CN111057723A - 一种种子生物刺激素sb-mgw6的制备及应用方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及种子科学领域，特别是关于一种种子生物刺激素SB‑MGW6的制备及应用方法。从甘肃省山丹县明长城(Ming Great Wall)附近极度干旱的土壤中分离筛选、纯化鉴定获得重要菌株蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus MGW6，研究发现其具有耐盐、固氮、溶磷、产吲哚乙酸等能力，利用菌液可直接制备种子生物刺激素SB‑MGW6，浸种‑保湿，回干处理能有效提高盐碱地玉米种子萌发出苗能力。本发明可广泛应用于盐碱地玉米生产中。

Description

一种种子生物刺激素SB-MGW6的制备及应用方法

技术领域

本发明涉及种子科学领域，特别是关于一种种子生物刺激素（Seed Biostimulantof Ming Great Wall 6, SB-MGW6）制备及应用方法。

背景技术

近年来生物刺激素已成为全球农资市场上一个极其时尚的名词。按照国际组织的定义，生物刺激素是一种包含某些成分和微生物的物质，这些成分和微生物在施用于植物或者根际时，其功效是对植物的自然进程起到刺激作用，包括加强/有益于营养吸收、营养功效、非生物胁迫耐抗能力及作物品质，而与营养成分无关。在欧洲，生物刺激素的使用已涉及果树(柑橘、橄榄、葡萄等)、蔬菜和水果(西兰花、辣椒、黄瓜、草莓、西红柿、甜瓜等)、粮食作物(土豆、小麦、玉米、油菜等)和花卉、苗圃等，并取得了良好的效果。

种子活力是指在广泛的田间条件下，决定种子迅速整齐出苗和长成正常幼苗潜在能力的总称（McDonald，1980）。种子处理、包衣是指在种子收获后到播种前，采用各种有效的处理，包括杀菌消毒、温汤浸种、肥料浸拌种、微量元素处理、低温层积、生长调节剂处理和包衣等强化方法，具有防止种子携带病菌的危害和土壤中的病虫害，保护种子正常发芽和出苗生长；提高种子对不利土壤和气候条件的抗逆能力，增加成苗率；提高种子的耐藏性，防止种子劣变；改变种子大小和形状，便于机械化播种；增加种子活力，促进全苗、壮苗，提高作物产量和改善产品质量等功效。前期研究发现生物刺激素能够有效提高种子活力，以保障田间播种后实现苗齐、苗匀、苗壮，并可持续影响植株后期的产量和品质，特别是种子生物刺激素研发作为一项新兴产业，具有广阔的发展应用前景。

人口增长、土壤退化和农药滥用是农业未来几十年必须面对的重大挑战。同时，近年来我国旱薄地、盐碱地等中低产田的开发、改良和利用在扩大作物种植面积、提高产量方面发挥了重要作用，其中高质量种子又是适应土壤退化环境、满足盐碱地绿色开发利用，实现种业可持续发展的重要基础和保障，故提高种子质量特别是不断突破种子质量保障关键技术已成为新时代种业发展最重要的主题之一。玉米作为我国第一大粮食作物，农业农村部部长韩长赋在《玉米论略》一文中就特别强调了“抓好玉米生产就抓好了粮食持续稳定发展的关键”。故不断研发种子质量增强技术，如：开发种子生物刺激素新产品并应用于玉米等作物生产中，进而改善种子际、提高作物种子逆境出苗等能力，以保障作物产量和品质，这对加快我国新旧动能转换、保障我国未来粮食有效供给、助力世界粮食安全具有重大意义。

目前我国利用种子生物刺激素产品提高玉米种子逆境（土壤盐渍化、土壤贫瘠、干旱等）发芽能力的报道甚少。其中土壤盐渍化是世界范围内农业生产上最常见的问题, 它产生的离子毒害和渗透胁迫对植物的生长和发育造成重大影响，直接影响产量和品质。选育耐（抗）逆农作物新品种是一种切实可行的解决途径，但周期长、难度大；相对而言，研发目标品种种子生物刺激素产品已成为一种更为高效的策略。科学应用产品便能有效改善种子际、提高作物种子的耐（抗）逆生长能力，实现提质增效、绿色生产。

基于有益微生物的分离鉴定，结合其他物质成分，研发种子生物刺激素产品以提高玉米等作物种子萌发耐（抗）盐碱能力的报道及产品较少，尚具有巨大的市场空间和发展潜力，非常值得我们去研发。

发明内容

本发明的目的是为满足种子生物刺激素市场的需求和克服现有技术不足，提供一种种子生物刺激素SB-MGW6的制备及应用方法，该生物刺激素的制备及应用能够有效提高玉米种子萌发出苗抗盐胁迫能力，以满足盐碱地玉米生产需要。

为了实现上述目的，本发明基于生物刺激素对植物的自然进程起到刺激作用，特别是具有提高植物生长对非生物胁迫耐抗能力等功效。围绕“提高玉米等作物种子萌发抗盐胁迫能力等”这一目标，广泛收集目标有益微生物的可能来源样本，并通过分离鉴定等一系列作业，获得目标菌株并完成提高玉米种子萌发耐盐性生物刺激素研发及应用工作。本发明采用以下技术方案获得一种种子生物刺激素SB-MGW6的制备及应用方法，主要包括以下作业：（1）生态调研及菌源样品收集；（2）菌株分离筛选；（3）菌株纯化；（4）目标菌株特性研究；（5）菌株促生能力测定；（6）菌株鉴定；（7）种子生物刺激素制备；（8）种子生物刺激素应用实效检测。

所述作业（1）中，根据研发目标，开展生态调研，制定取样方案，进行菌源样品收集，并对收集到的样品进行标识、信息备注和低温保存。本发明菌源为甘肃省山丹县明长城(Ming Great Wall)附近（100.88E，38.84N），极度干旱的土壤（1千克左右）。

所述作业（2）中，采用匀浆法在含不同浓度NaCl的固体牛肉膏蛋白胨上对土壤样品中内生细菌进行逐级分离筛选耐盐菌株。

所述作业（3）中，采取平板划线法进行菌株纯化获得候选菌株，并对候选菌株的耐盐性等进一步确认。

所述作业（4）中，对目标菌株的自身固氮能力、溶磷能力、产激素吲哚乙酸等进行测定。

所述作业（5）中，制备目标菌液，对试验玉米品种种子浸种处理后进行标准发芽试验、幼苗生长测定、模拟田间出苗率测定等以鉴定促生效果。

所述作业（6）中，对目标菌落进行形态特征鉴定和16S rDNA种属分子鉴定。

所述作业（7）中，以目标菌液为主效成分制备目标种子生物刺激素。

所述作业（8）中，对目标种子生物刺激素进行盐碱地玉米生产应用实效验证及使用方法研究。

本发明的有益效果是：基于生物刺激素可对植物的自然进程起到刺激作用，特别是具有提高对非生物胁迫的耐抗能力等功效。为提高玉米种子萌发抗盐胁迫能力等能力，通过生态调研及菌源样品收集、菌株分离筛选、菌株纯化、目标菌株特性研究、菌株促生能力测定、菌株鉴定、种子生物刺激素制备、种子生物刺激素应用实效检测等流程获得目标种子生物刺激素，并结合盐碱地应用实效建立使用方法。本发明可广泛应用于盐碱地玉米生产中，以提高玉米种子活力，保障种子在盐胁迫等条件下快速整齐出苗，助力盐碱地玉米增产增效。

附图说明

图1为本发明的作业流程图。

图2为本发明的菌株MGW6耐盐能力测定。

图3为本发明的菌株MGW6固氮、溶磷能力测定。

图4为本发明的IAA浓度与吸光值变化标准曲线。

图5为本发明的盐胁迫下MGW6菌液处理对玉米种子发芽势和发芽率的影响。

图6为本发明的盐胁迫下MGW6菌液处理对玉米幼苗生长的影响。

图7为本发明的MGW6菌液处理对玉米种子模拟田间出苗率的影响。

图8为本发明的菌株MGW6革兰氏染色图。

图9为本发明的菌株MGW6的16S rDNA序列。

图10为本发明的菌株MGW6系统发育树进化树。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明进行详细的描述。

如图1所示，本发明基于生物刺激素可对植物的自然进程起到刺激作用，微生物有益菌等物质作为种子生物刺激素重要组成，对其开发利用将有利于提高种子活力，增强种子萌发出苗抗逆能力，并可持续影响植株后期的产量和品质。本发明涉及的提高玉米种子萌发耐（抗）盐性生物刺激素制备及应用方法包括生态调研及菌源样品收集、菌株分离筛选、菌株纯化、目标菌株特性研究、菌株促生能力测定、菌株鉴定、种子生物刺激素制备、种子生物刺激素应用实效检测等作业（图1）。

本发明涉及一种种子生物刺激素的制备及应用方法，其具体实施方式如下。

（1）生态调研及菌源样品收集：根据本种子生物刺激素研发目标，基于生态调研，选择微生物有益菌来源，对收集的样品名称、具体时间、地点等信息进行登记；本发明菌源为2017年8月17日甘肃省山丹县明长城（Ming Great Wall）附近（100.88E，38.84N）获取的极度干旱的土壤样品（1千克左右）备用。

（2）菌株分离筛选：牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏3.0 g，蛋白胨10.0 g，琼脂15-25g，蒸馏水1000 mL，pH 7.4-7.6；采用稀释法，称取20 g土样放入三角瓶，加入80 mL无菌水，摇匀制备成菌种悬液，并将其稀释成不同浓度菌种溶液，备用。再用接种环蘸取10倍系列稀释的菌种悬浮液1-2 滴，采用涂布法接种于含5%、6%、7%、8%、9%、10%等6个不同浓度NaCl的固体牛肉膏蛋白胨培养基平板上（不断增加盐浓度直至无菌落出现），各浓度6个重复，置于恒温培养箱28℃培养6-7 d，观察菌株的生长状况。

（3）菌株纯化：基于平板细菌生长情况观察，则选择7%的NaCl固体牛肉膏蛋白胨培养基平板上，挑选生长旺盛菌落，用平板划线法接种到固体牛肉膏蛋白胨培养基上；并将培养基放入培养箱继续培养，待菌落长出较多时，继续划线纯化，直到纯化出单一菌落。注：对菌株分离后，对不同的菌株进行编号，本发明纯化出的目标菌株编号为MGW6（Ming GreatWall 6）。

（4）目标菌株特性研究：28℃下培养48h，得到菌株MGW6，并针对该菌株进一步开展耐盐性、固氮性、溶磷性、产激素吲哚乙酸能力等补充试验。

耐盐性测定：将生长对数期的MGW6菌液0.1mL加入40mLNaCl含量为5%、6%、7%、8%、9%、10%的牛肉膏蛋白胨液体培养基中，28℃恒温摇床200 r/min培养24h，测菌液OD600nm的吸光值，以未接菌的牛肉膏蛋白胨液体培养基作对照，重复3次。

结果进一步表明菌株MGW6具有一定的耐盐性，耐盐范围为0％-7.0％（图2）。

菌株MGW6以25％甘油作冷冻保护剂，MGW6菌株在-80℃超低温冰箱保存，保存地点为：青岛农业大学农学院种子科学与工程实验室。同时在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心也进行了保存；地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；保藏中心登记入册编号CGMCC No. 18689。

固氮性测定：在无菌操作台上，将MGW6菌株划线接种到无氮培养基中，并置于黑暗培养箱中28℃下培养，4-6d观察其生长情况，根据平板上菌落的有无，检验菌株是否能够自身固氮，保证其正常生长。

结果表明MGW6菌株接种到无氮培养基上，第4d观察到有菌落出现，第6d菌落较明显，说明MGW6菌株具有固氮能力（图3）。

溶磷性测定：在无菌操作台上，将MGW6菌株点接于无机磷和有机磷培养基中，并置于黑暗培养箱中28℃下培养，7d左右观察菌株是否有透明圈（溶磷圈），根据透明圈的大小，判别菌株是否具有分解无机磷和有机磷的能力（若溶磷圈直径与菌落直径的比值为1表示无解磷能力），3次重复。

结果表明MGW6菌株在有机磷和无机磷培养基接种后，第3d可以观察到透明圈，一直到第7d透明圈不断增大，其中在有机磷培养基平板上产生透明圈，溶磷圈直径与菌落直径的比值为1.8，表明MGW6菌株具有溶解无机磷和有机磷的能力（图3）。

产激素吲哚乙酸测定：首先将在金氏B液体培养基上28℃恒温200 r/min摇培48h的菌液按照Kovacs氏靛基质试剂盒（青岛海博生物技术有限公司）说明书进行操作，颜色变红表明MGW6能产生吲哚乙酸，颜色越深，表明产生的吲哚乙酸越多，3次重复；其次以吲哚乙酸标准品制作标准曲线，将培养48h的菌悬液和对照10000 r/min离心10 min后取上清，加入等体积的Salkowsk显色剂，室温下避光显色20min，测定其OD530nm吸光值；最后根据标准曲线计算内生细菌分泌吲哚乙酸的含量。

产激素吲哚乙酸测定结果表明在含100 mg/L色氨酸的金氏B液体培养基中，加入该菌培养后Kovacs氏靛基质试剂变红，说明MGW6具有产生吲哚乙酸的能力；Salkowsk显色后OD530nm为0.305，由标准曲线方程y=0.030x+0.002（R ² =0.981，y代表吸光值，x代表浓度）计算得吲哚乙酸的含量为10.1mg/L（图4）。

（5）菌株促生能力测定：采用MGW6菌液处理玉米种子，对处理后的玉米种子进行标准发芽试验、幼苗生长测定、模拟田间出苗率测定等；结果数据统计分析采用SPSS17.0统计软件进行单因素方差分析，Duncan法检验各参数不同处理间的差异显著性（P<0.05）。

标准发芽试验及幼苗生长测定：以登海605、鲁单818、青农105玉米品种样品为材料（2018年获得，无包衣），参照农作物种子检验规程和国际种子检验规程进行卷纸发芽；选取大小均一、健康饱满的种子，用1％NaClO溶液消毒10min后，用无菌蒸馏水清洗3遍，然后用吸水纸吸去种子表面浮水，备用；将28℃恒温200 r/min摇培48h的MGW6菌液浓度调为2.0×10⁸-3.0×10⁸cfu/mL；将消毒后的玉米种子在菌液中浸种1h（Treatment，T）保湿12h后取出，回干备用（前期已完成预试验）。基于前期研究，选用200mmol/L的NaCl溶液润湿发芽纸（美国Anchor安科发芽纸）交错置床后卷起放入自封袋，垂直置于人工气候箱中25℃下避光发芽，3次重复，每重复100粒（3卷），盐胁迫条件下，以未浸泡处理为对照1（Control1，C1），液体培养基浸泡处理为对照2（Control2，C2），第4d统计发芽势（Germination Energy，GE），第7d统计发芽率（Germination Percentage，GP）；GE＝4d内发芽种子数/供试种子数×100%；GP＝7d内发芽种子数/供试种子数×100%；统计发芽率的同时，从各重复随机选取10株苗，进行芽（苗）长、主根长、芽（苗）鲜重/10株、根鲜重/10株、芽（苗）干重/10株（105℃，17h±1h，低温烘干，参考International Rules for Seed Testing Editon 2012, ISTA）和根干重/10株（105℃，17h±1h, 低温烘干，参考International Rules for SeedTesting Editon 2012, ISTA）等指标的测定。

模拟田间出苗率测定：从山东东营市运取足够盐碱土，室温下进行模拟田间试验。首次在发芽盒中放入盐碱土，用平基板将土床制平，土深约10cm；其次通过置种板上的置种孔将处理或未处理的种子整齐置床，种胚朝下，移去置种板后，覆土3cm；最后再用平基板将覆土制平（注：本步骤使用的平基板、置种板、置种孔介绍见实用新型专利：江绪文,李贺勤.一种玉米种子发芽盒.专利号201320432096.X），并用保鲜膜将发芽盒封口。每处理3次重复，各重复100粒种子，第15天统计出苗率。

试验于2018年10月-11月在青岛农业大学种子科学与工程实验室完成。

从标准发芽试验结果来看：与C1和C2相比，T均能明显提高3个玉米品种样品种子盐胁迫条件下的发芽势和发芽率，3个玉米品种样品种子处理后（T），其发芽势和发芽率与C1相比差异均显著（图5）。

从幼苗生长试验结果来看：与C1和C2相比，T均能明显提高3个玉米品种样品种子盐胁迫条件下的芽（苗）长、主根长、芽（苗）鲜重/10株、芽（苗）干重/10株、根鲜重/10株和根干重/10株等6项指标。与C1相比，除青农105的芽（苗）干重/10株、根鲜重/10株两项指标外，3个品种T的其他各项指标差异均显著（图6）。

模拟田间出苗率测定结果来看：与C1和C2相比，T均能显著提高3个玉米品种样品种子的模拟田间出苗率，且差异均显著（图7）。

（6）菌株鉴定：从形态和分子两个方面对菌株MGW6进行鉴定。

形态鉴定：菌株MGW6在牛肉膏蛋白胨固体培养基上28℃培养48h，观察记录菌落的形态、光泽、质地、边缘特征、表面特征、隆起形状及菌落颜色等特征。

形态鉴定结果表明，菌落圆形、隆起、直径约4-7mm，乳白色；菌落表面光滑湿润，边缘扩展、不透明、表面粗糙呈白蜡状；革兰氏染色呈阳性，细胞为杆状（图8）。

分子鉴定：将接种到牛肉膏蛋白胨液体培养基28℃恒温200r•min^-1摇培48h的菌液进行16SrDNA分子鉴定，3次重复；采用细菌基因组DNA快速抽提试剂盒（购于生工生物工程（上海）股份有限公司）提取MGW6基因组，以基因组为模板进行PCR扩增，通用引物为27F(5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’)和1492R(5’-GGTTACCTTGT-3’)，反应体系为20uL，PCR扩增条件：94℃预变性2min，94℃变性30s，55℃退火30 s，72℃延伸1.5min，30个循环；72℃延伸10min后存于4℃；PCR反应产物测序由北京三博远志生物技术有限责任公司完成；将PCR反应产物测序结果在GeneBank上进行Blast比对，获得与目标菌株相似性较高的序列，再用Clustalx比对，采用MEGA5.1工具构建NJ系统发育树。

分子鉴定结果表明，MGW6菌株16SrDNA基因序列片段大小为1417bp；登录NCBI进行Blast比对，选取12个相似度较高的菌株16SrDNA基因序列构建NJ系统发育树，MGW6与Bacterium cereus clone F3502/73R(DQ289990.1)聚在一个分支，相似度99%，说明MGW6与该菌株亲缘关系最近（图9和图10）。

结合形态特征和16S rDNA基因序列分析结果（图8和图9），判定MGW6为蜡样芽孢杆菌，命名为Bacillus cereus MGW6。现保存在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；保藏中心登记入册编号CGMCC No. 18689；经保藏中心于2019年10月16日检测结果为存活；建议的分类命名为：Bacillus cereus。

（7）种子生物刺激素制备：经试验发现MGW6菌液处理对提高玉米种子萌发抗盐胁迫具有良好效果。本发明种子生物刺激素由蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus MGW6（2.0×10⁸-3.0×10⁸cfu/mL），调菌液pH到7.0-8.0之间即可；使用方法为：浸种1h，保湿12h，回干备用。

（8）种子生物刺激素应用实效检测：2019年在山东东营和菏泽进行盐碱地田间出苗率试验，种子间距0.06m，行间距0.06m，行长0.6m，3次重复。以登海605和青农105玉米品种种子为试验材料，在Bacillus cereus MGW6（2.0×10⁸-3.0×10⁸cfu/mL）菌液中浸种1h后保湿12h后回干播种，以未浸种处理的种子为对照，播种后15天统计田间出苗率。实施效果：与对照相比，处理后的种子出苗更快，出苗更整齐，两地田间出苗率分别提高了5.3%和6.7%（登海605），5.7%和7.7%（青农105）。

综上所述，本发明基于生物刺激素可对植物的自然进程起到刺激作用，特别是具有能够提高对非生物胁迫的耐抗能力等功效。为提高玉米种子萌发抗盐能力，研发了一种提高种子萌发耐盐性生物刺激素，其中重要菌株蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus MGW6，具有耐盐、固氮、产生吲哚乙酸并兼具溶磷能力，能有效提高盐胁迫条件下玉米种子萌发活力，基于MGW6菌株成功制备了一种种子生物刺激素SB-MGW6，为该产品后期的正式商业化使用及相关产品研发奠定了重要基础。本发明可以广泛的应用于盐碱地玉米生产中。

最后所应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明实施的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明的设计精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

序列表

<110> 青岛农业大学

<120> 一种种子生物刺激素SB-MGW6的制备及应用方法

<141> 2020-01-03

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1417

<212> DNA

<213> 蜡样芽孢杆菌MGW6(Bacillus cereus MGW6)

<400> 1

tgcaagtcga gcgaatggat tgagagcttg ctcttatgaa gttagcggcg gacgggtgag 60

taacacgtgg gtaacctgcc cataagactg ggataactcc gggaaaccgg ggctaatacc 120

ggataacatt ttgaactgca tggttcgaaa ttgaaaggcg gcttcggctg tcacttatgg 180

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agccgacctg agagggtgat cggccacact gggactgaga cacggcccag actcctacgg 300

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taagctggca ccttgacggt acctaaccag aaagccacgg ctaactacgt gccagcagcc 480

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taagtgttag agggtttccg ccctttagtg ctgaagttaa cgcattaagc actccgcctg 840

gggagtacgg ccgcaaggct gaaactcaaa ggaattgacg ggggcccgca caagcggtgg 900

agcatgtggt ttaattcgaa gcaacgcgaa gaaccttacc aggtcttgac atcctctgaa 960

aaccctagag atagggcttc tccttcggga gcagagtgac aggtggtgca tggttgtcgt 1020

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tacaaagagc tgcaagaccg cgaggtggag ctaatctcat aaaaccgttc tcagttcgga 1260

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cacccgaagt cggtggggta acctttttga gccagcc 1417

Claims (4)

1.一种种子生物刺激素SB-MGW6的制备及应用方法，其特征在于包括（1）生态调研及菌源样品收集；（2）菌株分离筛选；（3）菌株纯化；（4）目标菌株特性研究；（5）菌株促生能力测定；（6）菌株鉴定；（7）种子生物刺激素制备；（8）种子生物刺激素应用实效检测；所述作业（1）中，根据生物刺激素研发目标，本发明菌源为甘肃省山丹县明长城（Ming Great Wall）附近（100.88E，38.84N）极度干旱土壤；所述作业（2）中，采用稀释法，接种环蘸取10倍系列稀释浓度的菌种悬浮液1-2滴，采用涂布法接种于含不同浓度NaCl的固体牛肉膏蛋白胨培养基平板上，恒温28℃培养6-7d后，观察菌株生长状况；所述作业（3）中，基于平板细菌生长情况，取来源明长城极度干旱土壤匀浆的含7% NaCl的固体牛肉膏蛋白胨上生长的菌落，采取平板划线法进行纯化，28℃下培养48h，得到菌株MGW6；所述作业（4）中，菌株MGW6具有固氮、可分解无机磷和有机磷、产生吲哚乙酸的能力；所述作业（5）中，MGW6菌液（2.0×10⁸-3.0×10⁸cfu/mL）调菌液pH到7.0-8.0，玉米种子播前在MGW6菌液中浸种1h，保湿12h，回干使用可有效提高盐胁迫条件下玉米种子活力；所述作业（6）中，结合形态鉴定和分子鉴定判定MGW6为蜡样芽孢杆菌，命名为Bacillus cereus MGW6，CGMCC No. 18689；所述作业（7）中，目标种子生物刺激素由蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus MGW6（2.0×10⁸-3.0×10⁸cfu/mL），调菌液pH到7.0－8.0即可；所述作业（8）中，种子生物刺激素（SB-MGW6, 2.0×10⁸-3.0×10⁸cfu/mL），对玉米种子浸种1h，保湿12h，回干备用，可有效提高盐碱地玉米种子田间出苗率。

2.如权利要求1所述的一种种子生物刺激素SB-MGW6的制备及应用方法，其特征在于：所述作业（4）中，菌株MGW6具有耐盐性，菌株MGW6耐盐范围0％-7.0％。

3.如权利要求1所述的一种种子生物刺激素SB-MGW6的制备及应用方法，其特征在于：所述作业（4）中，菌株MGW6在含100 mg/L色氨酸的金氏B液体培养基中，加入该菌培养后Kovacs氏靛基质试剂变红；Salkowsk显色后OD530nm为0.305，吲哚乙酸的含量为10.1mg/L；将菌株MGW6具有溶解无机磷和有机磷的能力，点接于固体有机磷培养基上，28℃培养7d，产生透明圈，溶磷圈直径与菌落直径的比值为1.8；从标准发芽试验、幼苗生长测定、模拟田间出苗率测定MGW6菌液对玉米种子处理后的发芽势、发芽率、芽（苗）长、主根长、芽（苗）鲜重/10株、根鲜重/10株、芽（苗）干重/10株（105℃，17h±1h）、根干重/10株（105℃，17h±1h）、模拟田间出苗率等指标均高于对照（未浸种-保湿处理）。

4.如权利要求1所述的一种种子生物刺激素SB-MGW6的制备及应用方法，其特征在于：所述作业（6）中，菌株MGW6形态鉴定结果为菌落圆形、隆起、直径约4-7 mm，乳白色；菌落表面光滑湿润，边缘扩展、不透明、表面粗糙呈白蜡状；革兰氏染色呈阳性，细胞为杆状；MGW6菌株分子鉴定结果为16SrDNA基因序列片段大小为1417bp，CGMCC建议分类命名为：蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus。

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