CN111019013A - 一种高纯度壳聚糖的制备及纯化方法 - Google Patents
一种高纯度壳聚糖的制备及纯化方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111019013A CN111019013A CN201911355540.0A CN201911355540A CN111019013A CN 111019013 A CN111019013 A CN 111019013A CN 201911355540 A CN201911355540 A CN 201911355540A CN 111019013 A CN111019013 A CN 111019013A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- chitosan
- purity
- acetic acid
- adopting
- preparing
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/0006—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
- C08B37/0024—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid beta-D-Glucans; (beta-1,3)-D-Glucans, e.g. paramylon, coriolan, sclerotan, pachyman, callose, scleroglucan, schizophyllan, laminaran, lentinan or curdlan; (beta-1,6)-D-Glucans, e.g. pustulan; (beta-1,4)-D-Glucans; (beta-1,3)(beta-1,4)-D-Glucans, e.g. lichenan; Derivatives thereof
- C08B37/0027—2-Acetamido-2-deoxy-beta-glucans; Derivatives thereof
- C08B37/003—Chitin, i.e. 2-acetamido-2-deoxy-(beta-1,4)-D-glucan or N-acetyl-beta-1,4-D-glucosamine; Chitosan, i.e. deacetylated product of chitin or (beta-1,4)-D-glucosamine; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/0003—General processes for their isolation or fractionation, e.g. purification or extraction from biomass
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
本发明公开了一种高纯度壳聚糖的制备及纯化方法。该方法包括如下步骤，第一步，选取脱乙酰度在50‑95％、黏均分子量在40‑800万的市售壳聚糖；第二步，用稀醋酸溶解后，在超声波、高效复合酶酶解蛋白作用下水解，之后加入氢氧化钠沉淀，再进行干燥；第三步，将经超声、酶处理后的壳聚糖醋酸溶液，采用微孔膜加压过滤；第四步，将经微滤处理的壳聚糖醋酸溶液，采用超滤装置超滤，收集滤液，再经氢氧化钠沉淀后洗涤干燥；第五步，采用喷雾干燥技术，制备得到一定粒子形态的高纯度壳聚糖粉末。本发明中将现有的市售壳聚糖进行进一步的纯化，制得高纯度的壳聚糖，使得壳聚糖的纯度等级能够达到医用级别，便于后续的壳聚糖纤维纱布的制成。
Description
技术领域
本发明涉及壳聚糖技术领域，具体涉及一种高纯度壳聚糖的制备及纯化方法。
背景技术
壳聚糖又称脱乙酰甲壳素，是由自然界广泛存在的几丁质经过脱乙酰作用得到的，这种天然高分子的生物官能性和相容性、血液相容性、安全性、微生物降解性等优良性能在医药界取得了良好的研究进展。由于壳聚糖能够诱导血红细胞聚集起到封堵出血口的作用，因此壳聚糖能应用于医疗纱布领域。但是，壳聚糖想要制成壳聚糖纤维纱布，壳聚糖的纯度需达到很高的要求，因此，现有技术中仅仅通过酸洗脱钙、碱洗脱蛋白以及乙醇多级沉淀洗涤得壳聚糖的工艺达不到要求。
发明内容
本发明的目的是针对上述背景技术中存在的不足，提供一种能制得高纯度壳聚糖的方法以及该高纯度壳聚糖的纯化方法。
为实现上述目的，本发明一种高纯度壳聚糖的制备及纯化方法，采用了如下技术方案：
一种高纯度壳聚糖的制备及纯化方法，包括如下步骤，
第一步，选取脱乙酰度在50-95％、黏均分子量在40-800万的市售壳聚糖；
第二步，用稀醋酸溶解后，在超声波、高效复合酶酶解蛋白作用下水解，之后加入氢氧化钠沉淀，再进行干燥；
第三步，将经超声、酶处理后的壳聚糖醋酸溶液，采用微孔膜加压过滤，收集滤液进行细菌培养计数；
第四步，将经微滤处理的壳聚糖醋酸溶液，采用超滤装置超滤，收集滤液，再经氢氧化钠沉淀后过滤洗涤干燥；
第五步，将经超滤处理的壳聚糖醋酸溶液，采用喷雾干燥技术，制备得到一定粒子形态的高纯度壳聚糖粉末。将市售壳聚糖进一步酸洗脱钙，之后利用蛋白酶-超声波联合去蛋白技术，将壳聚糖内的蛋白质高效去除，再经过微滤、超滤技术将壳聚糖纯化，最后干燥得到纯度较高的壳聚糖。对市售壳聚糖进一步制备纯化，得到纯度较高的壳聚糖，为下一步工序铺垫。
具体的，所述稀醋酸浓度为0.5-3％。
具体的，所述市售壳聚糖脱乙酰度为50-70％时，所述稀醋酸浓度为2-3％；所述市售壳聚糖脱乙酰度为70-95％时，所述稀醋酸浓度为0.5-2％。对脱乙酰度较低的壳聚糖使用浓度较高的稀醋酸溶解，溶解效果更好，反之，用浓度较低的稀醋酸溶解脱乙酰度较高的壳聚糖溶解效果也较优。
具体的，所述第二步中超声波功率为280-300W。
具体的，所述第二步中水解时间为10-40min。
具体的，所述第二步完成后，采用库马斯亮蓝法测壳聚糖中残留的蛋白质含量，若含量过高，重复第二步。对市售壳聚糖脱蛋白进行检测，便于蛋白质去除的高效。
具体的，所述第二步完成后，采用鲎试剂法检测壳聚糖中残留内毒素的含量，若含量过高，重复第二步。保证壳聚糖内不含有毒素，保证壳聚糖的质量。
具体的，所述第四步完成后，采用热失重法和高效液相法测定壳聚糖纯度，若纯度过低，重复第四步。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明中将现有的市售壳聚糖进行进一步的纯化，制得高纯度的壳聚糖，使得壳聚糖的纯度等级能够达到医用级别，便于后续的壳聚糖纤维纱布的制成。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例一
一种高纯度壳聚糖的制备及纯化方法，包括如下步骤，
第一步，选取脱乙酰度为60％、黏均分子量为100万的市售壳聚糖；
第二步，用浓度为2.5％的稀醋酸溶解后，在超声波(280W)、高效复合酶酶解蛋白作用下水解30min，之后加入氢氧化钠沉淀，过滤后再进行干燥；对干燥后的产物采用库马斯亮蓝法测壳聚糖中残留的蛋白质含量、采用鲎试剂法检测壳聚糖中残留内毒素的含量，若检测到蛋白质含量过高或者残留内毒素过高，则重复复合酶-超声波联合去蛋白步骤；
第三步，将经超声、酶处理后的壳聚糖醋酸溶液，采用微孔膜加压过滤，收集滤液进行细菌培养计数；
第四步，将经微滤处理的壳聚糖醋酸溶液，采用超滤装置超滤，收集滤液，再经氢氧化钠沉淀后过滤洗涤干燥；干燥后的产物采用热失重法和高效液相法测定壳聚糖纯度，纯度过低，则进一步超滤纯化；
第五步，将经超滤处理的壳聚糖醋酸溶液，采用喷雾干燥技术，制备得到一定粒子形态的高纯度壳聚糖粉末；根据单位时间的产率，调整温度、压力、流速等参数，提高干燥的效率。
最后，进行工艺放大，得到高产率高效率的高纯度壳聚糖。
实施例二
一种高纯度壳聚糖的制备及纯化方法，包括如下步骤，
第一步，选取脱乙酰度为75％、黏均分子量为300万的市售壳聚糖；
第二步，用浓度为1.5％的稀醋酸溶解后，在超声波(300W)、高效复合酶酶解蛋白作用下水解20min，之后加入氢氧化钠沉淀，过滤后再进行干燥；对干燥后的产物采用库马斯亮蓝法测壳聚糖中残留的蛋白质含量、采用鲎试剂法检测壳聚糖中残留内毒素的含量，若检测到蛋白质含量过高或者残留内毒素过高，则重复复合酶-超声波联合去蛋白步骤；
第三步，将经超声、酶处理后的壳聚糖醋酸溶液，采用微孔膜加压过滤，收集滤液进行细菌培养计数；
第四步，将经微滤处理的壳聚糖醋酸溶液，采用超滤装置超滤，收集滤液，再经氢氧化钠沉淀后过滤洗涤干燥；干燥后的产物采用热失重法和高效液相法测定壳聚糖纯度，纯度过低，则进一步超滤纯化；
第五步，将经超滤处理的壳聚糖醋酸溶液，采用喷雾干燥技术，制备得到一定粒子形态的高纯度壳聚糖粉末；根据单位时间的产率，调整温度、压力、流速等参数，提高干燥的效率。
最后，进行工艺放大，得到高产率高效率的高纯度壳聚糖。
实施例三
一种高纯度壳聚糖的制备及纯化方法，包括如下步骤，
第一步，选取脱乙酰度为90％、黏均分子量为700万的市售壳聚糖；
第二步，用浓度为0.5％的稀醋酸溶解后，在超声波(300W)、高效复合酶酶解蛋白作用下水解10min，之后加入氢氧化钠沉淀，过滤后再进行干燥；对干燥后的产物采用库马斯亮蓝法测壳聚糖中残留的蛋白质含量、采用鲎试剂法检测壳聚糖中残留内毒素的含量，若检测到蛋白质含量过高或者残留内毒素过高，则重复复合酶-超声波联合去蛋白步骤；
第三步，将经超声、酶处理后的壳聚糖醋酸溶液，采用微孔膜加压过滤，收集滤液进行细菌培养计数；
第四步，将经微滤处理的壳聚糖醋酸溶液，采用超滤装置超滤，收集滤液，再经氢氧化钠沉淀后过滤洗涤干燥；干燥后的产物采用热失重法和高效液相法测定壳聚糖纯度，纯度过低，则进一步超滤纯化；
第五步，将经超滤处理的壳聚糖醋酸溶液，采用喷雾干燥技术，制备得到一定粒子形态的高纯度壳聚糖粉末；根据单位时间的产率，调整温度、压力、流速等参数，提高干燥的效率。
最后，进行工艺放大，得到高产率高效率的高纯度壳聚糖。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
Claims (8)
1.一种高纯度壳聚糖的制备及纯化方法，其特征在于：包括如下步骤，
第一步，选取脱乙酰度在50-95％、黏均分子量在40-800万的市售壳聚糖；
第二步，用稀醋酸溶解后，在超声波、高效复合酶酶解蛋白作用下水解，之后加入氢氧化钠沉淀，再进行干燥；
第三步，将经超声、酶处理后的壳聚糖醋酸溶液，采用微孔膜加压过滤，收集滤液进行细菌培养计数；
第四步，将经微滤处理的壳聚糖醋酸溶液，采用超滤装置超滤，收集滤液，再经氢氧化钠沉淀后洗涤干燥；
第五步，将经超滤处理的壳聚糖醋酸溶液，采用喷雾干燥技术，制备得到一定粒子形态的高纯度壳聚糖粉末。
2.根据权利要求1所述的一种高纯度壳聚糖的制备及纯化方法，其特征在于：所述稀醋酸浓度为0.5-3％。
3.根据权利要求2所述的一种高纯度壳聚糖的制备及纯化方法，其特征在于：所述市售壳聚糖脱乙酰度为50-70％时，所述稀醋酸浓度为2-3％；所述市售壳聚糖脱乙酰度为70-95％时，所述稀醋酸浓度为0.5-2％。
4.根据权利要求1所述的一种高纯度壳聚糖的制备及纯化方法，其特征在于：所述第二步中超声波功率为280-300W。
5.根据权利要求1所述的一种高纯度壳聚糖的制备及纯化方法，其特征在于：所述第二步中水解时间为10-40min。
6.根据权利要求1所述的一种高纯度壳聚糖的制备及纯化方法，其特征在于：所述第二步完成后，采用库马斯亮蓝法测壳聚糖中残留的蛋白质含量，若含量过高，重复第二步。
7.根据权利要求1所述的一种高纯度壳聚糖的制备及纯化方法，其特征在于：所述第二步完成后，采用鲎试剂法检测壳聚糖中残留内毒素的含量，若含量过高，重复第二步。
8.根据权利要求1所述的一种高纯度壳聚糖的制备及纯化方法，其特征在于：所述第四步完成后，采用热失重法和高效液相法测定壳聚糖纯度，若纯度过低，重复第四步。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201911355540.0A CN111019013A (zh) | 2019-12-25 | 2019-12-25 | 一种高纯度壳聚糖的制备及纯化方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201911355540.0A CN111019013A (zh) | 2019-12-25 | 2019-12-25 | 一种高纯度壳聚糖的制备及纯化方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111019013A true CN111019013A (zh) | 2020-04-17 |
Family
ID=70214753
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201911355540.0A Pending CN111019013A (zh) | 2019-12-25 | 2019-12-25 | 一种高纯度壳聚糖的制备及纯化方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111019013A (zh) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1425696A (zh) * | 2003-01-07 | 2003-06-25 | 江南大学 | 一种甲壳低聚糖的制备方法及应用 |
| CN1492039A (zh) * | 2003-06-21 | 2004-04-28 | 北海国发海洋生物产业股份有限公司 | 壳聚糖酶生产菌及低聚壳聚糖的生产方法 |
| CN101845471A (zh) * | 2010-05-12 | 2010-09-29 | 江苏双林海洋生物药业有限公司 | 快速溶解壳聚糖、以高底物浓度酶法制备壳寡糖的方法 |
| CN106317255A (zh) * | 2015-07-08 | 2017-01-11 | 惠州长龙生物技术有限公司 | 一种采用离子交换树脂脱酸制备中性壳寡糖的方法 |
| CN107739418A (zh) * | 2017-11-08 | 2018-02-27 | 广东药科大学 | 一种采用木瓜蛋白酶冷冻干燥制备壳寡糖的方法 |
-
2019
- 2019-12-25 CN CN201911355540.0A patent/CN111019013A/zh active Pending
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1425696A (zh) * | 2003-01-07 | 2003-06-25 | 江南大学 | 一种甲壳低聚糖的制备方法及应用 |
| CN1492039A (zh) * | 2003-06-21 | 2004-04-28 | 北海国发海洋生物产业股份有限公司 | 壳聚糖酶生产菌及低聚壳聚糖的生产方法 |
| CN101845471A (zh) * | 2010-05-12 | 2010-09-29 | 江苏双林海洋生物药业有限公司 | 快速溶解壳聚糖、以高底物浓度酶法制备壳寡糖的方法 |
| CN106317255A (zh) * | 2015-07-08 | 2017-01-11 | 惠州长龙生物技术有限公司 | 一种采用离子交换树脂脱酸制备中性壳寡糖的方法 |
| CN107739418A (zh) * | 2017-11-08 | 2018-02-27 | 广东药科大学 | 一种采用木瓜蛋白酶冷冻干燥制备壳寡糖的方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| JING HONG-JUAN 等: ""Chitooligosaccharide Prolongs Vase Life of Cut Roses by Decreasing Reactive Oxygen Species"", 《KOREN JOURNAL OF HORTICULTURAL SCIENCE&TECHNOLOGY》 * |
| 汪多仁 等编: "《有机食品营养强化剂》", 31 August 2008, 科学文献出版社 * |
| 白云鹏 等: ""不同干燥方式对甲壳低聚糖品质的影响"", 《食品与生物技术学报》 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103665371B (zh) | 一种利用超滤纳滤技术精制生物发酵液中聚谷氨酸的方法 | |
| CN111150049B (zh) | 一种高黏度、高凝胶强度的透明三赞胶的制备方法 | |
| CN101717530A (zh) | 添加壳聚糖/丝胶的天然橡胶液体浆料及其制备方法 | |
| CN110106163B (zh) | 岩藻多糖及其水解寡糖在制备益生菌保护剂中的应用及方法 | |
| JP6225321B1 (ja) | ポリ硫酸ペントサンの製造方法 | |
| HUE029596T2 (en) | Preparation of sodium hyaluronate using mutant streptococcus zooepidemicus | |
| CN106832129A (zh) | 一种衣康酸均聚物接枝羧甲基壳聚糖纳米粒的制备方法 | |
| CN101704905A (zh) | 一种透明质酸的提取方法 | |
| CN103130904A (zh) | 一种虾夷扇贝下脚料高值化利用的方法 | |
| Li et al. | Structure and properties of chitin/alginate blend membranes from NaOH/urea aqueous solution | |
| EP0140725B1 (fr) | Procédé de traitement d'une solution de polysaccharide et son utilisation | |
| CN107602726B (zh) | 低分子量c6-羧基甲壳素及其制备方法 | |
| KR101638662B1 (ko) | 히알루론산 및／또는 그의 염의 정제 방법 | |
| CN105154496B (zh) | 一种利用酶法制备特定分子量水溶性壳聚糖的方法 | |
| CN111019013A (zh) | 一种高纯度壳聚糖的制备及纯化方法 | |
| CN103539870A (zh) | 从植物纤维中提取半纤维素的方法 | |
| CN110922506A (zh) | 一种高澄清度的肝素钠 | |
| CN104448043A (zh) | 一种依诺肝素钠的生产及纯化方法 | |
| CN102617752A (zh) | 一种低分子果胶的生产工艺 | |
| CN101215383B (zh) | 酸碱两性可溶的壳聚糖的制备方法 | |
| CN108841200A (zh) | 一种水溶性木耳黑色素的制备方法 | |
| CN107011451B (zh) | 银耳异聚多糖及其提取物、制备方法和应用 | |
| CN102276751B (zh) | 一种从泥螺中提取糖胺聚糖的方法 | |
| CN103145880B (zh) | 一种去除依诺肝素钠原料中游离态硫的方法 | |
| CN115477709A (zh) | 一种水溶酵母β-葡聚糖及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20200417 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |