类进行相应的亚组分析。
对于从基线至第1天(表15和表16)的PCT浓度降低≥20％或从基线至第4天的PCT浓度降低≥50％(表17和表18)的患者，发现其28天死亡率分别为18.3％(N＝458)和17.1％(N＝557)。当患者具有持续低水平的MR-proADM时，这一比例下降到5.6％(N＝125)和1.8％(N＝111)，但在具有持续高MR-proADM值的患者中增加到66.7％(N＝27)和53.8％(N＝39)(HR[95％CI]：19.1[8.0-45.9]和43.1[10.1-184.0])。
此外，PCT值降低≥50％(基线至第4天)但MR-proADM浓度持续高或中的患者，出现后续医院感染的风险显著更高(HR[95％CI]：高浓度：3.9[1.5-10.5]；中浓度：2.4[1.1-5.1]，相对于具有持续低浓度的患者；中浓度：2.9[1.2-6.8]，相对于降低的中至低浓度)，或需要急诊手术(HR[95％CI]：中浓度：2.0[1.1-3.7]，相对于降低的中至低浓度)。相反，与具有持续中(HR[95％CI]：3.2[1.3-7.6])或降低(HR[95％CI]：中至低：8.7[3.1-24.8])；高至中：4.6[1.4-14.5]值的患者相比，具有中至高浓度的患者更有可能需要清除感染源。当PCT水平未能降低≥50％时，如果MR-proADM浓度处于持续高(HR[95％CI]：5.7[1.5-21.9])或中(HR[95％CI]：4.2[1.3-13.2])水平，而不是持续低水平，则观测到需要急诊手术的风险显著增加。
实施例6：基线生物标志物和临床评分与死亡率的关联
在具有肺病和腹内感染的患者中以及在具有革兰氏阳性感染的患者中，MR-proADM显示出最强关联，而与感染源无关(表19-20)。当根据手术紧急情况、非手术紧急情况和择期手术史导致入住ICU将患者分组时，在所有组中，MR-proADM与28天死亡率之间的关联最强且最平衡(表21)。
实施例7：在基线和第1天时生物标志物和临床评分与SOFA的相关性
MR-proADM在所有生物标志物中与基线时的SOFA评分之间具有最大的相关性，当基线值与第1天的SOFA评分相关时，MR-proADM的相关性显著增加。可以在第10天发现MR-proADM与SOFA之间的最大相关性，整个过程中发现各个SOFA子评分之间存在差异(表22-24)。
实施例8：高风险患者的鉴定
在具有高MR-proADM浓度和低或中SAPS II值的124名患者(12.0％)的亚组中(高MR-proADM亚组：[54.8％和65.6％死亡率]；剩余的SAPS II群体[19.7％和30.0％死亡率])，以及在具有低或中APACHE II值的109名(10.6％)患者中(高MR-proADM亚组：[56.9％和66.7％死亡率]；其余的APACHE II群体：[19.5％和30.3％死亡率])，可以发现类似结果。
实施例9：通过组合PCT和ADM改进的降钙素原(PCT)指导疗法
构建了两个PCT指导算法模型，其研究从基线至第1天或第4天的PCT变化，其中基于MR-proADM严重程度分类进行相应的亚组分析(表25-30)。
先前的实施例显示了ADM在PCT降低＜20％或＜50％的患者中以及PCT降低≥20％或≥50％的患者中的附加价值。但是，其它分析表明，无论PCT降低或甚至增加的百分比如何，ADM都可以作为附加。降低的PCT值可能会反映出抗生素治疗似乎在起作用的患者，因此临床医生认为他们正在以一种良好的方式存活(即杀死败血症的根本原因-细菌，应该使患者变得更好)。
例如，一些患者的PCT水平从基线(入院日)到第1天降低，其28天死亡率为19％。通过另外测量ADM，可以从具有低ADM的患者中推断出更高的存活概率或更低的死亡概率(表25；比较仅降低PCT的死亡率为19％与PCT+低ADM的死亡率为5％)。通过降低死亡风险，患者可以更有信心地从ICU出院，或者需要更少的诊断测试(即，知道他们正处于康复过程中)。
另一方面，对于那些具有高ADM值的人，需要考虑采取新措施。他们的死亡风险要高得多(将仅降低PCT的死亡率为19％与PCT+高ADM的死亡率为58.8％进行比较)。医师认为由于PCT值的降低，患者正在好转，但实际上ADM浓度保持不变。因此可以得出结论：治疗无效，需要尽快进行调整。
以类似的方式，ADM可以帮助对那些PCT值升高的患者进行分层(表25)。
出现新感染
从基线至第1天或从基线至第4天，在两个模型中分析了PCT和MR-proADM的变化。根据总体PCT变化和MR-proADM严重水平对患者进行分组。
随后分别计算在第1天或第4天存在的每名患者在第1、2、3和4天内(表26)以及在第4、5、6和7天内(表27)的新感染数。在一些情况下，患者在观察期内出院。假定出院后没有出现新感染。在观察期内发生多次感染的患者被视为一次新感染。
作为临床结果，MR-proADM浓度高的患者应在入住ICU时结合其它药物一起使用广谱抗生素治疗，以阻止出现新感染。由于特别容易出现新感染，因此这些患者应格外小心。
病灶清除的需求
从基线至第1天或从基线至第4天，在两个模型中分析了PCT和MR-proADM的变化。根据总体PCT变化和MR-proADM严重水平对患者进行分组。
随后分别计算了在第1天或第4天存在的每个患者在第1、2、3和4天内(表28)以及在第4、5、6和7天内(表29)的病灶清除事件的数目。在一些情况下，患者在观察期内出院。
急诊手术的需求
从基线至第1天或从基线至第4天，在两个模型中分析了PCT和MR-proADM的变化。根据总体PCT变化和MR-proADM严重水平对患者进行分组。
随后计算在第1天存在的每个患者在第1、2、3和4天内的急诊手术需求/事件的数目(表30)。在一些情况下，患者在观察期内出院。
实施例10：抗生素更换或修改的需求
当结合在PCT指导的抗生素算法内时，MR-proADM可以将那些将来需要更换或修改抗生素治疗的患者与那些不需要的患者进行分层。
从基线至第1天或从基线至第4天，在两个模型中分析了PCT和MR-proADM的变化。根据总体PCT变化和MR-proADM严重水平对患者进行分组。
随后计算每个患者组在第4天所需的抗生素变化百分比(表31和表32)。
在PCT值降低≥50％的患者中
MR-proADM浓度从低升至中严重水平的患者比具有持续低水平的患者更有可能在第4天需要修改抗生素治疗(优势比[95％CI]：1.5[0.6-4.1])。
在PCT值降低＜50％的患者中
MR-proADM浓度从中升至高严重水平或持续高浓度的患者与MR-proADM浓度持续低的患者相比在第4天也更有可能需要更换其抗生素治疗(优势比[95％CI]：分别为5.9[1.9-18.1]和2.9[0.8-10.4])。
结论
尽管从基线至第1天或从基线至第4天，PCT浓度增加，但MR-proADM浓度持续低的患者对其处方抗生素治疗所做的修改显著低于具有持续中或高浓度的患者。作为临床结果，当面对增加的PCT浓度时，医师应该在决定更换抗生素之前检查患者的MR-proADM水平。在考虑更换前，具有低MR-proADM浓度的患者应考虑增加相同抗生素的剂量或增加相同抗生素的强度。那些具有较高MR-proADM浓度的患者应考虑进行早期抗生素更换(即在第1天至第3天，而不是第4天)。
实施例11：鉴定具有异常血小板水平的患者和鉴定具有血小板减少的高风险患者(表33、34和35)。
在基线和第1天，测量并分析了肾上腺髓质素原和降钙素原水平，并进行了凝血细胞计数、死亡率和血小板输注方面的分析。proADM和PCT浓度的增加与血小板数量的减少和反映血小板减少的血小板数目(每μl＜150,000)相关。在基线时proADM水平最高的患者中观测到血小板计数的下降最强。此外，proADM和PCT浓度升高与需要血小板输注治疗的患者一致。还可以证实较高的死亡率与血小板减少以及proADM(＞6nmol/L)和PCT(＞7ng/ml)水平升高相关。
研究了基线时凝血细胞水平正常的患者的Pro-ADM水平，以了解增加的proADM是否可以预测血小板减少。在基线和第1天(proADM＞10.9nmol/l)proADM水平持续升高的患者中，有39.4％出现了血小板减少。在基线(proADM＞2.75nmol/L)和第一天(proADM＞9.5nmol/L)时proADM水平升高的患者中有25.6％出现血小板减少。在基线和第1天(proADM≤2.75nmol/L)时proADM水平持续低的患者中有14.7％出现血小板减少。proADM水平升高与血小板减少事件的严重程度及相关的死亡率增加相关(proADM＞10.9nmol/L，死亡率为51％；proADM≤2.75nmol/L，死亡率为9.1％)。
实施例11涉及表33-35。
实施例的讨论
为了尽早开始最适当的治疗，准确且快速地评估疾病的严重程度至关重要。实际上，延迟或不足的治疗可能会导致患者的临床状况普遍恶化，从而导致进一步治疗的效果降低，并且总体结果较差的可能性更大(8、27)。结果，已提出了许多生物标志物和临床严重程度评分来满足这一未满足的临床需求，目前重点强调了序贯器官衰竭评估(SOFA)评分是最适当的工具，从而使其在2016年败血症-3定义中发挥核心作用(4)。这项对SISPCT试验的二次分析(26)首次将大量具有重度败血症和败血性休克的患者中常规生物标志物和临床评分(例如乳酸盐、降钙素原(PCT)和SOFA)与微循环功能障碍标志物MR-proADM的序贯测量结果进行了比较。
我们的结果表明，与所有其它生物标志物或评分相比，在败血症诊断后的最初24小时内首次使用MR-proADM会导致与短期、中期和长期死亡率的最强关联。先前的研究在很大程度上证实了我们的发现(17、28、29)，但是有矛盾的结果(30)在一定程度上可以解释为分析的样本量较小，以及该研究中强调的其它因素，例如微生物种类、感染源以及败血症发生之前的既往手术史，所有这些都可能影响生物标志物性能，从而增加了小研究群体中结果的潜在可变性。此外，我们的研究还密切确认了先前研究的结果(17)，强调了MR-proADM在低和中器官功能障碍严重程度患者中的优异表现。实际上，Andaluz-Ojeda等(17)对器官功能障碍水平低的患者组非常重视，因为“该组代表在败血症临床过程中的最早呈现和/或疾病的不太严重形式”。然而，就死亡率预测而言，可以在所有严重程度组中维持合理的表现，在根据败血症-3和败血性休克-3标准定义的两个患者组中情况也是如此。
对败血症发作后进行的序贯测量进行分析，允许根据疾病的严重程度鉴定特定的患者组。在我们的分析中，对低风险和高风险患者的鉴定非常关注。在许多ICU中，对ICU床位的需求可能会周期性地超过可用性，这可能导致分诊不足，资源分配以及后续适当入住ICU的可能性降低(32-35)。因此，对可能有资格尽早从ICU出院到降级病房的具有较低医院死亡风险的患者进行准确评估可能会带来巨大的好处。在我们研究中测量的每个时间点，MR-proADM可以鉴定出更高数目的具有最低ICU、医院和28天死亡率的低严重程度患者。对严重程度低且没有进一步ICU特异性疗法的患者组进行的进一步分析表明，在进行生物标志物测量后的每个时间点均观测到ICU停留另外4天。与在每个时间点实际出院的患者群体相比，采用生物标志物驱动的方法准确鉴定低严重程度的患者导致28天和90天死亡率降低。实际上，出院的患者具有各种低、中和高严重程度的MR-proADM浓度，随后反映出较高的死亡率。然而，尚不清楚该组内的许多患者是否仍需要进一步的ICU治疗以应对非微循环的无生命威胁的问题，或者是否有可用的降级病床床位。然而，除了临床医生的判断之外，这种由生物标志物驱动的ICU出院方法还可以改善患者的正确分层，并带来伴随的临床益处和潜在的成本节省。
相反，鉴定可能需要早期且有针对性的治疗以防止后续临床恶化的高风险患者可能具有更大的临床意义。根据SISPCT研究和其它试验中的PCT指导算法，已经观测到大量成本节省和抗生素使用减少(26、36、37)，但是即使PCT值似乎在稳步下降，仍然可以观测到较高的死亡率。我们的研究显示，在后续ICU天内，MR-proADM在PCT模型中的添加降低，从而可以鉴定低、中和高风险患者组，其中从基线至第1天，MR-proADM严重水平升高和降低提供关于治疗成功的敏感性和早期指示。此外，对未来病灶清除或急诊手术的需求以及出现新感染的易感性的预测可能对启动其它治疗和干预策略具有重大益处，从而试图预防将来早期发生任何临床并发症。
我们的研究强度包括从随机试验数据库中彻底检查具有低和高疾病严重程度的几个不同亚组，调整潜在的混杂因素，并包括具有以SEPSIS 1和3定义为特征的败血症的患者的最大样本量，以及关于MR-proADM动力学的信息。总之，基于初步诊断和在ICU治疗过程中，MR-proADM能够鉴定败血症患者的死亡风险，其性能优于其它生物标志物和临床严重程度评分。因此，MR-proADM可用作鉴定可能需要替代性诊断和治疗干预的高严重程度患者以及可能符合早期ICU出院以及不存在ICU特定疗法的低严重程度患者的工具。
表格
表1.存活至28天的患者在基线时的特性
/>
/>
/>
ICU：重症监护病房；COPD：慢性阻塞性肺病；MR-proADM：中区肾上腺髓质素原；PCT：降钙素原；CRP：C反应蛋白；SOFA：序贯器官衰竭评估；SAPS II：简化急性生理评分；APACHE II：急性生理和慢性健康评估。数据以绝对数目和百分比呈现在方括号中，表示在28天时存活和非存活的患者的比例。
表2.败血症诊断后的28天死亡率的预测
/>
/>
/>
N：数目；AUROC：接受者操作曲线下的面积；LR X2：HR：危险比；IQR：四分位数范围。所有多变量分析通过p＜0.0001与28天死亡率关联。
表3. 7天、90天的存活分析、ICU和医院死亡率
/>
/>
/>
/>
对于7天死亡率，除了PCT和CRP(分别为0.0015和0.0843)外的所有多变量p值都＜0.0001。
表4.当添加至个别生物标志物或临床评分时的MR-proADM的存活分析
/>
/>
/>
/>
HR IQR[95％CI]指示每个双变量或多变量模型中MR-proADM的危险比。每个双变量模型的自由度为2，而每个多变量模型的自由度为11。
表5.基于SOFA严重水平的28天死亡率预测的AUROC分析
/>
/>
N：数目；AUROC：接受者操作曲线下的面积；LR X2：HR：危险比；IQR：四分位数范围。
表6.MR-proADM当与个别生物标志物或临床评分组合时在不同器官功能障碍严重程度组内的存活分析
/>
表7.相应的28天SOFA和MR-proADM疾病严重程度组
MR-proADM：中区肾上腺髓质素原；SOFA：序贯器官衰竭评估
表8.相应的28天SAPS II和MR-proADM疾病严重程度组
MR-proADM：中区肾上腺髓质素原；SAPS II：简化急性生理II
表9.相应的28天APACHE II和MR-proADM疾病严重程度组
MR-proADM：中区肾上腺髓质素原；APACHE II：急性生理和慢性健康评估II
表10.相应的28天乳酸盐和MR-proADM疾病严重程度组
MR-proADM：中区肾上腺髓质素原
表11.在第1、4、7和10天生物标志物和SOFA与28天死亡率的关联
/>
/>
表12.整个ICU治疗中的低和高风险严重程度组和相应死亡率
/>
/>
表13.基于MR-proADM浓度和ICU特定疗法的死亡率和ICU治疗持续时间
*排除相同或第二天死亡率
表14.对于MR-proADM的单个和累积添加的时间依赖性Cox回归
MR-proADM：中区肾上腺髓质素原；DF：自由度
表15.遵循PCT和MR-proADM动力学的28天和90天死亡率
/>
具有以下符号的患者的危险比：*持续中值对低值；**持续高值对中值；***持续高值对低值；从低值升至中值对持续低值；/>从中值升至高值对持续中值；/>从高值降至中值对持续高值；/>从中值降至低值对从中值升至高值。Kaplan Meier图示出单个患者亚组，或成组的升高或降低的亚组。
表16.遵循PCT浓度和MR-proADM严重水平的变化的死亡率
/>
具有以下符号的患者的危险比：*持续中值对低值；**持续高值对中值；***持续高值对低值；从低值升至中值对持续低值；/>从中值升至高值对持续中值；/>从高值降至中值对持续高值；/>从中值降至低值对持续中值
表17.遵循PCT浓度和MR-proADM严重水平的变化的28天和90天死亡率
/>
具有以下符号的患者的危险比：*持续中值对低值；**持续高值对中值；***持续高值对低值；从低值升至中值对持续低值；/>从中值升至高值对持续中值；/>从高值降至中值对持续高值；/>从中值降至低值对持续中值
表18.遵循PCT浓度和MR-proADM严重水平的变化的ICU和医院死亡率
/>
具有以下符号的患者的危险比：*持续中值对低值；**持续高值对中值；***持续高值对低值；从低值升至中值对持续低值；/>从中值升至高值对持续中值；/>从高值降至中值对持续高值；/>从中值降至低值对持续中值
表19.感染源对28天死亡率预测的影响
/>
/>
在肺病感染源中，MR-proADM AUROC值显著大于除APACHE II外的所有其它参数。
表20.微生物物种对28天死亡率预测的影响
/>
/>
/>
表21.ICU进入模式对28天死亡率预测的影响
/>
/>
/>
表22.基线生物标志物和临床评分与基线和第1天SOFA的相关性
*使用与第1天在基线时相同的患者
表23.基线MR-proADM与在基线和第1天的SOFA子评分的相关性
表24.生物标志物与整个ICU治疗期间的SOFA评分的相关性
表25.基于MR-proADM严重程度和升高或降低的PCT浓度的死亡率-基线至第1天
/>
表26.从基线至第1天的PCT动力学-在第1、2、3、4天内出现新感染。
/>
表27.从基线至第4天的PCT动力学-在第4、5、6、7天内出现新感染。
表28.从基线至第1天的PCT动力学-在第1、2、3、4天内的病灶清除需求。
表29.从基线至第4天的PCT动力学-在第4、5、6、7天内的病灶清除需求。
表30.从基线至第1天的PCT动力学-在第1、2、3、4天内的紧急手术需求。
表31.从基线至第1天升高的PCT-第4天的抗生素变化
表32.从基线至第4天升高的PCT-第4天的抗生素变化
/>
表33.基于血小板计数的生物标志物水平
表34.基于proADM水平的血小板计数
表35.在基线和第1天时出现血小板减少和proADM动力学。
参考文献
1.Martin GS，Mannino DM，Eaton S，Moss M.The epidemiology of sepsis inthe United States from 1979 through 2000.N Engl J Med.Apr 17 2003；348(16)：1546-1554.
2.Kaukonen KM，Bailey M，Suzuki S，Pilcher D，Bellomo R.Mortality relatedto severe sepsis and septic shock among critically ill patients in Australiaand New Zealand，2000-2012.JAMA.Apr 02 2014；31 1(13)：1308-1316.
3.Vincent JL，Sakr Y，Sprung CL，et al.Sepsis in European intensive careunits：results of the SOAP study.Crit Care Med.Feb 2006；34(2)：344-353.
4.Singer M，Deutschman CS，Seymour CW，et al.The Third InternationalConsensus Definitions for Sepsis and Septic Shock(Sepsis-3).JAMA.Feb 23 2016；315(8)：801-810.
5.Kopterides P，Siempos，II，Tsangaris I，Tsantes A，ArmaganidisA.Procalcitonin-guided algorithms of antibiotic therapy in the intensive careunit：a systematic review and meta-analysis of randomized controlledtrials.Crit Care Med.Nov 2010；38(11)：2229-2241.
6.de Jong E，van Oers JA，Beishuizen A，et al.Efficaey and safety ofprocalcitonin guidance in reducing the duration of antibiotic treatment incritically ill patients：a randomised，controlled，open-label trial.LancetInfect Dis.Jul 2016；16(7)：819-827.
7.Harbarth S，Holeckova K，Froidevaux C，et al.Diagnostic value ofprocalcitonin，interleukin-6，and interleukin-8 in critically ill patientsadmitted with suspected sepsis.Am J Respir Crit Care Med.Aug 1 2001；164(3)：396-402.
8.Andriolo BN，Andriolo RB，Salomao R，Atallah AN.Effectiveness andsafety of procalcitonin evaluation for reducing mortality in adults withsepsis，severe sepsis or septic shock.Cochrane Database Syst Rev.Jan 18 2017；1：CD010959.
9.Temmesfeld-Wollbruck B,Brell B,David I，et al.Adrenomedullin reducesvascular hyperpermeability and improves survival in rat septicshock.Intensive Care Med.Apr 2007；33(4):703-710.
10.Muller-Redetzky HC,Will D,Hellwig K,et al.Mechanical ventilationdrives pneumococcal pneumonia into lung injury and sepsis in mice:protectionby adrenomedullin.Crit Care.2014；18(2):R73.
11.Vallet B.Endothelial cell dysfunction and abnormal tissueperfusion.Crit Care Med.May 2002；30(5 Suppl):S229-234.
12.Gonzalez-Rey E,Chorny A,Varela N,Robledo G,Delgado M.Urocortin andadrenomedullin prevent lethal endotoxemia by down-regulating the inflammatoryresponse.Am J Pathol.Jun 2006；168(6):1921-1930.
13.Carrizo GJ,Wu R,Cui X,Dwivedi AJ,Simms HH,Wang P.Adrenomedullinand adrenomedullin-binding protein-1 downregulate inflammatory cytokines andattenuate tissue injury after gut ischemia-reperfusion.Surgery.Feb 2007；141(2):245-253.
14.Brell B,Hippenstiel S,David I,et al.Adrenomedullin treatmentabolishes ileal mucosal hypoperfusion induced by Staphylococcus aureus alpha-toxin--an intravital microscopic study on an isolated rat ileum.Crit CareMed.Dec 2005；33(12):2810-2016.
15.Brell B,Temmesfeld-Wollbruck B,Altzschner I,et al.Adrenomedullinreduces Staphylococcus aureus alpha-toxin-induced rat ileum microcirculatorydamage.Crit Care Med.Apr 2005；33(4):819-826.
16.Vigue B,Leblanc PE,Moati F,et al.Mid-regional pro-adrenomedullin(MR-proADM),a marker of positive fluid balance in critically ill patients:results of the ENVOL study.Crit Care.Nov 09 2016；20(1):363.
17.Andaluz-Ojeda D,Cicuendez R,Calvo D,et al.Sustained value ofproadrenomedullin as mortality predictor in severe sepsis.J Infect.Jul 2015；71(1):136-139.
18.Hartmann O,Schuetz P,Albrich WC,Anker SD,Mueller B,Schmidt T.Time-dependent Cox regression:serial measurement of the cardiovascular biomarkerproadrenomedullin improves survival prediction in patients with lowerrespiratory tract infection.Int J Cardiol.Nov 29 2012；161(3):166-173.
19.Albrich WC,Dusemund F,Ruegger K,et al.Enhancement of CURB65 scorewith proadrenomedullin(CURB65-A)for outcome prediction in lower respiratorytract infections:derivation of a clinical algorithm.BMC Infect Dis.2011；11:112.
20.Albrich WC,Ruegger K,Dusemund F,et al.Optimised patient transferusing an innovative multidisciplinary assessment in Kanton Aargau(OPTIMA I):an observational survey in lower respiratory tract infections.Swiss MedWkly.2011；141:w13237.
21.Albrich WC,Ruegger K,Dusemund F,et al.Biomarker-enhanced triage inrespiratory infections:a proof-of-concept feasibility trial.Eur Respir J.Oct2013；42(4):1064-1075.
22.Riera J,Senna A,Cubero M,Roman A,Rello J,Study Group InvestigatorsTV.Primary Graft Dysfunction and Mortality Following Lung Transplantation:ARole for Proadrenomedullin Plasma Levels.Am J Transplant.Oct 13 2015.
23.Schoe A,Schippers EF,Struck J,et al.Postoperative pro-adrenomedullin levels predict mortality in thoracic surgery patients:comparison with Acute Physiology and Chronic Health Evaluation IV Score*.CritCare Med.Feb 2015；43(2):373-381.
24.Tyagi A,Sethi AK,Girotra G,Mohta M.The microcirculation insepsis.Indian J Anaesth.Jun 2009；53(3):281-293.
25.Hernandez G,Bruhn A,Ince C.Microcirculation in sepsis:newperspectives.Curr Vase Pharmacol.Mar 01 2013；11(2):161-169.
26.Bloos F,Trips E,Nierhaus A,et al.Effect of Sodium SeleniteAdministration and Procalcitonin-Guided Therapy on Mortality in Patients WithSevere Sepsis or Septic Shock:A Randomized Clinical Trial.JAMA Intern Med.Sep01 2016；176(9):1266-1276.
27.Bloos F,Ruddel H,Thomas-Ruddel D,et al.Effect of a multifacetededucational intervention for anti-infectious measures on sepsis mortality:acluster randomized trial.Intensive Care Med.May 02 2017.
28.Enguix-Armada A,Escobar-Conesa R,La Torre AG,De La Torre-PradosMV.Usefulness of several biomarkers in the management of septic patients:C-reactive protein,procalcitonin,presepsin and mid-regional pro-adrenomedullin.Clin Chem Lab Med.Jun 17 2015.
29.Christ-Crain M,Morgenthaler NG,Struck J,Harbarth S,Bergmann A,Muller B.Mid-regional proadrenomedullin as a prognostic marker in sepsis:anobservational study.Crit Care.2005；9(6):R816-824.
30.Suberviola B,Castellanos-Ortega A,Ruiz Ruiz A,Lopez-Hoyos M,Santibanez M.Hospital mortality prognostication in sepsis using the newbiomarkers suPAR and proADM in a single determination on ICUadmission.Intensive Care Med.Nov 2013；39(11):1945-1952.
31.Gillmann HJ,Meinders A,Larmann J,et al.Adrenomedullin IsAssociated With Surgical Trauma and Impaired Renal Function in VascularSurgery Patients.J Intensive Care Med.Jan 01 2017:885066616689554.
32.Garrouste-Orgeas M,Montuclard L,Timsit JF,Misset B,Christias M,Carlet J.Triaging patients to the ICU:a pilot study of factors influencingadmission decisions and patient outcomes.Intensive Care Med.May 2003；29(5):774-781.
33.Garrouste-Orgeas M,Montuclard L,Timsit JF,et al.Predictors ofintensive care unit refusal in French intensive care units:a multiple-centerstudy.Crit Care Med.Apr 2005；33(4):750-755.
34.Mery E,Kahn JM.Does space make waste？The influence of ICU bedcapacity on admission decisions.Crit Care.May 08 2013；17(3):315.
35.Orsini J,Blaak C,Yeh A,et al.Triage of Patients Consulted for ICUAdmission During Times of ICU-Bed Shortage.J Clin Med Res.Dec 2014；6(6):463-468.
36.Kip MM,Kusters R,MJ IJ,Steuten LM.A PCT algorithm fordiscontinuation of antibiotic therapy is a cost-effective way to reduceantibiotic exposure in adult intensive care patients with sepsis.J MedEcon.2015；18(11):944-953.
37.Wilke MH,Grube RF,Bodmann KF.The use of a standardized PCT-algorithm reduces costs in intensive care in septic patients-a DRG-basedsimulation model.Eur J Med Res.Dec 02 2011；16(12):543-548.
38.Baughman RP,Lower EE,Flessa HC,Tollerud DJ.Thrombocytopenia in theintensive care unit.Chest.1993；104(4):1243-7.7.
39.Drews RE,Weinberger SE.Thrombocytopenic disorders in criticallyill patients.Am J Respir Crit Care Med.2000；162(2 Pt 1):347-51.
40.Vanderschueren S,De Weerdt A,Malbrain M,Vankersschaever D,Frans E,Wilmer A,et al.Thrombocytopenia and prognosis in intensive care.Crit CareMed.2000；28(6):1871-6.9.
41.Strauss R,Wehler M,Mehler K,Kreutzer D,Koebnick C,HahnEG.Thrombocytopenia in patients in the medical intensive care unit:bleedingprevalence,transfusion requirements,and outcome.Crit Care Med.2002；30(8):1765-71.10.
42.Smith-Erichsen N.Serial determinations of platelets,leucocytes andcoagulation parameters in surgical septicemia.Scand J Clin Lab InvestSuppl.1985；178:7-14.11.
43.Akca S,Haji-Michael P,de Mendonca A,Suter P,Levi M,Vincent JL.Timecourse of platelet counts in critically ill patients.Crit Care Med.2002；30(4):753-6.12.
44.Crowther MA,Cook DJ,Meade MO,Grifth LE,Guyatt GH,Arnold DM,etal.Thrombocytopenia in medical-surgical critically ill patients:prevalence,incidence,and risk factors.J Crit Care.2005；20(4):348-53.13.
45.Moreau D,Timsit JF,Vesin A,Garrouste-Orgeas M,de Lassence A,ZaharJR,et al.Platelet count decline:an early prognostic marker in critically illpatients with prolonged ICU stays.Chest.2007；131(6):1735-41.14.
46.Hui P,Cook DJ,Lim W,Fraser GA,Arnold DM.The frequency and clinicalsignifcance of thrombocytopenia complicating critical illness:a systematicreview.Chest.2011；139(2):271-8.15.
47.Venkata C,Kashyap R,Farmer JC,Afessa B.Thrombocytopenia in adultpatients with sepsis:incidence,risk factors,and its association with clinicaloutcome.J Intensive Care.2013；1(1):9.
48.Semple JW,Freedman J.Platelets and innate immunity.Cell Mol LifeSci.2010；67(4):499-511.17.
49.Semple JW,Italiano JE Jr,Freedman J.Platelets and the immunecontinuum.Nat Rev Immunol.2011；11(4):264-74.18.
50.Vieira-de-Abreu A,Campbell RA,Weyrich AS,Zimmerman GA.Platelets:versatile efector cells in hemostasis,infammation,and the immunecontinuum.Semin Immunopathol.2012；34(1):5-30.19.
51.Herter JM,Rossaint J,Zarbock A.Platelets in infammation andimmunity.J Thromb Haemost.2014；12(11):1764-75.20.
52.Morrell CN,Aggrey AA,Chapman LM,Modjeski KL.Emerging roles forplatelets as imune and infammatory cells.Blood.2014；123(18):2759-67.21.
53.Xu XR,Zhang D,Oswald BE,Carrim N,Wang X,Hou Y,et al.Platelets areversatile cells:new discoveries in hemostasis,thrombosis,immune responses,tumor metastasis and beyond.Crit Rev Clin Lab Sci.2016；53(6):409-30.
54.Yu-Min Shen et al.Evaluating Thrombocytopenia during heparintherapy.Jama.Feb 2018；Egede Johansen et al.The potential of antimicrobials toinduce thrombocytopenia in critically ill patients:data froma arandomizedcontrolled trial.PLOS one.Nov.2013；Vol.8.
55.Van der Poll et al.Pathogenisis of DIC in sepsis.Sepsis.1999；103-109；Koyama et al.Time course of immature platelet count and its relation tothrombocytopenia and mortality in patients with sepsis.PLOS one.Jan.2018.
56.Guru et al.Association of Thrombocytopenia and Mortality inCritically Ill Patients on Continuous Renal Replacement Therapy.Nephron.2016；133:175-182.
57.Larkin et al.Sepsis-associated thrombocytopenia.ThrombosisReserch.2016；
58.AN N.,Auerbach H.(2017),New-onset acute thrombocytopenia inhospitalized patients:pathophysiology and diagnostic approach,Journal ofCommunity Hospital Internal Medicine Perspectives,7:3,157-167.
59.Dewitte et al.Blood platelets and sepsis pathophysiology:A newtherapeutic prospect in critical ill patients？.Ann.Intensive Care.2017；7:115.
序列表
<110> B.R.A.H.M.S有限公司
<120> 作为异常血小板水平的标志物的肾上腺髓质素原
<130> XII 2079/18WO
<150> EP17190912.0
<151> 2017-09-13
<150> EP18161091.6
<151> 2018-03-09
<160> 2
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 185
<212> PRT
<213> 智人
<400> 1
Met Lys Leu Val Ser Val Ala Leu Met Tyr Leu Gly Ser Leu Ala Phe
1 5 10 15
Leu Gly Ala Asp Thr Ala Arg Leu Asp Val Ala Ser Glu Phe Arg Lys
20 25 30
Lys Trp Asn Lys Trp Ala Leu Ser Arg Gly Lys Arg Glu Leu Arg Met
35 40 45
Ser Ser Ser Tyr Pro Thr Gly Leu Ala Asp Val Lys Ala Gly Pro Ala
50 55 60
Gln Thr Leu Ile Arg Pro Gln Asp Met Lys Gly Ala Ser Arg Ser Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ser Ser Pro Asp Ala Ala Arg Ile Arg Val Lys Arg Tyr Arg
85 90 95
Gln Ser Met Asn Asn Phe Gln Gly Leu Arg Ser Phe Gly Cys Arg Phe
100 105 110
Gly Thr Cys Thr Val Gln Lys Leu Ala His Gln Ile Tyr Gln Phe Thr
115 120 125
Asp Lys Asp Lys Asp Asn Val Ala Pro Arg Ser Lys Ile Ser Pro Gln
130 135 140
Gly Tyr Gly Arg Arg Arg Arg Arg Ser Leu Pro Glu Ala Gly Pro Gly
145 150 155 160
Arg Thr Leu Val Ser Ser Lys Pro Gln Ala His Gly Ala Pro Ala Pro
165 170 175
Pro Ser Gly Ser Ala Pro His Phe Leu
180 185
<210> 2
<211> 48
<212> PRT
<213> 智人
<400> 2
Glu Leu Arg Met Ser Ser Ser Tyr Pro Thr Gly Leu Ala Asp Val Lys
1 5 10 15
Ala Gly Pro Ala Gln Thr Leu Ile Arg Pro Gln Asp Met Lys Gly Ala
20 25 30
Ser Arg Ser Pro Glu Asp Ser Ser Pro Asp Ala Ala Arg Ile Arg Val
35 40 45

Claims (30)

1.检测试剂在制备用于对患者中的异常血小板水平进行测定的产品中的用途，其中：
-所述检测试剂结合患者样本中肾上腺髓质素原或其片段，
-其中肾上腺髓质素原或其片段的水平与所述患者中的所述异常血小板水平相关。
2.根据权利要求1所述的用途，其中所述产品用于基于所述样本中的肾上腺髓质素原或其片段的水平，测定血小板减少和/或弥散性血管内凝血。
3.根据权利要求1所述的用途，其中所述患者为重症，或已经被诊断为重症。
4.根据权利要求3所述的用途，其中在诊断为重症的时间点之时或之后从所述患者中分离所述样本。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的用途，其中所述患者被诊断出具有感染性疾病。
6.根据权利要求1-4中任一项所述的用途，其中所述患者被诊断出具有败血症。
7.根据权利要求6所述的用途，其中所述患者被诊断出具有重度败血症或败血性休克。
8.根据权利要求1-4中任一项所述的用途，其中所述患者被诊断出具有一种或多种现有器官衰竭，和/或是创伤后或手术后患者。
9.根据权利要求1-4中任一项所述的用途，其中所述患者被诊断出具有凝血系统失调，和/或具有凝血系统相关器官的功能障碍。
10.根据权利要求1-4中任一项所述的用途，其中所述肾上腺髓质素原水平与所述血小板水平负相关。
11.根据权利要求1-4中任一项所述的用途，其中所述样本选自由血液样本、血清样本、血浆样本和/或尿液样本组成的组。
12.根据权利要求1-4中任一项所述的用途，其中测定肾上腺髓质素原或其片段的水平包括测定中区肾上腺髓质素原的水平。
13.根据权利要求1-4中任一项所述的用途，其中
a.低于高严重水平的肾上腺髓质素原或其片段水平指示正常或高血小板水平，或
b.等于或高于高严重水平的肾上腺髓质素原或其片段水平指示血小板减少和/或弥散性血管内凝血的存在或其出现可能性，
c.其中肾上腺髓质素原或其片段的高严重水平是高于6.5nmol/l的水平。
14.根据权利要求13所述的用途，其中所述肾上腺髓质素原或其片段的水平等于或高于所述高严重水平指示开始或改变所述患者的治疗以解决血小板减少和/或弥散性血管内凝血的存在或其出现可能性。
15.根据权利要求14所述的用途，其中所述治疗选自由以下组成的组：血液或血小板输注，血液成分包括血清、血浆或特定细胞或其组合的输注，施用促进凝血细胞形成的药物，开始病因治疗或进行脾切除术。
16.根据权利要求13所述的用途，其用于对患者中的血小板减少和/或弥散性血管内凝血进行预后、风险评估和/或风险分层，其中肾上腺髓质素原或其片段的水平等于或高于所述高严重水平指示发生不良事件。
17.根据权利要求16所述的用途，其中不良事件包括血小板减少、弥散性血管内凝血、感染、器官衰竭、器官功能障碍和/或死亡中的一种或多种。
18.根据权利要求13所述的用途，其中所述患者是重症监护病房患者，其中
a.所述肾上腺髓质素原或其片段的水平低于所述高严重水平指示所述患者从重症监护病房出院，和/或
b.所述肾上腺髓质素原或其片段的水平等于或高于所述高严重水平指示改变所述患者在所述重症监护病房中的治疗。
19.根据权利要求1-4中任一项所述的用途，其包括测定从所述患者分离的样本中一种或多种额外标志物的水平。
20.根据权利要求19所述的用途，其中所述一种或多种额外标志物包括血液样本中的血小板水平。
21.根据权利要求19所述的用途，其中所述一种或多种额外标志物包括降钙素原或其片段。
22.根据权利要求19所述的用途，其中所述一种或多种额外标志物包括一种或多种弥散性血管内凝血标志物。
23.根据权利要求22所述的用途，其中所述一种或多种弥散性血管内凝血标志物选自由以下组成的组：膜微粒、sCD14-ST、凝血酶原酶、抗凝血酶和/或抗凝血酶活性、阳离子蛋白18、von Willebrand因子(vWF)裂解蛋白酶、脂蛋白与C反应蛋白的组合、血纤维蛋白原、血纤维蛋白、B2GP1、GPIIb-IIIa、血纤维蛋白的非变性D-二聚体、血小板因子4、组蛋白和/或PT测定。
24.根据权利要求1-4中任一项所述的用途，其中所述产品用于对具有异常血小板水平的患者中的不良事件进行测定，其中所述肾上腺髓质素原或其片段的水平与所述异常血小板水平和所述患者中存在的不良事件的可能性相关。
25.根据权利要求24所述的用途，其中所述不良事件选自由死亡、败血症相关死亡、器官衰竭和器官功能障碍组成的组。
26.根据权利要求25所述的用途，其中器官衰竭或器官功能障碍与血小板减少相关。
27.根据权利要求1-4中任一项所述的用途，其中测量至少一种额外标志物或临床参数，所述标志物或临床参数选自由以下组成的组：降钙素原、组蛋白3、组蛋白2A、组蛋白2B、组蛋白4或其片段、血小板计数、平均血小板体积和一种或多种凝血系统失调标志物。
28.根据权利要求25所述的用途，其中所述患者显示感染性疾病或败血症的症状，或者被诊断出具有感染性疾病和/或一种或多种现有器官衰竭，或者已被诊断为患有败血症。
29.根据权利要求28所述的用途，其中所述患者已被诊断为患有重度败血症或败血性休克。
30.根据权利要求1-4中任一项所述的用途，其中所述产品用于对患者中的败血性血小板减少进行测定，所述产品包括：
a.用于测定所述样本中肾上腺髓质素原或其片段的水平的检测试剂，以及
b.用于测定所述样本中降钙素原或其片段的水平的检测试剂，
c.其中当降钙素原或其片段的水平≥0.5ng/ml时，其指示败血症的存在或获得败血症的风险增加，并且其中当肾上腺髓质素原水平或其片段≥2.75nmol/L时，其指示血小板减少的存在或获得血小板减少的风险增加。
CN201880059382.1A 2017-09-13 2018-09-13 作为异常血小板水平的标志物的肾上腺髓质素原 Active CN111094987B (zh)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP17190912 2017-09-13
EP17190912.0 2017-09-13
EP18161091.6 2018-03-09
EP18161091 2018-03-09
PCT/EP2018/074725 WO2019053118A1 (en) 2017-09-13 2018-09-13 PROADRÉNOMÉDULLINE AS A MARKER OF ABNORMAL PLATELET RATES

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111094987A CN111094987A (zh) 2020-05-01
CN111094987B true CN111094987B (zh) 2023-10-31

Family

ID=63517904

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201880059382.1A Active CN111094987B (zh) 2017-09-13 2018-09-13 作为异常血小板水平的标志物的肾上腺髓质素原

Country Status (8)

Country Link
US (3) US11327082B2 (zh)
EP (3) EP3971573A1 (zh)
JP (1) JP7346389B2 (zh)
CN (1) CN111094987B (zh)
DK (1) DK3682247T3 (zh)
ES (1) ES2909399T3 (zh)
PL (1) PL3682247T3 (zh)
WO (1) WO2019053118A1 (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020243011A1 (en) * 2019-05-24 2020-12-03 Astute Medical, Inc. Methods for evaluation and treatment of renal injury based on c-c motif chemokine ligand 14 measurement

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1759319A (zh) * 2003-04-10 2006-04-12 B.R.A.H.M.S股份公司 生物液中肾上腺髓质素原中间区域部分肽的诊断检测,和实施这样的检测的免疫检测方法
WO2008055491A2 (de) * 2006-11-08 2008-05-15 Brahms Aktiengesellschaft Diagnose und risikostratifizierung von diabetes mellitus mittels mr-proadm
WO2010136983A1 (en) * 2009-05-26 2010-12-02 Consiglio Nazionale Delle Ricerche A method for producing a device applicable to biological tissues, particularly a patch for treating damaged tissues, and a device obtained by said method
CN102428368A (zh) * 2009-05-05 2012-04-25 B.R.A.H.M.S有限公司 患有内皮功能/功能障碍相关疾病的患者的基于血管活性激素的分层
CA3006390A1 (en) * 2015-11-27 2017-06-01 B.R.A.H.M.S Gmbh Mr-proadm as marker for the extracellular volume status of a subject

Family Cites Families (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2570703B1 (fr) 1984-09-26 1988-07-08 Commissariat Energie Atomique Complexes macropolycycliques de terres rares et application a titre de marqueurs fluorescents
US4882733A (en) 1987-03-13 1989-11-21 Ford Aerospace Corporation Method and apparatus for combining encoding and modulation
FR2664699B1 (fr) 1990-07-13 1995-08-18 Cis Bio Int Procede d'amplification du signal d'emission d'un compose luminescent.
JPH11512087A (ja) 1995-08-18 1999-10-19 アメリカ合衆国 ヒトの病理学及び生理学における、アドレノメジュリン（ａｍ）及び遺伝子関連産物（ｐａｍｐ）の機能的役割
DE19847690A1 (de) * 1998-10-15 2000-04-20 Brahms Diagnostica Gmbh Verfahren und Substanzen für die Diagnose und Therapie von Sepsis und sepsisähnlichen systemischen Infektionen
KR100425525B1 (ko) 2000-11-21 2004-03-30 재단법인서울대학교산학협력재단 조산과 태아감염 및 태아손상을 산전 진단하기 위한진단시약 및 진단키트
US6838432B2 (en) * 2001-09-19 2005-01-04 Oklahoma Medical Research Foundation Treatment of sepsis with TAFI
US20060029589A1 (en) * 2004-06-01 2006-02-09 Hartmut Weiler Induction of heterozygous FV Leiden carrier status to reduce mortality in sepsis and to prevent organ damage caused by inflammation and/or ischemia-reperfusion injury
JP2008505649A (ja) * 2004-07-09 2008-02-28 アモークス リミテッド 免疫細胞バイオセンサーおよびその使用方法
EP1619505B1 (en) * 2004-07-22 2008-04-16 BRAHMS Aktiengesellschaft Method for the diagnosis of critically ill patients
DE102006034142A1 (de) 2006-07-24 2008-01-31 B.R.A.H.M.S. Aktiengesellschaft Verfahren zur Steuerung der Therapie von Patienten mit Herzinsuffizienz anhand der vitro Bestimmung von Schwellenwerten von vasoaktiven Peptiden
DE102006060112A1 (de) 2006-12-20 2008-06-26 Brahms Aktiengesellschaft Diagnose und Risikostratifizierung mittels dem neuen Marker CT-proADM
US8298774B2 (en) 2007-03-12 2012-10-30 Biomedica Medizinprodukte Gmbh & Co Kg Diagnosis of septic complications
CN101796418B (zh) 2007-09-07 2013-05-01 苏黎世大学 检测分析人体脓毒症的方法
ES2486268T3 (es) 2007-11-16 2014-08-18 Biocartis Nv Biomarcadores y procedimientos de diagnóstico, predicción y/o pronóstico de septicemia y usos de los mismos
WO2010139475A1 (en) 2009-06-05 2010-12-09 B.R.A.H.M.S Gmbh Detection of bacterial infections in subjects suffering from dyspnea
ES2601104T3 (es) 2009-10-13 2017-02-14 B.R.A.H.M.S Gmbh Procalcitonina para el diagnóstico de infecciones bacterianas y la guía del tratamiento antibiótico en pacientes con apoplejía aguda o accidente isquémico transitorio
CN102822675B (zh) 2010-03-08 2016-06-01 B.R.A.H.M.S有限公司 降钙素原用于在具有非特异性不适的患者中诊断细菌感染和指导抗生素治疗
US20130302841A1 (en) 2010-11-01 2013-11-14 B.R.A.H.M.S Gmbh Prognosis and risk assessment of patients with non-specific complaints
AU2012337838B2 (en) * 2011-11-15 2016-04-21 Asahi Kasei Pharma Corporation Medicament for therapeutic treatment and/or improvement of sepsis
EP3540440B1 (en) 2011-12-08 2022-09-28 Astute Medical, Inc. Methods and uses for evaluating renal injury and renal status
KR102044940B1 (ko) * 2012-05-07 2019-11-14 가부시키가이샤 엘에스아이 메디엔스 파종성 혈관 내 응고 증후군 또는 감염성 파종성 혈관 내 응고 증후군을 검출하는 방법
SG10201800309SA (en) 2013-03-20 2018-02-27 Sphingotec Gmbh Adrenomedullin to guide therapy of blood pressure decline
MX2019000003A (es) 2016-07-08 2019-08-29 Sphingotec Gmbh Adrenomodulina para evaluar la congestión en un individuo con insuficiencia cardiaca aguda.
US20190178894A1 (en) 2016-08-09 2019-06-13 B.R.A.H.M.S Gmbh Histones and/or proadm as markers indicating an adverse event

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1759319A (zh) * 2003-04-10 2006-04-12 B.R.A.H.M.S股份公司 生物液中肾上腺髓质素原中间区域部分肽的诊断检测,和实施这样的检测的免疫检测方法
WO2008055491A2 (de) * 2006-11-08 2008-05-15 Brahms Aktiengesellschaft Diagnose und risikostratifizierung von diabetes mellitus mittels mr-proadm
CN102428368A (zh) * 2009-05-05 2012-04-25 B.R.A.H.M.S有限公司 患有内皮功能/功能障碍相关疾病的患者的基于血管活性激素的分层
WO2010136983A1 (en) * 2009-05-26 2010-12-02 Consiglio Nazionale Delle Ricerche A method for producing a device applicable to biological tissues, particularly a patch for treating damaged tissues, and a device obtained by said method
CA3006390A1 (en) * 2015-11-27 2017-06-01 B.R.A.H.M.S Gmbh Mr-proadm as marker for the extracellular volume status of a subject

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Clinical Manifestations and Management of Dengue/DHF/DSS;Siripen Kalayanarooj;《Tropical Medicine and Health》;20111231;第39卷(第3期);第1-5页 *
High plasma mid-regional pro-adrenomedullin levels in children with severe dengue virus infections;Meta Michels 等;《Journal of Clinical Virology》;20111231;第50卷;第8-12页 *
Serum Procalcitonin and Peripheral Venous Lactate for Predicting Dengue Shock and/or Organ Failure: A Prospective Observational Study;Vipa Thanachartwet 等;《PLOS Neglected Tropical Diseases》;20160826;第1-19页 *

Also Published As

Publication number Publication date
JP2020533593A (ja) 2020-11-19
WO2019053118A1 (en) 2019-03-21
EP3682247A1 (en) 2020-07-22
US20220229076A1 (en) 2022-07-21
EP3971572A1 (en) 2022-03-23
ES2909399T3 (es) 2022-05-06
DK3682247T3 (da) 2022-03-21
EP3682247B1 (en) 2022-02-09
JP7346389B2 (ja) 2023-09-19
CN111094987A (zh) 2020-05-01
US20220221474A1 (en) 2022-07-14
PL3682247T3 (pl) 2022-04-25
US20200271675A1 (en) 2020-08-27
US11327082B2 (en) 2022-05-10
EP3971573A1 (en) 2022-03-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2023095851A (ja) 抗生物質治療をモニタリングするためのマーカーとしてのｐｃｔおよびｐｒｏ－ａｄｍ
CN111094987B (zh) 作为异常血小板水平的标志物的肾上腺髓质素原
CA3108835A1 (en) Pro-adm for prognosing the risk of a medical condition requiring hospitalization in patients with symptoms of infectious disease
JP7366007B2 (ja) プロアドレノメジュリンに基づく輸液療法のガイダンスのための方法
RU2782305C2 (ru) Про-адм в качестве маркера мониторинга терапии для критически больных пациентов
JP2020533586A (ja) 重篤患者における腎置換療法のための指標としてのアドレノメズリン前駆体
RU2788885C2 (ru) Прокальцитонин и про-адм в качестве маркеров для мониторинга лечения антибиотиками

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant