CN111012789A - 苦杏仁苷在制备治疗脂肪性肝病的药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及苦杏仁苷在制备治疗脂肪性肝病的药物中的应用。经发明人的研究,首次发现苦杏仁苷对非酒精性脂肪性肝病具有显著的治疗作用。对肝脏损伤时的异常生化指标有明显的改善作用,并且显著减少肝脏脂质聚集。本发明已完成的动物模型试验表明,对于高脂饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝炎模型或蛋氨酸胆碱缺乏饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝炎模型,使用苦杏仁苷干预后可显著降低血清天门冬氨酸氨基转移酶和谷氨酸丙酮酸转氨酶水平,减少肝组织甘油三酯含量,改善肝组织病理学变化,抑制肝脏脂质聚集。效果显著优于其他试药。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域,具体地说,涉及苦杏仁苷在制备治疗脂肪性肝病的药物中的应用。
背景技术
现有的研究表明苦杏仁苷(Amygdalin)存在于杏、桃、枇杷、青梅、杨梅等植物的种仁中,具有止咳平喘、抗肝/肾纤维化、抗肿瘤、抗动脉粥样硬化、抗炎以及免疫调节作用。如专利文献CN101361782A,公开日2009.02.11,公开了一种治疗慢性肝病的药物组合物,由中药有效组分或成分虫草多糖、苦杏仁甙和绞股蓝总皂甙组成,虫草多糖、苦杏仁甙与绞股蓝总皂甙的重量比为1:0.2~10:0.2~8,经经典动物模型试验证实,所述药物能显著降低模型大鼠肝组织胶原含量,减轻肝纤维化程度和肝损伤程度,能提高抗肝纤维化作用,有效阻止肝纤维化的发展并促进肝纤维化的逆转;再如专利文献CN103191188A,公开日2013.07.10,公开了一种治疗肝纤维化的6组分植物药组合物,按每公斤体重计分别为:虫草粗多糖180-350mg、虫草脂溶性组分0.06~0.82ml、丹参酚酸100-190mg、绞股蓝皂苷2-68mg、绞股蓝多糖3-12mg、苦杏仁苷0.1~4mg,经动物实验证实具有抗肝纤维化和其他脏器的抗纤维化治疗作用。
脂肪性肝病(fatty liver disease,FLD)是一种呈世界性流行分布,与胰岛素抵抗及环境、遗传易感相关,代谢应激损伤性常见慢性疾病。其为一临床概念,系指病变主体在肝小叶,以弥漫性肝细胞大泡性脂肪变为病理特征的临床综合征。根据有无长期过量饮酒,分为非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)和酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD)。NAFLD指除外酒精和其他明确损肝因素所致的以弥漫性肝细胞大泡性脂肪变为主要特征的临床病理综合征,根据病理改变分为非酒精性单纯性脂肪肝(nonalcoholic simple fatty liver,NAFL)、非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholicsteatohepatitis,NASH)、非酒精性脂肪性肝硬化。ALD是由于长期大量饮酒导致的肝脏疾病,其病理学改变主要为大泡性或大泡性为主伴小泡性的混合性肝细胞脂肪变性,根据病理改变分为酒精性脂肪肝(alcoholic simple fatty liver,AFL)、酒精性肝炎(alcoholichepatitis,AH)、酒精性肝硬化。
近年来NAFLD已成为全球重要的健康问题,也已成为我国第一大慢性肝病和健康体检肝脏生物化学指标异常的首要原因,而糖尿病、肥胖、血脂异常患者NAFLD患病率更显著。目前用于治疗NAFLD的药物尚多处于临床试验和实验研究阶段,尚无针对肝脏脂质沉积的生物和化学药物被推荐用于临床,目前的药物治疗尚定位于辅助治疗。ALD是我国常见的肝脏疾病之一,严重危害人民健康。
目前苦杏仁苷在肝脏疾病中的相关药理药效研究报道主要集中在肝纤维化、肝癌,且早有报道,但迄今为止在脂肪性肝病中尚无报道。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术中的不足,提供苦杏仁苷的一种新用途。
第一方面,本发明提供了苦杏仁苷在制备治疗脂肪性肝病的药物中的应用。
作为本发明的一种优选实施方式,所述脂肪性肝病为不伴有肝纤维化的脂肪性肝病。
更优选地,所述脂肪性肝病为非酒精性脂肪性肝病或酒精性肝病。
更优选地,所述非酒精性脂肪性肝病为非酒精性单纯性脂肪肝或非酒精性脂肪性肝炎。
更优选地,所述酒精性肝病为酒精性脂肪肝或酒精性肝炎。
作为本发明的另一种优选实施方式,所述苦杏仁苷作为唯一的活性成分。
第二方面,本发明提供了苦杏仁苷在制备降低不伴有肝纤维化的脂肪性肝病动物模型的血清门冬氨酸氨基转移酶含量、血清谷氨酸丙酮酸转氨酶含量、肝组织甘油三酯含量、肝脏脂肪变程度、肝脏炎症程度或肝脏气球变程度的实验试剂中的应用。
作为本发明的一种优选实施方式,所述实验试剂用于研究不伴有肝纤维化的脂肪性肝病的病理机制。
作为本发明的另一种优选实施方式,所述动物模型为蛋氨酸胆碱缺乏饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎动物模型或高脂饲料诱导的非酒精性脂肪性肝炎动物模型。
本发明优点在于:
经发明人的研究,首次发现苦杏仁苷对不伴有肝纤维化的非酒精性脂肪性肝病具有显著的治疗作用。对肝脏损伤时的异常生化指标有明显的改善作用,并且显著减少肝脏脂质聚集。本发明已完成的动物模型试验表明,对于高脂饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝炎模型或蛋氨酸胆碱缺乏饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝炎模型,使用苦杏仁苷干预后可显著降低血清天门冬氨酸氨基转移酶和谷氨酸丙酮酸转氨酶水平,减少肝组织甘油三酯含量,改善肝组织病理学变化,抑制肝脏脂质聚集。效果显著优于其他试药,如吡格列酮、绞股蓝总皂苷等。
附图说明
图1.苦杏仁苷的化学结构式。
图2.肝脏病理切片H&E染色。
图3.肝脏冰冻切片油红染色。
上述图中,MCS表示正常对照组,MCD表示模型对照组,AMY表示苦杏仁苷组,PGZ表示吡格列酮组。
具体实施方式
下面结合附图对本发明提供的具体实施方式作详细说明。
实验例1:苦杏仁苷对蛋氨酸胆碱缺乏饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎的防治作用
1.实验方法
实验动物:本发明所用实验动物为C57BL/6小鼠,体重20-22g,雄性,由上海中医药大学实验动物中心提供。
实验用对照饲料(MCS)和蛋氨酸胆碱缺乏饲料(MCD)均购自Research Diets公司;苦杏仁苷购自大连美仑生物技术有限公司;结构通过NMR及MS确定,纯度采用HPLC面积归一化法测定大于98%。
C57BL/6小鼠40只,SPF级,分为正常组(MCS,n=10),MCD模型组(MCD,n=10),苦杏仁苷组(n=10),吡格列酮组(n=10)。造模方式,正常组给予蛋氨酸胱氨酸足够(MCS)的饲料喂养,模型组、苦杏仁苷组、吡格列酮组给予MCD喂养,共喂养6周。从第4周起在继续喂养相应饲料的同时,正常组和模型组予以等体积的0.3%CMC-Na溶液,苦杏仁苷组灌胃给予5mg/kg 0.3%CMC-Na配置的苦杏仁苷溶液,吡格列酮组给予10mg/kg 0.3%CMC-Na配置的混悬吡格列酮溶液,每日1次,共干预3周。第6周末结束处死所有小鼠,留取血清及肝组织,检测肝功能、肝组织甘油三酯含量(TG)、肝组织病理(H&E)以及肝组织油红染色。
2.实验结果
2.1苦杏仁苷对肝功能的影响
与MCS对照组比较,MCD组血清门冬氨酸氨基转移酶(AST)和血清谷氨酸丙酮酸转氨酶(ALT)显著升高(P<0.001);与MCD组相比,苦杏仁苷组AST和ALT活性显著降低(P<0.05或P<0.01),而吡格列酮组则降低不明显,具体见表1。
注:###,表示与MCS对照组比较P<0.001;*,表示与MCD组比较P<0.05;**,表示与MCD组比较P<0.01。
2.2苦杏仁苷对肝组织TG含量的影响
与MCS组相比,MCD组小鼠肝组织TG含量显著增加(P<0.01),而苦杏仁苷组和吡格列酮组TG的含量均显著低于MCD组(P<0.05或P<0.01),其中苦杏仁苷组减少更为明显,具体见表2。
注:##,表示与MCS对照组比较P<0.01;*,表示与MCD组比较P<0.05;**,表示与MCD组比较P<0.01。
2.3肝组织病理学改变
肝组织H&E染色显示,可见MCS对照组肝组织形态结构均正常,肝细胞索围绕中央静脉呈放射状排列,血管周围无炎症细胞浸润,存在一定量的小空泡;MCD模型组肝组织可见大量脂肪变性,胞质内充满大小不一的脂滴空泡,血管周围炎症细胞浸润严重,但未发现肝纤维,病理分期为S0;与MCD组相比,苦杏仁苷组与吡格列酮组肝组织脂肪变性均显著减轻,且苦杏仁苷组较吡格列酮组改善更明显(图2)。
2.4肝组织油红染色
肝组织油红染色显示,MSC对照组小鼠肝组织存在排列均一且小的红色脂滴,MCD模型组小鼠较MCS组肝细胞内有大量红色脂滴填充,形状不规则的脂滴排列紧密,形态较大;与MCD组相比,苦杏仁苷组和吡格列酮组小鼠肝组织脂滴显著减少(图3)。油红染色阳性面积比结果显示:与MCS组比较,MCD组油红染色面积比显著增加,而苦杏仁苷组与吡格列酮组油红染色面积比较MCD组显著降低,且苦杏仁苷组改善更为明显,具体见表3。
注:###,表示与正常对照组比较P<0.001;**,表示与模型组比较P<0.01;***,表示与模型组比较P<0.001。
3.实验结论
苦杏仁苷对蛋氨酸胆碱缺乏饮食诱导非酒精性脂肪性肝炎有较好的治疗效果。
实验例2:苦杏仁苷对高脂饲料诱导的非酒精性脂肪性肝炎的防治作用
1.实验方法
实验动物:本发明所用实验动物为C57BL/6小鼠,体重20-22g,雄性,由上海中医药大学实验动物中心提供。
实验用对照饲料(D12450B,10%热量来源于脂肪)和高脂饲料(D12492,60%热量来源于脂肪)均购于美国Research Diets公司。
C57BL小鼠40只,SPF级,分为正常组(N,n=10),高脂饲料模型组(M,n=10),高脂饲料给苦杏仁苷组(n=10),高脂饲料给吡格列酮组(n=10)。造模方式,正常组给予对照饲料喂养,模型组、苦杏仁苷组、吡格列酮组给予高脂饲料喂养,喂养12周后,从第13周起在继续喂养相应饲料的同时,正常组和模型组予以等体积的0.3%CMC-Na溶液,苦杏仁苷组灌胃给予5mg/kg 0.3%CMC-Na配制的苦杏仁苷溶液,吡格列酮组给予10mg/kg 0.3%CMC-Na配制的混悬吡格列酮溶液,每日1次,共干预4周。第16周末结束处死所有小鼠,留取血清及肝组织,检测肝功能、肝组织甘油三酯含量(TG)、肝组织病理(H&E)以及肝组织油红染色。
2.实验结果
2.1一般状况及体重变化
造模过程中,小鼠精神状态良好,皮毛有光泽,运动灵活,反应灵敏,进食饮水正常,体重逐渐增加,其中,高脂饮食组(模型组、苦杏仁苷组、吡格列酮组)体重较对照饮食组(正常组)有增高趋势。见表4。
注:#,表示与正常对照组比较P<0.05。
2.2各组小鼠肝组织TG含量、血清ALT活性变化
与正常组相比,模型组小鼠肝组织TG含量(P<0.01)及血清ALT活性(P<0.01)明显升高,与模型组相比,苦杏仁苷组和吡格列酮组肝组织TG含量(P<0.01)及血清ALT活性均显著下降(P<0.01)。见表5。
注:##,表示与N组比较P<0.01;**,表示与M组比较P<0.01。
2.3肝组织病理变化及NAS积分情况
肝组织HE染色可见:正常组组小鼠肝组织镜下可见小叶结构清晰,肝索排列整齐;与正常组比较,模型组小鼠肝细胞出现明显的弥漫性肿胀、脂肪变性,胞浆内大小不一的脂滴,部分汇管区、小叶内可见炎细胞浸润,但并未发现肝纤维化,病理分期为S0。与模型组比较,模型给苦杏仁苷组和吡格列酮组小鼠肝索排列较整齐,胞浆内脂滴明显减少,脂肪变性和炎性细胞浸润均有所减轻。
肝组织油红O染色可见:正常组小鼠染色色脂滴非常少。与正常小鼠比较,模型组小鼠肝细胞有显著脂肪变性,大泡变性为主,分布广泛,脂滴弥漫性浸润肝细胞,可见部分脂滴融合成片。与模型组比较,模型给苦杏仁苷组和吡格列酮组小鼠脂滴形成较少,分布较局限,且脂滴融合成片情况减少。
肝组织NAS积分判定显示,与正常组相比,模型组小鼠肝脏脂肪变积分、炎症积分、气球变积分均显著增加(P<0.05),NAS中位数>4分,提示模型组小鼠肝组织出现脂肪性肝炎。苦杏仁苷和吡格列酮干预后,小鼠肝脏脂肪变积分、炎症积分有显著下降(P<0.05),NAS中位数较模型组显著下降(P<0.01)。见表6。
表6各组小鼠肝组织病理积分
注:##,表示与N组比较P<0.01;*,表示与M组比较P<0.05。
3.实验结论
苦杏仁苷对高脂饮食诱导非酒精性脂肪性肝炎有较好的治疗效果。
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员,在不脱离本发明方法的前提下,还可以做出若干改进和补充,这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。
Claims (9)
1.苦杏仁苷在制备治疗脂肪性肝病的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述脂肪性肝病为不伴有肝纤维化的脂肪性肝病。
3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,所述脂肪性肝病为非酒精性脂肪性肝病或酒精性肝病。
4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,所述非酒精性脂肪性肝病为非酒精性单纯性脂肪肝或非酒精性脂肪性肝炎。
5.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,所述酒精性肝病为酒精性脂肪肝或酒精性肝炎。
6.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述苦杏仁苷作为唯一的活性成分。
7.苦杏仁苷在制备降低不伴有肝纤维化的脂肪性肝病动物模型的血清门冬氨酸氨基转移酶含量、血清谷氨酸丙酮酸转氨酶含量、肝组织甘油三酯含量、肝脏脂肪变程度、肝脏炎症程度或肝脏气球变程度的实验试剂中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,所述实验试剂用于研究不伴有肝纤维化的脂肪性肝病的病理机制。
9.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,所述动物模型为蛋氨酸胆碱缺乏饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎动物模型或高脂饲料诱导的非酒精性脂肪性肝炎动物模型。
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