CN111024964A - 胃功能检测用复合质控品及检测试剂盒 - Google Patents

胃功能检测用复合质控品及检测试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种胃蛋白酶原I、胃蛋白酶原II和胃泌素‑17复合质控品，其包含蛋白质保存液以及溶于所述蛋白质保存液中的胃蛋白酶原I、胃蛋白酶原II和胃泌素‑17，其中以蛋白质保存液的总体积计，蛋白质保存液包含0.8‑3.5g/L的AEP‑HBC，0.002‑0.006g/L的纤维蛋白原，0.05‑0.15g/L的明胶，2‑8g/L的海藻糖，0.05‑0.25g/L的四聚磷酸盐，5‑25mmol/L的2‑(N‑吗啉)乙烷磺酸，0.5‑4g/L的乙二胺四乙酸或乙二胺四乙酸盐，1‑20mmol/L的半胱氨酸、甲硫氨酸或精氨酸，0.05％‑0.10％的防腐剂。本发明的胃蛋白酶原I、胃蛋白酶原II和胃泌素‑17复合质控品是国内首创，可在2‑8℃的温度下稳定保存14个月。本发明还提供包含该复合质控品的检测试剂盒，可用于胃功能的临床检测。

Description

胃功能检测用复合质控品及检测试剂盒
技术领域
本发明涉及生化检测技术领域，具体涉及一种用于胃功能检测的稳定的胃蛋白酶原I(PGI)、胃蛋白酶原II(PGII)和胃泌素17(G17)复合质控品，还涉及包含该复合质控品的检测试剂盒，例如化学发光检测试剂盒或酶联免疫检测试剂盒。
背景技术
胃癌是最常见的消化道肿瘤之一，严重危害人类的生命健康。不良的饮食结构、不健康的生活饮食习惯、幽门螺旋杄菌(H.pylori)慢性感染可能是胃癌高发的危险因素。随着人们的生活条件的改善、良好饮食习惯的形成、幽门螺杆菌治疗药物的开发等因素，胃癌发病率总体有所下降，但是其发病率在全球仍高居男性肿瘤第四位，死亡率排在第三位，男性发病率是女性的两倍[1-2]。我国是胃癌高发国家，根据2019年国家癌症中心统计结果，胃癌是我国男性第二大、女性第三大癌症，我国每年胃癌预估新发病例67.9万例，死亡病例49.8万例，分别占全球42.6％和45.0％[3]。全球中东亚地区胃癌发病率最高，韩国和日本已经具有比较完善的胃癌预防和筛查体系[4]，对早期胃癌的诊治率分别达到了50％和70％，而我国早期胃癌的诊治率低于10％[5]。因此，开展早期胃癌的筛查诊治以降低我国胃癌的发病率和病死率，是亟待解决的重大公共健康问题，也符合我国人民日益增长的对美好生活的需求。
造成我国早期胃癌的诊治率低的原因有多种。首先，胃癌前病变是一个病理性概念，包括肠上皮化生和异型增生，主要伴存于慢性萎缩性胃炎，是从正常胃粘膜向胃癌转化过程中的一个重要阶段。胃部疾病特点是无显著症状体征或引起非特异性症状，临床明确诊断较为困难，难以及时有效地进行治疗。目前我国发现的胃癌约90％属于进展期，而胃癌的预后与诊治时机密切相关，进展期胃癌即使接受了外科手术，5年生存率仍低于30％[6]，而早期胃癌治疗后5年生存率可超过90％，甚至达到治愈效果[7]。其次，当前临床上，诊断胃部疾病的主要方法是胃镜检查取活组织进行病理活检，这是诊断的金标准。但胃镜对患者机体会造成一定的创伤，是有创性检查，对一些患者耐受性较差，尚不能作为广泛人群的普查手段。尿素呼气试验(UBT)和肿瘤标记物均属无创检测，但存在临床应用价值不高等弊端。
近年来，血清胃蛋白酶原、胃泌素17及幽门螺旋杄菌感染的检测在胃功能诊断中的价值引起了众多学者的关注，已被国际及中国临床指南推荐为胃癌早期筛查的标记物[8-10]。胃蛋白酶原(PG)是从胃黏膜中分离得到的一种蛋白质，它在中性和微碱性溶液中会丧失稳定性及催化活性，在pH＜5的酸性条件下可转化为胃蛋白酶从而促进蛋白质分解，并且与胃蛋白酶具有不同的氨基酸序列。胃蛋白酶原含有一条多肽链，该肽链有375个氨基酸，其平均分子量为42kDa。胃蛋白酶原在核糖体上合成，由高尔基体分泌出细胞，被盐酸激活后变成胃蛋白酶。人胃黏膜中有7组胃蛋白酶同工酶原，可分成PGI和PGII两个亚群。具体地，根据生化性质、免疫原性、细胞来源及组织内分布，1-5组胃蛋白酶同工酶原的免疫原性近似，称为PGI(PGA)亚群，主要由胃体和胃底腺的主细胞和颈黏液细胞分泌；6-7组胃蛋白酶同工酶原被称为PGII(PGC)亚群，除由胃底腺分泌外，胃窦幽门腺和近端十二指肠Brunner腺也可以分泌[11-12]。PGI和PGII分泌入胃腔中，约有1％可在血清中发现，且在血液中稳定存在，在正常情况下，血清PGII的含量约为PGI的1/6。当胃黏膜出现不同的结构与功能异常变化时，血清中PG的表达也会出现差异性变化。因此，胃黏膜功能状态的变化可由血清PG含量反映，如幽门螺旋杄菌感染、萎缩性变化、炎症的形成、癌变的发生等。
PG是反映胃体胃窦黏膜外分泌功能的良好指标，可被称为“血清学活检”[13]。血清PGI和PGII的含量反映胃黏膜腺体和细胞的数量，也可间接反映胃黏膜不同部位的分泌功能，即检测胃泌酸腺细胞功能。胃酸分泌增多引起PGI升高，分泌减少或胃粘膜腺体萎缩引起PGI降低；PGII与胃底粘膜病变的相关性较大(相对于胃窦粘膜)，其升高与胃底腺管萎缩、胃上皮化生或假幽门腺化生、异型增值有关；PGR(PGI与PGII比值)的进行性降低与胃粘膜萎缩进展相关。当胃黏膜发生萎缩时，血清PGI和/或PGR水平降低。有研究认为，将“PGI≤70μg/L且PGR≤3”(不同检测产品的参考值范围不同)作为针对无症状健康人群的胃癌筛查界限值，具有较好的筛查效果[14-15]。
胃泌素17(G17)由胃窦的G细胞合成，主要生理功能为刺激胃酸分泌、促进胃黏膜细胞增殖与分化，其在人体中的含量占生物活性胃泌素总量的90％以上[16]。G17是反映胃窦内分泌功能的敏感指标之一，可以提示胃窦黏膜萎缩状况或是否存在异常增殖。血清G17水平取决于胃内酸度及胃窦G细胞数量，G17本身在胃癌的发生、发展过程中也有促进作用。有研究表明，当血清G17水平升高，可以提示存在胃癌发生风险[17-18]。有研究认为，血清G17联合PGI和PGII检测胃功能疾病，其诊断特异度及灵敏度高于其他各单项指标，可以提高对胃癌的诊断价值[8-9]。
体外诊断试剂盒的质控品通常用于校正并验证实验结果的准确程度，是实现体外诊断试剂临床检测及监督检验结果准确一致的主要工具，也是保证量值有效传递的计量实物标准。质控品的稳定保存对于发挥其校正作用至关重要。胃蛋白酶原I(PGI)、胃蛋白酶原II(PGII)和胃泌素17(G17)是胃癌诊断的关键指标。蛋白质类质控品易受脱酰胺反应、氧化反应、水解反应、错误二硫键形成、消旋、β-消除、变性、吸附、聚集或沉淀等多种物理化学变化的影响而导致不稳定，甚至失活。并且目前尚无胃蛋白酶原I(PGI)、胃蛋白酶原II(PGII)和胃泌素17(G17)复合质控品上市。因此，有必要开发稳定的胃蛋白酶原I(PGI)、胃蛋白酶原II(PGII)和胃泌素17(G17)复合质控品。
发明内容
本发明的目的在于提高胃蛋白酶原I(PGI)、胃蛋白酶原II(PGII)和胃泌素17(G17)质控品的稳定性，提供稳定的胃蛋白酶原I(PGI)、胃蛋白酶原II(PGII)和胃泌素17(G17)复合质控品以及包含该复合质控品的检测试剂盒。
本发明的目的通过以下技术方案来实现：
在第一方面，本发明提供一种胃蛋白酶原I、胃蛋白酶原II和胃泌素-17复合质控品，该复合质控品包含蛋白质保存液以及溶于该蛋白质保存液中的胃蛋白酶原I、胃蛋白酶原II和胃泌素-17，其中以该蛋白质保存液的总体积计，该蛋白质保存液包含：
Figure BDA0002328236860000031
优选地，以该蛋白质保存液的总体积计，该蛋白质保存液包含：
Figure BDA0002328236860000032
Figure BDA0002328236860000041
优选地，该四聚磷酸盐为四聚磷酸钠。
优选地，该乙二胺四乙酸盐为乙二胺四乙酸二钠。
优选地，该防腐剂为NaN3或Procline。
优选地，该蛋白质保存液的pH为6.0-7.5，更优选地，该蛋白质保存液的pH为6.5-7.0。
优选地，该胃蛋白酶原I、胃蛋白酶原II和胃泌素-17在该蛋白质保存液中的浓度分别为5-130ng/mL、2-50ng/mL和20-1000pg/mL。
在第二方面，本发明提供一种检测试剂盒，该检测试剂盒包含本发明第一方面的胃蛋白酶原I、胃蛋白酶原II和胃泌素-17复合质控品。
该检测试剂盒可以与化学发光检测试剂盒或酶联免疫检测试剂盒配套使用。
本发明的有益效果：
本发明的胃蛋白酶原I、胃蛋白酶原II和胃泌素-17复合质控品是国内首创，由于包含本发明人精心配制的蛋白质保存液，其可在2-8℃的温度下稳定保存14个月，满足产品稳定性要求。
本发明的检测试剂盒具有稳定的货架期，使用方便，可用于胃功能(如胃癌)的临床检测。
具体实施方式
下面通过具体实施方式对本发明作进一步详细说明。
体外诊断试剂盒的质控品通常用于校正并验证实验结果的准确程度，是实现体外诊断试剂临床检测及监督检验结果准确一致的主要工具，也是保证量值有效传递的计量实物标准。蛋白质类质控品易受多种物理化学变化的影响而导致不稳定，甚至失活。具体而言，蛋白质(包括多肽)的稳定性差主要是由以下原因引起的：
脱酰胺反应：在脱酰反应中，天门冬酰胺(Asn)或谷氨酰胺(Gln)残基侧链发生水解分别形成异天门冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)。发生在分子内的非酶催化的脱酰胺反应是蛋白质最常见的降解反应。天门冬酰胺-甘氨酸(Asn-Gly-)结构中的酰胺基团更易水解，位于分子表面的酰胺基团也比分子内部的酰胺基团易水解。
氧化反应：蛋白质易氧化的主要原因有两种，一是溶液中有过氧化物的污染，二是蛋白质的自发氧化。在所有的氨基酸残基中，蛋氨酸(Met)、半胱氨酸(Cys)、组氨酸(His)、色氨酸(Trp)、酪氨酸(Tyr)等最易氧化。氧分压、温度和缓冲溶液对氧化也都有影响。
水解反应：蛋白质中的肽键易水解断裂，由Asp参与形成的肽键比其它肽键更易断裂，尤其是Asp-Pro和Asp-Gly肽键。
错误二硫键形成：二硫键之间或二硫键与巯基之间发生交换可形成错误的二硫键，导致蛋白质的三级结构改变和活性丧失。
消旋：除Gly外，所有氨基酸残基的α碳原子都是手性的，易在碱催化下发生消旋反应，其中Asp残基最易发生消旋反应。
β-消除：β-消除是指氨基酸残基中的β碳原子上基团的消除。半胱氨酸(Cys)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)、苯丙氨酸(Phe)、酪氨酸(Tyr)等残基都可通过β-消除降解。在碱性pH下易发生β-消除，温度和金属离子对其也有影响。
变性、吸附、聚集或沉淀：变性一般都与三级结构以及二级结构的破坏有关。在变性状态，蛋白质往往更易发生化学反应，活性难以恢复。在蛋白质变性过程中，首先形成中间体。通常中间体的溶解度低，易于聚集，形成聚集体，进而形成肉眼可见的沉淀。
胃蛋白酶原I(PGI)、胃蛋白酶原II(PGII)和胃泌素17(G17)是胃癌诊断的关键指标，胃癌检测试剂盒包含胃蛋白酶原I(PGI)、胃蛋白酶原II(PGII)和胃泌素17(G17)质控品。但是，如何使胃蛋白酶原I(PGI)、胃蛋白酶原II(PGII)和胃泌素17(G17)质控品能长期稳定保存仍是一个挑战，并且本领域还没有胃蛋白酶原I(PGI)、胃蛋白酶原II(PGII)和胃泌素17(G17)复合质控品。本发明人经过锐意研究，开发了一种稳定的胃蛋白酶原I、胃蛋白酶原II和胃泌素-17复合质控品。
在本发明的实施方案中，该复合质控品包含蛋白质保存液以及溶于该蛋白质保存液中的胃蛋白酶原I、胃蛋白酶原II和胃泌素-17，其中以该蛋白质保存液的总体积计，该蛋白质保存液包含：
Figure BDA0002328236860000051
Figure BDA0002328236860000061
AEP-HBC是一种蛋白保护剂，具有抗沉淀、增溶和促效作用，从而提高产品的稳定性。纤维蛋白原是人体自身的蛋白分子，在体内不会被很快降解也不会产生免疫排斥反应，具有分子伴侣活性和广谱的非特异性保护作用，能促进变形蛋白正确折叠，稳定蛋白构象和功能，可以作为蛋白保护剂使用。明胶也是一种蛋白质保护剂。海藻糖可以防止蛋白质的冷冻变性。四聚磷酸盐作为表面活性剂有增溶和抗沉淀作用。2-(N-吗啉)乙烷磺酸因pKa位于中性范围，且不容易受温度影响，水溶性强，可以为复合质控品提供良好的缓冲环境。乙二胺四乙酸或乙二胺四乙酸盐也为复合质控品提供良好的缓冲环境。半胱氨酸、甲硫氨酸含硫原子，是最容易被氧化的两种氨基酸残基，半胱氨酸转化为二硫化合物，而甲硫氨酸转化为甲硫氨基亚砜。半胱氨酸和甲硫氨酸对于氧化的易感性使其它氨基酸受到保护，从而起到维持复合质控品稳定的作用。金属催化氧化(metal-catalyzed oxidation,MCO)是最为重要的蛋白质氧化损伤机制，精氨酸是MCO最主要的靶点，精氨酸对MCO的易感性使其它氨基酸受到保护，从而起到提高复合质控品稳定性的作用。防腐剂可以防止微生物污染。
在本发明的优选实施方案中，以该蛋白质保存液的总体积计，该蛋白质保存液包含：
Figure BDA0002328236860000062
在本发明的优选实施方案中，四聚磷酸盐为四聚磷酸钠。
在本发明的优选实施方案中，乙二胺四乙酸盐为乙二胺四乙酸二钠。
在本发明的优选实施方案中，防腐剂为NaN3或Procline。
该蛋白质保存液可以通过将各组分按比例加入到纯化水中溶解并混合来制备，pH为6.0-7.5，优选地pH为6.5-7.0。
本发明的胃蛋白酶原I、胃蛋白酶原II和胃泌素-17复合质控品可通过将胃蛋白酶原I、胃蛋白酶原II和胃泌素-17溶于该蛋白质保存液中来制备。胃蛋白酶原I、胃蛋白酶原II和胃泌素-17是可以市售获得的生化试剂。在本发明的优选实施方案中，胃蛋白酶原I、胃蛋白酶原II和胃泌素-17在该蛋白质保存液中的浓度分别为5-130ng/mL、2-50ng/mL和20-1000pg/mL。
本发明的胃蛋白酶原I、胃蛋白酶原II和胃泌素-17复合质控品是本发明人在国内首创的，目前并没有类似的复合质控品上市。
本发明的胃蛋白酶原I、胃蛋白酶原II和胃泌素-17复合质控品由于包含本发明人精心配制的蛋白质保存液，经测定，可在2-8℃的温度下稳定保存14个月。
在本发明的胃蛋白酶原I、胃蛋白酶原II和胃泌素-17复合质控品的基础上，本发明人开发了包含该复合质控品的检测试剂盒，可用于胃功能(例如胃癌)的临床检测。该检测试剂盒包含复合质控品，可以与酶联免疫试剂盒及化学发光试剂盒配套使用。
以下通过具体实施例对本发明作进一步的举例说明。这些实施例是示例性的，并不意在以任何方式限制本发明。
实施例1
本实施例采用以下配方的蛋白质保存液来配制胃蛋白酶原I、胃蛋白酶原II和胃泌素-17复合质控品。该蛋白质保存液是用纯化水将各组分溶解混合制备而成，pH为6.5±0.2。
Figure BDA0002328236860000071
将胃蛋白酶原I(PGI)抗原、胃蛋白酶原II(PGII)抗原和胃泌素-17(G17)抗原添加到该蛋白质保存液中，配制高值和低值两份复合质控品，其中低值复合质控品含PGI 40ng/mL、PGII 10ng/mL、G17 40pg/mL，高值复合质控品含PGI 80ng/mL、PGII 30ng/mL、G17100pg/mL。将配制好的两份复合质控品在37℃环境下进行加速稳定性试验。在第0天、第7天和第14天，分别用辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗PGI抗体、HRP标记的抗PGII抗体和HRP标记的抗G17抗体(国药集团化学试剂有限公司)在K3酶标仪(Labserv)上进行检测。
PGI、PGII检测步骤如下所示：
配液：将20×浓缩洗涤液(自制)用纯化水1：20稀释备用(25ml洗涤液稀释至500mL，50mL洗涤液稀释至1000mL)。
编号：将样品对应微孔按序编号。
加样：分别在相应孔中加入低值复合质控品和高值复合质控品20μL，然后每孔加入HRP标记的抗PGII抗体或HRP标记的抗PGII抗体100μL，轻轻振荡混匀。
温育：用盖板膜封板后置于37℃温育60分钟。
洗涤：将孔内液体甩干，用洗涤液充分洗涤5遍，扣干。如使用洗板机洗板，建议加液量设定为350-400μL。
显色：每孔加入显色液A(柠檬酸缓冲液、过氧化氢脲)50μL，然后每孔加入显色液B(四甲基联苯胺(TMB)溶液)50μL，混匀，37℃避光显色15分钟。
测定：每孔加硫酸终止液50μL，混匀，在酶标仪设定450nm处(建议用双波长450/630nm检测)，用空白孔调零后测定OD值。
数据处理：可使用酶标仪自带软件计算或手工计算。以校准品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，做四参数逻辑拟合曲线。方程式为Y＝(A-D)/[1+(X/C)^B]+D。从拟合线上计算待测样本中PGI的浓度(校准品、质控品、样本OD值均需减去空白孔OD值)。
G-17检测步骤如下所示：
配液：将20×浓缩洗涤液(自制)用纯化水1:20稀释成洗涤液备用；
编号：将样本对应酶标仪微孔按顺序编号；
加入抗原：分别在相应微孔中加入50μL的低值复合质控品和高值复合质控品，轻轻振荡混匀；
温育：用盖板膜封板后，将酶标仪置于37℃温育60分钟；
洗涤：将微孔内液体甩干，用洗涤液充分洗涤4遍，扣干。如使用洗板机洗板，建议加液量设定为350-400μL；
加入抗体：每个微孔加入HRP标记的抗G17抗体100μL，轻轻振荡混匀；
温育：用盖板膜封板后，将酶标仪置于37℃温育30分钟；
洗涤：将微孔内液体甩干，用洗涤液充分洗涤4遍，扣干。如使用洗板机洗板，建议加液量设定为350-400μL；
显色：每个微孔加入显色液A(柠檬酸缓冲液、过氧化氢脲)、B液(四甲基联苯胺(TMB)溶液)各50μL，轻轻振荡混匀，37℃避光显色15分钟；
测定：每个微孔加硫酸终止液50μL，轻拍混匀，酶标仪设定450nm处，用空白微孔调零后测定OD值。
测定结果按PGI、PGII和G17分别列表显示，如表1-1、1-2和1-3所示。
表1-1：PGI的37℃加速稳定性试验结果
Figure BDA0002328236860000091
表1-2：PGII的37℃加速稳定性试验结果
Figure BDA0002328236860000092
表1-3：G17的37℃加速稳定性试验结果
Figure BDA0002328236860000093
由表1-1、1-2和1-3可见，本实施例中高值和低值两份复合质控品在37℃加速稳定性试验中，直到第14天，其中的PGI、PGII和G17测得的OD值都没有明显降低，表明PGI、PGII和G17复合质控品在蛋白质保存液中能稳定保存。
对比例1
作为实施例1的对比，本对比例采用以下配方的蛋白质保存液来配制胃蛋白酶原I、胃蛋白酶原II和胃泌素-17复合质控品。该蛋白质保存液是用纯化水将各组分溶解混合制备而成，pH为7.4±0.2，只含有BSA作为蛋白稳定剂。
Figure BDA0002328236860000094
Figure BDA0002328236860000101
将胃蛋白酶原I(PGI)抗原、胃蛋白酶原II(PGII)抗原和胃泌素-17(G17)抗原添加到该蛋白质保存液中，配制高值和低值两份复合质控品，其中低值复合质控品含PGI 40ng/mL、PGII 10ng/mL、G17 40pg/mL，高值复合质控品含PGI80ng/mL、PGII 30ng/mL、G17100pg/mL。将配制好的两份复合质控品在37℃环境下进行加速稳定性试验，并按实施例1的方式进行检测，检测结果按PGI、PGII和G17分别列表显示，如表2-1、2-2和2-3所示。
表2-1：PGI的37℃加速稳定性试验结果
Figure BDA0002328236860000102
表2-2：PGII的37℃加速稳定性试验结果
Figure BDA0002328236860000103
表2-3：G17的37℃加速稳定性试验结果
Figure BDA0002328236860000104
由表2-1、2-2和2-3可见，本对比例中高值和低值两份复合质控品在37℃加速稳定性试验中，到第7天，其中的PGI、PGII和G17测得的OD值就大幅下降，表明PGI、PGII和G17复合质控品在只含有蛋白质稳定剂BSA的蛋白质保存液中不能很好地稳定保存。
实施例2
本实施例采用以下配方的蛋白质保存液来配制胃蛋白酶原I、胃蛋白酶原II和胃泌素-17复合质控品。该蛋白质保存液是用纯化水将各组分溶解混合制备而成，pH为6.5±0.2。
Figure BDA0002328236860000111
将胃蛋白酶原I(PGI)抗原、胃蛋白酶原II(PGII)抗原和胃泌素-17(G17)抗原添加到该蛋白质保存液中，配制高值和低值两份复合质控品，其中低值复合质控品含PGI 40ng/mL、PGII 10ng/mL、G17 40pg/mL，高值复合质控品含PGI80ng/mL、PGII 30ng/mL、G17100pg/mL。将配制好的两份复合质控品在37℃环境下进行加速稳定性试验，并按实施例1的方式进行检测，检测结果按PGI、PGII和G17分别列表显示，试验结果按PGI、PGII和G17分别列表显示，如表3-1、3-2和3-3所示。
表3-1：PGI的37℃加速稳定性试验结果
Figure BDA0002328236860000112
表3-2：PGII的37℃加速稳定性试验结果
Figure BDA0002328236860000113
表3-3：G17的37℃加速稳定性试验结果
Figure BDA0002328236860000114
由表3-1、3-2和3-3可见，本实施例中高值和低值两份复合质控品在37℃加速稳定性试验中，直到第14天，其中的PGI、PGII和G17测得的OD值都没有明显降低，表明PGI、PGII和G17复合质控品在蛋白质保存液中能稳定保存。
实施例3
本实施例采用实施例1的蛋白质保存液，将胃蛋白酶原I(PGI)抗原、胃蛋白酶原II(PGII)抗原和胃泌素-17(G17)抗原添加到该蛋白质保存液中，配制低值和高值两份复合质控品，其中低值复合质控品含PGI 40ng/mL、PGII 10ng/mL、G17 40pg/mL，高值复合质控品含PGI 80ng/mL、PGII 30ng/mL、G17 100pg/mL。将配制好的两份复合质控品在2-8℃环境下进行14个月的长期稳定性试验，考察准确度、瓶内均一性和瓶间均一性。具体方法如下：
1.准确度
按照仪器和试剂盒使用说明书，测定校准品，得到标准曲线。测定待测质控品，重复测定3次，根据标准曲线换算出3次测量的浓度值，根据公式(1)计算每次实测浓度值(A)与标识值(T)的相对偏差。实测值与靶值的相对偏差应在±10％以内。
Figure BDA0002328236860000121
式中：
B：相对偏差；
A：实测浓度值；
T：质控品靶值。
2.均一性
取11瓶同批次的质控品，用经校准后的酶标仪测试。取10瓶质控品，每瓶测试1次，计算测试结果的平均值M1和标准差SD1。
剩余的1瓶质控品连续测试11次，剔除第一次测定结果，计算平均值M2和SD2。计算CV瓶内和CV瓶间。
根据公式(2)计算瓶内均一性，根据公式(4)计算瓶间均一性。瓶内、瓶间均一性测试的变异系数(CV)应≤12％。
Figure BDA0002328236860000122
Figure BDA0002328236860000123
Figure BDA0002328236860000131
当SD1＜SD2时，CV瓶间＝0。
式中：
CV：变异系数；
SD1：瓶间标准差；
SD2：瓶内标准差；
M1：瓶间测定均值；
M2：瓶内测定均值。
试验结果按PGI、PGII和G17分别列表显示，如表4-1、4-2和4-3所示。
表4-1：PGI的2-8℃长期稳定性试验结果
Figure BDA0002328236860000132
表4-2：PGII的2-8℃长期稳定性试验结果
Figure BDA0002328236860000133
Figure BDA0002328236860000141
表4-3：G17的2-8℃长期稳定性试验结果
Figure BDA0002328236860000142
由表4-1、4-2和4-3可见，本实施例的PGI、PGII和G17复合质控品可在2-8℃的温度下稳定保存14个月。
实施例4
本实施例采用实施例2的蛋白质保存液，将胃蛋白酶原I(PGI)抗原、胃蛋白酶原II(PGII)抗原和胃泌素-17(G17)抗原添加到该蛋白质保存液中，配制低值值和高值两份复合质控品，其中低值复合质控品含PGI 40ng/mL、PGII 10ng/mL、G17 40pg/mL，高值复合质控品含PGI 80ng/mL、PGII 30ng/mL、G17 100pg/mL。将配制好的两份复合质控品在2-8℃环境下进行14个月的长期稳定性试验，按实施例3的方式考察准确度、瓶内均一性和瓶间均一性。试验结果按PGI、PGII和G17分别列表显示，如表5-1、5-2和5-3所示。
表5-1：PGI的2-8℃长期稳定性试验结果
Figure BDA0002328236860000151
表5-2：PGII的2-8℃长期稳定性试验结果
Figure BDA0002328236860000152
表5-3：G17的2-8℃长期稳定性试验结果
Figure BDA0002328236860000153
Figure BDA0002328236860000161
由表5-1、5-2和5-3可见，本实施例的PGI、PGII和G17复合质控品可在2-8℃的温度下稳定保存14个月。
综上，实施例1、实施例2和对比例1的数据显示，本发明的PGI、PGII和G17复合质控品由于包含了本发明人配制的蛋白质保存液，在37℃加速稳定性试验中显示出优异的稳定性。实施例3和4的数据显示，本发明的PGI、PGII和G17复合质控品可在2-8℃的温度下稳定保存14个月。因此，本发明的PGI、PGII和G17复合质控品可用于制备能够长时间稳定保存的胃功能检测用检测试剂盒。
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以上应用了具体实例对本发明进行了阐述，只是用于帮助理解本发明，并不用以限制本发明。本发明所属技术领域的技术人员依据本发明的构思，还可以做出若干简单推演、变形或替换。这些推演、变形或替换方案也落入本发明的权利要求范围内。

Claims (10)

1.一种胃蛋白酶原I、胃蛋白酶原II和胃泌素-17复合质控品，其特征在于，所述复合质控品包含蛋白质保存液以及溶于所述蛋白质保存液中的胃蛋白酶原I、胃蛋白酶原II和胃泌素-17，其中以所述蛋白质保存液的总体积计，所述蛋白质保存液包含：
Figure FDA0002328236850000011
2.根据权利要求1所述的胃蛋白酶原I、胃蛋白酶原II和胃泌素-17复合质控品，其特征在于，以所述蛋白质保存液的总体积计，所述蛋白质保存液包含：
Figure FDA0002328236850000012
3.根据权利要求1或2所述的胃蛋白酶原I、胃蛋白酶原II和胃泌素-17复合质控品，其特征在于，所述四聚磷酸盐为四聚磷酸钠。
4.根据权利要求1或2所述的胃蛋白酶原I、胃蛋白酶原II和胃泌素-17复合质控品，其特征在于，所述乙二胺四乙酸盐为乙二胺四乙酸二钠。
5.根据权利要求1或2所述的胃蛋白酶原I、胃蛋白酶原II和胃泌素-17复合质控品，其特征在于，所述防腐剂为NaN3或Procline。
6.根据权利要求1或2所述的胃蛋白酶原I、胃蛋白酶原II和胃泌素-17复合质控品，其特征在于，所述蛋白质保存液的pH为6.0-7.5。
7.根据权利要求6所述的胃蛋白酶原I、胃蛋白酶原II和胃泌素-17复合质控品，其特征在于，所述蛋白质保存液的pH为6.5-7.0。
8.根据权利要求1或2所述的胃蛋白酶原I、胃蛋白酶原II和胃泌素-17复合质控品，其特征在于，所述胃蛋白酶原I、胃蛋白酶原II和胃泌素-17在所述蛋白质保存液中的浓度分别为5-130ng/mL、2-50ng/mL和20-1000pg/mL。
9.一种检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包含根据权利要求1-8中任一项所述的胃蛋白酶原I、胃蛋白酶原II和胃泌素-17复合质控品。
10.根据权利要求9所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒与化学发光检测试剂盒或酶联免疫检测试剂盒配套使用。
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