CN111067893A - 一种组合物及其在制备皮肤修复产品中的应用 - Google Patents

一种组合物及其在制备皮肤修复产品中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种组合物及其在皮肤修复产品中的应用，该组合物包含褪黑素和乙酰半胱氨酸，褪黑素和乙酰半胱氨酸组合有协同效应，抗紫外损伤效果要优于其各自单一使用的效果，同时具有抗氧化、抗炎和抗衰老的功效。褪黑素和乙酰半胱氨酸联合使用不但能提高疗效，而且在保证疗效的基础上降低使用剂量，从而降低成本和可能出现的副作用。褪黑素和乙酰半胱氨酸及其组合对紫外辐射和氧化引起的人角质形成细胞损伤具有显著的修复作用，可用于抗紫外、抗氧化、抗炎和抗衰老等皮肤修复化妆品和皮肤外用药物制剂中，具有良好的应用前景。

Description

一种组合物及其在制备皮肤修复产品中的应用
技术领域
本发明涉及一种组合物及其新用途，具体为褪黑素和乙酰半胱氨酸组合物及其在制备抗紫外损伤、抗氧化、抗炎症和抗衰老等皮肤修复产品中的应用。
背景技术
阳光中的紫外线是波长100至400纳米(nm)的不可见光，可分为UVA(紫外线A，波长320-400nm，长波)、UVB(波长280-320nm，中波)、UVC(波长100-280nm，短波)。UVC在经过地球表面同温层时被臭氧层吸收，不能到达地球表面。UVA对皮肤的穿透性远比中波紫外线要强，可达到真皮深处，并可对表皮部位的黑色素起作用，从而引起皮肤黑色素沉着，使皮肤变黑，起到了防御紫外线，保护皮肤的作用。因而长波紫外线也被称做"晒黑段"。长波紫外线虽不会引起皮肤急性炎症，但对皮肤的作用缓慢，可长期积累，是导致皮肤老化和严重损害的原因之一。UVB对人体皮肤有一定的生理作用，使皮肤基底层内贮存的7-脱氢胆固醇转化为胆骨化醇即维生D3(VitD3)。虽然UVB的极大部分被皮肤表皮所吸收，不能渗入真皮层，但由于其阶能较高，能造成皮肤角质形成细胞能产生过多的活性氧(ROS)，对皮肤可产生强烈的光损伤，被照射部位真皮血管扩张，皮肤可出现红肿、水泡等症状，长久照射皮肤会出现红斑、炎症、皮肤老化，严重者可引起皮肤癌。同时，受UVB诱发细胞发生氧化损伤。由此中波紫外线又被称作紫外线的晒伤(红)段，是应重点预防的紫外线波段。
褪黑激素(Melatonin)主要是由哺乳动物和人类的松果体产生的一种胺类激素，化学名称为N-乙酰基-5-甲氧基色胺。国内外对褪黑激素的生物学功能，尤其是作为膳食补充剂的保健功能进行了广泛的研究，表明其具有促进睡眠、调节生物钟、抗衰老、调节免疫、抗肿瘤等多项生理功能。美国FDA认为褪黑激素可作为普通的膳食补充剂。到目前为止，我国卫生部先后批准了约20种含有褪黑激素的产品作为“改善睡眠”保健食品。也有文献报道褪黑激素通过抗氧化作用抑制紫外线诱导的皮肤损伤。乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine)是细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)的前体物质，它可以直接清除体内自由基，增强机体抗氧化应激能力，并可减少炎性细胞因子、趋化因子和黏附分子产生。此外，乙酰半胱氨酸还可以调节机体免疫状态和细胞凋亡程序等多种功效。它在临床上已长期用作溶粘蛋白剂以及扑热息痛中毒后的解毒剂，其优势是实质上无副作用。
发明内容
发明目的：本发明的目的在于提供一种组合物，包含褪黑素和乙酰半胱氨酸，褪黑素和乙酰半胱氨酸组合具有协同效应。本发明的另一个目的在于公开该组合物在制备皮肤修复产品中的应用。
技术方案：本发明所述的组合物，包含褪黑素和乙酰半胱氨酸。
所述乙酰半胱氨酸与褪黑素的摩尔比为0.5-16：1。
所述组合物由褪黑素和乙酰半胱氨酸添加化妆品和外用制剂可接受的辅料制备成产品；产品的剂型为膏剂、霜剂、乳剂、液剂或凝胶剂、脂质体、微球。
所述液剂中褪黑素的浓度为12-1000μM，乙酰半胱氨酸的浓度为12-1000μM。
所述液剂中褪黑素的浓度为25-800μM，乙酰半胱氨酸的浓度为25-800μM。
所述膏剂、霜剂、乳剂或凝胶剂中褪黑素的重量分数为组合物重量的0.3％-10％，乙酰半胱氨酸的重量分数为组合物重量的1％-15％。
所述的组合物在制备抗紫外损伤皮肤修复产品中的应用。
所述的组合物在制备抗氧化皮肤修复产品中的应用。
所述的组合物在制备抗炎症皮肤修复产品中的应用。
所述的组合物在制备抗衰老皮肤修复产品中的应用。
有益效果：褪黑素或乙酰半胱氨酸均可抑制紫外辐射引起的人角质形成细胞存活率的下降，褪黑素和乙酰半胱氨酸组合有协同效应，效果要优于其各自单一的效果；褪黑素和乙酰半胱氨酸均可抑制紫外辐射引起的斑马鱼体内ROS含量的增加，褪黑素和乙酰半胱氨酸组合有协同效应，效果要优于其各自单一的效果；褪黑素和乙酰半胱氨酸组合还对紫外辐射致人角质形成细胞光老化具有显著的修复作用；此外，褪黑素和乙酰半胱氨酸组合还可以有效抑制过氧化氢引起的人角质形成细胞存活率的下降和炎性因子的分泌。因此，褪黑素和乙酰半胱氨酸组合具有抗紫外辐射、抗氧化、抗炎和抗衰老的功效。褪黑素和乙酰半胱氨酸的组合物不但能提高疗效，而且在保证疗效的基础上降低使用剂量，从而降低成本和可能出现的副作用，可用于抗紫外损伤、抗氧化、抗炎和抗衰老等皮肤修复化妆品和外用药物制剂中。
附图说明
图1MT对HaCaT细胞存活率的影响；
图2MT对紫外损伤HaCaT细胞的修复作用；
图3NAC对HaCaT细胞存活率的影响；
图4NAC对紫外损伤HaCaT细胞的修复作用；
图5褪黑素和乙酰半胱氨酸组合对UVB损伤的人角质形成细胞的修复作用；
图6MT为12.5μM时以NAC剂量为横坐标的相加效应图和实际效应图；
图7MT和NAC合用对紫外损伤HaCaT细胞修复作用；
图8MT为25μM时以NAC剂量为横坐标的相加效应图和实际效应图；
图9MT和NAC分别对紫外损伤斑马鱼体内ROS含量的影响；
图10NAC为1.25μg/ml和不同浓度NAC组合对紫外损伤斑马鱼体内ROS含量的影响；
图11NAC为1.25μg/ml时以MT剂量为横坐标的相加效应图和实际效应图；
图12NAC为2.5μg/ml和不同浓度MT组合对紫外损伤斑马鱼体内ROS含量的影响；
图13NAC为2.5μg/ml时以MT剂量为横坐标的相加效应图和实际效应图；
图14MT和NAC合用对H2O2损伤的HaCaT细胞存活率的影响；
图15MT和NAC合用对H2O2损伤的HaCaT细胞TNF-α含量的影响；
图16MT和NAC合用对H2O2损伤的HaCaT细胞IL-1β含量的影响；
图17MT和NAC合用对紫外损伤的HaCaT细胞PIP含量的影响。
具体实施方式
下面结合附图，对本发明的具体实施方式进行详细描述。以下实施例及附图中MT为褪黑素的简写，NAC为乙酰半胱氨酸的简写。人永生化角质形成细胞株HaCaT细胞为本实验室保存，斑马鱼成鱼购自于国家斑马鱼资源中心，胚胎为实验室自行孵化获得。
实施例1
褪黑素单独使用对UVB损伤的人角质形成细胞的修复作用
HaCaT细胞是人永生化角质形成细胞株，在生物特性上与正常人角质形成细胞相似。取状态良好处于指数生长期的HaCaT细胞，消化，计数，将细胞接种于96孔板，接种浓度为1×104个/孔，接种体积为200μL/孔，置37℃，5％CO2培养箱中培养贴壁后，加入不同浓度的褪黑素继续培养24h，MTT法测定细胞存活率。结果示于图1，其中，与对照组相比，*表示P<0.05，***表示P<0.001。如图1所示，褪黑素浓度小于1mM时，对细胞无毒性，为安全浓度。用UVB(311nm)照射细胞(50mJ/cm2)建立紫外损伤模型，无照射的作为对照组。然后加入不同浓度的褪黑素培养24h后，用MTT法测定细胞存活率。结果示于图2，其中，与UV相比，#表示P<0.05，###表示P<0.001。如图2所示，UVB显著降低细胞存活率，而25μM-1000μM的褪黑素显著提高细胞存活率(图2)，表明其对角质形成细胞有很好的修复功能。
实施例2
乙酰半胱氨酸单独使用对UVB损伤的人角质形成细胞的修复作用
取状态良好处于指数生长期的HaCaT细胞，消化，计数，将细胞接种于96孔板，接种浓度为1×104个/孔，接种体积为200μL/孔，置37℃，5％CO2培养箱中培养贴壁后，加入不同浓度的乙酰半胱氨酸继续培养24h，MTT法测定细胞存活率。结果示于图3，其中，与对照组相比，***表示P<0.001。如图3所示，乙酰半胱氨酸大于10mM时，对细胞有显著毒性，因此后续实验应选用小于5mM的浓度。用UVB(311nm)照射细胞(50mJ/cm2)建立紫外损伤模型，无照射的作为对照组。然后加入不同浓度的乙酰半胱氨酸培养24h后，用MTT法测定细胞存活率。结果示于图4，其中，与UV相比，###表示P<0.001。如图4所示，UVB显著降低细胞存活率，而100μM-1000μM的乙酰半胱氨酸显著提高细胞存活率(图2)，表明其对角质形成细胞有很好的修复功能。
实施例3
褪黑素和乙酰半胱氨酸组合对UVB损伤的人角质形成细胞的修复作用
参考文献《多药合用药效相加的数学规律及协同拮抗的定量计算方法》(袁守军著，江苏凤凰科学技术出版社)，根据图2和图4的结果，用Origin软件中的Logistic分别拟合出各自量效关系方程，记作
Figure BDA0002376977230000041
Figure BDA0002376977230000042
对现有几个合用计量点进行评价，计算出预期相加效应，即预期的HaCaT细胞存活率。具体如下：
(1)按MT 12.5μM(未起效剂量)不变，NAC剂量改变的方式合用，以NAC为目标药的序贯进行等效剂量兑换后，预期相加效应的计算表如下：
Figure BDA0002376977230000043
各栏目数值计算说明：(3)栏：将(2)栏数据用公式①算出；(4)栏：将(3)栏用公式②算出；(5)栏：(1)栏+(4)栏；(6)栏：将(5)栏用公式②算出。
(2)按MT 12.5μM(未起效剂量)不变，NAC剂量改变的方式合用，以MT为目标药的序贯进行等效剂量兑换后，预期相加效应的计算表如下：
Figure BDA0002376977230000051
各栏目数值计算说明：(3)栏：将(2)栏数据用公式①算出；(4)栏：将(3)栏用公式②算出；(5)栏：(1)栏+(4)栏；(6)栏：将(5)栏用公式②算出。
根据上表设计的合用剂量进行实验，验证预期的合用效应。取状态良好处于指数生长期的HaCaT细胞，消化，计数，将细胞接种于96孔板，接种浓度为1×104个/孔，接种体积为200μL/孔，置37℃，5％CO2培养箱中培养24小时使其贴壁。吸出培养基后，加入200μLPBS，用强度为50mJ/cm2的UVB光源对HaCaT细胞照射后，给予不同MT和NAC组合剂量刺激，继续培养24小时。每孔用PBS清洗两遍后，加入200μL含10％MTT的DMEM，37℃培养箱中孵育4h。吸除上清液，每孔加入150μL DMSO，振摇10分钟。490nm测定每孔的吸光值，计算细胞增殖率。实验过程中使用显微镜拍照。
结果示于图5，其中，与对照组相比，***表示P<0.001；与UV相比，###表示P<0.001。如图5所示，UVB显著降低细胞存活率，除了MT和NAC均为12.5μM组外，其余各剂量组合均可显著修复紫外损伤，表明MT和NAC合用，效果优于单药效果。
实验效应值与预期效应值比较如图6所示。以合用组各计量水平为横坐标，以各预期相加效应值为纵坐标作图，构成预期等效相加效应的量效曲带。同时，在图上作出合用组的实际效应值。结果表明：当MT剂量为12.5μM，NAC在25-200μM剂量范围内合用情况下是具有协同效果的。
(3)褪黑素(MT)和乙酰半胱氨酸(NAC)按MT 25μM不变，NAC剂量改变的方式合用，以NAC为目标药的序贯进行等效剂量兑换后，预期相加效应的计算表
Figure BDA0002376977230000061
各栏目数值计算说明：(3)栏：将(2)栏数据用公式①算出；(4)栏：将(3)栏用公式②算出；(5)栏：(1)栏+(4)栏；(6)栏：将(5)栏用公式②算出。
(4)褪黑素(MT)和乙酰半胱氨酸(NAC)按MT 25μM不变，NAC剂量改变的方式合用，以MT为目标药的序贯进行等效剂量兑换后，预期相加效应的计算表如下：
Figure BDA0002376977230000062
各栏目数值计算说明：(3)栏：将(2)栏数据用公式②算出；(4)栏：将(3)栏用公式①算出；(5)栏：(1)栏+(4)栏；(6)栏：将(5)栏用公式①算出。
根据上表设计的合用剂量进行实验，验证预期的合用效应。取状态良好处于指数生长期的HaCaT细胞，消化，计数，将细胞接种于96孔板，接种浓度为1×104个/孔，接种体积为200μL/孔，置37℃，5％CO2培养箱中培养24小时使其贴壁。吸出培养基后，加入200μLPBS，用强度为50mJ/cm2的UVB光源对HaCaT细胞照射后，给予不同MT和NAC组合剂量刺激，继续培养24小时。每孔用PBS清洗两遍后，加入200μL含10％MTT的DMEM，37℃培养箱中孵育4h。吸除上清液，每孔加入150μL DMSO，振摇10分钟。490nm测定每孔的吸光值，计算细胞增殖率。实验过程中使用显微镜拍照。
结果示于图7，其中，与对照组相比，***表示P<0.001；与UV相比，###表示P<0.001。如图7所示，UVB显著降低细胞存活率，各剂量组合均可显著修复紫外损伤。
实验效应值与预期效应值比较如图8所示。以合用组各计量水平为横坐标，以各预期相加效应值为纵坐标作图，构成预期等效相加效应的量效曲带。同时，在图上作出合用组的实际效应值。结果表明：当MT剂量为25μM，NAC在12.5-200μM剂量范围内合用情况下是具有协同效果的。
实施例4
乙酰半胱氨酸和褪黑素分别单独使用对斑马鱼紫外损伤的修复作用
野生型斑马鱼在28.5℃下将鱼单独保存在3L丙烯酸罐中，光照：暗14:10小时循环。将胚胎收集在含有3ml胚胎培养基的6孔板(每孔10个胚胎)，孵育到第六天最终浓度为1.25、2.5、5、10μg/ml的NAC，和25、50、100、200μg/ml的MT预处理24小时，再用上述实验得出的适宜辐射剂量照射斑马鱼后，在4h观察幼鱼的情况，并用荧光探针DCFH-DA孵育30分钟后，荧光显微镜拍照，并用ImageJ软件定量分析幼鱼体内ROS含量。
结果示于图9，其中，与对照组相比，***表示P<0.001；与UV相比，#表示P<0.05，##表示P<0.01，###表示P<0.001。如图9所示，与正常对照组相比，UV使斑马鱼体内ROS含量显著增加，证明引起斑马鱼氧化损伤，相比UV处理组，MT(25-200μg/ml)和NAC(1.25-10μg/ml)分别处理，均能显著降低斑马鱼体内ROS水平，呈现剂量依赖性。
实施例5
褪黑素和乙酰半胱氨酸组合对斑马鱼紫外损伤的修复作用
根据图9的结果，用Origin软件中的Logistic分别拟合出各自量效关系方程，记作
Figure BDA0002376977230000071
Figure BDA0002376977230000072
对现有几个合用计量点进行评价，计算出预期相加效应，即预期的紫外损伤修复作用。具体如下：
(1)按NAC 1.25μg/ml不变，MT剂量改变的方式合用，以NAC为目标药的序贯进行等效剂量兑换后，预期相加效应的计算表如下：
Figure BDA0002376977230000073
Figure BDA0002376977230000081
各栏目数值计算说明：(3)栏：将(2)栏数据用公式③算出；(4)栏：将(3)栏用公式④算出；(5)栏：(1)栏+(4)栏；(6)栏：将(5)栏用公式④算出。
(2)按NAC 1.25μg/mL不变，MT剂量改变的方式合用，以MT为目标药的序贯进行等效剂量兑换后，预期相加效应的计算表如下：
Figure BDA0002376977230000082
各栏目数值计算说明：(3)栏：将(2)栏数据用公式③算出；(4)栏：将(3)栏用公式④算出；(5)栏：(1)栏+(4)栏；(6)栏：将(5)栏用公式④算出。
根据上表设计的合用剂量进行实验，验证预期的合用效应。将胚胎收集在含有3ml胚胎培养基的6孔板(每孔10个胚胎)，孵育到第六天。以NAC剂量不变，MT剂量选择0，5，10，20，40μg/ml，每组10个胚胎，处理24小时。然后用新鲜培养基清洗胚胎，并将其暴露于50mJ/cm2辐射强度的UVB下，然后用DCFH-DA(10μM)孵育30分钟。用新鲜培养基洗涤两次，用三卡因麻醉。麻醉后的斑马鱼在彩色数码相机(Olympus)的显微镜下拍摄。荧光强度通过图像程序进行量化处理。结果示于图10，其中，与对照组相比，***表示P<0.001；与UV相比，#表示P<0.05，##表示P<0.01，###表示P<0.001。图10结果表明：NAC以1.25μg/ml剂量不变，MT和NAC合用情况下，也能明显降低斑马鱼因紫外损伤引起的ROS。
实验效应值与预期效应值比较如图11所示。以合用组各计量水平为横坐标，以各预期相加效应值为纵坐标作图，构成预期等效相加效应的量效曲带。同时，在图上作出合用组的实际效应值。结果表明：当NAC以1.25μg/ml剂量不变，MT剂量为40μg/ml时合用能表现出协同效应。
(3)按NAC 2.5μg/mL不变，MT剂量改变的方式合用，以NAC为目标药的序贯进行等效剂量兑换后，预期相加效应的计算表如下：
Figure BDA0002376977230000091
各栏目数值计算说明：(3)栏：将(2)栏数据用公式③算出；(4)栏：将(3)栏用公式④算出；(5)栏：(1)栏+(4)栏；(6)栏：将(5)栏用公式④算出。
(4)按NAC 2.5μg/mL不变，MT剂量改变的方式合用，以MT为目标药的序贯进行等效剂量兑换后，预期相加效应的计算表如下：
Figure BDA0002376977230000092
各栏目数值计算说明：(3)栏：将(2)栏数据用公式③算出；(4)栏：将(3)栏用公式④算出；(5)栏：(1)栏+(4)栏；(6)栏：将(5)栏用公式④算出。
根据上表设计的合用剂量进行实验，验证预期的合用效应。将胚胎收集在含有3ml胚胎培养基的6孔板(每孔10个胚胎)，孵育到第六天。以NAC剂量不变，MT剂量选择0，5，10，20，40μg/ml，每组10个胚胎，处理24小时。然后用新鲜培养基清洗胚胎，并将其暴露于50mJ/cm2辐射强度的UVB下，然后用DCFH-DA(10μM)孵育30分钟。用新鲜培养基洗涤两次，用三卡因麻醉。麻醉后的斑马鱼在彩色数码相机(Olympus)的显微镜下拍摄。荧光强度通过图像程序进行量化处理。结果示于图12，其中，与对照组相比，***表示P<0.001；与UV相比，##表示P<0.01，###表示P<0.001。图12结果表明：NAC以2.5μg/ml剂量不变，MT和NAC合用情况下，也能明显降低斑马鱼因紫外损伤引起的ROS。
实验效应值与预期效应值比较如图13所示。以合用组各计量水平为横坐标，以各预期相加效应值为纵坐标作图，构成预期等效相加效应的量效曲带。同时，在图上作出合用组的实际效应值。结果表明：当NAC以2.5μg/ml剂量不变，MT剂量为40μg/ml以下时合用未能表现出协同效应。
实施例6
褪黑素和乙酰半胱氨酸组合对过氧化氢损伤的人角质形成细胞的修复作用
实验分为空白对照组、H2O2刺激组(模型组)和药物组(不同剂量褪黑素和乙酰半胱氨酸组合)。取状态良好处于指数生长期的HaCaT细胞，消化，计数，将细胞接种于96孔板，接种浓度为1×104个/孔，接种体积为200μL/孔，置37℃，5％CO2培养箱中培养24小时使其贴壁。吸出培养基后，空白对照组加入200μL PBS，其余各组用含100μM的H2O2的PBS培养6h后，各组弃去PBS后加入培养基，其中药物组分别给予不同MT和NAC组合剂量置于37℃培养24h后收集上清，每孔用PBS清洗两遍后，加入200μL含10％MTT的DMEM，37℃培养箱中孵育4h。吸除上清液，每孔加入150μL DMSO，振摇10分钟。490nm测定每孔的吸光值，计算细胞增殖率。采用ELISA试剂盒操作检测收集的细胞培养上清中炎性因子TNF-α和IL-1β含量。
结果示于图14-17，其中，与对照组相比，***表示P<0.001，与H2O2相比，##表示P<0.01，###表示P<0.001。如图14所示，H2O2显著降低细胞存活率，除了MT和NAC均为12.5μM组外，其余各剂量组合均可显著增加细胞的存活率。如图15和图16所示，H2O2显著增加细胞分泌炎性因子，而除了MT和NAC均为12.5μM组外，其余各剂量组合均可显著降低H2O2引起的细胞炎性因子的分泌，因而具有抗皮肤炎症的功效。
实施例7
褪黑素和乙酰半胱氨酸组合对紫外辐射致人角质形成细胞光老化的修复作用
皮肤光老化过程中I型胶原蛋白前体(procollagen typeⅠprotein,PIP)生物合成降低，从而导致皮肤老化。取状态良好处于指数生长期的HaCaT细胞，消化，计数，将细胞接种于96孔板，接种浓度为1×104个/孔，接种体积为200μL/孔，置37℃，5％CO2培养箱中培养24小时使其贴壁。吸出培养基后，加入200μLPBS，用强度为20mJ/cm2的UVB光源对HaCaT细胞照射后，给予不同MT和NAC组合剂量刺激，继续培养24小时。用ELISA试剂盒测定培养上清中I型胶原蛋白前体的含量。
结果示于图17，其中，与正常对照组相比，***表示P<0.001；与UV组相比，###表示P<0.001。如图17所示，UV显著降低细胞分泌的PIP水平，除了MT和NAC均为12.5μM组外，其余各剂量组合均可显著增加PIP水平。
实施例8
组合物制剂的制备
褪黑素30mg、乙酰半胱氨酸300mg、羧甲基纤维素钠0.5g、甘油1g、苯甲酸钠0.05g、水8mL采用常规技术制成膏剂。具体为取羧甲基纤维素钠置于研钵中，加入甘油研匀，然后边研边加入溶有苯甲酸钠的水溶液，待溶胀后研匀，即得基质。取褪黑素和乙酰半胱氨酸置于研钵中，分次加入制得的基质研匀。
褪黑素若干，乙酰半胱氨酸若干，溶解于PBS缓冲液制成液剂，褪黑素终浓度为25μM，乙酰半胱氨酸终浓度为200μM。

Claims (10)

1.一种组合物，其特征在于包含褪黑素和乙酰半胱氨酸。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于所述乙酰半胱氨酸与褪黑素的摩尔比为0.5-16：1。
3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于所述组合物由褪黑素和乙酰半胱氨酸添加化妆品和外用制剂可接受的辅料制备成产品；产品的剂型为膏剂、霜剂、乳剂、液剂或凝胶剂、脂质体、微球。
4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于所述液剂中褪黑素的浓度为12-1000μM，乙酰半胱氨酸的浓度为12-1000μM。
5.根据权利要求4所述的组合物，其特征在于所述液剂中褪黑素的浓度为25-800μM，乙酰半胱氨酸的浓度为25-800μM。
6.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于所述膏剂、霜剂、乳剂或凝胶剂中褪黑素的重量分数为组合物重量的0.3％-10％，乙酰半胱氨酸的重量分数为组合物重量的1％-15％。
7.如权利要求1所述的组合物在制备抗紫外损伤皮肤修复产品中的应用。
8.如权利要求1所述的组合物在制备抗氧化皮肤修复产品中的应用。
9.如权利要求1所述的组合物在制备抗炎症皮肤修复产品中的应用。
10.如权利要求1所述的组合物在制备抗衰老皮肤修复产品中的应用。
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