CN111032689A - 抗爱帕琳肽抗体及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明描述了抗爱帕琳肽抗体及其抗原结合片段。本发明还描述了编码所述抗体的核酸、包含所述抗体的组合物、制备所述抗体的方法，以及使用所述抗体治疗或预防疾病的方法，所述疾病包括：糖尿病性视网膜病变(DR)(包括增生性糖尿病性视网膜病变(PDR)和非增生性糖尿病视网膜病变(NPDR))、老年性黄斑变性(AMD)、糖尿病性黄斑水肿(DME)、视网膜静脉阻塞(RVO)后黄斑水肿、视网膜变性、近视脉络膜新生血管(mCNV)、糖尿病性肾病、慢性肾病(CKD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、肝硬化、斑块新生血管、虹膜红变、新生血管性青光眼、角膜新生血管(CNV)、早产儿视网膜病变(ROP)、视网膜病变、黄斑变性、卵巢过度刺激综合征(OHSS)、子宫出血、子宫内膜异位、子宫内膜增生和癌症、子宫肌层平滑肌瘤、子宫腺肌病、癌症(例如，实体瘤和血液系统恶性肿瘤)、纤维化，和/或相关并发症。

Description

抗爱帕琳肽抗体及其用途
相关申请的交叉引用
本申请要求2017年8月24日提交的美国临时申请62/549,523；2017年10月31日提交的美国临时申请62/579,287；2018年4月12日提交的美国临时申请62/656,586；和2018年4月16日提交的美国临时申请62/658,111的优先权。每个公开通过引用整体并入本文。
发明领域
本发明涉及单克隆抗爱帕琳肽(apelin)抗体、编码该抗体的核酸和表达载体、包含该载体的重组细胞，以及包含该抗体的组合物。本发明还提供了制备所述抗体的方法、将所述抗体用于诊断目的的测量血液和/或组织中爱帕琳肽水平的方法，以及使用所述抗体治疗疾病的方法，所述疾病包括：糖尿病性视网膜病变(DR；包括增生性糖尿病性视网膜病变(PDR)和非增生性糖尿病视网膜病变(NPDR))、老年性黄斑变性(AMD)、糖尿病性黄斑水肿(DME)、视网膜静脉阻塞(RVO)后黄斑水肿、视网膜变性、近视脉络膜新生血管(mCNV)、糖尿病性肾病、慢性肾病(CKD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、肝硬化、斑块新生血管、虹膜红变、新生血管性青光眼、角膜新生血管(CNV)、早产儿视网膜病变(ROP)、视网膜病变、黄斑变性、卵巢过度刺激综合征(OHSS)、子宫出血、子宫内膜异位、子宫内膜增生和癌症、子宫肌层平滑肌瘤、子宫腺肌病、癌症(例如，实体瘤和血液系统恶性肿瘤)、纤维化(例如，病理性和生理性纤维化、肾纤维化、心脏纤维化、肝纤维化和肺纤维化)，和/或相关并发症。
电子提交的序列表的引用
本申请包含序列表，该序列表通过EFS-Web以ASCII格式的序列表电子提交，文件名为“689204.1WO序列表”，创建日期为2018年8月15日，大小为88kb。通过EFS-Web提交的序列表是本说明书的一部分，其全文通过引用并入本文。
发明背景
爱帕琳肽是一种具有几种内源形式的天然存在的肽。它最初是以77个氨基酸的前体(前爱帕琳肽蛋白(preproapelin))产生的，所述前体被蛋白水解加工成爱帕琳肽-36(或爱帕琳肽36)(包含爱帕琳肽前体的C末端36个氨基酸)、爱帕琳肽-17(或爱帕琳肽17)(包含前爱帕琳肽蛋白的C末端17个氨基酸；K17F)和爱帕琳肽-13(或爱帕琳肽13)(包含前爱帕琳肽蛋白的C末端13个氨基酸)(Tatemoto等，Biochem Biophys Res.Commun.251(2)：471-6(1998)；Habata等，Biochim Biophys Acta 1452(1)：25-35(1999)；Lee等，神经化学杂志，74(1):34-41(2000))。也已经报道了其他形式的衍生自77个氨基酸的前体的爱帕琳肽(Mesmin等，J Proteome Res.10(11)：5222-31(2011)；Shin等，Biochim BiophysActa.1861(8):1901-12(2017))。爱帕琳肽13的N末端谷氨酰胺残基可以被焦谷氨酰化，生成爱帕琳肽13的焦谷氨酰形式(pE13F)。爱帕琳肽是爱帕琳肽受体APJ(也称为apelinR、AGTRL1或APLNR)的内源性配体。APJ是G蛋白偶联受体基因家族的成员。爱帕琳肽结合并激活APJ，并触发一系列下游信号传导事件，包括下调福司可林(forskolin)诱导的cAMP产生并促进细胞外信号调节激酶(ERK)、Akt和p70 S6激酶的磷酸化(De Mota，神经内分泌学，72(6):400-7(2000)；Li等，Front Biosci.13:3786-92(2008)；Masri等，Biochem BiophysRes Commun.290(1):539-45(2002)；Liu等，Biochem Biophys Res Commun.468(4):617-21(2015)；Masri等，FASEB J.18(15):1909-11(2004)；O'Carroll等，内分泌杂志.219(1):R13-35(2013))。K17F和pE13F均可诱导APJ受体内化。K17F对APJ的亲和力高于pE13F，而爱帕琳肽-36与pE13F的亲和力相似(Iturrioz等，生物化学杂志，285(42):32627-37(2010)；Medhurst等，神经化学杂志，84(5):1162-72(2003))。爱帕琳肽和APJ均在中枢神经系统和周围组织中表达(O'Carroll等，内分泌杂志，219(1):R13-35(2013))。爱帕琳肽/APJ通路调节许多生理功能，包括心脏收缩性、血压、心血管张力、组织血管生成、水稳态、胃肠道生理、血管平滑肌细胞(VSMC)和其他细胞类型的增殖、单核细胞对人脐静脉内皮细胞的粘附、心肌梗死后的心脏修复，以及几种组织或器官的病理性纤维化(O'Carroll等，内分泌杂志，219(1):R13-35(2013))。
爱帕琳肽在内皮细胞(EC)的血管生成和细胞增殖中起重要作用(Kalin等，DevBiol.305(2):599-614(2007)；Kasai等，Biochem Biophys Res Commun.325(2):395-400(2004))。爱帕琳肽和APJ均在血管生成过程中在新生血管的EC上表达(Kidoya等，EMBOJ.27(3):522-34(2008)；Saint-Geniez等，MechDev.110(1-2):183-6(2002))，并且，爱帕琳肽的表达由缺氧诱导(Kasai等，Arterioscler Thromb Vasc Biol.30(11):2182-7(2010))。爱帕琳肽基因敲除小鼠的视网膜血管形成和眼部发育受损(Kasai等，Arterioscler Thromb Vasc Biol.28(10):1717-22(2008))，这暗示了爱帕琳肽在视网膜发育中的重要作用。患有增生性糖尿病性视网膜病变(PDR)的患者中爱帕琳肽的玻璃体浓度高于没有糖尿病的个体(Tao等，Invest Ophthalmol Vis Sci.51(8):4237-42(2010))。升高的爱帕琳肽水平可发挥较强的血管生成和增殖作用，并导致糖尿病和其他眼部疾病的视网膜发生病理变化。爱帕琳肽中和单克隆抗体(mAb)可以与爱帕琳肽特异性结合，并阻断其对表达爱帕琳肽受体APJ的细胞的生物学活性；它也可以称为具有中和活性的抗爱帕琳肽mAb。诸如爱帕琳肽中和性mAb的药剂可用于治疗糖尿病性视网膜病变(DR)、年龄相关性黄斑变性(AMD)，和糖尿病性黄斑水肿(DME)。由于爱帕琳肽/APJ通路可协同作用于VEGF途径，因此爱帕琳肽中和性mAb与VEGF阻断剂(如雷珠单抗(ranibizumab)
Figure BDA0002390784750000031
)的组合可对DR、DME、AMD和/或其他眼部疾病的患者产生叠加甚至协同的治疗作用。同时靶向爱帕琳肽和VEGF的双特异性抗体可能具有相似的作用。
爱帕琳肽-13已显示在多种类型的癌症中促进肿瘤增殖，包括乳腺癌、肝细胞癌、淋巴癌、肺癌和卵巢癌。在各种肿瘤中，爱帕琳肽和APJ的表达上调(Sorli等，Oncogene.26(55):7692-9(2007)；Picault等，Eur J Cancer.50(3):663-74(2014)；Zuurbier等，Oncotarget.8(26):42949-42961(2017)；Muto等，Anticancer Res.34(10):5313-20(2014))。爱帕琳肽通过其受体APJ的结合和活化，是一种有效的肿瘤新血管生成和增殖活化剂(Sorli等，Drug Discov Today.11(23-24):1100-6(2006))。因此，用爱帕琳肽中和性mAb阻断爱帕琳肽的作用可用于治疗爱帕琳肽/APJ通路在靠近肿瘤部位的癌细胞生长和/或血管生成中起作用的各种癌症。爱帕琳肽中和性单克隆抗体可以与
Figure BDA0002390784750000032
或其他抗VEGF和/或抗血管生成剂联合使用，以在癌症治疗中实现叠加甚至协同作用。此外，可以将爱帕琳肽中和性mAb与其他抗癌药物(例如用于化学疗法、抑制肿瘤生长或免疫肿瘤疗法的药物)组合使用，以达到更高的疗效。
爱帕琳肽也与肝病有关。它在肝硬化大鼠的活化肝星状细胞(HSC)中过表达，并且在这些动物的血管生成和纤维化中都起着重要作用(Principe等，Hepatology.48(4):1193-201(2008))。爱帕琳肽(Melgar-Lesmes等，内分泌学.151(11):5306-14(2010))和APJ(Yokomori等，胃肠病学杂志，46(2):222-31(2011))也在人肝硬化肝的HSC中过表达。另一方面，缺氧和促炎因子均上调人HSC和肝细胞中APJ的表达。肝硬化患者的血清爱帕琳肽水平升高。此外，血清爱帕琳肽水平与慢性肝病的严重程度有关。这些发现表明，爱帕琳肽可以在例如非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、肝纤维化和肝硬化等肝脏疾病的发病机理中发挥重要作用。爱帕琳肽中和性单克隆抗体可用于治疗这些肝脏疾病。
已证明，爱帕琳肽可通过增强肾小球内皮细胞的通透性并诱导足细胞功能障碍来促进啮齿动物的糖尿病性肾病(Guo等人，J Cell Mol Med.19(9):2273-85(2015))。还发现爱帕琳肽通过抑制足细胞的自噬而参与糖尿病性肾病的发展(Liu等人，Cell Death Dis.8(8):e3006(2017))。因此，爱帕琳肽中和性mAb可以用于治疗糖尿病性肾病和慢性肾病。
发明概述
在一个一般方面，本发明涉及特异性结合爱帕琳肽的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段。
本发明提供了分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3，其具有以下多肽序列：
(1)分别为SEQ ID NO：168、169、170、171、102和172；
(2)分别为SEQ ID NO：50、51、52、110、111和112；
(3)分别为SEQ ID NO：173、174、175、176、114和115；
(4)分别为SEQ ID NO：68、177、178、128、129和130；
(5)分别为SEQ ID NO：74、75、76、134、135和136；
(6)分别为SEQ ID NO：179、78、180、137、138和139；
(7)分别为SEQ ID NO：83、84、85、143、144和145；
(8)分别为SEQ ID NO：86、87、88、146、147和148；
(9)分别为SEQ ID NO：89、90、91、149、150和151；
(10)分别为SEQ ID NO：92、93、94、152、153和154；
(11)分别为SEQ ID NO：95、96、97、155、156和157；或
(12)分别为SEQ ID NO：98、99、100、158、159和160；
其中，所述抗体或其抗原结合片段特异性结合爱帕琳肽，优选人爱帕琳肽。SEQ IDNO：168显示氨基酸序列X1NRX2S，其中X1是选自S或T的氨基酸，并且X2是选自M或V的氨基酸。SEQ ID NO：169显示氨基酸序列SIGSSPWX1ASWAX2G，其中X1是选自Y或F的氨基酸，并且X2选自Q或L。SEQ ID NO：170显示氨基酸序列GGYRPGX1SX2，其中X1是选自A或G的氨基酸，并且X2是选自V或I的氨基酸。SEQ ID NO：171显示氨基酸序列QSSQSVYDNNDLX1，其中X1是选自A或G的氨基酸。SEQ ID NO：172显示氨基酸序列AGGYX1GDIYT，其中X1是选自S或N的氨基酸。SEQID NO：173显示氨基酸序列X1YAX2D，其中X1是选自N或S的氨基酸，并且X2选自M或I。SEQ IDNO：174显示氨基酸序列VIAPNX1X2TX3YPTWARG，其中X1是选自R、G或H的氨基酸；X2是选自R、A或Y的氨基酸；并且X3是选自Y或C的氨基酸。SEQ ID NO：175显示氨基酸序列YPIX1X2GX3NI，其中X1是选自E或D的氨基酸；X2是选自P、A、S或T的氨基酸；并且X3是选自A或S的氨基酸。SEQID NO：176显示氨基酸序列QSSESVX1X2NNQLS，其中X1是选自D或G的氨基酸，并且X2是选自Y、N或M的氨基酸。SEQ ID NO：177显示氨基酸序列VIAPSX1TTYYPTWAKG，其中X1是选自G或S的氨基酸。SEQ ID NO：178显示氨基酸序列YPIDPGSNX1，其中X1是选自I或V的氨基酸。SEQ ID NO：179显示氨基酸序列X1X2AMD，其中X1是选自N或S的氨基酸，并且X2是选自Y或H的氨基酸。SEQID NO：180显示氨基酸序列YPIDX1GANV，其中X1是选自V或A的氨基酸。
本发明还提供了一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，包括：
a.具有SEQ ID NO：1的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：2的多肽序列的轻链可变区；
b.具有SEQ ID NO：3的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：4的多肽序列的轻链可变区；
c.具有SEQ ID NO：5的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：6的多肽序列的轻链可变区；
d.具有SEQ ID NO：7的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：8的多肽序列的轻链可变区；
e.具有SEQ ID NO：9的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：10的多肽序列的轻链可变区；
f.具有SEQ ID NO：11的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：12的多肽序列的轻链可变区；
g.具有SEQ ID NO：13的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：14的多肽序列的轻链可变区；
h.具有SEQ ID NO：15的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：16的多肽序列的轻链可变区；
i.具有SEQ ID NO：17的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：18的多肽序列的轻链可变区；
j.具有SEQ ID NO：19的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：20的多肽序列的轻链可变区；
k.具有SEQ ID NO：21的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：22的多肽序列的轻链可变区；
l.具有SEQ ID NO：23的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：24的多肽序列的轻链可变区；
m.具有SEQ ID NO：25的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：26的多肽序列的轻链可变区；
n.具有SEQ ID NO：27的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：28的多肽序列的轻链可变区；
o.具有SEQ ID NO：29的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：30的多肽序列的轻链可变区；
p.具有SEQ ID NO：31的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：32的多肽序列的轻链可变区；
q.具有SEQ ID NO：33的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：34的多肽序列的轻链可变区；
r.具有SEQ ID NO：35的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：36的多肽序列的轻链可变区；
s.具有SEQ ID NO：37的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：38的多肽序列的轻链可变区；或
t.具有SEQ ID NO：39的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：40的多肽序列的轻链可变区。
本发明还提供了分离的针对爱帕琳肽的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特异性结合包含SEQ ID NO：188的氨基酸序列的表位。所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段可以例如抑制爱帕琳肽活性。所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段可以例如特异性结合pyro-爱帕琳肽-13、爱帕琳肽-13、爱帕琳肽-17、爱帕琳肽-36、爱帕琳肽-55，和/或与爱帕琳肽-13具有相同的C末端的其他形式的爱帕琳肽。
本发明还提供了分离的针对爱帕琳肽的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特异性结合包含SEQ ID NO：204的氨基酸序列的表位。所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段可以例如抑制爱帕琳肽活性。所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段可以例如特异性结合爱帕琳肽-13和pyro-爱帕琳肽-13。
在某些实施方式中，所述分离的单克隆抗体或其抗原结合片段是嵌合的。
在某些实施方式中，所述分离的单克隆抗体或其抗原结合片段是人的或人源化的。在某些实施方式中，所述人源化的单克隆抗体或其抗原结合片段包括：
a.具有SEQ ID NO：211的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：215的多肽序列的轻链可变区；
b.具有SEQ ID NO：212的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：215的多肽序列的轻链可变区；
c.具有SEQ ID NO：213的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：215的多肽序列的轻链可变区；
d.具有SEQ ID NO：214的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：215的多肽序列的轻链可变区；
e.具有SEQ ID NO：213的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：216的多肽序列的轻链可变区；
f.具有SEQ ID NO：214的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：216的多肽序列的轻链可变区；
g.具有SEQ ID NO：217的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：219的多肽序列的轻链可变区；要么
h.具有SEQ ID NO：218的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：220的多肽序列的轻链可变区。
本发明还提供了分离的核酸，其编码本发明所公开的单克隆抗体或其抗原结合片段。
本发明还提供了载体，其包含编码本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段的分离的核酸。
本发明还提供了宿主细胞，其含有包含编码本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段的分离的核酸的载体。
在某些实施方式中，提供了一种药物组合物，其包含本发明的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段和药学上可接受的载体。
本发明还提供了在有所需要的受试者中阻断爱帕琳肽与爱帕琳肽受体结合的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
本发明还提供了在有所需要的受试者中治疗糖尿病性视网膜病变(DR)的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
本发明还提供了在有所需要的受试者中治疗年龄相关性黄斑变性(AMD)的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
本发明还提供了在有所需要的受试者中治疗糖尿病性黄斑水肿(DME)的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
本发明还提供了在有所需要的受试者中治疗视网膜静脉阻塞(RVO)后黄斑水肿的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
本发明还提供了在有所需要的受试者中治疗视网膜变性的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
本发明还提供了在有所需要的受试者中治疗近视脉络膜新生血管(mCNV)的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
本发明还提供了在有所需要的受试者中治疗糖尿病性肾病的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
本发明还提供了在有所需要的受试者中治疗慢性肾病(CKD)的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
本发明还提供了在有所需要的受试者中治疗非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
本发明还提供了在有所需要的受试者中治疗组织纤维化的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
本发明还提供了在有所需要的受试者中治疗肝硬化的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
本发明还提供了在有所需要的受试者中治疗斑块新生血管的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
本发明还提供了在有所需要的受试者中治疗虹膜红变的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
本发明还提供了在有所需要的受试者中治疗新生血管性青光眼的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
本发明还提供了在有所需要的受试者中治疗角膜新生血管(CNV)的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
本发明还提供了在有所需要的受试者中治疗早产儿视网膜病变(ROP)的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
本发明还提供了在有所需要的受试者中治疗视网膜病变的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
本发明还提供了在有所需要的受试者中治疗黄斑变性的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
本发明还提供了在有所需要的受试者中治疗卵巢过度刺激综合症(OHSS)的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
本发明还提供了在有所需要的受试者中治疗子宫出血的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
本发明还提供了在有所需要的受试者中治疗子宫内膜异位的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
本发明还提供了在有所需要的受试者中治疗子宫内膜增生和癌症的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
本发明还提供了在有所需要的受试者中治疗子宫肌层平滑肌瘤的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
本发明还提供了在有所需要的受试者中治疗子宫腺肌病的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
本发明还提供了在有所需要的受试者中治疗癌症的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。所述癌症可以是任何液体或实体癌，例如，其可以选自但不限于肺癌、胃癌、结肠癌、肝细胞癌、肾细胞癌、膀胱尿路上皮癌、胆管癌、转移性黑素瘤、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、头颈癌、胰腺癌、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤和其他实体瘤，以及非霍奇金淋巴瘤(NHL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、多发性骨髓瘤(MM)、急性髓性白血病(AML)和其他液体肿瘤。
在某些实施方式中，所述药物组合物还包含第二治疗性抗癌剂。所述第二治疗性抗癌剂可以是例如抗VEGF剂。所述抗VEGF剂可以是例如
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或贝伐单抗生物类似剂。所述抗VEGF剂可以是例如VEGFR1和/或VEGFR2阻断剂。
本发明还提供了确定受试者中爱帕琳肽水平的方法。所述方法包括(a)从受试者获得样品；(b)使所述样品与本发明的抗体或其抗原结合片段接触；(c)确定受试者中爱帕琳肽的水平。在某些实施方式中，所述样品是组织样品。所述组织样品可以是例如癌组织样品、肝组织样品或肾组织样品。
本发明还提供了产生本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段的方法，包括在产生所述单克隆抗体或其抗原结合片段的条件下培养包含编码所述单克隆抗体或抗原结合片段的核酸的细胞，以及从所述细胞或培养物中回收所述抗体或抗原结合片段。
本发明还提供了制备包含本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段的药物组合物的方法，所述方法包括将所述单克隆抗体或其抗原结合片段与药学上可接受的载体组合以获得药物组合物。
附图简要说明
当结合附图阅读时，将能更好地理解本发明的前述概述以及以下对本申请的优选实施例的详细描述。然而，应理解，本申请不限于附图中所示的明确实施例。
图1A-1C显示了ELISA测定的抗爱帕琳肽mAb与各种生物素化的爱帕琳肽的结合。将生物素化的爱帕琳肽固定在包被有中性抗生物素蛋白的ELISA板上，并加入纯化的重组兔抗爱帕琳肽mAb，使其与板上的肽结合。通过添加与碱性磷酸酶偶联的山羊抗兔IgG Fc和PNPP底物来检测结合，并在405nm处测量吸光度。图1A显示了通过ELISA测量的爱帕琳肽mAbC5、C8、C17、C24、C25、C26、C27、C4和C9与各种生物素化的爱帕琳肽的结合。图1B显示了通过ELISA测量的爱帕琳肽mAb C1、C6、C7、C10、C12和C16与各种生物素化的爱帕琳肽的结合。图1C显示了通过ELISA测量的爱帕琳肽mAb C11、C14、C22、C20和C13与各种生物素化的爱帕琳肽的结合。
图2A-2K显示了在基于细胞的爱帕琳肽活性测定中，选定的抗爱帕琳肽mAb的中和作用。评估了爱帕琳肽下调cAMP HunterTM CHO-K1 AGTRL1 Gi细胞(DiscoverX#95-0147C2)中福司可林(FSK)诱导的cAMP产生的能力，以评估其活性。在给定的稀释度下，一式三份测定每种mAb。为了计算在给定浓度下mAb的抑制百分比，将0％抑制定义为来自接受爱帕琳肽处理的FSK刺激细胞的信号，而100％抑制定义为来自未接受爱帕琳肽处理的FSK刺激细胞的信号。将mAbs浓度增加时的抑制百分比作图。图2A显示了抗爱帕琳肽mAb C1的活性。图2B显示了抗爱帕琳肽mAb C6的活性。图2C显示了抗爱帕琳肽mAb C7的活性。图2D显示了抗爱帕琳肽mAb C8的活性。图2E显示了抗爱帕琳肽mAb C24的活性。图2F显示了抗爱帕琳肽mAbC25的活性。图2G显示了抗爱帕琳肽mAb C10的活性。图2H显示了抗爱帕琳肽mAb C11的活性。图2I显示了抗爱帕琳肽mAb C12的活性。图2J显示了抗爱帕琳肽mAb C22的活性。图2K显示了抗爱帕琳肽mAb C26的活性。
图3A-3C显示了通过ELISA测量的表7中的竞争肽对生物素-爱帕琳肽-13(SEQ IDNO：165)与抗爱帕琳肽mAb C8、C24和C25结合的抑制。将山羊抗兔IgG固定在ELISA板上。将兔抗爱帕琳肽mAb(C8、C24或C25)和竞争肽的混合物在室温下预孵育30分钟，然后加入生物素-爱帕琳肽-13(SEQ ID NO：165)，混合，将最终的溶液添加到板上。通过添加与碱性磷酸酶偶联的链霉亲和素和PNPP底物，并测量405nm处的吸光度，检测生物素-爱帕琳肽-13(SEQID NO：165)与固定的抗爱帕琳肽mAb C8(图3A)、C24(图3B)和C25(图3C)的结合。
图4A-4C显示了通过ELISA测量的衍生自表位8-13(KGPMPF(SEQ ID NO：188))的丙氨酸扫描肽(表8)对生物素-爱帕琳肽-13(SEQ ID NO：165)与抗爱帕琳肽mAb C8、C24和C25结合的抑制。将山羊抗兔IgG固定在ELISA板上。将兔抗爱帕琳肽mAb(C8、C24或C25)和丙氨酸扫描肽的混合物在室温下预孵育30分钟，然后加入生物素-爱帕琳肽-13(SEQ ID NO：165)，混合，将最终的溶液添加到板上。通过添加与碱性磷酸酶偶联的链霉亲和素和PNPP底物，并测量405nm处的吸光度，检测生物素-爱帕琳肽-13(SEQ ID NO：165)与固定的抗爱帕琳肽mAb C8(图4A)、C24(图4B)和C25(图4C)的结合。几种竞争肽被用作对照。
图5A-5C显示了通过ELISA测量的表9中的竞争肽对爱帕琳肽-13-生物素(QRPRLSHKGPMPF-生物素(SEQ ID NO：165))与抗爱帕琳肽mAb C1、C6和C7结合的抑制。将山羊抗兔IgG固定在ELISA板上。将兔抗爱帕琳肽mAb(C1、C6或C7)和竞争肽的混合物在室温下预孵育30分钟，然后加入爱帕琳肽-13-生物素(SEQ ID NO：165)，混合，将最终的溶液添加到板上。通过添加与碱性磷酸酶偶联的链霉亲和素和PNPP底物，并测量405nm处的吸光度，检测爱帕琳肽-13-生物素(SEQ ID NO：165)与固定的抗爱帕琳肽mAb C1(图5A)、C6(图5B)和C7(图5C)的结合。
图6A-6B显示了通过ELISA测量的衍生自表位1-5(QRPRL(SEQ ID NO：204))的丙氨酸扫描肽(表10)对爱帕琳肽-13-生物素(SEQ ID NO：165)与抗爱帕琳肽mAb C6(图6A)和C7(图6B)结合的抑制。
图7A-7B显示了在基于细胞的测定中人源化抗爱帕琳肽mAb A31的IC50曲线。评估了爱帕琳肽下调cAMP HunterTM CHO-K1 AGTRL1 Gi细胞(DiscoverX#95-0147C2)中福司可林(FSK)诱导的cAMP产生的能力，以评估其活性，并评估了抗爱帕琳肽mAb逆转爱帕琳肽抑制作用的能力，以评估其活性。图7A显示了在测定中使用爱帕琳肽13(APL13)时的IC50图。图7B显示了在测定中使用pyro-爱帕琳肽13(pyroAPL13)时的IC50图。CPS，每秒计数。
图8显示了异种移植模型中人源化抗爱帕琳肽mAb A31对肿瘤生长的影响。测试了单独的mAb或mAb与贝伐单抗联用；单独的贝伐单抗也包括在研究中。
发明详述
背景技术和整个说明书中引用或描述了各种出版物、文章和专利；这些参考文献中的每一个均通过引用整体并入本文。本说明书中包括的对文件、行为、材料、装置、物品等的讨论是为了提供本发明的背景。对于所公开或要求保护的任何发明内容，这种讨论并非承认所有这些或任何这些事项构成现有技术的一部分。
除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的相同含义。否则，本文中使用的某些术语具有说明书中阐述的含义。
必须注意的是，如本文和所附权利要求书中所使用的，单数形式的“一个”、“一种”和“该”包括复数形式，除非上下文另外明确指出。
除非另有说明，否则任何数值，例如本文所述的浓度或浓度范围，在任何情况下均应理解为由术语“约”修饰。因此，数值通常包括所述值的±10％。例如，1mg/mL的浓度包括0.9mg/mL至1.1mg/mL。同样的，1％至10％(w/v)的浓度范围包括0.9％(w/v)至11％(w/v)。如本文所使用的，数值范围的使用明确地包括所有可能的子范围，该范围内的所有单个数值，包括该范围内的整数和分数，除非上下文另外明确指出。
除非另有说明，否则一系列元件之前的术语“至少”应理解为是指该系列中的每个元件。仅使用常规实验，本领域技术人员将认识到或能够确定本文所述的本发明的特定实施方式的多种等同方案。本发明旨在涵盖这样的等同方案。
如本文所用，术语“包含”、“包含有”、“包括”、“包括有”、“具有”、“有”、“含有”或“含有”或其任何其他变型将被理解为隐含地包括陈述的整数或整数组，但不排除任何其他整数或整数组，并且是非排他性的或开放式的。例如，包含一系列元素的组合物、混合物、步骤、方法、物品或设备不一定仅限于那些元素，而是可以包括此组合物、混合物、步骤、方法、物品或设备中未明确列出或固有的其他元素。此外，除非明确指出相反的意思，否则“或”是指包含性的“或”而不是排他性的“或”。例如，以下任一条件都满足条件A或B：A为真(或存在)并且B为假(或不存在)、A为假(或不存在)并且B为真(或存在)，以及A和B均为真(或存在)。
如本文所用，多个叙述的元素之间的连接术语“和/或”应理解为包括单独的和组合的选择。例如，在两个元素由“和/或”连接的情况下，第一个选项是指适用第一个元素而没有第二个元素。第二个选项是指适用第二个元素而没有第一个元素。第三个选项是指第一和第二元素一起适用。这些选项中的任何一个都应理解为落入该含义内，并因此满足本文所用术语“和/或”的要求。不止一个选项的并行适用也应理解为在其含义之内，因此满足术语“和/或”的要求。
如本文所用，在整个说明书和权利要求书中使用的术语“由……组成”或诸如“由……构成”或“由……所组成”的变体表示包括任何所述整数或整数组，但是指定的方法、结构或组合物中不能增加其他的整数或整数组。
如本文所用，在整个说明书和权利要求书中使用的术语“基本上由...组成”或诸如“基本上由...构成”或“基本上由...所组成”的变体表示包括任何所述的整数或整数组，并且可选地包含不会实质上改变指定的方法、结构或组合物的基本或新颖性质的任何所述整数或整数组。参见M.P.E.P.§2111.03。
如本文所用，“受试者”是指任何动物，优选为哺乳动物，最优选为人。如本文所用，术语“哺乳动物”涵盖任何哺乳动物。哺乳动物的例子包括但不限于牛、马、绵羊、猪、猫、狗、小鼠、大鼠、兔、豚鼠、猴、人等，但更优选人。
词语“右”、“左”、“下”和“上”表示附图中的参考方向。
还应当理解，当提及优选发明的部件的尺寸或特性时，如本文所用的术语“大约”、“约”、“通常”、“基本上”以及类似术语表示所描述的尺寸/特性不是严格的边界或参数，并且不排除其在功能上相同或相似的微小变化，如本领域普通技术人员所理解的那样。至少，包括数字参数的此类引用将包括使用本领域公认的数学和工业原理(例如，四舍五入、测量或其他系统误差、制造公差等)不会改变最小有效位数的变化。
在两个或多个核酸或多肽序列(例如抗爱帕琳肽抗体、爱帕琳多肽和编码它们的多核苷酸)的上下文中，术语“同一的”或“同一性”百分比是指，当使用以下序列比较算法之一或通过目视检查进行比较和比对以获得最大对应性时，两个或多个序列或子序列是相同的或具有特定百分比的氨基酸残基或核苷酸相同。
为了进行序列比较，通常将一个序列用作参考序列，将测试序列与其进行比较。当使用序列比较算法时，将测试序列和参考序列输入计算机，必要时指定子序列坐标，并指定序列算法程序参数。然后，序列比较算法根据指定的程序参数，计算测试序列相对于参考序列的序列同一性百分比。
用于比较的序列的最佳比对可以例如通过如下算法进行，例如通过Smith和Waterman，高等应用数学，2：482(1981)的局部同源算法进行，通过Needleman和Wunsch，分子生物学杂志，48：443(1970)的同源性比对算法进行，通过Pearson和Lipman，美国国家科学院学报，85：2444(1988)的相似性搜索方法进行，通过这些算法的计算机化实现(GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA，位于威斯康星州的575科学Madison博士的遗传学计算机组的遗传学软件包中)，或通过目视检查实现(通常参见，分子生物学实验室指南，F.M.Ausubel等编辑，实验室指南，格林出版联合公司(Greene Publishing Associates,Inc.)和约翰威利父子公司(John Wiley&Sons,Inc.)的合资企业(1995年副刊)(Ausubel))。
适于确定序列同一性和序列相似性百分比的算法的实例是BLAST和BLAST 2.0算法，这些算法在Altschul等(1990)，分子生物学杂志，215：403-410和Altschul等(1997)，核酸研究，25：3389-3402中分别进行了描述。可通过国家生物技术信息中心的公开途径获得进行BLAST分析的软件。该算法涉及首先通过识别查询序列中长度为W的短序列来识别高分序列对(HSP)，这些短序列在与数据库序列中相同长度的序列对齐时匹配或满足某个正值阈值T。T被称为邻近序列分数阈值(Altschul等，同上)。这些最初的邻近序列的命中充当启动搜索以查找包含它们的较长HSP的种子。然后沿着两个方向将序列的命中在每个序列延伸至累积比对得分不再增加。
对于核苷酸序列，使用参数M(一对匹配残基的加分；始终>0)和N(错配残基的罚分；始终<0)来计算累积得分。对于氨基酸序列，使用得分矩阵来计算累积得分。在以下情况下，将停止序列的命中在每个方向上的延伸：累积比对得分比其最大获得值降低数值X；由于一个或多个负得分残基比对的累积，累积得分变为零或更低；或到达任一序列的末尾。BLAST算法参数W、T和X决定了比对的灵敏度和速度。BLASTN程序(用于核苷酸序列)使用字长(W)为11、期望值(E)为10、M＝5、N＝-4，以及两条链的比较作为默认值。对于氨基酸序列，BLASTP程序默认使用字长(W)为3、期望值(E)为10和BLOSUM62评分矩阵作为默认值(参见Henikoff和Henikoff，美国国家科学院学报，89：10915(1989))。
除了计算序列同一性百分比外，BLAST算法还对两个序列之间的相似性进行统计分析(参见，例如，Karlin和Altschul，美国国家科学院学报，90：5873-5787(1993))。BLAST算法提供的一种相似性测量是最小总和概率(P(N))，它提供了偶然发生两个核苷酸或氨基酸序列匹配的概率的指示。例如，如果在测试核酸与参考核酸的比较中，最小总和概率小于约0.1，更优选地小于约0.01，最优选地小于约0.001，则认为该核酸与参考序列相似。
如下所述，若由第一核酸编码的多肽与由第二核酸编码的多肽在免疫学上交叉反应，则进一步指示两个核酸序列或多肽基本上相同。因此，例如，当两条多肽中仅通过保守取代而不同，则通常认为其中一条多肽与第二多肽基本相同。两个核酸序列基本相同的另一个指示是两个分子在严格条件下彼此杂交。
如本文所用，术语“抑制”、“抑制的”和“抑制性”是指降低活性、应答、症状、病症或其他生物学参数。这可以包括但不限于完全清楚活性、应答、症状或病症。这还可包括例如与天然或对照水平相比，活性、应答、症状或病症降低10％。因此，与天然或对照水平相比，降低量可以是10、20、30、40、50、60、70、80、90、100％，或其之间的任何减少量。作为非限制性实例，本发明的抗体可以抑制爱帕琳蛋白的活性。相对于天然爱帕琳蛋白活性，爱帕琳肽蛋白的活性可以被降低或消除。
抗体
本发明通常涉及分离的抗爱帕琳肽抗体，编码所述抗体的核酸和表达载体，含有所述载体的重组细胞，以及包含所述抗体的组合物。本发明还提供了制备所述抗体的方法，以及使用所述抗体治疗疾病的方法，所述疾病包括：糖尿病性视网膜病变(DR)(包括增生性糖尿病性视网膜病变(PDR)和非增生性糖尿病视网膜病变(NPDR))、老年性黄斑变性(AMD)、糖尿病性黄斑水肿(DME)、视网膜静脉阻塞(RVO)后黄斑水肿、视网膜变性、近视脉络膜新生血管(mCNV)、糖尿病性肾病、慢性肾病(CKD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、肝硬化、斑块新生血管、虹膜红变、新生血管性青光眼、角膜新生血管(CNV)、早产儿视网膜病变(ROP)、视网膜病变、黄斑变性、卵巢过度刺激综合征(OHSS)、子宫出血、子宫内膜异位、子宫内膜增生和癌症、子宫肌层平滑肌瘤、子宫腺肌病、癌症(例如，实体瘤和血液系统恶性肿瘤)，和纤维化(例如，病理性和生理性纤维化、肾纤维化、心脏纤维化、肝纤维化和肺纤维化)。本发明的抗体具有一种或多种期望的功能特性，包括但不限于结合爱帕琳肽的高亲和力、对爱帕琳肽的高特异性，以及阻断爱帕琳肽与爱帕琳肽受体结合的能力。
在一个一般方面，本发明涉及特异性结合爱帕琳肽的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段。
如本文所用，术语“抗体”以广义使用，并且包括免疫球蛋白或抗体分子，所述抗体分子包括单克隆或多克隆的人、人源化、复合和嵌合抗体以及抗体片段。通常，抗体是对特定抗原表现出结合特异性的蛋白或肽链。抗体结构是众所周知的。根据重链恒定结构域的氨基酸序列，免疫球蛋白可分为五个主要类别(即，IgA、IgD、IgE、IgG和IgM)。IgA和IgG进一步亚分类为同种型IgA1、IgA2、IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。因此，本发明的抗体可以是五个主要类别或相应的亚类别中的任何一个。优选地，本发明的抗体是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。脊椎动物物种的抗体轻链可以基于其恒定结构域的氨基酸序列被指定为两种明显不同的类型之一，即κ和λ。因此，本发明的抗体可以包含κ或λ轻链恒定结构域。根据特定的实施方式，本发明的抗体包括来自大鼠或人抗体的重链和/或轻链恒定区。除重链和轻链恒定结构域外，抗体还包含由轻链可变区和重链可变区组成的抗原结合区，两者均包含三个结构域(即互补决定区1-3；(CDR1、CDR2和CDR3))。所述轻链可变区结构域可替代地称为LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述重链可变区结构域可替代地称为HCDR1、HCDR2和HCDR3。
如本文所用，术语“分离的抗体”是指基本上不含具有不同抗原特异性的其他抗体的抗体(例如，特异性结合爱帕琳肽的分离的抗体基本上不含不结合爱帕琳肽的抗体)。另外，分离的抗体基本上不含其他细胞物质和/或化学物质。
如本文所用，术语“单克隆抗体”是指从基本上同质的抗体群获得的抗体，即除了可能少量存在的天然的突变以外，包含种群的单个抗体是同一的。本发明的单克隆抗体可以通过杂交瘤方法、噬菌体展示技术、单淋巴细胞基因克隆技术或重组DNA方法来制备。例如，所述单克隆抗体可以由杂交瘤产生，所述杂交瘤包括获自具有人源重链转基因和轻链转基因的基因组的转基因非人动物(如转基因小鼠或大鼠)的B细胞。
如本文所用，术语“抗原结合片段”是指抗体片段，例如双抗体、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv片段、二硫键稳定的Fv片段(dsFv)、(dsFv)2、双特异性dsFv(dsFv-dsFv')、二硫键稳定的双抗体(ds双抗体)、单链抗体分子(scFv)、单域抗体(sdab)、scFv二聚体(双价双抗体)、由包含一个或多个CDR的抗体的一部分形成的多特异性抗体、骆驼源单域抗体、纳米抗体、结构域抗体、二价结构域抗体，或任何其他与抗原结合但不包含完整的抗体结构的抗体片段。抗原结合片段能够与亲本抗体或亲本抗体片段结合的相同抗原结合。根据特定的实施方式，所述抗原结合片段包含轻链可变区、轻链恒定区和重链的Fd区段。根据其他特定的实施方式，所述抗原结合片段包含Fab和F(ab')。
如本文所用，术语“单链抗体”是指本领域中常规的单链抗体，其包含通过约15至约20个氨基酸的短肽连接的重链可变区和轻链可变区。如本文所用，术语“单域抗体”是指本领域中常规的单域抗体，其包含重链可变区和重链恒定区，或仅包含重链可变区。
如本文所用，术语“人抗体”是指由人产生的抗体或使用本领域已知的任何技术制备的具有与由人产生的抗体相对应的氨基酸序列的抗体。人抗体的该定义包括完整或全长抗体、其片段，和/或包含至少一种人重链和/或轻链多肽的抗体。
如本文所用，术语“人源化抗体”是指进行修饰以增加与人抗体的序列同源性，从而保留了抗体的抗原结合特性，但降低了其对人体的抗原性的非人抗体。
如本文所用，术语“嵌合抗体”是指其中免疫球蛋白分子的氨基酸序列源自两个或更多个物种的抗体。轻链和重链的可变区通常对应于衍生自一种哺乳动物物种(例如，小鼠、大鼠、兔等)的具有期望的特异性、亲和力和能力的抗体的可变区，而恒定区对应于衍生自另一种哺乳动物(例如人)的抗体的序列，以避免引起该物种的免疫应答。
如本文所用，术语“多特异性抗体”是指包含多个免疫球蛋白可变结构域序列的抗体，其中第一免疫球蛋白可变结构域序列对第一表位具有结合特异性，并且第二免疫球蛋白可变结构域序列对第二表位具有结合特异性。在一个实施方式中，所述第一和第二表位在相同抗原上，例如，在相同的蛋白(或多聚蛋白的亚基)上。在一个实施方式中，所述第一和第二表位重叠或基本上重叠。在一个实施方式中，所述第一和第二表位不重叠或基本不重叠。在一个实施方式中，所述第一和第二表位在不同抗原上，例如，在不同的蛋白(或多聚体蛋白的不同亚基)上。在一个实施方式中，多特异性抗体包含第三、第四或第五免疫球蛋白可变结构域。在一个实施方式中，多特异性抗体是双特异性抗体分子、三特异性抗体，或四特异性抗体分子。
如本文所用，术语“双特异性抗体”是指结合不超过两个表位或两个抗原的多特异性抗体。双特异性抗体的特征在于对第一表位具有结合特异性的第一免疫球蛋白可变结构域序列和对第二表位具有结合特异性的第二免疫球蛋白可变结构域序列。在一个实施方式中，所述第一和第二表位在相同抗原上，例如，在相同的蛋白(或多聚蛋白的亚基)上。在一个实施方式中，所述第一和第二表位重叠或基本上重叠。在一个实施方式中，所述第一和第二表位在不同抗原上，例如，在不同的蛋白(或多聚体蛋白的不同亚基)上。在一个实施方式中，双特异性抗体包含对第一表位具有结合特异性的重链可变结合域序列和轻链可变结构域序列，和对第二表位具有结合特异性的重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列。在一个实施方式中，双特异性抗体包含对第一表位具有结合特异性的半抗体或其片段，和对第二表位具有结合特异性的半抗体或其片段。在一个实施方式中，双特异性抗体包含对第一表位具有结合特异性的scFv或其片段，和对第二表位具有结合特异性的scFv或其片段。在一个实施方式中，所述第一表位位于爱帕琳肽上，并且所述第二表位位于VEGF、血管生成素-2(ANG-2)、富含亮氨酸的α-2-糖蛋白1(LRG1)、PD-1、PD-L1、LAG-3、TIM-3、CTLA-4、HER-2、EGFR、CD19、CD73、CD47、CD20、CD33、DLL3、连接蛋白(claudin)18.2、TIP-1、CD3、PDGFβ、VI型胶原受体、TGF-β受体、LOXL2、p75神经营养蛋白受体(NGFR p75)和/或胰岛素样生长因子2受体(IGF2R)上。在某些实施方式中，将本发明的抗爱帕琳肽单克隆抗体或其抗原结合片段和抗VEGF抗体(例如，
Figure BDA0002390784750000181
或贝伐单抗生物类似剂)或其抗原结合片段工程化以形成双特异性抗体，该双特异性抗体同时针对爱帕琳肽和VEGF。
如本文所用，术语“爱帕琳肽”是指77个氨基酸的前体蛋白，称为前爱帕琳肽蛋白，及其加工的亚型，包括爱帕琳肽-13、爱帕琳肽-16、爱帕琳肽-17、爱帕琳肽-36、爱帕琳肽-55和其他衍生自所述77个氨基酸的前体的形式。每种亚型均具有独特的活性，并通过充当爱帕琳肽受体APJ(也称为apelinR、AGTRL1或APLNR)的配体起作用，APJ是A型视紫红质样G蛋白偶联受体(GPCR)。爱帕琳肽亚型的受体结合亲和力是不同的，这可以解释为触发爱帕琳肽受体APJ的细胞内信号传导的效力是不同的。爱帕琳肽/APJ系统在许多器官的生理和病理生理中起着重要的各种作用，包括但不限于调节血压、心脏收缩性、心血管张力、组织血管生成、水稳态、胃肠道生理、代谢平衡、血管平滑肌细胞(VSMC)和其他细胞类型的增殖、人脐静脉内皮细胞的单核细胞粘附、心肌梗死后的心脏修复，以及一些组织或器官的病理性纤维化。术语“人爱帕琳肽”是指源自人的爱帕琳肽。人爱帕琳肽前体的示例性氨基酸序列在GenBank登录号AAF25815.1(SEQ ID NO：221)中显示。
如本文所用，“特异性结合爱帕琳肽”的抗体是指与爱帕琳肽，优选人爱帕琳肽结合的抗体，其KD值小于1×10-7M，优选小于1×10-8M，更优选小于5×10-9M、小于1×10-9M、小于5×10-10M、小于1×10-10M。术语“KD”是指解离常数，其是从Kd与Ka之比(即，Kd/Ka)获得的，并被表示为摩尔浓度(M)。鉴于本公开，可以使用本领域的方法测定抗体的KD值。例如，抗体的KD可以通过使用表面等离子体共振来确定，例如通过使用生物传感器系统，例如
Figure BDA0002390784750000191
系统，或者通过使用生物层干涉技术，例如Octet RED96系统。
抗体的KD值越小，所述抗体与靶抗原结合的亲和力越高。
根据一个特定的方面，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3，其具有以下多肽序列：
(1)分别为SEQ ID NO：168、169、170、171、102和172；
(2)分别为SEQ ID NO：50、51、52、110、111和112；
(3)分别为SEQ ID NO：173、174、175、176、114和115；
(4)分别为SEQ ID NO：68、177、178、128、129和130；
(5)分别为SEQ ID NO：74、75、76、134、135和136；
(6)分别为SEQ ID NO：179、78、180、137、138和139；
(7)分别为SEQ ID NO：83、84、85、143、144和145；
(8)分别为SEQ ID NO：86、87、88、146、147和148；
(9)分别为SEQ ID NO：89、90、91、149、150和151；
(10)分别为SEQ ID NO：92、93、94、152、153和154；
(11)分别为SEQ ID NO：95、96、97、155、156和157；或
(12)分别为SEQ ID NO：98、99、100、158、159和160；
其中，所述抗体或其抗原结合片段特异性结合爱帕琳肽，优选人爱帕琳肽。
SEQ ID NO：168显示氨基酸序列X1NRX2S，其中X1是选自S或T的氨基酸，并且X2是选自M或V的氨基酸。
SEQ ID NO：169显示氨基酸序列SIGSSPWX1ASWAX2G，其中X1是选自Y或F的氨基酸，并且X2选自Q或L。
SEQ ID NO：170显示氨基酸序列GGYRPGX1SX2，其中X1是选自A或G的氨基酸，并且X2是选自V或I的氨基酸。
SEQ ID NO：171显示氨基酸序列QSSQSVYDNNDLX1，其中X1是选自A或G的氨基酸。
SEQ ID NO：172显示氨基酸序列AGGYX1GDIYT，其中X1是选自S或N的氨基酸。
SEQ ID NO：173显示氨基酸序列X1YAX2D，其中X1是选自N或S的氨基酸，并且X2选自M或I。
SEQ ID NO：174显示氨基酸序列VIAPNX1X2TX3YPTWARG，其中X1是选自R、G或H的氨基酸；X2是选自R、A或Y的氨基酸；并且X3是选自Y或C的氨基酸。
SEQ ID NO：175显示氨基酸序列YPIX1X2GX3NI，其中X1是选自E或D的氨基酸；X2是选自P、A、S或T的氨基酸；并且X3是选自A或S的氨基酸。
SEQ ID NO：176显示氨基酸序列QSSESVX1X2NNQLS，其中X1是选自D或G的氨基酸，并且X2是选自Y、N或M的氨基酸。
SEQ ID NO：177显示氨基酸序列VIAPSX1TTYYPTWAKG，其中X1是选自G或S的氨基酸。
SEQ ID NO：178显示氨基酸序列YPIDPGSNX1，其中X1是选自I或V的氨基酸。
SEQ ID NO：179显示氨基酸序列X1X2AMD，其中X1是选自N或S的氨基酸，并且X2是选自Y或H的氨基酸。
SEQ ID NO：180显示氨基酸序列YPIDX1GANV，其中X1是选自V或A的氨基酸。
根据另一个特定方面，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含含有与SEQ ID NO：1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37或39之一具有至少85％，优选地90％，更优选地95％的同一性的多肽序列的重链可变区，或含有与SEQ ID NO：2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38或40之一具有至少85％，优选地90％，更优选地95％的同一性的多肽序列的轻链可变区。根据一个优选的实施方式，本发明所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含含有与SEQ ID NO：1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37或39具有至少85％，优选地90％，更优选地95％的同一性的多肽序列的重链可变区，和含有与SEQ ID NO：2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38或40具有至少85％，优选地90％，更优选地95％的同一性的多肽序列的轻链可变区，分别地。
根据另一个特定方面，本发明涉及本发明的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，包括：
a.具有SEQ ID NO：1的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：2的多肽序列的轻链可变区；
b.具有SEQ ID NO：3的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：4的多肽序列的轻链可变区；
c.具有SEQ ID NO：5的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：6的多肽序列的轻链可变区；
d.具有SEQ ID NO：7的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：8的多肽序列的轻链可变区；
e.具有SEQ ID NO：9的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：10的多肽序列的轻链可变区；
f.具有SEQ ID NO：11的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：12的多肽序列的轻链可变区；
g.具有SEQ ID NO：13的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：14的多肽序列的轻链可变区；
h.具有SEQ ID NO：15的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：16的多肽序列的轻链可变区；
i.具有SEQ ID NO：17的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：18的多肽序列的轻链可变区；
j.具有SEQ ID NO：19的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：20的多肽序列的轻链可变区；
k.具有SEQ ID NO：21的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：22的多肽序列的轻链可变区；
l.具有SEQ ID NO：23的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：24的多肽序列的轻链可变区；
m.具有SEQ ID NO：25的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：26的多肽序列的轻链可变区；
n.具有SEQ ID NO：27的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：28的多肽序列的轻链可变区；
o.具有SEQ ID NO：29的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：30的多肽序列的轻链可变区；
p.具有SEQ ID NO：31的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：32的多肽序列的轻链可变区；
q.具有SEQ ID NO：33的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：34的多肽序列的轻链可变区；
r.具有SEQ ID NO：35的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：36的多肽序列的轻链可变区；
s.具有SEQ ID NO：37的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：38的多肽序列的轻链可变区；或
t.具有SEQ ID NO：39的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：40的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其分别具有SEQ ID NO：41、42、43、101、102和103所示的多肽序列。在另一实施方式中，所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与SEQ ID NO：1至少85％，较佳的90％，更佳的95％同源性的多肽序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：2至少85％，较佳的90％，更佳的95％同源性的多肽序列的轻链可变区。优选地，所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：1的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：2的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其分别具有SEQ ID NO：44、45、46、104、105和106所示的多肽序列。在另一实施方式中，所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与SEQ ID NO：3至少85％，较佳的90％，更佳的95％同源性的多肽序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：4至少85％，较佳的90％，更佳的95％同源性的多肽序列的轻链可变区。优选地，所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：3的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：4的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其分别具有SEQ ID NO：47、48、49、107、108和109所示的多肽序列。在另一实施方式中，所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与SEQ ID NO：5至少85％，较佳的90％，更佳的95％同源性的多肽序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：6至少85％，较佳的90％，更佳的95％同源性的多肽序列的轻链可变区。优选地，所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：5的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：6的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其分别具有SEQ ID NO：50、51、52、110、111和112所示的多肽序列。在另一实施方式中，所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与SEQ ID NO：7至少85％，较佳的90％，更佳的95％同源性的多肽序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：8至少85％，较佳的90％，更佳的95％同源性的多肽序列的轻链可变区。优选地，所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：7的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：8的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其分别具有SEQ ID NO：53、54、55、113、114和115所示的多肽序列。在另一实施方式中，所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与SEQ ID NO：9至少85％，较佳的90％，更佳的95％同源性的多肽序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：10至少85％，较佳的90％，更佳的95％同源性的多肽序列的轻链可变区。优选地，所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：9的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：10的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其分别具有SEQ ID NO：56、57、58、116、117和118所示的多肽序列。在另一实施方式中，所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与SEQ ID NO：11至少85％，较佳的90％，更佳的95％同源性的多肽序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：12至少85％，较佳的90％，更佳的95％同源性的多肽序列的轻链可变区。优选地，所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：11的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：12的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其分别具有SEQ ID NO：59、60、61、119、120和121所示的多肽序列。在另一实施方式中，所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与SEQ ID NO：13至少85％，较佳的90％，更佳的95％同源性的多肽序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：14至少85％，较佳的90％，更佳的95％同源性的多肽序列的轻链可变区。优选地，所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：13的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：14的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其分别具有SEQ ID NO：62、63、64、122、123和124所示的多肽序列。在另一实施方式中，所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与SEQ ID NO：15至少85％，较佳的90％，更佳的95％同源性的多肽序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：16至少85％，较佳的90％，更佳的95％同源性的多肽序列的轻链可变区。优选地，所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：15的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：16的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其分别具有SEQ ID NO：65、66、67、125、126和127所示的多肽序列。在另一实施方式中，所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与SEQ ID NO：17至少85％，较佳的90％，更佳的95％同源性的多肽序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：18至少85％，较佳的90％，更佳的95％同源性的多肽序列的轻链可变区。优选地，所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：17的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：18的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其分别具有SEQ ID NO：68、69、70、128、129和130所示的多肽序列。在另一实施方式中，所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与SEQ ID NO：19至少85％，较佳的90％，更佳的95％同源性的多肽序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：20至少85％，较佳的90％，更佳的95％同源性的多肽序列的轻链可变区。优选地，所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：19的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：20的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其分别具有SEQ ID NO：71、72、73、131、132和133所示的多肽序列。在另一实施方式中，所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与SEQ ID NO：21至少85％，较佳的90％，更佳的95％同源性的多肽序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：22至少85％，较佳的90％，更佳的95％同源性的多肽序列的轻链可变区。优选地，所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：21的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：22的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其分别具有SEQ ID NO：74、75、76、134、135和136所示的多肽序列。在另一实施方式中，所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与SEQ ID NO：23至少85％，较佳的90％，更佳的95％同源性的多肽序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：24至少85％，较佳的90％，更佳的95％同源性的多肽序列的轻链可变区。优选地，所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：23的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：24的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其分别具有SEQ ID NO：77、78、79、137、138和139所示的多肽序列。在另一实施方式中，所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与SEQ ID NO：25至少85％，较佳的90％，更佳的95％同源性的多肽序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：26至少85％，较佳的90％，更佳的95％同源性的多肽序列的轻链可变区。优选地，所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：25的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：26的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其分别具有SEQ ID NO：80、81、82、140、141和142所示的多肽序列。在另一实施方式中，所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与SEQ ID NO：27至少85％，较佳的90％，更佳的95％同源性的多肽序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：28至少85％，较佳的90％，更佳的95％同源性的多肽序列的轻链可变区。优选地，所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：27的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：28的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其分别具有SEQ ID NO：83、84、85、143、144和145所示的多肽序列。在另一实施方式中，所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与SEQ ID NO：29至少85％，较佳的90％，更佳的95％同源性的多肽序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：30至少85％，较佳的90％，更佳的95％同源性的多肽序列的轻链可变区。优选地，所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：29的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：30的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其分别具有SEQ ID NO：86、87、88、146、147和148所示的多肽序列。在另一实施方式中，所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与SEQ ID NO：31至少85％，较佳的90％，更佳的95％同源性的多肽序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：32至少85％，较佳的90％，更佳的95％同源性的多肽序列的轻链可变区。优选地，所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：31的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：32的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其分别具有SEQ ID NO：89、90、91、149、150和151所示的多肽序列。在另一实施方式中，所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与SEQ ID NO：33至少85％，较佳的90％，更佳的95％同源性的多肽序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：34至少85％，较佳的90％，更佳的95％同源性的多肽序列的轻链可变区。优选地，所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：33的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：34的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其分别具有SEQ ID NO：92、93、94、152、153和154所示的多肽序列。在另一实施方式中，所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与SEQ ID NO：35至少85％，较佳的90％，更佳的95％同源性的多肽序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：36至少85％，较佳的90％，更佳的95％同源性的多肽序列的轻链可变区。优选地，所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：35的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：36的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其分别具有SEQ ID NO：95、96、97、155、156和157所示的多肽序列。在另一实施方式中，所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与SEQ ID NO：37至少85％，较佳的90％，更佳的95％同源性的多肽序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：38至少85％，较佳的90％，更佳的95％同源性的多肽序列的轻链可变区。优选地，所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：37的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：38的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其分别具有SEQ ID NO：98、99、100、158、159和160所示的多肽序列。在另一实施方式中，所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与SEQ ID NO：39至少85％，较佳的90％，更佳的95％同源性的多肽序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：40至少85％，较佳的90％，更佳的95％同源性的多肽序列的轻链可变区。优选地，所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：39的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO：40的多肽序列的轻链可变区。
根据另一个特定方面，本发明还提供了分离的针对爱帕琳肽的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特异性结合包含SEQ ID NO：188的氨基酸序列的表位。所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段可以例如抑制爱帕琳肽活性。所述的单克隆抗体或其抗原结合片段可以例如特异性结合pyro-爱帕琳肽-13、爱帕琳肽-13、爱帕琳肽-17、爱帕琳肽-36、爱帕琳肽-55，和/或与爱帕琳肽-13具有相同的C末端的其他形式的爱帕琳肽。
根据另一个特定方面，本发明还提供了分离的针对爱帕琳肽的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特异性结合包含SEQ ID NO：204的氨基酸序列的表位。所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段可以例如抑制爱帕琳肽活性。所述的单克隆抗体或其抗原结合片段可以例如特异性结合爱帕琳肽-13和/或pyro-爱帕琳肽-13。
根据另一具体方面，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述的抗体或其抗原结合片段是嵌合的。
根据另一具体方面，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述的抗体或其抗原结合片段是人的或人源化的。
根据另一个特定方面，本发明涉及分离的人源化单克隆抗体或抗原结合片段，其中所述分离的人源化抗体或其抗原结合片段包括：
a.具有SEQ ID NO：211的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：215的多肽序列的轻链可变区；
b.具有SEQ ID NO：212的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：215的多肽序列的轻链可变区；
c.具有SEQ ID NO：213的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：215的多肽序列的轻链可变区；
d.具有SEQ ID NO：214的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：215的多肽序列的轻链可变区；
e.具有SEQ ID NO：213的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：216的多肽序列的轻链可变区；
f.具有SEQ ID NO：214的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：216的多肽序列的轻链可变区；
g.具有SEQ ID NO：217的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：219的多肽序列的轻链可变区；要么
h.具有SEQ ID NO：218的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：220的多肽序列的轻链可变区。
在另一个一般方面，本发明涉及一种编码本发明单克隆抗体或其抗原结合片段的分离的核酸。本领域技术人员可以理解，蛋白质的编码序列可以在不改变蛋白质的氨基酸序列的情况下被改变(例如替换、删除、插入等)。因此，本领域技术人员能够理解，可以在不改变蛋白质的氨基酸序列的情况下，改变编码本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段的核酸序列。
在另一个一般方面，本发明涉及一种载体，其包含编码本发明单克隆抗体或其抗原结合片段的分离的核酸。鉴于本公开，可以使用本领域技术人员已知的任何载体，例如质粒，粘粒，噬菌体载体或病毒载体。在一些实施方式中，所述载体是重组表达载体，如质粒。所述载体可以包括用于构建表达载体的常规功能的任何元件，例如启动子、核糖体结合元件、终止子、增强子、选择标记和复制起点。启动子可以是组成型、诱导型或抑制型启动子。本领域已知，许多表达载体能够将核酸递送至细胞，其可以在本发明中使用，用于在细胞中产生抗体或其抗原结合片段。根据本发明的实施方式，可以利用常规克隆技术或人工基因合成生产重组表达载体。
在另一个一般方面，本发明涉及一种宿主细胞，其包含编码本发明单克隆抗体或其抗原结合片段的分离的核酸。鉴于本公开内容，本领域技术人员已知的任何宿主细胞可用于重组表达本发明的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方式中，宿主细胞是大肠杆菌TG1或BL21细胞(用于表达例如scFv或Fab抗体)、CHO-DG44或CHO-K1细胞或HEK293细胞(用于表达例如全长IgG抗体)。根据具体的实施方式，通过常规方法例如化学转染、热休克或电穿孔将重组表达载体转化到宿主细胞中，其被稳定整合到宿主细胞基因组中，使得重组核酸得到有效表达。
在另一个一般方面，本发明涉及制备本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段的方法，包括在一定条件下培养包含编码单克隆抗体或抗原结合片段的核酸的细胞，以产生本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段，并从细胞或细胞培养物(如从上清液中)中回收抗体或其抗原结合片段。可以从细胞中收获表达的抗体或其抗原结合片段，并根据本领域已知的和本文所述的常规技术进行纯化。
药物组合物
在另一个一般方面，本发明涉及一种药物组合物，其包含分离的本发明单克隆抗体或其抗原结合片段和药学上可接受的载体。如本文所用，术语“药物组合物”是指包含本发明的抗体和药学上可接受的载体的产品。本发明的抗体和包含它们的组合物也可用于制备药物，所述药物用于本发明提及的治疗性应用。
如本文所用，术语“载体”是指任何赋形剂、稀释剂、填充剂、盐、缓冲剂、稳定剂、增溶剂、油、脂质、含脂质的囊泡、微球体、脂质包封体、或本领域已知的用于药物制剂的其他物质。应当理解，载体、赋形剂或稀释剂的特性取决于具体应用的给药途径。如本文所用，术语“药学上可接受的载体”是指不干扰本发明所述组合物的有效性或本发明所述组合物的生物活性的无毒物质。根据具体实施方式，鉴于本公开内容，适用于抗体药物组合物的任何药学上可接受的载体均可用于本发明。
用药学上可接受的载体进行药学活性成分的配制是本领域已知的，例如《雷明顿：药学的科学与实践》(例如，第21版(2005年)以及任何更高版本)。其他成分的非限制性实例包括：缓冲剂、稀释剂、溶剂、张度调节剂、防腐剂、稳定剂和螯合剂。一种或多种药学上可接受的载体可以用于配制本发明的药物组合物。
在本发明的一种实施方式中，所述药物组合物是液体制剂。液体制剂的优选实例是水性制剂，即包含水的制剂。液体制剂可以包含溶液、悬浮液、乳液、微乳液、凝胶等。水性制剂通常包含至少50％w/w的水，或至少60％、70％、75％、80％、85％、90％或至少95％w/w的水。
在一种实施方式中，所述药物组合物可以配制成可以，例如通过注射装置(例如，注射器或输液泵)注射的注射剂。例如，可以皮下、肌肉内、腹膜内、玻璃体内或静脉内递送注射剂。
在另一种实施方式中，所述药物组合物是固体制剂，例如冷冻干燥或喷雾干燥的组合物，其可以原样使用，或在使用前由医师或患者向其添加溶剂和/或稀释剂。固体剂型可包括片剂，例如压制片剂和/或包衣片剂，以及胶囊剂(例如，硬或软明胶胶囊)。所述药物组合物也可以是例如小包装、糖衣丸、粉末、颗粒、锭剂或用于重构的粉末的形式。
剂型可以是立即释放的，在这种情况下，它们可以包含水溶性或分散性载体，或者可以是延迟释放，持续释放或调节释放，在这种情况下，它们可以包含调节速率的水不溶性聚合物。剂型在胃肠道或皮肤下的溶解。
在其他实施方式中，所述药物组合物可以通过鼻内、颊内或舌下递送。
水性制剂中的pH可以在pH 3至pH 10之间。在本发明的一种实施方式中，制剂的pH为约7.0至约9.5。在本发明的另一种实施方式中，制剂的pH为约3.0至约7.0。
在本发明的另一种实施方式中，所述药物组合物包含缓冲剂。缓冲剂的非限制性实例包括：精氨酸、天冬氨酸、二甘氨酸、柠檬酸盐、磷酸氢二钠、富马酸、甘氨酸、双甘氨肽、组氨酸、赖氨酸、马来酸、苹果酸、乙酸钠、碳酸钠、磷酸二氢钠、磷酸钠、琥珀酸、酒石酸、三甲基甘氨酸和三(羟甲基)-氨基甲烷及其混合物。缓冲剂可以单独存在，或以总计约0.01mg/ml至约50mg/ml，例如约0.1mg/ml至约20mg/ml的浓度存在。包含这些特定缓冲剂中的每一种的药物组合物构成本发明的替代实施方式。
在本发明的另一种实施方式中，所述药物组合物包含防腐剂。防腐剂的非限制性实例包括：苄索氯铵、苯甲酸、苯甲醇、溴硝醇、4-羟基苯甲酸丁酯、氯丁醇、氯甲酚、氯己定、氯苯甘醚、邻甲酚、间甲酚、对甲酚、4-羟基苯甲酸乙酯、咪唑烷脲、4-羟基苯甲酸甲酯、苯酚、2-苯氧基乙醇、2-苯基乙醇、4-羟基苯甲酸丙酯、脱氢乙酸钠、硫柳汞及其混合物。防腐剂可以单独存在，或以总计约0.01mg/ml至约50mg/ml，例如约0.1mg/ml至约20mg/ml的浓度存在。包含这些特定防腐剂中的每一种的药物组合物构成本发明的替代实施方式。
在本发明的另一种实施方式中，所述药物组合物包含等渗剂。该实施方式的非限制性实例包括盐(例如氯化钠)、氨基酸(例如甘氨酸、组氨酸、精氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、天冬氨酸、色氨酸和苏氨酸)、醛醇(alditol)(例如丙三醇、1,2-丙二醇(丙二醇)、1,3-丙二醇和1,3-丁二醇)、聚乙二醇(例如PEG400)及其混合物。等渗剂的另一个实例包括糖。糖的非限制性实例可以是单糖、二糖或多糖，或水溶性葡聚糖，包括例如果糖、葡萄糖、甘露糖、山梨糖、木糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、海藻糖、右旋糖酐、支链淀粉、糊精、环糊精、α和β-HPCD、可溶性淀粉、羟乙基淀粉和羧甲基纤维素钠。等渗剂的另一个实例是糖醇，其中术语“糖醇”定义为具有至少一个-OH基团的C(4-8)烃。糖醇的非限制性实例包括甘露醇、山梨醇、肌醇、半乳糖醇、卫矛醇、木糖醇和阿拉伯糖醇。等渗剂可以单独存在，或以总计约0.01mg/ml至约50mg/ml，例如约0.1mg/ml至约20mg/ml的浓度存在。包含这些特定等渗剂中的每一种的药物组合物构成本发明的替代实施方式。
在本发明的另一种实施方式中，所述药物组合物包含螯合剂。螯合剂的非限制性实例包括柠檬酸、天冬氨酸、乙二胺四乙酸(EDTA)盐及其混合物。螯合剂可以单独存在，或以总计约0.01mg/ml至约50mg/ml，例如约0.1mg/ml至约20mg/ml的浓度存在。包含这些特定螯合剂中的每一种的药物组合物构成本发明的替代实施方式。
在本发明的另一种实施方式中，所述药物组合物包含稳定剂。稳定剂的非限制性实例包括一种或多种聚集抑制剂，一种或多种氧化抑制剂，一种或多种表面活性剂和/或一种或多种蛋白酶抑制剂。
在本发明的另一种实施方式中，所述药物组合物包含稳定剂，其中所述稳定剂是羧基-/羟基纤维素及其衍生物(例如HPC、HPC-SL、HPC-L和HPMC)、环糊精、2-甲硫基乙醇、聚乙二醇(例如PEG 3350)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮、盐(例如氯化钠)、含硫物质(例如硫代甘油)或巯基乙酸。稳定剂可以单独存在，或以总计约0.01mg/ml至约50mg/ml，例如约0.1mg/ml至约20mg/ml的浓度存在。包含这些特定稳定剂中的每一种的药物组合物构成本发明的替代实施方式。
在本发明的其他实施方式中，所述药物组合物包含一种或多种表面活性剂，优选一种表面活性剂、至少一种表面活性剂、或两种不同的表面活性剂。术语“表面活性剂”是指由水溶性(亲水)部分和脂溶性(亲脂)部分组成的任何分子或离子。表面活性剂可以例如选自下组：阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、非离子表面活性剂和/或两性离子表面活性剂。表面活性剂可以单独存在，或以总计约0.1mg/ml至约20mg/ml的浓度存在。包含这些特定表面活性剂中的每一种的药物组合物构成本发明的替代实施方式。
在本发明的另一种实施方式中，所述药物组合物包含一种或多种蛋白酶抑制剂，例如EDTA和/或盐酸(HCl)苯甲脒。蛋白酶抑制剂可以单独存在，或以总计约0.1mg/ml至约20mg/ml的浓度存在。包含这些特定蛋白酶抑制剂中的每一种的药物组合物构成本发明的替代实施方式。
在另一个一般方面，本发明涉及制备包含本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段的药物组合物的方法，包括将所述单克隆抗体或其抗原结合片段与药学上可接受的载体组合以获得所述药物组合物。
使用方法
在另一个一般方面，本发明涉及一种阻断爱帕琳肽与爱帕琳肽受体的结合的方法，所述方法包括向受试者施用本发明的药物组合物。
与爱帕琳肽结合的抗体及其抗原结合片段的功能活性可以通过本领域已知的和本文所述的方法进行表征。表征结合爱帕琳肽的抗体及其抗原结合片段的方法包括但不限于：亲和力和特异性测定法，包括Biacore、ELISA和OctetRed分析；受体配体结合测定法，以检测爱帕琳肽与爱帕琳肽受体结合的阻断；基于细胞的检测，以检测mAb对爱帕琳肽刺激的细胞内信号传导的中和活性。根据特定的实施方式，与爱帕琳肽结合的抗体及其抗原结合片段的表征方法包括以下描述的那些。
在另一个一般方面，本发明涉及治疗有需要的受试者的糖尿病性视网膜病变(DR)的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
在另一个一般方面，本发明涉及治疗有需要的受试者的老年性黄斑变性(AMD)的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
在另一个一般方面，本发明涉及治疗有需要的受试者的糖尿病性黄斑水肿(DME)的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
在另一个一般方面，本发明涉及治疗有需要的受试者的视网膜静脉阻塞(RVO)后黄斑水肿的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
在另一个一般方面，本发明涉及治疗有需要的受试者的视网膜变性的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
在另一个一般方面，本发明涉及治疗有需要的受试者的近视脉络膜新生血管(mCNV)的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
在另一个一般方面，本发明涉及治疗有需要的受试者的糖尿病性肾病的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
在另一个一般方面，本发明涉及治疗有需要的受试者的慢性肾病(CKD)的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
在另一个一般方面，本发明涉及治疗有需要的受试者的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
在另一个一般方面，本发明涉及治疗有需要的受试者的肝硬化的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
在另一个一般方面，本发明涉及治疗有需要的受试者的斑块新生血管的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
在另一个一般方面，本发明涉及治疗有需要的受试者的虹膜红变的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
在另一个一般方面，本发明涉及治疗有需要的受试者的新生血管性青光眼的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
在另一个一般方面，本发明涉及治疗有需要的受试者的角膜新生血管(CNV)的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
在另一个一般方面，本发明涉及治疗有需要的受试者的早产儿视网膜病变(ROP)的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
在另一个一般方面，本发明涉及治疗有需要的受试者的视网膜病变的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
在另一个一般方面，本发明涉及治疗需要的受试者的黄斑变性的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
在另一个一般方面，本发明涉及治疗有需要的受试者的卵巢过度刺激综合征(OHSS)的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
在另一个一般方面，本发明涉及治疗有需要的受试者的子宫出血的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
在另一个一般方面，本发明涉及治疗有需要的受试者的子宫内膜异位的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
在另一个一般方面，本发明涉及治疗有需要的受试者的子宫内膜增生和癌症的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
在另一个一般方面，本发明涉及治疗有需要的受试者的子宫肌层平滑肌瘤的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
在另一个一般方面，本发明涉及治疗有需要的受试者的子宫腺肌病的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。
在另一个一般方面，本发明涉及治疗有需要的受试者的纤维化的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。纤维化可例如选自病理和生理性纤维化、肾纤维化、心脏纤维化、肝纤维化或肺纤维化。
在另一个一般方面，本发明涉及治疗有需要的受试者的癌症的方法，包括向受试者施用本发明的药物组合物。所述癌症可以是任何液体或实体癌，例如，其可以选自但不限于肺癌、胃癌、结肠癌、肝细胞癌、肾细胞癌、膀胱尿路上皮癌、胆管癌、转移性黑素瘤、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、头颈癌、胰腺癌、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤和其他实体瘤，以及非霍奇金淋巴瘤(NHL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、多发性骨髓瘤(MM)、急性髓性白血病(AML)和其他液体肿瘤。
在某些实施方式中，所述药物组合物还包含第二治疗性抗癌剂。所述第二治疗性抗癌剂可以是例如抗VEGF剂。所述抗VEGF剂可以是例如
Figure BDA0002390784750000341
或贝伐单抗生物类似剂。所述抗VEGF剂可以是例如VEGFR1和/或VEFR2阻断剂。在某些实施方式中，抗爱帕琳肽单克隆抗体或其抗原结合片段和第二治疗性抗癌剂在分开的制剂中共同施用。在某些实施方式中，抗爱帕琳肽单克隆抗体或其抗原结合片段和第二治疗性抗癌剂在共同的制剂中共同施用。在某些实施方式中，抗爱帕琳肽单克隆抗体或其抗原结合片段和第二治疗性抗癌剂，例如抗VEGF剂，例如
Figure BDA0002390784750000342
被工程化为同时靶向VEGF和爱帕琳肽的双特异性抗体。
根据本发明的实施方式，所述药物组合物包含治疗有效量的抗爱帕琳肽抗体或其抗原结合片段。如本文所用，术语“治疗有效量”是指在受试者中引起期望的生物或药物反应的活性成分或组分的量。根据所述目的，可以以经验和常规方式确定治疗有效量。
如本文所用，对于抗爱帕琳肽抗体或其抗原结合片段，治疗有效量是指在有需要的受试者中调控免疫应答的抗爱帕琳肽抗体或其抗原结合片段的量。同样地，如本文所用，对于抗爱帕琳肽抗体或其抗原结合片段，治疗有效量是指治疗疾病、病症或症状；预防或减缓疾病、病症或症状发展；或减轻或完全减轻与疾病、病症或症状有关的症状的抗爱帕琳肽抗体或其抗原结合片段的量。
根据特定的实施方式，待治疗的疾病、病症或病状是糖尿病性视网膜病变(DR)、老年性黄斑变性(AMD)、糖尿病性黄斑水肿(DME)、视网膜静脉阻塞(RVO)后黄斑水肿、视网膜变性、近视脉络膜新生血管(mCNV)、糖尿病性肾病、慢性肾病(CKD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、肝硬化、斑块新生血管、虹膜红变、新生血管性青光眼、角膜新生血管(CNV)、早产儿视网膜病变(ROP)、视网膜病变、黄斑变性、卵巢过度刺激综合征(OHSS)、子宫出血、子宫内膜异位、子宫内膜增生和癌症、子宫肌层平滑肌瘤、子宫腺肌病、纤维化(例如，病理性和生理性纤维化、肾纤维化、心脏纤维化、肝纤维化和肺纤维化)，和/或相关并发症。根据其他特定的实施方式，待治疗的疾病、病症或症状是癌症，优选选自下组的癌症：肺癌、胃癌、结肠癌、肝细胞癌、肾细胞癌、膀胱尿路上皮癌、胆管癌、转移性黑素瘤、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、头颈癌、胰腺癌、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤和其他实体瘤，以及非霍奇金淋巴瘤(NHL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、多发性骨髓瘤(MM)、急性髓性白血病(AML)和其他液体肿瘤。
根据具体的实施方式，治疗有效量是指足以实现1、2、3、4或更多种以下效果的治疗量：(i)减轻或改善待治疗的疾病、病症或症状或与之相关的症状的严重程度；(ii)减少待治疗的疾病、病症或症状或与之相关的症状的持续时间；(iii)预防待治疗的疾病、病症或症状或与之相关的症状发展；(iv)使待治疗的疾病、病症或症状或与之相关的症状退化；(v)预防待治疗的疾病、病症或症状或与之相关的症状的发展或发作；(vi)预防待治疗的疾病、病症或症状或与之相关的症状的复发；(vii)减少患有待治疗的疾病、病症或症状或与之相关的症状的受试者的住院治疗；(viii)减少患有待治疗的疾病、病症或症状或与之相关的症状的受试者的住院时间；(ix)增加患有待治疗的疾病、病症或症状或与之相关的症状的受试者的存活率；(xi)抑制或减轻受试者中待治疗的疾病、病症或症状或与之相关的症状；和/或(xii)增强或改善另一种疗法的预防或治疗效果。
治疗有效量或剂量可根据各种因素而变化，例如待治疗的疾病、病症或症状、给药方式、靶位点、受试者的生理状态(包括，例如年龄、体重、健康状况)、受试者是人还是动物、施用的其他药物、以及该处理是预防还是治疗。优化滴定的治疗剂量，以优化安全性和有效性。
根据具体的实施方式，配制本文所述的组合物，以使其适合向受试者施用的预期途径。例如，本文所述的组合物可以配制成适合于静脉内、皮下或肌肉内施用的形式。
如本文所用，术语“治疗”、“治疗的”和“疗法”均旨在表示改善或逆转与下述疾病相关的至少一种可测的生理参数：癌症、糖尿病性视网膜病变(DR)的疾病、病症或病状、老年性黄斑变性(AMD)的疾病、病症或病状、糖尿病性黄斑水肿(DME)的疾病、病症或病状、视网膜静脉阻塞(RVO)后黄斑水肿的疾病、病症或病状、视网膜变性的疾病、病症或病状、近视脉络膜新生血管(mCNV)的疾病、病症或病状、糖尿病性肾病的疾病、病症或病状、慢性肾病(CKD)的疾病、病症或病状、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的疾病、病症或病状、肝硬化的疾病、疾病或症状、斑块新生血管的疾病、疾病或病症、虹膜红变的疾病、病症或症状、新生血管性青光眼的疾病、病症或症状、角膜新生血管(CNV)的疾病、疾病或病症、早产儿视网膜病变(ROP)的疾病、病症或症状、视网膜病变的疾病、病症或症状、黄斑变性的疾病、病症或症状、卵巢过度刺激综合症(OHSS)的疾病、病症或症状、子宫出血的疾病、病症或症状、子宫内膜异位的疾病、病症或症状、子宫内膜增生和癌症的疾病，疾病或病症、子宫肌层平滑肌瘤的疾病、病症或症状、子宫腺肌病的疾病、病症或症状，和/或纤维化的疾病、病症或病状，其在受试者中不必须可辨别，但在受试者中可辨别。术语“治疗”、“治疗的”和“疗法”还可指使得疾病、病症或症状消退、阻碍其进展、或至少减缓其进展。在具体的实施方式中，“治疗”、“治疗的”和“疗法”是指减轻，预防与疾病、病症或症状(例如肿瘤，更优选地为癌症)相关的一种或多种症状的发展或发作，或减少其持续时间。在具体的实施方式中，“治疗”、“治疗的”和“疗法”是指预防疾病、病症或症状的复发。在具体的实施方式中，“治疗”、“治疗的”和“疗法”是指增加患有疾病、病症或症状的受试者的存活率。在具体的实施方式中，“治疗”、“治疗的”和“疗法”是指治愈受试者的疾病、病症或症状。
根据特定的实施方式，可以将组合物与另一种疗法联合，用于治疗以下疾病：癌症、糖尿病性视网膜病变(DR)的疾病、病症或病状、老年性黄斑变性(AMD)的疾病、病症或病状、糖尿病性黄斑水肿(DME)的疾病、病症或病状、视网膜静脉阻塞(RVO)后黄斑水肿的疾病、病症或病状、视网膜变性的疾病、病症或病状、近视脉络膜新生血管(mCNV)的疾病、病症或病状、糖尿病性肾病的疾病、病症或病状、慢性肾病(CKD)的疾病、病症或病状、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的疾病、病症或病状、肝硬化的疾病、疾病或症状、斑块新生血管的疾病、疾病或病症、虹膜红变的疾病、病症或症状、新生血管性青光眼的疾病、病症或症状、角膜新生血管(CNV)的疾病、疾病或病症、早产儿视网膜病变(ROP)的疾病、病症或症状、视网膜病变的疾病、病症或症状、黄斑变性的疾病、病症或症状、卵巢过度刺激综合症(OHSS)的疾病、病症或症状、子宫出血的疾病、病症或症状、子宫内膜异位的疾病、病症或症状、子宫内膜增生和癌症的疾病，疾病或病症、子宫肌层平滑肌瘤的疾病、病症或症状、子宫腺肌病的疾病、病症或症状，和/或纤维化的疾病、病症或病状。对于癌症治疗，所述组合物可以联合使用的另一种治疗包括但不限于：化学疗法、阻断VEGF/VEGFR1/VEGFR2通路的疗法，例如
Figure BDA0002390784750000371
抗CD20 mAb、抗CTLA-4抗体、抗LAG-3mAb、抗EGFR mAb、抗HER-2mAb、抗CD19 mAb、抗CD33mAb、抗CD73 mAb、抗CD47 mAb、抗DLL-3mAb、抗爱帕琳肽(apelin)mAb、抗TIP-1mAb、抗CLDN18.2 mAb、抗FOLR1 mAb、抗PD-L1抗体、抗PD-1抗体、PD-1/PD-L1疗法、其他免疫肿瘤学药物、靶向疗法、抗血管生成剂、放射疗法，或其他抗癌药物。抗爱帕琳肽抗体可与针对以下靶点的伴侣mAb共同构建双特异性抗体以治疗癌症/肿瘤：VEGF、血管生成素2(ANG-2)、富含亮氨酸的α-2-糖蛋白1(LRG1)、CD73、PD-1、PD-L1、LAG-3、TIM-3、CTLA-4、EGFR、HER-2、CD19、CD20、CD33、CD47、DLL3、连接蛋白(claudin)18.2、TIP-1、CD3、PDGFβ、VI型胶原受体、TGF-β受体、LOXL2、p75神经营养蛋白受体(NGFR p75)、胰岛素样生长因子2受体(IGF2R)，和/或其他肿瘤表面抗原。为了治疗糖尿病性视网膜病变(DR)、老年性黄斑变性(AMD)和/或糖尿病性黄斑水肿(DME)，该组合物可以与另一种疗法联合使用，所述另一种疗法包括但不限于VEGF阻断剂(例如，雷尼单抗(ranibizumab)
Figure BDA0002390784750000372
阿柏西普(
Figure BDA0002390784750000373
康柏西普)或另一种抗DR、抗AMD和/或抗DME药物。抗爱帕琳肽抗体可与以下mAb共同构建双特异性抗体：抗VEGF、ANG-2的mAb，和/或抗DR、AMD和/或DME特异性抗原的其他mAb，以治疗同时表达爱帕琳肽和特异性DR、AMD和/或DME抗原的DR、AMD和/或DME。
如本文所用，上下文中向受试者施用两种或更多种疗法的术语“联合”是指使用多于一种的疗法。使用的术语“联合”不限制向受试者施用的治疗的顺序。例如，向受试者施用第一种疗法(例如，本文所述的组合物)可以在施用第二种疗法之前(例如，提前5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、16小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周)，同时，或之后(例如，延后5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、16小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周)。
在另一个一般方面，本发明涉及一种确定受试者中爱帕琳肽水平的方法。所述方法包括(a)从受试者获得样品；(b)使所述样品与本发明的抗体或其抗原结合片段接触；(c)确定受试者中爱帕琳肽的水平。
如本文所用，“样品”是指从受试者分离的生物样品，可以包括但不限于全血、血清、血浆、血细胞、内皮细胞、活检组织(例如，癌组织、肝组织等)、淋巴液、腹水、组织液、骨髓、脑脊液、唾液、粘液、痰、汗液、尿液或任何其他分泌物、排泄物或其他体液。“血液样品”是指全血或其任何部分，包括血细胞、血清和血浆。
在某些实施方式中，可以利用选自但不限于下组的方法测定受试者中爱帕琳肽的水平：蛋白质印迹分析、ELISA分析，和/或放射免疫分析(RIA)。相对蛋白水平可以通过蛋白质印迹分析和免疫组织化学(IHC)来确定，绝对蛋白水平可以通过ELISA分析或RIA分析来确定。当测定爱帕琳肽的相对水平时，可以在至少两个样品之间测定的爱帕琳肽水平，例如，在不同时间点来自同一受试者的样品之间、来自同一受试者的不同组织的样品之间，和/或来自两个受试者的样品之间的爱帕琳肽的水平。或者，在测定爱帕琳肽的绝对水平时，例如通过ELISA测定法时，可以通过在测试样品之前为ELISA分析建立标准来确定样品中爱帕琳肽的绝对水平，而当使用RIA测定法时，样品中爱帕琳肽的绝对水平可以通过将样品与放射性标记的爱帕琳肽和已知量的本发明的抗体或其抗原结合片段混合以使其结合，将结合的爱帕琳肽(包括放射性标记的和天然的)从游离的(未结合的)爱帕琳肽(同样包括放射性标记的和天然的)中分离出来，并测量游离的(未结合的)爱帕琳肽的放射性强度。本领域技术人员将理解，利用本发明的抗体或其抗原结合片段，可使用哪种分析技术确定来自受试者的样品中的爱帕琳肽水平。
利用确定受试者样品中爱帕琳肽水平的方法，可诊断疾病中爱帕琳肽水平的异常(升高、降低或不足)并做出适当的治疗决策。这种疾病可以选自但不限于：心血管疾病、心力衰竭、糖尿病、肥胖、糖尿病性视网膜病变(DR)、老年性黄斑变性(AMD)、糖尿病性黄斑水肿(DME)、视网膜静脉阻塞(RVO)后黄斑水肿、视网膜变性、近视脉络膜新生血管(mCNV)、糖尿病性肾病、慢性肾病(CKD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、肝硬化、斑块新生血管、虹膜红变、新生血管性青光眼、角膜新生血管(CNV)、早产儿视网膜病变(ROP)、视网膜病变、黄斑变性、卵巢过度刺激综合征(OHSS)、子宫出血、子宫内膜异位、子宫内膜增生和癌症、子宫肌层平滑肌瘤、子宫腺肌病、纤维化(例如，病理性和生理性纤维化、肾纤维化、心脏纤维化、肝纤维化和肺纤维化)，和/或癌症。另外，通过监测受试者中爱帕琳肽的水平，可以基于对特定疾病中和/或在特定疾病的进展期间爱帕琳肽水平的了解来确定发生上述疾病的风险。
实施方式
本发明还提供以下非限制性实施方式。
实施方式1是一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3，其具有以下多肽序列：
(1)分别为SEQ ID NO：168、169、170、171、102和172；
(2)分别为SEQ ID NO：50、51、52、110、111和112；
(3)分别为SEQ ID NO：173、174、175、176、114和115；
(4)分别为SEQ ID NO：68、177、178、128、129和130；
(5)分别为SEQ ID NO：74、75、76、134、135和136；
(6)分别为SEQ ID NO：179、78、180、137、138和139；
(7)分别为SEQ ID NO：83、84、85、143、144和145；
(8)分别为SEQ ID NO：86、87、88、146、147和148；
(9)分别为SEQ ID NO：89、90、91、149、150和151；
(10)分别为SEQ ID NO：92、93、94、152、153和154；
(11)分别为SEQ ID NO：95、96、97、155、156和157；或
(12)分别为SEQ ID NO：98、99、100、158、159和160；
其中，所述抗体或其抗原结合片段特异性结合爱帕琳肽，优选人爱帕琳肽。
实施方式2是如实施方式1所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含含有与SEQ ID NO：1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37或39具有至少95％的同一性的多肽序列的重链可变区，或含有与SEQ ID NO：2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38或40具有至少95％的同一性的多肽序列的轻链可变区。
实施方式3是如实施方式1或2所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含：
(a)具有SEQ ID NO：1的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：2的多肽序列的轻链可变区；
(b)具有SEQ ID NO：3的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：4的多肽序列的轻链可变区；
(c)具有SEQ ID NO：5的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：6的多肽序列的轻链可变区；
(d)具有SEQ ID NO：7的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：8的多肽序列的轻链可变区；
(e)具有SEQ ID NO：9的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：10的多肽序列的轻链可变区；
(f)具有SEQ ID NO：11的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：12的多肽序列的轻链可变区；
(g)具有SEQ ID NO：13的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：14的多肽序列的轻链可变区；
(h)具有SEQ ID NO：15的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：16的多肽序列的轻链可变区；
(i)具有SEQ ID NO：17的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：18的多肽序列的轻链可变区；
(j)具有SEQ ID NO：19的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：20的多肽序列的轻链可变区；
(k)具有SEQ ID NO：21的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：22的多肽序列的轻链可变区；
(l)具有SEQ ID NO：23的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：24的多肽序列的轻链可变区；
(m)具有SEQ ID NO：25的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：26的多肽序列的轻链可变区；
(n)具有SEQ ID NO：27的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：28的多肽序列的轻链可变区；
(o)具有SEQ ID NO：29的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：30的多肽序列的轻链可变区；
(p)具有SEQ ID NO：31的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：32的多肽序列的轻链可变区；
(q)具有SEQ ID NO：33的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：34的多肽序列的轻链可变区；
(r)具有SEQ ID NO：35的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：36的多肽序列的轻链可变区；
(s)具有SEQ ID NO：37的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：38的多肽序列的轻链可变区；或
(t)具有SEQ ID NO：39的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：40的多肽序列的轻链可变区。
实施方式4是一种分离的针对爱帕琳肽的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特异性结合包含SEQ ID NO：188的氨基酸序列的表位。
实施方式5是一种分离的针对爱帕琳肽的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特异性结合包含SEQ ID NO：204的氨基酸序列的表位。
实施方式6是如实施方式4或5所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述的抗体或其抗原结合片段抑制爱帕琳肽活性。
实施方式7是如实施方式4所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段能够结合pyro-爱帕琳肽-13、爱帕琳肽-13、爱帕琳肽-17、爱帕琳肽-36、爱帕琳肽-55，和/或与爱帕琳肽-13具有相同的C末端的其他形式的爱帕琳肽。
实施方式8是如实施方式5所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段能够结合爱帕琳肽-13和/或pyro-爱帕琳肽-13。
实施方式9是如实施方式1至8中任一项所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述的抗体或其抗原结合片段是嵌合的。
实施方式10是如实施方式1至9中任一项所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述的抗体或其抗原结合片段是人的或人源化的。
实施方式11是如实施方式10所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述的抗体或其抗原结合片段包括：
a.具有SEQ ID NO：211的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：215的多肽序列的轻链可变区；
b.具有SEQ ID NO：212的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：215的多肽序列的轻链可变区；
c.具有SEQ ID NO：213的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：215的多肽序列的轻链可变区；
d.具有SEQ ID NO：214的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：215的多肽序列的轻链可变区；
e.具有SEQ ID NO：213的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：216的多肽序列的轻链可变区；
f.具有SEQ ID NO：214的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：216的多肽序列的轻链可变区；
g.具有SEQ ID NO：217的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：219的多肽序列的轻链可变区；或
h.具有SEQ ID NO：218的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：220的多肽序列的轻链可变区。
实施方式12是一种分离的核酸，其编码如实施方式1至11中任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段。
实施方式13是一种载体，其包含如实施方式12所述的分离的核酸。
实施方式14是一种宿主细胞，其包含如实施方式13所述的载体。
实施方式15是一种药物组合物，其包含如实施方式1至11中任一项所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，和药学上可接受的载体。
实施方式16是一种在有所需要的受试者中阻断爱帕琳肽与爱帕琳肽受体结合的方法，其包括向受试者施用如实施方式15所述的药物组合物。
实施方式17是一种在有所需要的受试者中治疗糖尿病性视网膜病变(DR)的方法，其包括向受试者施用如实施方式15所述的药物组合物。
实施方式18是一种在有所需要的受试者中治疗老年性黄斑变性(AMD)的方法，其包括向受试者施用如实施方式15所述的药物组合物。
实施方式19是一种在有所需要的受试者中治疗糖尿病性黄斑水肿(DME)的方法，其包括向受试者施用如实施方式15所述的药物组合物。
实施方式20是一种在有所需要的受试者中治疗视网膜静脉阻塞(RVO)后黄斑水肿的方法，其包括向受试者施用如实施方式15所述的药物组合物。
实施方式21是一种在有所需要的受试者中治疗视网膜变性的方法，其包括向受试者施用如实施方式15所述的药物组合物。
实施方式22是一种在有所需要的受试者中治疗近视脉络膜新生血管(mCNV)的方法，其包括向受试者施用如实施方式15所述的药物组合物。
实施方式23是一种在有所需要的受试者中治疗糖尿病性肾病的方法，其包括向受试者施用如实施方式15所述的药物组合物。
实施方式24是一种在有所需要的受试者中治疗慢性肾病(CKD)的方法，其包括向受试者施用如实施方式15所述的药物组合物。
实施方式25是一种在有所需要的受试者中治疗非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的方法，其包括向受试者施用如实施方式15所述的药物组合物。
实施方式26是一种在有所需要的受试者中治疗肝硬化的方法，其包括向受试者施用如实施方式15所述的药物组合物。
实施方式27是一种在有所需要的受试者中治疗斑块新生血管的方法，其包括向受试者施用如实施方式15所述的药物组合物。
实施方式28是一种在有所需要的受试者中治疗虹膜红变的方法，其包括向受试者施用如实施方式15所述的药物组合物。
实施方式29是一种在有所需要的受试者中治疗新生血管性青光眼的方法，其包括向受试者施用如实施方式15所述的药物组合物。
实施方式30是一种在有所需要的受试者中治疗角膜新生血管(CNV)的方法，其包括向受试者施用如实施方式15所述的药物组合物。
实施方式31是一种在有所需要的受试者中治疗早产儿视网膜病变(ROP)的方法，其包括向受试者施用如实施方式15所述的药物组合物。
实施方式32是一种在有所需要的受试者中治疗视网膜病变的方法，其包括向受试者施用如实施方式15所述的药物组合物。
实施方式33是一种在有所需要的受试者中治疗黄斑变性的方法，其包括向受试者施用如实施方式15所述的药物组合物。
实施方式34是一种在有所需要的受试者中治疗卵巢过度刺激综合征(OHSS)的方法，其包括向受试者施用如实施方式15所述的药物组合物。
实施方式35是一种在有所需要的受试者中治疗子宫出血的方法，其包括向受试者施用如实施方式15所述的药物组合物。
实施方式36是一种在有所需要的受试者中治疗子宫内膜异位的方法，其包括向受试者施用如实施方式15所述的药物组合物。
实施方式37是一种在有所需要的受试者中治疗子宫内膜增生和癌症的方法，其包括向受试者施用如实施方式15所述的药物组合物。
实施方式38是一种在有所需要的受试者中治疗子宫肌层平滑肌瘤的方法，其包括向受试者施用如实施方式15所述的药物组合物。
实施方式39是一种在有所需要的受试者中治疗子宫腺肌病的方法，其包括向受试者施用如实施方式15所述的药物组合物。
实施方式40是一种在有所需要的受试者中治疗癌症的方法，其包括向受试者施用如实施方式15所述的药物组合物。
实施方式41是如实施方式40所述的方法，其中所述药物组合物还包含第二抗癌剂。
实施方式42是如实施方式41所述的方法，其中所述第二抗癌剂是抗VEGF剂。
实施方式43是如实施方式42所述的方法，其中所述抗VEGF剂是
Figure BDA0002390784750000441
或贝伐单抗生物类似剂。
实施方式44是如实施方式42所述的方法，其中所述抗VEGF剂是VEGFR1和/或VEGFR2阻断剂。
实施方式45是如实施方式40-44中任一项所述的方法，其中所述癌症选自下组：肺癌、胃癌、结肠癌、肝细胞癌、肾细胞癌、膀胱尿路上皮癌、胆管癌、转移性黑素瘤、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、头颈癌、胰腺癌、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤和其他实体瘤，以及非霍奇金淋巴瘤(NHL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、多发性骨髓瘤(MM)、急性髓性白血病(AML)和其他液体肿瘤。
实施方式46是如实施方式45所述的方法，其中所述癌症是胆管癌。
实施方式47是一种在有所需要的受试者中治疗组织纤维化的方法，其包括向受试者施用如实施方式15所述的药物组合物。
实施方式48是一种确定受试者中爱帕琳肽水平的方法，所述方法包括(a)获得一来自受试者的样品；(b)使所述样品与如实施方式1至11中任一项所述的抗体或其抗原结合片段接触；和(c)测定受试者中爱帕琳肽的水平。
实施方式49是如实施方式48所述的方法，其中所述样品是组织样品。
实施方式50是如实施方式49所述的方法，其中所述组织样品是癌组织样品。
实施方式51是如实施方式49所述的方法，其中所述组织样品是肝组织样品。
实施方式52是如实施方式49所述的方法，其中所述组织样品是肾组织样品。
实施方式53是一种产生如实施方式1至11中任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段的方法，其包括在一定条件下培养包含编码单克隆抗体或抗原结合片段的核酸的细胞，以产生所述单克隆抗体或抗原结合片段，并从细胞或培养物中回收所述抗体或抗原结合片段。
实施方式54是一种制备包含实施方式1至11中任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段的药物组合物的方法，包括将所述单克隆抗体或抗原结合片段与药学上可接受的载体结合，以获得所述药物组合物。
实施例
实施例1：抗爱帕琳肽单克隆抗体的鉴定
用偶联于KLH载体蛋白的Cys-爱帕琳肽-17(在N端添加一个半胱氨酸；C-KFRRQRPRLSHKGPMPF(SEQ ID NO：161))和pyr-爱帕琳肽-13-Cys(爱帕琳肽-13的焦谷氨酰化形式，在其C端添加一个半胱氨酸；pE-RPRLSHKGPMPF-C(SEQ ID NO：162))免疫兔。为了产生兔mAb，从免疫兔的全血中分离出PBMC，并在96孔板中培养抗原特异性B细胞。通过对B细胞培养物上清液进行抗原结合ELISA筛选来鉴定分泌pyr-爱帕琳肽-13(爱帕琳肽-13的焦谷氨酰化形式；pE-RPRLSHKGPMPF(SEQ ID NO：163))反应性抗体的B细胞。利用碳酸盐包被缓冲液(pH9.6)中的1μg/ml的pyr-爱帕琳肽-13对高结合力ELISA板包被过夜。用含1％BSA的TBS溶液封闭板后，添加稀释的B细胞培养上清液(1至10倍稀释)，并将板在室温下孵育90分钟。兔抗体与pyr-爱帕琳肽-13结合后，添加与碱性磷酸酶偶联的山羊抗兔IgG Fc，并通过添加PNPP底物并在405nm下读取ELISA板的吸光度，来检测抗体-抗原的结合。根据抗体与pyr-爱帕琳肽-13-Cys(pE-RPRLSHKGPMPF-C(SEQ ID NO：162))、Cys-(Q)爱帕琳肽-13(CQRPRLSHKGPMPF(SEQ ID NO：164))和Cys-爱帕琳肽-17(CKFRRQRPRLSHKGPMPF(SEQ IDNO：161))的结合差异，进一步证实了兔抗体与pyr-爱帕琳肽-13的结合。为了克隆抗爱帕琳肽-13兔单克隆抗体，用鉴定的B细胞中制备的总RNA制备出兔IgG cDNA，通过PCR扩增，然后克隆到表达载体中。
对重链和轻链的可变区进行测序。表1和表2分别列出了抗爱帕琳肽mAb的重链和轻链可变区的序列。这些mAb的重链和轻链CDR的序列分别列在表3和表4中。使用Kabat方法确定抗爱帕琳肽mAb的重链和轻链CDR。
表1：抗爱帕琳肽单克隆抗体(mAb)的重链可变区序列
Figure BDA0002390784750000451
Figure BDA0002390784750000461
Figure BDA0002390784750000471
VH：重链可变区
表2：抗爱帕琳肽mAb的轻链可变区序列
Figure BDA0002390784750000472
Figure BDA0002390784750000481
Figure BDA0002390784750000491
VL：轻链可变区
表3：抗爱帕琳肽mAb的重链CDR区1-3
Figure BDA0002390784750000492
Figure BDA0002390784750000501
Figure BDA0002390784750000511
HC：重链；CDR：互补决定区
使用IMGT方法确定了抗爱帕琳肽mAb的HC CDR(Lefranc,M.-P.等，核酸研究，1999；27:209-212)。
表4：抗爱帕琳肽mAb的轻链CDR区1-3
Figure BDA0002390784750000512
Figure BDA0002390784750000521
LC：轻链；CDR：互补决定区
使用IMGT方法确定了抗爱帕琳肽mAb的LC CDR(Lefranc,M.-P.等，核酸研究，1999；27:209-212)。
实施例2：重组mAb的生产和纯化
为了获得重组抗爱帕琳肽兔mAb，将含有兔IgG cDNA的表达载体瞬时转染到HEK293细胞中。在这些HEK293细胞的悬浮液中产生重组抗体，并使用蛋白A亲和色谱法纯化。
实施例3：评估抗爱帕琳肽mAb与爱帕琳肽的特异性结合
使用以下生物素化的爱帕琳肽，通过ELISA证实了重组兔单克隆抗体与爱帕琳肽的特异性结合：生物素-爱帕琳肽-13(生物素-QRPRLSHKGPMPF(SEQ ID NO：165))、爱帕琳肽-13-生物素(QRPRLSHKGPMPF-生物素(SEQ ID NO：165))、pyr-爱帕琳肽-13-生物素(pE-RPRLSHKGPMPF-生物素(SEQ ID NO：163))、生物素-爱帕琳肽-17(生物素-KFRRQRPRLSHKGPMPF(SEQ ID NO：166))、爱帕琳肽-17-生物素(KFRRQRPRLSHKGPMPF-生物素(SEQ ID NO：166))，和生物素-爱帕琳肽-(27-14)(生物素-GPGAWQGGRRKFRR(SEQ ID NO：167))。对于结合测定，将碳酸盐包被缓冲液中的中性抗生物素蛋白以1μg/ml过夜包覆在高结合ELISA板上。将板用含1％BSA的TBS封闭后，加入4μg/ml的肽。将板在室温下孵育60分钟后，清洗板，然后添加200ng/ml的纯化的重组兔抗体。兔抗体与板上的肽在室温下结合90分钟后，添加与碱性磷酸酶偶联的山羊抗兔IgG Fc，并通过添加PNPP底物并在405nm下读取ELISA板的吸光度，来检测抗体-抗原的结合。一式两份地分析每个mAb。抗爱帕琳肽mAb与爱帕琳肽的结合显示于图1A-C中(生物素-APL13，生物素-爱帕琳肽-13；APL13-生物素，爱帕琳肽-13-生物素；pyrAPL13-生物素，pyr-爱帕琳肽-13-生物素；生物素-APL17，生物素-爱帕琳肽-17；APL17-生物素，爱帕琳肽-17-生物素；生物素-APL27-14，生物素-爱帕琳肽-(27-14))。图1A中爱帕琳肽与某些mAb的结合受爱帕琳肽C末端的生物素化影响，这表明爱帕琳肽的C末端对于这些mAb与爱帕琳肽的结合很重要。图1B中某些mAb与爱帕琳肽的结合受到爱帕琳肽-13的N端生物素化的影响。图1中的mAbs具有与图1A和1B不同的结合曲线。
实施例4：基于细胞的分析法评估抗爱帕琳肽mAb的中和作用
使用cAMP Hunter TM CHO-K1 AGTRL1 Gi细胞系(#95-0147C2)(DiscoverX；费利蒙市，CA；USA)进行
Figure BDA0002390784750000531
cAMP检测。将细胞以10,000个细胞/孔的密度接种到384孔白色组织培养物处理的平板(Corning#3570)(康宁；康宁，NY；USA)中，并在37℃孵育过夜。然后将细胞用无血清培养基洗涤3次，然后再与已经在37℃预孵育15分钟的爱帕琳肽/mAb混合物一起在37℃孵育5分钟。在此步骤中，与细胞一起孵育的爱帕琳肽终浓度为1.2nM。将福司可林(FSK)添加到每个孔中，以使FSK终浓度为15μM，并且爱帕琳肽终浓度为1nM。孵育30分钟后，根据制造商的说明，使用用于生物制剂(Biologics)(DiscoverX#90-0075LM10)的
Figure BDA0002390784750000542
cAMP分析试剂盒测量cAMP水平。化学发光信号在EnVision读板仪(384USLum)(铂金埃尔默；沃尔瑟姆，MA；USA)上读取。在给定的稀释度下，一式三份测定每种mAb。为了计算在给定浓度下mAb的抑制百分比，将0％抑制定义为来自接受爱帕琳肽处理的FSK刺激细胞的信号，而100％抑制定义为来自未接受爱帕琳肽处理的FSK刺激细胞的信号。选定的抗爱帕琳肽mAb的中和作用示于图2A-K。
实施例5：抗爱帕琳肽mAb的亲和力分析
为了测定mAb克隆C4、C5、C8、C9、C17、C24、C25、C26和C27的KD，将生物素-爱帕琳肽-13(生物素-QRPRLSHKGPMPF(SEQ ID NO：165))固定在CM5-SA(链霉亲和素)芯片(GE生命科学；马尔堡，MA)表面。在芯片表面捕获了四种不同浓度(12.5nM、25nM、50nM和100nM)的抗爱帕琳肽mAb。测量抗体-抗原结合的开启和关闭速率，进行曲线拟合并计算。数据示于表5。
为了测定mAb克隆C1、C6、C7、C10、C11、C12、C14、C16、C20和C22的KD，将爱帕琳肽-13-生物素(QRPRLSHKGPMPF-生物素(SEQ ID NO：165))和pyr-爱帕琳肽-13-生物素(pE-RPRLSHKGPMPF-生物素(SEQ ID NO：163))用于上述Biacore测定中。数据示于表6。
表5：来自Biacore分析的抗爱帕琳肽mAb的KD值
Figure BDA0002390784750000541
Figure BDA0002390784750000551
表6：通过Biacore分析测定的使用爱帕琳肽13和pyro-爱帕琳肽13测得的抗爱帕琳肽mAb的KD值
Figure BDA0002390784750000552
实施例6：抗爱帕琳肽mAb的表位作图
使用基于ELISA的肽竞争分析法绘制抗爱帕琳肽mAb C8、C24和C25的抗体结合位点。简而言之，将mAb捕获在ELISA板上，并测量与mAb结合的生物素-爱帕琳肽-13(SEQ IDNO：165)。评价每种竞争肽(表7)抑制生物素-爱帕琳肽-13与mAb结合的能力。抑制信号反映了竞争肽与溶液中mAb结合的能力。
对于肽竞争测定，将碳酸盐包被缓冲液中的山羊抗兔IgG以1μg/ml过夜包覆在高结合ELISA板上。将兔mAb(C8、C24或C25)和竞争肽(表7)的混合物在室温下预孵育30分钟，然后加入生物素-爱帕琳肽-13(SEQ ID NO：165)，混合，将最终的溶液添加到ELISA板上。在室温下孵育60分钟后，洗涤板，然后加入与碱性磷酸酶偶联的链霉亲和素，通过添加PNPP底物并在405nm下读取ELISA板的吸光度来检测结合。对于给定的mAb，一式两份地分析每种竞争肽或对照样品。图3A-3C显示了竞争肽对生物素-爱帕琳肽-13(SEQ ID NO：165)与抗爱帕琳肽mAb的结合的抑制。“无竞争肽：”未添加竞争肽；“无抗体，无竞争肽：”未添加竞争肽或抗爱帕琳肽mAb。如图3A所示，当在爱帕琳肽13的C末端缺失一个氨基酸时，该肽不与C8结合。在缺失到第8位残基之前，爱帕琳肽13的N末端氨基酸的连续缺失对其与C8的结合没有影响。该作图结果表明C8与包含氨基酸KGPMPF(SEQ ID NO：188)的表位结合。对于C24和C25观察到相同的结果。因此，C8、C24和C25均结合至包含氨基酸KGPMPF(SEQ ID NO：188)的表位。
为了进一步了解表位8-13(KGPMPF(SEQ ID NO：188))中的氨基酸在mAb C8、C14或C25的表位结合中的重要性，生成了丙氨酸扫描肽(表8)并使用上述基于ELISA的肽竞争试验评估了它们抑制生物素-爱帕琳肽-13(SEQ ID NO：165)与这些mAb的结合的能力。图4A-4C显示了丙氨酸扫描肽对生物素-爱帕琳肽-13(SEQ ID NO：165)与抗爱帕琳肽mAb C8、C24或C25的结合的抑制。对于给定的mAb，一式两份地分析每个肽或对照样品。如图4A所示，肽8A仍然阻断生物素-爱帕琳肽-13(SEQ ID NO：165)与C8的结合，但是与爱帕琳肽13(肽1-13)、9A或10A相比，程度较小。肽11A、12A和13A在很大程度上丧失了阻断生物素-爱帕琳肽-13(SEQ ID NO：165)与C8结合的能力。这些数据表明，残基11、12和13的侧链是爱帕琳肽与C8结合所必需的，而残基8的侧链对与C8的结合有一些贡献；残基9和10的侧链对于C8的结合并不重要。图4B和4C显示了对于C24和C25观察到相同的结果。
表7：用于抗爱帕琳肽mAb C8、C24和C25竞争分析的爱帕琳肽
Figure BDA0002390784750000561
Figure BDA0002390784750000571
表8：用于抗爱帕琳肽mAb C8、C24和C25的竞争检测的衍生自表位8-13的丙氨酸扫描肽
肽 序列 SEQ ID NO：
8A AGPMPF 192
9A KAPMPF 193
10A KGAMPF 194
11A KGPAPF 195
12A KGPMAF 196
13A KGPMPA 197
使用爱帕琳肽-13-生物素(QRPRLSHKGPMPF-生物素(SEQ ID NO：165))和表9所示的竞争肽，通过上述基于ELISA的肽竞争测定法绘制了抗爱帕琳肽mAb C1、C6和C7的抗体结合位点。图5A-5C显示了竞争肽对生物素-爱帕琳肽-13(SEQ ID NO：165)与抗爱帕琳肽mAbC1、C6和C7的结合的抑制。如图5A所示，当在爱帕琳肽13的C末端缺失一个氨基酸时，该肽不与C1结合。在缺失到第5位残基之前，爱帕琳肽13的C末端氨基酸的连续缺失对其与C1的结合没有影响。有趣的是，C1不与爱帕琳肽17结合(表9中的1-17肽)，这表明爱帕琳肽-13的自由N末端对于C1结合很重要。该作图结果表明C1与包含氨基酸QRPRL(SEQ ID NO：204)(表9中的肽1-5)的表位结合。对于C6和C7观察到相同的结果。
为了进一步了解表位1-5(QRPRL(SEQ ID NO：204))中的氨基酸在mAb C6或C7的表位结合中的重要性，生成了丙氨酸扫描肽(表10)并使用上述基于ELISA的肽竞争试验评估了它们抑制爱帕琳肽-13-生物素(SEQ ID NO：165)与这些mAb的结合的能力。图6A-6B显示了丙氨酸扫描肽对爱帕琳肽-13-生物素(SEQ ID NO：165)与抗爱帕琳肽mAb C6或C7的结合的抑制。对于给定的mAb，一式两份地分析每个肽或对照样品。如图6A和6B所示，肽1A、2A、3A、4A和5A在很大程度上丧失了阻断爱帕琳肽-13-生物素(SEQ ID NO：165)与C6或C7结合的能力。这些数据表明，残基1、2、3、4和5的侧链对于爱帕琳肽结合C6或C7是必需的。
表9：用于抗爱帕琳肽mAb C1、C6和C7竞争分析的爱帕琳肽
肽 序列 SEQ ID NO：
1-17 KFRRQRPRLSHKGPMPF 166
1-13 QRPRLSHKGPMPF 165
2-13 RPRLSHKGPMPF 182
1-12 QRPRLSHKGPMP 181
1-11 QRPRLSHKGPM 198
1-10 QRPRLSHKGP 199
1-9 QRPRLSHKG 200
1-8 QRPRLSHK 201
1-7 QRPRLSH 202
1-6 QRPRLS 203
1-5 QRPRL 204
1-4 QRPR 205
表10：用于抗爱帕琳肽mAb C6和C7的竞争检测的衍生自表位1-5的丙氨酸扫描肽
肽 序列 SEQ ID NO：
1A ARPRL 206
2A QAPRL 207
3A QRARL 208
4A QRPAL 209
5A QRPRA 210
实施例7：抗爱帕琳肽单克隆抗体的人源化
兔抗爱帕琳肽mAb C8被人源化，以降低用于人类患者时的免疫原性。将重链和轻链可变区(VH和VL)的序列与蛋白质数据库(PDB)中的人抗体序列进行比较，并通过SWISS模型建立同源性模型。将兔mAb的重链和轻链中的CDR移植到最有可能维持抗原结合所需的适当结构人框架区中。在必要时，设计了从人残基到兔残基的反向突变。表11和表12分别显示了人源化的VH和VL区的序列。将人源化的VH和VL区分别与人IgG1重链和κ轻链恒定区融合，以生成人源化mAb。将对应于mAb序列的构建物瞬时转染到HEK 293细胞中，并分析上清液中每种人源化mAb对爱帕琳肽的亲和力。使用生物素-爱帕琳肽-13(生物素-QRPRLSHKGPMPF(SEQ ID NO：165))在Biacore上测定人源化mAb的KD值。数据示于表13。
通过在A31上进行序列修饰产生了另外两个人源化mAb(B24和B25)。将这三个mAb(A31、B24和B25)克隆到人IgG4骨架上，并在ELISA分析中进行测试，其中将浓度递增的抗体固定在板上，并且加入生物素-爱帕琳肽-13(生物素-QRPRLSHKGPMPF(SEQ ID NO：165))用于结合，然后与偶联碱性磷酸酶的链霉亲和素结合。然后通过添加PNPP底物并读取ELISA板在405nm处的吸光度来检测结合。ELISA结合曲线的EC50值示于表14。
使用如上所述的基于细胞的测定法绘制了人源化抗爱帕琳肽mAb A31(在人IgG1骨架上)的IC50曲线。评估了爱帕琳肽下调cAMP HunterTM CHO-K1 AGTRL1 Gi细胞(DiscoverX#95-0147C2)中福司可林(FSK)诱导的cAMP产生的能力，以评估其活性，并评估了抗爱帕琳肽mAb逆转爱帕琳肽抑制作用的能力，以评估其活性。图7A显示了在测定中使用爱帕琳肽13(APL13)时的IC50图；图7B显示了在测定中使用pyro-爱帕琳肽13(pyroAPL13)时的IC50图。CPS，每秒计数。
在小鼠异种移植模型中测试了抗爱帕琳肽mAb A31(在人IgG1骨架上)对肿瘤生长的影响。将HUCCT1细胞(1x107)植入NOD/SCID小鼠，并生长直至肿瘤达到150-200mm3。随机分组后(每组n＝3)，向小鼠施用载体、0.5mg/kg贝伐单抗、20mg/kg mAb A31，或0.5mg/kg贝伐单抗和20mg/kg mAb A31的组合。每周通过腹膜内注射给药3次，并在同一天测量肿瘤体积。图8显示了研究期间不同组的肿瘤体积。数据表明mAb A31与贝伐单抗的组合对肿瘤生长具有很强的抑制作用。
表11：人源化抗爱帕琳肽mAb重链可变区的序列
Figure BDA0002390784750000591
Figure BDA0002390784750000601
VH：重链可变区
表12：人源化抗爱帕琳肽mAb轻链可变区的序列
Figure BDA0002390784750000602
Figure BDA0002390784750000611
VL：轻链可变区
表13：来自Biacore分析的人源化抗爱帕琳肽mAb的KD值
mAb克隆 KD
A11 0.126pM
A21 1.65fM
A31 0.148pM
A41 0.067pM
A33 0.0143pM
A43 3.26pM
表14：人源化mAb的ELISA结合EC50值
mAb克隆 EC50(nM)
A31 0.21
B24 0.79
B25 0.47
本领域技术人员将意识到，可以在不脱离本发明的广泛发明构思的情况下对上述实施例进行改变。因此，应当理解，本发明不限于所公开的特定实施例，而是旨在涵盖在本说明书所限定的本发明的精神和范围内的修改。
序列表
<110> 凡恩世制药公司
<120> 抗爱帕琳肽抗体及其用途
<130> 689204.1WO
<150> 62/549,523
<151> 2017-08-24
<150> 62/579,287
<151> 2017-10-31
<150> 62/656,586
<151> 2018-04-12
<150> 62/658,111
<151> 2018-04-16
<160> 221
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Tyr Ser Asn Arg
20 25 30
Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Ser Ile Gly Ser Ser Pro Trp Tyr Ala Ser Trp Ala Gln Gly Arg Phe
50 55 60
Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asn Leu Lys Ile Thr Ser
65 70 75 80
Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Lys Gly Gly Tyr
85 90 95
Arg Pro Gly Ala Ser Val Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 2
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Gln Val Leu Thr Gln Thr Glu Ser Pro Val Ser Ala Pro Val Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Ala Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Tyr Asp Asn Asn
20 25 30
Asp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Gln Thr Pro Lys Arg Leu
35 40 45
Ile Tyr Leu Ala Ser Ser Leu Asp Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu
65 70 75 80
Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gly Gly Tyr Ser Gly Asp
85 90 95
Ile Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Glu
100 105
<210> 3
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Tyr Thr Asn Arg
20 25 30
Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Ile Gly
35 40 45
Ser Ile Gly Ser Ser Pro Trp Tyr Ala Ser Trp Ala Gln Gly Arg Phe
50 55 60
Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asn Leu Lys Ile Thr Ser Ser
65 70 75 80
Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Lys Gly Gly Tyr Arg
85 90 95
Pro Gly Gly Ser Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 4
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
Gln Val Leu Thr Gln Ser Ala Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly Asp
1 5 10 15
Ser Val Thr Ile Ala Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Tyr Asp Asn Asn
20 25 30
Asp Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Thr Pro Lys Arg Leu
35 40 45
Ile Tyr Leu Ala Ser Ser Leu Asp Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu
65 70 75 80
Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gly Gly Tyr Ser Gly Asp
85 90 95
Ile Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105
<210> 5
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Tyr Thr Asn Arg
20 25 30
Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Ser Ile Gly Ser Ser Pro Trp Phe Ala Ser Trp Ala Leu Gly Arg Phe
50 55 60
Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asn Leu Lys Ile Thr Ser Pro
65 70 75 80
Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Lys Gly Gly Tyr Arg
85 90 95
Pro Gly Ala Ser Val Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 6
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
Gln Val Leu Thr Gln Thr Glu Ser Pro Val Ser Ala Pro Val Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Ala Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Tyr Asp Asn Asn
20 25 30
Asp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Gln Thr Pro Lys Arg Leu
35 40 45
Ile Phe Leu Ala Ser Ser Leu Asp Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu
65 70 75 80
Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gly Gly Tyr Asn Gly Asp
85 90 95
Ile Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105
<210> 7
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Ala Lys Pro Asp Glu Thr
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Asn Ser His Ala
20 25 30
Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Val Ile Ala Pro Asp Thr Arg Thr Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Arg Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Ser Val Glu Leu Lys Met
65 70 75 80
Thr Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Ala Tyr
85 90 95
Pro Ile Glu Pro Gly Ala Asn Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 8
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
Asp Pro Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Pro Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Gly Cys Gln Ala Ser Glu Ser Val Asp Tyr Asn
20 25 30
Asn Gln Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Arg
35 40 45
Leu Met Tyr Tyr Val Ser Thr Leu Asp Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu
65 70 75 80
Glu Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Gly Tyr Pro Tyr
85 90 95
Asn Ile Tyr Pro Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
<210> 9
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Lys Pro Asp Glu Thr
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Asn Tyr Ala
20 25 30
Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Val Ile Ala Pro Asn Arg Arg Thr Tyr Tyr Pro Thr Trp Ala Arg Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met
65 70 75 80
Thr Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Thr Tyr
85 90 95
Pro Ile Glu Pro Gly Ala Asn Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 10
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
Asp Pro Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Pro Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Gly Cys Gln Ser Ser Glu Ser Val Asp Tyr Asn
20 25 30
Asn Gln Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Arg
35 40 45
Leu Met Tyr Tyr Val Ser Thr Leu Asp Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu
65 70 75 80
Glu Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Gly Tyr Ile Ser
85 90 95
Asn Ile Tyr Pro Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
<210> 11
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Gly Ser
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala
20 25 30
Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Val Ile Ala Pro Asn Gly Ala Thr Tyr Tyr Pro Thr Trp Ala Arg Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met Thr
65 70 75 80
Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Thr Tyr Pro
85 90 95
Ile Asp Ala Gly Ala Asn Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 12
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
Asp Pro Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Ser Val Ser Ala Ala Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Gly Cys Gln Ser Ser Glu Ser Val Asp Asn Asn
20 25 30
Asn Gln Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Gln Pro Pro Lys Arg
35 40 45
Leu Met Tyr Tyr Val Ser Thr Leu Asp Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr His Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val
65 70 75 80
Gln Cys Tyr Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Gly Tyr Ile Ser
85 90 95
Asn Leu Tyr Pro Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
<210> 13
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Gly Ser
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Asn Ser Tyr Ala
20 25 30
Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Val Ile Ala Pro Asn His Tyr Thr Tyr Tyr Pro Thr Trp Ala Arg Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met Thr
65 70 75 80
Arg Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Thr Tyr Pro
85 90 95
Ile Glu Ser Gly Ser Asn Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Ile Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 14
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
Asp Pro Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Ser Val Ser Ala Ala Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Gly Cys Gln Ser Ser Glu Ser Val Gly Met Asn
20 25 30
Asn Gln Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Arg
35 40 45
Leu Met Tyr Tyr Val Ser Thr Leu Asp Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Thr Ile Ser Asp Leu
65 70 75 80
Glu Cys Asp Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Gly Tyr Ile Ser
85 90 95
Asn Leu Tyr Pro Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
<210> 15
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 15
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Gly Ser
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Asn Asn Tyr Ala
20 25 30
Ile Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Val Ile Ala Pro Asn His Tyr Thr Cys Tyr Pro Thr Trp Ala Arg Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met Thr
65 70 75 80
Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Ala Tyr Pro
85 90 95
Ile Glu Thr Gly Ser Asn Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Ile Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 16
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 16
Asp Pro Met Leu Thr Gln Thr Pro Ser Ser Val Ser Ala Ala Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Ser Cys Gln Ser Ser Glu Ser Val Asp Met Asn
20 25 30
Asn Gln Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Arg
35 40 45
Leu Met Tyr Tyr Val Ser Thr Leu Asp Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Ser Gly Ser Gly Ile His Phe Ser Leu Thr Ile Ser Asp Leu
65 70 75 80
Glu Cys Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Gly Tyr Ile Ser
85 90 95
Asn Leu Tyr Pro Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
<210> 17
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 17
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Gly Ser
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Asn Asn Tyr Ala
20 25 30
Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Val Ile Ala Pro Asn His Tyr Thr Tyr Tyr Pro Thr Trp Ala Arg Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met Thr
65 70 75 80
Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Thr Tyr Pro
85 90 95
Ile Glu Thr Gly Ser Asn Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Ile Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 18
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 18
Asp Pro Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Ser Val Ser Ala Ala Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Ser Cys Gln Ser Ser Glu Ser Val Asp Met Asn
20 25 30
Asn Gln Leu Ser Trp Tyr His Gln Lys Ser Gly Gln Pro Pro Lys Arg
35 40 45
Leu Met Tyr Tyr Val Ser Thr Leu Asp Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val
65 70 75 80
Gln Cys Asp Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Gly Tyr Ile Ser
85 90 95
Asn Leu Tyr Pro Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
<210> 19
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 19
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Gly Ser
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Asn Ser Tyr Ala
20 25 30
Ile Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Val Ile Ala Pro Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Pro Thr Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Val Thr
65 70 75 80
Gly Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Ala Tyr Pro
85 90 95
Ile Asp Pro Gly Ser Asn Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 20
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 20
Asp Pro Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Ser Val Ser Ala Ala Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Ala Thr Ile Gly Cys Gln Ser Ser Glu Ser Val Asp Tyr Gly
20 25 30
Asn Gln Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Arg
35 40 45
Leu Ala Tyr Tyr Val Ser Ile Leu Asp Ala Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu
65 70 75 80
Glu Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Gly Tyr Ile Ser
85 90 95
Asn Leu Tyr Pro Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Gln
100 105 110
<210> 21
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 21
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Gly Ser
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Ser Tyr Ala
20 25 30
Ile Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Val Ile Ala Pro Ser Ser Thr Thr Tyr Tyr Pro Thr Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Val
65 70 75 80
Ile Gly Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Ala Tyr
85 90 95
Pro Ile Asp Pro Gly Ser Asn Val Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 22
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 22
Asp Pro Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Ser Val Ser Ala Ala Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Gly Cys Gln Ser Ser Glu Ser Val Asp Tyr Gly
20 25 30
Asn Gln Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Arg
35 40 45
Leu Thr Tyr Tyr Val Ser Ile Leu Asp Ala Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu
65 70 75 80
Glu Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Gly Tyr Ile Ser
85 90 95
Asn Leu Tyr Pro Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Gln
100 105 110
<210> 23
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 23
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Ala Lys Pro Gly Glu Thr
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Asn Ser His Ala
20 25 30
Val Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Val Ile Gly Pro Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met
65 70 75 80
Thr Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Ala Thr Phe Phe Cys Ala Thr Tyr
85 90 95
Pro Ile Tyr Ser Gly Asp Asn Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
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<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 24
Asp Pro Val Leu Thr Gln Thr Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ser Ser Glu Ser Val Asp Asn Asn
20 25 30
Asn Gln Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Val Gly Gln Pro Pro Lys Arg
35 40 45
Leu Met Tyr Tyr Ala Ser Thr Leu Asp Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Gly Gly Ser Gly Thr His Phe Thr Leu Thr Ile Thr Asp Leu
65 70 75 80
Glu Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Gly Thr Ala Thr
85 90 95
Asn Ile Tyr Pro Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
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<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 25
Gln Ser Pro Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Gly Ser
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Lys Ile Ser Gly Val Asp Leu Ser Asn Tyr Ala
20 25 30
Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Val Ile Ala Pro Asn Asp Ala Thr Tyr Tyr Pro Thr Trp Ala Arg Gly
50 55 60
Arg Leu Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met Thr
65 70 75 80
Arg Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Ala Tyr Pro
85 90 95
Ile Asp Val Gly Ala Asn Val Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
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<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 26
Asp Pro Met Leu Thr Gln Thr Ala Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ser Ser Glu Ser Val Asp Tyr Asn
20 25 30
Asn Gln Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Arg
35 40 45
Leu Met Tyr Tyr Val Ser Thr Leu Asp Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Thr Ile Ser Asp Leu
65 70 75 80
Glu Cys Asp Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Gly Tyr Ile Ser
85 90 95
Asn Leu Tyr Pro Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
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<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 27
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Ser Pro Gly Gly Ser
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Ser His Ala
20 25 30
Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Val Ile Ala Pro Asn Asp Ala Thr Tyr Tyr Pro Thr Trp Ala Arg Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Gly Leu Lys Met Thr
65 70 75 80
Arg Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Ala Tyr Pro
85 90 95
Ile Asp Ala Gly Ala Asn Val Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 28
Asp Pro Met Leu Thr Gln Thr Ala Ser Pro Val Ser Ala His Val Gly
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Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ser Ser Glu Ser Val Asp Tyr Asn
20 25 30
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35 40 45
Leu Met Tyr Tyr Val Ser Thr Leu Asp Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Thr Ile Ser Asp Leu
65 70 75 80
Glu Cys Asp Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Gly Tyr Ile Ser
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Asn Leu Tyr Pro Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 29
Gln Glu Gln Leu Glu Gln Ser Gly Gly Gly Ala Glu Gly Gly Leu Val
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Lys Pro Gly Gly Ser Leu Glu Leu Cys Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr
20 25 30
Leu Ser Ser Ser Tyr Trp Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys
35 40 45
Gly Leu Glu Trp Ile Gly Cys Ile His Tyr Gly Ser Ser Gly Thr Ala
50 55 60
Tyr Tyr Ala Ser Trp Val Asn Gly Arg Phe Thr Leu Ser Arg Asp Ile
65 70 75 80
Asp Gln Ser Thr Gly Cys Leu Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ala Ala Asp
85 90 95
Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg Phe Leu Ser Asp Met Tyr Tyr Tyr
100 105 110
Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<210> 30
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 30
Gln Val Leu Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Ala Ala Val Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Tyr Asn Asn Asn
20 25 30
Gln Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu
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Ile Tyr Tyr Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln
65 70 75 80
Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Gln Phe Asn Cys Arg
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Ser Ala Asp Cys His Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
<210> 31
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 31
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Gly Ala Trp
20 25 30
Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Val Val Ser Ser Asp Asp Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Leu Thr
65 70 75 80
Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Asn Leu
85 90 95
Gly Thr Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
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<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 32
Gln Val Leu Thr Gln Thr Glu Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Trp Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Val Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Thr Ser Lys Leu Pro Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Asn Asp Leu Glu Cys
65 70 75 80
Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gly Gly Tyr Ser Gly His Ile
85 90 95
Tyr Ser Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105
<210> 33
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 33
Gln Glu Gln Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Glu Gly
1 5 10 15
Ser Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Trp Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Ala Cys Ile Tyr Gln Ser Gly Asp Gly Arg Thr Trp Tyr Ala Ser
50 55 60
Trp Ala Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Pro Thr Thr Val
65 70 75 80
Thr Leu Gln Met Ala Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe
85 90 95
Cys Ala Arg Cys Pro His Asn Thr Tyr Ser His Phe Asp Leu Trp Gly
100 105 110
Pro Ser Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<210> 34
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 34
Ala Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Ala Ala Val
1 5 10 15
Gly Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Asn Ser
20 25 30
Trp Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Pro Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu
65 70 75 80
Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Ser Cys Leu Gly Tyr Tyr Tyr Ser Ser
85 90 95
Tyr Asn Ser Val Gly Phe Trp Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val
100 105 110
Val Lys
<210> 35
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 35
Gln Glu Gln Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Glu Gly
1 5 10 15
Ser Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Leu Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Ile
35 40 45
Gly Cys Ile Asp Ile Gly Ser Asp Asp Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Thr Ser Ser Thr Thr Val Thr Leu
65 70 75 80
Gln Val Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Ser Gly Gly Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 36
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 36
Gln Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Ser Thr Ser Ala Ala Val Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Asn Asn
20 25 30
Asp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Arg Leu
35 40 45
Ile Tyr Glu Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu
65 70 75 80
Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gly Gly Trp Ser Gly Asn
85 90 95
Phe Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105
<210> 37
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 37
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Gly Ser
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Ile Asn Ala Trp
20 25 30
Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Thr Thr Thr Asp Asp Asp Thr Ile Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Val Thr
65 70 75 80
Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ser Lys Gly Arg
85 90 95
Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Leu
100 105
<210> 38
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 38
Gln Val Leu Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Ala Ala Val Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asp Gly Asn
20 25 30
Trp Leu Cys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Arg Leu
35 40 45
Ile Tyr Lys Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu
65 70 75 80
Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Gly Phe Thr Ser Asn
85 90 95
Ile Tyr Pro Phe Ala Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105
<210> 39
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 39
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Lys Pro Asp Glu Thr
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Ser Asn Ala
20 25 30
Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Ser Met Tyr Thr Asp Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Ala Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met
65 70 75 80
Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly
85 90 95
Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105
<210> 40
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 40
Gln Val Leu Thr Gln Thr Ala Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Ser Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Tyr Asn Asn Asn
20 25 30
Trp Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Arg Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Thr Ser Glu Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln
65 70 75 80
Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Thr Tyr Ser Ser Asn
85 90 95
Ile His Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105
<210> 41
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 41
Ser Asn Arg Met Ser
1 5
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<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 42
Ser Ile Gly Ser Ser Pro Trp Tyr Ala Ser Trp Ala Gln Gly
1 5 10
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 43
Gly Gly Tyr Arg Pro Gly Ala Ser Val
1 5
<210> 44
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 44
Thr Asn Arg Val Ser
1 5
<210> 45
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 45
Ser Ile Gly Ser Ser Pro Trp Tyr Ala Ser Trp Ala Gln Gly
1 5 10
<210> 46
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 46
Gly Gly Tyr Arg Pro Gly Gly Ser Ile
1 5
<210> 47
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 47
Thr Asn Arg Met Ser
1 5
<210> 48
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 48
Ser Ile Gly Ser Ser Pro Trp Phe Ala Ser Trp Ala Leu Gly
1 5 10
<210> 49
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 49
Gly Gly Tyr Arg Pro Gly Ala Ser Val
1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 50
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1 5
<210> 51
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 51
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1 5 10 15
<210> 52
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 52
Tyr Pro Ile Glu Pro Gly Ala Asn Ile
1 5
<210> 53
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 53
Asn Tyr Ala Met Asp
1 5
<210> 54
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 54
Val Ile Ala Pro Asn Arg Arg Thr Tyr Tyr Pro Thr Trp Ala Arg Gly
1 5 10 15
<210> 55
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 55
Tyr Pro Ile Glu Pro Gly Ala Asn Ile
1 5
<210> 56
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 56
Ser Tyr Ala Met Asp
1 5
<210> 57
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 57
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1 5 10 15
<210> 58
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 58
Tyr Pro Ile Asp Ala Gly Ala Asn Ile
1 5
<210> 59
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 59
Ser Tyr Ala Met Asp
1 5
<210> 60
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 60
Val Ile Ala Pro Asn His Tyr Thr Tyr Tyr Pro Thr Trp Ala Arg Gly
1 5 10 15
<210> 61
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 61
Tyr Pro Ile Glu Ser Gly Ser Asn Ile
1 5
<210> 62
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 62
Asn Tyr Ala Ile Asp
1 5
<210> 63
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 63
Val Ile Ala Pro Asn His Tyr Thr Cys Tyr Pro Thr Trp Ala Arg Gly
1 5 10 15
<210> 64
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 64
Tyr Pro Ile Glu Thr Gly Ser Asn Ile
1 5
<210> 65
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 65
Asn Tyr Ala Met Asp
1 5
<210> 66
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 66
Val Ile Ala Pro Asn His Tyr Thr Tyr Tyr Pro Thr Trp Ala Arg Gly
1 5 10 15
<210> 67
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 67
Tyr Pro Ile Glu Thr Gly Ser Asn Ile
1 5
<210> 68
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 68
Ser Tyr Ala Ile Asp
1 5
<210> 69
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 69
Val Ile Ala Pro Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Pro Thr Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 70
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 70
Tyr Pro Ile Asp Pro Gly Ser Asn Ile
1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 71
Ser Tyr Ala Ile Asp
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 72
Val Ile Ala Pro Ser Ser Thr Thr Tyr Tyr Pro Thr Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 73
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 73
Tyr Pro Ile Asp Pro Gly Ser Asn Val
1 5
<210> 74
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 74
Ser His Ala Val Asp
1 5
<210> 75
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 75
Val Ile Gly Pro Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 76
<211> 9
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 76
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<400> 77
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Gly
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1
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Gly Asp Ile
1
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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Leu Ala Ser Ser Leu Asp Ser
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 104
Gln Ser Ser Gln Ser Val Tyr Asp Asn Asn Asp Leu Gly
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<211> 10
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Gln Ser Ser Gln Ser Val Tyr Asp Asn Asn Asp Leu Ala
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Leu Ala Ser Ser Leu Asp Ser
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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Gln Ala Ser Glu Ser Val Asp Tyr Asn Asn Gln Leu Ser
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 112
Gln Gly Gly Tyr Pro Tyr Asn Ile Tyr Pro
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 113
Gln Ser Ser Glu Ser Val Asp Tyr Asn Asn Gln Leu Ser
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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Gln Gly Gly Tyr Ile Ser Asn Ile Tyr Pro
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<211> 13
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 116
Gln Ser Ser Glu Ser Val Asp Asn Asn Asn Gln Leu Ser
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 117
Tyr Val Ser Thr Leu Asp Ser
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 119
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 121
Gln Gly Gly Tyr Ile Ser Asn Leu Tyr Pro
1 5 10
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 122
Gln Ser Ser Glu Ser Val Asp Met Asn Asn Gln Leu Ser
1 5 10
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 123
Tyr Val Ser Thr Leu Asp Ser
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 124
Gln Gly Gly Tyr Ile Ser Asn Leu Tyr Pro
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 125
Gln Ser Ser Glu Ser Val Asp Met Asn Asn Gln Leu Ser
1 5 10
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<211> 7
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 126
Tyr Val Ser Thr Leu Asp Ser
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 127
Gln Gly Gly Tyr Ile Ser Asn Leu Tyr Pro
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 128
Gln Ser Ser Glu Ser Val Asp Tyr Gly Asn Gln Leu Ser
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 129
Tyr Val Ser Ile Leu Asp Ala
1 5
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 130
Gln Gly Gly Tyr Ile Ser Asn Leu Tyr Pro
1 5 10
<210> 131
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 131
Gln Ser Ser Glu Ser Val Asp Tyr Gly Asn Gln Leu Ser
1 5 10
<210> 132
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 132
Tyr Val Ser Ile Leu Asp Ala
1 5
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 133
Gln Gly Gly Tyr Ile Ser Asn Leu Tyr Pro
1 5 10
<210> 134
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 134
Gln Ser Ser Glu Ser Val Asp Asn Asn Asn Gln Leu Ser
1 5 10
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 135
Tyr Ala Ser Thr Leu Asp Ser
1 5
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 136
Gln Gly Gly Thr Ala Thr Asn Ile Tyr Pro
1 5 10
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 137
Gln Ser Ser Glu Ser Val Asp Tyr Asn Asn Gln Leu Ser
1 5 10
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 138
Tyr Val Ser Thr Leu Asp Ser
1 5
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 139
Gln Gly Gly Tyr Ile Ser Asn Leu Tyr Pro
1 5 10
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 140
Gln Ser Ser Glu Ser Val Asp Tyr Asn Asn Gln Leu Ser
1 5 10
<210> 141
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 141
Tyr Val Ser Thr Leu Asp Ser
1 5
<210> 142
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 142
Gln Gly Gly Tyr Ile Ser Asn Leu Tyr Pro
1 5 10
<210> 143
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 143
Gln Ala Ser Gln Ser Ile Tyr Asn Asn Asn Gln Leu Ser
1 5 10
<210> 144
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 144
Tyr Ala Ser Thr Leu Ala Ser
1 5
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 145
Gln Gly Gln Phe Asn Cys Arg Ser Ala Asp Cys His Ala
1 5 10
<210> 146
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 146
Gln Ser Ser Gln Ser Val Trp Ser Asn Tyr Leu Ser
1 5 10
<210> 147
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 147
Gly Thr Ser Lys Leu Pro Ser
1 5
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 148
Ala Gly Gly Tyr Ser Gly His Ile Tyr Ser
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 149
Gln Ala Ser Gln Ser Ile Asn Ser Trp Leu Ser
1 5 10
<210> 150
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 150
Gly Ala Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 151
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 151
Leu Gly Tyr Tyr Tyr Ser Ser Tyr Asn Ser Val Gly Phe Trp Ala
1 5 10 15
<210> 152
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 152
Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Asn Asn Asp Leu Ala
1 5 10
<210> 153
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 153
Glu Ala Ser Lys Leu Ala Ser
1 5
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 154
Ala Gly Gly Trp Ser Gly Asn Phe Tyr Val
1 5 10
<210> 155
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 155
Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asp Gly Asn Trp Leu Cys
1 5 10
<210> 156
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 156
Lys Ala Ser Thr Leu Glu Ser
1 5
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 157
Gln Gly Gly Phe Thr Ser Asn Ile Tyr Pro
1 5 10
<210> 158
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 158
Gln Ser Ser Gln Ser Val Tyr Asn Asn Asn Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 159
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 159
Gly Thr Ser Glu Leu Ala Ser
1 5
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 160
Leu Gly Thr Tyr Ser Ser Asn Ile His Val
1 5 10
<210> 161
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 161
Cys Lys Phe Arg Arg Gln Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Met
1 5 10 15
Pro Phe
<210> 162
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 162
Glu Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Met Pro Phe Cys
1 5 10
<210> 163
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 163
Glu Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Met Pro Phe
1 5 10
<210> 164
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 164
Cys Gln Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Met Pro Phe
1 5 10
<210> 165
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 165
Gln Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Met Pro Phe
1 5 10
<210> 166
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 166
Lys Phe Arg Arg Gln Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Met Pro
1 5 10 15
Phe
<210> 167
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 167
Gly Pro Gly Ala Trp Gln Gly Gly Arg Arg Lys Phe Arg Arg
1 5 10
<210> 168
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 168
Xaa Arg Asn Xaa Ser
1 5
<210> 169
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 169
Ser Ile Gly Ser Ser Pro Trp Xaa Ala Ser Trp Ala Xaa Gly
1 5 10
<210> 170
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 170
Gly Gly Tyr Arg Pro Gly Xaa Ser Xaa
1 5
<210> 171
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 171
Gln Ser Ser Gln Ser Val Tyr Asp Asn Asn Asp Leu Xaa
1 5 10
<210> 172
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 172
Ala Gly Gly Tyr Xaa Gly Asp Ile Tyr Thr
1 5 10
<210> 173
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 173
Xaa Tyr Ala Xaa Asp
1 5
<210> 174
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 174
Val Ile Ala Pro Asn Xaa Xaa Thr Xaa Tyr Pro Thr Trp Ala Arg Gly
1 5 10 15
<210> 175
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 175
Tyr Pro Ile Xaa Xaa Gly Xaa Asn Ile
1 5
<210> 176
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 176
Gln Ser Ser Glu Ser Val Xaa Xaa Asn Asn Gln Leu Ser
1 5 10
<210> 177
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 177
Val Ile Ala Pro Ser Xaa Thr Thr Tyr Tyr Pro Thr Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 178
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 178
Tyr Pro Ile Asp Pro Gly Ser Asn Xaa
1 5
<210> 179
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 179
Xaa Xaa Ala Met Asp
1 5
<210> 180
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 180
Tyr Pro Ile Asp Xaa Gly Ala Asn Val
1 5
<210> 181
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 181
Gln Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Met Pro
1 5 10
<210> 182
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 182
Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Met Pro Phe
1 5 10
<210> 183
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 183
Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Met Pro Phe
1 5 10
<210> 184
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 184
Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Met Pro Phe
1 5 10
<210> 185
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 185
Leu Ser His Lys Gly Pro Met Pro Phe
1 5
<210> 186
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 186
Ser His Lys Gly Pro Met Pro Phe
1 5
<210> 187
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 187
His Lys Gly Pro Met Pro Phe
1 5
<210> 188
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 188
Lys Gly Pro Met Pro Phe
1 5
<210> 189
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 189
Gly Pro Met Pro Phe
1 5
<210> 190
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 190
Pro Met Pro Phe
1
<210> 191
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 191
Met Pro Phe
1
<210> 192
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 192
Ala Gly Pro Met Pro Phe
1 5
<210> 193
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 193
Lys Ala Pro Met Pro Phe
1 5
<210> 194
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 194
Lys Gly Ala Met Pro Phe
1 5
<210> 195
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 195
Lys Gly Pro Ala Pro Phe
1 5
<210> 196
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 196
Lys Gly Pro Met Ala Phe
1 5
<210> 197
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 197
Lys Gly Pro Met Pro Ala
1 5
<210> 198
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 198
Gln Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Met
1 5 10
<210> 199
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 199
Gln Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro
1 5 10
<210> 200
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 200
Gln Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly
1 5
<210> 201
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 201
Gln Arg Pro Arg Leu Ser His Lys
1 5
<210> 202
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 202
Gln Arg Pro Arg Leu Ser His
1 5
<210> 203
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 203
Gln Arg Pro Arg Leu Ser
1 5
<210> 204
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 204
Gln Arg Pro Arg Leu
1 5
<210> 205
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 205
Gln Arg Pro Arg
1
<210> 206
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 206
Ala Arg Pro Arg Leu
1 5
<210> 207
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 207
Gln Ala Pro Arg Leu
1 5
<210> 208
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 208
Gln Arg Ala Arg Leu
1 5
<210> 209
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 209
Gln Arg Pro Ala Leu
1 5
<210> 210
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 210
Gln Arg Pro Arg Ala
1 5
<210> 211
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 211
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
1 5 10 15
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Ile Asp Leu Tyr Ser Asn Arg
20 25 30
Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser
35 40 45
Ser Ile Gly Ser Ser Pro Trp Tyr Ala Ser Trp Ala Gln Gly Arg Phe
50 55 60
Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser
65 70 75 80
Leu Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Gly Gly Tyr
85 90 95
Arg Pro Gly Ala Ser Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 212
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 212
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
1 5 10 15
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Ile Asp Leu Tyr Ser Asn Arg
20 25 30
Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser
35 40 45
Ser Ile Gly Ser Ser Pro Trp Tyr Ala Ser Trp Ala Gln Gly Arg Phe
50 55 60
Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser
65 70 75 80
Leu Thr Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Lys Gly Gly Tyr
85 90 95
Arg Pro Gly Ala Ser Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 213
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 213
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
1 5 10 15
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Ile Asp Leu Tyr Ser Asn Arg
20 25 30
Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly
35 40 45
Ser Ile Gly Ser Ser Pro Trp Tyr Ala Ser Trp Ala Gln Gly Arg Phe
50 55 60
Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser
65 70 75 80
Leu Thr Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Lys Gly Gly Tyr
85 90 95
Arg Pro Gly Ala Ser Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 214
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 214
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
1 5 10 15
Leu Arg Leu Ser Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Tyr Ser Asn Arg
20 25 30
Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly
35 40 45
Ser Ile Gly Ser Ser Pro Trp Tyr Ala Ser Trp Ala Gln Gly Arg Phe
50 55 60
Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Asn Thr Val Tyr Leu Lys Met Asn Ser
65 70 75 80
Pro Thr Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Lys Gly Gly Tyr
85 90 95
Arg Pro Gly Ala Ser Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 215
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 215
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser Gln Ser Ile Tyr Asp Asn
20 25 30
Asn Asp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Thr Pro Lys Arg
35 40 45
Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Ser Leu Asp Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu
65 70 75 80
Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gly Gly Tyr Ser Gly
85 90 95
Asp Ile Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 216
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 216
Ala Gln Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ala Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Tyr Asp Asn
20 25 30
Asn Asp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Gln Thr Pro Lys Arg
35 40 45
Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Ser Leu Asp Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu
65 70 75 80
Gln Cys Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gly Gly Tyr Ser Gly
85 90 95
Asp Ile Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Glu
100 105 110
<210> 217
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 217
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
1 5 10 15
Leu Arg Leu Ser Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Tyr Thr Asn Arg
20 25 30
Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly
35 40 45
Ser Ile Gly Ser Ser Pro Trp Tyr Ala Ser Trp Ala Gln Gly Arg Phe
50 55 60
Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Asn Thr Val Tyr Leu Lys Met Asn Ser
65 70 75 80
Pro Thr Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Lys Gly Gly Tyr
85 90 95
Arg Pro Gly Gly Ser Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 218
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 218
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
1 5 10 15
Leu Arg Leu Ser Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Tyr Thr Asn Arg
20 25 30
Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly
35 40 45
Ser Ile Gly Ser Ser Pro Trp Phe Ala Ser Trp Ala Leu Gly Arg Phe
50 55 60
Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Asn Thr Val Tyr Leu Lys Met Asn Ser
65 70 75 80
Pro Thr Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Lys Gly Gly Tyr
85 90 95
Arg Pro Gly Ala Ser Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 219
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 219
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser Gln Ser Ile Tyr Asp Asn
20 25 30
Asn Asp Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Thr Pro Lys Arg
35 40 45
Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Ser Leu Asp Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu
65 70 75 80
Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gly Gly Tyr Ser Gly
85 90 95
Asp Ile Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 220
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 220
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser Gln Ser Ile Tyr Asp Asn
20 25 30
Asn Asp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Thr Pro Lys Arg
35 40 45
Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Ser Leu Asp Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu
65 70 75 80
Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gly Gly Tyr Asn Gly
85 90 95
Asp Ile Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 221
<211> 77
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 221
Met Asn Leu Arg Leu Cys Val Gln Ala Leu Leu Leu Leu Trp Leu Ser
1 5 10 15
Leu Thr Ala Val Cys Gly Gly Ser Leu Met Pro Leu Pro Asp Gly Asn
20 25 30
Gly Leu Glu Asp Gly Asn Val Arg His Leu Val Gln Pro Arg Gly Ser
35 40 45
Arg Asn Gly Pro Gly Pro Trp Gln Gly Gly Arg Arg Lys Phe Arg Arg
50 55 60
Gln Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly Pro Met Pro Phe
65 70 75

Claims (51)

1.一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，包含重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3，其具有以下多肽序列：
(1)分别为SEQ ID NO：168、169、170、171、102和172；
(2)分别为SEQ ID NO：50、51、52、110、111和112；
(3)分别为SEQ ID NO：173、174、175、176、114和115；
(4)分别为SEQ ID NO：68、177、178、128、129和130；
(5)分别为SEQ ID NO：74、75、76、134、135和136；
(6)分别为SEQ ID NO：179、78、180、137、138和139；
(7)分别为SEQ ID NO：83、84、85、143、144和145；
(8)分别为SEQ ID NO：86、87、88、146、147和148；
(9)分别为SEQ ID NO：89、90、91、149、150和151；
(10)分别为SEQ ID NO：92、93、94、152、153和154；
(11)分别为SEQ ID NO：95、96、97、155、156和157；或
(12)分别为SEQ ID NO：98、99、100、158、159和160；
其中，所述抗体或其抗原结合片段特异性结合爱帕琳肽，优选人爱帕琳肽。
2.如权利要求1所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，其包含含有与SEQ ID NO：1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37或39具有至少95％的同一性的多肽序列的重链可变区，或含有与SEQ ID NO：2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38或40具有至少95％的同一性的多肽序列的轻链可变区。
3.如权利要求1或2所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，包含：
a.具有SEQ ID NO：1的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：2的多肽序列的轻链可变区；
b.具有SEQ ID NO：3的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：4的多肽序列的轻链可变区；
c.具有SEQ ID NO：5的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：6的多肽序列的轻链可变区；
d.具有SEQ ID NO：7的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：8的多肽序列的轻链可变区；
e.具有SEQ ID NO：9的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：10的多肽序列的轻链可变区；
f.具有SEQ ID NO：11的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：12的多肽序列的轻链可变区；
g.具有SEQ ID NO：13的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：14的多肽序列的轻链可变区；
h.具有SEQ ID NO：15的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：16的多肽序列的轻链可变区；
i.具有SEQ ID NO：17的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：18的多肽序列的轻链可变区；
j.具有SEQ ID NO：19的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：20的多肽序列的轻链可变区；
k.具有SEQ ID NO：21的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：22的多肽序列的轻链可变区；
l.具有SEQ ID NO：23的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：24的多肽序列的轻链可变区；
m.具有SEQ ID NO：25的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：26的多肽序列的轻链可变区；
n.具有SEQ ID NO：27的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：28的多肽序列的轻链可变区；
o.具有SEQ ID NO：29的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：30的多肽序列的轻链可变区；
p.具有SEQ ID NO：31的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：32的多肽序列的轻链可变区；
q.具有SEQ ID NO：33的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：34的多肽序列的轻链可变区；
r.具有SEQ ID NO：35的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：36的多肽序列的轻链可变区；
s.具有SEQ ID NO：37的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：38的多肽序列的轻链可变区；或
t.具有SEQ ID NO：39的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：40的多肽序列的轻链可变区。
4.一种分离的针对爱帕琳肽的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，特异性结合包含SEQ ID NO：188的氨基酸序列的表位。
5.一种分离的针对爱帕琳肽的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，特异性结合包含SEQ ID NO：204的氨基酸序列的表位。
6.如权利要求4或5所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的抗体或其抗原结合片段抑制爱帕琳肽活性。
7.如权利要求4所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段能够结合爱帕琳肽-13、pyro-爱帕琳肽-13、爱帕琳肽-17、爱帕琳肽-36、爱帕琳肽-55，和/或与爱帕琳肽-13具有相同的C末端的其他形式的爱帕琳肽。
8.如权利要求5所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段能够结合爱帕琳肽-13和pyro-爱帕琳肽-13。
9.如权利要求1至8中任一项所述的分离的单克隆抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述的抗体或其抗原结合片段是嵌合的。
10.如权利要求1至9中任一项所述的分离的单克隆抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述的抗体或其抗原结合片段是人的或人源化的。
11.如权利要求10所述的分离的单克隆抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述的抗体或其抗原结合片段包括：
a.具有SEQ ID NO：211的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：215的多肽序列的轻链可变区；
b.具有SEQ ID NO：212的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：215的多肽序列的轻链可变区；
c.具有SEQ ID NO：213的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：215的多肽序列的轻链可变区；
d.具有SEQ ID NO：214的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：215的多肽序列的轻链可变区；
e.具有SEQ ID NO：213的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：216的多肽序列的轻链可变区；
f.具有SEQ ID NO：214的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：216的多肽序列的轻链可变区；
g.具有SEQ ID NO：217的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：219的多肽序列的轻链可变区；或
h.具有SEQ ID NO：218的多肽序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：220的多肽序列的轻链可变区。
12.一种编码权利要求1至11中任一项所述的单克隆抗体或抗原结合片段的分离的核酸。
13.一种载体，其特征在于，所述载体包含如权利要求12所述的分离的核酸。
14.一种宿主细胞，其特征在于，包含如权利要求13所述的载体。
15.一种药物组合物，其特征在于，包含如权利要求1至11中任一项所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，和药学上可接受的载体。
16.一种在有所需要的受试者中阻断爱帕琳肽与爱帕琳肽受体结合的方法，其特征在于，包括向受试者施用如权利要求15所述的药物组合物。
17.一种在有所需要的受试者中治疗糖尿病性视网膜病变(DR)的方法，其特征在于，包括向受试者施用如权利要求15所述的药物组合物。
18.一种在有所需要的受试者中治疗老年性黄斑变性(AMD)的方法，其特征在于，包括向受试者施用如权利要求15所述的药物组合物。
19.一种在有所需要的受试者中治疗糖尿病性黄斑水肿(DME)的方法，其特征在于，包括向受试者施用如权利要求15所述的药物组合物。
20.一种在有所需要的受试者中治疗视网膜静脉阻塞(RVO)后黄斑水肿的方法，其特征在于吧，包括向受试者施用如权利要求15所述的药物组合物。
21.一种在有所需要的受试者中治疗视网膜变性的方法，其特征在于，包括向受试者施用如权利要求15所述的药物组合物。
22.一种在有所需要的受试者中治疗近视脉络膜新生血管(mCNV)的方法，其特征在于，包括向受试者施用如权利要求15所述的药物组合物。
23.一种在有所需要的受试者中治疗糖尿病性肾病的方法，其特征在于，包括向受试者施用如权利要求15所述的药物组合物。
24.一种在有所需要的受试者中治疗慢性肾病(CKD)的方法，其特征在于，包括向受试者施用如权利要求15所述的药物组合物。
25.一种在有所需要的受试者中治疗非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的方法，其特征在于，包括向受试者施用如权利要求15所述的药物组合物。
26.一种在有所需要的受试者中治疗肝硬化的方法，其特征在于，包括向受试者施用如权利要求15所述的药物组合物。
27.一种在有所需要的受试者中治疗斑块新生血管的方法，其特征在于，包括向受试者施用如权利要求15所述的药物组合物。
28.一种在有所需要的受试者中治疗虹膜红变的方法，其特征在于，包括向受试者施用如权利要求15所述的药物组合物。
29.一种在有所需要的受试者中治疗新生血管性青光眼的方法，其特征在于，包括向受试者施用如权利要求15所述的药物组合物。
30.一种在有所需要的受试者中治疗角膜新生血管(CNV)的方法，其特征在于，包括向受试者施用如权利要求15所述的药物组合物。
31.一种在有所需要的受试者中治疗早产儿视网膜病变(ROP)的方法，其特征在于，包括向受试者施用如权利要求15所述的药物组合物。
32.一种在有所需要的受试者中治疗视网膜病变的方法，其特征在于，包括向受试者施用如权利要求15所述的药物组合物。
33.一种在有所需要的受试者中治疗黄斑变性的方法，其特征在于，包括向受试者施用如权利要求15所述的药物组合物。
34.一种在有所需要的受试者中治疗卵巢过度刺激综合征(OHSS)的方法，其特征在于，包括向受试者施用如权利要求15所述的药物组合物。
35.一种在有所需要的受试者中治疗子宫出血的方法，其特征在于，包括向受试者施用如权利要求15所述的药物组合物。
36.一种在有所需要的受试者中治疗子宫内膜异位的方法，其特征在于，包括向受试者施用如权利要求15所述的药物组合物。
37.一种在有所需要的受试者中治疗子宫内膜增生和癌症的方法，其特征在于，包括向受试者施用如权利要求15所述的药物组合物。
38.一种在有所需要的受试者中治疗子宫肌层平滑肌瘤的方法，其特征在于，包括向受试者施用如权利要求15所述的药物组合物。
39.一种在有所需要的受试者中治疗子宫腺肌病的方法，其特征在于，包括向受试者施用如权利要求15所述的药物组合物。
40.一种在有所需要的受试者中治疗组织纤维化的方法，其特征在于，包括向受试者施用如权利要求15所述的药物组合物。
41.一种在有需要的受试者中治疗癌症的方法，其特征在于，包括向受试者施用如权利要求15所述的药物组合物。
42.如权利要求41所述的方法，其特征在于，所述药物组合物还包含第二抗癌剂。
43.如权利要求42所述的方法，其特征在于，所述第二抗癌剂是抗VEGF剂。
44.如权利要求43所述的方法，其特征在于，所述抗VEGF剂是阿瓦斯汀(Avastin)或贝伐单抗生物类似剂。
45.如权利要求43所述的方法，其特征在于，所述抗VEGF剂是VEGFR1和/或VEGFR2阻断剂。
46.一种确定受试者中爱帕琳肽水平的方法，其特征在于，所述方法包括：
a.获得一来自受试者的样品；
b.使所述样品与如权利要求1至11中任一项所述的抗体或抗原结合片段接触；和
c.确定受试者中爱帕琳肽的水平。
47.如权利要求46所述的方法，其特征在于，所述样品是组织样品。
48.如权利要求47所述的方法，其特征在于，所述组织样品是癌组织样品。
49.如权利要求46所述的方法，其特征在于，所述样品是血液样品。
50.一种制备权利要求1至11中任一项所述的单克隆抗体或抗原结合片段的方法，其特征在于，包括在一定条件下培养包含编码单克隆抗体或抗原结合片段的核酸的细胞，以产生所述的单克隆抗体或抗原结合片段，并从细胞或培养物中回收所述的抗体或抗原结合片段。
51.一种制备包含权利要求1至11中任一项所述的单克隆抗体或抗原结合片段的药物组合物的方法，其特征在于，包括将所述单克隆抗体或抗原结合片段与药学上可接受的载体结合，以获得所述药物组合物。
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